CZ305374B6

CZ305374B6 - Dijodo-komplexy platiny a jejich použití pro přípravu léčiv k léčbě nádorových onemocnění

Info

Publication number: CZ305374B6
Application number: CZ2014-275A
Authority: CZ
Inventors: Zdeněk Trávníček; Pavel Štarha; Zdeněk Dvořák
Original assignee: Univerzita PalackĂ©ho
Priority date: 2014-04-22
Filing date: 2014-04-22
Publication date: 2015-08-19
Also published as: CZ2014275A3

Abstract

Dijodo-komplexy platiny v oxidačním stupni +II se 7-azaindolem nebo jeho deriváty obecného vzorce cis-[Pt(L).sub.2.n.I.sub.2.n.] I, vyjádřené strukturním vzorce I´, kde symbol L představuje 7-azaindol nebo jeho derivát vázaný na atom platiny přes atom dusíku N7, přičemž pokud L představuje derivát 7-azaindolu, tak alespoň jeden ze substituentů R2, R3, R4 a R5 je vybrán z funkčních skupin alkyl nebo halogen, kde halogen je vybrán ze skupiny F, Cl, Br, I, a alkyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z 1 až 6, především pak z 1 až 4, atomů uhlíku. Komplexy jsou určeny jako farmakologické prostředky pro použití pro léčbu prsního karcinomu a/nebo pro léčbu osteosarkomu a/nebo pro léčbu karcinomu vaječníku a/nebo pro léčbu karcinomu vaječníku resistenčního vůči cisplatině a/nebo pro léčbu karcinomu prostaty a/nebo pro léčbu karcinomu plic a/nebo pro léčbu karcinomu děložního čípku a/nebo pro léčbu maligního melanomu.

Description

Předložený vynález se zabývá dijodoplatnatými komplexy se 7-azaindolem nebo jeho deriváty a jejich použití k přípravě léčiv pro léčbu nádorových onemocnění, konkrétně pak pro léčbu prsního karcinomu, osteosarkomu, karcinomu vaječníků, karcinomu vaječníků resistentního vůči cisplatině, karcinomu prostaty, karcinomu plic, karcinomu děložního čípku a/nebo maligního melanomu.

Dosavadní stav techniky

Původním, a do současnosti stále v onkologické praxi nej používanějším, chemoterapeutikem na bázi platiny, je cz.s-diamin-dichloroplatnatý komplex, cz's-[Pt(NH₃)₂Cl₂)], obecně známý pod názvem cisplatina. Používá se především při terapii karcinomů (např. vaječníků), ale i dalších typů nádorů (sarkomy, lymfomy). Nedostatky klinické aplikace cisplatiny jsou její negativní vedlejší účinky (např. nefrotoxicita, neurotoxicita, myelosuprese) a přirozená nebo získaná rezistence některých nádorů vůči cisplatině. Nejen z těchto důvodů je výzkum a vývoj koordinačních sloučenin platiny i po půl století od objevu protinádorových účinků cisplatiny stále moderní a dynamicky se rozvíjející výzkumnou oblastí bioanorganické a medicinální chemie, jejímž ideálním cílem je příprava takové látky, která by při aplikaci vyvolávala vyšší protinádorové účinky a její negativní výše zmíněné vedlejší účinky, doprovázející léčbu, by byly současně potlačeny, případně by její aplikace nebyla provázena problémy s rezistencí.

Od počátku výzkumu protinádorové aktivních komplexů platiny bylo na dijodo-komplexy nahlíženo jako na farmakologicky málo perspektivní deriváty cisplatiny, protože již czs-diamindijodoplatnatý komplex, cz5-[Pt(NH₃)₂I₂] (vzorec A), byl prokázán jako protinádorové téměř neaktivní (Cleare and Hoeschele, Bioinorg. Chem.

1973, 2, 187). Nicméně, i přesto byly nadále vyvíjeny a zkoumány nové dijodo-komplexy platiny, přičemž zcela ojediněle bylo v případě takovýchto sloučenin zjištěno, že látky vykazují výraznou protinádorovou aktivitu, dokonce i vyšší ve srovnání s klinicky užívanými metaloterapeutiky na bázi platiny (např. Messori et al., ACS Med. Chem. Lett. 2010, 1, 381; vzorec B).

NH

Pt

NH.

'3

Na základě literárního průzkumu je tedy zřejmé, že protinádorovou aktivitu dijodoplatnatých komplexů nelze předem predikovat. Lze ale také současně nepřímo vyvodit, že případná protinádorová aktivita u takovýchto systémů může být odvislá od použitého nosného A-donorového ligandu, což ale nic nemění na výše uvedené skutečnosti, že v obecné rovině nelze protinádorový účinek předem očekávat. Tento zobecněný závěr pak může být podpořený faktem, že dosud žádný z připravených dijodo-komplexů platiny nevstoupil jako léčivo do klinické praxe.

S předmětnými látkami předloženého spisu, kterými jsou dijodoplatnaté komplexy s deriváty 7azaindolu (L) obecného vzorce cz5-[Pt(NH₃)₂I₂] (I), souvisí v literatuře popsané dijodo komplexy platiny v oxidačním stupni +11 obsahující ve své struktuře jednu nebo dvě monodentátní hetero- 1 CZ 305374 B6 cyklické molekuly (L') koordinované na centrální Pt(II) atom přes endocyklický atom dusíku, jejichž obecný vzorec lze vyjádřit jako cz.s-Z/razz.s-fPtfřL')?] nebo czs/ZraMS-[Ptl2(L')L'')] (L = ligand odlišný od L'), a u kterých byla studována a popsána jejich cytotoxická, především pak protinádorová aktivita. Ve spisu W02012/085 475 jsou popsány platnaté komplexy obsahující karbenové ligandy a pyridin a jejich terapeutické využití k léčbě různých nádorových onemocnění. V práci Huq et al. Int. J. Cancer Res. 2006, 2, 367 byl popsán komplex s 2,3-pyridindiaminem, u kterého sice nebyla stanovena jeho in vitro cytotoxicita, jako u v práci popsaných dichloro-komplexů, ale bylo prokázáno, že tento komplex ve srovnání s dichloro analogem méně proniká do nádorových buněk a méně se váže na jejich DNA. Komplexy cw-[Pt(NH₃)₂I₂] a cis[Pt(NH₃)(dptp)I₂] s 5,7-difenyl-l,2,4-triazolo[l,5-a]pyrimidinem (dptp) byly testovány vůči A549 plicnímu a T47D prsnímu karcinomu, avšak vykazovaly nižší cytotoxickou aktivitu ve srovnání s dichloro analogy i s cisplatinou (Lakomska et al., Spectrochim. Acta A, 91, 2012, 126). Dalšími v literatuře popsanými dijodoplatnatými komplexy jsou tři látky obecného složení czs-[Pt(zzIm)₂I₂], kde zzlm symbolizuje imidazol a jeho deriváty di(l/7-imidazol-2-yl)methan a dimethyl_2-(di(l//-imidazol-2-yl)methyl)malonát, přičemž pouze poslední z těchto látek byla testována vůči lidským nádorovým liniím karcinomu vaječníků A2780, cÁsp/č/Zzů-resistentní karcinomu vaječníků A2780Cp8 a kolorektálního karcinomu HCT116, na kterých byly signifikantně méně aktivní ve srovnání s cisplatinou, karboplatinou i oxaliplatinou (Ravera et al., J. Inorg. Biochem. 2011, 105, 400). Ve struktuře dijodoplatnatého komplexu s L-histidinem je zmíněný ligand koordinovaný na centrální atom přes jeden endocyklický a jeden exocyklický atom dusíku, komplex však byl, na rozdíl od analogického dichloro komplexu, cisplatiny a karboplatiny, inaktivní vůči lidským nádorovým buněčným liniím prsního karcinomu A549/ATCC, kolorektálního karcinomu HT-29 a karcinomu prostaty LNCaP (Ye et al., Chem. Pharm. Bull. 2009, 57, 424).

Pokud se zaměříme na druhou část molekuly předložených dijodoplatnatých komplexů s deriváty 7-azaindolu (L) obecného vzorce cA-[Pt(L)₂I₂] (I), kteráje tvořena dvěma deriváty 7-azaindolu (L), které se na centrální atom koordinují přes N7 endocyklický atom dusíku, je třeba zmínit, že bylo v literatuře popsáno několik dihalogeno komplexů platiny v oxidačním stupni +11 se 7azaindolem nebo jeho deriváty koordinujícími se na centrální atom přes endocyklický dusík, přičemž tyto komplexy byly podrobeny studiu cytotoxické aktivity. V konkrétním přiblížení se jedná o c«-[Pt(L)₂X₂] komplexy (X = Cl nebo I) se 7-azaindolem (L), jež byly popsány (Harrison et al., Inorg. Chim. Acta 1984, 92, 43) jako invivo protinádorově neefektivní (Yoshida-sarkom, osteosarkom, ADJ/PC6A tumor, P388 myší lymfocytická leukémie). U komplexu cis-[Pt(L)₂Cl₂] se 7-azaindolem (L) byla navíc studována in vitro cytotoxická aktivita vůči lidským nádorovým buněčným liniím osteosarkomu HOS a prsního karcinomu MCF7, avšak vzhledem kjeho omezené rozpustnosti u nich nebyla žádná výrazná aktivita (IC₅₀ > 1,0 μΜ) zjištěna (Starha et al., Polyhedron 2012, 33, 404). New et al. (J. Inorg. Biochem. 2009, 103, 1120) studovali komplexy cz'5-[Pt(NH₃)(L)Cl₂] a Zrazzs-[Pt(NH₃)(L)Cl₂] (L = 7-azaindol), jež vykázaly nižší protinádorovou aktivitu in vitro na linii A2780 ve srovnání s cisplatinou. U komplexů výše zmíněného typu cis[Pt(L)₂Cl₂], které ve své struktuře obsahují halogen-deriváty 7-azaindolu (L), byla v nedávné době prokázána výrazně vyšší in vitro protinádorová aktivita vůči sérii lidských nádorových linií (HOS, MCF7, LNCaP, A549, A2780, c/syz/ařzTz-resistentní karcinomu vaječníků A2780R, karcinom děložního čípku HeLa, maligní melanom G361) ve srovnání s cisplatinou (Starha et al., J. Inor. Biochem. 2012, 115, 57; Trávníček et al., CZ303417 (2012), Trávníček et al., CZ303560 (2012); Muchová et al., J. Biol. Inorg. Chem. 2013, 18, 579) a výrazná protinádorová aktivita in vivo na myším modelu lymfocytámí leukémie (Štarha et al., PLOS One 2014, 9, e90341). Stran in vitro protinádorově aktivity zmíněných dichloroplatnatých komplexů s halogen-deriváty 7azaindolu je na tomto místě vhodné zmínit, že předložené dijodoplatnaté komplexy s analogickými ligandy na bázi 7-azaindolu vykazují vyšší účinek in vitro vůči zmíněnému širokému spektru lidských nádorových linií a z tohoto hlediska je lze pokládat za farmakologicky vysoce perspektivní substance pro klinické využití při léčbě nádorových onemocnění.

Závěrem je nutné opět konstatovat, že ačkoli předložené dijodoplatnaté komplexy se 7-azaindolem nebo jeho deriváty mohou být považovány za analogy nedávno popsaných dichloroplatnatých komplexů s halogenderiváty 7-azaindolu, obdobná záměna chloro ligandů za jodo ve

-2CZ 305374 B6 struktuře platnatých komplexů není automatickou garancí výrazných cytotoxických účinků (viz výše zmíněná inaktivita cz's-[Pt(NH₃)I₂] vs klinické onkologické využití czs-[Pt(NH₃)CI₂], Cleare and Hoeschele, Bioinorg. Chem. 1973, 2, 187). Naopak, velmi často jsou dijodoplatnaté komplexy těmi méně aktivními ve srovnání s dichloroplatnatými komplexy (např. de Mier-Vinué et al., J. Inorg. Biochem. 2008, 102, 973; Berger et al., Chem Med Chem 2007, 2, 505-514). Z výše uvedených a literárně doložitelných faktů je i proto nezbytné nahlížet na předložené dijodoplatnaté komplexy obecného složení cis-[Pt(L)₂l2] se 7-azaindolem nebo jeho deriváty (L) jako na unikátní látky s vysokou perspektivou uplatnění jako možných léčiv nádorových onemocnění.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu jsou dijodo-komplexy platiny v oxidačním stupni +11 s 7-azaindolem nebo jeho deriváty obecného vzorce cžs-[Pt(L)₂I₂] I, vyjádřené strukturním vzorcem Γ

symbol L představuje 7-azaindol nebo jeho derivát vázaný na atom platiny přes atom dusíku N7, přičemž pokud L představuje derivát 7-azaindolu, tak alespoň jeden ze substituentů R2, R3, R4 a R5 je vybrán z funkčních skupin alkyl nebo halogen, kde halogen je vybrán ze skupiny F, Cl, Br, I, a alkyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z 1 až 6, především pak z 1 až 4, atomů uhlíku.

Také jsou podstatou vynálezu krystalosolváty komplexů platiny vzorce I a Γ, kde u sloučenin obecného složení cw-[Pt(L)₂I₂]-w,S'o/vjsou

- L 7-je azaindol nebo jeho derivát vázaný na atom platiny přes atom dusíku N7

- n udává počet krystalově vázaných molekul, především 1 až 6, a

- Solv je konkrétní molekula použitého rozpouštědla a/nebo některá z reakčních komponent vybraná ze skupiny voda, primární alkohol, sekundární alkohol, aceton, A/M-dimethylformamid, dimethyl sulfoxid, chloroform, dichlormethan, acetonitril nebo diethylether, a to buď samostatně, nebo v kombinaci uvedených solvátových molekul.

Rovněž je podstatou vynálezu farmakologický prostředek obsahující terapeuticky účinné množství platnatých komplexů vzorce I a Γ nebo jejich krystalosolvátů s jedním či více přijatelnými nosiči a pomocnými látkami pro použití pro léčbu prsního karcinomu a/nebo pro léčbu osteosar-3 CZ 305374 B6 komu a/nebo pro léčbu karcinomu vaječníku a/nebo pro léčbu karcinomu vaječníku resistentního vůči cisplatině a/nebo pro léčbu karcinomu prostaty a/nebo pro léčbu karcinomu plic a/nebo pro léčbu karcinomu děložního čípku a/nebo pro léčbu maligního melanomu.

Objasnění výkresů

Konkrétní příklady provedení vynálezu jsou doloženy připojenými výkresy, kde:

- obr. 1 je 'HNMR spektrum komplexu cis-[Pt(Li)₂l2] (1; Li = 7-azaindol) rozpuštěného v DMF-J₇ měřené při teplotě 25 °C a prezentované společně s přiřazením jednotlivých vodíkových atomů číslovaných podle strukturního vzorce studovaného komplexu (I)

- obr. 2 je ’HNMR spektrum komplexu cis-[Pt(Li)₂I₂] (1; L] = 7-azaindol) rozpuštěného v DMF-í/₇ měřené při teplotě 65 °C a prezentované společně s přiřazením jednotlivých vodíkových atomů číslovaných podle strukturního vzorce studovaného komplexu (I)

- obr. 3 je ^l3C NMR spektrum komplexu cis-[Pt(L,)₂I₂] (1; L| = 7-azaindol) rozpuštěného v DMF-J₇ měřené při teplotě 25 °C a prezentované společně s přiřazením jednotlivých uhlíkových atomů číslovaných podle strukturního vzorce studovaného komplexu (I)

- obr. 4 je ¹³C NMR spektrum komplexu c/s’-[Pt(L|)₂I₂] (1; L, = 7-azaindol) rozpuštěného v DMF-J₇ měřené při teplotě 65 °C a prezentované společně s přiřazením jednotlivých uhlíkových atomů číslovaných podle strukturního vzorce studovaného komplexu (I)

- obr. 5 'H-¹³C gs-HMQC spektrum komplexu cz's-[Pt(L₄)₂I₂] (4; L₄ = 3-jod-7-azaindol) rozpuštěného v DMF-í/₇ měřené při teplotě 25 °C, včetně přiřazení signálů.

- obr. 6 je znázorněním molekulové struktury komplexu c«-[Pt(L₈)2l₂] DMF (8; L₈ = 2-methyl4-chlor-7-azaindol) s DMF jako krystalově vázanou molekulou rozpouštědla.

Příklady uskutečnění vynálezu

V následující části je vynález doložen, nikoli však limitován, konkrétními příklady jeho uskutečnění. Rozsah vynálezu je pak jednoznačně limitován patentovými nároky.

V níže uvedených příkladech byly připravené látky charakterizovány fyzikálně-ehemickými metodami elementární analýza (stanovení procentového zastoupení uhlíku, vodíku a dusíku, (CHN(O)S analyzátor Flash 2000, Thermo Scientific), nukleární magnetická rezonance (NMR; 'H, ¹³C, 'Η-'Η gs-COSY, 'H-¹³C gs-HMQC, 'H-^C gs-HMBC experimenty, 400 MHz NMR, Varian) a monokrystalová rentgenová strukturní analýza (Xcalibur2, Oxford Diffraction).

Pro stanovení in vitro protinádorové aktivity připravených komplexů, jak je uvedeno v příkladu 2 byla použita mikrotitrační metoda využívající 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazolium bromid (MTT) jako indikátor viability buněk. Testem jsou detekovány životaschopné buňky, přičemž jejich počtu odpovídá množství zredukovaného MTT. In vitro testy protinádorové aktivity byly provedeny na následujících lidských nádorových buněčných liniích: prsní karcinom MCF7, osteosarkom HOS, karcinom plic A549, maligní melanom G361, karcinom děložního čípku HeLa, karcinom vaječníku A2780, cisplatin-rezistentní karcinom vaječníku A2780R a karcinom prostaty 22Rvl. Linie byly udržovány v plastikových lahvích v DMEM médiu (5 g/1 glukózy, 2 mM glutaminu, 100 U/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetálního telecího séra a hydrogenuhličitan sodný) pro buněčné kultury. Suspenze buněk (ca 1,25 x 10⁵ buněk mL¹) byly rozpipetovány po 80 μΐ na devadesátišesti jamkové mikrotitrační destičky. Tyto byly preinkubovány při 37 °C v CO₂ atmosféře po dobu 24 hodin. Testované platnaté dichlorido komplexy a cisplatina byly předrozpuštěny v Λζ/Υ-dimethylformamidu, naředěny do koncentrace 50,0 mM a tyto sloužily jako zásobní roztoky. Pro vlastní experiment byly zásobní roztoky ředěny lOOOx v kultivačním médiu do maximální koncentrace 50,0 μΜ. Po odsátí kultivačního média byla směs jednotlivých testovaných látek přidána k preinkubované suspenzi nádorových buněk.

-4CZ 305374 B6

Směsi byly následně inkubovány po dobu 24 h při teplotě 37 °C, 100% vlhkosti a v atmosféře CO₂. Poté byl přidán roztok MTT a následovala inkubace po dobu 1 hodiny. MTT analýza byla provedena spektrofotometricky (TECAN, Schoeller Instruments LLC) při 540 nm. Inhibiční koncentrace testovaných komplexů IC₅o (μΜ), odpovídající koncentraci testovaných látek potřebné k inhibici růstu 50 % vložených nádorových buněk, byly vypočteny z dávkových křivek.

Příklad 1: Příprava a charakterizace platnatých dijodo-komplexů se 7-azaindolem a jeho deriváty

Platnaté dijodo-komplexy se 7-azaindolem a jeho deriváty cz's-[Pt(L])₂I₂] (1), c/s-[Pt(L₂)₂I₂] (2) , c/5-[Pt(L₃)₂I₂] (3), cz5-[Pt(L₄)₂I₂] (4), c«-[Pt(L₅)₂I₂] (5), cžs-[Pt(L₆)₂I₂] (6), cw-[Pt(L₇)₂I₂] (7) a ez,s'-[Pt(L₈)₂I₂] (8), kde Li = 7-azaindol, L₂ = 3-chlor-7-azaindol, L₃ = 3-brom-7-azaindol, L₄ = 3-jod-7-azaindol, L₅ = 4-chlor-7-azaindol, L₆ = 4-brom-7-azaindol, L₇ = 5-brom-7-azaindol a L₈ = 2-methyl-4-chlor-7-azaindol, byly připraveny syntetickým postupem, na jehož počátku byl výchozí tetrachloroplatnatan draselný (K₂PtCl₄; 0,5 mmol, 207,5 mg) rozpuštěn za laboratorní teploty v 10 ml destilované vody. Do roztoku byl v nadbytku přisypán jodid draselný (K.1; 2,5 mmol, 415,0 mg) a směs se za laboratorní teploty míchala po dobu 60 až 90 min, během které vznikl tetrajodoplatnatan draselný (K₂Ptl₄), což se projevilo výraznou změnou zbarvení reakční směsi až do temně červenoéemého. Do tohoto roztoku byl přilit roztok 1,0 mmol příslušného derivátu 7-azaindolu (118,1 mg L_b 152,6 mg L₂ a L₅, 197,0 mg L₃, L₆ a L₇, 244,0 mg L₄ a 166,6 mg L₈) v 10 ml etanolu nebo metanolu. Reakční směs byla za laboratorní teploty míchána 24 h, poté byl vzniklý žlutý produkt odfiltrován a promyt destilovanou vodou (2x5 ml), etanolem nebo metanolem (2x5 ml) a diethyletherem (2x5 ml). Produkt byl vysušen a uchován v exsikátoru nad silikagelem. Připravené komplexy 1-8 byly studovány elementární analýzou (C, Η, N), ^!H a ¹³C NMR (obr. 1, 2, 3 a 4) a 2D NMR (obr. 5) spektroskopií a v případě DMFsolvátu komplexu 8 také monokrystalovou rentgenovou strukturní analýzou (obr. 6).

cis-[Pt(Li)₂I₂] (1): Prvkové složení pro Ci₄Hi₂N₄I₂Pt (M_r = 685,17) vypočteno: C, 24,54; H, 1,77; N, 8,18%; nalezeno: 24,40; H, 1,63; N, 8,02%. 'H NMR (DMFA, 25 °C, SiMe₄, ppm): δ 13,33 a 12,78 (br, N1H, IH), 8,97 (d, 4,7, C6H, IH), 8,03 (br, C4H, IH), 7,80 (s, C2H, IH), 7,20 (br, C5H, IH), 6,60 (s, C3H, IH). ¹³C NMR (DMF-í/₇, SiMe₄, ppm): δ 148,57 (CT), 145,93 (C6), 132,16 (C4), 128,58 (C2), 124,31 (C3'), 117,68 (C5), 102,82 (C3).

cz'5-[Pt(L₂)₂I₂] (2): Prvkové složení pro C₁₄H₁₀N₄Cl₂I₂Pt (M_r = 754,05) vypočteno: C, 22,30; H, 1,34; N, 7,43%; nalezeno: 22,60; H, 1,27; N, 7,57%. 'H NMR (DMF-<7₇, 25 °C, SiMe₄, ppm): δ

13.76 a 13,07 (br, N1H, IH), 9,10 (d, 5,3, C6H, IH), 8,08 (br, C4H, IH), 8,03 (s, C2H, IH), 7,37 (m, C5H, IH). ¹³C NMR (DMFA, SiMe₄, ppm): δ 147,46 (C6), 146,19 (CT), 129,99 (C4), 126,25 (C2), 125,85 (C3'), 118,40 (C5), 105,05 (C3).

c«-[Pt(L₃)₂I₂] (3): Prvkové složení pro Ci₄Hi₀N₄Br₂I₂Pt (M_r = 842,96) vypočteno: C, 19,95; H, 1,20; N, 6,65%; nalezeno: 19,53; H, 1,02; N, 6,49%. ’H NMR (DMF-4 25 °C, SiMe₄, ppm): δ 13,85 a 13,19 (br, N1H, IH), 9,06 (br, C6H, IH), 8,09 (br, C2H, IH), 7,79 (s, C4H, IH), 7,33 (br, C5H, IH). ¹³C NMR (DMF-í/₇, SiMe₄, ppm): δ 147,15 (C7'), 145,84 (C6), 133,59 (C2), 132,43 (C4), 126,73 (C3'), 118,81 (C5), 56,45 (C3).

c/.y-[Pt(L₄)₂I₂] (4): Prvkové složení pro Ci₄Hj₀N₄I₄Pt (M_t = 936,96) vypočteno: C, 17,95; H, 1,08; N, 5,98%; nalezeno: 17,53; H, 1,02; N, 5,49%. *H NMR (DMF-í/₇, 25 °C, SiMe₄, ppm): δ 13,85 a 13,19 (br, N1H, IH), 9,06 (br, C6H, IH), 8,09 (br, C2H, IH), 7,79 (s, C4H, IH), 7,33 (br, C5H, IH). ¹³C NMR (DMF-č/₇, SiMe₄, ppm): δ 147,15 (CT), 145,84 (C6), 133,59 (C2), 132,43 (C4), 126,73 (C3'), 118,81 (C5), 56,45 (C3).

cz5-[Pt(L₅)₂I₂] (5): Anal. Vypočteno pro Ci₄Hi₀N₄Cl₂I₂Pt (M, = 754,05) vypočteno: C, 22,30; H, 1,34; N, 7,43%; nalezeno: 22,07; H, 1,46; N, 6,85%. ^]H NMR (DMFA, 25 °C, SiMe₄, ppm): δ

13.77 a 13,12 (br, N1H, IH), 8,98 (br, C6H, IH), 7,95 (br, C2H, IH), 7,37 (br, C5H, IH), 6,67

-5CZ 305374 B6 (br, C3H, 1H). ¹³C NMR (DMFX₇, SiMe₄, ppm): δ 147,96 (C7'), 146,35 (C6), 138,45 (C4), 129,63 (C2), 123,28 (C3'), 118,04 (C5), 101,07 (C3).

cis-[Pt(L₆)₂I₂] (6): Prvkové složení pro Cj₄HioN₄Br₂I₂Pt (M_r = 842,96) vypočteno: C, 19,95; H, 1,20; N, 6,65%; nalezeno: 19,60; H, 1,22; N, 6,25%. *H NMR (DMF-í/₇, 25 °C, SiMe₄, ppm): δ

13,78 a 13,12 (br, N1H, 1H), 8,88 (br, C6H, 1H), 7,96 (br, C2H, 1H), 7,51 (br, C5H, 1H), 6,59 (br, C3H, 1H). ¹³C NMR (DMF-ď₇, SiMe₄, ppm): δ 147,04 (C7'), 146,02 (C6), 129,64 (C2), 128,02 (C3'), 125,68 (C4), 121,11 (C5), 102,66 (C3).

c/5-[Pt(L₇)₂I₂] (7): Prvkové složení pro C_]4Hi₀N₄Br₂I₂Pt (M_r = 842,96) vypočteno: C, 19,95; H, 1,20; N, 6,65%; nalezeno: 19,55; H, 1,03; N, 6,23%. *H NMR (DMF-J₇, 25 °C, SiMe₄, ppm): δ 13,66 a 12,97 (br, N1H, 1H), 9,26 (br, C6H, 1H), 8,27 (br, C4H, 1H), 7,90 (br, C2H, 1H), 6,60 (br, C3H, 1H). ¹³C NMR (DMF-A, SiMe₄, ppm): δ 146,85 (C7'), 145,82 (C6), 134,36 (C4), 130,83 (C2), 126,01 (C3'), 110,86 (C5), 102,70 (C3).

cŽ5-[Pt(L₈)₂I₂] (8): Prvkové složení pro Ci₆Hi₄N₄Cl₂I₂Pt (M_r = 782,10) vypočteno: C, 24,57; H, 1,80; N, 7,16%; nalezeno: 24,35; H, 1,93; N, 7,04%. Základní krystalografická data pro cis[Pt(L₈)₂I₂] DMF: Prostorová grupa P-l, a = 11,0784(2), b = 11,0789(2), c = 11,6320(2) Á, a = 76,6972(17), β = 65,0446(18), γ = 71,7722(16)°, V = 1221,42(4) A³, T = 120 K, Z = 2, R1 [I > 2σ(Ι)] = 2,48%. Ptl-Il = 2,5833(4), Ptl-12 = 2,5836(4), Ptl-N7 = 2,044(4), Ptl-N7a = 2,055(4) Á,Il-Ptl-I2 = 92,237(13°), N7-Ptl-N7a = 88,87(16°), 1Á = 0,1 nm.

Příklad 2: In vitro protinádorová aktivita studovaných komplexů vůči zvoleným lidským nádorovým liniím ajejich srovnání s cisplatinou

Pro stanovení in vitro protinádorové aktivity studovaných komplexů cžs-[Pt(L₅)₂I₂] (5), cis[Pt(L₆)₂I₂] (6), c/5-[Pt(L₇)₂I₂] (7), cz.s—[Pt(L₈)₂I₂] (8) a cisplatiny vůči lidským nádorovým liniím (prsní karcinom MCF7, osteosarkom HOS, karcinom plic A549, maligní melanom G361, karcinom děložního čípku HeLa, karcinom vaječníků A2780, czspZařizj-rezistentní karcinom vaječníků A2780R a karcinom prostaty 22Rvl) byl použit výše popsaný MTT test (Lj = 7-azaindol, L₂ = 3-chlor-7-azaindol, L₃ = 3-brom-7-azaindol, L₄ = 3-jod-7-azaindol, L₅ = 4-chlor-7-azaindol, L₆ = 4-brom-7-azaindol, L₇ = 5-brom-7-azaindol a L₈ = 2-methylX-chlor-7-azaindol).

Protinádorová aktivita studovaných komplexů a cisplatiny, jako zvoleného standardu, vyjádřená hodnotami inhibiční koncentrace IC₅₀ (μΜ) je uvedena v Tabulce 1.

Tabulka 1: In vitro protinádorová aktivita studovaných komplexů vůči lidským nádorovým buněčným liniím prsního karcinomu MCF7, osteosarkomu HOS, karcinomu plic A549, maligního melanomu G361, karcinomu děložního čípku HeLa, karcinomu vaječníků A2780, cisplatinrezistentního karcinomu vaječníků A2780R a karcinomu prostaty 22Rvl ajejich srovnání s cisplatinou (CDDP) vyjádřené v hodnotách inhibiční koncentrace IC₅o (μΜ)

	MCF7	HOS	A549	G361	HeLa	A2780	A2780R	22Rv1
1	1,7±0,8	0,8±0,4	12,3±1,1	2,9±0,6	7,0±0,6	3,5±0,7	3,3±0,3	4,6±1,2
2	1,5±0,4	1,3±0,8	6,4±1,4	2,3±1,0	4,8±0,4	4,1 ±0,8	3,3±0,5	4,8±2,4

-6CZ 305374 B6

3	1,9±0,5	2,2±1,2	8,8±2,2	3,1±0,2	4,7±0,8	2,8±0,3	3,2±0,2	4,2±1,2
4	1,8±0,3	2,8±1,0	9,8±1,3	1,6±0,7	6,2±0,7	2,3±1,1	2,6±0,8	4,5±1,6
5	1,5±0,5	0,5±0,2	4,7±0,3	3,2±0,2	3,8±0,3	3,7±1,1	3,4±0,2	4,2±0,1
6	1,0±0,4	0,4±0,1	4,3±0,9	3,2±0,2	3,8±0,2	3,7±1,1	3,3±0,4	3,8±0,1
7	1,6±0,8	1,4±1,1	7,3±1,6	3,4±0,3	5,4±1,2	3,4±0,2	3,5±0,5	5,1 ±0,8
8	2,1±1,0	0,7±0,2	3,5±0,2	1,7±1,3	3,8±0,1	1,7±1,1	1,0±0,4	3,5±0,2
CDDP	17,9±3,5	18,9±1,7	>50,0	5,3±0,7	30,4±11,0 21,6±0,6	20,2±4,7	26,9±3,5

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. Dijodo-komplexy platiny v oxidačním stupni +11 se 7-azaindolem nebo jeho deriváty obec10 ného vzorce cis-[Pt(L)₂l2] I, vyjádřené strukturním vzorcem Γ kde symbol L představuje 7-azaindol nebo jeho derivát vázaný na atom platiny přes atom dusíku N7, přičemž pokud L představuje derivát 7-azaindolu, tak alespoň jeden ze substituentů R2, R3, R4 a R5 je vybrán z funkčních skupin alkyl nebo halogen, kde

20 halogen je vybrán ze skupiny F, Cl, Br, I, a alkyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z 1 až 6, především pak z 1 až 4, atomů uhlíku.

2. Krystalosolváty komplexů platiny vzorce I a Γ podle nároku 1, kde u sloučenin obecného 25 složení cz.s’-[Pt(L)2l₂]'«5'o/v jsou

- L je 7-azaindol nebo jeho derivát podle nároku 1, vázaný na atom platiny přes atom dusíku N7

- n udává počet krystalově vázaných molekul, především 1 až 6, a

- Solv je konkrétní molekula použitého rozpouštědla a/nebo některá z reakčních komponent vybraná ze skupiny voda, primární alkohol, sekundární alkohol, aceton, AV-dimethylformamid,

-7CZ 305374 B6 dimethyl sulfoxid, chloroform, dichlormethan, acetonitril nebo diethylether, a to buď samostatně, nebo v kombinaci uvedených sol váto vých molekul.

3. Farmakologický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje terapeutický účinné 5 množství platnatých komplexů vzorce I a Γ podle nároku 1 nebo jejich krystalosolvátů podle nároku 2 s jedním či více přijatelnými nosiči a pomocnými látkami.

4. Farmakologický prostředek podle nároku 3 pro použití pro léčbu prsního karcinomu a/nebo pro léčbu osteosarkomu a/nebo pro léčbu karcinomu vaječníku a/nebo pro léčbu karcinomu va10 ječníku rezistentního vůči cisplatině a/nebo pro léčbu karcinomu prostaty a/nebo pro léčbu karcinomu plic a/nebo pro léčbu karcinomu děložního čípku a/nebo pro léčbu maligního melanomu.

3 výkresy

-8CZ 305374 B6

Ή NMR chemický posun (ppm)

OBR. 1

Ή NMR chemický posun (ppm)

OBR. 2