CZ2011626A3

CZ2011626A3 - Dichlorido komplexy platiny s halogenderiváty 7-azaindolu, zpusob jejich prípravy a použití techto komplexu jako léciv v protinádorové terapii

Info

Publication number: CZ2011626A3
Application number: CZ20110626A
Authority: CZ
Inventors: Trávnícek@Zdenek; Štarha@Pavel; Popa@Igor
Original assignee: Univerzita Palackého
Priority date: 2011-10-06
Filing date: 2011-10-06
Publication date: 2012-09-05
Also published as: CZ303417B6

Abstract

Dichlorido komplexy platiny v oxidacním stupni +II a jejich krystalosolváty zahrnující strukturní motiv I obecného vzorce II nebo III a vyjádrené strukturními vzorci cis-[PtCl.sub.2.n.(L).sub.2.n.] II´ nebo cis-[PtCl.sub.2.n.(L)(L´)] III´, kde symboly L a L´ predstavují halogenderivát 7-azaindolu obecného vzorce IV vázaného na atom platiny pres libovolný atom dusíku nezávisle vybraný z atomu N1 nebo N7, kde substituenty R3, R4 a R5 odpovídají atomu chloru, bromu, nebo jodu.

Description

Dichlorido komplexy platiny s halogenderiváty 7-azaindolu, způsob jejich přípravy a použití těchto komplexů jako léčiv v protinádorové terapii

Oblast techniky

Předložený vynález, spadající do oblasti léčiv nádorových onemocnění na bázi platiny, se týká dichlorido komplexů platiny s halogenderiváty 7-azaindolu, jejich způsobu přípravy vycházejícího z M₂[PtCI₄], kde M je atom Η, K, nebo Na, a jejich použití v lékařské praxi jako léčiv a farmaceutických kompozic, které tyto komplexy obsahují jako účinnou látku.

Dosavadní stav techniky

Cis-dichlorido komplexy platiny představují významnou skupinu látek, jež má díky c/s-diamindichlorido-platnatému komplexu (cisplatina; vzorec A) využití v praxi, jelikož cisplatina je nejdéle a jedním z nejvíce používaných léčiv na bázi platiny představujících účinnou složku farmaceutických kompozic v protinádorové terapii. Uvedení cisplatiny do onkologické praxe vedlo k přípravě a studiu biologických vlastností tisíců koordinačních sloučenin platiny, přičemž méně než pět substancí úspěšné absolvovalo klinická studia a je v současné době celosvětově nebo jen v některých státech používáno k léčbě nádorových onemocnění. Obecně za druhou generaci léčiv na bázi platiny je možno považovat diamino-platnaté komplexy s tzv. odstupující skupinou odlišnou, resp. odstupujícími skupinami odlišnými, od dvou chloridových aniontů cisplatiny, třetí generace se pak od cisplatiny liší použitými aminy resp. použitým aminem. Klinicky používanými reprezentanty druhé a třetí generace léčiv na bázi platiny jsou diamin-1,r-cyklobutandikarboxyláto-platnatý komplex (karboplatina', vzorec B), resp. (1 R,2R)-1,2-diamínocyklohexan-oxaláto-platnatý komplex (oxaliplatina’, vzorec C). Do fáze klinických testů byly přijaty taktéž trans- izomery odvozené od ciplatiny nebo vícejaderné komplexy platiny.

O

I c

Dosud byly připraveny platnaté dichlorido komplexy s různými N-donorovýmí ligandy, které lze formálně považovat za deriváty cisplatiny. Při omezení se na ty substance, které jsou dostupné z publikované patentové literatury, jsou známy Pt(ll)* dichlorido komplexy s následujícími N-donorovými ligandy: s amino-substituovanými uhlovodíky (JP 3002191), se substituovaným aminopyrrolidinem (JP

5178872), s deriváty L-xylopyranosideplatinum (JP 3127796), se substituovanými cykloalkany jako je např. 1,2-bis(aminomethyl)cyklobutan (JP 2000795), s 1,4diaminocyklohexanem (US 3393|909), s kombinací substituovaného aminu (např.

cyklického aminu) a NH₃, nebo jeho mono- nebo dialkyl deriváty (US s aminoalkyl-substituovanými cykloalkylaminy (US 4j97C&24, USSÍ16831), s 2-octyl * 1,3-diaminopropanem (JP 62051693 A), s vícesubstituovanými deriváty pyrazolu (PL

381974; E. Budzisz, m. Miernicka, l.-P. Lorenz, P. Mayer, E. Balcerczak, U.

12.*

Krajewska, M. Rozalski, Eur. J. Med. Chem. 45, 2010, 2613*2621), s deriváty alkylendiaminu (JP 9025285), s 3,4-diamino-3,4-dideoxy-/_-xylopyranosou a 2,4-

- diamino-2,4-dideoxy-L-arabinopyranosou (JP 2223591), s 3-aminoperhydroazepinem (JP 63307890, JP 63303988), s křemík-obsahujícímí organokovovými diaminy (JP 63267794), s 2-alkyl-1,3-diaminopropanem (JP 63208597), s 2,3-disubstituovaným

1,4-diaminobutanem (JP 63203692), s diaminy, jako je např. 1,1-bis(aminomethyl)-4-

- oxacyklohexan (JP 63112591), s diaminocyklohexanoly jako je např. DL-2,3-diamino- (1,2/3)-cyclohexanol (JP 63017894, JP 61286396), s alkylendiaminy substituovanými na uhlíkovém řetězci i na dusíkových atomech (JP 62190192, JP 61263991), s aminoalkyl-substituovaným pyrimidinem (JP 60214795), s1,2

- diaminoadamantanem (JP 58079994^), se stilbendiaminem (JP 56103192), s diaminocyklopentanem (JP 55130992), s kombinací amoniaku a hydroxylaminu (CN 101134601; W. Liu, L. Lou, X. Chen, S. Hou, Q. Ye, Y. Yu, Arch. Pharmacal. Res. 33,

11’

2010, 807*811), s 5,7-disubstituovanými deriváty 1,2,4-triazol[1,5-a]pyrimidinu (PL 196310), s karboxylatodiaminem (JP 2028134), s trans-/-1,2-diaminocyklohexanem (WO 0122915), a kombinací NH₃ a primárního tricyklického aminu (např. 1adamantylamin) (CZ 288406).

Předložené platnaté dichlorido komplexy s halogeno-deriváty 7-azaindolu představují novou, v literatuře doposud nepopsanou, skupinu biologicky aktivních komplexů platiny. Vlastní 7-azaindol (Haza) reprezentuje základní strukturní jednotku, od které je odvozeno mnoho derivátů s výraznými biologickými vlastnostmi, které např. inhibují proteionové kinázy (US 20040198737, US 20110166175), působí * « · ·* · « ·* • * · »·

*., . í · · · · protizánětlivě (US 20100216768), vykazují proti virovou aktivitu (US 20100239527), atd.

Komplexů platiny v oxidačním stupni +II se 7-azaindolem a jeho deriváty bylo v literatuře popsáno několik a jako příklady je možno uvést: Toxicita a protinádorová aktivita (Yoshida-sarkom, osteosarkom, ADJ/PC6A tumor, P388 lymfocytická leukémie) c/s-[PtCI₂(Haza)₂], c/s-[Ptl₂(Haza)₂] a [Pt(ox)(Haza)₂] komplexů se 7-

- azaindolem (Haza) byla studována in vivo na myších. Lze konstatovat, že žádné výrazné protinádorové vlastnosti nebyly pozorovány, např. dichlorido komplex nevykazoval žádný cytotoxický efekt vůči uvedeným tumorům při dávkách 50 mg/kg, 600 mg/kg, 125 mg/kg, resp. 400 mg/kg (R.C. Harrison et al. Inorg. Chim. Acta 92, αν

1984, 43<46). U komplexu c/s-[PtCl2(Haza)(NH₃)] byla, společně s jeho trans· ' izomerem, studována in vitro protinádorová aktivita vůči A2780 lidským nádorovým buňkám - výsledná cytotoxická aktivita (IC₅₀ = 3,6 μΜ a 6,0 μΜ pro cis-, resp. trans-

- izomer) je nižší ve srovnání s cisplatinou, jejíž ICso je pro daný test rovna 1,4 μΜ (E.J.

q Z*

Newet al. J. Inorg. Biochem. 103, 2009, 1120*1125). J. Ruiz et al. (Dalton Trans. 39, 2010, 3290*3301) studoval jec^b- a dvojjaderné platnaté komplexy se 7’azaindolem, jako je např. [NBu4][Pt(C₆F5)2(Haza)(aza)] Haza nebo [Pt(dmba)(aza)(dmso)], z nichž druhý uvedený vykazuje submikromolární cytotoxicitu vůči A2780 (ICso = 0,34 μΜ) a T47D (ICso = 0,53 μΜ) lidským nádorovým liniím (dmba - Λ/,Λ/'-dimethylbenzylamin).

Biologická aktivita pak nebyla dosud studována u následujících komplexních sloučenin s deriváty Haza: Komplexy se 1-(difenylfosfin)-7-azaindolem popsané ve 4 Z* stati H.L. Milion et al. Inorg. Chem. Commun. 7 (2004) 1106«1108. Obdobné látky, kde jako Ν,Ρ-bidentátní ligand vystupuje kromě zmíněného 1-(difenylfosfin)-7-

- azaindolu také 1-(dipyrolylfosfin)-7-azaindol jsou popsány v práci A.D. Burrows et al.

Dalton Trans. 2003, 4718Í4730). Komplex [Pt(N,N-Si-BNPA)Ph₂] obsahuje triarylboronovou sloučeninu a A/-(2’-pyrídyl)-7-azaindolyl (NPA) spojené tetraedrální } z.* silanovou skupinou (Z.M. Hudson et al, Chem. Eur. J. 15, 2009, 6131*6137). S.B. Zhao publikoval sérii prací s komplexy platiny s deriváty 7-azaindolu. Jsou popsány komplexy s A/-(2-pyridyl)-7-azaindolem (npa), jako je např. [Pt(npa)Me₂] (S.B. Zhao et al. J. Am. Chem. Soc. 129, 2007, 3092^093), [Pt(N,A/-L)R₂] komplexy, kde Λ/,ΛΖ-L představuje bis(7-azaindol-1-yl) chelatující ligand s alifatickým nebo aromatickým linkerem spojujícím obě jednotky a R je většinou methyl nebo fenyl (S.B. Zhao et al. Dalton Trans. 2008, 6953-(6965, S.B. Zhao et al. Organometallics, 25, 2006, 5979< VI*

5989, S.B. Zhao et a\. Organometallics 24, 2005, 3290*3296, D. Song, S. Wang,

Organometallics 22, 2003, 2187x2189), obdobné komplexy, kde jsou v rámci Λ/,/V-L ligandů dva 7-azaindoly spojeny SiMe₃, SnMe₃ nebo SnPh₃ (S.B. Zhao et al.

•n*

Organometallics 28, 2009, 2572*2582) a dvojjademé Pt(ll)-komplexy {např. [Pt₂(tpab)Me₄]} obsahující 1,2,4,5-tetrakis(5-(p-C₇Hi5Ph)-7-azaindol-1-yl)benzen (tpab) (S.B. Zhao et al. Organometallics 29, 2010, 998*1003). [Pt(N,N-L)CI] komplexy, kde N,N-\_ představuje bis(7-azaindol-1-yl) ligand s aromatickým linkerem (fenyl nebo 4-bromfenyl), jsou popsány v D. Song et al. Organometallics 20, 2001, 4683*4689).

Dalšími publikovanými sloučeninami jsou [NBu₄][Pt(C₆F₅)₂CI(Haza)] a [NBu₄]₂[Pt₂(p-aza^fCeFsM (J.M. Casas et al. Inorg. Chem. 47, 2008, 8767*8775), nebo [NBu₄] [{Pt(C6F₅)₃})(p-aza){Ag(pi)}], kde pi = propanimin (J.M. Casas et al. Organometallics 21, 2002, 4560*4563). Deprotonizovaný 7-azaindol vystupuje jako můstkující ligand ve dvojjaderných komplexech publikovaných v práci S.W. Lai et al. Organometallics 18, 1999, 3991*3997 nebo J.A. Bailey et al. Inorg. Chem. 32, 1993, 369*370.

Z výsledků výše uvedených prací popisujících biologickou aktivitu komplexů platiny se 7-azaindolem je patrné, že koordinace organické molekuly nebo organických molekul, tj. Haza, na z hlediska biologické aktivity perspektivní motiv, jako je cis- [PtCI₂] nebo [Pt(ox)], nemusí nutně vést ke vzniku komplexní sloučeniny vykazující výrazné biologické, např. protinádorové účinky. Pokud však dojde ke vhodné změně složení komplexu, jako je popsaná substituce jedné molekuly Haza za NH₃ ve struktuře komplex u cís-[PtCI₂(Haza)(NH₃)], může tato vést k výraznému progresu biologických vlastností výsledného komplexu, v konkrétním případě zmíněné sloučeniny se jedná o in vitro cytotoxicitu. Úkolem předkládaného vynálezu je představit platnaté komplexy s halogeno-deriváty 7-azaindolu, u nichž modifikace molekuly 7-azaindolu vhodnou substitucí atomu vodíku za halogen výrazně modifikuje in vitro protinádorové vlastnosti výsledných komplexů platiny. Připravené sloučeniny pak svojí in vitro cytotoxicitou výrazně převyšují v současnosti klinicky používaná léčiva na bázi platiny, jako jsou cisplatina, karboplatina nebo oxaliplatina. Popsané komplexy tedy mohou představovat perspektivní protinádorová léčiva, která vznikla kombinací biologicky, v konkrétním případě pak protinádorové, neaktivních komponent.

5’

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu jsou dichlorido komplexy platiny v oxidačním stupni +11 a jejich krystalosolváty zahrnující strukturní motiv (I)' obecného vzorce >11^ nebo flll^ a vyjádřené strukturními vzorci c/s-[PtCI₂(L)₂] fllýriebo c/s-[PtCI₂(L)(L')] (llí^ kde symboly Lať představují halogenderivát 7-azaindolu obecného vzorce ýlV^ vázaného na atom platiny pres libovolný atom dusíku nezávisle vybraný z atomů N1 nebo N7, kde jsou substituenty R3, R4 a R5 vybrány ze skupiny: chlor, brom nebo jod.

			R.
_/CI	K Z^C1	^L\ Z^CI		í³1/
Pt	Pt	Pt	Π Ί
i/⁷ \:i		L^{Z X}CI	Λ Λ N,	Z* 'N, H
(i)	(ID	(lil)	(IV)

Další podstatou vynálezu jsou krystalosolváty platnatých dichlorido komplexů, kde u sloučenin obecného složení c/s-[PtCI₂(L)₂]xSolv nebo c/s-[PtCl2(L)(L')] xSolv udává (xj počet krystalových molekul 1 až 6 a (Solvfje konkrétní molekula použitého rozpouštědla a/nebo některá z reakčních komponent vybraných ze skupiny voda, primární alkohol, sekundární alkohol, aceton, Λ/,Λ/'-dimethylformamid, dimethyl sulfoxid, chloroform, dichlormethan, acetonitril nebo diethylether, a to buď samostatně,, nebo v kombinaci uvedených solvátových molekul.

Také je podstatou vynálezu způsob přípravy platnatých dichlorido komplexů dle něhož se sloučenina obecného vzorce jll? nebo (IIIy připraví reakcí alkalického tetrachloridoplatnatanu nebo odpovídající kyseliny obecného složení M₂[PtCI₄], kde M zahrnuje především Η, K a Na, s halogenderivátem 7-azaindolu.

Ve výhodném provedení se sloučenina obecného vzorce (ilý nebo (lll.ý připraví tak, že nejdříve spolu reagují dva molární ekvivalenty halogenderivátu 7-azaindolu rozpuštěného při teplotě 20 až 70 °C v minimálním množství rozpouštědla ze skupiny primárních nebo sekundárních alkoholů nebo acetonu, s jedním molárním ekvivalentem sloučeniny M₂[PtCU], kde M představuje Η, K nebo Na, rozpuštěné v minimálním množství horké vody o teplotě 20 až 90 °C_; poté se reakční směs míchá po dobu dvou až čtyř dnů při teplotě 40 až 70 °C, a následné je vzniklý produkt odfiltrován, promyt horkými použitými rozpouštědly a vysušen.

Nedílnou podstatou vynálezu je farmakologický prostředek obsahující terapeuticky účinné množství plstnatých dichlorido komplexů, anebo farmaceutickou kompozici platnatých dichlorido komplexů s jedním či více přijatelných nosičů a pomocných látek.

Konečně je podstatou vynálezu použití dichlorido komplexů platiny pro výrobu léčiv pro léčbu nádorových onemocnění.

Přehled obrázků na MeotenýcW výkresech

Konkrétní příklady provedení vynálezu jsou doloženy připojenými výkresy, kde:

- obr. 1 je IR Spektrum (oblast 400x4000 cm'* provedena technikou ATR) C/s-

- [PtCl2(L₃)2]O,75EtOH komplexu,

- obr, 2 je molekulová struktura komplexu C7s-[PtCI₂(L₆)2]-DMF vyřešená užitím monokrystalové rentgenové strukturní analýzy, molekula DMF není pro přehlednost zobrazena a

- obr. 3 je znázornění průběhu termického rozkladu komplexu c/s-

- [PtCI₂(L3)₂] 0,75EtOH metodami termogravimetrie (TG) a diferenční termické analýzy (OTA)

Příklady provedení vynálezu .

V následující části je vynález doložen, nikoli však limitován, konkrétními příklady jeho uskutečnění. Rozsah vynálezu je pak jednoznačně limitován patentovými nároky.

V níže uvedených příkladech byly připravené látky charakterizovány následujícími fyzikálně-chemickými metodami:

•elementární analýza (Flash 2000 CHNS, Thermo Scientific);

‘infračervená spektroskopie, kde byly oblasti 150 až 600 cm¹ (far-IR) a 400 až 4000 cm’¹ (mid-IR) provedeny technikou ATR (Nexus 670 FT-IR, Thermo Nicolet);

* nukleární magnetická rezonance (NMR) DMF-d_z roztoků komplexů - ’Η, ¹³C, ¹⁹⁵Pt, Ή-Ή gs-COSY, ¹H-ⁿC gs-HMQC, Ή-¹³0 gs-HMBC a ¹H-¹⁵N gs-HMBC experimenty (400 MHz NMR spectrometer, Varian);

'termická analýza s metodami termogravimetrie (TG) a diferenční termické analýzy (DTA) (Exstar TG/DTA 6200 thermal analyzer (Seiko Instruments)) 'monokrystaiová rentgenová strukturní analýza (Xcalibur™2 difraktometr, Sapphire2 CCD detektor, Mo Ka monochromátor, Oxford Diffractíon).

Příklad 1: Syntéza a charakterizace cis-{dichlorido-bis(3-chlor-7-azaindol)-platnatého komplexu, cis-[PtCI₂(L2)2]:

0,5 mmol K₂PtCI₄ bylo za laboratorní teploty rozpuštěno v minimálním objemu destilované vody a přilito ke dvěma molárním ekvivalentům (1 mmol) 3-chlor-7- azaindolu (L₂) rozpuštěného taktéž za laboratorní teploty v minimálním objemu ethanolu podle obecného schématu 1.

Μ = K. Na nebo H

R3 = H (L,. L„ LJ, Br (L,). Cl (L* L,.). i (L_lt L,} R4 = H (L_1T L„ U, U L», LJ. Br (L₄), Cl (L,)

R5 = H(L,.U L„ U, U), BríL,. L,, LJ

R3

voda/ethanol 40jf70 ^aC 2*4 dny

R3

Schéma 1

Reakční směs byla míchána pod zpětným chladičem po dobu tří dnů pri teplotě 50 °C . % Světle béžový produkt, c/s-[ PtCl2(L2)₂], se znázorněním včetně číslování atomů podle vzorce 1, který se v průběhu reakce vytvořil, byl odfiltrován, vícenásobně promyt destilovanou vodou, ethanolem a diethyletherem a následně vysušen v exsikátoru nad P₄Oi₀.

Cl

Vzorec [1)

Procentové zastoupení prvků C, Η, N ve formě: vypočtená hodnota (v závorce nalezená hodnota) pro Ci₄Hi₀N₄CI₄Pt: C, 29,44(29,02); H, 1,76(1,65); N, 9,81(9,33)%. far-IR (vatr/citt¹): 347, 351, 448, 473, 488, 555, 568. mid-IR (vATR/cm-¹): 439, 467, 485, 529, 594, 641, 664, 752, 797, 845, 897, 929, 1016, 1095, 1130, 1203, 1237, 1278, 1320, 1337, 1411, 1445, 1491, 1518, 1549, 1595, 3077, 3100, 3156, 3273, 3310. ¹H NMR (DMF-d7, SiMe₄, ppm): δ 13,51 (bs, N1H, 1H), 9,02 (d, 5,6, C6H, 1H), 8,07 (d, 6,5, C4H, 1H), 8,05 (s, C2H, 1H), 7,29 (m, C5H, 1H). ¹³C NMR (DMF-dz, SiMe4, ppm): δ 146,82 (C6), 146,00 (C7a), 129,17 (C4), 125,17 (C2), 120,95 (C3a), 117,70 (C5), 104,24 (C3). ¹⁵N NMR (DMF-dz, ppm): δ 140,9 (N1), 173,4 (N7). ¹⁹⁵Pt NMR (DMF-dz, K2PtCI₄, ppm): δ-2126,2.

Příklad 2: Syntéza a charakterizace cis-{dichlorido-bis(3-jod-7-azaindol)-platnatého komplexu, c/s-[PtCI₂(L₃)₂]O,75EtOH

0,5 mmol K₂PtCI₄ bylo za laboratorní teploty rozpuštěno v minimálním objemu destilované vody a přilito ke dvěma molárním ekvivalentům (1 mmol) 3-jod-7azaindolu (L₃) rozpuštěného taktéž za laboratorní teploty v minimálním objemu ethanolu podle obecného schématu 1. Reakční směs byla míchána pod zpětným chladičem po dobu tří dnů při teplotě 50 °C. Světle béžový produkt, cis~[PtCl2(L₃)₂]O,75EtOH, se znázorněním včetně číslování atomů podle vzorce 2, který se v průběhu reakce vytvořil, byl odfiltrován, vícenásobně promyt destilovanou vodou, ethanolem a diethyletherem a následně vysušen v exsikátoru nad P₄Oi₀.

Vzorec(2)

Procentové zastoupení prvků C, Η, N ve formě: vypočtená hodnota (v závorce nalezená hodnota) pro CuHi₀N₄CI₂l₂PtO,75EtOH: C, 23,61(23,32); H, 1,85(1,68); N, 7,10(6,73)%. far-IR (Vatr/citi^-1): 331, 339, 434, 471,480, 492, 504, 519, 564, 592. midIR (VATR/cm-¹): 504, 518, 562, 594, 641, 750, 793, 823, 869, 899, 929, 980, 1037, 1068, 1097, 1127, 1194, 1271, 1335, 1405, 1438, 1502, 1594, 2889, 2917, 2983, 3094, 3131, 3165, 3419. ¹H NMR (DMF-dz, SiMe4, ppm): δ 13,59 (bs, N1H, 1H), 8,98 (dd, 5,7, 1,1, C6H, 1H), 8,09 (d, 2,6, C2H, 1H), 7,82 (d, 7,6, C4H, 1H), 7,28 (m, C5H, 1H). ¹³C NMR (DMF-dz, SiMe4, ppm): δ 147,35 (C7a), 146,50 (C6), 132,51 (C2), 131,57 (C4), 125,66 (C3a), 117,84 (C5), 55,58 (C3). ¹⁵N NMR (DMF-d7, ppm): δ 149,8 (N1), 173,6 (N7). ¹⁹⁵Pt NMR (DMF-d7, K₂PtCI₄, ppm): δ -2121,6.

Příklad 3: Syntéza a charakterizace cis-{dichlorido-bis(5-brom-7-azaindol)-platnatého komplexu, c/s-[PtCI₂(L₆)₂]

0,5 mmol K₂PtCI₄ bylo za laboratorní teploty rozpuštěno v minimálním objemu destilované vody a přilito ke dvěma molárním ekvivalentům (1 mmol) 5-brom-7azaindolu (L₆) rozpuštěného taktéž za laboratorní teploty v minimálním objemu ethanolu podle obecného schématu 1. Reakční směs byla míchána pod zpětným chladičem po dobu tří dnů při teplotě 50 °C. Světle béžový produkt, cís-[PtCI₂(L₆)₂] se znázorněním včetně číslování atomů podle vzorce 3, který se v průběhu reakce vytvořil, byl odfiltrován, vícenásobně promyt destilovanou vodou, ethanolem a diethyletherem a následně vysušen v exsikátoru nad P₄0w.

I 4

B

Vzorec(3)

Procentové zastoupení prvků C, Η, N ve formě: vypočtená hodnota (v závorce nalezená hodnota) pro Ci₄HioN₄CI₂Br₂Pt: C, 25,48(25,83); H, 1,53(1,43); N, 8,49(8,27)%. far-IR (vatr/citt¹): 334, 344, 468, 490, 529, 548, 555, 580. mid-IR (VATR/cm¹): 469, 494, 530, 551, 580, 624, 702, 722, 779, 808, 880, 912, 944, 1058, 1091, 1194, 1282, 1340, 1422, 1470, 1506, 1580, 3061, 3108, 3143, 3297, 3359, 3381. ¹H NMR (DMF-d7, SiMe4, ppm): δ 13,47 (bs, N1H, 1H), 9,25 (d, 1,7, C6H, 1H), 8,31 (d, 1,6, C4H, 1H), 7,91 (t, 3,0, C2H, 1H), 6,65 (m, C3H, 1H). ¹³C NMR (DMF-d7, SiMe₄, ppm): δ 146,84 (C7a), 145,19 (C6), 133,66 (C4), 129,74 (C2), 124,74 (C3a), 110,17 (C5), 101,94 (C3). ¹⁵N NMR (DMF-d7, ppm): δ 143,5 (N1), 174,9 (N7). ¹⁹⁵Pt NMR (DMF-d7, K₂PtCI₄, ppm): δ-2112,4.

Příklad 4: In vitro cytotoxická aktivita nových látek na lidských nádorových liniích

Pro stanovení cytotoxické aktivity připravených komplexů byla použita mikrotitrační analýza využívající 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazolium bromid (MTT). Testem jsou detekovány životaschopné buňky, přičemž jejich počtu odpovídá množství zredukovaného MTT. In vitro testy cytotoxické aktivity byly provedeny na následujících lidských nádorových buněčných liniích: prsní adenokarcinom (MCF7) a osteosarkom (HOS). Linie byly udržovány v plastikových lahvích v DMEM médiu (5 g/l glukózy, 2 mM glutaminu, 100 U/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, Λ

fetálního telecího séra a hydrogenuhličitan sodný) pro buněčné kultury. Suspenze buněk (ca 1,25 χ 10⁵ buněk ml'¹) byly rozpipetovány po 80 μί na devadesátišesti jamkové mikrotitrační destičky. Tyto byly preinkubovány při 37 °C v CO₂ atmosféře po dobu 24 hodin. Testované platnaté dichlorido komplexy a cisplatina byly předrozpuštěny v N, N '-d i mety Iform amidu, naředěny do koncentrace 50,0 mM a tyto sloužily jako zásobní roztoky. Pro vlastní experiment byly zásobní roztoky ředěny

1000* v kultivačním médiu do maximální koncentrace 50.0 μΜ. Po odsátí kultivačního média byla smés jednotlivých testovaných látek přidána k preinkubované suspenzi nádorových buněk. Směsi byly následně inkubovány po dobu 24 h při teplotě 37 °C, 100% vlhkosti a v atmosféře CO₂. Poté byl přidán roztok MTT a následovala inkubace po dobu 1 hodiny. MTT analýza byla provedena spektrofotometricky (TECAN, Schoeller Instruments LLC) při 540 nm.

Inhibiční koncentrace testovaných komplexů IC» (μΜ), odpovídající koncentraci testovaných látek potřebné k inhibici růstu 50% vložených nádorových buněk, byly vypočteny z dávkových křivek a jsou uvedeny v Tabulce 1 a graficky znázorněny na obr.4.

Tabulka 1. Výsledky (tabelizované hodnoty a grafické znázornění) in vitro cytotoxicity připravených plstnatých dichlorido komplexů s halogenderiváty 7-azaindolu výjádřenév hodnotách inhibiční koncentrace ICso(pM) a jejich porovnání s cisplatinou

Komplex	MCF7	HOS
asqPtCMUhni)	3,4±0,3	3,8±0,1
c/s-[PtCI₂(L3)₂] 0,75EtOH (II)	2_t0±0,2	2,5±0,1
c/s-tPtCyLjhMIII)	8,0±0,9	3,9±0,2
Cisplatina (IV)	19,6±4,3	34,2±6,4

L₂ - 3-chlor-7-azaindol l_3 = 3-jod-7-azaindol

L_e = 5-brom-7-azaindol

MCF7 = lidský prsní adenokarcinom HOS = lidský osteosarkom

Příklad 5 : Příklady substituentů R3, R4 a R5 vybrány ze skupiny: chlor, brom nebo jod

Přehled možných příkladů substituentů R3, R4 a R5 je pak uveden v tabulce 2.

Tabulka 2: Přehled halogenderivátů 7-azaindolu (L_n) a jejich jednotlivých substituentů

Halogenderivát 7-azaindolu	R3	R4	R5
3-bromo-7-azaindol (Li)	Br	H	H
3-chloro-7-azaindol (L₂)	Cl	H	H
3-jodo-7-azaindol (L₃)	I	H	H
4-bromo-7-azaindol (L₄)	H	Br	H
4-chloro-7-azaindol (L_s)	H	Cl	H
5-bromo-7-azaindol (L₆)	H	H	Br
5-bromo-3-chloro-7-azaindol (L₇)	Cl	H	Br
5-bromo-3-jodo-7-azaindol (L₈)	I	H	Br

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Dichlorído komplexy platiny v oxidačním stupni +II a jejich krystalosolváty zahrnující strukturní motiv (I) obecného vzorce ,(liy nebo (III) a vyjádřené strukturními vzorci c/s-[ PtCI₂(L)₂] (II) nebo c/s-[PtCI₂(L)(L')] .(lity, kde symboly L a L' představují halogenderivát 7-azaíndolu obecného vzorce (IV) vázaného na atom platiny přes

libovolný atom dusíku nezávisle vybraný z atomů N1 nebo N7, substituenty R3, R4 a R5 vybrány ze skupiny: chlor, brom nebo jod n^/CI ^L\ Z^CI ^L\ Z^CI R, R, 1/ Pt Pt Pt í I \Z \P ^Cl \:i « 'Ni H (i) (il) (Hl) (IV)
2. Krystalosolváty platnatých dichlorído komplexů podle nároku 1, kde u sloučenin obecného složení c/s-[PtCI₂(L)₂] xSolv nebo c/s-[PtCl2(L)(L')]xSolv udává (x) počet krystalových molekul 1 až 6 a (Solv)je konkrétní molekula použitého rozpouštědla a/nebo některá z reakčních komponent vybraných ze skupiny voda, primární alkohol, sekundární alkohol, aceton, Λ/,Λ/'-dímethylformamid, dimethyl sulfoxid, chloroform, dichlormethan, acetonitril nebo diethylether, a to buď samostatně_znebo v kombinaci uvedených solvátových molekul.
3. Způsob přípravy platnatých dichlorído komplexů podle nároku 1, vyznačující se tím, že se sloučenina obecného vzorce (II) nebo /lil) připraví reakcí alkalického tetrachloridoplatnatanu nebo odpovídající kyseliny obecného složení M^PtCk], kde M zahrnuje především H, Ka Na, s halogenderivátem 7-azaindolu,
4. Způsob přípravy dle nároku 3, vyznačující se tím, že se sloučenina obecného vzorce (II) nebo (III) připraví tak, že nejdříve spolu reagují dva molární ekvivalenty halogenderivátu 7-azaindolu rozpuštěného při teplotě 20 až 70 °C v minimálním množství rozpouštědla ze skupiny primárních nebo sekundárních alkoholů nebo acetonu, s jedním molárním ekvivalentem sloučeniny MyPtCU], kde M představuje Η, K nebo Na, rozpuštěné v minimálním množství horké vody o teplotě 20 až 90 °C, poté se reakčni směs míchá po dobu dvou až čtyř dnů při teplotě 40 až 70 °C, a • * *

4 4 4 » t · » > «4 • > * * 4 *· > 1 · * * « > *I t a 4 > *í ' * * M * · ’ * W 5 t * V « t » následné je vzniklý produkt odfiltrován, promyt horkými použitými rozpouštědly a vysušen.
5. Farmakologický prostředek,vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství platnatých dichlorido komplexů podle nároku 1 a nebo farmaceutickou kompozici platnatých dichlorido komplexů podle nároku 1 s jedním či více přijatelných nosičů a pomocných látek.
6. Použití dichlorido komplexů platiny podle nároku 1 pro výrobu léčiv pro léčbu nádorových onemocnění.