CZ2002500A3 - Způsob izolace a vyčiątění alergenů trávních pylů - Google Patents

Způsob izolace a vyčiątění alergenů trávních pylů Download PDF

Info

Publication number
CZ2002500A3
CZ2002500A3 CZ2002500A CZ2002500A CZ2002500A3 CZ 2002500 A3 CZ2002500 A3 CZ 2002500A3 CZ 2002500 A CZ2002500 A CZ 2002500A CZ 2002500 A CZ2002500 A CZ 2002500A CZ 2002500 A3 CZ2002500 A3 CZ 2002500A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
allergens
groups
pollen
grass
gel filtration
Prior art date
Application number
CZ2002500A
Other languages
English (en)
Inventor
Roland Suck
Oliver Cromwell
Helmut Fiebig
Original Assignee
Merck Patent Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=7919344&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ2002500(A3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Merck Patent Gmbh filed Critical Merck Patent Gmbh
Publication of CZ2002500A3 publication Critical patent/CZ2002500A3/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/35—Allergens
    • A61K39/36—Allergens from pollen
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5097—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving plant cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54353—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals with ligand attached to the carrier via a chemical coupling agent
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/24—Immunology or allergic disorders
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/806—Antigenic peptides or proteins
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/868—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving autoimmunity, allergy, immediate hypersensitivity, delayed hypersensitivity, immunosuppression, or immunotolerance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Způsob izolace a vyčištění alergenů trávních pylů
Ob1ast techni ky
Vynález se týká rychlého a účinného způsobu izolování a čištění pěti skupin alergenů 1, 2, 3, 10 a 13 z trávních pylů. Jako přírodní surovina pro čištění alergenů slouží pyly sladkých travin, jako například Phleum pratense (bojínek). Vyčištění spočívá ve vynalezené kombinaci hydrofobní interakční chromatografie, gelové filtrace a katexové chromatografie. Proteiny, takto získané, mohou sloužit k lepši diagnostice alergií na pyly a k přípravě farmaceutických prostředků k léčení nemocí způsobených alergií na pyly .
Dosavadní stav techniky
Alergie typu 1 mají světový význam. Až 20 % obyvatelstva v průmyslových zemích trpí obtížemi, jako je alergická rýma, zánět spojivek nebo bronchiální astma, které jsou vyvolávány alergeny obsaženými ve vzduchu (aeroalergeny), uvolňovanými z různých zdrojů, jako jsou rostliny, roztoči, kočky nebo psi. Až 40 % těchto alergiků typu 1 vykazuje specifickou reakci na IgE alergeny z trávního pylu (Freidhoff a kol., J. Allergy Clin. Immunol. 78, str. 1190 až 201, 1986).
Látkami vyvolávajícími alergie typu 1 jsou proteiny, glykoproteiny nebo polypeptidy. Tyto alergeny reagují po přijetí sliznieí u senzibi1izovaných osob na povrchu mastocyty vázaných IgE molekul. Jestliže se dvě nebo několik molekul IgE navzájem zesít-í alergenem, dochází k vylučování mediátorů (například histaminu, prostaglandinu) a cytokinů efektorovou buňkou a tím k odpovídajícím klinickým příznakům.
V závislosti na relativní četnosti alei^giků, kteří vyká2 • · • ·*· ······ ·♦·· · • · « ··« 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9 9 99 9 9 99 9 9 zují IgE protilátky proti určitým alergenům, se rozlišuje mezi majoritními a minoritními alergeny. V případě bojínku CPhleum pratense) již byl charakterizován Phl pl CPetersen a kol., J. ftllergy Clin. Immunol. 92, str. 789 až 796, 1993), Phl p5 CMatthiesen a Lowenstein, Clin. Exp. ftllergy 21, str. 297 až 307, 1991; Petersen a kol., 1992) Phl p6 CPetersen a kol.,Int. Arch. Allergy Immunol. 108, str. 49 až 54, 1995) a Phl p2/3 CDolecek a kol. 1993) jako majoritní alergeny a Phl p4 (Lovenstein, Prog. Allergy 25, str. 1 až 62, 1978) a skupina 10 a 11 z Lolium perenne Cjílek) CAnsari a kol.,J. Allergy Clin. Immunol. 80, str. 229 až 235, 1987) jako minoritní alergeny. Kromě toho byl nedávno popsán další vysokomolekulový majoritní alergen, který byl označen jako Phl pl3. Alergeny skupiny 1 a 13 jsou glykosylované.
V souvislosti s vynálezem mají obzvláštní význam alergenové skupiny 1, 2, 3, 10 a 13. Zavedené způsoby čištění přírodních alergenů spočívají v izolaci vždy jednotlivých proteinů. Pomocí afinitní chromatografie za použití specifických protilátek byla dosud vyčištěna například skupina 1 alergenů z Lolium perenne CBoutin a kol., Int. Arch. ftllergy Immunol. 112, str. 218 až 225) a z Phelum pratense CGrobe a kol., Eur. J. Biochem. 263, str. 33 až 40, 1999). Tento způsob je kapacitně omezen a provádí se za extremních hodnot pH, takže obsah nativních konformací nemůže být zajištěn. Jiné způsoby jsou založeny na sledu různých několikastupňových chromatografických kroků. Získají se při tom vždy individuální alergeny, jako například skupina 10 CAnsari a kol., J. ftllergy Clin. Immunology 80, str. 229 až 235, 1987) nebo skupina 3, CAnsari a kol., Biochemistry 28, str. 8665 až 8670, 1989). Jiné alergeny se při těchto způsobech ztratí, nebo není možno připravit je čisté.
Údaje o sekvencích DNA jsou pro Phl p 1 CLaffer a kol-, ftllergy Clin. Immunol. 94, str. 1190 až 98, 1994; Petersen a kol., J. ftllergy Clin.Immunol. 95C5), str. 987 až 994, 1995) ·♦ 44 4« ·* 44 ··
4 4 4 4 4 4 «444
4*· >4 4 44 4 • 4 444 * ···· 4
444 4 4 · «44 ··*· 44 44 ·*·* ·· 4·44
F’hl ρ5 (Vrtala a kol. J.Immunol. 151(9), str. 4773 až 4781, 1993), Phl p6 (Petersen a kol. Int. Arch. Allergy Immunol. 108 (1), str. 55 až 59, 1995) a Phl p2 (Doleček a kol., FEBS 336 (3), str. 299 až 304, 1993). Pomocí sekvencí cDNA je možno připravovat, rekombinantní alergeny, které mohou nalézt uplatnění v diagnostice a terapii (Scheiner a Kraft, Allergy 50, str. 384 až 391, 1995).
Klasické nasazení k účinnému terapeutickému ošetření alergií představuje specifická imunoterapie nebo hyposenzibilizace (Fiebig Allergo J. 4(6), str. 336 až 339, 1995; Bosquet a kol., J. Allergy Clin. Immunol. 102 (4), str. 558 až 562, 1998). Pacientovi subkutánně injektují přírodní extrakty alergenů ve vzrůstajících dávkách. Nicméně existuje při tomto způsobu nebezpečí alergických reakcí nebo dokonce anaphylaktického šoku. Ke zmírnění těchto rizik se nasazují inovační prostředky ve formě alergoidů. Jsou to chemicky modifikované alergenové extrakty, které vykazují výrazně sníženou lgE-reakt. i vitu, avšak identickou reaktivitě T-buněk v porovnání s nezpracovaným extraktem. (Fiebig Allergo J. 4(7), str. 377 až 382, 1995).
Byla by možná dalekosáhlá optimalizace terapie použitím vysoce vyčištěných alergenů. Definované kokteily z přírodních alergenů mohou dosavadní extrakty nahradit, nebot obsahují kromě různých alergenů větší počet imunogenních, ale nealergenových doprovodných proteinů, které nejsou nutné pro specifickou imunoterapii. Použití alergenových kokteilů připouští také přípravu směsí alergenů specifických pro pacienta podle senzibil izačního spektra. Reálné perspektivy, které mohou vést k bezpečné hyposenzibilaci vysoce čistými přírodními alergeny, nabízejí modifikované alergeny, při kterých se lg-epitopy zničí nevratnou modifikací sekunderní a terciemi struktury bez poškození pro terapii potřebných epitopů T-buněk.
«9 «9 ·*· ·· ·· 99
Λ · 9 · · · 9 ···« • »9 · 9 · 4
9*9 · 9 9 999
9999 99 99 9*99 9· 9999
Podstata vynálezu
Způsob Izolace a vyčištění alergenů z trávních pylů skupin 1, 2, 3, 10, 13, spočívá podle vynálezu v tom, že se připraví vodný extrakt pylů travin a rozpustné složky se podrobí hydrofobní interakční chromatografií, gelové filtraci a popřípadě katexové chromatografi i Vynálezu je možno použít rovněž v diagnostice alergických onemocnění in vitro a in vivo, speciálně s výhodou pollinosis.
K tomu se nasazují vyčištěné skupiny alergenů k detekci protilátek IgE zavedenými způsoby.
Vynález se týká biochemických způsobů čištění, které probíhá účinným třístupňovým čištěním k izolování 4 hlavních alergenů a 1 minoralergenu z vodných krátkodobých pylových extraktů. Jako přírodní surovina slouží při tom pyly trav jako je například Phleum pratense (bojínek), Lolium perene (jílek), Dactylis glomerata (srha), Poa pratensis, Cynodon dactylon, Holcus lanatus. Na obr. 1 je znázorněno schéma čištění 5 jmenovaných alergenů z extraktů trávových pylů. Označení alergenů Phl pl až Phl pl3 odpovídají v textu použitým označením alergenům 1 až 13.
Podle vynálezu se může připojit i více stupňů druhu chromatograf ie, zpravidla je však způsob tak účinný, že postačí pouze jeden stupeň děleníZpůsob se hodí zejména k získávání uvedených alergenů z pylů Phleum pratense, Lolium perenne, Dactylis glomerata, Festuca pratensis (kostřava), Holcus lanatus, Poa pratensis, Secale cereale (žito).
Při jednom způsobu provedení probíhá extrakce za použití Tris/HCl pufrovaného vodného roztoku. Podle vynálezu jsou však použitelné i jiné vodné pufrové roztoky.
• · · · · · • · ···· · · ····
Pro vyčištění jmenovaných alergenů se používají rozpustné podíly extraktu. Za tím účelem se extrakt odstreďuje 3 až 8 minut, s výhodou 5 minut, při 18 000 až 30 000 x g a supernat-ant se použije k dalšímu čištění. Alternativně může oddělování nerozpustných podílů probíhat i jinými způsoby, například f i 1trací.
První chromatografický čisticí stupen probíhá za použití hydrofobní interakční chromatografie, například na SepharoseK. Na nosiči se zachytí četné nečistoty, zatímco žádoucí alergeny jsou v eluátu. Použít lze také jiných nosičových materiálů.
Vynález se tedy týká způsobu, při kterém se za použití hydrofobní interakční chromatografie trávní alergeny skupin 1, 2, 3, 10, 13 oddělí od ostatních složek.
V následujícím stupni čištění se trávové alergeny rozdělí do tří frakcí, přičemž skupiny 1, 13 představují vždy jednu frakci a skupiny 2, 3 a 10 třetí frakci. Vynález se tedy týká zvláště způsobu, při kterém se alergeny skupiny 1 a 13 získají dodatečně zařazeným stupněm gelové filtrace v oddělených frakcích a od alergenů skupin 2, 3 a 10 se oddělí.
Alergeny skupin 2, 3 a 10 se podle vynálezu mohou od sebe odděl! následným chromatografickým stupněm přes katex. Vynález se tedy týká způsobu, při kterém se po gelové filtraci získané alergeny stupně 2, 3 a 10 od sebe oddělují zařazenou katexovou chromatograf i í.
Identifikace jmenovaných o sobě známých alergenů probíhá buď přes jejich známé rozdílné fyzikální, chemické, biologické nebo přes imunologické vlastnosti, obzvláště pomocí isoelektrického zaostření, měření UV-absorpce, SDS-PAGE a specifických protilátek. Tyto způsoby a techniky jsou známé a obecně popsané.
· 4 4 4 4 4··
44·· ·· ·· ···· · · ····
Výtěžek alergenů získaných podle vynálezu je 0,5 až 1,5 %, vztaženo na původně nasazené celkové proteiny trávních pylů.
Vynález slouží také ke zlepšení diagnostiky in vivo a in vitro v rámci, rozluštěné identifikace alergenové složky pacientova specifického spektra citlivosti. Vynález se toktýká způsobu k diagnose pylových alergií in vivo a in vitro za použití alergenů získaných podle nároku 1 až 6.
Vymález slouží také k výrobě zlepšených prostředků ke specifické imunoterapii alergií na trávní pyly oddělováním imunogenních, avšak pro terapii irelevantních složek extraktů. Dále může být získán chemickou reakcí vyčištěných alergenů alergoidní prostředek. Vynález se tedy týká také farmaceutického prostředku, který obsahuje jeden nebo několik alergenů získaných způsobem podle vynálezu a popřípadě také pomocné látky a nosiče.
Podrobný popis způsobu
Čištění přírodních alergenů z pylů bojínku probíhá ve třech stupních (obr. 1). Po vodné extrakci roztokem pufrovaným Tris/HCl <20 mM Tris/HCl, 1 mM EDTA, hodnota pH 8,0) pylů se po 30 minutách extrakt oddělí odstřeďováním s výhodou po dobu 5 minut při 20000xg. Supernatant, pufrovaný Tris/HCl <20 mM Tris/HCl, 1 mM EDTA, hodnota pH 8,0), se smísí s 1M síranem amonným a podrobí se hydrofobní-interakční chromatografi i <Pheny1-Sepharose High Performance, Pharmacia). Typický sloupec je naplněn 50 až 100 ml nosičového materiálu a provozuje se s průtočnou rychlostí 5 ml/min. Proteklá frakce obsahuje výhradně proteiny 5 alergenových skupin: skupiny 1 <30-35 kDa), skupiny 2 <11 kDa), skupiny 3 <12 kDa), skupiny 10 <13 kDa) a skupiny 13 <55-60 kDa). Následuje zkoncentrování objemu s výhodou u1trafi 1trací nebo lyof i 1 izací.
Ve druhém stupni se alergeny skupiny 13 a 1 oddělí gelovou filtrací odpovídající jejich rozdílným molekulovým hmot7 nos tem za použití SuperdexR 75 prep grade (Pharmacia) nebo podobného k tomuto účelu známého vhodného nosičového materiálu nízkomolekulových alergenů- Elučním činidlem je s výhodou 50 mM hydrogenuhličitan amonný- Sloupec se provozuje průtočnou rychlostí 5 ml/min. Získají se tři frakce, které obsahuji alergeny 1, 13 (vždy oddělené) a 2, 3, 10 (v jedné frakci).
Nízkomolekulové alergeny skupin 2, 3 a 10, které byly eluovány společně ve třetí frakci gelové filtrace, se od sebe oddělí katexovou chromatografií- Za tímto účelem se vyjme lyofilizovaný vzorek do vodného pufru, s výhodou 20 mM fosfátového pufru o hodnotě pH 7,2 a nanese se na tímto pufrem vyvážený katexový sloupec (například Source SR). V průtoku je kyselý alergen 2. Solnými gradienty O až 500 mM NaCl přes přibližně 20 objemů sloupce se vázané alergeny 3 a 10 posupně eluují. Tím se nízkomolekulární alergenová skupina rozdělí na své jednotlivé alergeny. Použít se dá podle vynálezu i jiných katexových materlálů.
Vynález tedy umožňuje poskytovaným způsobem, který se vyznačuje speciálním sledem chromatografických stupňů a volbou chromatografických prostředí, vysoce účinný, technologicky proveditelný způsob získávání několika vysoce čistých alergenů z přírodních trav s nepatrnými pracovními a časovými nároky. Jelikož je použitý způsob čištění velmi šetrný k proteinům, zůstávají jejich konformace a antigenita zachovány. To je předpokladem pro úspěšnou diagnostiku alergických onemocnění.
Průmyslová využitelnost
Vyčištění alergenů podle vynálezu spočívá ve vynalezené kombinaci hydrofobní interakční chromatografie, gelové filtrace a katexové chromatografie pro získání čistých alergenů z trávních pylů. Získané jsou vhodné pro lepší diagnostiku pylových alergií a pro výrobu farmaceutických prostředků k léčení nemocí způsobených pylovou alergií.

Claims (8)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Způsob získávání v podstatě čistých trávních alergenů skupin 1, 2, 3, 10, 13, vyznačující se tím, že se připraví vodný extrakt pylů travin a rozpustné složky se podrobí hydrofobní interakční chromatografií, gelové filtraci a popřípadě katexové chromatografi i.
  2. 2. Způsob podle nároku 1,vyznačující se tím, že se používá k extrakci pylů rostlin Phleum pratense, Lolium perenne, Dactylis glomerata, Festuca pratensís, Holcus lanatus, Poa pratensís, Secale cereale.
  3. 3. Způsob podle nároku 1 nebo 2,vyznačující se tím, že se k extrakci používá vodného roztoku pufrovaného Tris/HCl.
  4. 4. Způsob podle nároku 1 až 3,vyznačující se tím, že se v prvním stupni pomocí hydrofobní interakční chromatografie oddělí trávní alergeny skupin 1, 2, 3, 10 a 13.
  5. 5. Způsob podle nároku 4, vyznačující se t í m, že se alergeny skupiny 1 a 13 získají dodatečně zařazeným stupněm gelové filtrace v oddělených frakcích a oddělí se od alergenů skupiny 2, 3 a 10.
  6. 6. Způsob podle nároku 5, vyznačující se tím, že se alergeny 2, 3 a 10, získané po stupni gelové filtrace, od sebe oddělí následnou katexovou chromatografií.
  7. 7. Způsob diagnózy pylových alergií in vivo a in vitro za použití alergenů získaných podle nároků 1 až 6.
  8. 8. Farmaceutický prostředek, vyznačující se t í m, že obsahuje jeden nebo několik alergenů podle nároku 1 až 6 a odpovídající pomocné a nosičové látky.
CZ2002500A 1999-08-24 2000-08-18 Způsob izolace a vyčiątění alergenů trávních pylů CZ2002500A3 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19939982A DE19939982A1 (de) 1999-08-24 1999-08-24 Verfahren zur Isolierung und Aufreinigung von Gräserpollenallergenen

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ2002500A3 true CZ2002500A3 (cs) 2002-05-15

Family

ID=7919344

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2002500A CZ2002500A3 (cs) 1999-08-24 2000-08-18 Způsob izolace a vyčiątění alergenů trávních pylů

Country Status (20)

Country Link
US (3) US7326769B1 (cs)
EP (1) EP1206488B2 (cs)
JP (1) JP4942892B2 (cs)
KR (1) KR20020019965A (cs)
CN (1) CN1205222C (cs)
AT (1) ATE297408T1 (cs)
AU (1) AU776154B2 (cs)
CA (1) CA2381340C (cs)
CZ (1) CZ2002500A3 (cs)
DE (2) DE19939982A1 (cs)
ES (1) ES2241646T5 (cs)
HU (1) HUP0203744A2 (cs)
MX (1) MXPA02001949A (cs)
NO (1) NO20020884L (cs)
PL (1) PL205323B1 (cs)
PT (1) PT1206488E (cs)
RU (1) RU2242248C2 (cs)
SK (1) SK2202002A3 (cs)
WO (1) WO2001013946A2 (cs)
ZA (1) ZA200202288B (cs)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE10102096B4 (de) * 2001-01-18 2007-08-09 BLüCHER GMBH Geruchsadsorbierende Berufsbekleidung
SE0200946D0 (sv) * 2002-03-27 2002-03-27 Pharmacia Diagnostics Ab Novel Allergen
EP1872792A1 (en) * 2006-06-29 2008-01-02 Biotech Tools S.A. A method for the production of hydrolyzed allergen
JP5279238B2 (ja) * 2006-11-16 2013-09-04 森川健康堂株式会社 血圧降下作用を有する花粉の製造方法
EP2152405B2 (de) * 2007-05-25 2017-04-05 Merck Patent GmbH Mischpfropfpolymere für die kationenaustauschchromatographie
CN102675439A (zh) * 2012-03-31 2012-09-19 广州医学院第二附属医院 一种重组黑麦草花粉过敏原与突变体的制备方法和应用

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05509230A (ja) * 1990-08-17 1993-12-22 ザ・ユニバーシテイ・オブ・メルボルン ライグラスの花粉のアレルゲン
US5736362A (en) * 1990-10-26 1998-04-07 The University Of Melbourne Ryegrass pollen allergen
AT401937B (de) * 1993-04-01 1996-12-27 Biomay Prod & Handel Rekombinantes lieschgras pollen allergen phl p ii
DE19918682A1 (de) * 1999-04-23 2000-10-26 Merck Patent Gmbh DNA-Sequenz und rekombinante Herstellung eines Graminaen-Allergens

Also Published As

Publication number Publication date
HUP0203744A2 (hu) 2003-04-28
DE50010525D1 (de) 2005-07-14
US20080118536A1 (en) 2008-05-22
US7326769B1 (en) 2008-02-05
AU6997000A (en) 2001-03-19
SK2202002A3 (en) 2002-06-04
ES2241646T5 (es) 2016-01-22
JP2003507432A (ja) 2003-02-25
NO20020884D0 (no) 2002-02-22
CA2381340C (en) 2015-07-14
US8329185B2 (en) 2012-12-11
PL353349A1 (en) 2003-11-17
DE19939982A1 (de) 2001-03-01
EP1206488B1 (de) 2005-06-08
ZA200202288B (en) 2003-06-20
CN1205222C (zh) 2005-06-08
CA2381340A1 (en) 2001-03-01
US20080118991A1 (en) 2008-05-22
EP1206488B2 (de) 2015-10-14
JP4942892B2 (ja) 2012-05-30
WO2001013946A3 (de) 2001-06-07
NO20020884L (no) 2002-02-22
ATE297408T1 (de) 2005-06-15
PL205323B1 (pl) 2010-04-30
ES2241646T3 (es) 2005-11-01
MXPA02001949A (es) 2002-11-07
KR20020019965A (ko) 2002-03-13
PT1206488E (pt) 2005-10-31
CN1372567A (zh) 2002-10-02
WO2001013946A2 (de) 2001-03-01
RU2242248C2 (ru) 2004-12-20
AU776154B2 (en) 2004-08-26
EP1206488A2 (de) 2002-05-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Andersson et al. Characteristics and immunobiology of grass pollen allergens
ES2604502T3 (es) Péptidos derivados del alérgeno principal de ambrosía (Ambrosia artemisiifolia) y usos de los mismos
US8329185B2 (en) Method for isolating and purifying grass pollen allergens
CN101115504A (zh) 控制次要过敏原以便提高免疫疗法的安全性
Suck et al. The high molecular mass allergen fraction of timothy grass pollen (Phleum pratense) between 50–60 kDa is comprised of two major allergens: Phl p 4 and Phl p 13
ES2287067T3 (es) Vacunas que contienen polipeptidos hibridos que consisten en al menos dos proteinas alergenicas diferentes.
Jang et al. Allergen homologues, pathogenesis-related 1, polygalacturonase, and pectin methyl esterase from a Japanese Hop
González-Rioja et al. Genetically engineered hybrid proteins from Parietaria judaica pollen for allergen-specific immunotherapy
Stumvoll et al. Purification, structural and immunological characterization of a timothy grass (Phleum pratense) pollen allergen, Phl p 4, with cross-reactive potential
RU2409589C2 (ru) ВАРИАНТ АЛЛЕРГЕНА ГРУППЫ I ИЗ Роасеае, ХАРАКТЕРИЗУЮЩИЙСЯ СНИЖЕННОЙ АЛЛЕРГЕННОСТЬЮ И СОХРАНЕННОЙ Т-КЛЕТОЧНОЙ РЕАКТИВНОСТЬЮ (ВАРИАНТЫ), КОДИРУЮЩАЯ ЕГО МОЛЕКУЛА ДНК И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ
US20070154496A1 (en) Dna sequence, and recombinant preparation of the grass pollen allergen lol p4
RU2238321C2 (ru) Последовательность днк и получение аллергена злаковых рекомбинантным способом
Seitzer et al. Characterization of immunoglobulin E responses in Balb/c mice against the major allergens of timothy grass (Phleum pratense) pollen
JP4960102B2 (ja) 穀物からの４群主要アレルゲンのｄｎａ配列および組換え製剤
Law et al. Identification and characterization of plant allergens using proteomic approaches
Abdulla Allergenic potency and cross reactivity of rice extract allergens
CA2596802A1 (en) Minor allergen control to increase safety of immunotherapy