CZ20021983A3

CZ20021983A3 - Nové aminopropylfosfinové kyseliny

Info

Publication number: CZ20021983A3
Application number: CZ20021983A
Authority: CZ
Inventors: Thomas Elebring; Peter Guzzo; ANDERS HOLMéN; Thomas Olsson; Marianne Swanson; Unge Sverker Von
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 1999-12-09
Filing date: 2000-12-04
Publication date: 2002-11-13
Also published as: KR100689144B1; HK1048321B; JP2006306885A; PL201789B1; RU2002113909A; US20020156053A1; PL364795A1; EE05067B1; IL149840A0; DK1240172T3; JP2003516407A; MXPA02005536A; HUP0300301A3; IS2231B; HK1048321A1; US7807658B2; US20080146836A1; AU780459B2; JP3914435B2; EE200200286A

Description

Nové aminopropylfosfinové kyseliny

Oblast techniky

Tento vynález se týká nových sloučenin majících afinitu k jednomu nebo více GABA_b receptorům, stejně jako > jejich farmaceuticky přijatelných solí, solvátů a stereoizomerů. Vynález se také týká způsobů jejich výroby, ’ farmaceutických kompozic obsahujících uvedené terapeuticky aktivní sloučeniny a také použití uvedených aktivních sloučenin při terapii.

Dosavadní stav techniky

Reflux

Gastroezofageální reflux (Gastro-oesophageal reflux disease - GORD) je nejčastější choroba horní části gastrointestinálního traktu. Stávající terapie je zaměřena na snížení sekrece žaludeční kyseliny nebo na snížení expozice ezofageální kyselinou zvýšením ezofageální clearance, tonus spodního ezofageálního (jícnového) svěrače a na gastrické vyprazdňování. Dříve se prosazoval názor, že hlavní mechanismus, který stojí za refluxem, je závislý na hypotonickém spodním ezofageálním svěrací. Avšak pozdější výzkumy (např. Halloway & Dent (1999) Gastroenterol. Clin. N. Amer. 19, 517 - 535) ukázaly, že většina refluxových epizod se vyskytuje během krátkodobých relaxací spodního ezofageálního svěrače, dále označovaných jako TLOSR, tj . relaxací nevyvolaných polknutím. Ukázalo se také, že sekrece gastrické kyseliny je obvykle normální u pacientů s GORD.

Existuje tudíž potřeba sloučenin, které snižují výskyt TLOSR a tím předcházejí refluxu.

Farmaceutické kompozice obsahující lokální anestetika přizpůsobené k zamezení relaxace spodního ezofageálního svěrače je popsána ve WO 87/04077 a US 5 036 057. Nověji se ukázalo, že agonisté GABA_B-receptoru inhibují TLOSR, jak je popsáno ve WO 98/11885.

Agonisté GABA_b receptoru

GABA (kyselina 4-aminobutanová) je endogenní neuropřenašeč v centrálním a periferním nervovém systému. Receptory GABA se tradičně rozdělují do receptorových subtypů GABA_a a GABA_b. GABA_b receptory patří do nadskupiny receptorů vázajících G-protein. Agonisté GABA_b receptoru se popisují jako užiteční při léčení chorob CNS, jako je svalová relaxace u spinální spasticita, kardiovaskulárních chorob, astmatu, chorob pohybu střev, jako je dráždivý střední syndrom (IBS - irritable bowel synrome) a jako prokinetická a antitusivní činidla. Bylo objeveno, ze agonisté GABA_b receptoru jsou užiteční při léčení zvracení (WO 96/11680) a nověji, jak bylo uvedeno výše, u inhibice TLOSR (WO 98/11885) .

Nejvíce studovaným agonistou GABA_b receptoru je baclofen (kyselina 4-amino-3-(chlorfenyl)butanová) popsaná ve švýcarském patentu č. CH 449 046. Baclofen byl po několik let používán jako antispastické činidlo. EP 0356128 popisuje použití specifické sloučeniny kyseliny (3aminopropyl)methylfosfinové jako silného agonisty GABA_breceptoru v terapii. EP 0181833 popisuje substituované 3aminopropylfosfinové kyseliny, u kterých bylo zjištěno, že mají vysokou aktivitu k místům GABA_b receptorů. Analogicky jako u baclofenu mohou být tyto sloučeniny použity jako například muskulární relaxanty. EP 0399949 popisuje • ····· ·· ··· · · • * ···· ··· ··· · · · · · · ·· ···· deriváty kyseliny (3-aminopropyl)methylfosfinové, které jsou popsány jako silné agonisty GABA_b receptoru. Tyto sloučeniny jsou uváděny jako užitečné jako muskulární relaxanty. EP 0443969 a FR 2722192 jsou přihlášky týkající se derivátů kyseliny 4-aminobutanové mající různé heterocyklické substituenty na uhlíku 3 butanového řetězce Vztahy mezi strukturou a aktivitou několika analogů kyseliny fosfinové s ohledem na jejich afinitu ke GABA_breceptoru stejně jako jejich účinek jako muskulární relaxant jsou popsány v J. Med. Chem. (1995) 38, 3297 3312. Závěr tohoto článku je, že s (S)-enantiomerem kyseliny 3-amino-2-hydroxypropylmethylfosfinové může být dosažena znatelně vyšší muskulární relaxace než s baclofenem a bez výskytu nežádoucích účinků na CNS.

V literatuře jsou fosfinové kyseliny mající atom vodíku napojený na fosfor také nazývány fosforné kyseliny. Tyto dva názvy mohou být použity pro stejné sloučeniny. Avšak pro pojmenování sloučenin podle tohoto vynálezu byl zvolen název fosfinové kyseliny.

Podstata vynálezu

Tento vynález poskytuje nové sloučeniny vzorce I

kde

Rj představuje vodík, hydroxyskupinu, nižší alkyl, nižší alkoxyskupinu nebo halogen;

R₂ představuje hydroxyskupinu, merkaptoskupinu, halogen nebo oxoskupinu;

··· ···· · · · • ····· · · ' ··· · · • · · · · · ··· ··» ·· ** 99 99 9 999

R₃ představuje vodík nebo nižší alkyl (případně substituovaný hydroxyskupinou, merkaptoskupinou, nižší alkoxyskupinou, nižší thioalkoxyskupinou nebo arylem);

R₄ představuje vodík, nižší alkyl (případně substituovaný arylem) nebo aryl;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli, solváty a jejich stereoizomery, s výj imkou:

i) racemátu kyseliny (3-amino-2-hydroxypropyl)fosfinové a ii) kyseliny (2R/S, 3R)-(3-amino-2-hydroxybutyl)fosfinové

Ve výhodném provedení

R₄ představuje vodík, nižší alkyl nebo halogen;

R₂ představuje halogen, hydroxyskupinu nebo oxoskupinu; R₃ představuje vodík; a

R₄ představuje vodík s výjimkou racemátu kyseliny (3-amino-2hydroxypropyl)fosfinové.

Zvláště výhodné sloučeniny jsou kyselina (3-amino-2fluorpropyl)fosfinová, kyselina (2R)-(3-amino-2fluorpropyl)fosfinová, kyselina (2S)-(3-amino-2fluorpropyl)fosfinová, kyselina (3-amino-2-fluor-1methylpropyl)fosfinová, kyselina (3-amino-2oxopropyl)fosfinová, kyselina (2S)-(3-amino-2hydroxypropyl)fosfinoá, kyselina (2R)-(3-amino-2hydroxypropyl)fosfinová) a kyselina (3-amino-l-fluor-2hydroxypropyl)fosfinová.

• · ··· · · · · ·· · • ····· · · ··· · · • · ···· · · · • · · ·· ·· ·· ·· ····

V souladu s tímto vynálezem se rozumí, že když R₂ je oxoskupina, vazba mezi R₂ a uhlíkem je dvojná vazba.

V souladu s tímto vynálezu se rozumí pojmem „nižší radikály a sloučeniny, například ty, které mají až 7 včetně, zvláště až 4 včetně, uhlíkové atomy. Všechny obecné pojmy mají následující významy:

Nižší alkyl je například Ci-C₄ alkyl, jako je methyl, ethyl, n-propyl nebo n-butyl, také isopropyl, isobutyl sekundární butyl nebo terciární butyl, ale může to také být C5-C7 alkylová skupina, jako je pentylová, hexylová nebo heptylová skupina.

Nižší alkoxyskupina je například C_x-C₄ alkoxyskupina, jako je methoxyskupina, ethoxyskupina, n-propoxyskupina nebo n-butoxyskupina, také isopropoxyskupina, isobutoxyskupina, sekundární butoxyskupina nebo terciární butoxyskupina, ale může to také být C₅-C₇ alkoxyskupina, jako je pentoxyskupina, hexoxyskupina nebo heptoxyskupina.

Nižší thioalkoxyskupina je například Ci-C₄thioalkoxyskupina, jako je thiomethoxyskupina, thioethoxyskupina, n-thiopropoxyskupina nebo nthíobutoxyskupina, také thioisopropoxyskupina, thioisobutoxyskupina, sekundární thiobutoxyskupina nebo terciární thiobutoxyskupina, ale může to také být C5-C7 thioalkoxyskupina, jako je thiopentoxyskupina, thiohexoxyskupina nebo thioheptoxyskupina.

Halogenem je halogen o atomovém čísle až 35 včetně, jako je fluor nebo chlor a méně výhodně brom.

Sloučeniny vzorce I podle vynálezu jsou amfoterní povahy a mohou být přítomny ve formě vnitřních solí. Mohou také tvořit adiční soli s kyselinami a soli s bázemi. Tyto soli jsou zvláště farmaceutické kyselé adiční soli, stejně jako farmaceuticky přijatelné soli tvořené s bázemi. Vhodné kyseliny pro tvorbu těchto solí zahrnují například

minerální kyseliny, jako je kyselina chlorovodíková, bromovodíková, sírová a fosforečná, nebo organické kyseliny, jako jsou sulfonové kyseliny a karboxylové kyseliny. Soli s bázemi jsou například soli alkalických kovů, například sodné nebo draselné soli, nebo soli kovů alkalických zemin, například vápenaté nebo hořečnaté soli, stejně jako amonné soli, jako jsou soli amoniaku nebo organických aminů. Tyto soli mohou být připraveny běžnými metodami.

Když je v molekule přítomno jedno nebo více stereocenter, sloučeniny vzorce I mohou být ve formě stereoizomerních směsí, tj. směsí diastereomerů a/nebo racemátů, nebo ve formě jednotlivých stereoizomerů, tj. jednotlivých enantiomerů a/nebo diastereomerů. Tyto sloučeniny mohou být také ve formě solvátu, například hydrátů.

Všechny sloučeniny vzorce I mohou být použity pro inhibici TLOSR a tak pro ošetření chorob spojených s gastroezofageálním refluxem. Uvedená inhibice TLOSR také zahrnuje to, že všechny sloučeniny vzorce I mohou být použity pro ošetření regurgitace u dětí. Účinné zvládnutí regurgitace u dští by mohlo znamenat důležitou cestu u zvládnutí nepříjemností v důsledku přílišných ztrát pozřených nutričních látek. Nové sloučeniny mohou být navíc použity pro ošetření s GORD- nebo non-GORD spojeným astmatem, říhání, kašle, bolesti, závislostí na kokainu, škytavky, IBS, dyspepsie, zvracení a nocicepce.

Na rozdíl od dosavadního stavu techniky (J. Med. Chem. (1995) 3297 - 3312 a The GABA Receptors: Second Edition, Edited by S. J. Enna and Norman Bowery, Humana Press (1997) zvláště str. 281 - 282 sloučeniny podle tohoto vynálezu mají překvapivě vysokou metabolickou stabilitu i přes přítomnost P-H vazby. Sloučeniny mají také překvapivě vysokou terapeutickou hodnotu.

Příprava

Sloučeniny vzorce I podle tohoto vynálezu mohou být připraveny jedním z následujících způsobů.

A) sloučenina vzorce II

(II) kde Ri a R₃ jsou definovány stejně jako výše ve vzorci I, X je vodík nebo chránící skupina, jako je -CCH3 (OCH₂CH₃)₂,

Z je chránící skupina, jako je t-butoxykarbonyl, a Y je vodík nebo chránící skupina, jako je nižší alkyl, přičemž sloučenina vzorce II může být syntetizována kondenzační reakcí podle schématu 1 za použití vhodného esteru Nchráněné aminokyseliny, kde R₃ je definována stejně jako výše, W je chránící skupina, jako je nižší alkyl, a Z je definována stejně jako ve vzorci II, a vhodného chráněného derivátu fosfinové kyseliny, kde R_x je definována stejně jako výše u vzorce I, X a Y jsou definovány stejně jako u vzorce II, a báze, jako je lithiumdiisopropylamid,

Schéma 1

se

a) přemění případně N-alkylační reakcí za účelem zavedení R₄, pokud se u R₄ požaduje, aby nepředstavovala vodík, a poté hydrolytickou reakcí pro získání sloučeniny vzorce III

kde Ri, R₃ a R₄ jsou definovány stejně jako výše u vzorce I, a případně se převede výše uvedená výsledná sloučenina III na jinou chemickou sloučeninu vzorce III a/nebo výsledná směs izomerů se rozdělí na jednotlivé izomery a/nebo výsledná sůl se převede na volnou sloučeninu vzorce III a/nebo na jinou sůl a/nebo se převede výsledná volná sloučenina III na sůl v souladu s výše uvedenou definicí, nebo

b) se přemění redukční reakcí, případně N-alkylační reakcí, pokud se u R₄ požaduje, aby nepředstavovala vodík, a konečně hydrolytickou reakcí pro získání sloučeniny vzorce IV

kde Ri, R₃ a R₄ jsou definovány stejně jako výše u vzorce I, a případně se výše uvedená výsledná sloučenina IV převede na jinou chemickou sloučeninu vzorce IV a/nebo výsledná směs izomerů se rozdělí na jednotlivé izomery a/nebo výsledná sůl se přemění na volnou sloučeninu vzorce IV a/nebo na jinou sůl a/nebo se přemění výsledná volná sloučenina IV na sůl v souladu s výše uvedenou definicí, nebo • · • · •« ·· ·· • · · · · • * a · * • a a · « • · · * • · a · « t ( *

c) se převede redukční reakcí následovanou deoxohalogenační reakcí, případně N-alkylační reakcí za účelem zavedení R₄, pokud se u R₄ požaduje, aby nepředstavovala vodík, a konečně hydrolytickou reakcí na sloučeninu vzorce V

kde Ri, R₃ a R₄ jsou definovány stejně jako výše u vzorce I, a Halo je atom halogenu, a případně se výše uvedená výsledná sloučenina V převede na jinou chemickou sloučeninu vzorce V a/nebo výsledná směs izomerů se rozdělí na jednotlivé izomery a/nebo výsledná sůl se převede na volnou sloučeninu vzorce V a/nebo na jinou sůl a/nebo se převede výsledná volná sloučenina V na sůl v souladu s výše uvedenou definicí;

nebo B) sloučenina vzorce VI

kde Ri a R3 jsou definovány stejně jako ve vzorci I, X je vodík nebo chránící skupina, jako je -CCH3 (OCH₂CH₃) 2, T je skupina, která může být převedena na skupinu NH2, a Y je vodí nebo chránící skupina, jako je nižší alkyl, přičemž sloučenina vzorce VI může být syntetizována kondenzační reakcí podle schématu 2 za použití derivátu 2,3epoxypropylu, jako je vhodný N-chráněný derivát 2,3epoxypropylaminu nebo epichlorhydrinu, kde Ri a R₃ jsou definovány stejně jako výše u vzorce I, a vhodného chráněného derivátu fosfinové kyseliny aktivovaného Osilylací, kde X a Y jsou definovány stejně jako u vzorce VI, a Lewisovy kyseliny, jako je bezvodý ZnCl2,

I

P —X I

OY

Lewisova kyselina

-►

Schéma 2

a) se převede reakcí, kde trimethylsilylová skupina je nahrazena atomem vodíku, reakcí, kde T skupina definovaná u vzorce VI se převede na -NHR₄, kde R₄ je definována stejně jako výše u vzorce I, a konečně hydrolytickou reakcí za účelem získání sloučeniny vzorce IV

kde Ri, R3 a R₄ jsou definovány stejně jako výše u vzorce I, a případně se převede výše uvedená výsledná sloučenina IV na jinou chemickou sloučeninu vzorce IV a/nebo výsledná směs izomerů se rozdělí na jednotlivé izomery a/nebo výsledná sůl se převede na volnou sloučeninu vzorce IV a/nebo na jinou sůl a/nebo se přemění výsledná volná sloučenina IV na sůl v souladu s výše uvedenou definicí, nebo

b) se převede reakcí, kde trimethylsilylová skupina je nahrazena atomem vodíku, oxidační reakcí, reakcí, kde T • · • · ti • · · · · · · · · · I ····· · · ··· · · ··· ·· ·· ·· ·· · · · · skupina definovaná u vzorce VI se převede na -NHR₄, kde R₄je definována stejně jako výše u vzorce I, a konečně hydrolytickou reakcí za účelem získání sloučeniny vzorce III

c) se převede reakcí, kde trimethylsilylová skupina je nahrazena vodíkem, oxidační reakcí, reakcí, kde T skupina, jak je definována u vzorce VI, se přeměnění na -NHR₄, kde R₄ je definována stejně jako výše u vzorce I, a konečně hydrolytickou reakcí za účelem získání sloučeniny vzorce V

kde Ri, R3 a R₄ jsou definovány stejně jako výše u vzorce I, a Halo je atom halogenu, a případně výše uvedená výsledná sloučenina V se převede na jinou chemickou sloučeninu vzorce V a/nebo výsledná směs izomerů se rozdělí na jednotlivé izomery a/nebo výsledná sůl se přemění na • · · · · · • · k · ·· ·· · · · · volnou sloučeninu vzorce V a/nebo na jinou sůl a/nebo se přemění výsledná volná sloučenina V na sůl v souladu s výše uvedenou definicí;

nebo C) sloučenina vzorce VII

(VII) kde Ri je definována stejně jako výše ve vzorci I, X je vodík nebo chránící skupina, jako je -CCH₃ (OCH₂CH₃) ₂, U je elektrony přitahující skupina, jako je například -CN nebo CO₂Et, která může být převedena na skupinu -CH₂NH₂, a Y je vodík nebo chránící skupina, jako je nižší alkyl, a Halo je atom halogenu, přičemž sloučenina vzorce VII může být syntetizována adiční reakcí podle schématu 3 za použití nenasycené sloučeniny, kde Ri je definována stejně jako výše u vzorce I, U a Halo jsou definovány stejně jako u vzorce VII, a vhodného chráněného derivátu fosfinové kyseliny aktivovaného O-sílylací, kde X a Y jsou definovány stejně jako u vzorce VII,

Ri

Halo

OY

Schéma 3 se převede reakcí, kde skupina U se přeměňuje na -NHR₄, kde R₄ je definována stejně jako výše u vzorce I, a hydrolytickou reakcí za účelem získání sloučeniny vzorce VIII

(VIII) kde Ri a R₄ jsou definovány stejně jako ve vzorci I a Halo je atom halogenu, a případně se převede výše uvedená výsledná sloučenina VIII na jinou chemickou sloučeninu vzorce VIII a/nebo výsledná směs izomerů se rozdělí na jednotlivé izomery a/nebo výsledná sůl se přemění na volnou sloučeninu vzorce VIII a/nebo na jinou sůl a/nebo se přemění výsledná volná sloučenina VIII na sůl v souladu s výše uvedenou definicí;

nebo D) sloučenina vzorce IX, případně jako individuální

kde Ri, R₃ a R₄ jsou definovány stejně jako ve vzorci I,

Z je chránící skupina, jako je t-butyloxykarbonyl, a Halo je atom halogenu, přičemž sloučenina vzorce IX může být syntetizována substituční reakcí podle schématu 4 za použití elektrofilní sloučeniny, kde Ri, R₃ a R₄ jsou definovány stejně jako výše, L je odstupující skupina, jako jod, Z a Halo jsou definovány stejně jako výše, a methylfosfinovou kyselinou aktivovanou O-silylací, • · • · • · • · • · · · · ·

Schéma 4 se převede hydrolytickou reakcí na sloučeninu vzorce V

(V) kde Ri, R₃ a R₄ jsou definovány stejně jako výše u vzorce I, a případně se výše uvedená výsledná sloučenina V převede na jinou chemickou sloučeninu vzorce V a/nebo výsledná směs jednotlivých izomerů se rozdělí na jednotlivé izomery a/nebo výsledná sůl se přemění na volnou sloučeninu vzorce V a/nebo na jinou sůl a/nebo se přemění výsledná volná sloučenina V na sůl v souladu s výše uvedenou definicí;

nebo E) sloučenina vzorce XI,

(XI) kde Ri, R₃ a R₄ jsou definovány stejně jako výše u vzorce I, X je vodík nebo chránící skupina, jako je -CCH₃ (OCH₂CH₃) ₂, a Y je vodík nebo chránící skupina, jako je nižší alkyl, přičemž sloučenina vzorce XI může být syntetizována adiční reakcí podle schématu 4 reakcí nenasyceného derivátu fosfinové kyseliny, kde Ri, R₃ a R₄ jsou definovány stejně • · · · · · jako výše u vzorce I, s H2S, merkaptidovým iontem (HS~) nebo chráněnou merkaptosloučeninou, jako je benzylthiol, přičemž v tomto případě se poté chránící skupina odstraní,

Schéma 5 se převede

na sloučeninu vzorce XII, (XII) kde Ri, R₃ a R₄ jsou definovány stejně jako výše u vzorce I, a případně se výše uvedená výsledná sloučenina XII převede na jinou chemickou sloučeninu vzorce XII a/nebo výsledná směs jednotlivých izomerů se rozdělí na jednotlivé izomery a/nebo výsledná sůl se přemění na volnou sloučeninu vzorce XII a/nebo na jinou sůl a/nebo se přemění výsledná volná sloučenina XII na sůl v souladu s výše uvedenou definicí.

Vynález bude nyní popsán detailněji pomocí následujících příkladu, které nejsou zamýšleny jako omezení vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Kyselina (3-amino-2-fluorpropyl)fosfinová « · • ·

Do roztoku ethyl-(3-amino-2-fluor-3oxopropyl)(diethoxymethyl)fosfinatu v THF (tetrahydrofuranu) chlazeného v ledové lázni pod hladinou argonu byl přidán 1 M BH₃-THF. Po 10 minutách byl roztok zahříván k varu pod zpětným chladičem po dobu 2,5 h. Roztok byl ochlazen na pokojovou teplotu a byl přidán roztok 6 N HC1 (200 ml). THF byl odstraněn na rotační odparce a směs byla vařena pod zpětným chladičem po dobu 2,5 h. Roztok byl ochlazen a odpařen. Zbytek byl přečištěn iontově výměnnou kolonovou chromatografií (DOWEX® 50WX 8-200, H⁺ forma, 3,5 x 4,0 cm). Iontově výměnná pryskyřice byla předběžně promyta směsí methanol/voda 2 : 1 (400 ml). Surový produkt byl rozpuštěn ve směsi methanol/voda 1:1a nanesen na kolonu a promyt směsí methanol/voda 1 : 1 (400 ml). Eluční činidlo bylo změněno za směs methanol/koncentrovaný hydroxid amonný 3:1. Dvě frakce (150 ml) byly spojeny a odpařeny za vzniku 645 mg (34 %) kyseliny (3-amino-2fluorpropyl)fosfinové jako bílé pevné látky.

Vlastnosti: t. t. 203 -207 °C; Rf = 0,35 (methanol, methylenchlorid, koncentrovaný hydroxid amonný : 40 : 1); ³H NMR (300 MHz, D2O) δ 7,11 (d, J = 5,28 Hz, 1H), 5,18 (dm, J = 54 Hz, 1H), 3,28 - 3,45 (m, 2H), 1,65 2,23 (m, 2H) ; ¹³C NMR (125 MHz, D2O + dioxan) δ 87,8 (J =

170 Hz), 44,3 (dd, J = 12,6, 21,6'Hz), 35,6 (dd, J = 20,2, 86,5 Hz); APIMS: m/z = 142 (M + H)⁺.

Příklad 2

Kyselina (2S)-(3-amino-2-hydroxypropyl)fosfinová

Směs ethyl (2S)-(3-amino-2-hydroxypropyl)(l,ldiethoxyethyl)fosfinatu (1,0 g, 3,5 mmol) a koncentrované HC1 (50 ml) byla zahřívána k varu pod zpětným chladičem 2 h. Zbytek byl rozpuštěn v methanolu (100 ml) a byl při pokojové teplotě podroben reakci s propylenoxidem (2 ml).

Poté, co byla směs míchána po dobu 5 hodin, byla vysrážená pevná látka oddělena od rozpouštědla dekantací. Pevná látka byla vysušena v proudu argonu, čímž bylo získáno 220 mg (45 %) kyseliny (2S)-(3-amino-hydroxypropyl)fosfinové jako bílé pevné látky.

Vlastnosti: ^XH NMR (300 MHz, D₂0) δ 7,1 (d, J = 540 Hz,

1H), 4,2 (m, 1H) , 2,9 - 3,2 (m, 2H) , 1,7 - 2,0 (m, 2H) ;

³¹P NMR (121 MHz, D2O) δ 24,2 (d, J = 522 hz); FABMS: m/z = 140 (M + H)⁺; [a]D při 20 °C = + 8 '° (0,5 % v 0,1 M HC1) .

Příklad 3

Kyselina (2R)-(3-amino-2-hydroxypropyl)fosfinová

Směs ethyl (2R)-(3-amino-2-hydroxypropyl)(1,1diethoxyethyl)fosfinatu (0,9 g, 3,2 mmol) a koncentrované HC1 (50 ml) byla zahřívána k varu pod zpětným chladičem 2 h. Zbytek byl rozpuštěn v methanolu (50 ml) a byl při pokojové teplotě podroben reakci s propylenoxidem (3 ml). Poté, co byla směs míchána po dobu 5 hodin, byla vysrážená pevná látka oddělena od rozpouštědla dekantací. Pevná látka byla vysušena v proudu argonu, čímž bylo získáno 260 mg (59 %) kyseliny (2R)-(3-amino-hydroxypropyl)fosfinové jako bílé pevné látky.

Vlastnosti: ³H NMR (300 MHz, D₂O) δ 7,1 (d, J = 540 Hz,

1H) , 4,2 (m, 1H), 2,9 - 3,2 (m, 2H), 1,7 - 2,0 (m, 2H) ;

³¹P NMR (121 MHz, D2O) δ 23,2 (d, J = 525 Hz); FABMS: m/z = 140 (M + H)⁺; [a]D při 20 °C = - 8 ⁰ (0,5 % v 0,1 M HC1).

Příklad 4

Kyselina (3-amino-2-oxoproyl)fosfinová

Vzorek ethyl [3-[N-(terc.butoxykarbonyl)amino]-2oxoproypl](1,1-diethoxyethyl)fosfinatu (8,11 g, 21 mmol) • · byl rozpuštěn v 3 N HC1 (400 ml), která byla předtím deooxygenována probubláváním N₂ přes roztok. Směs byla míchána 14 h při pokojové teplotě a poté byla odpařena. Zbytek byl spoluodpařen s methanolem. Zbytek byl poté rozpuštěn v methanolu (10 ml) a byl přidán propylenoxid )10 ml). Směs byla míchána 6 h a výsledná sraženina byla izolována filtrací. Pevná látka byla rozpuštěna v chladném methanolu a vysušena za vakua při 50 °C, čímž bylo získáno 2,1 g (73 %) kyseliny (3-amino-2-oxopropyl)fosfinové jako bělavé pevné látky.

Vlastnosti: ^ΧΗ NMR (300 MHz, D₂O) δ 7,13 (d, J = 551 Hz,

1H), 4,14 (s, 2H), 3,14 (d, J = 18 Hz, 2H);

¹³C NMR (75 MHz, D₂O + dioxan) δ 199, 5, 49,2, 47,3, (d, J =

Hz); FABMS: m/z = 138 (M + H)⁺’

Příklad 5

Kyselina (2R)-(3-amino-2-fluorpropyl)fosfinová

Do tříhrdlé dvoulitrové baňky vybavené mechanickým míchadlem, teploměrem, nálevkou a argonovým probublávačem byl přidán fosfornan amonný (73,8 g, 0,89 mol). Baňka byla umístěna do vodní lázně pro pokojové teplotě a byl přidán N,O-bis-(trimethylsilyl)acetamid (215 ml, 0,87 mol-BSA) takovou rychlostí, aby vnitřní teplota byla udržována pod 38 °C (přibližně 30 minut) za použití chlazení ledovou lázní. Po dokončení přídavku BSA byla reakční směs zahřáta na 45 až 48 °C a udržována při této teplotě 1 h. Reakční směs byla ochlazena na pokojovou teplotu a k reakční směsi byl přidán roztok terc.butyl (2R)-2-fluor-3jodpropylkarbamatu (27,3 g, 0,09 mol) v methylenchloridu (300 ml). Reakční směs byla poté ponechána míchat při pokojové teplotě 18 h. Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a poté byla opatrně zředěna methanolem (275 ml) a poté vodou (32 ml). Reakční směs byla míchána 30 min, poté byla « · reakční směs přefiltrována a pevná látka byla promyta methanolem. Filtrát byl odpařen a zbytek byl umístěn do vysokého vakua (0,1 mm Hg) přes noc. Surový zbytek byl triturován s methylenchloridem, methanolem, koncentrovaným roztokem hydroxidu amonného (80 : 20 :1) a byl přefiltrován. Filtrát byl odpařen za sníženého tlaku a triturace byla zopakována. Surový koncentrát byl převeden do dvoulitrové baňky, rozpuštěn v methanolu (375 ml) a umístěn do vodní lázně při pokojové teplotě. Byl přidán nasycený roztok plynného chlorovodíku v ethylacetátu (500 ml) a směs byla míchána 3 h. Reakční směs byla poté přefiltrována a pevné látky byly promyty směsí methanolu a ethylacetátu (90 : 10). Filtrát byl odpařen za sníženého tlaku a surový produkt byl převeden přes kolonu Dowex® 50WX8-200 mesh H⁺ forma (500 g, 8 x 15 cm) za eluce směsí methanol/voda 1:1, dokud nebyla detekována analýzou TLC žádná další látka. Výsledný surový produkt byl poté podroben eluci pomocí směsi koncentrovaný hydroxid amonný/methanol 1:3. Produkt byl přečištěn kolonovou chromatografií za eluce směsí chloroform, methanol, koncentrovaný roztok hydroxidu amonného (6 : 3 : 1), čímž byla získána kyselina (2R)-(3-amino-2-fluorpropyl)fosfinová jako bílá pevná látka (3,12 g, 24 %).

³H NMR (300 MHz, D₂O) δ 7,90 (s, 0,5H), 6,15 (s, 0,5 Η) ,

5,12 - 5,29 (m, 0,5 Η), 4,92 - 5,10 (m, 0,5 Η), 3,12 - 3,42 (m, 2H) , 1,74 - 2,26 .(m, 2H) .

Příklad 6

Kyselina (2S)- (3-amino-2-fluorpropyl)fosfinová

Do tříhrdlé dvoulitrové baňky vybavené mechanickým míchadlem, teploměrem, nálevkou a argonovým probublávačem byl přidán fosfornan amonný (58,1 g, 0,70 mmol). Byl přidán N,O-bis-(trimethylsilyl)acetamid (175,9 ml, 0,71 mol-BSA) • «··»« ·· · · · · * » *·«· · * · ··· · » » · · * ·· «··· takovou rychlostí, aby vnitřní teplota byla udržována mezi 35 až 40 °C. Po dokončení přídavku BSA byla reakční smšs zahřáta na 35 - 40 °C a udržována při této teplotě 45 min. Byl přidán methylenchlorid (150 ml) a směs byla míchána při 35 až 40 °C dalších 45 min. Reakční směs byla ochlazena na pokojovou teplotu a k reakční směsi byl přidán roztok terč.butyl-(2S)-2-fluor-3-jodpropylkarbamatu (42,5 g, 0,14 mol) v methylenchloridu (300 ml). Reakční směs byla poté ponechána míchat při pokojové teplotě přes noc. Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a poté byla opatrně zředěna methanolem (150 ml) a poté vodou (60 ml). Reakční směs byla odpařena a zbytek byl umístěn pod vysoké vakuum. Zbytek byl upraven na pH přibližně 8 přídavkem koncentrovaného hydroxidu amonného (50 ml), poté byl přidán methylenchlorid (400 ml) a methanol (250 ml). Výsledné pevné látky byly odfiltrovány a filtrát byl odpařen. Zbytek byl triturován s methylenchloridem, methanolem, koncentrovaným roztokem hydroxidu amonného (80 : 20 : 1; 400 ml) a byl přefiltrován. Filtrát byl odpařen za sníženého tlaku a surový koncentrát byl rozpuštěn v methanolu (400 ml). Byl přidán nasycený roztok plynného chlorovodíku v ethylacetátu (400 ml) a směs byla míchána 3 h. Reakční směs byla poté přefiltrována a filtrát byl odpařen za sníženého tlaku. Surový produkt byl převeden přes kolonu D.owex® 50WX8-200 mesh H⁺ forma (500 g, 8 x 15 cm) za eluce směsí methanol/voda 1 : 1, tak dlouho, dokud byla detekována analýzou TLC jakákoli látka. Výsledný surový produkt byl poté podroben eluci pomocí směsi koncentrovaný hydroxid amonný/methanol 1:3. Produkt byl přečištěn kolonovou chromatografií za eluce směsí chloroform, methanol, koncentrovaný roztok hydroxidu amonného (6:3:1), čímž byla získána kyselina (2S)-(3-amino-2-fluorpropyl)fosfinová jako bílá pevná látka (3,46 g, 17 %).

³Η NMR (300 MHz, D₂O) δ 7,90 (s, 0,5H), 6,15 (s, 5,12 - 5,29 (m, 0,5 Η) , 4,92 - 5,10 (m, 0,5 Η) , (m, 2H), 1,74 - 2.

0,5 Η) ,

3,12 - 3,42

Příklad 7

Kyselina (3-amino-l-fluor-2-hydroxypropyl)fosfinová

Ethyl (3-(N-terc.butoxykarbonyl)amino-l-fluor-2hydroxypropyl)(1,1-diethoxyethyl)fosfinat (180 mg, 4,5 mmol) byl rozpuštěn v methanolu (2 ml), podroben reakci s 3 N kyselinou chlorovodíkovou (20 ml, 60,0 mmol, vypranou argonem bezprostředně před použitím). Směs byla míchána při pokojové teplotě 6 hodin pod argonovou atmosférou. Reakční směs byla odpařena za sníženého tlaku, surový produkt byl znovu rozpuštěn v methanolu (5 ml); reziduální voda byla odstraněna spoluodpařením s methanolem za sníženého tlaku, surový produkt (70 mg) byl přečištěn kolonovou chromatografií (kolona 1 x 10 cm) za eluce směsí methylenchlorid, methanol, koncentrovaný hydroxid amonný (6 : 3 : 1). Frakce obsahující produkt byly odpařeny za sníženého tlaku, spoluodpařeny s acetonitrílem (2 x 10 ml) a poté s methanolem (1 x 10 ml) a vysušeny přes noc za vysokého vakua (0,1 mm Hg). Tento postup vedl ke kyselině (3 amino-l-fluor-2-hydroxypropyl)fosfinové jako bílé pevné látce (400 mg, 56 %).

^XH NMR (300 MHz, D₂O) 5 7, 93 (s, 0,5H), 6,11 (s, 0,5 Η) ,

4,60 - 4,20 (m, 2H), 3,42 - 3,08 (m, 2H) .

Příklad 8

Kyselina (3-amino-2-fluor-l-methylpropyl)fosfinová

Do roztoku ethyl-3-amino-2-fluor-l-methyl-3oxopropyl(diethoxymethyl)fosfinatu (1,6 g, 5,3 mmol) v THF • · (15 ml) chlazeného v ledové lázni pod atmosférou argonu byl přidán 1 M BH₃-THF (12,3 ml, 12,3 mmol). Po 10 minutách byl roztok zahříván k varu pod zpětným chladičem po dobu 3 h. Roztok byl ochlazen na pokojovou teplotu a po kapkách byl přidán roztok 6 N HC1 (100 ml). THF byl odstraněn na rotační odparce a byla přidána další porce 6 N HC1 (100 ml). Směs byla vařena pod zpětným chladičem po dobu 3 h. Roztok byl ochlazen, odpařen, spoluodpařen s vodou a poté s ethanolem. Zbytek byl přečištěn iontově výměnnou chromatografií (Dowex®50WX8-200, H⁺ forma, 3,5 x 4,0 cm). Iontově výměnná pryskyřice byla předem promyta směsi methanol/voda 2 methanol/voda 1 methanol/voda 1

1. Surový produkt rozpuštěný ve směsi 1 byl nanesen na kolonu a promyt směsí 1. Eluční činidlo bylo vyměněno za směs methanol/koncentrovaný hydroxid sodný 3:1. Odpovídající frakce byly spojeny a odpařeny za vzniku 150 mg (15 %) diastreomerní směsi kyseliny (3-amino-2-fluor-lmethylpropyl)fosfinové jako oleje.

NMR (400 MHz, D₂O) δ 6,2 - 7,8 (m, 1H), 4,8 - 5,2 (m,

1H) , 3,2 - 3,5 (m, 2H), 1,8 - 2,2 (m, 1H), 1,0 - 1,2 (m, 3H); MS: m/z = 170 (Μ + H)⁺.

Následující meziprodukty byly použity při přípravě sloučenin podle vynálezu.

Meziprodukty

Příklad II

Ethyl-3-[(diethoxymethyl)(ethoxy)fosforyl]-2-fluorpropanoat (meziprodukt sloučeniny uvedené v příkladu 1)

Směs ethyl(diethoxymethyl)fosfinatu (26,0 g, 133 mmol) a 1,1,1,3,3,3-hexamethyldisilazanu (28 ml, 133 mmol) byla vařena pod zpětným chladičem 2 h pod argonovou atmosférou.

*·· Λ 9 · · * · ♦ · · · · «

Směs byla ochlazena na pokojovou teplotu a poté byl přidán fluorakrylát (10,5 g, 89 mmol). Reagenty byly ohřátý na 60 °C na 3 dny pod atmosférou argonu. Směs byla ochlazena na pokojovou teplotu, zředěna ethylacetátem (300 ml), promyta IN HC1 (2 x 150 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného (100 ml).Organická vrstva byla vysušena síranem hořečnatým, přefiltrována a odpařena, čímž bylo získáno 32,0 g žlutého oleje. Zbytek byl přečištěn kolonovou chromatografií na za vlhka plněné silikagelové koloně (6 x 30 cm) za eluce směsí methylenchlorid/methanol (97 : 3). Odpovídající frakce byly spojeny a odpařeny, čímž bylo získáno 16,0 g (57 %) ethyl3-[diethoxymethyl)(ethoxy)fosforyl]-2-fluorpropanoatu jako čirého oleje.

Vlastnosti: NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 5,32 (dm, 1H) , 4,67 4,77 (m,lH), 4,18 - 4,32 (m,2H), 3,58 - 3,91 (m, 4H), 2,30

- 2,62 (m, 2H), 1,20 - 1,41 (m, 9H).

Příklad 12

Ethyl (3-amino-2-fluor-3-oxopropyl)(diethoxymethyl)fosfinat (meziprodukt sloučeniny uvedené v příkladu 1)

K roztok ethyl-3-[(diethoxymethyl)(ethoxy)fosforyl]-2fluorpropanoatu (16,0 g, 51,1 mmol), ethanolu (22 ml) byl přidán koncentrovaný chlorid amonný (14,8 N, 3,5 ml, 51,1 mmol). Roztok byl míchán při pokojové teplotě 16 h a odpařen. Zbytek byl podroben chromatografií na za vlhka plněné silikagelové koloně (7 x 37 cm) za eluce směsí methylenchlorid/methanol 96,5 : 3,5. Odpovídající frakce byly spojeny a odpařeny, čímž bylo získáno 3,43 g (27 %) ethyl(3-amino-2-fluor-3-oxopropyl)(diethoxymethyl)fosfinatu jako čirého oleje.

²H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 6,43 (s, 1H), 5,70 (s, 1H) , 5,21

- 5,4 (dm, 1H), 4,7 (dd, 1H), 4,18 - 4,31 (m, 2H) , 3,65 24 • · · · · · · • · · · · · · « ··«·« ·· · • · * ♦ · • · a · · ·· « ·

3,91 (m, 4H), 2,21 - 2,81 (m, 2H), 1,30 - 1,40 (m,3H), 1,2 - 1,28 (m, 6H).

Příklad 13

Ethyl (2R)-(3-chlor-2-hydroxypropyl)(1,1-diethoxyethyl)fosfinat (meziprodukt sloučeniny uvedené v příkladu 2)

Poté, co byla směs ethyl (diethoxyethyl)fosfinatu (15,0 g, 71 mmol) a toluenu odpařena do sucha, zbytek a 1,1,1,3,3,3-hexamethyldisilazan (13,2 g, 82 mmol) byl zahříván k varu pod zpětným chladičem po dobu 3 h pod argonovou atmosférou. Směs byla ochlazena na pokojovou teplotu a odpařena. Byl přidán (R)-epichlorhydrin (6,6 g, 71 mmol) a bezvodý chlorid zinečnatý (2,5 g, 18 mmol) a reagenty byly zahřívány na 60 °C přes noc pod atmosférou argonu. Směs byla ochlazena na pokojovou teplotu, zředěna methylenchloridem a vodou. Organická vrstva byla promyta vodou, vysušena síranem hořečnatý, přefiltrována a odpařena, čímž bylo získáno 20,7 g žlutého oleje. Zbytek byl rozpuštěn v methanolu (150 ml) obsahujícího 1 % kyseliny octové a roztok byl míchán přes noc. Rozpouštědlo bylo odpařeno, čímž bylo získáno 17,7 g (82 %) ethyl (2R)(3-chlor-2-hydroxypropyl)(1,1-diethoxyethyl)fosfinatu jako čirého oleje.

Vlastnosti: ^XH NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 4,3 - 4,4 (m, 1H),

4,1 - 4,3 (m, 2H), 3,5 - 3,8 (m, 4H) , 1,9 - 2,4 (m, 2H) , 1,5 (dd, J = 2,3, 11,4 Hz, 3H), 1,32 - 1,37 (m, 3H), 1,18 1,24 (m, 6H).

Příklad 14

Ethyl (2S)-(3-amino-2-hydroxypropyl)(1,1diethoxyethyl)fosfinat (meziprodukt sloučeniny uvedené v příkladu 2) ··· ···· · · · • ····* ·· · * · · · • · · · · · «·· • · · ·· ·♦ · « ·· · · · ·

Roztok ethyl· (2R)-(3-chlor-2-hydroxypropyl)(1,1diethoxyethyl)fosfinatu (5,0 g, 17 mmol) v ethanolu obsahujícím 9 % amoniaku byl míchán v autoklávu při pokojové teplotě po dobu 4 dnů a při 60 °C další den.

Roztok byl odpařen a zbytek byl přečištěn chromatografií na za vlhka plněné silikagelové koloně za eluce pomocí směsi methylenchlorid/methanol (5 - 8 % MeOH) obsahující 5 % triethylaminu. Odpovídající frakce byly spojeny, odpařeny a zředěny methylenchloridem a vodou. U vodné vrstvy bylo upraveno pH přídavkem několika ml 10% vodného roztoku uhličitanu sodného a vrstva byla opakovaně extrahována methylenchloridem. Spojené organické extrakty byly vysušeny síranem sodným a odpařeny za vzniku 1,2 g (26 g (26 %) ethyl (2S)-(3-amino-2-hydroxypropyl)(1,1diethoxyethyl)fosfinatu jako čirého oleje.

Vlastnosti: ³Η NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 4,40 - 4,55 (b, 1H) , 4,10 - 4,30 (m, 2H), 3,55 - 3,80 (m, 4H), 3,20 - 3,30 (m, 1H(, 3,00 - 3,10 (m, 1H) , 2,00 - 2,40 (m, 2H) , 1,45 - 1,53 (dd, J = 3,4, 11,7 Hz, 3H) , 1,30 - 1, 40 (m, 3H) , 1,15 1,25 (m, 6H).

Příklad 15

Ethyl (2S)-(3-chlor-2-hydroxypropyl) (1,1diethoxyethyl)fosfinat (meziprodukt sloučeniny uvedené v příkladu 3)

Poté, co byla směs ethyl (diethoxyethyl)fosfinatu (15,0 g, 71 mmol) a toluenu odpařena do sucha, zbytek a 1,1,1,3,3,3-hexamethyldisilazan (13,2 g, 82 mmol) byl zahříván k varu pod zpětným chladičem po dobu 3 h pod argonovou atmosférou. Směs byla ochlazena na pokojovou teplotu a odpařena. Byl přidán (S)-epichlorhydrin (6,6 g, mmol) a bezvodý chlorid zinečnatý (2,5 g, 18 mmol) a reagenty byly zahřívány na 60 °C přes noc pod atmosférou argonu. Směs byla ochlazena na pokojovou teplotu, zředěna methylenchloridem a vodou. Organická vrstva byla promyta vodou, vysušena síranem hořečnatým, přefiltrována a odpařena, čímž bylo získáno 20,7 g žlutého oleje. Zbytek byl rozpuštěn v methanolu (150 ml) obsahujícím 1 % kyseliny octové a roztok byl míchán přes noc. Rozpouštědlo bylo odpařeno, čímž bylo získáno 16,8 g (79 %) ethyl (2S)-(3chlor-2-hydroxypropyl)(1,1-diethoxyethyl)fosfinatu jako čirého oleje..

Vlastnosti: ³H NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 4,4 (m, 1H) , 4,2 4,3 (m, 2H) , 3,6 - 3,8 (m, 4H) , 1,9 - 2,4 (m, 2H) , 1,5 (dd, J = 2,3, 11,4 Hz, 3H), 1,32 - 1,37 (m, 3H), 1,18 - 1,24 (m, 6H) .

Příklad 16

Ethyl (2R)-(3-amino-2-hydroxypropyl)(1,1diethoxyethyl)fosfinat (meziprodukt sloučeniny uvedeného v příkladu 3)

Roztok ethyl (2R)-(3-chlor-2-hydroxypropyl)(l,ldiethoxyethyl)fosfinatu (5,0 g, 17 mmol) v ethanolu obsahujícím 9 % amoniaku byl míchán v autoklávu při pokojové teplotě po dobu 6 dnů a při 55 °C další den.

Roztok byl odpařen a zbytek byl přečištěn chromatografií na za vlhka plněné silikagelové koloně za eluce pomocí směsi methylenchlorid/methanol (5 - 8 % MeOH) obsahující 5 % triethylaminu. Odpovídající frakce byly spojeny, odpařeny a zředěny methylenchloridem a vodou. U vodné vrstvy bylo upraveno pH přídavkem několika ml 10% vodného roztoku uhličitanu sodného a byla opakovaně extrahována methylenchloridem. Spojené organické extrakty byly vysušeny síranem sodným a odpařeny za vzniku 0,9 g (19 %) ethyl (2R)-(3-amino-2-hydroxypropyl) (1,1-diethoxyethyl)fos finatu jako čirého oleje.

• * • · · «4·· ·· · • ···»· ·· · · · · · • · ···· · · » ··· ·· ·· ·· · · ♦ *· ·

Vlastnosti: ²H NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 4,1 - 4,3 (m, 2H) ,

4,05 (b, 1H), 3,60 - 3,80 (m, 4H) , 2,4 - 2,9 (m, 2H) , 1,7 2,1 (m, 2H), 1,4 - 1,5 (dd 3H), +,3 - 1,4 (m, 3H) , 1,2 (m, 6H) .

Příklad 17

Ethyl [3-[N-(terč.butoxykrabonyl)amino]-2-oxopropyl] (1,1— diethoxyethyl)fosfinat (meziprodukt sloučeniny uvedené v příkladu 4)

K roztoku diisopropyleminu (3,0 ml, 21 mmol) v THF (5 ml) při -10 °C byl po kapkách přidán n-BuLi (2,5 M v hexanech, 8,6 ml, 21 mmol). Po 10 minutách byla reakčni směs ochlazena na -78 °C a po kapkách byl přidán ethyl (1,1-diethoxyethyl)(methyl)fosfin (4,80 g, 21,0 mmol) v THF (5 ml). Po přídavku byl roztok míchán při -78 °C 1 h. Po kapkách byl přidán roztok methylesteru N-Boc-glycínu (810 mg, 4,3 mmol) v THF (15 ml). Poté, co byl přídavek ukončen, reakčni směs byla míchána po dobu 45 minut. Byla přidána kyselina octová (1,2 ml, 21 mmol) a reakčni směs byla ohřátá na pokojovou teplotu. Reakčni směs byla rozdělena mezi methylenchlorid a vodu a vrstvy byly odděleny. Vodná vrstva byla extrahována jednou methylenchloridem. Spojené organické extrakty byly vysušeny síranem hořečnatým, přefiltrovány a odpařeny, čímž bylo získáno 4,89 g oleje. Zbytek byl přečištěn chromatografií na 100 g silikagelu za eluce ethylacetátem. Odpovídající frakce byly shromážděny, čímž bylo získáno 1,2 g (75 %) ethyl [3-[N(terč.butoxykrabonyl)amino]-2-oxopropyl](1,1diethoxyethyl)fosfinatu jako olej.

Vlastnosti: ^XH	NMR	(300	MHz, CDC1₃) δ 5,48 (s, 1H) ,	4 , 10
4,30 (m, 2H),	4,17	(d,	2H), 3,60 - 3,80 (m, 4H), 3,	01 -
3,30 (m, 2H),	1,52	(d,	3H), 1,43 (s, 9H), 1,32 (t,	3H) ,
1,19 (t, 6H).

• 4 · · «4 ··« · · · · · ·

Příklad 18 (2R) -3- (Dibenzylamino)-2-fluor-l-propanol (meziprodukt sloučeniny uvedené v příkladu 5)

Tetrahydroboritan sodný (5,3 g, 0,24 mol) byl převeden do suspenze v THF (200 ml) pod dusíkovou atmosférou a byl ochlazen na -15 °C za míchání. Methyl (2R)-3(dibenzylamino)-2-fluorpropanoat (56,6 g, 0,19 mol) byl převeden do suspenze v THF (250 ml) a byl po kapkách přidán do směsi během 1 h; vnitřní teplota byla udržována během přídavku pod -10 °C. Po dokončení přídavku byla reakční směs ponechána ohřát na pokojovou teplotu a byla míchána při této teplotě 17 h. Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a opatrně zředěna nasyceným vodným roztokem chloridu amonného (300 ml). Reakční směs byla extrahována ethylacetátem (2 x 200 ml) a organická fáze byla odpařena za sníženého tlaku. Surový zbytek byl rozpuštěn v 2N kyselině chlorovodíkové (200 ml, pH = asi 2) a vodná fáze byla promyta etherem (2 x 200 ml). Vodná fáze byla zalkalizována (pH = asi 10) pomocí 80% hydroxidu amonného v solance, extrahována ethylacetátem (3 x 200 ml), vysušena bezvodým síranem sodným (10 g), přefiltrována a odpařena za sníženého tlaku, čímž byl získán (2R)-(3-dibenzylamino)-2fluor-l-propanol (48 g, 93 %) jako žlutý olej.

⁷Η NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,15 - 7,38 (m, 10H) , 4,65 - 4,78 (m, 0,5 Η), 4,48 - 4,58 (m, 0,5 Η), 3,50 - 3,82 (m, 6H), 2,70-2,88 (m, 2H).

Příklad 19 (2R)-3-Amino-2-fluor-l-propanol (meziprodukt sloučeniny uvedené v příkladu 5) • · (2R)-(3-Dibenzylamino)-2-fluor-l-propanol (29,2 g,

0,11 mol) byl rozpuštěn v ethanolu (300 ml). Bylo přidáno 10 % hmotn. hydroxidu palladnatého (5,0 g) a směs byla umístěna na protřepávač Parr® pod atmosférou vodíku (55 psi) po dobu 6 h. Když nebyla pozorována další spotřeba vodíku, směs byla přefiltrována přes lože Celit® (20 g). Byla přidána další čerstvá várka hydroxidu palladnatého (5 g) a ethanolová směs byla opět podrobena hydrogenačním podmínkách, jak jsou popsány výše, po dobu 17 h. Surová reakční směs byla přefiltrována přes Celit® a odpařena za sníženého tlaku, čímž byl získán (2R)-3-amino-2-fluor-lpropanol jako bledě žlutý olej (9,6 g, 96 %).

³H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 4 , 78 - 5, 00 (bs s, 3H) , 4,49 4,62 (m, 0,5 Η) , 4,32 - 4,46 (m, 0,5 H(, 3,54 - 3,70 (m,

2H) , 2,70 - 2,96 (m, 2H) .

Příklad 110 terc.Butyl(2R)-2-fluor-3-hydroxypropylkarbamat (meziprodukt sloučeniny uvedené v příkladu 5) (2R)-3-Amino-2-fluor-l-propanol (4,6 g, 49 mmol) byl rozpuštěn v 25% vodném dioxanu (160 ml), byl přidán uhličitan draselný (7,1 g, 51 mmol) a směs byla ochlazena na 0 °C. Ve dvou dávkách byl poté přidán diterc.butyldikarbonat (11,6 g, 53 mmol). Směs byla poté ponechána ohřát na pokojovou teplotu přes noc. Surová reakční směs byla odpařena do sucha, byla přidána voda (150 ml) a poté nasycený vodný roztok hydrogensíránu draselného (dokud pH = asi 3). Organická látka byla extrahována methylenchloridem (2 x 150 ml), vysušena síranem sodný, přefiltrována a odpařena za sníženého tlaku, čímž byl získán terc.butyl (2R)-2-fluor-3-hydroxypropylkarbamat (9,5 g, 100 %) jako bezbarvý olej.

• <· • · • · ·· ·· •« · · · · · · · · · · ··· · · · · ·· · • ····« ·· · · · · · • · · · · · · · · • · · ·· ·* · · · · »··· ^XH NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 4,82 - 5, 04 (br s, 1H) , 4,62 4,72 (m, 0,5 Η), 4,48 - 4,58 (m, 0,5 Η) , 3, 62 - 3,72 (m, 2H), 3,32 - 3,62 (m, 2H(, 3,20 - 3,44 (br s, 1H) , 1,48 (s, 9H) .

Příklad 111 terč.Butyl (2R)-2-fluor-3-jodpropylkarbamat (meziprodukt sloučeniny uvedené v příkladu 5)

Imidazol (26,6 g, 0,39 mol) byl rozpuštěn v methylenchloridu (400 ml) při pokojové teplotě. Byl přidán jod (102,5 g, 0,39 mol) a reakční směs byla míchána 10 min při pokojové teplotě a poté byla ochlazena na 0 °C. Po dávkách byl během 10 minut přidán trifenylfosfin (102,5 g, 0,39 mol) tak, aby vnitřní teplota zůstala pod 10 °C.

Po kapkách byl přidán roztok terc.butyl (2R)-2-fluor-2hydroxypropylkarbamatu (60,4 g, 0,31 mol) v methylenchloridu (100 ml). Po dokončení přídavku terč.butyl(2R)-2-fluor-2-hydroxypropylkarbamatu byl přidán další methylenchlorid (200 ml). Reakční směs byla ponechána ohřát na pokojovou teplotu a v míchání se pokračovalo 17 h. Reakční směs byla přefiltrována přes lože Celit® (50 g) a byla promyta dalším methylenchloridem. Filtrát byl odpařen za sníženého tlaku a přečištěn silikagelovou kolonovou chromatografií za eluce methylenchloridem. Tato procedura dala terč.butyl(2R)-2-fluor-3-jodpropylkarbamat jako bílou pevnou látku (64,7 g, 68 %).

^XH NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 4,80 - 5,10 (br s, 1H) , 4,58 4,72 (m, 0,5 Η), 4,42 - 4,56 (m, 0,5 Η), 3,48 1H), 3,20 - 3,46 (m, 3H), 1,48 (s, 9H).

3,70 (m,

• ·

Příklad 112

Methyl (2S) -(3-dibenzylamino)-2-fluorpropanoat (meziprodukt sloučeniny uvedené v příkladu β)

Methyl (2R)-(dibenzylamino)-3-hydroxypropanoat (231,7 g, 0,77 mol) byl rozpuštěn v THF (850 ml) a po kapkách byl pomalu přidán roztok DAST (196 g, 1,2 mol) v THF (400 ml). Jakmile byl přídavek u konce, reakční směs byla míchána další 1,5 h. TLC analýzou byla indikována spotřeba výchozí látky. Reakční směs byla poté ochlazena na 0 °C a poté byla zředěna pomalým přídavkem vody (1,5 1) a poté neutralizována přídavkem pevného hydrogenuhličitanu sodného. Jakmile byla směs neutrální, byla přidána směs koncentrovaný hydroxid amonný/nasycený roztok chloridu sodného 1:1a reakční směs byla extrahována ethylacetátem a odpařena za sníženého tlaku. Surová směs byla přečištěna silikagelovou kolonovou chromatografií za eluce směsí ethylacetát : hexany (1 : 4), čímž byla získána požadovaná sloučenina (188,3 g, 62 %) jako olej.

³Η NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,18 - 7,38 (m, 10 Η) , 5,12 5,17 (m, 0,5 Η) , 4,95 - 5,00 (m, 0,5 Η) , 3,81 - 3,87 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 3,49 - 3,55 (, 2H), 2,90 - 3,12 (m, 2H).

Příklad 113 (2S)-3-(Dibenzylamino)-2-fluor-l-propanol (meziprodukt sloučeniny podle příkladu 6)

Tetrahydroboritan lithný (17,7 g, 0,81 mol) byl převeden do suspenze v THF (400 ml) pod dusíkovou atmosférou a ochlazen na -15 °C za míchání. Methyl (2S)-3(dibenzylamino)-2-fluorpropanoat (188,3 g, 0,62 mol) byl převeden do suspenze v THF (400 ml) a byl po kapkách přidán do směsi. Po dokončení přídavku byla reakční směs ponechána ·· ·· *· • ·» · * • e * ohřát na pokojovou teplotu a míchat při této teplotě 3 h. TLC analýza indikovala dokončení reakce spotřebování výchozí látky. Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a opatrně zředěna nasyceným vodným roztokem chloridu amonného (300 ml). Byla přidána další voda (400 ml) a reakční směs byla extrahována ethylacetátem (2 x 200 ml) a organická fáze byla odpařena za sníženého tlaku. Surový zbytek byl rozpuštěn v 2N kyselině chlorovodíkové a vodná fáze byla promyta dvakrát etherem. Vodná fáze byla zalkalizována (pH = asi 10) pomocí 80% hydroxidu amonného v solance, extrahována ethylacetátem, vysušena bezvodým síranem sodným, přefiltrována a odpařena za sníženého tlaku, čímž byl získán (2S)-(3-dibenzylamino)-2-fluor-l-propanol (156,6 g, 92 %) jako žlutý olej.

⁴Η NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,15 - 7,38 (m, 10H) , 4,65 - 4,78 (m, 0,5 H), 4,48 - 4,58 (m, 0,5 H), 3,50 - 3,82 (m, 6H), 2,70 - 2,88 (m, 2H).

Příklad 114 (2S)-3-Amino-2-fluor-l-propanol (meziprodukt sloučeniny uvedené v příkladu 6) (2S)-(3-Dibenzylamino)-2-fluor-l-propanol (39,1 g,

0,14 mol) byl rozpuštěn v ethanolu (300 ml). Bylo přidáno 10 % hmotn. hydroxidu palladnatého (5,0 g) a směs byla umístěna na protřepávač Parr® pod atmosférou vodíku (55 psi) přes noc. Když nebyla pozorována další spotřeba vodíku, směs byla přefiltrována přes lože Celit®. Do ethanolového roztoku byla přidána další čerstvá várka hydroxidu palladnatého (5 g) a směs byla opět podrobena hydrogenačním podmínkách, jak jsou popsány výše, po dobu 12 h. Když nebyla pozorována další spotřeba vodíku, směs byla přefiltrována přes Celit®. Opět byla k ethanolovému roztoku přidána čerstvá dávka hydroxidu palladnatého (5 g) a znovu ·· • · · · • · ·· • · · · fc • 1 · ·

A * ·· • · · • · · ·· A«f · byl podroben výše popsaným hydrogenačním podmínkám po dobu 12 h. Surová reakční směs byla přefiltrována přes Celit®a odpařena za sníženého tlaku, čímž byl získán (2S)-3-amino2-fluor-l-propanol jako bledě žlutý olej (13,3 g, 100 %).

^XH NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 4,78 - 5,00 (bs s, 3H) , 4,49 4,62 (m, 0,5 Η), 4,32 - 4,46 (m, 0,5 Η) , 3,54 - 3,70 (m,

2H), 2,70 - 2,96 (m, 2H).

Příklad 115 terc.Butyl (2S)-2-fluor-3-hydroxypropylkarbamat (meziprodukt sloučeniny uvedené v příkladu 6) (2S)-3-Amino-2-fluor-l-propanol (38,6 g, 0,41 mmol) byl rozpuštěn v 25% vodném dioxanu (1,4 ml), byl přidán uhličitan draselný (60,1 g, 0,46 mmol) a poté diterc.butyldikarbonat (99,5 g, 0,46 mol). Směs byla míchána přes noc. TLC analýza indikovala naprostou spotřebu výchozí látky. Surová reakční směs byla odpařena do sucha, byla přidána voda (300 ml) a poté nasycený vodný roztok hydrogensíranu draselného (dokud pH = asi 3). Organická látka byla extrahována dvakrát methylenchloridem, vysušena síranem sodným, přefiltrována a odpařena za sníženého tlaku, čímž byl získán terc.butyl (2S)-2-fluor-3hydroxypropylkarbamat (79,5 g, 99 %) jako žlutý olej.

³Η NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 4,82 - 5,04 (br s, 1H) , 4,62 4,72 (m, 0,5 Η), 4,48 - 4, 58 (m, 0,5 Η) , 3,62 - 3,72 (m, 2H), 3,32 - 3,62 (m, 2H) , 3,20 - 3,44 (br s, 1H) , 1,48 (s, 9H) .

Příklad 116 terc.Butyl (2S)-2-fluor-3-jodpropylkarbamat (meziprodukt sloučeniny uvedené v příkladu 6) • 4« ·· ·· ·· ·*

4 r 4 4 « 4 ···*

4 4 · « »· · * ·

494 # · í · · » 4 · 4 * · · · · » e e *

494 ·· 9* 4· ·· 4994

Imidazol· (19,8 g, 0,29 mol) byl rozpuštěn v methylenchloridu (900 ml) při pokojové teplotě. Byl přidán jod (73,9 g, 0,29 mol) a reakční směs byla míchána 10 min při pokojové teplotě a poté byla ochlazena na 0 °C. Po dávkách byl během 10 minut přidán trifenylfosfin (76,3 g, 0,29 mol) tak, aby vnitřní teplota zůstala pod 10 °C.

Po kapkách byl přidán roztok terc.butyl (2S)-2-fluor-3hydroxypropylkarbamatu (45,0 g, 0,23 mol) v methylenchloridu (300 ml). Reakční směs byla ponechána ohřát na pokojovou teplotu a v míchání se pokračovalo 12 h. Reakční směs byla přefiltrována přes lože Celit® a byla promyta dalším methylenchloridem. Filtrát byl odpařen za sníženého tlaku a přečištěn silikagelovou kolonovou chromatografií za eluce methylenchloridem. Tato procedura dala terc.butyl (2S)-2-fluor-3-jodpropylkarbamat jako bílou pevnou látku (42,5 g, 62 %).

⁷Η NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 4,80 - 5,10 (br s, 1H) , 4,58 4,72 (m, 0,5 Η), 4,42 - 4,56 (m, 0,5 Η), 3,48 - 3,70 (m, 1H), 3,20 - 3,46 (m, 3H), 1,48 (s, 9H).

Příklad 117

Ethyl (fluormethyl)(1,1-diethoxyethyl)fosfinat (meziprodukt sloučeniny uvedené v příkladu 7)

Hydrid sodný (1,4 g, 57,1 mmol) byl převeden do suspenze v THF (50 ml) v tlakové lahvi pod dusíkovou atmosférou a ochlazen na -10 °C za míchání. Ke směsi byl přidán po kapkách ethyl (1,1-diethoxyethyl)fosfinat (10,0 g, 47,6 mmol) v THF (20 ml) během 10 minut; vnitřní teplota byla udržována během přídavku pod 0 °C. Po dokončení přídavku byla reakční směs ponechána míchat při této teplotě 90 minut. Baňka byla ochlazena na -78 °C a do reakční směsi byl nakondenzován plynný chlorfluormethan (9,7 g, 142,8 mmol). Septum bylo odstraněno a baňka byla ··· · · · · · · · « ··· · · · · ··· · · • · · · · · · * «·· t · ·· · · ·· · · ·» uzavřena šroubovým uzávěrem. Baňka byla poté ponechána ohřát na pokojovou teplotu a poté byla ohřátá na 50 °C po dobu 24 h. Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a opatrně zředěna vodou (25 ml). K reakční směs byl přidán methylenchlorid a emulze byla přefiltrována přes lože Celit® (20 g). vodná fáze byla extrahována methylenchloridem (2 x 100 ml), vysušena bezvodým síranem hořečnatým, organická fáze byla odpařena za sníženého tlaku, čímž byl získán surový produkt jako bledě žlutý olej. (6,93 g). Surový zbytek byl přečištěn silikagelovou kolonovou chromatografií (kolona 6 x 25 cm) za eluce 20% acetonem v hexanech. Tato procedura vedla k ethyl (fluorpmethyl)(1,1-diethoxyethyl)fosfinatu jako čirému bezbarvému oleji (4,4 g, 42 %).

³H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 4,94 - 4,54 (m, 2H) , 4,32 - 4,20 (m, 2H(, 3,82 - 3,54 (m, 4H(, 1,60 - 1, 44 (m, 3H) , 1,40 1,28 (m, 3H), 1,26 - 1,08 (m, 6H).

Příklad 118

Ethyl (3-(N-(terč.butoxykarbonyl)amino-l-fluor-2oxopropyl)(1,1-diethoxyethyl)fosfinat (meziprodukt sloučeniny uvedené v příkladu 7)

K roztoku diisopropylaminu ((2,5 ml, 14,56 mmol, 3,5 ekv.) v THF (30 ml) při -10 °C bylo po kapkách přidáno (asi 10 minut) n-BuLi (1,4 M v hexanech, 9,0 ml, 14,5 mmol). Po 10 minutách byla reakční směs ochlazena na -78 °C a po kapkách byl během 10 minut přidán roztok ethyl (fluormethyl)(1,1-diethoxyethyl)fosfinatu (2,0 g, 8,26 mmol, 2 ekv.) v THF (10 ml). Po přídavku byla reakční směs míchána při -78 °C 1 h. Během 10 minut byl přidán roztok methylesteru N-Boc-glycinu (0,8 g, 4,1 mmol) v THF (10 ml) a to takovým způsobem, aby vnitřní teplota byla udržována pod -70 °C. Poté, co byl přídavek ukončen, byla směs • · smíchána při -78 °C 1 h. Reakční směs byla zředěna kyselinou octovou (1 ml, 14,5 mmol) a poté byla ohřátá na pokojovou teplotu. K reakční směsi byl přidán nasycený vodný roztok chloridu sodného (75 ml) a organická fáze se oddělila. Vodná fáze byla poté extrahována ethylacetátem (2 x 75 ml). Spojené organické fáze byly vysušeny bezvodým síranem sodným za sníženého tlaku, čímž byl získán surový produkt jako bledě žlutý olej (2,69 g). Surový produkt byl poté přečištěn kolonovou chromatografií (kolona 2 x 35 cm) za eluce 40% ethylacetátem v hexanech. Tato metoda vedla k (3-N-(terc.butoxykarbonyl)amino)-1-fluor-2-oxopropyl)(1,1diethoxyethyl)fosfinatu jako čirému bezbarvému oleji (0,73 g, 44 %) .

^XH NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 5,78 - 5, 24 (m, 2H) , 4,52 - 4,08 (m, 4H), 3,94 - 3,50 (m, 4H), 1,62 - 1,51 (m, 3H), 1,50 1,32 (m, 3H), 1,42 (s, 9H), 1,30 - 1,12 (m, 6H).

Příklad 119

Ethyl (3-(N-(terc.butoxykarbonyl)amino-l-fluor-2hydroxypropyl) (1,1-diethoxyethyl)fosfinat (meziprodukt sloučeniny uvedené v příkladu 7)

K roztoku ethyl (3-(N-(terc.butoxykarbonyl)amino-lfluor-2-oxopropyl)(1,1-diethoxyethyl)fosfinatu (0,7 g, 1,8 mmol) v methanolu (30 ml) při -5 °C pod atmosférou dusíku byl přidán v jedné dávce tetrahydroboritan sodný (76 mg,

2,0 mmol). Došlo k slabě exotermické reakci; avšak vnitřní teplota byla udržována pod -2 °C. Reakční směs byla míchána při 0 °C 1 h. Reakční směs byla zředěna nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (5 ml). Surová směs byla odpařena za sníženého tlaku. Surový zbytek byl extrahován ethylacetátem (30 ml), promyt nasyceným vodným roztokem chloridu sodného (5 ml) a vysušen bezvodým síranem hořečnatým. Odstranění rozpouštědla za sníženého tlaku

vedlo k surovému produktu jako bledě žlutému oleji (58 mg) . Přečištění kolonovou chromatografií dalo 2 frakce, které jevily shodu s různými diatereomery ethyl (3-(N(terc.butoxykarbonyl)amino-1-fluor-2-hydroxypropyl)(1,1diethoxyethyl)fosfinatu. Méně polární frakce se jevila jako směs dvou diastereomerů v pomru 1 : 1 (210 mg, 29 %) . Naproti tomu více polární frakce byla převažující jeden diastereomer, jak bylo zjištěno analýzou ¹H NMR (190 mg, 26 %) · ¹H NMR více polární sloučeniny (300 MHz, CDC1₃) δ 5,32 5,04 (br s, 1H), 4,88 - 4,82 (m, 0,5H), 4,72 - 4,68 (m, 0,5H), 4,40 - 4,08 (m, 4H), 3,90 - 3,26 (m, 6H), 1,66 1,52 (m, 3H), 1,50 - 1,32 (m, 3H), 1,44 (s, 9H), 1,30 1,12 (m, 6H).

Příklad 120

Ethyl 3-[(diethoxymethyl)(ethoxy)fosforyl]-2-fluorbutanoat (meziprodukt sloučeniny uvedené v příkladu 8)

Směs ethyl(diethoxymethyl)fosfinatu (21,7 g, 110 mmol) a 1,1,1,3,3,3-hexamethyldisilazanu (23,3 ml, 110 mmol) byla vařena pod zpětným chladičem 2 h pod argonovou atmosférou. Směs byla ochlazena na pokojovou teplotu a poté byla přidána diastereomerní směs ethyl 2-fluorbut-2-enoatu (14,6 g, 110 mmol). Reagenty byly zahřátý na 80 °C po dobu jednoho dne a na 120 °C po dobu 2 hodin pod a atmosférou argonu. Směs byla ochlazena na pokojovou teplotu a byla přidána další porce trimethylsilylem aktivovaného ethyl (diethoxymethyl)fosfinatu (tento byl připraven z ethyl(diethoxymethyl)fosfinatu (21,7,0 g, 110 mmol) a 1,1,1,3,3,3-hexamethylsilazanu (23,3 ml, 110 mmol) stejným způsobem jako výše). Směs byla zahřáta na 100 °C po dobu 3 dnů a byla přidána ještě další porce trimethylsilylem aktivovaného ethyl(diethoxymethyl)fosfinatu. Směs byla • · ···· «·· * · · · » ·· ·· ·· «··· zahřáta na 100 °C po dobu tří dnů pod atmosférou argonu, ochlazena na pokojovou teplotu a poté zředěna ethylacetátem (300 ml). Roztok byl promyt IN HCI (2 x 200 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného. Organická vrstva byla vysušena síranem hořečnatým, přefiltrována a odpařena, čímž bylo získáno 42,0 g žlutého oleje. Zbytek byl přečištěn chromatografií na za vlhka plněné silikagelové koloně za eluce směsí methylenchlorid/methanol (98 : 2). Odpovídající frakce byly spojeny a odpařeny, čímž bylo získáno 3,6 g (10 %) ethyl-3-[(diethoxymethyl)(ethoxy)fosforyl]-2fluorbutanoatu jako čirého oleje.

³Η NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 4,7 - 4,8 (m, 1H) , 4,2 - 4,4 (m,

4H) , 3,6 - 4,0 (m, 4H) , 2,6 - 2,9 (m, 1H (, 1,2 - 1,4 (m, 12H) .

Příklad 121

Ethyl 3-amino-2-fluor-1-methyl-3oxopropyl(diethoxymethyl)fosfinat (meziprodukt sloučeniny uvedené v příkladu 8)

K roztoku ethyl 3-[(diethoxymethyl)(ethoxy)fosforyl]2-fluorbutanoatu (1,8 g, 5,5 mmol) v ethanolu (3 ml) byl přidán nasycený roztok hydroxidu amonného (14,8 M, 0,5 ml,

7,4 mmol). Roztok byl míchán 24 h při 40 °C a odpařen, čímž bylo získáno 1,6 g (97 %) diasteromerní směsi ethyl 3amino-2-fluor-l-methyl-3-oxopropyl(diethoxymethyl)fosfinatu jako čirého oleje.

^ΧΗ NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5,7 - 5,7 (m, 2H) , 4,9 - 5,5,6 (m, 1H), 4,7 - 4,8 (m, 1H), 4,1 - 4,4 (m, 2H), 3,8 - 4,0 (m, 4H), 2,8 - 3,0 (m, 1H), 1,2 - 1,4 (m, 12H).

Farmaceutické přípravky

Sloučenina vzorce (I) podle tohoto vynálezu může být použita jako aktivní složka farmaceutického přípravku pro orální, rektální, epidurální, intravenózní, intramuskulární, subkutánní, nazální podávání a podávání infuzí nebo jakýmkoli jiným vhodným způsobem podávání. Výhodný způsob podávání je orální nebo injekcí/infúzí.

Farmaceutické přípravky obsahují sloučeninu podle tohoto vynálezu v kombinaci s jednou nebo více farmaceuticky přijatelnými složkami. Konečné dávkovači formy se vyrábí známými farmaceutickými způsoby. Obvykle je množství aktivních složek mezi 0,1 a 95 % hmotnosti přípravku, výhodně mezi 0,2 a 20 % hmotnosti u přípravků pro parenterální použití a výhodně mezi 1 a 50 % hmotnosti u přípravků pro orální podávání.

U přípravy farmaceutických přípravků obsahujících sloučeninu podle tohoto vynálezu ve formě pevné dávkové jednotky pro orální podávání může být vybraná sloučenina smíchána s pevnými, práškovými farmaceuticky přijatelnými složkami (mezi nimi například s rozvolňovadly a lubrikanty). Směs se poté lisuje do granulí, tablet, kapslí nebo pastilek.

Dávkové jednotky pro rektální podávání mohou být připraveny ve formě čípků; ve formě želatinové rektální kapsle; ve formě snadno připravitelného mikroklystýru; ve formě suché kompozice pro klystýr k rekonstituci ve vhodném rozpouštědle před podáváním.

Kapalné přípravky pro orální podávání mohou být připraveny ve formě sirupů nebo suspenzí, nebo ve formě suché směsí k rekonstituci s vhodným rozpouštědlem před použitím.

Roztoky pro parenterální podávání mohou být připraveny jako roztok sloučeniny podle vynálezu ve farmaceuticky * · ·

přijatelném rozpouštědle a jsou rozděleny do jednotkových dávek ve formě ampuli. Mohou být také připraveny jako suché přípravky k rekonstituci s vhodným rozpouštědlem bezprostředně před použitím.

Typické denní dávky aktivní sloučeniny budou záviset na různých faktorech, jako například na individuálních požadavcích každého pacienta, způsobu podávání a chorobě. Obecně platí, že dávky budou v rozmezí 1 pg až 100 mg na den a kg tělesné hmotnosti, výhodně 10 pg až 20 mg na den a kg tělesné hmotnosti.

Biologické testy

Vazebné zkoušky [³H]GABA radioligandu

Krysí synaptické membrány byly připraveny z celých mozků samců krys Sprague Dawley v podstatě dříve popsaným způsobem (Zukin, et al. (1974) Proč. Nati. Acad. USA 71, 4802 - 4807). Kompetitivní zkouška [³H]GABA, modifikovaná oproti Olpe et al. (1990) Eur. J. Pharmacol. 187, 27 - 38) byla provedena v 200 pl TCI (Tris Calcium Isoguvacine) pufru (50 mM Tris (tri(hydroxymethyl)aminomethan), pH 7,4,

2,5 mM CaCl₂ a 40 pM isoguvacinu) obsahujícím 20 nM [³H]GABA (specifická aktivita: 3 Tera Becquerel (TBq)/mmol), testovanou sloučeninu nebo rozpouštědlo a 80 pg synaptického membránového proteinu za použití 96 jamkových destiček. Po inkubaci po dobu 12 - 20 min při pokojové teplotě byla inkubace ukončena rychlou filtrací přes filtr ze skleněných vláken (Printed filtermat B filtry, Wallac), které byly předzpracovány pomocí 0,3% polyethyleniminu za použití harvesteru 96 jamkové destičky (Skatron nebo Tomtec). Filtry byly promyty pufrem obsahujícím 50 mM Tris (tris(hydroxymethyl)aminomethanu) a

2,5 mM CaCl₂, pH 7,4, při 4 °C a poté vysušeny při 55 °C. Scintilační desky MeltiLex B/HS (Wallac) byly připevněny k filtru a radioaktivita byla stanovena scintilačním čítačem Microbeta (Wallac).

Výsledky a diskuse

Bylo zjištěno, že sloučeniny podle tohoto vynálezu mají překvapivě vysoké afinity a potenci pro GABA_breceptor, jak bylo jištěno nízkými IC₅₀ a EC₅₀ ve vazebných zkouškách a ileových zkouškách. Potence ve vztahu k inhibicí TLOSR se týkala afinity a aktivity ke GABA_breceptoru. Vedlejší účinky na CNS (jak bylo stanoveno snížením tělesné teploty u myší) byly pozorovány pouze u dávek vyšších než jsou terapeutické dávky inhibující TLOSR u psích modelů. Rozdíl mezi terapeutickou dávkou (inhibice TLOSR) a dávkou způsobující vedlejší účinky je proto neočekávaně vysoký.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Sloučenina obecného vzorce I kde

R_x představuje vodík;

R₂ představuje hydroxyskupinu, atom fluoru nebo oxoskupinu;

R₃ představuje vodík;

R₄ představuje vodík;

a její farmaceuticky přijatelné soli, solváty a stereoizomery, s výjimkou racemátu kyseliny (3-amino-2-hydroxypropyl)fosfinové.
2. Sloučenina podle nároku 1, -2-fluorpropyl)fosfinová.

kterou je kyselina (3-amino3. Sloučenina podle nároku 2, kterou je -amino-2-fluorpropyl)fosfinová.

kyselina (2R)-(34. Sloučenina podle nároku 2, kterou je kyselina (2S)-(3-amino-2-fluorpropyl)fosfinová.

*0 H 9 9 9 9 9 9

9 9 ···· ···· • 9 «··« ·» «

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 · · • « · ·· ·· »· 9 9 9 9 9 9 (náhradní strana)

5. Sloučenina podle nároku 1, kterou je kyselina (3-amino-2-oxopropyl)fosfinové.

6. Sloučenina podle nároku 1, kterou je kyselina (2S)—(3— -amino-2-hydroxypropyl)fosfinové.

7. Sloučenina podle nároku 1, kterou je kyselina (2R)-(3-amino-2-hydroxypropyl)fosfinové.

8. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7 pro použití v terapii.

9. Použití sloučeniny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7 pro výrobu léčiva pro inhibici krátkodobých relaxací spodního ezofageálního svěrače.

10. Použití sloučeniny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7 pro výrobu léčiva pro ošetření chorob spojených s gastroezofageálním refluxem.

11. Použití sloučeniny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7 pro výrobu léčiva pro ošetření regurgitace u dětí.

12. Použití sloučeniny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7 pro výrobu léčiva pro ošetření s GORD- nebo non-GORD spojeným astmatem, říhání, kašle, bolesti, závislostí na kokainu, škytavky, IBS, dyspepsie, zvracení a nocicepce.

13. Způsob ošetření krátkodobých relaxací spodního ezofageálního svěrače, vyznačující se tím, že zahrnuje ošetření subjektu trpícího tímto stavem pomocí

99 99 • * f « • · f · · » · · · • r »i (náhradní strana) farmaceutického prostředku obsahujícího sloučeninu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7.

14. Způsob ošetření chorob spojených s gastroezofageálním refluxem, vyznačující se tím, že zahrnuje ošetření subjektu trpícího tímto stavem pomocí farmaceutického prostředku obsahujícího sloučeninu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7.

15. Způsob ošetření regurgitace u dětí, vyznačuj ίο i se t í m, že zahrnuje ošetření subjektu trpícího tímto stavem pomocí farmaceutického prostředku obsahujícího sloučeninu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7.

16. Způsob ošetření s GORD- nebo non-GORD spojeného astmatu, říhání, kašle, bolesti, závislostí na kokainu, škytavky, IBS, dyspepsie, zvracení nebo nocicepce, vyznačující se tím, že zahrnuje ošetření subjektu trpícího tímto stavem pomocí farmaceutického prostředku obsahujícího sloučeninu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7.

17. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní složku terapeuticky přijatelné množství sloučeniny definované v kterémkoli z nároků 1 až 7, případně ve spojení s ředidly, vehikuly nebo inertními nosiči.

18. SI oučenina vybraná ze souboru sestávajícího z ethyl-[3-[(diethoxymethyl)(ethoxy)fosforyl]-2-fluorpropanoatu], ethyl-[(3-amino-2-fluor-3-oxopropyl)(diethoxymethyl)fosfinatu], ethyl-[(2R)-(3-chlor-2-hydroxypropyl)(1,1-diethoxyethyl) fosfinatu], ethyl-[(2S)-(3-amino-2-hydroxypropyl) (1,1-diethoxyethyl)fosfinatu], ethyl-[(2S)- (345 >» (náhradní • ··· ί * *·> *· strana) ·*

-chlor-2-hydroxypropyl)(1,1-diethoxyethyl)fosfinatu], ethyl-[(2R)-(3-amino-2-hydroxypropyl)(1,1-diethoxyethyl) fosfinatu], ethyl-[[3-[N-(terc-butoxykarbonyl)amino] -2-oxopropyl] (1,1-diethoxyethyl)fosfinatu], (2R)-3-(dibenzylamino)-2-fluor-l-propanolu, (2R)-3-amino-2-fluor-1-propanolu, terc-butyl-[(2R)-2-fluor-3-hydroxypropylkarbamatu], terc-butyl-[(2R)-2-fluor-3-jodpropylkarbamatu], methyl-[(2S)-3-(dibenzylamino)-2-fluorpropanoatu], (2S)-3-(dibenzylamino)-2-fluor-l-propanolu, (2S)-3-amino-2-fluor-l-propanolu, terc-butyl-[(2S)-2-fluor -3-hydroxypropylkarbamatu], terc-butyl-[(2S)-2-fluor-3-jodpropylkarbamatu], ethyl-[(fluormethyl)(1,1-diethoxyethyl) fosfinatu], ethyl-[(3-(N-(terc-butoxykarbonyl) amino-l-fluor-2-oxopropyl)(1,1-diethoxyethyl) fosfinatu], ethyl-[(3-(N-(terc-butoxykarbonyl)amino—1—fluor-2-hydroxypropyl)(1,1-diethoxyethyl)fosfinatu], ethyl-[3-[(diethoxymethyl)(ethoxy)fosforyl]-2-fluorbutanoatu] a ethyl-[3-amino-2-fluor-l-methyl-3-oxopropyl(diethoxymethyl)fosfinatu].

····· ·· ··· · ·

24. Farmaceutická kompozice podle nároku 21 pro použití při ošetření regurgitace u dětí.

25. Způsob přípravy sloučeniny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 11, kde

A) sloučenina vzorce II (II) kde Ri a R₃ jsou definovány stejně jako výše ve vzorci I, X je vodík nebo chránící skupina, jako je -CCH₃ (OCH₂CH₃) ₂,

Z je chránící skupina, jako je t-butoxykarbonyl, a Y je vodík nebo chránící skupina, jako je nižší alkyl,

a) se převede případně N-alkylační reakcí za účelem zavedení R₄, pokud se u R₄ požaduje, aby nepředstavovala vodík, a poté hydrolytickou reakcí pro získání sloučeniny vzorce III kde Ri, R₃ a R₄ jsou definovány stejně jako výše u vzorce I, nebo

b) se převede redukční reakcí, případně N-alkylační reakcí, pokud se u R₄ požaduje, aby nepředstavovala vodík, a konečně hydrolytickou reakcí na sloučeninu vzorce IV (IV) kde Ri, R₃ a R₄ jsou definovány stejně jako výše u vzorce I, nebo

c) se převede redukční reakcí následovanou deoxohalogenační reakcí, případně N-alkylační reakcí za účelem zavedení R₄, pokud se u R₄ požaduje, aby nepředstavovala vodík, a konečně hydrolytickou reakcí na sloučeninu vzorce V kde Ri, R3 a R₄ jsou definovány stejně jako výše u vzorce I, a Halo je atom halogenu, a případně se jakákoli z výše uvedených sloučenin III, IV nebo V převede na jinou chemickou sloučeninu vzorce III, IV nebo V a/nebo výsledná směs izomerů se rozdělí na jednotlivé izomery a/nebo výsledná sůl se přemění na volnou sloučeninu vzorce III, IV nebo V a/nebo na jinou sůl a/nebo se převede výsledná volná sloučenina III, IV nebo V na sůl v souladu s výše uvedenou definicí;

nebo B) sloučenina vzorce VI • · kde Ri a R₃ jsou definovány stejně jako ve vzorci I, X je vodík nebo chránící skupina, jako je -CCH₃ (OCH₂CH₃) ₂, T je skupina, která může být převedena na skupinu -NH₂, a Y je vodík nebo chránící skupina, jako je nižší alkyl,

a) se převede reakcí, kde trimethylsilylová skupina je nahrazena atomem vodíku, reakcí, kde T skupina definovaná u vzorce VI se převede na -NHR₄, kde R₄ je definována stejně jako výše u vzorce I, a konečně hydrolytickou reakcí za účelem získání sloučeniny vzorce IV (IV) kde Ri, R₃ a R₄ jsou definovány stejně jako výše u vzorce I, nebo

b) se převede reakcí, kde trimethylsilylová skupina je nahrazena atomem vodíku, oxidační reakcí, reakcí, kde T skupina definovaná u vzorce VI se převede na -NHR₄, kde R₄je definována stejně jako výše u vzorce I, a konečně hydrolytickou reakcí za účelem získání sloučeniny vzorce III

OH

R₄ (III) • · • · kde Ri, R₃ a R₄ jsou definovány stejně jako výše u vzorce I, nebo

c) se převede reakcí, kde trimethylsilylová skupina je nahrazena vodíkem, deoxohalogenační reakcí, reakcí, kde T skupina, jak je definována u vzorce VI, se přeměněni na NHR₄, kde R₄ je definována stejně jako výše u vzorce I, a konečně hydrolytickou reakcí za účelem získání sloučeniny vzorce V kde Ri, R₃ a R₄ jsou definovány stejně jako výše u vzorce I, a Halo je atom halogenu, a případně výše uvedená výsledná sloučenina III, IV nebo V se převede na jinou chemickou sloučeninu vzorce III, IV nebo V a/nebo výsledná směs izomerů se rozdělí na jednotlivé izomery a/nebo výsledná sůl se převede na volnou sloučeninu vzorce III, IV nebo V a/nebo na jinou sůl· a/nebo se převede výsledná volná sloučenina III, IV nebo V na sůl v souladu s výše uvedenou definicí;

nebo C) sloučenina vzorce VII

Halo μ „ —X

OY (VII) • · kde Rx je definována stejně jako ve vzorci I, X je vodík nebo chránící skupina, jako je -CCH₃ (OCH₂CH₃) ₂, U je elektrony přitahující skupina, jako je například -CN nebo CO₂Et, která může být převedena na skupinu -CH₂NH₂, a Y je vodík nebo chránící skupina, jako je nižší alkyl, a Halo je atom halogenu, se převede reakcí, kde skupina U se přeměňuje na -NHR₄, kde R₄ je definována stejně jako výše u vzorce I, a hydrolytickou reakcí za účelem získání sloučeniny vzorce VIII kde Ri a R₄ jsou definovány stejně jako ve vzorci I a Halo je atom halogenu, a případně se převede výše uvedená výsledná sloučenina VIII na jinou chemickou sloučeninu vzorce IX a/nebo výsledná směs izomerů se rozdělí na jednotlivé izomery a/nebo výsledná sůl se převede na volnou sloučeninu vzorce VIII a/nebo na jinou sůl a/nebo se převede výsledná volná sloučenina VIII na sůl v souladu s výše uvedenou definici;

nebo D) sloučenina vzorce X, případně jako individuální (IX) kde Ri, R3 a R₄ jsou definovány stejně jako ve vzorci I,

Z je chránící skupina, jako je t-butyloxykarbonyl, a Halo je atom halogenu, se převede hydrolytickou reakcí na sloučeninu vzorce V kde Ri, R3 a R₄ jsou definovány stejně jako výše u vzorce I, a případně se výše uvedená výsledná sloučenina V převede na jinou chemickou sloučeninu vzorce V a/nebo výsledná směs jednotlivých izomerů se rozdělí na jednotlivé izomery a/nebo výsledná sůl se převede na volnou sloučeninu vzorce V a/nebo na jinou sůl a/nebo se převede výsledná volná sloučenina V na sůl v souladu s výše uvedenou definicí;

nebo E) sloučenina vzorce XI, kde Ri, R3 a R₄ jsou definovány stejně jako výše u vzorce I, X je vodík nebo chránící skupina, jako je -CCH3 (OCH₂CH₃) ₂, a Y je vodík nebo chránící skupina, jako je nižší alkyl, se převede hydrolytickou reakcí na sloučeninu vzorce XII,

R₄

SH

P—H

OH (XII) t · ···· ··· • · · ·· · · · · * * · · * · kde R_iř R₃ a R₄ jsou definovány stejně jako výše u vzorce I, a případně se výše uvedená výsledná sloučenina XII převede na jinou chemickou sloučeninu vzorce XII a/nebo výsledná směs jednotlivých izomerů se rozdělí na jednotlivé Izomery a/nebo výsledná sůl se převede na volnou sloučeninu vzorce XII a/nebo na jinou sůl a/nebo se přemění výsledná volná sloučenina vzorce XII na sůl v souladu s výše uvedenou definicí.

26. Sloučenina vybraná ze skupiny sestávající z ethyl 3[ (diethoxymethyl)(ethoxy)fosforyl]-2-fluorpropanoatu, ethyl (3-amino-2-fluor-3-oxopropyl)(diethoxymethyl)fosfinatu, ethyl (2R)-(3-chlor-2-hydroxypropyl)(1,1diethoxyethyl)fosfinatu, ethyl (2S)-(3-amino-2hydroxypropyl)(1,1-diethoxyethyl)fosfinatu, ethyl (2S)—(3— chlor-2-hydroxypropyl)(1,1-diethoxyethyl)fosfinatu, ethyl (2R)-(3-amino-2-hydroxypropyl)(1,1-diethoxyethyl)fosfinatu, ethyl [3-[N-(terč.butoxykarbonyl)amino]-2-oxopropyl] (1,1diethoxyethyl)fosfinatu, (2R)-3-(dibenzylamino)-2-fluor-lpropanolu, (2R)-3-amino-2-fluor-l-propanolu, terc.butyl(2R)-2-fluor-3-hydroxypropylkarbamatu, terc.butyl (2R)-2-fluor-3-jodpropylkarbamatu, methyl (2S)—3— (dibenzylamino)-2-fluorpropanoatu, (2S)-3-(dibenzylamino)2- fluor-l-propanolu, (2S)-3-amino-2-fluor-l-propanolu, terc.butyl (2S)-2-fluor-3-hydroxypropylkarbamatu, terc.butyl (2S)-2-fluor-3-jodpropylkarbamatu, ethyl (fluormethyl)(1,1-diethoxyethyl)fosfinatu, ethyl (3-(N(terc.butoxykarbonyl)amino-l-fluor-2-oxopropyl)(1,1diethoxyethyl)fosfinatu, ethyl (3—(N— (terč.butoxykarbonyl)amino-l-fluor-2-hydroxypropyl)(1,1diethoxyethyl)fosfinatu, ethyl 3[(diethoxymethyl)(ethoxy)fosforyl]-2-fluorbutanoatu a ethyl
3- amino-2-fluor-1-methyl-3oxopropyl (diethoxymethyl) fosfinatu.·