CZ20022265A3 - Léčivo pro podávání interleukinu-2 a stabilizovaný lyofilizovaný nebo sprejově sušený farmaceutický prostředek s obsahem interleukinu-2 - Google Patents

Léčivo pro podávání interleukinu-2 a stabilizovaný lyofilizovaný nebo sprejově sušený farmaceutický prostředek s obsahem interleukinu-2 Download PDF

Info

Publication number
CZ20022265A3
CZ20022265A3 CZ20022265A CZ20022265A CZ20022265A3 CZ 20022265 A3 CZ20022265 A3 CZ 20022265A3 CZ 20022265 A CZ20022265 A CZ 20022265A CZ 20022265 A CZ20022265 A CZ 20022265A CZ 20022265 A3 CZ20022265 A3 CZ 20022265A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
composition
dry powder
pulmonary inhalation
surfactant
polysorbate
Prior art date
Application number
CZ20022265A
Other languages
English (en)
Inventor
Bao-Lu Chen
Maninder Hora
Original Assignee
Chiron Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chiron Corporation filed Critical Chiron Corporation
Publication of CZ20022265A3 publication Critical patent/CZ20022265A3/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
    • A61K9/0075—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy for inhalation via a dry powder inhaler [DPI], e.g. comprising micronized drug mixed with lactose carrier particles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2013—IL-2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
    • A61K9/008—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy comprising drug dissolved or suspended in liquid propellant for inhalation via a pressurized metered dose inhaler [MDI]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1617—Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions

Description

Léčivo pro podávání interleukinu-2 a stabilizovaný lyofilizovaný nebo sprejově sušený farmaceutický prostředek s obsahem interleukinu-2
Oblast techniky
Tento vynález se týká použití interleukinu-2 (IL-2) nebo jeho varianty pro výrobu léčiva pro podávání IL-2 subjektu, který to potřebuje, a použití interleukinu-2 (IL-2) pro výrobu léčiva pro zvýšení biologické dostupnosti IL-2 podávaného subjektu. Vynález se také týká stabilizovaného lyofilizovaného nebo sprejově sušeného farmaceutického prostředku, který obsahuje interleukin-2 jako terapeuticky účinnou složku.
Dosavadní stav techniky
Plicní inhalace poskytuje slibný způsob absorpce peptidů a proteinů, které mají špatnou orální biologickou dostupnost z důvodu neefektivního transportu přes gastrointestinální epitel nebo z důvodu vysoké hladiny prvotního jaterního metabolismu. Potencionální výhodou tohoto způsobu podávání léčiv obsahujících peptidy nebo proteiny je větší míra absorpce z důvodu absorpční povrchové plochy, která je přibližně 140 m2, a vysokého objemu krve (5000 ml/min v plících u člověka), který protéká přes plíce (Hollinger(1985) Respirátory
Pharmacology and Toxicology (Saunders, PA), str. 1 - 20. Nedostatek některých forem peptidázové/proteázové aktivity ve srovnání s gastrointestinálním traktem a nedostatek prvotního jaterního metabolismu absorbovaných sloučenin zvyšují potenciální výhody podávání proteinových léčiv prostřednictvím plicní inhalace. Zájem o tento způsob podávání se zvýšil v nedávných letech, neboť mnoho
potencionálních léčiv obsahujících peptid nebo protein je absorbováno účinněji z plic než gastrointestinálního traktu (Patton a Platz (1992) Adv. Drug Del. Rev. 8: 179 - 196; Niven (1993) Pharm. Technol. 17:72 - 82).
Podávání farmaceutických přípravků obsahujících peptid a/nebo protein prostřednictvím plicní inhalace je známo, ačkoliv pouze několik příkladů bylo kvantitativně uskutečněno. Viz například Hubbard a kol., (1989) Ann. Internal Med. 3(3):206-212 (plazma α-1-antitrypsin); Smith a kol. (1989) J. Clin. Invest. 84: 1145 - 1154 (<x—1— proteinázový inhibitor). Experimenty s testovanými zvířaty ukázaly, že rekombinantní lidský růstový faktor při podávání ve formě aerosolu je rychle absorbován z plic a vyvolává rychlejší růst ve srovnání s podkožní injekcí. (Oswein a kol. (1990) „Aerosolization of Proteins v publikaci Proceedings of Symposium on Respirátory 0®vg Delivery II (Keystone, Colorado, březen 1990).
Rekombinantní verze cytokinů gama interferonu (IFN-γ) a faktoru a tumorózní nekrózy (TNF-a) byly také pozorovány v krevním oběhu po podání aerosolu do plic (Debs a kol. (1988). J. Immunol. 140: 3482 - 3488). Byla také prokázána proveditelnost plicního podávání faktoru stimulujícího kolonie granulocytů (G-CSF) a erythropoíetinu (EPO) savců. Viz U.S. patent č. 5,284,656 a 5,354,934. Viz také U.S. patent č. 5,997,848, ve kterém je prováděno systematické podávání insulinu savcům prostřednictvím inhalace suchého práškového aerosolu obsahujícího insulin.
Přes tyto příklady podávání proteinů plicní cestou se nedá předvídat, zdali určité polypeptidy mohou být-podávány takovým způsobem pro systémový účinek. Kromě toho biologická dostupnost polypeptidů podávaných prostřednictvím plicní cesty je obvykle zcela nízká-. Například plicní podávání endotelinu-1 (ET-1), vazokonstriktorového peptidu složeného z 21 aminokyselin vytvořeného v endotelových buňkách, není tak účinné jako nitrožilní podávání (Braquet a kol. (1989) J. Cardio.
Pharm. 13, suppl. 5: 143 - 146). Vazoaktivní intestinální peptid, malý polypeptid s relativní molekulovou hmotností 3450 daltonů (D) způsobující bronchodilataci při « · · · • · · · * · · · · nitrožilním podání živočichům i lidem, po ínhalačním podání nemá účinnost (Barroweliffe a kol. (1986) Thorax. 41/42:
- 93).
Úspěšné podávání peptidů a proteinů do hlubokých plicních tkání závisí na mnoha faktorech. Rozsah absorpce v plicních tkáních se mění s velikostí a strukturou polypeptidu a s použitým dávkovacím zařízením v rozmezí od 0 - 95 % podané dávky. Mezí taková podávači zařízení patří rozprašovače, dávkovači inhalátory a práškové inhalátory. Příprava farmaceutických prostředků obsahujících proteiny nebo peptidy ve formě vodného kapalného aerosolu, nevodného suspenzního aerosolu nebo suchého práškového aerosolu pro plicní podávání při použití těchto dávkovačích zařízení může ovlivnit stabilitu polypeptidů a tím i jejich biologickou dostupnost a rovněž i biologickou aktivitu po podání. Viz Wall (1995) Drug Delivery 2: 1 - 20; Krishnamurthy (březen 1999) BioPharm,, str. 34 - 38).
Z výše uvedeného vyplývá, že úspěšné plicní podávání určitého léčebného proteinu způsobujícího systémový účinek nemůže být předpovídáno před modelovým testováním na zvířatech. Jedním takovým modelem je intratracheální metoda (IT - intratracheal technique)(Niven a kol. (1994) Pharm. Res. 12: 1142 - 1149; Niven a kol. (1995) Pharm. Res. 12: 1889 -1895). Tímto modelem lze předpovídat plicní absorpci léčebných proteinů (viz. například Patton a kol. (1994) J. Controlled Release 28: 79 - 85).
Interleukin-2 je běžně podáván prostřednictvím nitrožilní nebo podkožní injekce. Plicní podávání tohoto proteinu by poskytlo atraktivní neinvazivní možnost těchto způsobů podávání. Plicní inhalace interleukinu-2 byla předvedena za použití rozprašovače k podávání vodného kapalného přípravku obsahujícího IL-2 (U.S. patenty č.
VÍ
- v
399 341 a 5 780 012). Avšak bylo ukázáno, že plicní podávání polypeptidů ve formě aerosolu za použití rozprašovacího systému denaturuje některé polypeptidy (Ip a kol. (1995) J. Pharm. Sci. 109: 17 - 26 (rekombinantní stimulační faktor kolonií granulocytů) a Niven a kol.
(1995), Pharm. Res. 12:53-59). Během procesu rozprašování je polypeptid vystaven smykovému napětí, které může zvýšit ztrátu biologické aktivity.
Vzhledem k výše uvedenému zůstává podávání proteinů s vysokou biologickou dostupností podnětným úkolem. Je potřeba vypracovat další neinvazivní způsoby podávání IL-2 pro systémovou odezvu.
Podstata vynálezu
Předmětem tohoto vynálezu je použití interleukinu-2 (IL-2) nebo jeho varianty pro výrobu léčiva pro podávání IL-2 subjektu, který to potřebuje, způsobem, který zahrnuje
a) získání farmaceutického prostředku obsahujícího stabilizovaný monomerní IL-2 nebo jeho varianty;
b) výrobu tohoto prostředku jako vodného nebo nevodného roztoku, vodné nebo nevodné suspenze nebo jako suché práškové formy; a
c) podání tohoto roztoku, suspenze nebo suché práškové formy tohoto prostředku uvedenému subjektu prostřednictvím plicní inhalace.
Předmětem tohoto vynálezu také je použití interleukinu-2 (IL-2) pro výrobu léčiva pro podávání IL-2 subjektu, který to potřebuje, způsobem, který zahrnuje
a) získání vysoce absorbovatelného farmaceutického prostředku obsahujícího monomerní IL-2 nebo jeho varianty, přičemž tento prostředek obsahuje alespoň jednu povrchově aktivní látku v množství dostatečném pro zvýšení absorpce tohoto prostředku po plicní inhalaci tohoto prostředku;
b) výrobu tohoto prostředku jako vodného nebo nevodného roztoku, vodné nebo nevodné suspenze nebo jako suché práškové formy; a
c) podání tohoto roztoku, suspenze nebo suché práškové formy tohoto prostředku uvedenému subjektu prostřednictvím plicní inhalace.
Předmětem tohoto vynálezu dále je použití interleukinu-2 (IL-2) pro výrobu léčiva pro podávání IL-2 subjektu, který to potřebuje, způsobem, který zahrnuje
a) získání farmaceutického prostředku obsahujícího multimerní IL-2 nebo jeho varianty;
b) výrobu uvedeného prostředku jako vodného nebo nevodného roztoku, vodné nebo nevodné suspenze nebo jako suché práškové formy; a
c) podání uvedeného roztoku, suspenze nebo suché práškové formy tohoto prostředku subjektu prostřednictvím plicní inhalace.
Předmětem tohoto vynálezu rovněž je použití interleukinu-2 (IL-2) pro výrobu léčiva pro podávání IL-2 subjektu, který to potřebuje, způsobem, který zahrnuje
a) získání farmaceutického prostředku obsahujícího stabilizovaný lyofilizovaný nebo sprejově sušený IL-2 nebo jeho varianty;
b) výrobu tohoto prostředku jako vodného nebo nevodného roztoku, vodné nebo nevodné suspenze nebo jako suché práškové formy; a
c) podávání tohoto roztoku, suspenze nebo suché práškové formy tohoto prostředku subjektu prostřednictvím plicní inhalace.
• · · • · * tt
Předmětem tohoto vynálezu rovněž je použití interleukinu-2 (IL—2) pro výrobu léčiva pro zvýšení biologické dostupnosti IL-2 podávaného subjektu prostřednictvím plicní inhalace, způsobem, který zahrnuje podávání vysoce absorbovatelného farmaceutického prostředku obsahujícího monomerní IL-2 nebo jeho varianty uvedenému subjektu prostřednictvím plicní - inhalace, přičemž tento prostředek obsahuje alespoň jednu povrchově aktivní látku v množství dostatečném pro zvýšení absorpce tohoto prostředku po plicní inhalaci uvedeného prostředku.
Předmětem tohoto vynálezu též je použití interleukinu-2 (IL-2) pro výrobu léčiva pro zvýšení biologické dostupnosti IL-2 podávaného subjektu prostřednictvím plicní inhalace, způsobem, který zahrnuje podávání farmaceutického prostředku obsahujícího multimerní IL-2 nebo jeho varianty subjektu prostřednictvím plicní inhalace, přičemž tento prostředek obsahuje alespoň jednu povrchově aktivní látku v množství dostatečném pro zvýšení absorpce tohoto prostředku po plicní inhalaci uvedeného prostředku.
Předmětem tohoto vynálezu konečně je použití interleukinu-2 (IL-2) pro výrobu léčiva pro zvýšení biologické dostupnosti IL-2 podávaného subjektu prostřednictvím plicní inhalace, způsobem, který zahrnuje podávání farmaceutického prostředku obsahujícího stabilizovaný lyofilizovaný nebo sprejově sušený IL-2 nebo jeho varianty subjektu prostřednictvím plicní inhalace, přičemž tento prostředek obsahuje alespoň jednu povrchově aktivní látku v množství dostatečném pro zvýšení absorpce tohoto prostředku po plicní inhalaci uvedeného prostředku.
Předmět tohoto vynálezu dále tvoří stabilizovaný lyofilizovaný nebo sprejově sušený farmaceutický prostředek, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje:
interleukin-2 (IL-2) jako terapeuticky účinnou složku;
- μ ·· ·· • · · ·
alespoň jedno činidlo na zvětšení objemu přítomné v množství od asi 0 % do asi 5 %;
alespoň jeden cukr vybraný ze souboru sestávajícího ze sacharosy, trehalosy, rafinosy, stachyosy, sorbitolu nebo alespoň jedné aminokyseliny vybrané ze souboru sestávajícího z argininu a lysinu, kde tento cukr je přítomen v množství od asi 0 % do asi 9 %, a kde tato aminokyselina je.přítomna v množství od asi 0 % do asi 1 %; a pufrovací činidlo pro udržení tohoto prostředku při pH v rozsahu od asi 4,0 do asi 8,5, když je tento prostředek rekonstituován jako kapalina.
Popis obrázků na výkresech
Obrázek 1 ukazuje profily průměrné plazmové koncentrace Proleukinu po intratracheálním (IT)(750 pg rhIL-2/zvíře) a podkožním (SC) (150 pg rhIL-2/zvíře) podání krysám.
Obrázek 2 ukazuje profily průměrné plazmové koncentrace monomerního rhIL-2 s polysorbátem 80 (Tween 80) po intratracheálním (IT) (375 pg/zvíře) a podkožním (SC). (75 pg/zvíře) podání krysám.
Obrázek 3 ukazuje koncentraci plazmového IL-2 po intratracheálním (IT)(375 pg/zvíře), podkožním (SC)(150 pg/zvíře) nebo nitrožilním (IV)(150 pg/zvíře) podání krysám monomerního rhIL-2 s nebo bez polysorbátu 80 (Tween 80) .
Obrázek 4 ukazuje koncentraci plazmového IL-2 po intratracheálním (IT) (400 pg/zvíře), podkožním (SC) nebo nitrožilním (IV)(0,5 mg/kg) podání krysám monomerního rhlL2 s nebo bez polysorbátu 80 (Tween 80) nebo argininu.
Obrázek 5 ukazuje koncentraci plazmového IL-2 po intratracheálním (IT)(400 pg/zvíře)podání monomerního rhlL2 a Proleukinu s různými koncentracemi tenzidů (Poloxamer • 444
188, PEG 4600 a polysorbát 80 (Tween 80) . Všechny monomerní rhIL-2 přípravky obsahují arginin zatímco přípravky Proleukinu neobsahovaly žádný arginin.
Podrobný popis vynálezu
Vynález je založen na způsobech podávání interleukinu2 (IL-2) nebo jeho variant prostřednictvím plicní inhalace. Použití podle tohoto vynálezu zahrnují přípravu farmaceutického prostředku obsahujícího IL-2 nebo jeho varianty pro následné podávání jako vodného nebo nevodného roztoku nebo suspenze nebo suché práškové formy. Mezi prostředky pro použití podle tohoto způsobu patří prostředky obsahující stabilizovaný monomerní IL-2 nebo jeho varianty, prostředky obsahující multimerní IL-2 nebo jeho varianty a prostředky obsahující stabilizovaný lyofilizovaný nebo sprejovš sušený IL-2 nebo jeho varianty. Každý z těchto prostředků může dále obsahovat tenzid v dostatečném množství pro zvýšení absorpce tohoto prostředku po jeho plicní inhalaci. Takové prostředky jsou označovány jako vysoce absorbovatelné prostředky.
Vynález umožňuje způsob zvýšení biologické dostupnosti IL-2 podávaného subjektu prostřednictvím plicní inhalace. Tento způsob zahrnuje přípravu aerosolu nebo jiného vhodného preparátu vysoce absorbovatelných prostředků popsaných v tomto vynálezu a podávání aerosolu nebo jiného vhodného preparátu subjektu prostřednictvím plicní inhalace.
Způsoby podávání interleukinu, zejména interleukinu-2 nebo jeho variant, subjektu se provádějí prostřednictvím plicní inhalace. Interleukin-2 je lymfokin, který je tvořen běžnými periferními krevními lymfocyty a je přítomen v těle v nízkých koncentracích. Vyvolává proliferaci antigenem nebo mitogenem stimulovaných T buněk po expozici
rostlinnými lektiny, antigeny nebo jinými stimuly. IL-2 poprvé popsal Morgan a kol. (1976) v Science 193: 1007 1008 a původně byl nazván růstový faktor T buněk z důvodu jeho schopnosti vyvolávat proliferaci stimulovaných T lymfocytů. Je proteinem s popsanou relativní molekulovou hmotností v rozsahu od 13 000 do 17 000 (Gillis a Watson (1980) J. Exp. Med. 159: 1709) a má izoelektrický bod v rozsahu od 6 až 8,5. V současné době je uznáváno, že kromě toho, že má vlastnosti růstového faktoru rovněž reguluje různé in vitro a in vivo funkce imunitního systému. IL-2 je jednou z messenger-regulačních molekul vytvořených lymfocyty, které zprostředkovávají buněčné interakce a funkce. Zde popsané způsoby zahrnují plicní (pulmonární) inhalaci IL-2 nebo jeho variant. IL-2 proteiny a jejich varianty používané při tomto vynálezu jsou podrobně popsány dále, za popisem způsobů a prostředků podle tohoto vynálezu.
Způsoby používané podle tohoto vynálezu zahrnují přípravu farmaceutického prostředku obsahujícího IL-2 nebo jeho varianty ve formě, která je vhodná pro plicní podávání a podávání tohoto přípravku subjektu prostřednictvím plicní inhalace. Výraz „plicní inhalace souvisí s farmaceutickým prostředkem, který je přímo aplikován do plic podáváním tohoto prostředku v aerosolu nebo v jiném vhodném přípravku prostřednictvím dodávacího zařízení přes ústní dutinu subjektu, jak subjekt vdechuje ústní dutinou. Výrazem „aerosol je myšlena suspenze tuhých nebo kapalných částic v proudícím vzduchu nebo jiném fyziologicky přijatelném proudu plynu. Mezi jiné přípravky například patří mlžné, inhalační nebo sprejové přípravky, pokud tyto částice obsahují proteinový prostředek, který je dodáván ve velikostním rozsahu shodném • · · · < • « · « · 9 · - · · 9
9 99 9 9 9 9 9 *· s farmaceutickými prostředky popsanými pro suché práškové formy, jak jsou definovány níže. Plicní inhalace by také mohla být prováděna jinými vhodnými způsoby, které jsou známé v oboru. Mezi ně- například patří vkapávání tekutin za použití vhodných prostředků nebo jiné takové způsoby.
Plicní inhalace veda k ukládání inhalovaného proteinového· prostředku v plicních sklípcích plic subjektu. Jednou uložený protein může být aktivně nebo pasivně absorbován přes sklípkový epitel a vrstvy kapilárního epitelu do krevního, oběhu následnou systematickou distribuci.
Plicní podávání polypeptidu nebo proteinu, jako je IL-2, vyžaduje dávkování biologicky aktivní látky z dávkovacího zařízení do ústní dutiny subjektu během inhalace. Pro účely tohoto vynálezu jsou prostředky obsahující IL-2 nebo jejich varianty podávány prostřednictvím inhalace aerosolu nebo jiného vhodného přípravku, který je získán z vodné nebo nevodné formy roztoku nebo suspenze nebo tuhé nebo. suché práškové formy farmaceutického prostředku a závisí na použitém dávkovacím zařízení. Taková dávkovači zařízení jsou dobře známá v oboru a například mezi né patří rozprašovače, dávkovači inhalátory a inhalátory na suché prášky nebo jakékoliv jiné vhodné dodávací mechanismy, které dovolují dávkování farmaceutického prostředku jako vodného- nebo nevadnéhoroztoku nebo suspenze nebo jako tuhé nebo suché práškové formy, Výrazem „vodný je myšlen prostředek připravený s vodou, obsahující vodu nebo rozpuštěný ve vodě včetně směsí, kde voda je převládající látka· ve směsi.
Převládající látka je přítomna ve větším množství než další složka směsi, výrazem „nevodný je myšlen připravený s, obsahující nebo rozpuštěný v látce jiné než voda nebo směsi, kde voda není převládající látkou ve směsi. Výrazem „roztok je myšlen homogenní přípravek dvou nebo více látek, které mohou být tuhými látkami, kapalinami, plyny u
's • ·· ·· • · ♦ · • · · · • · · · · • · · • · · · · · · * nebo jejich kombinací. Výrazem „suspenze'' je myšlena taková směs látek, kde jedna nebo více homogenních látek je homogenně dispergována v další převládající látce.
Pro účely tohoto vynálezu jsou výrazy „tuhá látka a „suchý prášek používány zaměnitelně. Výrazem „tuhá nebo „suchá prášková forma farmaceutického prostředku je myšlen prostředek, který byl sušen na jemně rozptýlený prášek mající obsah vlhkosti nižší než asi 10 % hmotn., obvykle nižší než asi 5 % hmotn^ a výhodně nižší než asi 3 % hmotn. Tato suchá prášková forma prostředku jě složena z částic obsahujících IL-2 nebo jeho varianty. Výhodné částic jsou o velikosti středního průměru menší než asi 10,0 pm, výhodnější jsou menší než asi 7,0 pm, ještě výhodnější- jsou menší než asi 6,0 pm, dokonce výhodnější jsou v rozsahu od 0,1 do 5,0 pm a nejvýhodnější jsou o středním průměru v rozsahu od asi 1,0 do asi 5,0 pm.
Kapalný farmaceutický prostředek obsahující IL-2 nebo jeho varianty zamýšlený pro použití ve způsobech podle tohoto vynálezu může být buď použit jako kapalný roztok nebo suspenze v podávacím zařízení nebo může být zpracován nejdříve do formy suchého prášku za použití lyofilizace nebo metodami sprejového sušení, které jsou dobře známé v oboru. Kapalný roztok nebo suspenze jsou dávkovacím zařízením, jako je rozprašovač, dávkovači inhalátor nebo jiná vhodná dávkovači zařízení, dávkovány v jedné nebo vícenásobných dávkách. Farmaceuticky účinné množství prostředku je prostřednictvím plicní inhalace aplikováno do plic pacienta jako kapičky mající stejnou velikost částic v rozsahu uvedeném výše pro suchou práškovou formu. Výrazem „farmaceuticky účinné množství je myšleno množství, které je užitečné při léčbě, prevenci nebo diagnóze nemoci či zdravotního stavu. Kapalný roztok nebo suspenze prostředku mohou být použity s fyziologicky vhodnými stabilizátory, vehikuly, objemovými, činidly, tenzidy nebo jejich
kombinacemi, jak je uvedeno níže. Mezi vhodná vehikula například patří pufry, modifikátory viskozity nebo jiné terapeuticky inaktivní, ale funkční přísady.
Jestliže je kapalný farmaceutický prostředek lyofilizovaný před použitím ve způsobech podávání podle tohoto vynálezu, je lyofilizovaný prostředek namlet za vzniku jemně rozptýleného suchého prášku, jehož částice jsou ve výše uvedeném požadovaném velikostním- rozsahu. Jestliže je použito sprejové sušení k získání suché práškové formy kapalného farmaceutického prostředku, je tento postup prováděn za podmínek, za kterých vzniká v podstatě amorfní jemně rozptýlený suchý prášek sestávající z Částic ve výše uvedeném požadovaném velikostním rozsahu. Podobně jestliže výchozí farmaceutický prostředek je již v -lyofilizované formě, prostředek může být namlet za vzniku suché práškové formy pro následný přípravek jako aerosol nebo jiný preparát vhodný plicní inhalaci. Jestliže výchozí farmaceutický prostředek byl výhodně připraven ve sprejově sušené formě, potom má prostředek vhodnou velikost částic pro dávkování ve formě vodného nebo nevodného roztoku nebo suspenze nebo suché práškové formě v souladu s způsoby plicního podávání podle tohoto vynálezu. Způsoby přípravy suchých práškových forem farmaceutických prostředků jsou například uvedeny v WO 96/32149, WO 97/41833, WO 98/29096 a U.S. patentových spisech 5 976 574, 5 985 248 a 6 001336, na které se tímto odkazuje.
Konečná suchá prášková forma tohoto prostředku je potom vložena do vhodného dávkovacího zařízení pro následný přípravek ve formě aerosolu nebo jiného vhodného preparátu, který je dodáván subjektu prostřednictvím plicní inhalace. Jestliže suchá prášková forma farmaceutického prostředku má být připravena a dávkována ve formě vodného nebo nevodného roztoku nebo suspenze, používá se pro dávkování odměrný
dávkovači inhalátor nebo jiné vhodné dávkovači zařízení. Farmaceuticky účinné množství suché práškové formy tohoto prostředku jě podáváno ve formě aerosolu nebo jiného přípravku vhodného pro plicní inhalaci. Množství suché práškové formy kompozice vložené do dávkovacího zařízení je dostatečné, aby bylo možno dávkovat farmaceuticky účinné množství prostředku subjektu prostřednictvím inhalace. Množství suché práškové formy vložené do dávkovacího. zařízení musí kompenzovat možné ztráty během skladování a dávkování suché práškové formy tohoto prostředku. Po vložení suché práškové formy do dávkovacího zařízení jsou částice o výše uvedené velikosti suspendovány v aerosolové hnací látce. Natlakovaná nevodná suspenze je potom uvolněna z dávkovacího zařízení do dýchacích cest subjektu během inhalování. Dávkovači zařízení dodává v jedné nebo více dávkách prostřednictvím plicní inhalace farmaceuticky účinné množství prostředku do plic pacienta. Aerosolová hnací látka může být jakákoliv běžná látka používaná pro tento účel, jako je chlorfluorovaný uhlovodík, chlorovaný uhlovodík, fluorovaný uhlovodík nebo uhlovodík, jako je trichlorfluormethan, dichlordifluormethan, dichlortetrafluorethan, dichlordifluormethan, dichlortetrafluorethanol a 1,1,1,2-tetrafluorethan nebo jejich kombinace. Tenzid může být přidán k farmaceutickému prostředku z důvodu snížení přilnavosti suchého prášku obsahujícího protein ke stěnám dávkovacího zařízení, ze kterého je aerosol dávkován. Mezi vhodné tenzidy pro zamýšlené použití patří například sorbitantrioleat, sojový lecithin a kyselina olejová. Zařízení vhodná pro plicní podávání suché práškové formy proteinového prostředku jako nevodné suspenze jsou komerčně dostupné. Mezi příklady takových zařízení patří Ventoliniho dávkovači inhalátor {Glaxo lne., Research Triangle Park., NC) a inhalátor Intal
- 1\ 9
9 9
Inhaler (Fisions, Corp., Bedford, MA). Viz také aerosolové dávkovači zařízení popsaná v U.S. patentových spisech č. 5 5.22 378, 5 775 320, 5 934 272 a 5 960792, na které se tímto odkazuje.
Jestliže tuhá nebo suchá prášková forma farmaceutického prostředku má být dodávána jako suchá prášková forma, potom je výhodně používán suchý práškový inhalátor nebo jiné vhodné dávkovači zařízeni. Suchá prášková forma farmaceutického prostředku je výhodně připravena běžným způsobem jako suchý práškový aerosol rozptýlením v proudícím vzduchu nebo v jiném fyziologicky přijatelném proudu plynu. Mezi příklady komerčně dostupných inhalátorů suchých prášků pro použití v souladu se způsoby podle tohoto vynálezu patří Spinhalerův práškový inhalátor (Fisions Corp., Bedford, MA) a Ventoliniho Rotahaler (Glaxo, lne., Research Triangle Park, NC). Viz také zařízení pro podávání suchých prášků popsaná v WO 93/00951, WO 96/09085, WO 96/32152 a U.S. patentových spisech č. 5458135, 5 785 049 a 5 993 783, na které se tímto odkazuje.
Suchá prášková forma, farmaceutického prostředku obsahujícího IL-2 nebo jeho varianty může být rekonstituována na vodný roztok pro následnou aplikaci jako aerosol vodného roztoku za použití rozprašovače, dávkovacího inhalátoru nebo jiného dávkovacího zařízení.
V případě rozprašovače je vodný roztok uchovávaný v zásobníku kapaliny přeměněn na vodný sprej, přičemž pouze malá část opouští rozprašovač pro aplikaci pacientovi v určitém čase. Zbývající sprej se vrací zpět do zásobníku tekutiny a odtud zpět do rozprašovače, kde je opět přeměňován na vodní sprej. Tento postup je opakován tak dlouho, dokud není zásobník tekutiny úplně prázdný nebo dokud není podávání aerosolového spreje ukončeno. Takové rozprašovače jsou komerčně dostupné a například zahrnují rozprašovač Ultravenť (Mallinckrodt lne., St.Louis, MO) a v ·· ··.··· ··· · ··· 4·· ·· ···· rozprašovač Acorn II (Marquest Medical Products,
EngIewood,CO). Viz také rozprašovač popsaný v WO 93/00951 a zařízení pro dodávání aerosolových vodných přípravků popsaná v U.S. patentovém spise č. 5 544 646; na které se tímto odkazuje.
Ve způsobech podle tohoto vynálezu může být použita jakákoli farmaceutická kompozice IL-2. Takové farmaceutické kompozice jsou známé v oboru a například mezi ně patří ty, které jsou popsány v U.S. patentových spisech č. 4 745 180;
766 106; 4 816 440; 4 894 226? 4 931 544; a 5 078 997, na které se tímto odkazuje. Tedy kapalné, lyofilizované nebo sprejově sušené prostředky obsahující IL-2 nebo jeho varianty, které jsou známy v oboru, mohou být připraveny jako vodný nebo nevodný roztok nebo suspenze nebo suchá prášková forma pro následnou aplikaci subjektu prostřednictvím plicní inhalace. Každá z těchto kompozic bude obsahovat IL~2 nebo jeho varianty jako terapeuticky nebo profylakticky aktivní složky. Výrazem „terapeuticky nebo profylakticky aktivní složka je myšleno, že IL-2 nebo jeho varianty jsou specificky.včleněny do prostředku pro vyvolání požadované terapeutické nebo profylaktické odezvy ve vztahu k nemoci, prevencí nebo diagnóze nemoci nebo zdravotnímu stavu subjektu, když je tento farmaceutický prostředek podáván tomuto subjektu. Výhodně farmaceutické prostředky obsahují vhodné stabilizátory, objemová činidla (nadouvadla) nebo oboje z důvodu zmenšení problémů spojených se ztrátou stability nebo biologické aktivity proteinu během lyofilizace, sprejového sušení a aerosolizačních procesech, které jsou zahrnuty ve způsobech plicního podávání podle tohoto vynálezu.
Ve výhodném provedení tohoto vynálezu farmaceuticky prostředky užitečnými ve způsobech podle tohoto vynálezu jsou prostředky obsahující stabilizovaný monomerní IL-2 nebo jeho varianty, prostředky obsahující multimerní IL-2
Ί- η • · · 9 99 99 «· 9 44 94 494 • 9 · · 9 99 >
······ · 9 99 9 >
4 4 4 4 9 4
999 · 999 999 99 9999 nebo jeho varianty, prostředky obsahující stabilizovaný lyofilizovaný nebo sprejově sušený IL-2 nebo jeho varianty a vysoce ábsorbovatelné formy těchto prostředků jak jsou zde uvedeny.
Farmaceutické prostředky obsahující stabilizovaný monomerní IL-2 nebo jeho varianty jsou popsány v souběžné předběžné přihlášce s názvem „Stabilized Liquid
Polypeptide-Containing Pharmáceutical Compositions, podané
4. října 1999 a zaregistrované jako U.S. předběžná přihláška č. 60/157696, na kterou se tímto odkazuje.
Výrazem „monomerní IL-2 je zamýšleno, že proteinové molekuly jsou přítomny ve zde popisovaných farmaceutických •prostředcích v podstatě v své monomerní formě, ne v agregované formě. Proto v nich nejsou přítomny kovalentní nebo hydrofóbní oligomery nebo agregáty IL-2. Zkrátka IL-2 nebo jeho varianty v těchto kapalných prostředcích jsou připravovány s- množstvím aminokyselinové báze dostatečným pro snížení vzniku agregátů IL-2 nebo jeho variant během skladování. Aminokyselinová báze je aminokyselina nebo kombinace aminokyselin, kde jakákoliv daná aminokyselina je přítomna buď ve své volné bazické formě nebo ve své kyselé formě. Výhodné aminokyseliny jsou vybrány ze skupiny skládající se z argininu, lysinu, kyseliny aspartové a kyseliny glutamové. Tyto prostředky dále obsahují pufrovací činidlo k udržení pH kapalného prostředku v přijatelném rozsahu pro stabilitu IL-2 nebo jeho variant, přičemž pufrovací činidlo je kyselina v podstatě bez své solí, kyselina ve formě své soli nebo směs kyseliny a její soli. Výhodně je sůl vybrána ze skupiny skládající se z kyseliny jantarové, kyseliny citrónové, kyseliny orthofosforečné a kyseliny glutamové.
Báze aminokyseliny v těchto prostředcích slouží k stabilizování IL-2 nebo jeho variant proti vzniku agregátů během skladování kapalného farmaceutického prostředku,
- 1\ • · ···· • fc ·· fc· • · • · zatímco použití v podstatě volné kyseliny, kyseliny v formě její soli a směsi kyseliny a její soli jako pufrovací činidlo má za následek,,že kapalný prostředek má osmolaritu, která je téměř izotonická. Kapalný farmaceutický prostředek může dále obsahovat jiné stabilizátory, zejména methionin, neionogenní tenzid, jako je polysorbát 80 a EDTA, z důvodu dalšího zvýšení stability polypeptidu. Uvádí se, že takové kapalné farmaceutické prostředky jsou stabilizované, neboť přidání aminokyselinové báze v kombinaci s kyselinou bez její soli, s kyselinou ve formě její soli nebo ve směsi kyseliny a její soli má za následek, že tyto prostředky mají prodlouženou skladovatelnost vůči připraveným kapalným farmaceutickým přípravkům, které neobsahují kombinaci těchto dvou složek.
Tyto kapalné farmaceutické prostředky obsahující stabilizovaný monomerní IL-2 nebo jeho varianty mohou být použity buď v kapalné formě nebo mohou být připraveny jako tuhá nebo suchá prášková forma pro použití ve způsobech podle tohoto vynálezu, jak je uvedeno výše.
Příklady farmaceutických prostředků obsahujících multimerní IL-2 nebo jeho varianty jsou popsány v U.S. patentu č. 4 604. 377, na který se tímto odkazuje. Výrazem „multimerní je myšleno, že proteinové molekuly jsou přítomny ve farmaceutickém prostředku v mikroagregovane formě o průměrně 10-50 asociovaných molekulách. Tyto multimery jsou přítomny jako volně vázané, fyzikálně spojené molekuly IL-2. Lyofilizovaná forma těchto prostředků je komerčně dostupná pod obchodním názvem Proleukin (Chiron Corporation). V tomto odkazu popsaný lyofilizovány přípravek obsahuje selektivně oxidovaný, mikrobiálně vytvořený rekombinantní lidský IL-2 („rhIL-2), ve kterém je rekombinantní 'IL-2 smíchán s vodou rozpustným nosičem, jako je mannitol, který slouží jako objemové
- ♦ 9 99 β • ·. *
99·· 9
9
9 9 9
9
9 9 9 • 9 • ·
9 «99 »99 • 9 99
9 9
9 >
9 9
9 9 • 9 ·«·· čindilo, a dostatečným množstvím dodecylsulfatu sodného, který zajišťuje rozpustnost rekombinantního IL-2 ve vodě. Tyto prostředky jsou vhodné pro rekonstituci, ve vodných injekcích pro parenterální podávání a jsou stálé a dobře snášené u lidí. V případě rekonstituce zůstává IL-2 nebo jeho varianty v jeho multimerním stavu. Takové lyofilizované nebo kapalné prostředky obsahující multimerní IL-2 nebo jeho varianty jsou zahrnuty ve způsobech podle tohoto vynálezu.
Jestliže jsou farmaceutické prostředky obsahující IL-2 nebo jejich varianty zpracovány do tuhé nebo suché práškové formy pro následné podávání jako aerosol, potom může být vhodné mít v prostředku přítomny nosičové materiály, které slouží jako objemové činidlo nebo stabilizátor. Tímto způsobem tento vynález popisuje stabilizované lyofilizované nebo sprejově sušené farmaceutické prostředky obsahující IL-2 nebo jeho varianty pro použití ve způsobech podle tohoto vynálezu. Tyto prostředky mohou dále obsahovat alespoň jedno objemové činidlo (nadouvadlo), alespoň jedno činidlo v dostatečném množství pro stabilizování proteinu během sušení, nebo obě činidla. Výrazem „stabilizovaný je myšleno, že IL-2 protein, nebo jeho varianty, zůstává ve své monomerní nebo multimerní formě a rovněž se nemění ani jeho další důležité vlastnosti tykající se kvality, čistoty a účinností po lyofilizaci nebo sprejovém sušení, čímž vzniká tuhá nebo suchá prášková forma tohoto prostředku.
Mezi výhodné nosičové materiály pro použití jako nadouvadlo patří glycin, mannitol, alanin, valin nebo jakákoliv jejich kombinace, nejvýhodněji glycin. Nadouvadlo je v prostředku přítomno v koncentračním rozsahu od 0 % do 10 % (hmotn./obj.) v závislosti na použitém činidle. Jestliže je nadouvadlem glycin, potom je přítomno v koncentračním rozsahu od asi 0 % do asi 4 %, výhodně od asi 0,25 % do asi 3,5 %, výhodněji od asi 0,5 % do asi 3,0 %, < · • ···» 4 &Χ>
- K' 4 4 ·· »
*· « 4 9
4 *
O ·
4« » · • t « « • 4 « ·««· ještě výhodněji od asi 1,0 % do asi 2,5 %, nejvýhodněji asi 2,0 %. Jestliže je nadouvadlem mannitol, potom je přítomno v koncentračním rozsahu od asi 0 % do asi 5,0 S, výhodně od asi 1,0 % do asi 4,5 %, výhodněji od asi 2,0 % do asi 4,0 %, nejvýhodněji asi 4,0 S. Jestliže je nadouvadlem alanin nebo valin, potom jsou přítomny v koncentračním rozsahu od asi 0 % do asi 5,0 %, výhodně od asi 1,0 % do asi 4,0 %, zvláště výhodně od asi 1,5 % do asi 3,0 %, nejvýhodněji asi 2,0 %.
Mezi výhodné nosičové materiály pro použití jako stabilizátor patří jakýkoliv cukr nebo cukerný alkohol nebo jakákoliv aminokyselina. Mezi výhodné cukry patří sacharosa, trehalosa, rafinosa, stachyosa, sorbitol, glukosa, laktosa, dextrosa nebo jakákoliv jejich kombinace, výhodná je sacharosa. Jestliže je stabilizátorem cukr, potom je přítomen v koncentračním rozsahu od asi 0 % do asi 9,0 % (hmotn./obj.), výhodně od asi 0,5 % do asi 5,0 %, výhodněji od asi 1,0 % do asi 3,0 %, nejvýhodněji asi 1,0 %. Jestliže je stabilizátorem aminokyselina, potom je přítomna v koncentračním rozsahu od asi 0 % do asi 1,0 %(hmotn./obj.5, výhodně od asi 0,3 % do asi 0,7 %, nejvýhodněji asi 0,5 %.
Tyto stabilizované lyofilízované nebo sprejově sušené prostředky mohou případně obsahovat methionin, kyselinu ethylendiamintetraoctovou (EDTA) nebo jednu z jejich solí jako je dinatrium-EDTA nebo jiné chélatační činidlo, které chrání IL-2 nebo jeho varianty vůči oxidaci methioninem. Použití těchto činidel tímto způsobem je popsáno v souběžné U.S. předběžné přihlášce č. 60/157696, na kterou se tímto odkazuje. Methionin je přítomen ve stabilizovaných lyofilizovaných nebo sprejově sušených farmaceutických prostředcích v koncentračním rozsahu od asi 0 do asi 10,0 mM, výhodně od asi 1,0 do asi 9,0 mM, výhodněji od asi 2,0 do asi 8,0 mM, zvláště výhodně od asi 3,0 do asi 7,0 mM, «Μ • ·
ještě výhodněji od asi 4,0 do asi 6,0 mM, nejvýhodněji asi 5,0 mM. EDTA je přítomna v koncentračním rozsahu od asi 0 do asi 10,0 mM, výhodně od asi 0,2 mM do asi. 8,0 mM, výhodněji od asi 0,5 mM do asi 6,0 mM, ještě výhodněji od asi 0,7 mM do asi 4,0 mM, ještě výhodněji od asi 0,8 mM do asi 3,0 mM, zvláště výhodně od asi 0,9 mM do asi 2,0 mM, nejvýhodněji asi 1,0 mM.
Stabilizované lyofilizované nebo sprejově sušené prostředky mohou být připraveny s použitím pufru, který udržuje pH farmaceutického prostředku v přijatelném rozsahu, jestliže je v kapalné fázi, tak jako během přípravy nebo po rekonstituci sušené formy tohoto prostředku. Výhodně je pH v rozsahu od asi pH 4,0 do asi pH
8.5, výhodněji od asi pH 4,5 do asi pH 7,5, ještě výhodněji od asi pH 5,0 do asi pH 6,5, ještě výhodněji od asi pH 5,6 do asi pH 6,3 a nejvýhodněji od asi pH 5,7 do asi pH 6,2. Vhodné pH zahrnuje asi 4,0, asi 4,5, asi 5,0, asi 5,1, asi 5,2, asi 5,3, asi 5,4, asi 5,5, asi 5,6, asi 5,7, asi 5,8, asi 5,9, asi 6,1, asi 6,2, asi 6,3, asi 6,4, asi 6,5, asi
6.6, asi 6,7, asi 6,8, asi 6,9, asi 7,0, asi 7,1, asi 7,2, asi 7,3, asi 7,4, asi 7,5, až asi do 8,5. Nejvýhodnější pH je asi 5,8.
Mezi vhodná pufrovací činidla například patří citrátový pufr, fosforečnanový pufr, sukcinátový pufr, zejména pufr citrát sodný/kyselina citrónová. Alternativně může být použit imidazol, histidin nebo jiná báze/kyselina, které udržují pH v rozsahu od asi pH 4,0 do asi 8,5. Pufry jsou vybrány tak, že jsou slučitelné se sušícím procesem a neovlivňují kvalitu, čistotu, účinnost a stabilitu během zpracování a po skladování.
V jednom provedení tohoto vynálezu obsahují stabilizované lyofilizované nebo sprejově sušené farmaceutické prostředky IL-2 nebo jeho varianty, glycin • · a» • · · · · a v koncentračním rozsahu od asi 0 % do asi 2,0 %, sacharosu v koncentračním rozsahu od asi 0 % do asi 9 %, methionin v koncentračním rozsahu od asi 0 mM do asi 10,0 mM a EDTA v koncentračním rozsahu od 0 mM do asi 10 mM a je pufrován na pH od asi pH 5,0 do asi pH 8,0 pufrem citát sodný/kyselina citrónová o koncentraci 10,0 mM. Ve výhodném provedení dále obsahuje stabilizovaný lyofilizovaný nebo sprejově sušený farmaceutický prostředek obsahující IL-2 nebo jeho varianty 2,0 % glycinu, 1,0 % sacharosy, 5,0 mM methioninu, 1,0 mM EDTA, polysorbát 80 v rozsahu od asi 0 % do asi 1,0 % a je pufrován v rozsahu od asi pH 6,0 do asi pH 7,0 pufrem citát sodný/kyselina citrónová o koncentraci 10,0 mM. Koncentrace IL-2 nebo jeho variant v těchto prostředcích je od asi 0,01 mg/ml do asi 1,0 mg/ml, výhodně od asi 0,2 mg/ml do asi 0,8 mg/ml, výhodněji od asi 0,3 mg/ml do asi 0,6 mg/ml, nejvýhodněji od asi 0,3 do asi 0,5 mg/ml.
Jakékoliv farmaceutické prostředky obsahující IL-2 nebo jeho varianty uvažované pro použití podle tohoto vynálezu mohou být připraveny s alespoň jedním tenzidem v dostatečném množství pro zvýšení absorpce ínhalovaných částic obsahujících IL-2 nebo jeho varianty z důvodu získání vysoce absorbovatelného prostředku pro použití při plicní inhalaci v souladu se způsoby popsanými v tomto vynálezu. Výrazem „vysoce absorbovatelný jsou myšleny farmaceutické' prostředky obsahující IL-2 nebo jeho varianty a alespoň jeden tenzid, jestliže jsou použity při plicním podávání prostřednictvím způsobů podle tohoto vynálezu, které mají biologickou dostupnost, která je asi 1,5- až asi dvaceti násobně, výhodně asi 1,6- až asi 17-násobně, výhodněji asi 1,7- až asi 15-násobně, dokonce výhodněji asi
1,8- až 13-násobně, ještě výhodněji asi 1,9- až asi 11násobně, nejvýhodněji asi 2,0- až 10-násobně větší než srovnatelný přípravek obsahující IL-2 nebo jeho varianty bez použití tenzidů- Tenzid použitý tímto způsobem zvyšuje
- χbiologickou dostupnost inhalovaného IL-2 nebo jeho variant, jak je popsáno níže.
Jakýkoliv tenzid, který zvyšuje absorpci farmaceutického prostředku obsahujícího IL-2 nebo jeho varianty způsobem popsaným v tomto vynálezu může být použit k získání těchto vysoce absorbovatelných farmaceutických prostředků, které obsahují protein. Mezi tenzidy vhodné pro použití při zvýšení absorpce inhalovaného IL-2 nebo jeho variant například patří estery polyoxyethylensorbitolu, jako je polysorbát 80 (Tween 80) a polysorbát 20 (Tween 20); estery polyoxypropylénu a polyoxyethylenu, jako je Poloxamer 188; polyoxyethylenalkoholy, jako je Brij 35; směs polysorbátových tenzidů s fosfolipidy, jako je fosfátidylcholin a jeho deriváty (dipalmitoyl, dioleoyl, dimyristyl nebo smíšené deriváty, jako je 1-palmítoyl, 2-oleoyl, atd.), dimyristolglycerol a jiné členy fosfolipid-glycerolové řády; lysofosfatidylcholin a jeho deriváty; směsi polysorbátů s lysolecithinem nebo cholesterolem; směs polysorbátových tenzidů s sorbitanovými tenzidy (jako je sorbitan monoleat, dioleat, trioleat nebo další z této řady); poloxamerové tenzidy; žlučové kyseliny a jejich deriváty, jako je cholat sodný, deoxycholat sodný, glykodeoxycholat sodný, taurocholat sodný, atd.; micely IL-2 smíchané se žlučovými kyselinami a fosfolipidy; Brij tenzidy (jako je Brij 35-PEG923) laurylalkohol, atd.). Množství tenzidů, které má být přidáno, je v rozmezí od asi 0,005 % do asi 1 % (hmotn./obj.), výhodně od asi 0,005 % do asi 0,5 %, výhodněji od asi 0,01 % do asi 0,4 %, ještě výhodněji od asi 0,03 % do asi 0,3 %, nejvýhodněji od asi 0,05 % do asi 0,2%.
V jednom provedení vynálezu vysoce absorbovatelný farmaceutický prostředek obsahuje monomerní IL-2 s alespoň jedním výše uvedeným tenzidem v dostatečném množství pro zvýšení absorpce inhalovaného IL-2.. Tento prostředek je
• · · · · • · ·· ·· podoben vysoce· absorbovatelnému farmaceutickému prostředku obsahujícímu stabilizovaný monomerní IL-2 nebo-jeho varianty, ale bez přítomnosti aminokyselinové báze.
Výše uvedená stabilizační nebo objemová činidla a tenzídy mohou být přidána k farmaceutickému prostředku před připravením prostředku jako tuhé nebo suché práškové formy.
V tomto případě jsou tato činidla tvořena současně spolu a jako část částic obsahujících IL-2 nebo jeho varianty.
V případě přípravy tímto způsobem je IL-2, nebo jeho varianty, přítomen v každé jednotlivé částici v rozmezí od asi 0,01 hmotn. % do asi 100 hmotn.%, výhodně od asi 0,1 hmotn.% do asi 10 hmotn.%. Zbytek částice tvoří převážně stabilizátory, ale také pufr a další složky, jak je uvedeno výše. Alternativně mohou být jakákoli činidla, která už nejsou přítomna ve farmaceutickém prostředku, připravena odděleně v suché práškové formě a potom mohou být smíchána se suchou práškovou formou farmaceutického prostředku před přípravou konečné suché práškové formy tohoto prostředku jako aerosolu.
V souladu se způsobem podle tohoto vynálezu je vodný . nebonevodný roztok nebo suspenze nebo tuhá nebo suchá prášková forma prostředku obsahujícího IL-2 nebo jeho varianty, podávána subjektu ve formě aerosolu nebo jiného přípravku vhodného pro plicní inhalaci. Výrazem „subjekt je myšlen jakýkoliv živočich. Výhodně je subjektem savec, nejvýhodněji je subjektem člověk. Mezi zvláště důležité savce kromě člověka například patří psi, kočky, krávy, koně, ovce a prasata.
Pokud je podávání pro účely ošetření, může se jednat o účely profylaktické (preventivní) nebo terapeutické. Při poskytování profylaxe je látka podávána před jakýmkoliv příznakem. Profylaktické podávání látky slouží k zabránění nebo zmírnění jakéhokoliv následného příznaku. Při
* · · • · « · • * 9 • · · · · · terapeutickém podávání je látka aplikována na začátku (nebo krátce po) projevu příznaku. Terapeutické podávání látky slouží ke zmírnění jakýchkoliv aktuálních příznaků.
Tento vynález také poskytuje způsob zvýšení biologické dostupnosti IL-2, nebo jeho variant, které jsou podáván plicní inhalací. Tento způsob zahrnuje přípravu vysoce absorbovatelných prostředků popsaných v tomto vynálezu, jako je aerosol nebo jiný vhodný preparát a podávání tohoto aerosolu nebo jiného vhodného preparátu subjektu prostřednictvím plicní inhalace. Výrazem „biologická dostupnost je zamýšlena míra absorpce IL-2 nebo jeho variant plicními tkáněmi do krevního oběhu po plicním podávání IL-2 nebo jeho variant ve srovnání s množstvím IL-2 nebo jeho variant v krevním oběhu po nitrožilní injekci (absolutní biologická dostupnost) nebo po podkožní injekci (relativní biologická dostupnost). Biologická dostupnost inhalovaného IL-2 nebo jeho variant může být zvýšena přídavkem tenzídu k farmaceutickému prostředku obsahujícímu IL-2 nebo jeho varianty před jeho podáním, pacientovi.
Pro účely tohoto vynálezu je biologická dostupnost IL-2 obsaženého v farmaceutickém prostředku určena za použití intratracheální (IT) techniky (Niven a kol. (1994) Pharm. Res. 12: 1142 - 1149; Niven a kol. (1995) Pharm.
Res. 12: 1889 - 1895). Tímto způsobem je roztok obsahující kompozici IL-2 injektován stříkačkou do savců buď přímo do průdušnice (IT), přímo do žíly (IV) nebo nitrožilně (SC) . Krev je potom odebírána v časových intervalech a analyzována na obsah IL-2. Biologická dostupnost je potom odhadnuta jako dávkově normalizovaná plocha pod křivkovým poměrem (area unde the curve - AUC) po IT (nebo SC) proti IV aplikaci (absolutní biologická dostupnost) nebo IT proti SC aplikaci (relativní biologická dostupnost); podrobnosti jsou popsány v příkladech níže.
b
- 2Χ • · ···· · • · · .· · · ♦ ··· · ··· «·· ·♦ ····
IL-2 přítomný ve farmaceutických prostředcích zde popsaných pro použití ve způsobech podle tohoto vynálezu může být nativní nebo může být připraven rekombinantními technikami a může být jakéhokoliv původu včetně savčího, jako je 2 myší, krys, králíků, primátů, prasat a lidí.
Výhodně jsou takové polypeptidy lidského původu a výhodněji jsou rekombinantními lidskými proteiny z mikrobiálních hostitelů.
Farmaceutické prostředky užitečné ve způsobech podle tohoto vynálezu mohou obsahovat biologicky aktivní varianty IL-2. Takové varianty by mohly udržet požadovanou biologickou aktivitu nativního polypeptidu tím způsobem, že farmaceutický prostředek' obsahující variantu polypeptidu má stejný, terapeutický účinek jako farmaceutický prostředek obsahující nativní polypeptid při podávání subjektu. To znamená, že Varianta polypeptidu bude působit jako terapeuticky aktivní složka ve farmaceutickém prostředku podobným způsobem, který je pozorován u nativního polypeptidu. V oboru jsou dostupné způsoby pro stanovení, zdali varianta polypetidu si udržuje požadovanou biologickou aktivitu a tím působí jako terapeuticky účinná složka ve farmaceutickém prostředku. Biologická aktivita může být měřena za použití testů specificky navržených pro měření aktivity nativního polypeptidu nebo proteinu, včetně zkoušek popsaných v tomto vynálezu. Protilátky vytvořené proti biologicky aktivnímu nativnímu polypeptidu mohou být testovány na jejich schopnost vázat se na variantu polypeptidu, přičemž účinná vazba udává, že polypeptid má konformaci, která je podobná nativnímu polypeptidu.
Takovými biologicky aktivními variantami nativního nebo přirozeně se vyskytujícího IL-2 mohou být fragmenty, analogy a deriváty tohoto polypeptidu. Výrazem „fragment1 je myšlen polypeptid skládající se pouze z části neporušené polypeptidové sekvence a struktury a může být C-koncovou
Ί
- 23, • · ♦ · * ·
9··· deléci nebo. N-koncovou delecí nativního polypeptidu.
Výrazem „analog je myšlen analog buď nativního polypeptidu nebo fragment nativního polypeptidu, přičemž analog obsahuje nativní polypeptidovou sekvenci a strukturu mající jednu nebo více aminokyselinových substitucí, inzercí nebo delecí.· „Muteiny jak jsou popsány v textu a peptidy mající jeden nebo více peptidů {látky podobající se peptidům) jsou také zahrnuty výrazem analog (viz mezinárodní přihláška č. WO 91/04282). Výraz „derivát označuje jakoukoli vhodnou modifikaci požadovaného nativního polypeptidu, fragmentu nativního polypeptidu nebo jejich příslušných analogů jako je glykosylace, fosforylace, polymerní konjugace (tak jako s polyethylenglykolem) nebo další adice cizích částí, pokud je udržena požadovaná biologická aktivita nativního polypeptidu. Způsoby přípravy polypeptidových fragmentů, analogů a derivátů jsou obecně známé v oboru.
Například aminokyselinová sekvence variant polypeptidu může být připravena mutacemi v sekvenci klonované DNA kódující požadovaný nativní polypeptid. Způsoby mutageneze změn sekvence nukleotidu jsou dobře známé v oboru. Viz například Walker and Gaastra, eds. (1983) Techniques in Molecular Biology (MacMillan Publishing Company, New York); Kunkel (1985) Proč. Nati. Acad. Sci USA 82: 488 - 492; Kunkel a kol, (1987) Methods Enzymol. 154: 367 - 382; Sambrook a kol. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor, New York); U.S. patentový spis 4 873 192; a zde uvedené odkazy; na které se tímto ' odkazuje. Řízení vhodných aminokyselinových substitucí, které neovlivňují biologickou aktivitu požadovaného polypeptidu, může být nalezeno v modelu Dayhoff a kol. (1978) v Atlas of Protein Sequence and Structure (Nati. Biomed. Res. Found., Washington, D.C.), na které se tímto odkazuje. Výhodné mohou být konzervativní substituce, jako jsou záměny jedné aminokyseliny za další mající podobné
- 2\ • · 9 · » · Φ · φ
Φ ΦΦΦ • · Φ· ΦΦΦΦ vlastnosti. Mezi příklady konzervativních substitucí patří například GlyOAla, Val<=>Ile<=>Leu, Asp<=>Glu, LysoArg, Asn<=>Gln a Phe<=>Trp<t>Tyr.
Při vytváření požadovaných variant polypeptidu IL-2 jsou modifikace prováděny tak, že varianty stále mají požadovanou aktivitu. Zřejmě žádné mutace provedené v DNA dekódování variantního polypeptidu nesmí umístit sekvenci mimo čtecí rámec a výhodně nevytvoří komplementární oblasti, které by mohly vytvořit sekundární strukturu mRNA. Viz zveřejněný patentový spis EP č. 75 444.
Biologicky aktivní varianty IL-2 budou obecně mít alespoň 70 %, výhodně alespoň 80 %, výhodněji asi 90 % až 95 % nebo více a nejvýhodněji asi 98 % nebo více aminokyselinové sekvenční identity ve srovnání s aminokyselinovou sekvencí referenční polypeptidové molekuly, která slouží jako základ pro srovnání. Biologicky aktivní varianta požadovaného nativního polypeptidu se může lišit od nativního polypeptidu například již o 1 - 15 aminokyselin, již o 1 - 10, .již o 6 - 10, již o 5, o 4, 3, nebo dokonce o 1 aminokyselinový zbytek'. Výrazem „sekvenční identita je myšleno, že se stejné aminokyselinové zbytky nacházejí ve variantě polypeptidu a polypeptidové molekule, která slouží jako referenční, když se mezi sebou srovnají specifikovaný segment aminokyselinové sekvence varianty a aminokyselinová sekvence referenční molekuly. Procentní sekvenční identita mezi dvěma aminokyselinovými sekvencemi se vypočte stanovením počtu poloh, ve kterých se identický aminokyselinový zbytek nachází.v obou sekvencích, čímž je získán počet souhlasných poloh, který se dělí celkovým počtem poloh v segmentu podléhajícímu srovnání s referenční molekulou a výsledek se násobí hodnotou 100.
<?
- 2$ • · · 9 99 99
999 99 99 · ·· • · · 9 9 9 9 9
999999 9 · ·· · · • · 9 9 9 9 9 ··· · ··· 999 99 9999
Pro účely optimálního seřazení dvou sekvencí může mít sousední.segment aminokyselinově sekvence variant další aminokyselinové zbytky nebo vynechané aminokyselinové zbytky oproti aminokyselinové sekvenci referenční molekuly. Sousední segment používaný pro srovnání s referenční aminokyselinovou sekvencí bude obsahovat alespoň dvacet (20) sousedních aminokyselinových zbytků a může obsahovat 30, 40, 50, 100 nebo více zbytků. Korekce pro zvýšení sekvenční identity spojené s inkluzí mezer v aminokyselinové sekvencí varianty mohou být prováděny přiřazením „gap penalties. Způsoby sekvenčního řazení jak pro aminokyselinové sekvence, tak i pro nukleotídové sekvence dekódující aminokyselinové sekvence jsou dobře známy v oboru.
Stanovení procentní identity mezi jakýmikoliv sekvencemi může být dosaženo za použití matematického algoritmu. Jedním výhodným neomezujícím příkladem matematického algoritmu používaného pro srovnání sekvencí je algoritmus uvedený v Myers a Miler (1988) CABIOS 4: 11 17. Takový algoritmus je používaný v programu ALTON (verze 2.0), který je částí sekvenčního softwarového paketu GCG. Tabulka hmotnosti zbytků APAM120, gap lengfh penalty 12 a gap penalty 4 mohou být použity s programem ALIGN, který srovnává aminokyselinové sekvence. Dalším výhodným neomezujícím příkladem matematického algoritmu pro použití při srovnání dvou sekvencí je algoritmus autorů Karlin a Altschul (1990) Proč. Nati. Acad. Sci. USA 87: 2264, modifikovaný v publikaci Karlin a Altschul (1993) Proč.
Nati. Acad. Sci. USA 90: 5873 - 5877. Takový algoritmus je začleněn do NBLAST a XBLAST programů autorů Altschul a kol. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403. BLAST nucleotíde searches může být používán s NBLAST programem, skóre = 100, délka slova = 12 pro získání nukleotidových sekvenci homologů k nukleotídové sekvenci kódování požadovaného polypeptidů.
9
- S6 BLAST protein vyhledání může být provedeno s XBLAST programem, skóre = 50, délka slova = 3, pro získání aminokyselinových sekvencí homologů k požadovanému polypeptidu. K získání chybějících uspořádání pro srovnávací účely program Gapped BLAST může být použit jak je uvedeno v publikaci Altschul a kol. (1977) Nucleic Acids Res. 25: 3389. Alternativně PSI-Blast může být použit k opakovávanému vyhledávání, které zjišťuje vzdálené vztahy mezi molekulami. Viz Altschul a kol. (1997) výše. Při použití programů BLAST, Gapped BLAST a PSI-Blast mohou být použity nastavené parametry příslušných programů (například XBLAST a NBLAST). Viz http://www.ncbi.nlm.nih.gov. Viz také ALIGN program (Dayhoff (1978) in Atlas of Protein Sequence and Structure 5: Suppl. 3 (National Biomedical Research Foundation, Washington, D.C.}) a programy ve Wisconsin Sequence Analysis sadě programů, verze 8 (dostupná od Genetics Computer Group, Madison, Wisconsin), například program GAP, kde jsou používány nastavené hodnoty programů.
Při posuzování procentní aminokyselinové sekvenční identity některé aminokyselinové zbytkové polohy se mohou lišit v důsledku konzervativních aminokyselinových substitucí, které neovlivňují vlastnosti proteinových funkčních vlastností. V těchto případech procentní sekvenční identita může být upravena směrem nahoru, aby odpovídala podobnosti u konzervativně substituovaných aminokyselin. Takové úpravy jsou dobře známy v oboru. Viz například Myers and Miller (1988) Computer Applic. Biol. Sci. 4: 11 - 17.
Přesná chemická struktura polypeptidu závisí na mnoha faktorech. Jestliže jsou v molekule přítomny ionizovatelné amino a karboxylové skupiny, pak určitý polypeptid může být obsažen jako kyselá nebo bazická sůl nebo v neutrální formě. Všechny takové přípravky, které si udrží svou' biologickou aktivitu po umístění do vhodného prostředí,
- • · · ·· ···· jsou zahrnuty ve zde uvedené definici. Dále primární aminokyselinová sekvence polypeptidu může být prodloužena derivatizací za použití cukerných částí (glykosylace) nebo dalšími přídavnými molekulami lipidu, fosforečnanu, acetylové skupiny a podobně. Tato sekvence může také být prodloužena konjugací se sacharidy. Určité aspekty takového prodloužení jsou dosaženy v hostitelských produkčních systémech? jiné takové modifikace mohou být provedeny in vitro. Takové modifikace jsou zahrnuty v definici zde používaného polypeptidu pokud jeho aktivita není zničena. Očekává se, že takové modifikace mohou kvantitativně nebo kvalitativně ovlivnit aktivitu, buď zvýšením nebo snížením aktivity polypeptidu v různých zkouškách. Dále jednotlivé aminokyselinové zbytky v řetězci mohou být modifikovány oxidací, redukcí nebo jinou derivatizací a polypeptid může být štěpen za vzniku fragmentů, které si udržují aktivitu. Takové změny, které nezničí aktivitu, nevylučují polypeptídovou sekvenci z definice polypeptidu, jak je použita v tomto textu.
Tento obor poskytuje značné možnosti s ohledem na přípravu a použití polypeptidových variant. Při přípravě variant IL-2 odborník může snadno zjistit, které modifikace nativního proteinového nukleotidu nebo aminokyselinové sekvence budou mít za následek vytvoření varianty, která je vhodná pro použití jako terapeuticky aktivní složka použitého farmaceutického prostředku ve způsobech podle tohoto vynálezu.
IL-2 nebo jeho varianty pro použití ve způsobech a prostředcích podle tohoto vynálezu mohou být z jakéhokoliv zdroje, ale výhodně je IL-2 rekombinantní. Výrazem „rekombinantní IL-2 je myšlen interleukin-2 mající srovnatelnou biologickou aktivitu s nativní sekvencí IL-2 a který byl připraven rekombinantními technikami DNA, jak jsou popsány například v Taniguchi a kol. (1983) Nátuře ·» ·· ·
Ať
- 2\
302; 305 - 310 a Devos (1983) Nucleic Acids Research 11: 4307 - 4323 nebo mutačně změněný IL-2, jak je popsán v Wang a kol. (1984) Science 224; 1431 - 1433. Obecně při genovém klonování je IL-2 klonován a potom exprimován v transformovaných organismech, výhodně mikroorganismu a nejvýhodněji E. coli jak je zde popsáno. Hostitelský organismus za vhodných podmínek exprimuje cizí gen za vzniku interleukinu-2. Syntetický rekombinantní IL-2 může také být připraven v eukaryotech, jako jsou kvasinky a lidské buňky. Postupy pěstování, získávání, rozrušení nebo extrahování IL-2 z buněk jsou v podstatě popsány například v U.S. patentových spisech č. 4 604- 377; 4 738 927;
656 132; 4 569 790; 4 748 234; 4 530 787; 4 572 798;
748 234 a 4 931 543, na které se tímto odkazuje.
Příklady proteinu variant IL-2 jsou uvedeny v Evropském patentu č. 136 489; Evropské patentové přihlášce č. 83101035.0 podané 3. února 1983 (publikované pod č. 91 539); Evropské patentové přihlášce č. 82307036.2, registrované 22. prosince 1982 (publikované 14. září 1983 pod č. 88 195); muteiny rekombinantního IL-2 jsou popsány v Evropské patentové přihlášce č. 83306221.9, podané 13. října 1983 (publikované 30. května 1984 pod č. 109 748), což je ekvivalent Belgického patentového spisu č. 893 016, v U.S. patentovém spise č. 4 518 584; muteiny jsou popsané v U.S. patentových spisech č. 4 752 585 a WO 99/60128; a mutein IL-2 použitý zde v příkladech a popsaný v U.S. patentovém spise 4 931 543, na které se tímto odkazuje.
Dále IL-2 může být modifikován polyethylenglykolem, čímž je dosaženo vyšší rozpustnosti a změněného farmokinetického profilu (viz U.S. patentový spis č. 4 766 106, na který se tímto odkazuje.
Následující příklady ilustrují, ale neomezují tento vynález. - ' • ·
9999
-2^4 ·
• · • 99 9 • 9
9·· 999
99
9 9
9 - 9
9 9
9 9
9999
Příklady provedeni vynálezu
IL-2 je silný mitogen, který stimuluje proliferaci T-buněk, má široké terapeutické použití při léčbě karcinomových metastází jako adjuvans pro léčbu karcinomu a jako konjuktivní činidlo u infekčních onemocnění.. Během různých klinických zkoušek užívajících k léčbě IL-2 bylo zjištěno, že by bylo žádoucí vyvinout neinvazní způsoby podávání.
Bylo hodnoceno několik farmaceutických přípravků obsahujících rekombinantní lidský IL-2 z důvodu jejich potenciální účinnosti při plicním podávání. Mezi testované přípravky patří Proleukin, lyofilizovaný přípravek rhIL-2 v současné době prodávaný firmou Chiron Corp., který byl použít pro léčbu pacientů s metastatickým karcinomem renálních buněk. Tento přípravek je také ve 3. fázi zkoušek léčby pacientů s HIV infekcí. Proleukin obsahuje 0,05 - 2,0 mg/ml rhIL-2, 3 - 7 % mannitolu, 5,0 - 20,0 mM fosforečnanu sodného, asi 130 - 230 pg SDS/ml rhIL-2 při pH 5,5 - 8,0 po rekonstituci vodou pro injekce. V tomto přípravku je IL-2 v mikroagregované formě s průměrnou asociací molekul 10 - 50. Agregace může ovlivnit absorpci v plících.
Také byl testován nově vyvinutý stabilizovaný kapalný přípravek IL-2, jak je popsáno v U.S. přihlášce č. 60/157696. Tento kapalný přípravek IL-2 je označen v těchto studiích jako monomerní rhIL-2. Ve srovnání s přípravkem Proleukin je v tomto kapalném přípravku molekula rhIL-2 ve stabilizované monomerní formě.. Tento přípravek obsahuje 0,03 - 3,0 mg/ml rhIL-2, 150 - 300mM L-arginovou bázi,'
- ISOmM kyselinu jantarovou, 0,5 - 5,0mM dinatrium-EDTA, 1,0 - 10,0mM methionin a 0,05 - 0,2 % polysorbátu 80 {Tween 80) při pH 5,0 - 8,0. Předpokládalo se, že tento stabilizovaný monomerní přípravek IL-2 může být lépe
9* 49 * 9 9
9 9
9 9 9 «99
9999
9
9 9 • 9 9
9999 4
9 <99 9 <9 9 •
<
•
9 absorbovatelný hlubokým plicním povrchem než multimerní přípravek Proleukin. Dále v kompozicí přípravku použité aminokyseliny a polysorbát 80 mohou vyvolat další výhody při plicním podávání jako je zvýšení absorpce IL-2 plicní tkání.
Tyto přípravky IL-2 byly hodnoceny s ohledem na jejich relativní plicní biologickou dostupnost ve srovnání s podkožní injekcí v intratracheálním modelu krys. Krysám rodu Sprague-Dawley byly podávány tyto dva přípravky IL-2 buď intratracheálním vkapáváním (IT) nebo podkožní injekcí (SC) . Při každém podávání byla zvířata nejdříve znecitlivěna isofluranem nebo směsí CO2/O2 a byla udržována v hrudní nebo vzpřímené poloze. Všechny intratracheálně podávané dávky IL-2 byly vkapávány buď katétrem nebo kuličkovou jehlou š jednorázově použitelnou sterilní injekční stříkačkou. Po intratracheálním dávkování byla zvířata ponechána ve vzpřímené poloze přibližně 20 s, aby se dávkovači roztok v plících usadil. Krevní vzorky byly odebírány v předem určených časových úsecích a byl k nim přidáván heparin. Plazma z krevních vzorků byla separována a imuňostanovením byla určena koncentrace IL-2.
Byly prováděny 4 studie pro hodnocení systémové biologické dostupnosti přípravků Proleukin a monomerního IL-2 po intratracheálním, podkožním nebo nitrožilním podávání krysám. Monomerní přípravky se lišily podle toho, zdali v nich byl přítomen polysorbát 80 (Tween 80) a/nebo arginin. Profily koncentrace IL-2 v plazmě z těchto studií jsou zobrazeny v obrázcích 1-4. Farmakokinetické parametry jsou shrnuty v tabulce 1-4. Podíl systémově absorbované dávky byl vypočten pro každý přípravek jako dávkový poměr normalizovaný AUC po IT podávání proti SC podávání (relativní biologická dostupnost) nebo SC (nebo IT) podávání proti IV podávání (absolutní biologická dostupnost). Ve studiích s neodpovídajícím SC podáváním u
- 4 * 9 v · « · » · · • · · -9 · • ····· · ' · • · · ·
4«9 4 ·44 44 · některých monomerních přípravků byla relativní biologická dostupnost vypočtena použitím AUC podkožního podávání podobného monomerního přípravku na základě zkušenosti, že podkožní AUC těchto monomerních přípravků byly podobné.
Tabulka 1.: PK parametry po IT a SC podávání přípravku Proleukin 8 krysám (4/pohlaví)a.
Způsob podávání Průměrná BW (g) Dávka na zvíře (gg) Cmax (ng/ml) Tmax (h) tl/2 (h) AUC (ng-h/ml) R.B. (IT/SC) (%)
IT 319 750 19 2 3,7 80 14
SC 327 150 43 1 1,1 118
a Symboly použité v tabulce: IT - intratracheální podávání, SC ~ podkožní podávání, BW - tělesná hmotnost, Cmax maximálně detekovaná koncentrace plazmového IL-2, ti/2 poločas vymizení, AUC - plocha pod křivkou závislosti plazmového IL-2 na čase, R.B. - relativní biologická dostupnost vypočtená na procentickém základě podílem AUC pro IT vůči AUC pro SC po dávkové normalizaci a násobením výsledného Čísla 100.
Tabulka 2: PK parametry po IT a SC podávání stabilizovaného monomerního přípravku rhIL-2 (s polysorbátem 80) 8 krysám (4/pohlaví )a.
Způsob Průměrná Dávka Cmax Tmax tl/2 AUC ' R.B.
podávání BW na zvíře (0-inf.) (ng-h/ml) (IT/SC)
(g) (pg) (ng/ml) (h) (h) (%)
IT 311 375 202 1,5 0,6 482 146
SC 320 75 ' 26 0,5 1,3 66
a Symboly použité v tabulce: IT - intratracheální podávání, SC - podkožní podávání, BW - tělesná hmotnost, Cmax maximálně detekovaná koncentrace plazmového IL-2, ti/2 poločas vymizení, AUC - plocha pod křivkou závislostí plazmového IL-2 na čase, R.B. - relativní biologická dostupnost vypočtená na procentickém základě podílem AUC pro IT vůči AUC pro SC po dávkové narmalizaci a násobením výsledného čísla 100.
Tabulka 3: PK parametry po IT, SC nebo IV podávání monomerního přípravku rhIL-2 s nebo bez polysorbátu 80 (Tween) 8 krysám (4/pohlaví)a
Způsob podávání Tweenu A.B. (SC/IV) Průměrná BW (g) Dávka na zvíře (pg) Cmax (ng/ml) Tmax (h) AUC (0-inf.) {ng-h/ml) R.B. (IT/SC) (%) {%)
+ IT ~ 320 375 190 0,5 327 905
- IT ~ 320 375 51 0,2 88 24 10
- . sc ~ 320 150 72 0,5 145
— IV ~ 320 150 4238 1532 1532
'γ/ ·· ·· · ·
T *#· ·· φ · « · · — 7>Ό _ · · i ··«··
J5 · · · · · η · · * · · « ' · · · · · · « ··· « ··* ··· φ · ····
Symboly použité v tabulce: IT - intratracheální podávání,
SC - podkožní podávání, BW - tělesná hmotnost,
Cmax - maximálně detekovaná koncentrace plazmového IL-2, ti/2 ~ poločas vymizení, AUC - plocha pod křivkou závislosti plazmového IL-2 na čase, R.B. - relativní biologická dostupnost vypočtená na procentickém základě podílem AUC pro IT vůči AUC pro SC po dávkové normalizaci, A. B. je absolutní biologická dostupnost vypočtena na procentickém základě podílem AUC pro SC vůči AUC pro IV a potom násobením výsledného čísla 100.
b Výpočet relativní biologické dostupnosti monomerního přípravku s polysorbátem 80 používající AUC pro SC monomerního přípravku bez polysorbátů 80.
Tabulka 4: PK parametry po IT, SC nebo IV podávání monomerního přípravku rhIL-2 (s polysorbátem 80 a argininem), monomerního přípravku s polysorbátem 80, a monomerního přípravku s argininem 4 krysím samcům9.
i ťřipravek 7\ n i i· i~r · (SC/IV) způsob ~ ^3 < VK < X Frům. ην.τ (g) Dávka na zvíře (pg) Cmax (ng/ml) rmax (h) AUC ffU-fm-F \ \ ·-' ·*-·*.*->- · ; (ng- h/ml) R.B. (IT/SC) (%) í%)
Monomerní* IT -400 400 441 0,5 697 185
Monomerní SC -400 -200 156 0,5 188 . 15
Monomerní IV -400 ' -200 14068 0 1250
Bez Tweenu 80c IT -400 400 176 0,17 . 298
Bez - argininu IT -400 400 637 0,17 530 141d
a Symboly použité v tabulce: IT - intratracheální podávání, SC - podkožní podávání, BW - tělesná hmotnost,
I
- 3K «0 0
Cmax - maximálně detekovaná koncentrace plazmového IL-2, ti/2 - poločas vymizení, AUC - plocha pod křivkou závislosti plazmového IL-2 na čase, R.S. - relativní biologická dostupnost vypočtená na procentickém základě podílem AUC pro IT vůči AUC pro SC po dávkové normalizaci, Ά.Β. je absolutní biologická dostupnost vypočtena na procentickém základě podílem AUC pro SC vůči AUC pro IV a potom násobením výsledného čísla 100.
b Přípravek obsahující 0,1% polysorbát 80 a 230mM arginin. c Přípravek obsahující 230mM arginin.
d Výpočet relativní biologické dostupnosti monomerních přípravků bez polysorbátu 80 a bez argininu používající AUC pro SC monomerního přípravku.
e Přípravek obsahující 0,1% polysorbát 80.
Výše uvedené údaje týkající se systémové absorpce IL-2 u těchto způsobů podávání mohou být shrnuty následovně. Relativní biologická dostupnost Proleukinu po IT podávání ve srovnání s SC podáváním byla 14 % (tabulka 1). Monomerní IL-2 obsahující polysorbát 80 byl absorbován významně lépe než Proleukin po IT podávání. Absolutní biologická dostupnost SC oproti IV byla 15 % (tabulka 4), zatímco relativní biologická dostupnost IT k SC byla průměrně 140 % (tabulka-2,3,4), z čehož vyplývá, že IT dávkování bylo absorbováno stejně dobře nebo lépe než SC podávání. Monomerní IL-2 obsahující polysorbát 80 bez argininu- byl absorbován asi stejně dobře jako monomerní IL-2 obsahující jak polysorbát 80, tak i arginin (tabulka 4). Monomerní IL-2 bez polysorbátu byl absorbován lépe než Proleukin, ale ne tak dobře jako monomerní IL-2 obsahující polysorbát 80. Absolutní biologická dostupnost byla 10 % (tabulka 3) a relativní biologická dostupnost byla 52 % (tabulka 3 a 4).
Pátá studie dále zkoumala účinky nižších koncentrací polysorbátu 80 (Tween 80) a dalších tenzidů (0,1%
- 3$ 9 9 ·
« · * • 9 ů ·' 9 999 ·
9 ·»· 9
Poloxameru 188 (prodávaného pod obchodním názvem Pluronic F68 firmou BASF), a PEG4600 (polyethylenglykolu majícího průměrnou relativní hmotnost 4600 zakoupeného od firmy Aldrich) na biologickou dostupnost intratracheálně (IT) podávaného Proleukinu a monomerního rhIL-2.
V páté studii, jako v dřívějších studiích, byli krysí samci rodu.Sprague-Dawley rozdělení do skupin po 4. Každé kryse byla podána jednotlivá 4 00pg dávka rhIL-2. IT podáváni bylo prováděno stejnou procedurou, jak je popsáno výše pro další 4 studie. Krevní vzorky všech krys byly odebírány v předem určených časových intervalech a byl k nim přidáván heparin. Plazma z krevních vzorků byla separována a koncentrace IL-2 byla určena imunostanovením.
Monomerní přípravky se lišily podle typu nebo množství použitého tenzidu a 230 mM arginin byl přítomen ve všech testovaných monomerních přípravcích. Přípravky Proleukinu se lišily podle toho, zdali v nich byl přítomen polysorbát 80 (Tween 80) o koncentraci 0,1 %. V přípravcích Proleukinu nebyl přítomen žádný arginin.
Profily plazmové koncentrace IL-2 z těchto studií jsou ukázány na obrázku 5. Plocha pod křivkou závislosti plazmové koncentrace ná čase pro IT podávání (AUC) pro každý přípravek je ukázána v tabulce 5. Relativní biologická dostupnost Proleukinových a monomerních přípravků byla vypočtena na procentickém základě za použití AUC určitého přípravku ve srovnání s AUC monomerního přípravku s 0,1% polysorbátem 80(Tween 80), který byl použit jako referenční přípravek, a je ukázána v tabulce 5.
« r • · « * » * • · · · · • · • 4 · *
4 • ·
444 4 4
Tabulka 5: Srovnání intratracheální biologické dostupnosti přípravků při dávce 400 pg rhIL-2/zvíře.
pnpravex AUC ing-n/nLM Relativní biologická dostupnost {% vůči mononiprnimn TT)
Monomerní (0,1 % Tween 80)* 664 100
Monomerní (0,03 % Tween 80) 503 76
Monomerní' (0,01 % Tween 80) 637 yb
Monomerní (0,001 % Tween 80) 668 101
Monomerní (0,1 % Poloxamer 188) 724 109 '
Monomerní (0,1 % PEG 4600) 596 90
Proleukin (bez Tweenu 80) 28,4 4
Proleukin (0,1 % Tween 80) 86,2 13
* Referenční přípravek pro výpočet relativní biologické dostupnosti.
Výše uvedené údaje ukazují, že přítomnost polysorbátu 80 možná hrála úlohu v systémové absorpci intratracheálně podávaného Proleukinu. Tyto údaje také naznačují, že biologická dostupnost byla podobná u monomerních přípravků IL-2 s Poloxamerem 188, PEG 4600, 0,1% polysorbátem 80 a 0,001% polysorbátem 80. Biologická dostupnost monomerního přípravku obsahujícího 0,1 % polysorbátu 80 a arginin byla vyšší ve srovnání s přípravkem Proleukinu obsahujícího 0,1 % polysorbátu 80.
Všechny publikace a patentové přihlášky v tomto popisu ukazují odborníkovi v oboru stav techniky, .který se týká tohoto vynálezu. Na všechny publikace a patentové přihlášky, na které se zde odkazuje, jsou zde zahrnuty v rozsahu, jako by se zde byla každá individuální publikace a patentová přihláška uvedena.
Ačkoliv tento vynález byl popsán do některých detailů prostřednictvím objasnění a příkladů je zřejmé, že v rámci • · * » w · · • · · ·« 4« · * · • · · » · · » 9 ·····>· « * ·-' · · · • · V · · · · ♦·· · «·· ··· 19 1111 rozsahu připojených nároků lze provádět určité změny a modifikace.

Claims (50)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Použití interleukinu-2 (IL-2) nebo jeho varianty pro výrobu léčiva pro podávání IL-2 subjektu, který to potřebuje, způsobem, který zahrnuje
    a) získání farmaceutického prostředku obsahujícího stabilizovaný monomerní IL-2 nebo jeho varianty;
    b) výrobu tohoto prostředku jako vodného nebo nevodného roztoku, vodné nebo nevodné suspenze nebo jako suché práškové formy; a
    c) podání tohoto roztoku, suspenze nebo suché práškové formy tohoto prostředku uvedenému subjektu prostřednictvím plicní inhalace.
  2. 2. Použití podle nároku 1, kde uvedený prostředek je v kapalné formě.
  3. 3. Použití podle nároku 1, kde uvedený prostředek je v suché formě, přičemž tato suchá forma je vybrána ze souboru sestávajícího z lyofilízované formy a sprejově sušené formy.
  4. 4. Použití podle nároku 1, kde uvedený roztok nebo suspenze jsou podávány z rozprašovače nebo dávkovacího inhalátoru.
  5. 5. Použití podle nároku 1, kde uvedená suchá prášková forma je podávána z dávkovacího inhalátoru nebo inhalátoru suchého prášku.
    -3^• · ·· ····
  6. 6. Použití podle nároku 5, kde uvedená suchá prášková forma je složena z částic.majících střední průměr menší než 10 pm.
  7. 7. Použití podle nároku 6, kde uvedené částice mají střední průměr v rozsahu od 1 do 5 pm.
  8. 8. Použití podle nároku 1, kde uvedeným prostředkem je vysoce absorbovatelný prostředek dále obsahující alespoň jednu povrchové aktivní látku v množství dostatečném pro zvýšení absorpce prostředku po plicní inhalaci tohoto prostředku.
  9. 9. Použití podle nároku 8, kde uvedená povrchově aktivní látka je vybrána ze souboru sestávajícího z polysorbátu 20 a polysorbátu 80.
  10. 10. Použití podle nároku 9, kde uvedenou povrchově aktivní látkou je polysorbát 80.
  11. 11. Použití interleukinu-2 (IL-2) pro výrobu léčiva pro podávání IL-2 subjektu, který to potřebuje, způsobem, který zahrnuje
    a) získání vysoce absorbovatelného farmaceutického prostředku obsahujícího monomerní IL-2 nebo jeho varianty, přičemž tento prostředek obsahuje alespoň jednu povrchově aktivní látku v množství dostatečném pro zvýšení absorpce tohoto prostředku po plicní inhalaci tohoto prostředku;
    b) výrobu tohoto prostředku jako vodného nebo nevodného roztoku, vodné nebo nevodné suspenze nebo jako suché práškové formy; a • ·· ·
    c) podání tohoto roztoku, suspenze nebo suché práškové formy tohoto prostředku uvedenému subjektu prostřednictvím plicní inhalace.
  12. 12. Použití podle nároku 11, kde uvedený prostředek je v kapalné formě.
  13. 13. Použití podle nároku 11, kde uvedený prostředek je v suché formě, přičemž tato suchá forma je vybrána ze souboru sestávajícího z lyofilizované formy a sprejově sušené formy.
  14. 14. Použití podle nároku 11, kde uvedený roztok nebo suspenze jsou podávány z rozprašovače nebo dávkovacího inhalátoru.
  15. 15. Použití podle nároku 11, kde uvedená suchá prášková forma je podávána z dávkovacího inhalátoru nebo inhalátoru suchého prášku.
  16. 16. Použití podle nároku 15, kde uvedená suchá prášková forma je složena z částic majících střední průměr menší než 10 pm.
  17. 17. Použití podle nároku 16, kde uvedené částice mají střední průměr v rozsahu od 1 do 5 pm.
  18. 18. Použití podle nároku 11, kde uvedená povrchově aktivní látka je vybrána ze souboru sestávajícího z polysorbátu 20 a polysorbátu 80.
  19. 19. Použití podle nároku 18, kde uvedenou povrchově aktivní látkou je polysorbát 80.
    r
    - 4Í • · · · • · · ·* ···· ·· ·*·· • · · · · • · · · · • · ♦ · · « • · · · · · • · · · · ·
  20. 20. Použití interleukinu-2 (IL-2) pro výrobu léčiva pro podávání IL-2 subjektu, který to potřebuje, způsobem, který zahrnuje
    a) získání farmaceutického prostředku obsahujícího multimerní IL-2 nebo jeho varianty;
    b) výrobu uvedeného prostředku jako vodného nebo nevodného roztoku, vodné nebo nevodné suspenze nebo jako suché práškové formy; a
    c) podání uvedeného roztoku, suspenze nebo suché práškové formy tohoto prostředku subjektu prostřednictvím plicní inhalace.
  21. 21. Použití podle nároku 20, kde uvedený prostředek je v kapalné formě.
  22. 22. Použití podle nároku 20, kde uvedený prostředek je v suché formě, přičemž uvedená suchá forma je vybrána ze souboru sestávajícího z lyofilizované formy a sprejově sušené formy.
  23. 23. Použití podle nároku 20, kde uvedený roztok nebo suspenze jsou podávány z dávkovacího inhalátoru.
  24. 24. Použití podle nároku 20, kde uvedená suchá prášková forma je podávána z dávkovacího inhalátoru nebo inhalátoru suchého prášku.
  25. 25. Použití podle nároku 24, kde uvedená suchá prášková forma je složena z částic majících střední průměr menší než 10 pm.
  26. 26. Použití podle nároku 25, kde uvedené částice mají střední průměr v rozsahu od 1 do 5 pm.
    ί>
    - 42\ - ·· • «·
  27. 27. Použití podle nároku 20, kde uvedený prostředek je vysoce absorbovatelný prostředek obsahující dále alespoň jednu povrchově aktivní látku v množství dostatečném pro zvýšení absorpce tohoto prostředku po plicní inhalaci uvedeného prostředku.
  28. 28. Použití podle nároku 27, kde uvedená povrchově aktivní látka je vybrána ze souboru skládajícího se z polysorbátu 20 a polysorbátu 80.
  29. 29. Použití podle nároku 28, kde uvedenou povrchově aktivní látkou je polysorbát 80.
  30. 30. Použití interleukinu-2 (IL-2) pro výrobu léčiva pro podávání IL-2 subjektu, který to potřebuje, způsobem, který zahrnuje
    a) získání farmaceutického prostředku obsahujícího stabilizovaný lyofilizovaný nebo sprejově sušený IL-2 nebo jeho varianty;
    b) výrobu tohoto prostředku jako vodného nebo nevodného roztoku, vodné nebo nevodné suspenze nebo jako suché práškové formy; a
    c) podávání tohoto roztoku, suspenze nebo suché práškové formy tohoto prostředku subjektu prostřednictvím plicní inhalace.
  31. 31. Použití podle nároku 30, kde uvedený roztok nebo suspenze jsou podávány z rozprašovače nebo z dávkovacího inhalátoru.
    - Μ• 4
  32. 32. Použití podle nároku 30, kde uvedená suchá prášková forma je podávána z dávkovacího inhalátoru nebo inhalátoru suchého prášku.
  33. 33. Použití podle nároku 32, kde uvedená suchá prášková forma je složena z částic majících střední průměr menší než 10 pm.
  34. 34. Použití podle nároku 33, kde uvedené částice mají střední průměr v rozsahu od 1 do 5 pm.
  35. 35. Použití podle nároku 30, kde uvedený prostředek je vysoce absorbovatelný prostředek obsahující dále alespoň jednu povrchově aktivní látku v množství dostatečném pro zvýšení absorpce tohoto prostředku po plicní inhalaci uvedeného prostředku.
  36. 36. Použití podle nároku 35, kde uvedená povrchově aktivní látka je vybrána ze souboru sestávajícího z polysorbátu 20 a polysorbátu 80.
  37. 37. Použití podle nároku 36, kde uvedenou povrchově aktivní látkou je polysorbát 80.
  38. 38. Použití interleukinu-2 (IL-2) pro výrobu léčiva pro zvýšení biologické dostupnosti IL-2 podávaného subjektu prostřednictvím plicní inhalace, způsobem, který zahrnuje podávání farmaceutického prostředku obsahujícího stabilizovaný monomerní IL-2 nebo jeho varianty uvedenému subjektu prostřednictvím plicní inhalace.
  39. 39. Použití podle nároku 38, kde uvedený prostředek dále obsahuje alespoň jednu povrchově aktivní látku v množství ·* 44··
    -4^dostatečném pro zvýšení absorpce tohoto prostředku po plicní inhalaci uvedeného prostředku.
  40. 40. Použití interleukinu-2 (IL-2) pro výrobu léčiva pro zvýšení biologické dostupnosti IL-2 podávaného subjektu prostřednictvím plicní inhalace, způsobem, který zahrnuje podávání vysoce absorbovatelného farmaceutického prostředku obsahujícího monomerní IL-2 nebo jeho varianty uvedenému subjektu prostřednictvím plicní inhalace, přičemž tento prostředek obsahuje alespoň jednu povrchově aktivní látku v množství dostatečném pro zvýšení absorpce tohoto prostředku po plicní inhalaci uvedeného prostředku.
  41. 41. Použití interleukinu-2 (IL-2) pro výrobu léčiva pro zvýšení biologické dostupnosti IL-2 podávaného subjektu prostřednictvím plicní inhalace, způsobem, který zahrnuje podávání farmaceutického prostředku obsahujícího multimerní IL-2 nebo jeho varianty subjektu prostřednictvím plicní inhalace, přičemž tento prostředek obsahuje alespoň jednu povrchově aktivní látku v množství dostatečném pro zvýšení absorpce tohoto prostředku po plicní inhalaci uvedeného prostředku.
  42. 42. Použití interleukinu-2 (IL-2) pro výrobu léčiva pro zvýšení biologické dostupnosti IL-2 podávaného subjektu prostřednictvím plicní inhalace, způsobem, který zahrnuje podávání farmaceutického prostředku obsahujícího stabilizovaný lyofilizovaný nebo sprejově sušený IL-2 nebo jeho varianty subjektu prostřednictvím plicní inhalace, přičemž tento prostředek obsahuje alespoň jednu povrchově aktivní látku v množství dostatečném pro zvýšení absorpce tohoto prostředku po plicní inhalaci uvedeného prostředku.
    fc • · β· fcfcfcfc • ·
  43. 43. Stabilizovaný lyofilizovaný nebo sprejově sušený farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje:
    interleukin-2 (IL-2) jako terapeuticky účinnou složku;
    alespoň jedno činidlo na zvětšení objemu přítomné v množství od asi 0 % do asi 5 %;
    alespoň jeden cukr vybraný ze souboru sestávajícího ze sacharosy, trehalosy, rafinosy, stachyosy, sorbitolu nebo alespoň jedné aminokyseliny vybrané ze souboru sestávajícího z argininu a lysinu, kde tento cukr je přítomen v množství od asi 0 % do asi 9 %, a kde tato aminokyselina je přítomna v množství od asi 0 % do asi 1 %; a pufrovací činidlo pro udržení tohoto prostředku při pH v rozsahu od asi 4,0 do asi 8,5, když je tento prostředek rekonstituován jako kapalina.
  44. 44. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje interleukin-2 (IL-2) nebo jeho varianty jako terapeutické činidlo, přičemž tento prostředek obsahuje alespoň jednu povrchově aktivní látku v množství dostatečném pro zvýšení absorpce tohoto prostředku po plicní inhalaci uvedeného prostředku.
  45. 45. Prostředek podle nároku 44, vyznačující se tím, že uvedená povrchově aktivní látka je vybrána ze souboru sestávajícího z polysorbátu 20 a polysorbátu 80.
  46. 46. Použití interleukinu-2 (IL-2) pro výrobu léčiva pro podávání interleukinu-2 (IL-2) nebo jeho varianty subjektu, který to potřebuje, způsobem, který zahrnuje podávání prostředku podle nároku 44 prostřednictvím plicní inhalace.
  47. 47. Použití podle nároku 46, kde uvedený prostředek je podáván z rozprašovače nebo dávkovacího inhalátoru.
  48. 48. Použití podle nároku 46, kde uvedený prostředek je podáván z dávkovacího inhalátoru nebo inhalátoru suchého prášku.
  49. 49. Použití podle nároku 48, kde uvedený prostředek je v suché práškové formě skládající se z částic majících střední průměr menší než 10 pm.
  50. 50. Použití podle nároku 49, kde uvedené částice máji střední průměr v rozsahu od 1 do 5 pm.
CZ20022265A 1999-12-30 2000-12-27 Léčivo pro podávání interleukinu-2 a stabilizovaný lyofilizovaný nebo sprejově sušený farmaceutický prostředek s obsahem interleukinu-2 CZ20022265A3 (cs)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US17392299P 1999-12-30 1999-12-30
US72481000A 2000-11-28 2000-11-28

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ20022265A3 true CZ20022265A3 (cs) 2004-01-14

Family

ID=26869690

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20022265A CZ20022265A3 (cs) 1999-12-30 2000-12-27 Léčivo pro podávání interleukinu-2 a stabilizovaný lyofilizovaný nebo sprejově sušený farmaceutický prostředek s obsahem interleukinu-2

Country Status (15)

Country Link
US (2) US20030198602A1 (cs)
EP (1) EP1244432A2 (cs)
JP (1) JP2003519175A (cs)
CN (1) CN100333790C (cs)
AU (1) AU783795B2 (cs)
BR (1) BR0016879A (cs)
CA (1) CA2395887A1 (cs)
CZ (1) CZ20022265A3 (cs)
HU (1) HUP0204136A3 (cs)
IL (2) IL150461A0 (cs)
NO (1) NO20023123L (cs)
NZ (1) NZ520379A (cs)
PL (1) PL356641A1 (cs)
SK (1) SK11142002A3 (cs)
WO (1) WO2001049274A2 (cs)

Families Citing this family (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030113271A1 (en) * 1997-01-29 2003-06-19 University Technology Corporation Formulations for pulmonary delivery
US20060171899A1 (en) * 1998-12-10 2006-08-03 Akwete Adjei Water-stabilized aerosol formulation system and method of making
US9006175B2 (en) 1999-06-29 2015-04-14 Mannkind Corporation Potentiation of glucose elimination
CA2396796C (en) * 2000-01-25 2011-06-21 Aeropharm Technology, Inc. Stabilized medicinal aerosol particulate formulations
JP4147234B2 (ja) 2004-09-27 2008-09-10 キヤノン株式会社 吐出用液体、吐出方法、カートリッジ及び吐出装置
US20050013867A1 (en) * 2001-10-19 2005-01-20 Lehrman S. Russ Use of proton sequestering agents in drug formulations
WO2003080149A2 (en) 2002-03-20 2003-10-02 Mannkind Corporation Inhalation apparatus
JP5057648B2 (ja) * 2002-09-26 2012-10-24 塩野義製薬株式会社 安定化されたタンパク組成物
EP1803445A3 (en) * 2003-01-08 2007-11-21 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Stabilized lyophilized compositions comprising tissue factor pathway inhibitor or tissue factor pathway inhibitor variants
JP2008500942A (ja) * 2003-01-08 2008-01-17 カイロン コーポレイション 組織因子経路インヒビターまたは組織因子経路インヒビター改変体を含有する安定化凍結乾燥組成物
JP5078014B2 (ja) 2004-08-20 2012-11-21 マンカインド コーポレイション ジケトピペラジン合成の触媒反応
MX2007002189A (es) 2004-08-23 2008-01-11 Mannkind Corp Sales de dicetopiperazina, sales de dicetomorfolina o sales de dicetodioxano para suministro de farmacos.
JP4147235B2 (ja) 2004-09-27 2008-09-10 キヤノン株式会社 吐出用液体、吐出方法、液滴化方法、液体吐出カートリッジ及び吐出装置
WO2006130943A1 (en) * 2005-06-10 2006-12-14 The Governors Of The University Of Alberta Respirable dried powder formulation comprising drug loaded nanoparticles
US7803404B2 (en) 2005-09-14 2010-09-28 Mannkind Corporation Method of drug formulation based on increasing the affinity of active agents for crystalline microparticle surfaces
TWI299993B (en) * 2005-12-15 2008-08-21 Dev Center Biotechnology Aqueous inhalation pharmaceutical composition
IN2015DN00888A (cs) 2006-02-22 2015-07-10 Mannkind Corp
CN101125199B (zh) * 2006-08-15 2010-07-21 北京四环生物制药有限公司 白介素2作为制备治疗鼻炎药物的应用
US8485180B2 (en) 2008-06-13 2013-07-16 Mannkind Corporation Dry powder drug delivery system
KR101933816B1 (ko) 2008-06-13 2019-03-29 맨카인드 코포레이션 건조 분말 흡입기 및 약물 투여 시스템
WO2009155581A1 (en) 2008-06-20 2009-12-23 Mannkind Corporation An interactive apparatus and method for real-time profiling of inhalation efforts
TWI494123B (zh) 2008-08-11 2015-08-01 Mannkind Corp 超快起作用胰島素之用途
US8314106B2 (en) 2008-12-29 2012-11-20 Mannkind Corporation Substituted diketopiperazine analogs for use as drug delivery agents
PL2405963T3 (pl) 2009-03-11 2014-04-30 Mannkind Corp Urządzenie, układ i sposób pomiaru oporu inhalatora
BRPI1013154B1 (pt) 2009-06-12 2020-04-07 Mannkind Corp Micropartículas de dicetopiperazina com áreas de superfície específicas definidas, pó seco compreendendo as referidas micropartículas, método para formação das referidasmicropartículas e formação de micropartículas de fumaril diacetopiperazina, uso das referidas micropartículas e sistema de inalação
CA2778698A1 (en) 2009-11-03 2011-05-12 Mannkind Corporation An apparatus and method for simulating inhalation efforts
MX359281B (es) 2010-06-21 2018-09-21 Mannkind Corp Sistema y metodos para suministrar un farmaco en polvo seco.
MX353285B (es) 2011-04-01 2018-01-05 Mannkind Corp Paquete de blister para cartuchos farmaceuticos.
WO2012174472A1 (en) 2011-06-17 2012-12-20 Mannkind Corporation High capacity diketopiperazine microparticles
EP2550863A1 (de) * 2011-07-27 2013-01-30 Bayer Intellectual Property GmbH Aktivstoffhaltige Partikel auf Polyacrylat-Basis
IN2014DN03093A (cs) 2011-10-24 2015-05-15 Mannkind Corp
SG10201605800UA (en) 2012-07-12 2016-09-29 Mannkind Corp Dry powder drug delivery system and methods
WO2014066856A1 (en) 2012-10-26 2014-05-01 Mannkind Corporation Inhalable influenza vaccine compositions and methods
KR102499439B1 (ko) 2013-03-15 2023-02-13 맨카인드 코포레이션 미세결정성 디케토피페라진 조성물 및 방법
CA2918369C (en) 2013-07-18 2021-06-29 Mannkind Corporation Heat-stable dry powder pharmaceutical compositions and methods
WO2015021064A1 (en) 2013-08-05 2015-02-12 Mannkind Corporation Insufflation apparatus and methods
US10307464B2 (en) 2014-03-28 2019-06-04 Mannkind Corporation Use of ultrarapid acting insulin
US10561806B2 (en) 2014-10-02 2020-02-18 Mannkind Corporation Mouthpiece cover for an inhaler
US11224594B2 (en) 2015-09-16 2022-01-18 Philip Morris Products S.A. Nicotine formulations and methods of making and using the same
US9585835B1 (en) * 2015-09-16 2017-03-07 Sansa Corporation (Barbados) Inc. Inhalable nicotine formulations and methods of making and using the same
JP7038655B2 (ja) * 2015-10-22 2022-03-18 イルトゥー・ファルマ Ｉｌ－２医薬組成物
UA124535C2 (uk) * 2016-06-30 2021-10-05 Філіп Морріс Продактс С.А. Нікотиновмісні частинки та композиції
AU2017350817B2 (en) * 2016-10-25 2022-07-21 Marquette University Storage media and powder formulations for avulsed teeth and explanted tissues comprising fibroblasts
WO2022100686A1 (zh) * 2020-11-13 2022-05-19 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种包含人白细胞介素2变体或其衍生物的药物组合物及其用途

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4604377A (en) * 1984-03-28 1986-08-05 Cetus Corporation Pharmaceutical compositions of microbially produced interleukin-2
US5037644A (en) * 1986-10-27 1991-08-06 Cetus Corporation Pharmaceutical compositions of recombinant interleukin-2 and formulation processes
US4927850A (en) * 1988-04-08 1990-05-22 Bayless Robert K Antioxidant compositions and methods for ameliorating inflammatory symptoms of respiratory disease
US5078997A (en) * 1988-07-13 1992-01-07 Cetus Corporation Pharmaceutical composition for interleukin-2 containing physiologically compatible stabilizers
US5780012A (en) * 1990-06-21 1998-07-14 Huland; Edith Method for reducing lung afflictions by inhalation of cytokine solutions
DK0462305T3 (da) * 1990-06-21 1995-04-24 Huland Edith Anvendelse af cytokinholdige aerosoler såvel som cytokholdige aerosoler i sig selv
CA2082951C (en) * 1991-03-15 1999-12-21 Robert M. Platz Pulmonary administration of granulocyte colony stimulating factor
US5354934A (en) * 1993-02-04 1994-10-11 Amgen Inc. Pulmonary administration of erythropoietin
JPH09501418A (ja) * 1993-07-19 1997-02-10 アムジエン・インコーポレーテツド エアゾル化タンパク質の安定化
WO1995024183A1 (en) * 1994-03-07 1995-09-14 Inhale Therapeutic Systems Methods and compositions for pulmonary delivery of insulin
US5985309A (en) * 1996-05-24 1999-11-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
US5874064A (en) * 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
US5855913A (en) * 1997-01-16 1999-01-05 Massachusetts Instite Of Technology Particles incorporating surfactants for pulmonary drug delivery
HU0800692D0 (en) * 1999-10-04 2009-01-28 Novartis Vaccines & Diagnostic Stabilized liquid polypeptide-containing pharmaceutical compositions

Also Published As

Publication number Publication date
JP2003519175A (ja) 2003-06-17
HUP0204136A3 (en) 2005-09-28
NZ520379A (en) 2004-05-28
US20030198602A1 (en) 2003-10-23
AU2603701A (en) 2001-07-16
IL150461A (en) 2008-11-26
NO20023123L (no) 2002-08-07
CA2395887A1 (en) 2001-07-12
WO2001049274A3 (en) 2002-02-14
IL150461A0 (en) 2002-12-01
SK11142002A3 (sk) 2004-09-08
AU783795B2 (en) 2005-12-08
PL356641A1 (en) 2004-06-28
CN100333790C (zh) 2007-08-29
CN1437466A (zh) 2003-08-20
HUP0204136A2 (hu) 2003-03-28
EP1244432A2 (en) 2002-10-02
NO20023123D0 (no) 2002-06-27
WO2001049274A2 (en) 2001-07-12
BR0016879A (pt) 2002-12-03
US20080003294A1 (en) 2008-01-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU783795B2 (en) Methods for pulmonary delivery of interleukin-2
JP4338214B2 (ja) エリトロポエチンの肺投与
US6565841B1 (en) Pulmonary administration of granulocyte colony stimulating factor
US7300919B2 (en) Pulmonary delivery of active fragments of parathyroid hormone
Bosquillon et al. Pulmonary delivery of growth hormone using dry powders and visualization of its local fate in rats
EP0505123B1 (en) Pulmonary administration of granulocyte colony stimulating factor
JP2005068158A (ja) 安定化された液体のポリペプチド含有薬学的組成物
CZ260096A3 (en) Administration methods and preparations for lung administration of insulin
CN1984674A (zh) 不含蛋白质或多肽类稳定剂的干扰素β鼻内制剂
US6610272B1 (en) Medicinal aerosol formulation
Siekmeier et al. Treatment of systemic diseases by inhalation of biomolecule aerosols
KR20060034216A (ko) 응고 인자의 흡입에 의한 혈우병 치료
JP2007161702A (ja) 水性吸入用医薬組成物
AU2006200923A1 (en) Methods for pulmonary delivery of interleukin-2
EA026073B1 (ru) Состав бычьего гранулоцитарного колониестимулирующего фактора и способ лечения с его использованием
CN1853725A (zh) 白细胞介素－2经肺部的输递方法
KR20220154214A (ko) 흡입용 gm-csf의 액상 제제