CZ20032028A3 - Sloučeniny azolu jako fungicidní činidla - Google Patents

Description

Sloučeniny azolu jako fungicidní činidla.

Oblast techniky

Vynález se týká derivátů speciálně substituovaných sloučenin azolu, které vykazují lepší fungicidní působení ve srovnání se současně dostupnými činidly této třídy a způsobů jejich přípravy. Vynález se týká farmaceutických přípravků obsahujících sloučeniny podle vynálezu a jejich použití při léčbě a/nebo prevenci infekcí způsobených houbami u savců, výhodněji u člověka.

Dosavadní stav techniky

Život ohrožující, systémové infekce způsobené houbami zůstávají vážným problémem současné zdravotní péče. Obzvlášť pacienti s oslabeným imunitním systémem v důsledku diabetů, rakoviny, dlouhodobé léčby steroidy, léčby proti zamítnutí transplantovaného orgánu, syndromu získaného selhání imunity (AIDS) nebo jiných fyziologických nebo imunologických syndromů, jsou náchylní k oportunním plísftovým infekcím.

Od padesátých a šedesátých let až do nedávné doby byly hlavními oportunními plísňovými patogeny, se kterými se lékaři potýkali: Candida albicans, Asperigillus fumigatus a zygomycety, které způsobují mukormykózu, rychlou infekci se smrtelnými následky obzvlášť u diabetických pacientů. Dnes se stala více rozšířenou nebělavá Candida (nonalbicans), stejně jako další druhy Aspergilus. Druhy Candida jsou dnes čtvrtou nejčastější příčinou nemocničních infekcí krevního řečiště a jsou spojeny s velmi vysokou 40% úmrtností. Od roku 1980 do roku 1990 se počet případů plísňových infekcí v nemocnicích v US téměř zdvojnásobil, ze 2 % propuštěných pacientů na 3,8 %. Nejzřetelnější nárůst plísňových infekcí se objevil nejen na transplantačních odděleních, nebo v onkologických centrech, ale také v chirurgických službách. Tento měnící se stav ukazuje, že plísňové infekce se už neomezují pouze na pacienty s nejvíce potlačenou imunitou.

Během posledních dvou dekád byl zaznamenán podstatný posun v epidemiologii výskytu kandidózy v důsledku objevení různých druhů Candida. V šedesátých a sedmdesátých letech byla Candida albicans zodpovědná za 85 až 90 % případů výskytu kandidózy. V roce 1999 bylo však pouze 42 % případů kandidózy způsobeno C. albicans, zatímco nebělavá Candida(non-albicans) byla zodpovědná za zbytek případů.

Kryptokokóza je hlavním důvodem úmrtnosti u pacientů s AIDS. Výskyt této život ohrožující kryptokokové infekce u těchto pacientů byl odhadnut na 10 až 30 %. V počátcích • ·· ···· · · · • · · · ···· · · · • ·«···«· · 9 9 9 9 9 * 9

- 99 9 99 9 9999 ·· * 9 9 99 »9 99 léčby zemře 10 až 20 % těchto pacientů a 30 až 60 % pacientů podlehne do jednoho roku. U HIV+ pacientů byl často izolován druh Penicillinium marneffei, obzvlášť v jihovýchodní Asii.

Nejběžnějším činidlem způsobujícím mukormykózu je rhizopus, běžná chlebová plíseň, která žije na jakémkoli organickém materiálu. Další patogeny zahrnují Mucor, Rhizomucor a Absidia. Zygomycety zahrnují dvacet různých hub, které se histologicky zdají být stejné. Pacient s těžce oslabeným imunitním systémem může být zygomycetami infikován vdechnutím.

Fusarium je celosvětově nejrozšířenější plísní rostlin, a v současné době bylo zjištěno, že patří také mezi lidské patogeny. Fusariové infekce se mohou objevit u imunokompetentních osob nebo osob s potlačenou imunitou. Infekce fusariem ohrožují život a jsou spojovány se špatnou prognózou.

Penicillium marneffei je plíseň životního prostředí, která může způsobit u pacientů s potlačenou imunitou vážné, život ohrožující infekce. Penicillium marneffei si získalo značnou pozornost během pandemie AIDS, jelikož může způsobovat chorobu, která je klinicky nerozeznatelná od rozšířené histoplazmózy.

Invazní aspergilóza se také stala vedoucí příčinou úmrtí, hlavně u pacientů s akutní leukémií nebo po alogenní transplantaci kostní dřeně a po cytotoxické léčbě těchto stavů. Také se objevuje u pacientů trpících AIDS nebo chronickou granulomatózní chorobou.

V současné době jsou pro léčbu aspergilózy dostupné pouze Amphotericin B a itraconazol. I přes jimi vykazované působení ίη-vitro zůstává jejich in-vivo účinek proti Aspergillus fumigatus nízký a důsledkem je přetrvávající vysoká úmrtnost na invazivní aspergilózu.

Během posledních tří desetiletí byl učiněn důležitý pokrok v léčbě systematických plísňových infekcí. Ačkoliv chemoterapeutická činidla jako flucytosin a jodid draselný jsou účinná proti vybraným plísňovým onemocněním, hlavním lékem pro použití u systémových mykóz zůstávají amphotericin B a sloučeniny azolu. I přes všeobecnou účinnost amphotericinu B je jeho použití omezeno celou řadou sním spojených komplikací a specifických toxicit. Navíc se tato látka špatně absorbuje ze zažívacího traktu, což vyžaduje injekční podání. Navíc amphoptericin B proniká špatně mozkomíšní tekutinou (CSF) jak u normálních, tak zanícených mozkových plen.

Problémy spojené s použitím amphotericinu B podpořily výzkum nových látek. Mezi dostupnými léky pro léčbu plísňových infekcí se nejslibněji jeví třída sloučenin azolu. Tato třída sloučenin inhibuje biosyntézu houbového ergosterolu, který je hlavní složkou buněčné membrány hub. Z různých představitelů fungicidů patří mezi ze začátku používané azoly: clotrimazol, miconazol, a tioconazol, které byly účinné proti celé řadě lidských plísňových • · · * · • · « ···· » · · • · · » · · · · · · · • ······· · ··· · · · ·

- ·········· ♦ · · · · ·· · · «· patogenů. Clotrimazol byl prvním orálně podávaným azolem, u nějž byla prokázána účinnost proti experimentální a lidské mykóze. Nicméně, krátké léčebné kůry clotrimazolem vedou k indukci jatemích mikrozomálních enzymů, které následně zvýší metabolismus léku, čímž zmenší jeho íungicidní účinek. Naopak miconazol, který se stal dostupným zhruba ve stejné době jako clotrimazol, není rychle metabolizován a je účinný při intravenózní léčbě mnohých systémových plísftových onemocnění. Bohužel je však použití miconazolu omezeno jeho mnohočetným toxickým působením.

Aktivita clotrimazolu, miconazolu a tioconazolu prokázaná in-vitro se v modelech in-vivo neprojevovala dobře v důsledku špatné absorbovatelnosti při perorálním podání a metabolické náchylnosti. Ketoconazol byl prvním lékem, který mohl být použit proti systémovým plísňovým onemocněním a který byl úspěšně podán orální cestou. Nicméně byl stále náchylný k metabolické inaktivaci a také způsoboval impotenci a gynekomastii, pravděpodobně v důsledku jeho působení proti enzymům lidského cytochromu P450.

Dokonce i s nástupem ketoconazolu pokračoval výzkum zdokonalených fungicidních sloučenin azolu, částečně v důsledku obav z potenciální toxicity a špatné pronikavosti do mozkomíšních tekutin (CSF) spojených s ketoconazolem. Několik azolů bylo vyvinuto jako aktuální činidla, primárně namířená proti povrchovým kandidovým a dermatofytickým infekcím.

Flucanozol jev současné době látkou volenou pro léčbu těžkých infekcí způsobovaných druhem Candida a C. neoformans. Nicméně, fluconazol vykazuje jen slabou účinnost proti izolovaným druhům Aspergillus [minimální inhibiční koncentrace (MIC) v hodnotách 400 pg/ml], jelikož má látka nízkou účinnost (IC₅o=4,8 μΜ) proti lanosterol 14a-de-metyláze, cílovému enzymu u plísní. Itraconazol, další triazolová fungicidní sloučenina je při léčbě aspergilózy obecně účinnější než flucanozol, ale její klinická aktivita zůstává nejistá, protože vykazovala různou orální dostupnost, nízkou rozpustnost a velmi vysokou proteinovou vazbu kromě toho, že způsobovala rakovinu vaječníků u zvířat.

Vývoj dřívějších sloučenin, které zahrnovali SCH 39304 (Genoconazol), SCH 42427 (Saperaconazol) a BAY R 8783 (Electrazol) musel být zastaven v důsledku obav týkajících se bezpečnosti. Další slibný triazol D0870, derivát fluconazolu, vykazoval značné odchylky vplazmatické farmakokinetice a měl také nízkou účinnost proti druhu Aspergillus. Další deriváty flucanozolu v různých stádiích vývoje zahrnují Voriconazol a ER 30346 (BMS 207147). Voricanozol také vykazuje nelineární farmakokinetiku, kromě některých obav z jeho zrakové toxicity. Aktivita ER 30346 proti aspergilu, jak in-vitro, tak in-vivo je pouze srovnatelná s aktivitou itraconazolu. SCH 56592 je hydroxylovaným analogem itraconazolu

9 9 ·

9» se silnou in-vitro a ίη-vivo aktivitou, ale nelze jej zjistit v CSF i v případě, že koncentrace léku v séru po několika dnech léčby dosáhla hodnot 25 až lOOkrát vyšších, než MIC pro nejrezistentnější C. neoformans. Tudíž je tato silná účinnost SCH 56592 pro C. neoformans částečně popřena její nízkou koncentrací v místě infekce v centrálním nervovém systému. Tito zmínění kandidáti azolů jsou diskutováni v následujících publikacích:

SCH 56592; Antimicrobial agents and chemotherapy, 40, 1910 (1996); 36^th Interscience Conference on Antimicrobial agents and chemotherapy, září, 1996, New Orleans, Abst. To F-87-F-102.

TAK-187; 36^th Interscience Conference on Antimicrobial agents and Chemotherapy, září, 1996, New Orleans, Abst. F 74; EP 567892.

TAK-456 a TAK-457; 40^th Interscience Conference on Antimicrobial agents and Chemotherapy, Toronto, Canada, Abs. No. 1085 a 1086; US 6 034 248. ER-30346 : Drugs of the Future, 21, 20 (1996).

Různé deriváty sloučenin azolu byly popsány v US patentu č. 5371101, postoupené Takeda. Ale žádný z nich nesplňuje plně lékařské potřeby, jelikož poskytují omezené spektrum aktivity a nízkou účinnost.

Proto na trhu dostupné fungicidy trpí nedostatky, jako je toxicita, omezené spektrum působení a mají spíše fungistatický než fungicidní profil. Některé z nich také vykazují interakce lék-lék a výsledkem je komplikovanost léčby. Při uvážení vysokého výskytu plísftových infekcí u pacientů s oslabenou imunitou a s ohledem na poslední trendy stálého/plynulého nárůstu populace těchto pacientů se zvyšuje poptávka po nových fungicidních činidlech se širokým spektrem působení a dobrými farmakokinetickými vlastnostmi. Pokračující požadavek na bezpečné fungicidní činidlo s širokým polem účinnosti s vhodnými farmakokinetickými vlastnostmi popoháněl jak navrhování, tak i vývoj nových systémově aktivních fungicidních triazolů.

I přes léčebný úspěch fluconazolu a itraconazolu zůstává značná potřeba zdokonalených, širokospektrálních, fungicidních spíše než fungistatických, lépe tolerovaných, méně toxických, bezpečnějších při účinných dávkách a účinnějších fungicidních sloučenin s minimálním potenciálem pro vývoj rezistence u cílových plísní. Proto vývoj fungicidních činidel zůstává neustále velkým úkolem.

Podstata vynálezu

Vynález poskytuje substituované sloučeniny azolu, které mohou být použity k léčbě nebo prevenci plísňových onemocnění u savců, s výhodou u člověka.

• · · · 4 • · · · 4 4

4444444 4 • 44 · · • · 4 4 4 • ·· · · 4 · 4

4· * 4 4

99999 4 4

4 4 4 * • 4 4 4 9 9

První aspekt vynálezu poskytuje sloučeninu obecného vzorce I, a její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, diastereomery, N-oxidy, prekurzory a metabolity,

kde X je vybráno ze skupiny sestávající z CH₂, CO, CS a SO₂;

Ar je substituovaná fenylová skupina obsahující jeden až tři substituenty nezávisle vybrané z halogenu (například, fluor, chlor, brom, nebo jod), z C1-C4 alkylu, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkylové skupiny, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkoxylové skupiny jako jsou: 2,4-difluorfenyl, 2,4-dichlorfenyl, 4-chlorfenyl, 4-fluorfenyl, 2-chlorfenyl, 2-fluorfenyl, 4-trifluormetylfenyl, 2-fluor-4-chlorfenyl, 2-chlor-4-fluorfenyl, 4-trifluormetoxyfenyl, 2,4,6-trifluorfenyl, 4-bromfenyl;

Ri a R₂ jsou každý nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, C1-C4 alkylu, CiC4 alkoxy, amino, hydroxy, nitro, kyano, karboxylu, chráněného karboxyiu, a SO₂R', kde R'je vodík, alkyl nebo aryl;

Y je fenylová skupina, která je nesubstituovaná nebo substituovaná 1 až 3 substituenty, z nichž každý byl nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z halogenu, nitro, amino, kyano, karboxylu, chráněného karboxylu, hydroxy, C1-C4 alkylu, C1-C4 alkoxy a SO₂R', kde R'je vodík, alkyl nebo aryl;

R₃ je vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, C1-C4 alkylové skupiny, C1-C4 alkoxy skupiny, nitro, amino, kyano, karboxylu, chráněného karboxylu a SO₂R', kde R'je vodík, alkyl nebo aryl, a

Xi, X₂, Yi, Y₂ a Z jsou nezávisle vybrané ze skupiny sestávající z vodíku, halogenu, nitro, kyano, amino, sulfonylu, arylu, C1-C4 alkylu, C1-C4 alkoxy, halogenu substituovaného nižší (C1-C4) alkylovou skupinu, halogenu substituovaného nižší (C1-C4) alkoxy skupinou a karboxylu, nebo chráněného karboxylu.

Pokud Ri není vodík, sloučenina obecného vzorce I má dvě asymetrická centra a existují čtyři možné enantiomery, což jsou: RR, RS, SR, a SS. Vynález se týká směsi enantiomerů, stejně jako individuálních izomerů a nej výhodněj ším se zde jeví izomer RR.

• ·

V souladu s druhým aspektem vynálezu je poskytnuta sloučenina obecného vzorce II, a její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, diastereomery, N-oxidy, proléčiva nebo metabolity, • 9 9 • 9 9 • 9 · 9

9 * * 9 ·

9 9

9

9 9 9 • · · 9

9 9 9 • 9 9999

9 9

9 9 9

kde X, Ar, Ri, R2, Xi, X2, Yi, Y2 a Z jsou stejné, jak zde bylo definováno.

Pokud Ri není vodík, sloučenina obecného vzorce II má dvě asymetrická centra a existují čtyři možné enantiomery, což jsou: RR, RS, SR, a SS. Vynález se týká jak směsi enantiomerů, tak i individuálních izomerů a nej výhodnějším izomerem v této situaci se jeví RR.

Nyní bylo zjištěno, že sloučenina, tedy 2-{[lR,2R]-2-(2,4-difluorfenyl)-2-hydroxy-l-metyl-3-( 1 Η-1,2,4-triazol-1 -yljpropyl} -4-(2 ‘,2 ‘ ,3 ‘ ,3 ‘-tetrafluoropropoxyfenyl)-3-(2H,4H)-1,2,4-thiotriazolon vykazuje neočekávaně silné působení proti klinicky důležitým vláknitým druhům hub, kromě zvětšeného spektra. Sloučenina se ukázala jako fungicidně působící proti některým vláknitým plísním.

Farmaceuticky přijatelné, ne-toxické soli přidané kyseliny se sloučeninami podle vynálezu obecného vzorce I nebo II mohou být vytvořeny s anorganickými nebo organickými kyselinami, podle postupů, které jsou dobře známy v oboru.

Cílem vynálezu je také poskytnout způsob syntézy sloučenin podle vynálezu.

Dalším cílem vynálezu je poskytnout kompozici obsahující sloučeniny podle vynálezu pro léčbu plísňových infekcí.

Vynález také zahrnuje v rámci svého obsahu proléčiva (prekurzory) sloučenin obecného vzorce I a II. Obecně budou takové látky funkčními deriváty těchto sloučenin, které budou v prostředí in-vivo pohotově přeměněny na definované sloučeniny. Jsou známy běžné postupy pro výběr a přípravu vhodných proléčiv.

Vynález také zahrnuje farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, diastereomery, N-oxidy, proléčiva, metabolity v kombinaci s farmaceuticky přijatelnými nosiči a případnými excipienty (inertní přenašeč).

Další výhody a přednosti vynálezu budou uvedeny v následujícím popisu a částečně budou zřejmé z popisu, nebo mohou být zjištěny při použití vynálezu.

• 4 44 4 · ·4 4 4

444 · · · · ·· ·

4444 · 4 4 4 44 4 · ·44· 4 4 4 444 4 4 4 4

4 44 · · 4 4 4

4 44 44 44 44

S cílem dosáhnout výše zmíněných aspektů a ve shodě se záměrem vynálezu tak, jak je zde zahrnut a popsán, jsou zde poskytnuty způsoby syntézy sloučenin obecného vzorce I a II, kde X, Ar, Ri, R₂, R3, Y, Xi, X2, Yi, Y₂ aZ jsou stejné, jak již bylo definováno výše. Počáteční sloučeniny obecného vzorce III a IV jsou známé z námi publikované patentové přihlášky (PCT) č. WO 01/66551 a z US patentu ě. 5371101, jednotlivě a jsou zde zahrnuty odkazem.

SCHÉMA I

Ve schématu I je poskytnut způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I, zde uvedené a jejích farmaceuticky přijatelných solí, enantiomerů, diastereomerů, N-oxidů, proléčiv nebo metabolitů, kde X je vybráno ze skupiny obsahující CH₂, CO, CS a SO₂;

Ar je substituovaná fenylová skupina obsahující jeden až tři substituenty nezávisle vybrané z halogenu (například fluor, chlor, brom, nebo jod), z C1-C4 alkylu, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkylové skupiny, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkoxy ·♦ φ φφ φφ φφφ φφφφ φφ φ φφφφ φφφφ φφ φ φ φ φφφφ φ φ φ φφφ φφφ φ φφφφφφφφφφ g φφ # φφ φφ φφ skupiny, jako jsou: 2,4-difluorfenyl, 2,4-dichlorfenyl, 4-chlorfenyl, 4-fluorfenyl, 2-chlorfenyl, 2-fluorfenyl, 4-trifluormetylfenyl, 2-fluor-4-chlorfenyl, 2-chlor-4-fluorfenyl, 4-trifluormetoxyfenyl, 2,4,6-trifluorfenyl, 4-bromfenyl;

Ri a R2 jsou každý nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, C1-C4 alkylu, CjC4 alkoxy, amino, hydroxy, nitro, kyano, karboxylu, chráněného karboxylu, a SO2R', kde R je vodík, alkyl nebo aryl;

Y je fenylová skupina, která je nesubstituovaná nebo substituovaná 1 až 3 substituenty, z nichž každý byl nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z halogenu, nitro, amino, kyano, karboxylu, chráněného karboxylu, hydroxy, C1-C4 alkylu, C1-C4 alkoxy a SO2R', kde Rje vodík, alkyl nebo aryl;

R₃ je vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, C1-C4 alkylové skupiny, C1-C4 alkoxy skupiny, nitro, amino, kyano, karboxylu, chráněného karboxylu a SO2R', kde Rje vodík, alkyl nebo aryl, a

Xi, X2, Yi, Y2 a Z jsou nezávisle vybrané ze skupiny sestávající z vodíku, halogenu, nitro, kyano, amino, sulfonylu, arylu, C1-C4 alkylu, C1-C4 alkoxy, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkylové skupiny, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkoxy skupiny a karboxylu, nebo chráněného karboxylu.

Pokud Ri není vodík, obecný vzorec I má dvě asymetrická centra a existují čtyři možné enantiomery, což jsou: RR, RS, SR, a SS. Vynález se týká jak směsi enantiomerů, tak i individuálních izomerů a nej výhodnějším se v této situaci jeví izomer RR;

který obsahuje reakci vhodné oxo sloučeniny obecného vzorce III, kde X, Ar, Ri, R2, Y,

R₃, Xi, X₂, Yi, Y2 a Z mají stejný význam, jak bylo definováno výše, s modifikovaným Lawessonovým činidlem vzorce V, což poskytne požadovanou sloučeninu obecného vzorce I.

Oxo sloučenina obecného vzorce III může být připravena podle postupů popsaných v naší PCT přihlášce WO 01/66551. Modifikované Lawenssonovo činidlo je připraveno podle postupu, který byl popsán v Masataka Yokohamna a kol., v Synthesis. str. 827-829 (1984).

4

4 4 4 4 4

4 4 4 4 4

444444 4 4

4 4 4 4 4

4 4 4 4 4

4 4 *

4 4 4 4

4444444

4 4 4

4 4 «4 4444

SCHÉMA II

(ID

Ve schématu II je poskytnut způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce II, jak bylo ukázáno výše, a jeho farmaceuticky přijatelných solí, enantiomerů, diastereomerů N-oxidů, proléčiv nebo metabolitů, kde X je vybrán ze skupiny sestávající z CH₂, CO, CS a SO₂;

Ar je substituovaná fenylová skupina obsahující jeden až tři substituenty nezávisle vybrané z halogenu (například fluor, chlor, brom, nebo jod), z C1-C4 alkylu, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkylové skupiny a halogenem substituované nižší (C1-C4) alkoxy skupiny, jako jsou: 2,4-difluorfenyl, 2,4-dichlorfenyl, 4-chlorfenyl, 4-fluorfenyl, 2-chlorfenyl, 2-fluorfenyl, 4-trifluormetylfenyl, 2-fluor-4-chlorfenyl, 2-chlor-4-fluorfenyl, 4-trifluormetoxyfenyl, 2,4,6-trifluorfenyl, 4-bromfenyl;

*· ··· ·

9 9 · · 9 9 • 9 · * 9 9 · 99 9

9999 9999 99 9

999999« 999999 9 «

W 9 9 9 99 9 9999

9 99 99 99 99

Ri a R₂ jsou každý nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, C1-C4 alkylu, CiC4 aikoxy, amino, hydroxy, nitro, kyano, karboxylu, chráněného karboxylu, a SO2R', kde Rje vodík, alkyl nebo aryl; a

Xi, X₂, Yi, Y2 a Z jsou nezávisle vybrané ze skupiny sestávající z vodíku, halogenu, nitro, kyano, amino, sulfonylu, arylu, C1-C4 alkylu, C1-C4 aikoxy, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkylové skupiny, halogenem substituované nižší (C1-C4) aikoxy skupiny a karboxylu, nebo chráněného karboxylu.

Pokud Ri není vodík, sloučenina obecného vzorce II má dvě asymetrická centra a existují čtyři možné enantiomery, což jsou: RR, RS, SR, a SS. Vynález se týká jak směsi enantiomerů, tak i individuálních izomerů a nej výhodnějším se v této situaci jeví izomer RR;

který obsahuje reakci vhodné oxo sloučeniny obecného vzorce IV, kde X, Ar, R_b R2,

Xi, X2, Yi, Y2 a Z mají stejný význam, jak zde bylo definováno, s modifikovanými Lawessonovými činidly [připravenými podle postupů popsaných v Masataka Yokohama a kol. v Synthesis, str. 827-829 (1984)] vzorce V, což poskytne požadovanou sloučeninu obecného vzorce II. Počáteční sloučenina obecného vzorce IV je připravena podle postupů tak, jak jsou uvedeny v US pat.č. 5371101.

Ve výše uvedených reakčních schématech byla uvedena specifická rozpouštědla a specifická modifikovaná Lawessonova činidla, rozumí se, že mohou být použita také jiná rozpouštědla a Lawessonova činidla nebo jejich modifikace. Podobně, reakční teplota během reakce může být upravena podle potřeby. Ilustrační list některých sloučenin podle vynálezu a takových, které lze připravit podle schémat I a II zahrnuje:

Sloučenina č. 1 : 2-{[lR,2R]-2-(2,4-Difluorfenyl)-2-hydroxy-l-metyl-3-(lH-l,2,4-triazol-1 -yl)propyl} -4- {4-[4-(4-chlorfenyl)-l -piperizinyl]fenyl} -3-(2H,4H)-1,2,4-thiotriazolon

Sloučenina č. 2 : 2-{[lR,2R]-2-(2,4-Difluorfenyl)-2-hydroxy-l-metyl-3-(lH-l,2,4-triazol-1 -yl)propyl} -1 -[4-(4-metoxyfenyl)-3-(2H,4H)-1,2,4-thiotriazolon

Sloučenina č. 3 : 2-{[lR,2R]-2-(2,4-difluorfenyl)-2-hydroxy-l-metyl-3-(lH-l,2,4-triazol-1 -yl)propyl} -4-(2 ',2 ',3 ',3 '-tetrafluorpropoxyfenyl)-3-(2H,4H)-1,2,4-thiotriazolon

Příklady uvedené níže ukazují obecné syntetické postupy a také specifické způsoby přípravy výhodných sloučenin. Příklady jsou zde uvedeny s cílem ilustrovat podrobnosti vynálezu a neměly by omezovat rozsah vynálezu.

·»* <· ··»· • · · · « • · 9 · • 9 9999

9 9 · 9

9 · ·

Sloučeniny byly charakterizovány použitím NMR, IR a byly chromatograficky čištěny. Surové produkty byly podrobeny čištění kolonovou chromatografii na silikagelu 39-78 ok.cm' ¹ nebo 23-47 okem’¹ (100-200 nebo 60-120 síť) jako stacionární fázi.

Příklad 1

Typické postupy pro přípravu sloučenin obecného vzorce I

Směs vhodné oxo sloučeniny (1,15 mmol) a modifikovaného Lawessonova činidla (6,34 mmol) ve 140 ml toluenu bylo zahříváno po dobu 3,5 hodin v lázni o teplotě 120 °C. Reakční směs byla potom ochlazena na pokojovou teplotu a rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu. Takto získaný zbytek byl promyt několikrát dichlormetanem. Frakce rozpustné v chloroformu byly spojeny a koncentrovány ve vakuu. Čištění kolonovou chromatografii (síť silikagelu 39-78 ok.cm’¹ (100-200), 10-15% etylacetát/dichlormetan) poskytlo požadovaný sírový analog v 44,5% výtěžku a ~90% HPLC čistotě. Rekrystalizace s absolutním etanolem poskytla čistou sloučeninu s 98% čistotou (podle HPLC).

Příklad 2

Typické postupy pro přípravu sloučenin obecného vzorce II

Oxo sloučenina (lmol) a Lawessonovo činidlo (2 mol ekvivalent) byly sušeny ve vysokém vakuu 10 minut, spláchnuty dusíkem a zahřívány v toluenu 15 hodin na reflux. Reakční směs byla koncentrována až do sucha, znovu rozpuštěna v dichlormetanu a čištěna kolonovou chromatografii (silikagel, síť 100=200), s použitím směsí dichlormetan-etylacetát (9,5:0,5 až 6:4), což poskytlo požadovaný produkt v zhruba 10% výtěžku.

Příklad 3

Příprava 2- {[ 1 R,2R] -2-(2,4-difluorfenyl)-2-hydroxy-1 -metyl-3-( 1 Η-1,2,4-triazol-1 -yl)propyl}- 4-(2',2',3 ',3 '-tetrafluorpropoxyfenyl)-3-(2H,4H)-l,2,4-thiotriazolon

Směs 1,41 g 2-{[lR,2R]-2-(2,4-difluorfenyl)-2-hydroxy-l-metyl-3-(lH-l,2,4-triazol-l-yl)propyl} -4-(2 ',2 ',3 ',3 '-tetrafluorpropoxyfenyl)-3-(2H,4H)-1,2,4-triazolonu a 2,08 g Lawessonova činidla (2,0 mol ekvivalent) bylo zahříváno 3 až 15 hodin v toluenu na reflux. Reakční směs byla koncentrována ve vakuu, což dalo žlutou polotuhou (vysoce viskózní) látku, která byla míchána 10 minut s dichlormetanem. Pevná látka byla filtrována a promyta dichlormetanem. Spojený filtrát a zbytky po několika promytí byly koncentrovány ve vakuu, což dalo žlutou polotuhou látku, která byla potom čištěna kolonovou chromatografii (nejdříve ·* 4 «4 » * * »

4*4 «4*9 9« · • 4 » * »44« 4 C » • 4 4444 44 » »·· 4 4 · 4

4«4 4444444 ** * ** «· *· ·* na silikagelu, 23-47 okem¹ (síť 60-120) a potom na aktivním oxidu hlinitém, základní), což dalo 0,3 g žluté kypré pevné látky jako požadované sloučeniny.

Bylo provedeno stanovení RR/SS na základě analýzy ¹HNMR.

Je zde uveden seznam ilustrující některé ze sloučenin podle vynálezu, které byly syntetizovány jedním nebo více zde popsanými způsoby spolu s jejich 'HNMR údaji. Všechna ^!HNMR spektra byla zaznamenána na přístrojích Brucker AMX 300 NMR (300 MHz), s použitím CDCI3 jako rozpouštědla a TMS jako vnitřního standardu, pokud není uvedeno jinak. Všechny hodnoty jsou uvedeny v ppm.

Symboly v příkladech mají tyto významy; s: singlet; d: dublet; t: triplet; q: kvartet; dd: dvojitý dublet; m: multiplet; br: široký; J: spojovací konstanta:

Sloučenina č. 1 : 2-{[lR,2R]-2-(2,4-Difluorfenyl)-2-hydroxy-l-metyl-3-(lH-l,2,4--triazol-l-yl)propyl}-4-{4-[4-(4-chlorfenyl)-l-piperizinyl]fenyl}-3-(2H,4H)-l,2,4--thiotriazolon

Teplota tání.: 129 až 13 0 °C

Ir (KBr): 3421, 2916, 2847,1614,1595 cm¹

NMR(CDC1₃) δ 1,33 (d=6,7 Hz, CH-CH₃), 3,33-3,42 (m, 8H piperazin-H), 4,35 (d, J=14,3 Hz, 1H, CH₂-Triazol), 5,14 (d, J=14,4 Hz, CH₂-Triazol), 5,19 (bs, 1H, -OH), 5,93 (q, J=6,7 Hz, 1H, CH-CH₃), 6,81-6,90 (m, 4H, Ar-H), 7,05 (d, J=8,5 Hz, 2H, Ar-H), 7,24 (d, J=8,5 Hz, 2H, Ar-H), 7,43 (d, J=8,5 Hz, 2H, Ar-H), 7,60 (m, 1H, 2,4-difluorfenzl-H), 7,74 (s,

1H, thiotriazolon-H), 7,92 (s, 1H, triazol-H), a 7,93 (s, 1H, triazol-H).

Hmotnost: m/z 623,1 (M+l)

Sloučenina č. 2 : 2-{[lR,2R]-2-(2,4-Difluorfenyl)-2-hydroxy-l-metyl-3-(lH-l,2,4-triazoll-yl)propyl}-l-[4-(4-metoxyfenyl)-3-(2H,4H)-l,2,4-thiotriazolon teplota tání: 166 až 170 °C

Ir (KBr): 3436, 2924,1615,1511,1476,1258, 962 a 835 cm¹

NMR(CDC1₃) δ 1,36 (d, 1H, J=9 Hz, CH-CH₃), 3,873 (s, 3H OCH₃), 4,351 (d, 1H,

J=14,4 Hz; triazol-CH₂), 5,703-5.202 (m, 2H; triazol-CH₂&OH), 5,933 (q, 1H, J=6,9 Hz, CH-CH₃), 6,81-6,87 (m, 2H; Ar-H), 7,034-7,07 (d, 2H, Ar-H), 7,455-7,483 (d, 2H; Ar-H), 7,59-7,642 (m, 1H; Ar-H), 7,31 (s, 1H; Ar-H) a 7,927 (s, 2H, Ar-H).

Hmotnost: m/z 459,0 (M+l)

Sloučenina č. 3 : 2-{[lR,2R]-2-(2,4-Difluorfenyl)-2-hydroxy-l-metyI-3-(lH-l,2,4~triazoll-yl)propyl}-4-(2 ',2 ',3 ',3 -tetrafluorpropoxyfenyl)-3-(2H,4H)-l ,2,4-thiotriazolon teplota tání: 76,8 až 84,3 °C ··· * * · · «00000 «·· «000 «0 0 «00« 000« 00 0

0 0000 00 0 000 000 0

0000000000

1J 0» 0 0» 00 00 00

Ir(KBr): 3447,1618, 1515,1423,1135,1110 a 867,6 cm'¹

NMR (CDC1₃) δ 1,33 (d, 3H, J=9 Hz, CH-CH3), 4,41 (m, 3H OCH₂CF₂ a triazol-CH₂),

5,16 (d, 1H, J=14,4 Hz; triazol-CH₂), 5,92 (q, 1H, J=9 Hz; CH-CH3),

6,07 (tt, 1H, J=53,4 a 4,5Hz; CF₂CF₂H), 6,85 (m, 2H; Ar-H ), 7,11 (d,

2H; J=9,0 Hz; Ar-H), 7,58 (m, 3H; Ar-H), 7,77 (s, 1H), 7,96 (s, 1H) a 8,26 (s, 1H).

Hmotnost: m/z 559,0 (M+l)

Farmakologická aktivita/farmakologické působení

Sloučeniny obecných vzorců I a II, jak byly uvedeny výše, a jejich soli jsou užitečné při léčebném nebo preventivním podávání u zvířat při infekcích způsobených houbami a také u člověka. Například, jsou vhodné při léčbě aktuálních plísňových onemocnění u člověka způsobených, mezi jinými, druhy Candida, Trichophyton, Microsporum nebo Epidermophyton, u infekcí postihujících sliznice způsobených C. albicans (jako jsou afty a vaginální kandidóza). Lze je také použít při léčbě systémových plísňových infekcí způsobených, například, druhy Candida (jako je Candida albicans}, Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Fusarium, Rhizopus nebo Penicillinium marneffei.

U sloučenin podle vynálezu bylo zjištěno, že vykazují neobvykle silné působení proti klinicky důležitým vláknitým druhům hub, kromě jejich zvětšujícího se spektra. Sloučeniny jsou fungicidní.

Hodnocení fungicidního působení sloučenin prováděné in vitro se může uskutečnit tak, že se stanoví minimální inhibiční koncentrace (MIC), jak je uvedeno v tabulce 1, což je koncentrace testované sloučeniny v Rosewell park Memoriál Institute (RPMI) 1640 kapalném médiu pufrovaném kyselinou 3-(Morfolino)propansulfonovou (MOPS) na pH 7, při kterém je sledována významná inhibice určité konkrétní houby/plísně. Prakticky byl pro určení MIC proti kvasinkám a vláknitým houbám s vhodnými modifikacemi pro dermatofyty až po další vláknité houby použit dokument Národní rady pro klinické laboratorní standardy (NCCLS)

M27A pro Candida a Cryptococcus a M38P pro Aspergilus. Při každém určení MIC byly zařazeny tři kmeny pro kontrolu kvality a hodnoty byly zaznamenány, jen pokud byly výsledky kontrolních kmenů v přijatelném rozmezí. Po zaznamenání výsledků MIC, bylo odebráno 100 μΐ z každé jamky, které nevykazovaly žádný růst a rozetřeno na Sabourad dextrózní agar (SDA) s cílem určit minimální fungicidní koncentraci (MFC), jak je uvedeno v tabulce 2.

•φ φ φ φ ·· ······ • Φ Φ ΦΦΦΦ 9 9 · φ φ φ φ φφφφ * φ ·

Φ ΦΦΦΟΦΦΦ Φ Φ Φ Φ φ. Φ φ · ®·Φ φφφφ φφφφ

Hodnocení sloučeniny in vivo lze provést jako sady různých dávek podávaných orálně nebo intravenózně myším, které byly naočkovány minimální letální dávkou Candida albicans, Cryptococcus neoformans nebo Aspergillus fumigatus do ocasní žíly. Aktivita je založena na přežití léčené skupiny myší po uhynutí neléčené slupiny myší. Pro infekce způsobené druhy Aspergillus a Cryptococcus byly cílové orgány po léčbě kultivovány pro dokumentování počtu vyléčených myší a pro další stanovení aktivity.

Pro použití u člověka mohou být fungicidní sloučeniny tohoto složení a jejich soli podány samostatně, ale obecně budou podávány ve směsi s farmaceutickým nosičem vybraným s ohledem na zamýšlený způsob podání a standardní farmaceutické postupy. Například je lze podávat orálně ve formě tablet obsahujících takové nosiče, jako jsou škrob nebo laktóza, nebo v podobě tobolek nebo oválků, buď samotné nebo ve směsi s inertními nosiči, nebo v podobě elixírů, roztoků nebo suspenzí obsahujících ochucovadlo a barvivo. Lze je podávat injekčně parenterálně, například intravenózně, intramuskulámě nebo podkožně.

Pro parenterální podání jsou nejlépe použitelné v podobě sterilních vodných roztoků, které mohou obsahovat další látky, například dostatek solí nebo glukózy, aby byl roztok izotonický s krví.

Rozpustnost sloučenin obecného vzorce I a II ve vodném médiu lze zlepšit vytvořením komplexů s hydroxyalkylovým derivátem cyklodextrinu při přípravě vhodné farmaceutické kompozice.

Pro orální a parenterální podání lidským pacientům se bude hodnota denní dávky fungicidních sloučenin obecného vzorce I a II a jejich solí pohybovat od 0,01 mg po 20 mg/kg (v jedné nebo rozdělených dávkách), pokud jsou podávány orálně nebo parenterálně. To znamená, že tablety nebo kapsle budou obsahovat od 5 mg do 0,5 g aktivní sloučeniny pro podání jedné, dvou nebo i více naráz, podle potřeby. Lékař určí u každého případu aktuální dávku, která bude nej vhodnější pro konkrétního pacienta a ta se bude lišit podle věku, hmotnosti a reakci toho kterého pacienta. Uvedené dávky jsou vzorové pro průměrný případ, a mohou samozřejmě nastat individuální případy, kdy jsou požadovány vyšší nebo nižší rozmezí dávek a tyto jsou zahrnuty do šíře vynálezu.

Alternativně mohou být fungicidní sloučeniny obecného vzorce I a II podány ve formě čípků nebo pesarů, nebo je lze aplikovat lokálně ve formě pleťové vody, roztoku, krému, masti nebo zásypu. Například, mohou být začleněny do krému, který obsahuje vodnou emulzi polyetylenglykolů nebo tekutého parafínu, nebo mohou být začleněny v rozmezí koncentrací 1 až 10 % do masti obsahující bílý vosk nebo bílou měkkou parafínovou bázi spolu s takovými potřebnými stabilizátory a konzervačními látkami.

• « 4 • · · • · · 4

44444 ···· • 4 4

Tabulka 1

Minimální inhibiční koncentrace (MIC) (pg/ml) standardních léků a sloučenin vynálezu proti různým druhům hub.

		Fluconazol	Amphotericin- B	Itraconazol	Slouč. č.l (vynález)	TAK 187
1.	C krusei 6258	32	0,25	0,25	0,06	2
2.	C parapsilosis 22019	2	0,25	0,03	0,004	0,03
3.	P variotii 22319	>128	0,03	0,016	0,004	0,25
4.	C albicans A-26	0,5	0,25	0,016	0,016	—
5.	C albicans Y01,19	8	0,125	0,25	0,03	2
6.	C glabrata 90030	4	0,25	0,5	0,06	0,5
7.	C tropicalis 750	0,5	0,25	0,016	0,008	0,125
8.	C krusei 766,1	128	0,25	0,5	0,125	2
9.	C neoformans M-106	4	0,03	0,03	0,008	0,06
10.	C neoformans I	1	0,06	0,03	0,008	0,03
11.	H capsulatum	4	0,125	0,03	0,06	0,25
12.	A fumigatus 1-1011	>128	0,25	0,06	0,016	4
13.	A fumigatus 11-1012	>128	0,125	0,06	0,008	8
14.	A fumigatus J-1032	>128	0,25	0,03	0,008	4
15.	A fumigatus K-1033	>128	0,125	0,06	0,008	8
16.	A fumigatus L-1034	>128	0,25	0,06	0,008	4
17.	A fumigatus Sl-1-1019	>128	0,5	0,03	0,016	2
18.	A fumigatus 1008	>128	0,25	0,06	0,016	4
19.	A fumigatus PGI-1023	>128	0,125	0,03	0,016	8
20.	A flavus P2-1045	>128	1	0,06	0,016	4
21.	A flavus P3-1041	>128	0,5	0,06	0,008	8
22.	A flavus E2-1043	>128	1	0,03	0,008	4
23.	A flavus E3-1044	>128	1	0,03	0,016	1
24.	A flavus E4-1042	>128	0,125	0,06	0,008	4
25.	Aniger E5-1047	>128	0,25	0,03	0,03	2
26.	Aniger PÍ-1046	128	0,25	0,125	0,03	0,5
27.	Penicillium H-1048	>128	0,25	16	0,03	16

• · ·

4·· · · · · · « « • · · · 9··· 9 9 · • · 9999 99 9 999 999 9

9 9 99 9 9999

9 * 99 99 «9 99

28.	Penicillium 1-1049	>128	0,25	16	0,03	16
29.	Penicillium 1641	64	0,06	0,25	0,25	16
30.	Penicillium 2548	128	0,03	0,25	0,125	16
31.	Penicillium 3162	>128	0,25	0,25	0,03	32
32.	Penicillium 191	64	0,25	0,06	0,06	16
33.	Penicillium 2306	>128	0,25	0,125	0,016	8
34.	Rhizopus 1052	>128	0,06	16	0,0005	8
35.	Rhizopus (Ceylon)	>128	64	64	0,125	2
36.	Altemaria 1051	>128	1	0,125	0,03	1
37.	Fusarium 1050	>128	0,5	64	1	64
38.	Fusarium 2960C	>128	0,5	16	2	32
39.	Fusarium 1827C	>128	>128	128	2	32
40.	Mucor (Ceylon)	>128	0,06	0,125	0,004	8
• Významné snížení růstu bylo vzato ja	ío MIC koncový	íod podle Národní rady pro klinické

laboratorní standardy (NCCLS) M27A a M38P.

• Paecillomyces variotii roste dobře po dobu 48 hod.

Tabulka 2

Minimální fungicidní koncentrace (MFC) (pg/ml) standardních léků a sloučenin podle vynálezu proti QC kmenům proti různým druhům vláknitých hub.

		Fluconazol	Amphotericin- B	Itraconazol	Slouč. č.l (tento vynález)	TAK 187
1.	C krusei 6258	128	1	64	0,016	64
2.	C parapsilosis 22019	4	32	8	0,016	0,03
3.	P variotii 22319	>128	2	0,06	0,06	32
4.	A fumigatus Sl-1-1019	>128	2	0,25	0,03	32
5.	A fumigatus 1008	>128	1	0,06	0,03	8
6.	A flavus P2-1045	>128	1	0,25	0,03	32
7.	A flavus P3-1041	>128	0,5	0,06	0,06	—
8.	A flavus E3-1044	>128	0,5	0,03	0,03	8
9.	A flavus E4-1042	>128	0,125	0,125	0,03	—
10.	AnigerE5-1047	>128	0,25	0,125	0,06	2
11.	A nigerP 1-1046	>128	0,25	0,25	0,06	0,5

• · · 9 9 9 9 9 9 · ···« 9 9 9 9 ·· « • ······« « ····· · · • · · · · · ft 9 9 · • · * 9 9 99 9 9 99

12.	Penicillium H-1048	>128	2	>128	4	>128
13.	Penicillium 1-1049	>128	4	>128	1	128
14.	Penicillium 1641	>128	16	0,06	0,25	32
15.	Penicillium 2548	>128	4	0,06	0,125	16
16.	Penicillium 3162C	>128	0,25	1	0,125	16
17.	Penicillium 191	>128	2	0,06	0,125	16
18.	Penicillium 2306	>128	0,5	16	0,06	16
19.	Rhizopus 1052	>128	8	8	0,03	32
20.	Rhizopus (Ceylon)	>128	64	128	0,5	>128
21.	Altemaria 1051	>128	>128	32	0,06	16
22.	Fusarium (Ceylon)	>128	>128	>128	32	128
23.	Fusarium 2960C	>128	>128	>128	>128	>128
24.	Fusarium 1827C	>128	>128	128	>128	32
40.	Mucor (Ceylon)	>128	1	>128	1	>128

Dále jsou zde uvedeny srovnávací in vitro a in vivo hodnoty ukazující biologickou aktivitu sloučenin vynálezu, 2-{[lR,2R]-2-(2,4-Difluorfenyl)-2-hydroxy-l-metyl-3-(lH-1,2,4-triazol-1 -yl)propyl} -4-(2 ',2 ',3 ',3 '-tetrafluorpropoxyfenyl)-3-(2H,4H)-1,2,4-thiotriazolon (sloučenina č. 3) s 2-[(lR,2R)-2-(2,4-difluorfenyl)-2-hydroxy-l-metyl-3-(lH-1,2,4-triazol-1 -yl)propyl]-4-(2 ',2 ',3 ',3 '-tetrafluorpropoxyfenyl)-3-(2H,4H)-1,2,4-triazolon (TAK 187) a standardních fungicidních léků:

všechny plísňové patogeny MIC (pg/ml)

	MICso	MIC9o	G.M.
Amphotericin B	0,25	0,5	0,21
Fluconazol	256	256	105
Itraconazol	0,19	256	0,437
TAK 187	8	32	4,16
sloučenina č. 3	0,25	2	0,285

•·4 · · « *

444 4 · · 4 • ·····«· « ··*<

· 4 «4

Všechny izolace/izoláty z Candida MIC (pg/ml)

	MIC50	mic90	G.M.
Amphotericin B	0,25	0,25	0,22
Fluconazol	8	128	5,3
Itraconazol	0,25	0,5	0,1
TAK 187	0,5	2	0,45
Sloučenina č. 3	0,5	1	0,1

Všechny izoláty z vláken/vláknité izoláty MIC (pg/ml)

	MICso	mic90	G.M.
Amphotericin B	0,25	0,5	0,22
Fluconazol	256	256	199
Itraconazol	0,25	256	0,6
TAK 187	8	32	7,246
Sloučenina č. 3	0,25	8	0,328

Izoláty z Aspergillus fumigatus MIC (pg/ml)

	MICso	mic90	G.M.
Amphotericin B	0,25	0,5	0,27
Fluconazol	256	256	256
Itraconazol	0,25	0,5	0,181
TAK 187	8	8	7,4
Sloučenina č. 3	0,125	0,25	0,112

Izoláty z Rhizoupus spp. MIC (pg/ml)

	MICso	mic90	G.M.
Amphotericin B	0,125	0,25	0,177

• to to • to • •toto • · · • · · · • to · · to to • · to • · · • · · · toto · • ««···· · · ·· · · · · · «· ·· «· ··

Fluconazol	256	256	256
Itraconazol	16	64	32
TAK 187	4	4	4
Sloučenina č. 3	0,125	0,125	0,125

Izoláty z Fusarium spp. MIC (pg/ml)

	MICso	MIC9o	G.M.
Amphotericin B	0,5	2	0,841
Fluconazol	256	256	256
Itraconazol	64	256	90,51
TAK 187	32	64	45,255
Sloučenina č. 3	8	8	8

Izoláty z Penicillium spp. MIC (pg/ml)

	MICso	MIC90	G.M.
Amphotericin B	0,25	0,25	0,144
Fluconazol	256	256	174,181
Itraconazol	0,5	256	0,922
TAK 187	16	64	18,664
Sloučenina č. 3	2	8	1,516

Působení proti dermatofytům

Organismus	Fluconazol	Itraconazol	Terbina	Sloučenina č. 3
T. mentagrophyt	>128	0,125	0,002	0,016
T. rubrum	>128	0,03	0,016	0,004

• ♦ φ φ φ · · · • φ φ φ · • φφφφ

In vivo fungicidní působení sloučeniny č. 3; určení 50% účinné dávky (ED₅₀):

Metoda: Stručně, švédským albínským myším o hmotnosti 20±2 g bylo injekčně podáno (do ocasní žíly) množství plísňových buněk, které bylo dostatečné pro 100% usmrcení zvířat neléčených na použitý kmen Aspergillus fumigatous. Ve všech případech se sestávala každá skupina z 6 myší. Pro určení bylo použito 5 úrovní dávek, které využívaly dvojnásobný rozsah roztoku, a to v rozmezí od 25 do 1,56 mg/kg tělesné hmotnosti. Dávky léku byly podávány během 5 dnů, začínaly 30 minut po injekci. U všech skupin neléčených myší byla pozorována 100% míra úmrtnosti. Léčená zvířata byla dvakrát denně sledována po dobu 14 dní od infikování a v tomto okamžiku byl pokus ukončen a bylo spočítáno ED50.

ED50 v mg/kg tělesné hmotnosti

Lék	7. den od infikování	14. den od infikování
Sloučenina č. 3	2,33	6,25
Itraconazol	8,84	21,02
TAK 187	10,08	20,39
Infekční kontrola	-	-

Zatímco byl vynález popsán z hlediska jeho specifických provedení vynálezu, určité modifikace a analogie budou zřejmé odborníkům pracujícím v oboru a měly by být zahrnuty do šíře oblasti tohoto vynálezu.

• · • 4 • · 4 · 4 4

4 44444 4

4 4 4 4 (znění patentových nároků určených pro další řízení)

Claims (10)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Sloučenina azolu obecného vzorce I,

   Ri S R, x_K Λ

   NF=/ Ar x/ y₂ (I),

   Ro kde X je vybráno ze skupiny sestávající z CH₂, CO, CS, a SO₂;

   Ar je substituovaná fenylová skupina obsahující jeden až tři substituenty nezávisle vybrané z halogenu, jako je fluor, chlor, brom, nebo jod, z C1-C4 alkylu, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkylové skupiny a halogenem substituované nižší (C1-C4) alkoxy skupiny, jako jsou: 2,4-difluorfenyl, 2,4-dichlorfenyl, 4-chlorfenyl, 4-fluorfenyl, 2-chlorfenyl,
2. 2-fluorfenyl, 4-trifluormetylfenyl, 2-fluor-4-chlorfenyl, 2-chlor-4-fluorfenyl, 4-trifluormetoxyfenyl, 2,4,6-trifluorfenyl, 4-bromfenyl;

   Ri a R₂ jsou každý nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, Ci- C4 alkylu, Ci-C4 alkoxy, amino, hydroxy, nitro, kyano, karboxylu, chráněného karboxylu, a SO₂R', kde R'je vodík, alkyl nebo aryl;

   Y je fenylová skupina, která je nesubstituovaná nebo substituovaná 1 až 3 substituenty, z nichž každý byl nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z halogenu, nitro, amino, kyano, karboxylu, chráněného karboxylu, hydroxy, C1-C4 alkylu, C1-C4 alkoxy a SO₂R', kde R'je vodík, alkyl nebo aryl;

   R₃ je vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, C1-C4 alkylové skupiny, C1-C4 alkoxy skupiny, nitro, amino, kyano, karboxylu, chráněného karboxylu a SO₂R', kde R'je vodík, alkyl nebo aryl, a

   Xi, X₂, Yi, Y₂ a Z jsou nezávisle vybrané ze skupiny sestávající z vodíku, halogenu, nitro, kyano, amino, sulfonylu, arylu, C1-C4 alkylu, C1-C4 alkoxy, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkylové skupiny, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkoxy skupiny a karboxylu, nebo chráněného karboxylu, φ · «φ ···· ·· · ·· • · · »*···« 9 • · Φ Φ Φ Φ Φ Φ ·· · • · ···· · · » ·Φφ · « » «

   99 * · · ·· φφφφφ

   Φ*** Φ Φ Φ < · · · φφ · | a její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, diastereomery, N-oxidy, proléčiva nebo metabolity.

   2. Sloučenina azolu obecného vzorce II, (II), kde X je vybrán ze skupiny sestávající z CH2, CO, CS a SO2;

   Ar je substituovaná fenylová skupina obsahující jeden až tři substituenty nezávisle vybrané z halogenu, jako je fluor, chlor, brom, nebo jod, z C1-C4 alkylu, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkylové skupiny a halogenem substituované nižší (C1-C4) alkoxy skupiny, jako jsou: 2,4-difluorfenyl, 2,4-dichlorfenyl, 4-chlorfenyl, 4-fluorfenyl, 2-chlorfenyl,

   2-fluorfenyl, 4-trifluormetylfenyl, 2-fluor-4-chlorfenyl, 2-chlor-4-fluorfenyl, 4-trifluormetoxyfenyl, 2,4,6-trifluorfenyl, 4-bromfenyl;

   Ri a R2 jsou každý nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, C1-C4 alkylu, Ci-C4 alkoxy, amino, hydroxy, nitro, kyano, karboxylu, chráněného karboxylu, a SO2R', kde R'je vodík, alkyl nebo aryl; a

   Xi, X₂, Yi, Y2 a Z jsou nezávisle vybrané ze skupiny sestávající z vodíku, halogenu, nitro, kyano, amino, sulfonylu, arylu, C1-C4 alkylu, C1-C4 alkoxy, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkylové skupiny, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkoxy skupiny a karboxylu, nebo chráněného karboxylu, a její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, diastereomery, N-oxidy, proléčiva nebo metabolity.
3. 3. Sloučenina azolu vybraná ze skupiny sestávající z:

   2-{[lR,2R]-2-(2,4-difluorfenyl)-2-hydroxy-l-metyl-3-(lH-l,2,4-triazol-l-yl)propyl}-4-{4-[4-(4-chlorfenyl)-l-piperizinyl]fenyl}-3-(2H,4H)-l,2,4-thiotriazolon (sloučenina č. 1)

   2- {[ 1 R,2R] -2-(2,4-difluorfenyl)-2-hydroxy-1 -metyl-3-( 1 Η-1,2,4-triazol-1 -yl)propyl} -1-[4-(4-metoxyfenyl)-3-(2H,4H)-l,2,4-thiotriazolon (sloučenina č. 2) • 9 •9 9999

   9 9

   9 9 9

   9 9 9 9«

   99 9 999 • 9 9

   99 99

   2- {[ lR,2R]-2-(2,4-difluorfenyl)-2-hydroxy-1 -metyl-3-(lH-l ,2,4-triazol-1 -yl)propyl} -4-(2',2',3',3'-tetrafluorpropoxyfenyl)-3-(2H,4H)-l,2,4-thiotriazolon (sloučenina č. 3).
4. 4. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle nároků 1 až 3 a farmaceuticky přijatelný nosič.
5. 5. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje farmaceuticky účinné množství sloučeniny podle nároků 1 až 3 nebo její adiční sůl s fyziologicky přijatelnou kyselinou a farmaceuticky přijatelný nosič.
6. 6. Sloučenina azolu obecného vzorce I (I), kde X je vybráno ze skupiny sestávající z CH2, CO, CS, a SO2;

   Ar je substituovaná fenylová skupina obsahující jeden až tři substituenty nezávisle vybrané z halogenu, jako je fluor, chlor, brom, nebo jod, z C1-C4 alkylu, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkylové skupiny a halogenem substituované nižší (C1-C4) alkoxy skupiny, jako jsou: 2,4-difluorfenyl, 2,4-dichlorfenyl, 4-chlorfenyl, 4-fluorfenyl, 2-chlorfenyl,

   2-fluorfenyl, 4-trifluormetylfenyl, 2-fluor-4-chlorfenyl, 2-chlor-4-fluorfenyl, 4-trifluormetoxyfenyl, 2,4,6-trifluorfenyl, 4-bromfenyl;

   Ri a R2 jsou každý nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, Ci- C4 alkylu, Ci-C4 alkoxy, amino, hydroxy, nitro, kyano, karboxylu, chráněného karboxylu, a SO₂R', kde R'je vodík, alkyl nebo aryl;

   Y je fenylová skupina, která je nesubstituovaná nebo substituovaná 1 až 3 substituenty, z nichž každý byl nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z halogenu, nitro, amino, kyano, karboxylu, chráněného karboxylu, hydroxy, C1-C4 alkylu, C1-C4 alkoxy a SO₂R', kde R'je vodík, alkyl nebo aryl;

   R₃ je vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, C1-C4 alkylové skupiny, C1-C4 alkoxy skupiny, nitro, amino, kyano, karboxylu, chráněného karboxylu a SO₂R', kde R'je vodík, alkyl nebo aryl, a • 4 ·· • · · · · · « • · · ♦ · · · • ······ « » • · · · · · · ·· ·· ·· ··

   Χι, X₂, Yi, Y₂ a Z jsou nezávisle vybrané ze skupiny sestávající z vodíku, halogenu, nitro, kyano, amino, sulfonylu, arylu, C1-C4 alkylu, C1-C4 alkoxy, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkylové skupiny, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkoxy skupiny a karboxylu, nebo chráněného karboxylu, a její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, diastereomery, N-oxidy, proléčiva nebo metabolity;

   pro použití při léčení nebo prevenci plísňových infekcí u savců.
7. 7. Sloučenina azolu obecného vzorce II (H)>

   kde Xje vybrán ze skupiny sestávající z CH₂, CO, CS a SO₂;

   Ar je substituovaná fenylová skupina obsahující jeden až tři substituenty nezávisle vybrané z halogenu, jako je fluor, chlor, brom, nebo jod, z C1-C4 alkylu, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkylové skupiny a halogenem substituované nižší (C1-C4) alkoxy skupiny, jako jsou: 2,4-difluorfenyl, 2,4-dichlorfenyl, 4-chlorfenyl, 4-fluorfenyl, 2-chlorfenyl,

   2-fluorfenyl, 4-trifluormetylfenyl, 2-fluor-4-chlorfenyl, 2-chlor-4-fluorfenyl, 4-trifluormetoxyfenyl, 2,4,6-trifluorfenyl, 4-bromfenyl;

   Ri a R₂ jsou každý nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, C1-C4 alkylu, Ci-C4 alkoxy, amino, hydroxy, nitro, kyano, karboxylu, chráněného karboxylu, a SO₂R', kde R'je vodík, alkyl nebo aryl; a

   Xi, X₂, Yi, Y₂ a Z jsou nezávisle vybrané ze skupiny sestávající z vodíku, halogenu, nitro, kyano, amino, sulfonylu, arylu, C1-C4 alkylu, C1-C4 alkoxy, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkylové skupiny, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkoxy skupiny a karboxylu, nebo chráněného karboxylu, a její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, diastereomery, N-oxidy, proléčiva nebo metabolity;

   pro použití při léčení nebo prevenci plísňových infekcí u savců.

   (I),
8. 8. Způsob přípravy sloučeniny azolu obecného vzorce I kde X je vybráno ze skupiny sestávající z CH₂, CO, CS, a SO₂;

   Ar je substituovaná fenylová skupina obsahující jeden až tři substituenty nezávisle vybrané z halogenu, jako je fluor, chlor, brom, nebo jod, z C1-C4 alkylu, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkylové skupiny a halogenem substituované nižší (C1-C4) alkoxy skupiny, jako jsou: 2,4-difluorfenyl, 2,4-dichlorfenyl, 4-chlorfenyl, 4-fluorfenyl, 2-chlorfenyl,

   2-fluorfenyl, 4-trifluormetylfenyl, 2-fluor-4-chlorfenyl, 2-chlor-4-fluorfenyl, 4-trifluormetoxyfenyl, 2,4,6-trifluorfenyl, 4-bromfenyl;

   Ri a R₂ jsou každý nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, Ci- C4 alkylu, Ci-C4 alkoxy, amino, hydroxy, nitro, kyano, karboxylu, chráněného karboxylu, a SO₂R', kde R'je vodík, alkyl nebo aryl;

   Y je fenylová skupina, která je nesubstituovaná nebo substituovaná 1 až 3 substituenty, z nichž každý byl nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z halogenu, nitro, amino, kyano, karboxylu, chráněného karboxylu, hydroxy, C1-C4 alkylu, C1-C4 alkoxy a SO₂R', kde R'je vodík, alkyl nebo aryl;

   R₃ je vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, C1-C4 alkylové skupiny, C1-C4 alkoxy skupiny, nitro, amino, kyano, karboxylu, chráněného karboxylu a SO₂R', kde R'je vodík, alkyl nebo aryl, a

   Xi, X₂, Yi, Y₂ a Z jsou nezávisle vybrané ze skupiny sestávající z vodíku, halogenu, nitro, kyano, amino, sulfonylu, arylu, C1-C4 alkylu, C1-C4 alkoxy, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkylové skupiny, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkoxy skupiny a karboxylu, nebo chráněného karboxylu, a její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, diastereomery, N-oxidy, proléčiva nebo metabolity;

   vyznačující se tím, že se nechá reagovat oxo sloučenina obecného vzorce III ·· ···· kde X, Ar, R_b R2, Y, R3, X_b X2, Y_b Y2, a Z mají stejný význam, jak je definováno výše, s modifikovaným Lawessonovým činidlem vzorce V (V).
9. 9. Způsob přípravy sloučeniny azolu obecného vzorce II kde X je vybrán ze skupiny sestávající z CH2, CO, CS a SO2;

   Ar je substituovaná fenylová skupina obsahující jeden až tři substituenty nezávisle vybrané z halogenu, jako je fluor, chlor, brom, nebo jod, z C1-C4 alkylu, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkylové skupiny a halogenem substituované nižší (C1-C4) alkoxy skupiny, jako jsou: 2,4-difluorfenyl, 2,4-dichlorfenyl, 4-chlorfenyl, 4-fluorfenyl, 2-chlorfenyl,

   2-fluorfenyl, 4-trifluormetylfenyl, 2-fluor-4-chlorfenyl, 2-chlor-4-fluorfenyl, 4-trifluormetoxyfenyl, 2,4,6-trifluorfenyl, 4-bromfenyl;

   Ri a R₂ jsou každý nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z vodíku, C1-C4 alkylu, Ci-C4 alkoxy, amino, hydroxy, nitro, kyano, karboxylu, chráněného karboxylu, a SO2R', kde R je vodík, alkyl nebo aryl; a

   X_b X2, Yi, Y2 a Z jsou nezávisle vybrané ze skupiny sestávající z vodíku, halogenu, nitro, kyano, amino, sulfonylu, arylu, C1-C4 alkylu, C1-C4 alkoxy, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkylové skupiny, halogenem substituované nižší (C1-C4) alkoxy skupiny a karboxylu, nebo chráněného karboxylu, a její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, diastereomery, N-oxidy, proléčiva nebo metabolity;

   vyznačující se tím, že který obsahuje reakci oxo sloučeniny obecného vzorce IV (schéma II), kde X, Ar, R_b R₂, X_b X₂, Y_b Y₂, a Zjsou stejné, jak zde bylo definováno, (IV), »· • · · · « · · · ··· · · · · • · * · · • » · · · ·

   3 ft s modifikovaným Lawessonovým činidlem vzorce V ·♦ ® • * · • »111« » · · ·« * ·· ·*·· (V).
10. 10. Způsob přípravy sloučeniny, jmenovitě 2-{[lR,2R]-2-(2,4-difluorfenyl)-2-hydroxy-1-metyl-3-(1 H-1,2,4-triazol-l-yl)propyl}-4-(2', 2', 3', 3'-tetrafluorpropoxyfenyl)-3-(2H,4H)-1,2,4-thiotriazolonu a jeho farmaceuticky přijatelných solí, enantiomerů, diastereomerů, N-oxidů, proléčiv nebo metabolitů, vyznačující se tím, že se nechá reagovat sloučenina, jmenovitě 2-[( 1 R,2R)-2-(2,4-difluorfenyl)-2-hydroxy-1 -metyl-3 -(1 Η-1,2,4-triazol-1 -yl)propyl]-4-(2 ',2 ',3 ',3 '-tetrafluorpropoxyfenyl)-3-(2H,4H)-1,2,4-triazolonu s Lawessonovým činidlem vzorce V (V).