CZ20021760A3 - Použití anti-CTLA-4 protilátek - Google Patents

Description

Oblast techniky

Předložený vynález se týká použití anti-CTLA-4 protilátek, které mají sekvence aminokyselin odvozené od lidských genů . a dále se týká kompozic s jejich obsahem.

Dosavadní stav techniky

CTLA-4 (cytotoxický T-lymfocytový antigen-4) je člen nadtřídy imunoglobulinů (Ig), což jsou proteiny, které regulují aktivaci T-buněk a Udržují imunologickou homeostázu. Konkrétně se předpokládá, že CD28 a CTLA-4 přinášejí opačné signály, které jsou integrovány T buňkami při určování odezvy na antigen. Výsledek stimulace receptorů T buněk antigeny je řízen kostimulačními signály CD28, stejně tak jako inhibičními signály, odvozenými od CTLA-4. Je také určen interakcí CD28 nebo CTLA-4 na T buňkách s B7 molekulami exprimovanými na buňkách presentujících antigen.

Kwon a kol. PNAS USA 94:8099-103 (1997) demonstrovali, že in vivo protilátkami zprostředkovaná blokáda CTLA-4 podporuje imunitní odezvu proti rakovině prostaty. Yang a kol., Cancer Res .57:4036-41 (1997) zjistili na základě ín vitro a in vivo výsledků, že CTLA-4 blokáda u zvířat s nádory zesiluje jejich schopnost generovat protínádorovou

T-buněčnou odezvu; v tomto modelu byl posilující účinek omezen na časná stádia růstu nádoru. Hurwitz a kol. Proč. Nati. Acad. Sci. USA 95:10067-71 (1998) použitli kombinaci CTLA-4 blokády a vakciny (sestávající z granulocytů-kolonie makrofágů-stimulační faktor exprimujících buněk SMI) pro indukci regrese rodičovských SMI nádorů a to i přes neúčinnost kteréhokoli z obou léčení samotných.

U.S. patent 5,811,097, autoři Allison a kol., se týká x podávání CTLA-4 blokujících činidel pro snížení růstu nádorových buněk. WO 00/37504 (publikovaný 29. června 2000) se týká lidských anti-CTLA-4 protilátek a použití těchto protilátek při léčení rakoviny. WO 01/14424 (publikovaná 1. března 2001) se týká dalších lidských anti-CTLA-4 protilátek a použití takových protilátek při léčení rakoviny. WO 93/00431 (publikovaná 7. ledna 1993) se týká regulace buněčných interakcí s monoklonálními protilátkami, které reagují s CTLA4Ig fúzovaným proteinem. WO 00/32231 (publikovaná 8. června 2000) se týká kombinace CTLA-4 blokujících činidel s nádorovou vakcinou pro stimulaci Tbuněk.

- 3 ·· · • · · • · ·

Podstata vynálezu

Předložený vynález se týká způsobu léčení rakoviny u savce, zahrnující podávání uvedenému savci takového množství antiCTLA-4 protilátky, které je účinné při léčení uvedené rakoviny, přičemž uvedená rakovina je zvolena ze souboru, zahrnujícího následující onemocnění: rakovina plic, rakovina kostí, rakovina slinivky břišní, rakovina kůže, rakovina hlavy nebo krku, kožní nebo intraokulární maligní melanom, rakovina dělohy, rakovina vaječníků, rektální rakovina, rakovina anální oblasti, rakovina žaludku, rakovina trakčníku, rakovina prsu, rakovina varlat, rakovina dělohy, karcinom vejcovodů, karcinom endometria, karcinom čípku děložního, karcinom vagíny, karcinom vulvy, Hodgkinova nemoc, ne-Hodgkinův lymfom, rakovina jícnu, rakovina tenkého střeva, rakovina endokrinního systému, rakovina štítné žlázy, rakovina příštítného tělíska, rakovina nadledvinek, sarkom měkké tkáně, rakovina močových cest, rakovina penisu, rakovina prostaty, chronická nebo akutní leukemie včetně akutní myeloidní leukemie, chronická myeloidní leukemie, akutní lymfoblastová leukemie, chronický lymfocytová leukemie, pevné nádory u dětí, lymfocytový lymfom, rakovina močového měchýře, rakovina ledvin nebo močovodu, karcinom ledvinových buněk, karcinom ledvinné pánvičky, neoplasmy centrálního nervového systému (CNS), primární CNS lymfom, nádorová angiogenese, nádory na páteří, gliom kmene mozkového, adenom hypofýzy, Kaposiho sarkom, rakovina epidermoidu, rakovina skvamózních buněk, lymfom T-buněk, rakoviny indukované vlivem životního prostředí včetně rakovin indukovaných asbestem a kombinace tt ·· ř ♦ · <

» · · « uvedených rakovin. V jednom provedení, způsob také zahrnuje podávání uvedenému savci uvedené protilátky v kombinaci s činidlem zvolený ze souboru, zahrnujícího chemoterapeutické činidlo, rakovinovou vakcinu, imunomodulační činidlo, činidlo proti angiogenesi, antivaskulární činidlo, inhibitor přenosu signálu, antiproliferativní činidlo, činidlo indukující apoptózu a inhibitor dráhy přežívání.

Pokud je protilátka podávána kombinaci chemoterapeutickým činidlem, činidlo může například být zvoleno ze alkylační antibiotikum, buněčného souboru, zahrnujícího inhibitor mitózy, činidlo, anti-metabolit, interkalační inhibitor růstového faktoru, inhibitor cyklu, enzym, inhibitor topoisomerázy, modifikátor biologické odezvy, angiogenese a anti-androgen.

anti-hormon, inhibitor

Pokud je protilátka podávána v kombinaci s inhibitorem přenosu signálu, inhibitor přenosu signálu může například být zvolen ze souboru, zahrnujícího inhibitor receptoru epidermálního růstového faktoru (EGFR - epidermal growth factor receptor), inhibitor vaskulárního endoteliálního růstového faktoru (VEGF - vaskular endothelial growth factor) a inhibitor receptoru erbB2.

V ještě dalším provedení se způsob provádí, když savci se podává množství uvedené protilátky v kombinaci s radiační terapií, kde množství protilátky v kombinaci s radiační terapií je účinné pro inhibici abnormálního růstu buněk nebo léčbu hyperproliferativní poruchy u savce. Způsob může

také být prováděn pro sensibilizaci rakoviny pro léčení ozařováním podáváním savci množství protilátky, které je účinné pro sensibilizaci uvedené rakoviny pro léčení ozařováním. Tento způsob výhodně dále zahrnuje léčení rakoviny ozařováním. Rozumí se, že způsob může být prováděn pro sensibilizaci rakoviny pro léčení protilátkou také ozařováním.

Ve výhodném provedení je savec člověk.

V jednom provedení má protilátka, která se váže k CTLA-4, následující vlastnosti:

vazebná afinita pro CTLA-4 přibližně 10“9 nebo více;
inhibice vazby mezi	CTLA-4	a B7-1 s IC50	přibližně	100	nM
nebo méně;
inhibice vazby mezi	CTLA-4	a B7-2 s IC50	přibližně	100	nM

nebo méně;

posílení produkce IL-2 v testu lidských T buněk 500 μς/ιπΐ nebo více; a zahrnuje těžký řetězec sekvence aminokyselin zahrnující lidské FR1, FR2 a FR3 sekvence aminokyselin, které odpovídají sekvencím genu V_H 3-33 nebo jejich konzervativní substituce nebo somatické mutace, kde FR sekvence jsou vázány s CDR1, CDR2 a CDR3 sekvencemi. Protilátka také může

It 4444 • 4 4 4 44 obsahovat oblast CDR ve svém lehkém řetězci z genu A27 nebo

012.

V dalších provedeních se předložený vynález týká protilátky inhibující vazby mezi CTLA-4 a B7-1 s IC₅o přibližně 10 nM nebo méně, výhodněji přibližně 5 nM nebo méně a nejvýhodnějí přibližně 1 nM.

Alternativně protilátka je v kompetici o vazbu s protilátkou, která má sekvence aminokyselin těžkého a lehkého řetězce protilátky zvolené ze souboru, zahrnujícího

4.1.1, 4.8.1, 6.1.1 a 11.2.1. Například protilátka může vázat epitop, ke kterému se protilátka váže, která má sekvence aminokyselin těžkého a lehkého řetězce protilátky zvolené ze souboru, zahrnujícího 4.1.1, 4.8.1, 6.1.1 a

11.2.1.

V jiném provedení se předložený vynález týká použití protilátky, která zahrnuje těžký řetězec zahrnující sekvence aminokyselin CDR-1, CDR-2 a CDR-3 a lehký řetězec, zahrnující sekvence aminokyselin CDR-1, CDR-2 a CDR-3, protilátky zvolené ze souboru, zahrnujícího 3.1.1, 4.1.1,

4.8.1, 4.10.2, 4.13.1, 4.14.3, 6.1.1, 11.2.1, 11.6.1,

11.7.1, 12,3:1,1 a 12.9.1.1 nebo sekvence, které mají změny ve srovnání s uvedenými CDR sekvencemi zvolené ze souboru, zahrnujícího konzervativní změny, kde uvedené konzervativní změny jsou zvoleny ze souboru, zahrnujícího nahrazení nepolárních zbytků jinými nepolárními zbytky, nahrazení polárních nabitých zbytků jinými polárními nenabitými zbytky, nahrazení polárních nabitých zbytků jinými •ft ·*·♦ — · · · • · ·· • · ···· ···

99 • 9 · 9

9 9 9

9 999

9 9

99

99

9 9

9 · • · · · ·

9999 polárními nabitými zbytky a substituce strukturálně podobných zbytků; nekonzervativní substituce, kde uvedené nekonzervativní substituce jsou zvoleny ze souboru, zahrnujícího substituce polárních nabitých zbytků za polární nenabité zbytky a substituce nepolárních zbytků za polární zbytky, adice a delece. V dalším provedení se předložený vynález týká protilátky obsahující méně než 10, 7, 5 nebo 3 aminokyselinové změny sekvence zárodečné linie ve rámcové (framework - FR) nebo CDR oblasti. V jiném provedení protilátka obsahuje méně než 5 aminokyselinových změn v rámcových oblastech a méně než 10 změn v CDR oblastech. V jednom výhodném provedení protilátka obsahuje méně než 3 aminokyselinových změn v rámcových oblastech a méně než 7 změn v CDR oblastech. Ve výhodném provedení změny v rámcových oblastech jsou konzervativní a změny v CDR oblastech jsou somatické mutace.

Ve výhodném provedení protilátka zahrnuje těžký řetězec zahrnující sekvence aminokyselin CDR-1, CDR-2 a CDR-3 a lehký řetězec zahrnující sekvence aminokyselin CDR-1, CDR-2 a CDR-3 protilátky zvolené ze souboru, zahrnujícího 3.1.1,

4.1.1, 4.8.1, 4.10.2, 4.13.1, 4.14.3, 6.1.1, 11.2.1,

11.6.1, 11.7.1, 12.3.1.1 a 12.9.1.1. V jiném provedení má protilátka sekvence aminokyselin těžkého a lehkého řetězce variabilních oblastí, které jsou stejné jako u protilátky zvolené ze souboru, zahrnujícího 4.1.1, 4.8.1, 6.1.1 a

11.2.1, 11.6.1, 11.7.1, 12.3.1.1 a 12.9.1.1. V jiném provedení protilátka zahrnuje sekvence aminokyselin těžkého řetězce lidského genu 3-33 a sekvence lehkého řetězce lidského genu A27 nebo 012.

<4 44 • 4 4

4 ·

4 4 ·

4 4 »1 «4*4 ♦ « 4 »4· * 4 4

4 4»

4 C ·

• •44 4·4 *4 4#

4 » 4 *4 4

4 444

4 4 «4 *4

Předložený vynález se také týká farmaceutické kompozice pro léčení rakoviny u savce, zahrnující množství lidské antiCTLA-4 protilátky, které je účinné při léčení uvedené rakoviny a farmaceuticky přijatelný nosič, kde uvedená rakovina je zvolena ze souboru, zahrnujícího následující onemocnění: rakovina plic, rakovina kostí, rakovina slinivky břišní, rakovina kůže, rakovina hlavy nebo krku, kožní nebo intraokulární maligní melanom, rakovina dělohy, rakovina vaječníků, rektální rakovina, rakovina anální oblasti, rakovina žaludku, rakovina trakčníku, rakovina prsu, rakovina varlat, rakovina dělohy, karcinom vejcovodů, karcinom endometria, karcinom čípku děložního, karcinom vagíny, karcinom vulvy, Hodgkinova nemoc, ne-Hodgkinův lymfom, rakovina jícnu, rakovina tenkého střeva, rakovina endokrinního systému, rakovina štítné žlázy, rakovina příštitného tělíska, rakovina nadledvinek, sarkom měkké tkáně, rakovina močových cest, rakovina penisu, rakovina prostaty, chronická nebo akutní leukemie, včetně akutní myeloidní leukemie, chronická myeloidní leukemie, akutní lymfoblastová leukemie, chronický lymfocytová leukemie, pevné nádory u dětí, lymfocytový lymfom, rakovina močového měchýře, rakovina ledvin nebo močovodu, karcinom ledvinových buněk, karcinom ledvinné pánvičky, neoplasmy centrálního nervového systému (CNS), primární CNS lymfom, nádorová angiogenese, nádory na páteři, gliom kmene mozkového, adenom hypofýzy, Kaposiho sarkom, rakovina epidermoidu, rakovina skvamózních buněk, lymfom T-buněk, rakoviny indukované vlivem životního prostředí včetně rakovin indukovaných asbestem a kombinace uvedených rakovin. V jednom provedení se předložený vynález týká kombinace farmaceutické kompozice, která také zahrnuje množství chemoterapeutického činidla, rakovinovou vakcinu, imunomodulační činidlo, činidlo proti angiogenesi, antivaskulární činidlo, inhibitor přenosu signálu, antiproliferativní činidlo, činidlo indukce apoptózy nebo inhibitor dráhy přežívání které, v kombinaci s uvedenou protilátkou, jsou účinné při léčení uvedené rakoviny.

Předložený vynález se týká také použití množství lidské anti-CTLA-4 protilátky pro přípravu a kompozice pro léčení rakoviny u savce které je účinné při léčení uvedené rakoviny, kde uvedená rakovina je zvolena ze souboru, zahrnujícího následující onemocnění: rakovina plic, rakovina kostí, rakovina slinivky břišní, rakovina kůže, rakovina hlavy nebo krku, kožní nebo intraokulární maligní melanom, rakovina dělohy, rakovina vaječníků, rektální rakovina, rakovina anální oblasti, rakovina žaludku, rakovina trakčníku, rakovina prsu, rakovina varlat, rakovina dělohy, karcinom vejcovodů, karcinom endometria, karcinom čípku děložního, karcinom vagíny, karcinom vulvy, Hodgkinova nemoc, ne-Hodgkinův lymfom, rakovina jícnu, rakovina tenkého střeva, rakovina endokrinního systému, rakovina štítné žlázy, rakovina příštitného tělíska, rakovina nadledvinek, sarkom měkké tkáně, rakovina močových cest, rakovina penisu, rakovina prostaty, chronická nebo akutní leukemie, včetně akutní myeloidní leukemie, chronická myeloidní leukemie, akutní lymfoblastová leukemie, chronický lymfocytová leukemie, pevné nádory u dětí, lymfocytový lymfom, rakovina močového měchýře, • · · · · · · · · · ♦ ♦ · · · · • · · · · · · · • 0 · 0 · · · · rakovina ledvin nebo močovodu, karcinom ledvinových buněk, karcinom ledvinné pánvičky, neoplasmy centrálního nervového systému (CNS), primární CNS lymfom, nádorová angiogenese, nádory na páteři, gliom kmene mozkového, adenom hypofýzy, Kaposiho sarkom, rakovina epidermoidu, rakovina skvamózních buněk, lymfom T-buněk, rakoviny indukované vlivem životního prostředí včetně rakovin indukovaných asbestem a kombinace uvedených rakovin.

Přehled obrázků na výkresech

Obr. 1 ukazuje ceié sekvence nukleotidů a sekvence aminokyselin anti-CTLA-4 protilátek 4.1.1; 4.8.1; 6.1.1; a

11.2.1.

Obr. 2 ukazuje porovnání sekvencí aminokyselin mezi předpovídanými klony těžkého řetězce 4.1.1, 4.8.1, 4.14.3,

6.1.1, 3.1.1, 4.10.2, 4.13.1, 11.2.1, 11.6.1, 11.7.1, 12.3.1 a 12.9.1.1 a sekvencí aminokyselin zárodečné linie DP-50 (3-33). Změny proti zárodečné linii jsou uvedeny tučně.

Obr. 3 ukazuje porovnání sekvencí aminokyselin mezi předpovídanou sekvencí klonu těžkého řetězce 2.1.3 a sekvencí aminokyselin zárodečné linie DP-65 (4-31). Změny proti zárodečné linii jsou uvedeny tučně a oblasti CDR jsou podtrženy.

Obr. 4 ukazuje porovnání sekvencí aminokyselin mezi předpovídanými sekvencemi κ lehkého řetězce klonu 4.1.1,

4.8.1, 4.14.3, 6.1.1, 4.10.2 a 4.13.1 a sekvencí aminokyselin zárodečné linie A27. Změny proti zárodečné linii jsou uvedeny tučně a oblasti CDR jsou podtrženy.

Obr. 5 ukazuje porovnání sekvencí aminokyselin mezi předpovídanými sekvencemi κ lehkého řetězce klonu 3.1.1,

11.2.1, 11.6.1 a 11.7.1 a sekvencí aminokyselin zárodečné linie 012. Změny proti zárodečné linii jsou uvedeny tučně a oblasti CDR jsou podtrženy.

Obr. 6 ukazuje porovnání sekvencí aminokyselin mezi mezi předpovídanou sekvencí κ lehkého řetězce klonu 2.1.3 a sekvencí aminokyselin zárodečné linie A10/A26. Změny proti zárodečné linii jsou uvedeny tučně a oblasti CDR jsou podtrženy.

Obr. 7 ukazuje porovnání sekvencí aminokyselin mezi předpovídanou sekvencí κ lehkého řetězce klonu 12.3.1 a sekvencí aminokyselin zárodečné linie A17. Změny proti zárodečné linii jsou uvedeny tučně a oblasti CDR jsou podtrženy.

Obr. 8 ukazuje porovnání sekvencí aminokyselin mezi předpovídanou sekvencí κ lehkého řetězce klonu 12.9.1 a sekvencí aminokyselin zárodečné linie A3/A19. Změny proti zárodečné linii jsou uvedeny tučně a oblasti CDR jsou podtrženy.

• · · · · » • · · · · ·· · · ι · · · · ··· · ·

Detailní popis předloženého vynálezu

Všechny patenty, patentové přihlášky, publikace a další citované reference jsou zde celé uvedeny jako reference.

Činidla proti angiogenesi, jako jsou inhibitory MMP-2 (matrix-metaloproteináza 2), inhibitory MMP-9 (matrixmetaloproteináza 9) a inhibitory COX-II (cyklooxygenáza II), mohou být použity společně s protilátkami ve způsobu podle předloženého vynálezu. Příklady použitelných inhibitorů COX-II zahrnují CELEBREX™ (celecoxib), valdecoxib a rofecoxib. Příklady použitelných inhibitorů matrix-metaloproteinázy jsou popsány v WO 96/33172 (publikovaná 24. října 1996), WO 96/27583 (publikovaná 7. března 1996), evropská patentová přihláška 97304971,1 (podaná 8. července 1997), evropská patentová přihláška 99308617,2 (podaná 29. října 1999), WO 98/07697 (publikovaná 26. února 1998), WO 98/03516 (publikovaná 29. ledna 1998), WO 98/34918 (publikovaná 13. srpna 1998), WO 98/34915 (publikovaná 13. srpna 1998), WO 98/33768 (publikovaná 6. srpna 1998), WO 98/30566 (publikovaná 16.

července 1998), (publikovaná 13. publikace 931788 patentová publikace 606046 1994), evropská patentová července 1999), WO 1990), WO 99/52910 evropská července (publikovaná 28.

90/05719 (publikovaná 31. května (publikovaná 21. října 1999), WO 99/52889 (publikovaná 21. října 1999), WO 99/29667 (publikovaná 17. června 1999), mezinárodní PCT přihláška PCT/IB98/01113 (podaná 21. července 1998), evropská patentová přihláška 99302232,1 (podaná 25. března 1999), britská patentová přihláška • «

9912961,1 (podaná 3. června 1999), U.S. předběžná přihláška 60/148,464 (podaná 12. srpna 1999), U.S. patent 5,863,949 (vydaný 26. ledna 1999), U.S. patent 5,861,510 (vydaný 19. ledna 1999) a evropská patentová . publikace '780386 (publikovaná 25. června 1997), Výhodné MMP-2 a MMP-9 inhibitory jsou ty, které máji malý nebo žádný inhibiční účinek na MMP-1. Výhodnější jsou inhibitory, které selektivně inhibují MMP-2 a/nebo MMP-9 vzhledem k ostatním matrix-metaloproteinázám (to jest MMP-1, MMP-3, MMP-4, MMP5, MMP-6, MMP-7, MMP-8, MMP-10, MMP-11, MMP-12 a MMP-13).

Některé specifické příklady MMP inhibitorů použitelných podle předloženého vynálezu jsou AG-3340, RO 32-3555, RS 13-0830 a sloučeniny uvedené v následujícím seznamu:

3-[[4-(4-fluor-fenoxy)-benzensulfonyl]-(1-hydroxykarbamoylcyklopentyl)-amino]-propionová kyselina;

3- exo-3-[4-(4-fluor-fenoxy)-benzensulfonylamino]-8-oxabicyklo[3.2.1]oktan-3-karboxylová kyselina, hydroxyamid;

(2R,3R)-1-[4-(2-chlor-4-fluor-benzyloxy)-benzensulfonyl]-3hydroxy-3-methyl-piperidin-2-karboxylová kyselina, hydroxyamid;

4- [4-(4-fluor-fenoxy)-benzensulfonylamino]-tetrahydropyran-4-karboxylová kyselina, hydroxyamid;

3—[[4—(4-fluor-fenoxy)-benzensulfonyl]-(1-hydroxykarbamoylcyklobutyl)-amino]-propionová kyselina;

·· ·· » · · tt ··· · 9 · · • ··· • · • · •··· ··· ·· ♦· ’ · · 2 » · · · » · · ·· ····

4-[4-(4-chlor-fenoxy)-benzensulfonylamino]-tetrahydropyran-4-karboxylová kyselina, hydroxyamid;

(R)-3-[4-(4-chlor-fenoxy)-benzensulfonylamino]-tetrahydropyran-3-karboxylová kyselina, hydroxyamid;

(2R,3R)-1-[4-(4-fluor-2-methyl-benzyloxy)-benzensulfonyl]3-hydroxy-3-methyl-piperidin-2-karboxylová kyselina, hydroxyamid;

3-[[4-(4-fluor-fenoxy)-benzensulfonyl]-(1-hydroxykarbamoyl1-methyl-ethyl)-amino]-propionová kyselina;

3-[[4-(4-fluor-fenoxy)-benzensulfonyl]-(4-hydroxykarbamoyltetrahydro-pyran-4-yl)-amino]-propionová kyselina;

3-exo-3-[4-(4-chlor-fenoxy)-benzensulfonylamino]-8-oxabicyklo[3.2.1]oktan-3-karboxylová kyselina, hydroxyamid;

3-endo-3-[4-(4-fluor-fenoxy)-benzensulfonylamino]-8-oxabicyklo[3.2.1]oktan-3-karboxylová kyselina, hydroxyamid; a (R)-3-[4-(4-fluor-fenoxy)-benzensulfonylamino]-tetrahydrofuran-3-karboxylová kyselina, hydroxyamid;

a farmaceuticky přijatelné sole a solváty uvedených sloučenin.

• · ·· ··«· • · ··· · • ♦ • ···

44·· 4··

Další činidla proti angiogenesi, včetně dalších COX-II inhibitorů a dalších MMP inhibitorů mohou být také použita podle předloženého vynálezu.

Protilátky mohou být také podávány s inhibitory mitóz, například vinblastinem; alkylačními činidly, například cisplatinem, karboplatinem a cyklofosfamidem; antimetabolity, například 5-fluoruracilem, cytosin arabinosidem a hydroxymočovinou nebo například s jedním s výhodných anti-metabolitů popsaným v evropské patentové přihlášce 239362, jako je N-(5-[N-(3,4-dihydro-2-methyl-4oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-methylamino]-2-thenoyl)-Lglutamová kyselina; inhibitory růstových faktorů; inhibitory buněčného cyklu; interkalačními antibiotiky, například adriamycinem a bleomycinem; enzymy, například interferony; a anti-hormony, například anti-estrogeny jako je Nolvadex™ (tamoxifen) nebo například anti-androgeny jako je Casodex™ (4'-kyano-3-(4-fluorfenylsulfonyl)-2hydroxy-2-methyl-3'-(trifluormethyl)propionanilid).

Společné (kombinačmí) léčení, které je zde popsáno, může být dosaženo současným, postupným nebo odděleným dávkováním jednotlivých složek léčení.

Protilátky mohou také být použity s inhibitory přenosu signálů, jako jsou činidla, která mohou inhibovat odezvy receptoru epidermálního růstového faktoru (EGFR epidermal growth factor receptor), jako jsou EGFR protilátky, EGF protilátky a molekuly, které jsou inhibitory EGFR; inhibitory vaskulárního endoteliálního ·» ·* • 9 9

9999 ··· ·· ·· > · ·

9· ·«« ’ růstového faktoru (VEGF - vaskular endothelial. growth factor), jako jsou VEGF receptory a molekuly, které mohou inhibovat VEGF; a inhibitory erbB2 receptorů, jako jsou organické molekuly nebo protilátky, které se váží k erbB2 receptorům, například Herceptin® (Genentech, lne., South San Francisco, California).

EGFR inhibitory jsou popsány například v WO 95/19970 (publikovaná 27. července 1995), WO 98/14451 (publikovaná 9. dubna 1998), WO 98/02434 (publikovaná 22. ledna 1998) a U.S. patent 5,747,498 (vydaný 5. května 1998) a takové látky mohou být použity podle předloženého vynálezu, tak jak je zde popsáno. EGFR-inhibiční činidla zahrnují neomezujícím způsobem monoklonální protilátky C225, antiEGFR 22Mab (ImClone Systems Incorporated, New York, New York) a ABX-EGF (Abgenix lne., Fremont, California), sloučeniny ZD-1839 (AstraZeneca), BIBX-1382 (Boehringer

Ingelheim), MDX-447 (Medarex lne., Annandale, New Jersey) a OLX-103 (Merck & Co., Whitehouse Station, New Jersey), VRCTC-310 (Ventech Research) a EGF fúzované toxiny (Seragen lne., Hopkinton, Massachusettes). Tyto a další EGFRinhibiční činidla mohou být použity podle předloženého vynálezu.

VEGF inhibitory, například SU-5416 a SU-6668 (Sugen lne., South San Francisco, California), mohou také být použity v kombinaci s protilátkami. VEGF inhibitory jsou popsány například ve WO 99/24440 (publikovaná 20. května 1999), mezinárodní PCT přihlášce PCT/IB99/00797 (podaná 3. května 1999), ve WO 95/21613 (publikovaná 17. srpna 1995), WO z*.:” ; ;; ; ; : .

-.····. · 5 : ··: *: ’· ·*

.......· »· .....*

99/61422 (publikovaná 2. prosince 1999), U.S. patentu 5,834,504 (vydaný 10. listopadu 1998), WO 98/50356 (publikovaný 12. listopadu 1998), U.S. patentu 5,883,113 (vydaný 16. března 1999), U.S. patentu 5,886,020 (vydaný

23. března 1999), U.S. patentu 5,792,783 (vydaný 11. srpna 1998), WO 99/10349 (publikovaná 4. března 1999), WO 97/32856 (publikovaná 12. září 1997), WO 97/22596 (publikovaná 26. června 1997), WO 98/54093 (publikovaná 3. prosince 1998), WO 98/02438 (publikovaná 22. ledna 1998), WO 99116755 (publikovaná 8. dubna 1999) a WO 98/02437 (publikovaná 22. ledna 1998). Další příklady některých specifických VEGF inhibitorů, použitelných podle předloženého vynálezu jsou IM862 (Cytran Inc., Kirkland, Washington); protilátka IMC-1C11 Imclone, anti-VEGF monoklonální protilátka společnosti Genentech, Inc., South San Francisco, California; a angiozym, synthetický ribozym společností Ribozyme (Boulder, Colorado) a Chiron (Emeryville, California).

S protilátkami mohou být dále kombinovány inhibitory ErbB2 receptorů, jako jsou GW-282974 (Glaxo Wellcome plc) a monoklonální protilátky AR-209 (Aronex Pharmaceuticals Inc., The Woodlands, Texas) a 2B-1 (Chiron), například ty, které jsou popsány ve WO 98/02434 (publikovaná 22. ledna 1998), WO 99/35146 (publikovaná 15. července 1999), WO 99/35132 (publikovaná 15. července 1999), WO 98/02437 (publikovaná 22. ledna 1998), WO 97/13760 (publikovaná 17. dubna 1997), WO 95/19970 (publikovaná 27. července 1995), U.S. patentu 5,587,458 (vydaný 24. prosince 1996) a U.S. patentu 5,877,305 (vydaný 2. března 1999). Inhibitory ErbB2 • · _ · · ···· β 4 · receptorů použitelné podle předloženého vynálezu jsou také popsány v EP1029853 (publikovaná 23. srpna 2000) a in WO 00/44728, (publikovaná 3. srpna 2000). Sloučeniny a látky jako inhibitory erbB2 receptorů, popsané ve výše uvedených PCT přihláškách, U.S. patentech a U.S. předběžných přihláškách, stejně tak jako další sloučeniny a látky, které inhibitují erbB2 receptory, mohou být použity s protilátkami podle předloženého vynálezu.

Protilátky mohou také být použity s dalšími činidly použitelnými při léčení abnormálního buněčného růstu nebo rakoviny, které neomezujícím způsobem zahrnují činidla schopná posílení protinádorové imunitní odezvy, jako jsou další a odlišné CTLA4 protilátky a dalšími činidly, která jsou také schopná blokování CTLA4; a anti-proliferativními činidly jako jsou farnesyl protein transferázy a inhibitory α_νβ₃, jako jsou α_νβ₃ protilátky Vitaxin, α_νβδ inhibitory, p53 inhibitory a podobně.

Pokud je protilátka podávána v kombinaci s dalším imunomodulačním činidlem, imunomodulační činidlo může být zvoleno například ze souboru, zahrnujícího aktivátory dendritických buněk, jako jsou protilátky představované CD40 ligandy a anti-CD40 agonisty, stejně tak jako posilovače prezentace antigenů, posilovače tropismu Tbuněk, inhibitory imunosuppresivních faktorů vztahujících se k nádorům, jako jsou TGF-β (transforming growth factor beta) a IL-10.

— · ·

Protilátka může také být podávána s protilátkami nebo dalšími ligandy, které inhibují růst nádoru vazbou k IGF-1R (insulin-like growth factor 1 receptor)'. Specifické antiIGF-1R protilátky, které mohou být použity podle předloženého vynálezu zahrnují ty, které jsou popsány v PCT přihlášce PCT/US01/51113, podané 20. prosince 2001.

Protilátka může také být podávána s cytokiny jako jsou IL2, IFN-g, GM-CSF, IL-12, IL-18 a FLT-3L.

Kromě rakovinových vakcin, zahrnujících k rakovině se vztahující antigeny, vakciny použitelné v kombinaci s protilátkami zahrnují neomezujícím způsobem GM-CSF DNA a buněčné vakciny, vakciny dendritických buněk, rekombinantní virové (například vaccinia virus) vakciny a HSP (heat shock protein) vakciny. Použitelné vakciny také zahrnují nádorové vakciny, jako jsou vakciny vytvořené z buněk melanomu; a mohou být autologní nebo allogenní. Vakciny mohou být založeny například na peptidu, DNA nebo buňce.

Protilátka může být podávána v kombinaci s antihormonální terapií, jako je anti-estrogenová nebo anti-androgenní terapie nebo se selektivními modulátory receptorů estrogenu (ŠERM).

V jiném provedení se protilátka podává tomu, kdo je pod působením imunosuprese, například jako výsledek chemoterapie, dialýzy, chirurgického zákroku nebo trpí věkem podmíněným imunitním onemocněním. Protilátka může být • · • · · · ♦ · • * · • · ·· · · ♦ · ·· · • · · · · ··· · · · · • · · · · · · · použita pro nápomoc imunitní odezvy na vakciny imunosuprimovaných populacích.

Protilátka může také být podávána jako podpora při léčbě nebo prevenci infekčních onemocnění, .včetně bakteriálních, parazitálních nebo virálních onemocnění. Je-li to požadováno, protilátka může být podávána v kombinaci s anti-infekčními vakcinami.

Způsob podle předloženého vynálezu může být paliativní terapie typu neo-adjuvans/adjuvans, použitelná pro zmírnění symptomů spojených se zde uvedenými onemocněními, stejně tak jako se symptomy souvisejícími s abnormálním buněčným růstem. Taková terapie může být monoterapie nebo může být kombinována s chemoterapií a/nebo imunoterapií a/nebo vakcinovou terapií.

Techniky podávání nízkých nebo vysokých dávek radiační terapie jsou v oboru známy a tyto techniky mohou být použity v kombinace s terapií, která zde byla popsána.

Léčení s využitím protilátkek může být prováděno za účelem přivedení abnormálních buněk do stavu, kdy jsou citlivější na léčení ozařováním pro účely usmrcení a/nebo inhibice růstu takových buněk. V souladu s tím se předložený vynález dále týká způsobu senzibilizace abnormálních buněk u savce na léčení ozařováním, které zahrnuje podávání uvedenému savci takového množství anti-CTLA4 protilátky, které je účinné pro senzibilizaci abnormálních buněk na léčení ozařováním.

• ·

• · · · ·· ····

Protilátka může být podávána pro léčení nebo prevenci počátečního onemocnění nebo pro léčení nebo prevenci rekurence. Může být použita pro léčení raného nebo pokročilého onemocnění. V jednom provedení se protilátka podává pro prevenci zděděných nádorů. Může také použita pro prevenci nádorů v případě vysokého rizika v důsledku infekce HVP (lidský papilomový virus), EBV (virus EpsteinaBarrové), HIV (virus lidské imunodeficience), hepatitidy C nebo pro léčení nádorů souvisejících s takovými infekcemi. Protilátka může také být použita pro snížení rizika růstu nádoru po chirurgickém zákroku nebo růstu nádoru souvisejícího s expozicí toxinu.

Výraz léčba, jak je zde používán, pokud není uvedeno jinak, znamená reverzi, úlevu, inhibicí postupu nebo prevenci poruchy nebo stavu, ke kterému se uvedený výraz vztahuje nebo jednoho nebo více symptomů takové poruchy nebo stavu. Výraz léčení, jak je zde používán, pokud není uvedeno jinak, se týká činnosti, kterou je prováděna léčba, jak byla definována bezprostředně výše.

Výraz epitop zahrnuje libovolný proteinový determinant schopný specifické vazby k imunoglobulinů nebo receptoru Tbuňky. Epitopické determinanty jsou obvykle představovány chemicky aktivními povrchovými seskupeními molekul, jako jsou aminokyseliny nebo cukrové povrchové řetězce a obvykle mají specifické třídimenzionální strukturální charakteristiky, stejně tak jako specifické nábojové charakteristiky. Uvádí se, že protilátka specificky váže

“ · ·· · · ·« ·· · · antigen, pokud disociační konstanta je <1 μΜ, výhodně < 100 nM a nejvýhodněji < 10 nM.

Způsoby přípravy protilátek použitelných podle předloženého vynálezu jsou popsány v PCT publikované přihlášce č. WO 00/37504 (publikovaná 29. června 2000).

Výraz lidská protilátka se týká protilátky, která má sekvenci aminokyselin odvozenou z lidských genů, všetně lidských genů v transgenní myši nebo jinde a zahrnují sekvence, které jsou výsledek somatických mutací nebo dalších změn, ke kterým dochází při vytváření sekvence protilátky z lidského genu. Předložený vynález zahrnuje změny typů, které budou popsány níže v sekvenci aminokyselin.

Proto také protilátky, které se liší změnami v sekvenci aminokyselin od konkrétních protilátek, které jsou zde uvedeny jako příklad, mohou být použity ve způsobu podle předloženého vynálezu. Například sekvence může být v zásadě identická, což znamená, že původní sekvence a změněná sekvence, pokud jsou vedle sebe položeny optimálním způsobem, například pomocí programu jako je GAP nebo BESTFIT s použitím základních vah mezer, se shodují na alespoň 80 procent, výhodně se shodují na alespoň 90 procent, ještě výhodněji se shodují na alespoň 95 procent a nejvýhodnějí se shodují na alespoň 99 procent v sekvenci celé protilátky, variabilních oblastí, rámcových oblastí nebo CDR oblastí. Výhodně se polohy zbytků, které nejsou • · • 0 • 0 00· 0

0 0 0

0 0 0

0 0 000 · stejné, odlišují konzervativními substitucemi aminokyselin. Konzervativní substituce aminokyselin se týkají vzájemné zaměnitelnosti zbytků, které mají podobné postranní řetězce. Například skupina aminokyselin, které mají alifatické postranní řetězce zahrnuje glycin, alanin, valin, leucin a isoleucin; skupina aminokyselin, které mají alifatické-hydroxylové postranní řetězce zahrnuje serin a threonin; skupina aminokyselin, které mají postranní řetězce obsahující amid zahrnuje asparagin a glutamin; skupina aminokyselin, které mají aromatické postranní řetězce zahrnuje fenylalanin, tyrosin a tryptophan; skupina aminokyselin, které mají bázické postranní řetězce zahrnuje lysin, arginin a histidin; a skupina aminokyselin, které mají postranní řetězce obsahující síru zahrnuje cystein a methionin. Výhodné konzervativní skupiny substituce aminokyselin jsou: valin-leucin-isoleucin, fenylalanintyrosin, lysin-arginin, alanin-valin, kyseliny glutamováaspartová a asparagin-glutamin. Například je rozumné očekávat, že izolované nahrazení leucinu isoleucinem nebo valinem, aspartátu glutamátem, podobná nahrazení aminokyselin aminokyselinami nebude mít zásadní účinek na vazbu nebo vlastnosti výsledné molekuly, obzvláště jestliže nahrazení nezahrnuje aminokyseliny v místě rámcové oblasti. Jestli změna aminokyseliny vede na funkční peptid může být snadno určeno testováním specifické aktivity polypeptidového derivátu.

threoninu serinem nebo strukturálně příbuznými

Fragmenty nebo analogy molekul protilátek nebo imunoglobulinů mohou být snadno připraveny běžným ftft · · ♦ · — · · · • · · · odborníkem v oboru. Výhodná amino- a karboxy zakončení fragmentů nebo analogů se nacházejí poblíž ohraničení funkčních domén. Strukturální a funkční domény mohou být identifikovány porovnáním nukleotidů a/nebo sekvence aminokyselin s veřejnými nebo soukromými databázemi sekvencí. Výhodně se používají počítačové porovnávací způsoby pro identifikaci motivů sekvencí nebo předpověděných proteinových konformačních domén, které se vyskytují u jiných proteinů se známou strukturou a/nebo funkcí. Způsoby identifikace proteinových sekvencí, které se skládají do známých třídimenzionálních struktur jsou známy. Bowie a kol. Science 253:164 (1991). Uváděné příklady tedy ukazují, že odborníci v oboru mohou rozpoznat sekvenční motivy a strukturální konformace, které mohou být použity pro definici strukturálních a funkčních domén podle předloženého vynálezu.

Výhodné aminokyselinové substituce jsou takové, které: (1) redukují náchylnost na proteolýzu, (2) redukují náchylnost na oxidaci, (3) mění vazebnou afinitu k vytváření proteinových komplexů, (4) mění vazebné afinity a (4) propůjčují nebo modifikují další fyzikálně-chemické nebo funkční vlastnosti takových analogů. Analogy mohou zahrnovat různé muteiny sekvencí jiné než přirozeně se vyskytující peptidové sekvence. Například jednoduchá nebo vícenásobná aminokyselinová substituce konzervativní aminokyselinová substituce) může provedena v přirozeně se vyskytující sekvencí (výhodně v části polypeptidu mimo domény vytvářející mezimolekulární kontakty). Konzervativní aminokyselinová substituce by (výhodně být ·· · · 9 9 9 9 9

9 99 · 9 9 9 · · · • · 9 999999 9 9 • 9 9 9 9 9 9 • 999 99 «9 9 · 9999 neměla podstatně měnit strukturální charakteristiky rodičovské sekvence (například substituovaná aminokyselina by neměla mít tendenci přerušit helix, který se vyskytuje u rodičovské sekvence nebo porušovat další typy sekundární struktury, která charakterizuje rodičovskou sekvenci).

Příklady v oboru popsaných polypeptidových sekundárních a terciárních struktur jsou popsány v Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed., W. H. Freeman a Company, New York (1984)); Introduction to Protein Structure (C. Branden a J. Tooze, editoři., Garland Publishing, New York, N.Y. (1991)); a Thornton a kol., Nátuře 354:105 (1991),

Výraz protilátka jak je zde používán se týká neporušené protilátky nebo jejího vazebného fragmentu, který je v kompetici s neporušenou protilátkou o specifickou vazbu. Vazebné fragmenty jsou produkovány rekombinantními DNA technikami nebo enzymatickým nebo chemickým štěpením neporušených protilátek. Vazebné fragmenty zahrnují Fab, Fab', F(ab')₂, Fv a protilátky s jedním řetězcem. Rozumí se, že protilátka jiná než bispecifická nebo bifunkční protilátka má každé ze svých vazebných míst identické. Protilátka v zásadě inhibuje adhezi receptoru k protireceptoru, pokud přebytek protilátky snižuje množství vazby receptoru k protireceptoru o alespoň přibližně 20%, 40%, 60% nebo 80% a obvykleji o více než přibližně 85% (jak je měřeno při in vitro testu vazebné kompetice).

99··

99

99 • · · • 9 «

9 9 ♦ 99 ♦ · 9999

Protilátky používané podle předloženého vynálezu mohou být vloženy do farmaceutických kompozic, vhodných pro podávání subjektu. Typicky farmaceutická kompozice zahrnuje protilátku a farmaceuticky přijatelný nosič. Jak je zde používán, výraz farmaceuticky přijatelný nosič zahrnuje jakákoli a všechna rozpouštědla, disperzní média, povlaky, antibakteriální a antifungální činidla, isotonická a absorpci zpožďující činidla a podobně, která jsou fyziologicky . slučitelná. Příklady farmaceuticky přijatelných nosičů zahrnují zahrnují jednu nebo více z následujících látek: voda, solný roztok, fosforečnanem pufrovaný solný roztok, dextróza, glycerol, ethanol a podobně, stejně tak jako jejich kombinace. V mnoha případech výhodně zahrnují isotonická činidla, například, cukry, polyalkoholy jako je jsou manitol, sorbitol nebo chlorid sodný v kompozici. Je možno použít i farmaceuticky přijatelné látky jako jsou smáčedla nebo minoritní množství doplňujících látkek jako jsou smáčecí nebo emulsifikační činidla, konzervační činidla nebo pufry, které zlepšují skladovací vlastnosti nebo účinnost protilátky nebo části protilátky.

Protilátky mohou být používány v řadě forem. Tyto formy zahrnují například, Kině, polotuhé a pevné dávkové formy, jako jsou Kině roztoky (například injektovatelné roztoky a roztoky aplikovatelné infúzí) , disperze nebo suspenzs, tablety, pilulky, prášky, liposomy a čípky. Výhodné formy závisejí na zamýšleném způsobu podávání a terapeutickém použití. Typické výhodné kompozice jsou ve formě

99··

9* ·9 ·· • · · 9999 999

9·· 9 99 9 9 · * • 999 999999 9 9

9 9 9 9 999 • 999 999 99 99 99 9999 injektovatelných roztoků a roztoků aplikovatelných infůzi, jako jsou kompozice podobné těm, které jsou používány pro pasivní imunizaci člověka jinými protilátkami. Výhodný způsob podávání je parenterální (například, intravenózní, subkutánní, intraperitoneální, intramuskulární). Ve výhodném provedení se protilátka podává intravenózní infůzi nebo injekcí. V jiném výhodném provedení se protilátka podává intramuskulární nebo subkutánní injekcí.

Terapeutická kompozice musí typicky být sterilní a stabilní za podmínek výroby a skladování. Kompozice mohou být připraveny jako roztok, mikroemulze, disperze, liposomy nebo jiná struktura, vhodná pro vysoké koncentrace účinné látky. Sterilní injektovatelné roztoky mohou být připraveny vložením protilátky v požadovaném množství do vhodného rozpouštědla s jednou nebo kombinací složek, uvedených výše, jak je požadováno, s následující filtrační sterilizací. Obecně se disperze připraví vložením účinné sloučeniny do sterilního vehikula, které obsahuje základní disperzní médium a požadované další ingredienty ze seznamu, který byl uveden výše. V případě sterilních prášků pro přípravu sterilních injektovatelných roztoků výhodné způsoby přípravy jsou vakuové sušení a vymrazování, které dávají prášek účinné složky spolu s dodatečnými požadovanými složkami z jejich předem připraveného sterilně filtrovaného roztoku. Správná fluidita roztoku může být udržována například použitím pokrytí jako je lecitin, udržováním požadované velikosti částic v případě disperze a použitím vhodných povrchově aktivních činidel. Prodloužená absorpce injektovatelných kompozic může být dosažena tím,

• 0 0000 • ·

0 0· ······<

že se v kompozici použije činidlo, které zpomaluje absorpci, například monostearanové sole a želatina.

Protilátky mohou být podávány množstvím způsobů, známých v oboru, zahrnujících neomezujícím způsobem podávání orální, parenterální, mukozální, inhalační, topické, bukální, nasální a rektální. Pro mnoho terapeutických použití je výhodnou cestou/způsobem podávání subkutánní, intramuskulární, intravenózní nebo infúze. , Mohou být použity injekce bez použití jehly, je-li to požadováno. Zkušenému odborníkovi v oboru je zřejmé, že cesta a/nebo způsob podávání závisí v závislosti na požadovaných výsledcích.

V jistých provedeních může být protilátka připravena s nosiči, které chrání sloučeninu před rychlým uvolňováním, jako jsou přípravky s řízeným uvolňováním, včetně implantů, transdermálních náplastí a mikrokapslových podávačích systémů. Mohou také být použity biodegradovatelné, biologicky kompatibilní polymery, jako je ethylenvinylacetát, polyanhydridy, polyglykolová kyselina, kolagen, polyorthoestery a polymery kyseliny mléčné. Mnoho způsobů přípravy takových přípravků je patentováno nebo obecně známo odborníkům v oboru. Viz například, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, editor, Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.

V jistých provedeních protilátka může být podávána orálně, například s inertním ředidlem nebo asimilovatelným jedlým nosičem. Protilátka (a další ingredienty, je-li to « 9 · • e * • 9 9« « t « • · Φ·* · »·· *» » · · · t « « ♦ • · ··« « t · <· «a

9 *9 « · * * • a · a

9 » «· ··*· požadováno) může také uzavřena v tvrdé nebo měkké želatinové kapsli, lisována do tablet nebo použita přímo v pacientově stravě. Pro orální terapeutický podávání mohou protilátky být použity s excipienty a používány ve formě poživatelných tablet, bukálních tablet, pastilek, kapslí, elixírů, suspenzí, sirupů, oplatek a podobně. Pro podávání protilátky jinak než pomocí parenterálního podávání může být nutné sloučeninu pokrýt nebo společně podávat s materiály, které zabraňují její inaktivaci.

Dávkový režim může být upraven pro dosažení optimální požadované odezvy (například terapeutické nebo profylaktické odezvy). Například může být podáván jednoduchý bolus nebo může být podáváno několik rozdělených dávek v průběhu jisté doby nebo může být dávka proporcionálně snižována nebo zvyšována, jak ukazují požadavky terapeutické situace. Je obzvláště výhodné připravovat parenterální kompozice v dávkových jednotkových formách pro snadné podávání a stejnoměrnost dávkování. Výraz dávková jednotková forma, jak je zde používán, se týká fyzikálně diskrétních jednotek, vhodných pro jednotkové dávkování savčím subjektům, které mají být léčeny; každá jednotka obsahuje předem určené množství účinné sloučeniny, vypočtené pro dosažení požadovaného terapeutického účinku, společně s požadovaným farmaceutickým nosičem. Specifikace dávkových jednotkových forem podle předloženého vynálezu je určována a přímo závisí na (a) jedinečných vlastnostech protilátky a konkrétním terapeutickém nebo profylaktickém účinku, který má být dosažen a (b) inherentních omezeních v oboru • · β · • · ·

30··. r· • · · · spojování a podávání účinné sloučeniny pro zvládnutí citlivosti individuí.

Jako neomezující příklady rozmezí terapeuticky nebo profylakticky účinných množství protilátky podávané podle předloženého vynálezu je možno uvést 0,1-100 mg/kg, výhodněji 0,5-50 mg/kg, výhodněji 1-20 mg/kg a ještě výhodněji 1-10 mg/kg. Mělo by být uvedeno, že hodnoty dávkování závisí na typu a závažnosti stavů, ve kterých má být dosaženo úlevy. Je dále zřejmé, že pro každý konkrétní subjekt by mělo být v průběhu doby určeno specifické dávkování v závislosti na individuálních potřebách pacienta a profesionálním úsudku osoby, která provádí podávání nebo dohlíží na podávání kompozic a že dávky, které jsou zde uvedeny jsou pouze příklady a nejsou zamýšleny jako omezení rozsahu nebo způsobu použití kompozice.

V jednom provedení se protilátka podává v intravenózním přípravku jako sterilní vodný roztok obsahující 5 nebo 10 mg/ml protilátky, s -20 mM octanu sodného, 0,2 mg/ml polysorbátu 80 a 140 mM chloridu sodného při pH 5,5.

V jednom provedení se část dávky podává jako intravenózní jednorázová injekce a zbytek jako infúze přípravku protilátky. V ještě dalším provedení je 0,01 mg/kg intravenózní jednorázová injekce protilátky následována 0,1 mg/kg intravenózní injekcí v průběhu 3-5 minut, následovaná 1 a 3 mg/kg infúzí v 100 ml solném roztoku rychlostí 100 ml/hodinu, následovaná 4 až 10 mg/kg infúzí v 250 ml solném roztoku rychlostí 100 ml/hodinu, následovaná 12,5 až 21

- 31» • · · · · · mg/kg infúzí v 500 ml solném roztoku rychlostí 100 ml/hodinu, následovaná 28 mg/kg infúzí v 600 ml solném roztoku (500 + 100 sáčky), rychlostí 120 ml/hodinu.

• · · · · · • · · · · · • · · ····· · • · · · · • · · · · · · ί

Protilátka využívaná ve způsobu podle předloženého vynálezu může být označena. To může být provedeno použitím detekovatelného markéru, například použitím radioaktivně, označené aminokyseliny nebo připojením biotinylové skupiny k polypeptidu, která může být detekována označením avidinem (například streptavidinem obsahujícím fluorescenční markér nebo enzymatickou aktivitou, která může být detekována optickým nebo kolorimetrickým způsobem). V jistých situacích může být označení nebo markér také terapeutický. V oboru jsou známy a mohou být použity různé způsoby označování polypeptidů a glykoproteinů. Příklady označení polypeptidů zahrnují neomezujícím způsobem následující: radioisotopy nebo radionuklidy (například, ³H, ¹⁴C, ¹⁵N, ³⁵S, ⁹⁰Y, ⁹⁹Tc, ^11:LIn, ¹²⁵I, ¹³¹I) , fluorescenční označení (například FITC, rhodamin, lanthanidové fosfory), enzymatická označení (například křenová peroxidáza, βgalaktosidáza, luciferáza, alkalická fosfatáza), chemiluminiscenty, biotinylové skupiny, předem určené polypeptidové epitopy rozpoznávané sekundárními reportéry (například leucinové párové sekvence, vazebná místa pro sekundární protilátky, domény vazby kovů, epitopové značky). V některých provedeních jsou označení připojena rameny různé délky pro snížení potenciálního sterického bránění.

• · · · · · • *“·

32• ·

Je známo, že základní strukturální jednotku protilátky představuje tetramer. Každý tetramer se skládá ze dvou identických párů polypeptidových řetězců, přičemž každý pár má jeden lehký řetězec (přibližně 25 kDa) a jeden těžký řetězec (přibližně 50-70 kDa). Amino-terminální části každého řetězce zahrnují variabilní oblast přibližně 100 až 110 nebo více aminokyselin primárně zodpovědných za rozpoznávání antigenů. Karboxy-terminální část řetězce definuje konstantní oblast primárně zodpovědnou za funkci efectoru. Lidské lehké řetězce jsou klasifikovány jako κ a λ lehké řetězce. Těžké řetězce jsou klasifikovány jako μ, δ, γ, a nebo ε a definují isotyp protilátky jako IgM, IgD, IgG, IgA respektive IgE. Uvnitř lehkých a těžkých řetězců jsou variabilní a konstantní oblasti spojeny pomocí oblasti J přibližně 12 nebo více aminokyselin, přičemž těžký řetězec také zahrnuje D oblast přibližně 10 dalších aminokyselin. Viz, obecně, Fundamental Immunology, kap. 7 (Paul, W., editor, 2. vydání, Raven Press, N.Y. (1989)). Variabilní oblasti každého páru lehký/těžký řetězec tvoří vazebné místo protilátky.

Neporušená IgG protilátka má dvě vazebná místa. S výjimkou bifunkčních nebo bispecifických protilátek jsou dvě vazebná místa stejná. Všechny řetězce vykazují stejnou obecnou strukturu relativně konzervovaných rámcových oblastí (framework region - FR) spojených třemi hypervariabilními oblastmi, také nazývanými complementarity determining regions a označovanými CDR. Oblasti CDR dvou řetězců každého páru jsou spojeny rámcovými oblastmi, což umožňuje ·· _ OD · ·_····

--¼ · · vazbu na specifické epitopy. Od N-konce po C-konec i lehký i těžký řetězec obsahuje domény FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 a FR4. Přiřazení aminokyselin každé doméně je v souladu s definicemi z Kabatovy Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 a 1991)) nebo Chothia & Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Chothia a kol. Nátuře 342:878-883 (1989).

Protilátky používané podle předloženého vynálezu jsou výhodně odvozeny z buněk, které exprimují lidské geny imunoglobulinů. V oboru je známo použití transgenní myši pro produkci takových lidských protilátek. Jeden takový způsob je popsán v Mendez a kol. Nátuře Genetics 15:146-156 (1997), Green a Jakobovits J. Exp. Med. 188:483-495 (1998) a U.S. patentová přihláška č. 08/759,620 (podaná 3. prosince 1996). Použití takové myši pro získání lidských protilátek je také popsáno v U.S. patentových přihláškách 07/466,008 (podaná 12. ledna 1990), 07/610,515 (podaná 8. listopadu 1990), 07/919,297 (podaná 24. července 1992), 07/922,649 (podaná 30. července 1992), 08/031,801 (podaná 15. března 1993), 08/112,848 (podaná 27. srpna 1993), 08/234,145 (podaná 28. dubna 1994), 08/376,279 (podaná 20. ledna 1995), 08/430, 938 (podaná 27. dubna 1995), 08/464,584 (podaná 5. června 1995), 08/464,582 (podaná 5. června 1995), 08/463,191 (podaná 5. června 1995), 08/462,837 (podaná 5. června 1995), 08/486,853 (podaná 5. června 1995), 08/486,857 (podaná 5. června 1995), 08/486,859 (podaná 5. června 1995), 08/462,513 (podaná 5. června 1995), 08/724,752 (podaná 2. října 1996) a

- 34.

• · ··

08/759,620 (podaná 3. prosince 1996). Viz' také Mendez a kol. Nátuře Genetics 15:146-156 (1997) a Green a Jakobovits J. Exp. Med. 188:483-495 (1998). Viz také evropský patent EP 0 463 151 (udělen 12. června 1996), mezinárodní patentová přihláška WO 94/02602 (publikovaná 3. února 1994), mezinárodní patentová přihláška WO 96/34096 (publikovaná 31. října 1996) a WO 98/24893 (publikovaná 11. června 1998).

Alternativou pro použití transgenní myši, která vytváří lidské protilátky je minilocus přístup, ve kterém je exogenní místo Ig napodobováno vložením částí (individuálních genů), které obsahuje místo Ig. Jeden nebo více V_H genů, jeden nebo více D_H genů, jeden nebo více J_H genů, μ konstantní oblast a druhá konstantní oblast (výhodně γ konstantní oblast) se spojí do konstruktu pro vložení do zvířete. Viz U.S. patent 5,545,807, autoři Surani a kol. a U.S. patenty 5,545,806, 5,625,825,

5,625,126, 5,633,425, 5,661,016, 5,770,429, 5,789,650 a

5,814,318, autoři Lonberg a Kay, U.S. patent 5,591,669, autoři Krimpenfort a Berns, U.S. patents 5,612,205, 5,721,367, 5,789,215, autoři Berns a kol. a U.S. patent

5,643,763, autoři Choi a Dunn a U.S. patentové přihlášky společnosti GenPharm International 07/574,748 (podaná 29. srpna 1990), 07/575,962 (podaná 31.srpna 1990), 07/810,279 (podaná 17. prosince 1991), 07/853,408 (podaná 18. března

1992) , 07/904,068 (podaná 23. června 1992), 07./990,860 (podaná 16. prosince 1992), 08/053,131 (podaná 26. dubna

1993) , 08/096,762 (podaná 22. července 1993), 08/155,301 _o r~ ·* ··· ·

Jo· *“· • · · · (podaná 18. listopadu 1993), 08/161,739 (podaná 3. prosince 1993), 08/165,699 (podaná 10. prosince 1993), 08/209,741 (podaná 9. března 1994). Viz také evropský patent 546 073 Bl, mezinárodní patentové přihlášky WO 92/03918, WO 92/22645, WO 92/22647, WO 92/22670, WO 93/12227, WO 94/00569, WO 94/25585, WO 96/14436, WO 97/13852 a WO 98/24884.

V jiném provedení protilátky používané ve způsobu podle předloženého vynálezu nejsou plně lidské, ale polidštěné. Konkrétně myší protilátky nebo protilátky dalších druhů mohou být polidštěny nebo primatizovány použitím technik známých v oboru. Viz například, Winter a Harris, Immunol. Today 14:43-46 (1993) a Wright a kol. Crit. Reviews in Immunol. 12125-168 (1992). Protilátka být vytvořena způsoby rekombinantního DNA inženýrství záměnou CH1, CH2, CH3, kloubové oblasti a/nebo rámcové oblasti odpovídajícími lidskými sekvencemi (viz WO 92/02190 a U.S. patenty 5,530,101, 5,585,089, 5,693,761, 5,693,792, 5,714,350 a 5,777,085). V oboru je také známo použití Ig cDNA pro konstrukci chimérických imunoglobulinových genů (Liu a kol. P.N.A.S. 84:3439 (1987) a J.Immunol. 139:3521 (1987)). mRNA s izoluje z hybridomu nebo další buňky produkující protilátky a použije se pro produkci cDNA. Požadovaná cDNA může být amplifikována polymerázovou řetězovou reakce použitím specifických primerů (U.S. patenty 4,683,195 a 4,683,202). Alternativně je možno vytvořet knihovnu a prohlížet ji pro izolaci požadované sekvence. DNA sekvence kódující variabilní oblast protilátky se potom fúzuje k sekvencím lidských konstantních oblastí. Sekvence genů

** ·· ·· ··

I II I II!

. .. i i l • « · ····· A A

A A · · · ·

AA AA AA AAAA lidských konstantních oblastí mohou být nalezeny v Kabat a kol., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, N.I.H. publikace č. 91-3242. Geny lidských C oblastí jsou snadno dostupné ze známých klonů. Volba isotypu bude řízena požadovanými efektorovými funkcemi jako je fixace komplementu nebo aktivita v protilátkově závislé buněčné cytotoxicitě. Výhodný isotypy jsou IgGl, IgG2, IgG3 a IgG4. Obzvláště výhodné isotypy pro protilátky podle předloženého vynálezu jsou IgG2 a IgG4. Může být použita libovolná z lidských konstantních oblastí lehkého řetězce, κ nebo λ. Chimérické polidštěné protilátky mohou být exprimovány obvyklými způsoby.

Jak bylo uvedeno výše, předložený vynález zahrnuje použití fragmentů protilátek (zahrnutých zde v definici pojmu protilátka). Fragmenty protilátek, jako je Fv, F(ab')₂ a Fab, mohou být připraveny štěpením neporušeného proteinu, například proteázou nebo chemickým štěpením. Alternativně mohou být navrženy zkrácené geny. Například chimérický gen kódující oblast F(ab')₂ fragmentu bude zahrnovat DNA sekvence kódující CHl doménu a kloubovou oblast H řetězce, následovanou translačním stop kodonem pro vytvoření zkrácené molekuly.

V jednom přístupu může být použita sekvence shody kódující J oblasti těžkých a lehkých řetězců pro návrh oligonukleotidů pro použití jako primerů pro vložení užitečných restrikčních míst do J oblasti pro následnou vazbu segmentu V oblasti na segment lidské C oblasti. cDNA C oblasti může být modifikována místně orientovanou • · místa v analogické

-κ -, ·· · ·* · · * · < ·♦· mutagenezí pro vložení restrikčního poloze v lidské sekvenci.

Vektory exprese pro použití pro získání protilátek používaných podle předloženého vynálezu zahrnují plasmidy, retroviry, kosmidy, YAC, od EBV odvozené episomy a podobně. Výhodný vektor je normálně takový, který kóduje funkčně úplné lidské CH nebo CL imunoglobulinové sekvence, s vhodnými restrikčními místy navrženými tak, aby libovolná VH nebo VL sekvence mohla být snadno vložena a exprimována. V takových vektorech dochází normálně k sestřihu mezi donorovým místem sestřihu ve vkládané J oblasti a akceptorovým místem sestřihu předcházejícím lidskou C oblast a také v sestřihových oblastech, které se vyskytují v lidských CH exonech. Polyadenylace a transkripční terminace nastávají na přirozených místech chromosomu směrem dolů v kódujících oblastech. Výsledná chimérická protilátka může být spojena s libovolným silným promotorem, včetně retrovirálních LTR, například SV-40 časný promotor, (Okayama a kol. Mol. Cell. Bio. 3:280 (1983)), Rousův virus sarkomu LTR (Gorman a kol. P.N.A.S. 79:6777 (1982)) a moloney virus myší leukemie LTR (Grosschedl a kol. Cell41:885 (1985)); přirozené Ig promotory a podobně.

Lidské protilátky nebo protilátky dalších druhů, použitelné podle předloženého vynálezu mohou také být generovány displejovými technologiemi, zahrnujícími neomezujícím způsobem fágový displej, retrovirový displej, ribosomální displej a další způsoby dobře známé v oboru. Výsledné molekuly mohou být vystaveny dodatečné maturaci, jako je φ · φ φ φ · φ ·· φφφφ φφφφ φφ * φ φφφφ φφφ φφφ φ φ φφφ φ φφφ φφφ φφφ φφ, φφ φφ φφφφ afinitní maturace, takové způsoby jsou známy v oboru. Viz Wright a Harris, Immunol. Today 14:43-46 (1993), Hanes a Plucthau PNAS USA 94:4937-4942 (1997) (ribosomální displej), Parmley a Smith Gene 73:305-318 (1988) (fágový displej), Scott TIBS 17:241-245 (1992), Cwirla a kol. PNAS USA 87:6378-6382 (1990), Russel a kol. Nucl. Acids Research 21:1081-1085 (1993), Hoganboom a kol. Immunol. Reviews 130:43-68 (1992), Chiswell a McCafferty TIBTECH 10:80-84 (1992) a U.S. patent 5,733,743. Pokud jsou displejové technologie použity pro produkci protilátek, které nejsou lidské, takové protilátky mohou být polidštěny, jak je popsáno výše.

Použitím těchto technik protilátky mohou být generovány do CTLA-4 exprimujících buněk, CTLA-4 samotných, forem CTLA-4, jejich epitopu nebo peptidů a jejich knihoven exprese (viz například U.S. patent 5,703,057), které potom mohou být prohledávány na aktivity popsané výše.

Protilátky, které jsou vytvořeny pro použití podle předloženého vynálezu nemusí na počátku vykazovat konkrétní požadovaný isotyp. Protilátka, tak jak je vytvořena, může vykazovat libovolný isotyp a může být isotypově změněna až poté použitím obvyklých technik. Tyto techniky zahrnují přímé rekombinantní techniky (viz například U.S. patent 4,816,397) a fúzovací techniky typu buňka-buňka (viz například U.S. patentová přihláška 08/730,639 (podaná 11. října 1996).

0000

0000 0 “0 0

000 0 0

0

00 0 * 0 ·

0 0 0

Jak bylo uvedeno výše, efektorová funkce protilátek podle předloženého vynálezu může být měněna změnou isotypu na IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgD, IgA, IgE nebo IgM pro různá terapeutická použití. Kromě toho může být závislost na komplementu pro usmrcování buněk vyloučena použitím například bispecifik, imunotoxinů nebo radioaktivního označení.

Mohou být vytvářeny bispecifické protilátky, které zahrnují (i) dvě protilátky: jednu specifickou pro CTLA-4 a druhou pro další molekulu (ii) jedinou protilátku, která má jeden řetězec specifický pro CTLA-4 a druhý řetězec specifický pro další molekulu nebo (iii) jediný řetězec protilátky, který je specifický pro CTLA-4 a další molekulu. Takové bispecifické protilátky mohou být vytvářeny použitím dobře známých technik, viz například Fanger a kol. Immunol. Methods 4:72-81 (1994), Wright a Harris, supra a Traunecker a kol. Int. J. Cancer (Suppl.) 7:51-52 (1992).

Protilátky pro použití podle předloženého vynálezu také zahrnují κ body (111 a kol. Design and construction of a hybrid immunoglobulin domain with properties of both heavy and light chain variable regions Protein Eng. 10:949-57 (1997)), minibody (Martin a kol. The affinity-selection of a minibody polypeptide inhibitor of human interleukin-6 EMBO J 13:5303-9 (1994)), diabody (Holliger a kol. 'Diabodies': smáli bivalent and bispecific antibody fragments, PNAS USA 90:6444-6448 (1993)) a janusiny (Traunecker a kol. Bispecific single chain molecules

44

HIV infected

4 4 4 4 4 —4 4

4 44 4 4

44 » 4 4 4 (Janusins) target cytotoxic lymphocytes cells EMBO J.

on

10:3655-3659 (1991) a Traunecker a kol. Janusin: new molecular design for bispecific reagents Int. J. Cancer Supp 17:51-52 (1992)).

Používané protilátky mohou být modifikovány obvyklými technikami, aby působily jako imunotoxiny. Viz například Vitetta, Immunol. Today 14:252 (1993). Viz také U.S. patent 5,194,594. Radioaktivně označené protilátky mohou také být připraveny použitím dobře známých technik. Viz například Junghans a kol. v Cancer Chemotherapiy and Biotherapiy, 655-686 (2. vydání, Chafner a Longo, editoři, Lippincott Raven (1996)). Viz také U.S. patenty 4,681,581, 4,735,210, 5,101,827, 5,102,990 (RE 35,500), 5,648,471 a 5,697,902.

Konkrétní protilátky, použitelné podle předloženého vynálezu zahrnují protilátky, které byly popsány ve WO 00/37504 a označeny jako 3.1.1, 4.1.1, 4.8.1, 4.10.2,

4.13.1, 4.14.3, 6.1.1, 11.2.1, 11.6.1, 11.7.1, 12.3.1.1 a

12.9.1.1. Zatímco informace o těchto sekvencích je zde uvedena, další informace mohou být nalezeny ve WO 00137504. Tyto protilátky jsou všechny plně lidské IgG2 nebo IgG4 těžké řetězce s lidskými κ lehkými řetězci. Předložený vynález se konkrétně týká použití protilátek, které mají sekvence aminokyselin těchto protilátek. Předložený vynález se také týká protilátek, které mají sekvence aminokyselin CDRs těžkých a lehkých řetězců těchto protilátek, stejně

• 9 tak jako protilátek, které mají změny v CDR oblastech jak bylo popsáno výše.

Protilátky používané podle předloženého vynálezu výhodně vykazují velmi vysoké afinity, typicky s Kds od přibližně 10^-9 až do přibližně ΙΟ^-11 M, pokud je měření prováděno buď v pevné fázi nebo v roztokové fázi.

Protilátky použité podle předloženého vynálezu mohou být exprimovány v buněčných liniích jiných než hybridomové buněčné linie. Sekvence kódující cDNA nebo genomové klony pro konkrétní protilátky mohou být použity pro transformaci vhodných savčích nebo nesavčích hostitelských buněk. Transformace může být provedena libovolným známým způsobem pro vložení polynukleotidů do hostitelské buňky, včetně například zabalení polynukleotidů do viru (nebo do virových vektorů) a transdukce hostitelské buňky virem (nebo vektorem) nebo způsoby transfekce, známými z oboru, jejichž příklady se nacházejí v U.S. patentech 4,399,216, 4,912,040, 4,740,461 a 4,959,455. Způsoby vkládání heterologních polynukleotidů do savčích buněk jsou známy v oboru a zahrnují neomezujícím způsobem dextranem zprostředkovanou transfekci, precipitaci fosforečnanem vápenatým, transfekci zprostředkovanou polybrenem, protoplastovou fúzi, elektroporaci, bombardování částicemi, enkapsulaci polynukleotidů nebo polynukleotidů v liposomech, peptidové konjugáty, dendrimery a přímé mikroinjekce DNA do jader.

• « • 9 99 9 · 4 · · 4 • 4 9 9 9 99» · 9 « · • 999 9 9 99

999 999 94 *> «9 «<9

Savčí buněčné linie, které jsou dostupné jako hostitel pro expresi jsou dobře známy v oboru a zahrnují mnoho imortalizovaných buněčných linií, které jsou dostupné z American Type Culture Collection (ATCC), včetně neomezujícím způsobem buněk vaječníků čínského křečka (Chinese hamster ovary - CHO), NSO, HeLa buněk, buněk ledvin .malého křečka (baby hamster. kidney - BHK) , opičích ledvinových buněk (monkey kidney cells - COS) a lidských buněk hepatocelulárního karcinomu (například Hep G2). Mohou také být použity nesavčí buňky včetně buněk bakterií, kvasinek, hmyzu a rostlin. Místně cílená mutageneze domén CH2 protilátek pro zabránění glykosylace může být výhodná pro zabránění změn imunogenicity, farmafokinetiky a/nebo efektorových funkcí, ke kterým dochází na základě ne-lidské glykosylace. Systém exprese glutamin syntázy je diskutován úplně nebo částečně v evropských patentech 216 846, 256 055 a 323 997 a evropské patentové přihlášce 89303964.4.

Protilátky pro použití podle předloženého vynálezu mohou také být produkovány transgenně vytvořením savce nebo rostliny, které jsou transgenní pro požadované imunoglobulinové sekvence těžkých a lehkých řetězců a které produkují protilátku, kterou je z nich možno získat. Transgenní protilátky mohou být produkovány a získávány z mléka ovcí, krav nebo dalších savců. Viz například U.S. patenty 5,827,690, 5,756,687, 5,750,172 a 5,741,957.

Obr. 1 ukazuje úplné nukleotidové a aminokyselinové sekvence následujících anti-CTLA-4 protilátek:

CA

4.1.1:

úplný 4.1.1 těžký řetězec (cDNA 22 (a), a aminokyseliny 22(c));

4.1.1 těžký 22(e));

(cDNA 22(f)

úplný aglykosylovaný 22(d) a aminokyseliny
4.1.1 lehký 22(g)) ;	řetězec
úplný 4.8.1	těžký
aminokyseliny	22 (i));
4.8.1 lehký	řetězec
22(k));

genom 22 (b) řetězec (cDNA a aminokyseliny řetězec (cDNA 22(h) a (cDNA 22 (j) a aminokyseliny úplný 6.1.1 těžký řetězec (cDNA 22(1) a aminokyseliny 22(m));

6.1.1 lehký řetězec (cDNA 22(n) a aminokyselina 22(0));

11.2.1:

úplný 11.2.1 těžký řetězec (cDNA 22(p) a aminokyseliny 22(q)); a

11.2.1 lehký řetězec (cDNA 22 (r) a aminokyseliny 22(s) ) .

Signální peptidové sekvence jsou uvedeny tučným a velkým textem. Otevřené čtecí rámce v úplné 4.1.1 genomické DNA sekvenci (Obr. l(b)) jsou podtrženy. Mutace vložené pro vytvoření aglykosylovaného 4.1.1 těžkého řetězce a výsledné změny (N294Q) jsou znázorněny dvojitým podtržením a tučným textem (cDNA (Obr. 1(b) a aminokyseliny (Obr. l(c)).

·♦ « · • · · · · • · ·· <

·· ·· · · · · «« ·· I · ·

Obr. 2 ukazuje' porovnání sekvencí mezi předpovězenými sekvencemi aminokyselin těžkého řetězce klonů 4.1.1, 4.8.1, 4.14.3, 6.1.1, 3.1,1, 4.10.2, 4.13.1, 11.2.1, 11.6.1,

11.7.1, 12.3.1.1 a 12.9.1.1 a sekvencí aminokyselin zárodečné linie DP-50 (3-33) . Rozdíly mezi· sekvencí zárodečné linie DP-50 a sekvencemi klonů jsou uvedeny tučně. Obrázek také ukazuje polohy sekvencí CDR1, CDR2 a CDR3 protilátek. Polohy sekvencí CDR1 a CDR2 jsou ukázány šipkami na okraji tabulky. Aminové zakončení CDR3 je také ukázáno na okraji, ale karboxy zakončení je variabilní a končí bezprostředně aminokyselinou, která je N-terminální v sekvenci.

Obr. 3 ukazuje porovnání sekvencí mezi předpovězeným těžkým řetězcem sekvence aminokyselin klonu 2.1.3 a sekvencí aminokyselin zárodečné linie DP-65 (4-31) . Rozdíly mezi sekvencí zárodečné linie DP-65 a sekvencí klonu jsou uvedeny tučně. Obrázek také ukazuje polohy sekvencí CDR1, CDR2 a CDR3 protilátky podtržením.

Obr. 4 ukazuje porovnání sekvencí mezi předpovězenou sekvencí aminokyselin κ lehkého řetězce klonů 4.1.1, 4.8.1, 4.14.3, 6.1.1, 4.10.2 a 4.13.1 a sekvencí aminokyselin zárodečné linie A27. Rozdíly mezi sekvencí zárodečné linie A27 a sekvencí v klonu jsou uvedeny tučně. Obrázek také ukazuje polohy CDR1, CDR2 a CDR3 sekvencí protilátky podtržením. Zjevné delece v CDR1 klonů 4.8.1, 4.14.3 a

6.1.1 jsou označeny jako Os.

• · • * ···* • ·· · * 4 · • · ·· • ·

• ·

Obr. 5 ukazuje porovnání sekvencí mezi předpovězenou sekvencí aminokyselin κ lehkého řetězce klonů 3.1.1,

11.2.1, 11.6.1 a 11.7.1 a sekvencí aminokyselin zárodečné linie 012. Rozdíly mezi sekvencí zárodečné linie 012 a sekvencí v klonu jsou uvedeny tučně. Obrázek také ukazuje polohy CDR1, CDR2 a CDR3 sekvencí protilátky podtržením.

Obr. 6 ukazuje porovnání sekvencí mezi předpovězenou sekvencí aminokyselin κ lehkého řetězce klonů 2.1.3 a sekvencí aminokyselin zárodečné linie A10/A26. Rozdíly mezi sekvencí zárodečné linie A10/A26 a sekvencí v klonu jsou uvedeny tučně. Obrázek také ukazuje polohy CDR1, CDR2 a CDR3 sekvencí protilátky podtržením.

Obr. 7 ukazuje porovnání sekvencí mezi předpovězenou sekvencí 'aminokyselin κ lehkého řetězce klonů 12.3.1 a sekvencí aminokyselin zárodečné linie A17. Rozdíly mezi sekvencí zárodečné linie A17 a sekvencí v klonu jsou uvedeny tučně. Obrázek také ukazuje polohy CDR1, CDR2 a CDR3 sekvencí protilátky podtržením.

Obr. 8 ukazuje porovnání sekvencí mezi předpovězenou sekvencí aminokyselin κ lehkého řetězce klonů 12.9.1 a sekvencí aminokyselin zárodečné linie A3/A19. Rozdíly mezi sekvencí zárodečné linie A3/A19 a sekvencí v klonu jsou uvedeny tučně. Obrázek také ukazuje polohy CDR1, CDR2 a CDR3 sekvencí protilátky podtržením.

0 0

Následující tabulka ukazuje počet aminokyselinových změn proti sekvenci zárodečné linie pro H a L. řetězec FR a CDR oblasti pro protilátky podle předloženého vynálezu:

	4.1.1	4.8.1	6.1.1	11.2.1
H-FR	1	0	1	0
H-CDR	3	4	3	1
L-FR	1	0	1	0
L-CDR	3	4 (včetně 2 delecí)	2 (včetně 1 delece)	3
Celkově FR/CDR	2/6	0/8	2/5	0/4

Zastupuje:

dr. P. Zelený

1) ÍMb - MO • · · * · ···*

SEQUENCE LISTING <110> PFIZER PRODUCTS INC.

<120> USES OF ANTI-CTLA-4 ANTIBODIES <130> PC23019A <140>

<141>

<150> 60/293042 <151> 2001-05-23 <160> 39 <170> Patentln Ver. 2.1 <210> 1 <211> 1392 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atggagtttg ggctgagctg ggttttcctc gttgctcttt taagaggtgt gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcgtg gtccagcctg ggaggtccct tgtgtagcgt ctggattcac cttcagtagc catggcatgc actgggtccg ggcaaggggc tggagtgggt ggcagttata tggtatgatg gaagaaataa gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag ttcggtcctt ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc aagggcccat cggtcttccc cctggcgccc tgctccagga gcacctccga gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc ggcgctctga ccagcggcgt gcacaccttc ccagctgtcc tacagtcctc tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcaacttcg gcacccagac aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga cagttgagcg gtcgagtgcc caccgtgccc agcaccacct gtggcaggac cgtcagtctt ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacgtg gacgtgagcc acgaagaccc cgaggtccag ttcaactggt acgtggacgg cataatgcca agacaaagcc acgggaggag cagttcaaca gcacgttccg gtcctcaccg ttgtgcacca ggactggctg aacggcaagg agtacaagtg aacaaaggcc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga tgaccaagaa ctgacctgcc tggtcaaagg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg gggcagccgg agaacaacta caagaccaca cctcccatgc tggactccga ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ccgggtaaat ga ··

ccagtgtcag	60
gagactctcc	120
ccaggctcca	180
atactatgca	240
gctgtttctg	300
aggaggtcac	360
agcctccacc	420
gagcacagcg	480
gtggaactca	540
aggactctac	600
ctacacctgc	660
caaatgttgt	720
cctcttcccc	780
cgtggtggtg	840
cgtggaggtg	900
tgtggtcagc	960
caaggtctcc	1020
gcagccccga	1080
ccaggtcagc	1140
ggagagcaat	1200
cggctccttc	1260
cgtcttctca	1320
ctccctgtct	1380 1392

·· ···* • · · • ···

·· « *· · • 4

4 <210> 2 <211> 1999 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 atggagtttg gtgcagctgg tgtgtagcgt ggcaaggggc gactccgtga caaatgaaca ttcggtcctt aagggcccat gccctgggct ggcgctctga tccctcagca aacgtagatc cagggaggga ctgtgcagcc tctgcccgcc gcaggcacag tcagacctgc ggccaaactg ccaatcttct cagcccaggc agggacaggc gtggcaggac cggacccctg ttcaactggt cagttcaaca aacggcaagg accatctcca gctcggccca gccccgagaa ggtcagcctg gagcaatggg ctccttcttc cttctcatgc cctgtctccg ggctgagctg tggagtctgg ctggattcac tggagtgggt agggccgatt gcctgagagc ttgactactg cggtcttccc gcctggtcaa ccagcggcgt gcgtggtgac acaagcccag gggtgtctgc ccagcccagg ccactcatgc gctgggtgcc caaaagccat tccactccct ctctgcagag ctcgccctcc cccagctggg cgtcagtctt aggtcacgtg acgtggacgg gcacgttccg agtacaagtg aaaccaaagg ccctctgccc ccacaggtgt acctgcctgg cagccggaga ctctacagca tccgtgatgc ggtaaatga ggttttcctc gggaggcgtg cttcagtagc ggcagttata caccatctcc cgaggacacg gggccaggga cctggcgccc ggactacttc gcacaccttc cgtgccctcc caacaccaag tggaagccag gcagcaaggc tcagggagag cctaccccag atccgggagg cagctcggac cgcaaatgtt agctcaaggc tgctgacacg cctcttcccc cgtggtggtg cgtggaggtg tgtggtcagc caaggtctcc tgggacccgc tgggagtgac acaccctgcc tcaaaggctt acaactacaa agctcaccgt atgaggctct gttgctcttt gtccagcctg catggcatgc tggtatgatg agagacaatt gctgtgtatt accctggtca tgctccagga cccgaaccgg ccagctgtcc agcaacttcg gtggacaaga gctcagccct aggccccatc ggtcttctgg gcccttcaca accctgcccc accttctctc gtgtcgagtg gggacaggtg tccacctcca ccaaaaccca gacgtgagcc cataatgcca gtcctcaccg aacaaaggcc ggggtatgag cgctgtgcca cccatcccgg ctaccccagc gaccacacct ggacaagagc gcacaaccac taagaggtgt ggaggtccct actgggtccg gaagaaataa ccaagaacac actgtgcgag ccgtctcctc gcacctccga tgacggtgtc tacagtcctc gcacccagac cagttggtga cctgcctgga tgtctcctca ctttttccac cacaggggca tgacctaagc ctcccagatc cccaccgtgc ccctagagta tctcttcctc aggacaccct acgaagaccc agacaaagcc ttgtgcacca tcccagcccc ggccacatgg acctctgtcc gaggagatga gacatcgccg cccatgctgg aggtggcagc tacacgcaga ccagtgtcag gagactctcc ccaggctcca atactatgca gctgtttctg aggaggtcac agctagcacc gagcacagcg gtggaactca aggactctac ctacacctgc gaggccagct cgcaccccgg cccggaggcc caggctccag ggtgcttggc cgaccccaaa cgagtaactc ccaggtaagc gcctgcatcc agcaccacct catgatctcc cgaggtccag acgggaggag ggactggctg catcgagaaa acagaggccg ctacagggca ccaagaacca tggagtggga actccgacgg aggggaacgt agagcctctc

120

180

240

300

360

420

480

540

600

660

720

780

840

900

960

1020

1080

1140

1200

1260

1320

1380

1440

1500

1560

1620

1680

1740

1800

1860

1920

1980

1999 <210> 3 <211> 463 <212> PRT <213> Homo sapiens ·· «·· · • * • · · ·

»« «· • · · • · · • » · · • · · ·« ···· <400> 3

Met Glu Phe Glý Leu 1 5

Val Gin Cys Gin Val 20

Pro Gly Arg Ser Leu 35

Ser Ser His Gly Met 50

Glu Trp Val Ala Val 65

Asp Ser Val Lys Gly 85

Thr Leu Phe Leu Gin 100

Tyr Tyr Cys Ala Arg 115

Gin Gly Thr Leu Val 130

Val Phe Pro Leu Ala 145

Ser Trp Val Phe Leu Val 10

Gin Leu Val Glu Ser Gly 25

Arg Leu Ser Cys Val Ala 40

His Trp Val Arg Gin Ala 55

Ile Trp Tyr Asp Gly Arg 70 75

Arg Phe Thr Ile Ser Arg 90

Met Asn Ser Leu Arg Ala 105

Gly Gly His Phe Gly Pro 120

Thr Val Ser Ser Ala Ser 135

Pro Cys Ser Arg Ser Thr 150 155

Ala Leu Leu Arg Gly 15

Gly Gly Val Val Gin 30

Ser Gly Phe Thr Phe 45

Pro Gly Lys Gly Leu 60

Asn Lys Tyr Tyr Ala 80

Asp Asn Ser Lys Asn 95

Glu Asp Thr Ala Val 110

Phe Asp Tyr Trp Gly 125

Thr Lys Gly Pro Ser 140

Ser Glu Ser Thr Ala 160

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 165 170 175

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 195 200 205

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 210 215 220

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys

225 230 235 240

Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val

245

250 • 4 »·« · ·

4 44 • 4 44 ·4 ·· • » 4 4 4 · ·

4 4 4 · 4 * •44 4 ··· 4 4 · · • 4 4 4 4 4 4

44 44 444«

255

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 260 265 270

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 275 280 285

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 290 295 300

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser

305 310 315 320

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

325 330 335

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 340 345 350

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 355 360 365

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 370 375 380

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

385 390 395 400

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser

405 410 415

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 420 425 430

Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 435 440 445

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460

<210>	4
<211>	1392
<212>	DNA
<213>	Homo sapiens
<400>	4

»· ·» • · » · • · · · • » ··· • * * ·· ·» atggagtttg gtgcagctgg tgtgtagcgt ggcaaggggc gactccgtga caaatgaaca ttcggtcctt aagggcccat gccctgggct ggcgctctga tccctcagca aacgtagatc gtcgagtgcc ccaaaaccca gacgtgagcc cataatgcca gtcctcaccg aacaaaggcc gaaccacagg ctgacctgcc gggcagccgg ttcctctaca tgctccgtga ccgggtaaat ggctgagctg tggagtctgg ctggattcac tggagtgggt agggccgatt gcctgagagc ttgactactg cggtcttccc gcctggtcaa ccagcggcgt gcgtggtgac acaagcccag caccgtgccc aggacaccct acgaagaccc agacaaagcc ttgtgcacca tcccagcccc tgtacaccct tggtcaaagg agaacaacta gcaagctcac tgcatgaggc ga ggttttcctc gggaggcgtg cttcagtagc ggcagttata caccatctcc cgaggacacg gggccaggga cctggcgccc ggactacttc gcacaccttc cgtgccctcc caacaccaag agcaccacct catgatctcc cgaggtccag acgggaggag ggactggctg catcgagaaa gcccccatcc cttctacccc caagaccaca cgtggacaag tctgcacaac gttgctcttt gtccagcctg catggcatgc tggtatgatg agagacaatt gctgtgtatt accctggtca tgctccagga cccgaaccgg ccagctgtcc agcaacttcg gtggacaaga gtggcaggac cggacccctg ttcaactggt cagttccaaa aacggcaagg accatctcca cgggaggaga agcgacatcg cctcccatgc agcaggtggc cactacacgc »» ««·· • * * • · «· • · · • · ··«» ··· ·» * · » • * « • · » • » » »» »«·· taagaggtgt ggaggtccct actgggtccg gaagaaataa ccaagaacac actgtgcgag ccgtctcctc gcacctccga tgacggtgtc tacagtcctc gcacccagac cagttgagcg cgtcagtctt aggtcacgtg acgtggacgg gcacgttccg agtacaagtg aaaccaaagg tgaccaagaa ccgtggagtg tggactccga agcaggggaa agaagagcct ccagtgtcag gagactctcc ccaggctcca atactatgca gctgtttctg aggaggtcac agcctccacc gagcacagcg gtggaactca aggactctac ctacacctgc caaatgttgt cctcttcccc cgtggtggtg cgtggaggtg tgtggtcagc caaggtctcc gcagccccga ccaggtcagc ggagagcaat cggctccttc cgtcttctca ctccctgtct

120

180

240

300

360

420

480

540

600

660

720

780

840

900

960

1020

1080

1140

1200

1260

1320

1380

1392 <210> 5 <211> 463 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5

Met Glu Phe Gly Leu

Ser Trp

Val

Phe Leu Val Ala Leu Leu Arg Gly

1

5

10

15

Val

Gin

Cys

Gin

Val

Gin

Leu

Val

Glu

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gin

20

25

30

Pro

Gly

Arg

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Val

Ala

Ser

Gly

Phe

Thr

Phe

35

40

45

Ser

Ser

His

Gly

Met

His

Trp

Val

Arg

Gin

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

50

55

60

Glu

Trp

Val

Ala

Val

Ile

Trp

Tyr

Asp

Gly

Arg

Asn

Lys

Tyr

Tyr

Ala

65

70

75

80

Asp

Ser

Val

Lys

Gly

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Arg

Asp

Asn

Ser

Lys

Asn

···· · * · · · ?

« · * · · ·*· · » · · • · ·· ♦ β · · _ ···««· ·· ·* * ® ·*··

85

90

95

Thr

Leu

Phe

Leu

Gin

Met

Asn

Ser

Leu

Arg

Ala

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

100

105

110

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Gly

Gly

His

Phe

Gly

Pro

Phe

Asp

Tyr

Trp

Gly

115

120

125

Gin

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Ala

Ser

Thr

Lys

Gly

Pro

Ser

130

135

140

Val

Phe

Pro

Leu

Ala

Pro

Cys

Ser

Arg

Ser

Thr

Ser

Glu

Ser

Thr

Ala

145

150

155

160

Ala

Leu

Gly

Cys

Leu

Val

Lys

Asp

Tyr

Phe

Pro

Glu

Pro

Val

Thr

Val

165

170

175

Ser

Trp

Asn

Ser

Gly

Ala

Leu

Thr

Ser

Gly

Val

His

Thr

Phe

Pro

Ala

180

185

190

Val

Leu

Gin

Ser

Ser

Gly

Leu

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Val

Val

Thr

Val

195

200

205

Pro

Ser

Ser

Asn

Phe

Gly

Thr

Gin

Thr

Tyr

Thr

Cys

Asn

Val

Asp

His

210

215

220

Lys

Pro

Ser

Asn

Thr

Lys

Val

Asp

Lys

Thr

Val

Glu

Arg

Lys

Cys

Cys

225

230

235

240

Val

Glu

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Pro

Val

Ala

Gly

Pro

Ser

Val

245

250

255

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

260

265

270

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

275

280

285

Val

Gin

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

290

295

300

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gin

Phe

Gin

Ser

Thr

Phe

Arg

Val

Val

Ser

305

310

315

320

Val

Leu

Thr

Val

Val

His

Gin

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

325

330

335

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

355

370

385

450

435

340

345

•

• · · « •

• • · · • ·

• · • • • ·

• • · · · • • · 350

• · • * • · • ·

• • • • · · ·

Lys

Gly

Gin

Pro

Arg

Glu

Pro

Gin

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

360

365

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gin

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

375

380

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

390

395

400

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Met

Leu

Asp

Ser

405

410

415

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

420

425

430

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Gys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

440

445

Tyr

Thr

Gin

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

455

460 <210> 6 <211> 708 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 6 atggaaaccc gaaattgtgt ctctcctgca cctggccagg gacaggttca cctgaagatt caagggacca ccatctgatg tatcccagag caggagagtg acgctgagca ggcctgagct cagcgcagct tgacgcagtc gggccagtca ctcccaggct gtggcagtgg ttgcagtgta aggtggaaat agcagttgaa aggccaaagt tcacagagca aagcagacta cgcccgtcac tctcttcctc tccaggcacc gagtattagc cctcatctat gtctgggaca ttactgtcag caaacgaact atctggaact acagtggaag ggacagcaag cgagaaacac aaagagcttc ctgctactct ctgtctttgt agcagcttct ggtgcatcca gacttcactc cagtatggta gtggctgcac gcctctgttg gtggataacg gacagcacct aaagtctacg aacaggggag ggctcccaga ctccagggga tagcctggta gcagggccac tcaccatcag cctcaccctg catctgtctt tgtgcctgct ccctccaatc acagcctcag cctgcgaagt agtgttag taccaccgga 60 aagagccacc 120 ccagcagaga 180 tggcatccca 240 cagactggag 300 gacgttcggc 360 catcttcccg 420 gaataacttc 480 gggtaactcc 540 cagcaccctg 600 cacccatcag 660

708 <210> 7 <211> 235 <212> PRT <213> Homo sapiens

9* ···· *· ·» ·· ·· ··· · · · · · · · ···· · · · * · · * • ·»· ······ 9 · • · · · · · · · ···· ··· »· ·· ·· ····

<400> 7

Gin

Leu

Leu Phe

Leu 10

Leu

Leu

Leu

Trp Leu Pro 15

Met 1

Glu

Thr

Pro

Ala 5

Asp

Thr

Thr

Gly

Glu

Ile

Val

Leu

Thr

Gin

Ser

Pro

Gly

Thr

Leu

Ser

20

25

30

Leu

Ser

Pro

Gly

Glu

Arg

Ala

Thr

Leu

Ser

Cys

Arg

Ala

Ser

Gin

Ser

35

40

45

Ile

Ser

Ser

Ser

Phe

Leu

Ala

Trp

Tyr

Gin

Gin

Arg

Pro

Gly

Gin

Ala

50

55

60

Pro

Arg

Leu

Leu

Ile

Tyr

Gly

Ala

Ser

Ser

Arg

Ala

Thr

Gly

Ile

Pro

65

70

75

80

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Thr

Ile

85

90

95

Ser

Arg

Leu

Glu

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Gin

Gin

Tyr

100

105

110

Gly

Thr

Ser

Pro

Trp

Thr

Phe

Gly

Gin

Gly

Thr

Lys

Val

Glu

Ile

Lys

115

120

125

Arg

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

130

135

140

Gin

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

145

150

155

160

Tyr

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gin

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gin

165

170

175

Ser

Gly

Asn

Ser

Gin

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gin

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

180

185

190

Thr

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

195

200

205

Lys

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gin

Gly

Leu

Ser

Ser

210

215

220

Pro

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

225

230

235

<210> 8 <211> 1395 <212> DNA <213> Homo <400> 8 atggagtttg gtgcagctgg tgtacagcgt ggcaaggggc gactccgtga caaatgaaca ctggggtcct accaagggcc gcggccctgg tcaggcgctc tactccctca tgcaacgtag tgtgtcgagt cccccaaaac gtggacgtga gtgcataatg agcgtcctca tccaacaaag cgagaaccac agcctgacct aatgggcagc ttcttcctct tcatgctccg tctccgggta sapiens ggctgagctg tggagtctgg ctggattcac tggagtgggt agggccgatt gcctgagagc actttgacta catcggtctt gctgcctggt tgaccagcgg gcagcgtggt atcacaagcc gcccaccgtg ccaaggacac gccacgaaga ccaagacaaa ccgttgtgca gcctcccagc aggtgtacac gcctggtcaa cggagaacaa acagcaagct tgatgcatga aatga ggttttcctc gggaggcgtg cttcagtaac ggcagttata caccatctcc cgaggacacg ctggggccag ccccctggcg caaggactac cgtgcacacc gaccgtgccc cagcaacacc cccagcacca cctcatgatc ccccgaggtc gccacgggag ccaggactgg ccccatcgag cctgccccca aggcttctac ctacaagacc caccgtggac ggctctgcac • · · · · · 9 9 9 9

9 9 9 9 9 ···· · ·· 9 • ··· 99999

9 9 9 9

999999 99 99 gttgctcttt gtccagcctg tatggcatgc tggtatgatg agtgacaatt gctgtgtatt ggaaccctgg ccctgctcca ttccccgaac ttcccagctg tccagcaact aaggtggaca cctgtggcag tcccggaccc cagttcaact gagcagttca ctgaacggca aaaaccatct tcccgggagg cccagcgaca acacctccca aagagcaggt aaccactaca taagaggtgt ggaggtccct actgggtccg gaagtaataa ccaagaacac actgtgcgag tcaccgtctc ggagcacctc cggtgacggt tcctacagtc tcggcaccca agacagttga gaccgtcagt ctgaggtcac ggtacgtgga acagcacgtt aggagtacaa ccaaaaccaa agatgaccaa tcgccgtgga tgctggactc ggcagcaggg cgcagaagag ccagtgtcag gagactctcc ccaggctcca acactatgga gctgtatctg aggagagaga ctcagcctcc cgagagcaca gtcgtggaac ctcaggactc gacctacacc gcgcaaatgt cttcctcttc gtgcgtggtg cggcgtggag ccgtgtggtc gtgcaaggtc agggcagccc gaaccaggtc gtgggagagc cgacggctcc gaacgtcttc cctctccctg

120

180

240

300

360

420

480

540

600

660

720

780

840

900

960

1020

1080

1140

1200

1260

1320

1380

1395 <210> 9 <211> 464 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9

Met 1

Glu

Phe

Gly

Leu 5

Ser

Trp

Val

Phe

Leu 10

Val

Ala

Leu

Leu

Arg 15

Gly

Val

Gin

Cys

Gin 20

Val

Gin

Leu

Val

Glu 25

Ser

Gly

Gly

Gly

Val 30

Val

Gin

Pro

Gly

Arg 35

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser 40

Cys

Thr

Ala

Ser

Gly 45

Phe

Thr

Phe

Ser

Asn

Tyr

Gly

Met

His

Trp

Val

Arg

Gin

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

• 0

Glu Trp 65

Asp Ser

Thr Leu

Tyr Tyr

Gly Gin 130

Ser Val 145

Ala Ala

Val Ser

Ala Val

Val Pro 210

His Lys 225

Cys Val

Val Phe

Thr Pro

Glu Val 290

Lys Thr

Val Ala Val Ile Trp Tyr Asp 70

Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile 85

Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu 100 105

Cys Ala Arg Gly Glu Arg Leu 115 120

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 135

Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser 150

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 165

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 180 185

Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr 195 200

Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin 215

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 230

Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala 245

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 260 265

Glu Val Thr Cys Val Val Val 275 280

Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp 295

Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe

Gly Ser Asn 75

Ser Ser Asp 90

Arg Ala Glu

Gly Ser Tyr

Ser Ala Ser 140

Arg Ser Thr 155

Tyr Phe Pro 170

Ser Gly Val

Ser Leu Ser

Thr Tyr Thr 220

Lys Thr Val 235

Pro Pro Val 250

Asp Thr Leu

Asp Val Ser

Gly Val Glu 300

Asn Ser Thr • 0

Lys

Asn

Asp

Phe

125

Thr

Ser

Glu

His

Ser

205

Cys

Glu

Ala

Met

His

285

Val

Phe • 0 · ·

0 · ' ·

0 0 *0 0 ·

0 0 ·

0* 0000

His Tyr Gly 80

Ser Lys Asn 95

Thr Ala Val 110

Asp Tyr Trp

Lys Gly Pro

Glu Ser Thr .160

Pro Val Thr 175

Thr Phe Pro 190

Val Val Thr

Asn Val Asp

Arg Lys Cys 240

Gly Pro Ser 255

Ile Ser Arg 270

Glu Asp Pro

His Asn Ala

Arg Val Val • ·

305	310	• • •	• · * • 9 • · · 9 315	4 · • • «' •	♦ · • 9 • 9 • ' · • · « ·	9 9 9 9 • 9 • · · • 9 ·	• 9 • • 9 9 • 4 ·	• · • · • • * • · • · · 320
Ser Val Leu Thr Val 325	Val His Gin Asp	Trp 330	Leu	Asn	Gly	Lys	Glu 335	Tyr
Lys Cys Lys Val Ser 340	Asn Lys Gly Leu 345	Pro	Ala	Pro	Ile	Glu 350	Lys	Thr
Ile Ser Lys Thr Lys 355	Gly Gin Pro Arg 360	Glu	Pro	Gin	Val 365	Tyr	Thr	Leu
Pro Pro Ser Arg Glu 370	Glu Met Thr Lys 375	Asn	Gin	Val 380	Ser	Leu	Thr	Cys
Leu Val Lys Gly Phe 385	Tyr Pro Ser Asp 390	Ile	Ala 395	Val	Glu	Trp	Glu	Ser 400
Asn Gly Gin Pro Glu 405	Asn Asn Tyr Lys	Thr 410	Thr	Pro	Pro	Met	Leu 415	Asp
Ser Asp Gly Ser Phe 420	Phe Leu Tyr Ser 425	Lys	Leu	Thr	Val	Asp 430	Lys	Ser
Arg Trp Gin Gin Gly 435	Asn Val Phe Ser 440	Cys	Ser	Val	Met 445	His	Glu	Ala
Leu His Asn His Tyr	Thr Gin Lys Ser	Leu	Ser	Leu	Ser	Pro	Gly	Lys

450 455 460 <210> 10 <211> 702 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 10 atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 120 ctctcctgca ggaccagtgt tagcagcagt tacttagcct ggtaccagca gaaacctggc 180 caggctccca ggctcctcat ctatggtgca tccagcaggg ccactggcat cccagacagg 240 ttcagtggca gtgggtctgg gacagacttc actctcacca tcagcagact ggagcctgaa 300 gattttgcag tctattactg tcagcagtat ggcatctcac ccttcacttt cggcggaggg 360 accaaggtgg agatcaagcg aactgtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 420 gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 480 agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 540 > « ·· «9 99 9· • · « * 9 «· » 9 9 · 9 9 · ⁴

999 999999 9 · • 9 9 9 9 9 9 » 99 99 »*9994 agtgtcacag agcaaagcag agctcgcccg agcaggacag actacgagaa tcacaaagag caaggacagc acacaaagtc cttcaacagg acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg tacgcctgcg aagtcaccca fccagggcctg ggagagtgtt ag

600

660

702 <210> 11 <211> 233 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11

Met Glu Thr Pro Ala Gin Leu Leu 1 5

Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu 20

Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr 35 40

Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin 50 55

Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser 65 70

Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 85

Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val 100

Ser Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly 115 120

Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile 130 135

Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val 145 150

Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys 165

Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu 180

Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu

Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro 10 15

Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser 25 30

Leu Ser Cys Arg Thr Ser Val Ser 45

Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg 60

Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg 75 80

Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg 90 95

Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Gly Ile 105 110

Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 125

Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu 140

Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 155 160

Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly 170 175

Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 185 190

Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His ·· ·» ·· ·» • · » · « · « • ·« · • · • ··· » · ·

195

200

205

Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val 210 215 220

Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 <210> 12 <211> 1392 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 12

atggagtttg	ggctgagctg	ggttttcctc	gttgctcttt	taagaggtgt	ccagtgtcag	60
gtgcagctgg	tggagtctgg	gggaggcgtg	gtcgagcctg	ggaggtccct	gagactctcc	120
tgtacagcgt	ctggattcac	cttcagtagt	tatggcatgc	actgggtccg	ccaggctcca	180
ggcaaggggc	tggagtgggt	ggcagttata	tggtatgatg	gaagcaataa	acactatgca	240
gactccgcga	agggccgatt	caccatctcc	agagacaatt	ccaagaacac	gctgtatctg	300
caaatgaaca	gcctgagagc	cgaggacacg	gctgtgtatt	actgtgcgag	agccggactg	360
ctgggttact	ttgactactg	gggccaggga	accctggtca	ccgtctcctc	agcctccacc	420
aagggcccat	cggtcttccc	cctggcgccc	tgctccagga	gcacctccga	gagcacagcg	480
gccctgggct	gcctggtcaa	ggactacttc	cccgaaccgg	tgacggtgtc	gtggaactca	540
ggcgctctga	ccagcggcgt	gcacaccttc	ccagctgtcc	tacagtcctc	aggactctac	600
tccctcagca	gcgtggtgac	cgtgccctcc	agcaacttcg	gcacccagac	ctacacctgc	660
aacgtagatc	acaagcccag	caacaccaag	gtggacaaga	cagttgagcg	caaatgttgt	720
gtcgagtgcc	caccgtgccc	agcaccacct	gtggcaggac	cgtcagtctt	cctcttcccc	780
ccaaaaccca	aggacaccct	catgatctcc	cggacccctg	aggtcacgtg	cgtggtggtg	840
gacgtgagcc	acgaagaccc	cgaggtccag	ttcaactggt	acgtggacgg	cgtggaggtg	900
cataatgcca	agacaaagcc	acgggaggag	cagttcaaca	gcacgttccg	tgtggtcagc	960
gtcctcaccg	ttgtgcacca	ggactggctg	aacggcaagg	agtacaagtg	caaggtctcc	1020
aacaaaggcc	tcccagcccc	catcgagaaa	accatctcca	aaaccaaagg	gcagccccga	1080
gaaccacagg	tgtacaccct	gcccccatcc	cgggaggaga	tgaccaagaa	ccaggtcagc	1140
ctgacctgcc	tggtcaaagg	cttctacccc	agcgacatcg	ccgtggagtg	ggagagcaat	1200
gggcagccgg	agaacaacta	caagaccaca	cctcccatgc	tggactccga	cggctccttc	1260
ttcctctaca	gcaagctcac	cgtggacaag	agcaggtggc	agcaggggaa	cgtcttctca	1320
tgctccgtga	tgcatgaggc	tctgcacaac	cactacacgc	agaagagcct	ctccctgtct	1380
ccgggtaaat	ga					1392

<210>	13
<211>	463
<212>	PRT
<213>	Homo sapiens
<400>	13

Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Leu Leu Arg Gly

99··

5

Val Gin Cys Gin Val Gin Leu Val 20

Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser 35 40

Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val 50 55

Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Tyr 65 70

Asp Ser Ala Lys Gly Arg Phe Thr 85

Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser 100

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Gly Leu 115 120

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 130 135

Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser 145 150

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 165

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 180

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr 195 200

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin 210 215

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 225 230

Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala 245

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

99 99 9

999 9999 ·<· •999 9 99 4 9 ·

949 444444 9

444 4499

9994 999 94 99 4· 99

15

Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Glu 25 30

Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe 45

Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 60

Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala 75 80

Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 90 95

Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 105 110

Leu Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 125

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 140

Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 155 160

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 170 175

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 185 190

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 205

Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 220

Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys 235 240

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 250 255

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

I · · » » · · > · · · · ·

I ·«·«·· * « > « · · · · • · «· ·· ··«

260

265

270

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 275 280 285

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 290 295 300

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser

305 310 315 320

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

325 330 335

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 340 345 350

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 355 360 365

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 370 375 380

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

385 390 395 400

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser

405 410 415

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 420 425 430

Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 435 440 445

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 14 <211> 705 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 14 atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 120 ctctcctgta gggccagtca aagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 180 «4 ·♦·· • « « · • · · • · ···· ggccaggctc aggttcagtg gaagattttg gggaccaaag tctgatgagc cccagagagg gagagtgtca ctgagcaaag ctgagctcgc ccaggcccct gcagtgggtc cagtgtatta tggatatcaa agttgaaatc ccaaagtaca cagagcagga cagactacga ccgtcacaaa catctatggt tgggacagac ctgtcagcag acgaactgtg tggaactgcc gfcggaaggtg cagcaaggac gaaacacaaa gagcttcaac gtatccagca ttcactctca tatggtatct gctgcaccat tctgttgtgt gataacgccc agcacctaca gtctacgcct aggggagagt >» · · · »· gggccactgg ccatcagcag caccattcac ctgtcttcat gcctgctgaa tccaatcggg gcctcagcag gcgaagtcac gttag catcccagac 240 actggagcct 300 tfctcggccct 360 cttcccgcca 420 taacttctat 480 taactcccag 540 caccctgacg 600 ccatcagggc 660 705 <210> 15 <211> 234 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15

Met

Glu

Thr

Pro

Ala

Gin

Leu

Leu

Phe

Leu

Leu

Leu

Leu

Trp

Leu

Pro

1

5

10

15

Asp

Thr

Thr

Gly

Glu

Ile

Val

Leu

Thr

Gin

Ser

Pro

Gly

Thr

Leu

Ser

20

25

30

Leu

Ser

Pro

Gly

Glu

Arg

Ala

Thr

Leu

Ser

Cys

Arg

Ala

Ser

Gin

Ser

35

40

45

Val

Ser

Ser

Tyr

Leu

Ala

Trp

Tyr

Gin

Gin

Lys

Pro

Gly

Gin

Ala

Pro

50

55

60

Arg

Pro

Leu

Ile

Tyr

Gly

Val

Ser

Ser

Arg

Ala

Thr

Gly

Ile

Pro

Asp

65

70

75

80

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

85

90

95

Arg

Leu

Glu

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Gin

Gin

Tyr

Gly

100

105

110

Ile

Ser

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

Pro

Gly

Thr

Lys

Val

Asp

Ile

Lys

Arg

115

120

125

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gin

130

135

140

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

145

150

155

160

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gin

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gin

Ser

• 9 4·«4 ·· ·♦ 44 ··

4 4 4 · ♦ · · · * • ··· 4 · · · · · ·

4 · 4 4 444 4 4 4 4

4 4 4 4444

4444 444 44 44 44 4444

165 170 175

Gly

Asn

Ser

Gin

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gin

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

180

185

190

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

195

200

205

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gin

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

210

215

220

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

225 230 <210> 16 <211> 1413 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 16 atggagtttg ggctgagctg ggttttcctc gttgctcttt taagaggtgt ccagtgtcag 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcgtg gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc 120 tgtgcagcgt ctggattcac cttcagtagc tatggcatgc actgggtccg ccaggctcca 180 ggcaaggggc tggagtgggt ggcagttata tggtatgatg gaagtaataa atactatgca 240 gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctg 300 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agatccgagg 360 ggagctaccc tttactacta ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 420 accgtctcct cagcctccac caagggccca tcggtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg 480 agcacctccg agagcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 540 gtgacggtgt cgtggaactc aggcgctctg accagcggcg tgcacacctt cccagctgtc 600 ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcaacttc 660 ggcacccaga cctacacctg caacgtagat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 720 acagttgagc gcaaatgttg tgtcgagtgc ccaccgtgcc cagcaccacc tgtggcagga 780 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 840 gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ccgaggtcca gttcaactgg 900 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cacgggagga gcagttcaac 960 agcacgttcc gtgtggtcag cgtcctcacc gttgtgcacc aggactggct gaacggcaag 1020 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1080 aaaaccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1140 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc 1200 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac acctcccatg 1260 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgfcggacaa gagcaggtgg 1320 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1380 cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa tga 1413 <210> 17 ·· »· ·· ·* • * * · « · · • ♦ · · » ♦ · • · ··· · « » * • · · · * · * · · · ·· ··»·

<211> 451 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17

Gin Val Gin Leu Val 1 5

Ser Leu Arg Leu Ser 20

Gly Met His Trp Val 35

Ala Val Ile Trp Tyr 50

Lys Gly Arg Phe Thr 65

Leu Gin Met Asn Ser 85

Ala Arg Asp Pro Arg 100

Asp Val Trp Gly Gin 115

Lys Gly Pro Ser Val 130

Glu Ser Thr Ala Ala 145

Pro Val Thr Val Ser 165

Thr Phe Pro Ala Val 180

Val Val Thr Val Pro 195

Asn Val Asp His Lys 210

Arg Lys Cys Cys Val

Glu Ser Gly Gly Gly 10

Cys Ala Ala Ser Gly 25

Arg Gin Ala Pro Gly 40

Asp Gly Ser Asn Lys 55

Ile Ser Arg Asp Asn 70

Leu Arg Ala Glu Asp 90

Gly Ala Thr Leu Tyr 105

Gly Thr Thr Val Thr 120

Phe Pro Leu Ala Pro 135

Leu Gly Cys Leu Val 150

Trp Asn Ser Gly Ala 170

Leu Gin Ser Ser Gly 185

Ser Ser Asn Phe Gly 200

Pro Ser Asn Thr Lys 215

Glu Cys Pro Pro Cys

Val Val Gin Pro Gly Arg 15

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 30

Lys Gly Leu Glu Trp Val 45

Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 60

Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 75 80

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 95

Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met 110

Val Ser Ser Ala Ser Thr 125

Cys Ser Arg Ser Thr Ser 140

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 155 160

Leu Thr Ser Gly Val His 175

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 190

Thr Gin Thr Tyr Thr Cys 205

Val Asp Lys Thr Val Glu 220

Pro Ala Pro Pro Val Ala ·· ···· « · · • ···

225 230

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 245 lle Ser Arg Thr Pro Glu Val 260

Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe 275

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 290 295

Arg Val Val Ser Val Leu Thr 305 310

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 325

Glu Lys Thr lle Ser Lys Thr 340

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 355

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 370 375

Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro 385 390

Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser 4 05

Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin 420

His Glu Ala Leu His Asn His 435

Pro Gly Lys 450

Pro Pro

Thr Cys 265

Asn Trp 280

Arg Glu

Val Val

Ser Asn

Lys Gly 345

Glu Glu 360

Phe Tyr

Glu Asn

Phe Phe

Gly Asn 425

Tyr Thr 440 <210> 18 <211> 714 <212> DNA

235

Lys Pro Lys 250

Val Val Val

Tyr Val Asp

Glu Gin Phe 300

His Gin Asp 315

Lys Gly Leu 330

Gin Pro Arg

Met Thr Lys

Pro Ser Asp 380

Asn Tyr Lys 395

Leu Tyr Ser 410

Val Phe Ser

Gin Lys Ser

99 99

9 9 9 9 >· • 9 9 9 9 9 9 • · 9 999 «99 9

9 9 9 9 9

99 999999

240

Asp Thr Leu Met 255

Asp Val Ser His 270

Gly Val Glu Val 285

Asn Ser Thr Phe

Trp Leu Asn Gly 320

Pro Ala Pro lle 335

Glu Pro Gin Val 350

Asn Gin Val Ser 365 lle Ala Val Glu

Thr Thr Pro Pro 400

Lys Leu Thr Val 415

Cys Ser Val Met 430

Leu Ser Leu Ser 445

4» *4 ··. 4*

4*4 4 · 4 4 · * 4

4··· · 444 · 4

4444

<213 > Homo	sapiens	4 4	4 4 4 4 • 4 4	44« 4 4 4 4 4 4 4 4 44 44 4*44
<400> 18
atggacatga	gggtccccgc	tcagctcctg	gggctcctgc	tactctggct	ccgaggtgcc	60
agatgtgaca	tccagatgac	ccagtctcca	tcctccctgt	ctgcatctgt	aggagacaga	120
gtcaccatca	cttgccgggc	aagtcagagc	attaacagct	atttagattg	gtatcagcag	180
aaaccaggga	aagcccctaa	actcctgatc	tatgctgcat	ccagtttgca	aagtggggtc	240
ccatcaaggt	tcagtggcag	tggatctggg	acagatttca	ctctcaccat	cagcagtctg	300
caacctgaag	attttgcaac	ttactactgt	caacagtatt	acagtactcc	attcactttc	360
ggccctggga	ccaaagtgga	aatcaaacga	actgtggctg	caccatctgt	cttcatcttc	420
ccgccatctg	atgagcagtt	gaaatctgga	actgcctctg	ttgtgtgcct	gctgaataac	480
ttctatccca	gagaggccaa	agtacagtgg	aaggtggata	acgccctcca	atcgggtaac	540
tcccaggaga	gtgtcacaga	gcaggacagc	aaggacagca	cctacagcct	cagcagcacc	600
ctgacgctga	gcaaagcaga	ctacgagaaa	cacaaagtct	acgcctgcga	agtcacccat	660
cagggcctga	gctcgcccgt	cacaaagagc	ttcaacaggg	gagagtgtta	gtga	714

<210>	19
<211>	214
<212>	PRT
<213>	Homo sapiens
<400>	•19

Asp 1

Ile Gin

Met

Thr 5

Gin Ser

Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val

Gly

10

15

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

Cys

Arg

Ala

Ser

Gin·

Ser

Ile

Asn

Ser

Tyr

20

25

30

Leu

Asp

Trp

Tyr

Gin

Gin

Lys

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Leu

Leu

Ile

35

40

45

Tyr

Ala

Ala

Ser

Ser

Leu

Gin

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

50

55

60

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gin

Pro

65

70

75

80

Glu

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gin

Gin

Tyr

Tyr

Ser

Thr

Pro

Phe

85

90

95

Thr

Phe

Gly

Pro

Gly

Thr

Lys

Val

Glu

Ile

Lys

Arg

Thr

Val

Ala

Ala

100

105

110

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gin

Leu

Lys

Ser

Gly

115

120

125

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

Pro

Arg

Glu

Ala

»· » » «·

	13 0
Lys 145	Val Gin	Trp	Lys	Val 150
Glu	Ser Val	Thr	Glu 165	Gin
Ser	Thr Leu	Thr 180	Leu	Ser
Ala	Cys Glu 195	Val	Thr	His
Phe	Asn Arg 210	Gly	Glu	Cys
<210> 20 <211> 76 <212> PRT <213> Homo sapiens
<400> 20 Val Ser Gly 1	Gly	Ser 5	Ile
Arg	Gin His	Pro 20	Gly	Lys
Ser	Gly Ser 35	Thr	Tyr	Tyr
Ser	Val Asp 50	Thr	Ser	Lys
Thr 65	Ala Ala	Asp	Thr	Ala 70

»· ·· ·· .·· ··* »··· ♦♦· « ··· · · · · · · · • ········ * · • «·· · · « · ···« ·<· ·· «· *· ·««· 140

Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 155 160

Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 170 175

Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 185 190

Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 205

Gly Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile 10 15

Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr 25 30

Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile 45

Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val 60

Tyr Cys Ala Arg 75 <210> 21 <211> 172 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21

Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys 1 5

Ser Gin Ile Leu Ser Leu Thr Cys 10 15

4» 9 9*9

9 9

9 99 9 . 9

99

9 9 · • 9 9 9 • · ··· « • · · ·· «· • ·» • 9 9

9 9

9 9

9999

Thr

Val

Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly

Gly

His

Tyr

Trp 30

Ser

Trp

20

25

Ile

Arg

Gin

His

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Tyr

35

40

45

Tyr

Ile

Gly

Asn

Thr

Tyr

Tyr

Asn

Pro

Ser

Leu

Lys

Ser

Arg

Val

Thr

50

55

60

Ile

Ser

Val

Asp

Thr

Ser

Lys

Asn

Gin

Phe

Ser

Leu

Lys

Leu

Ser

Ser

65

70

75

80

Val

Thr

Ala

Ala

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Asp

Ser

Gly

85

90

95

Asp

Tyr

Tyr

Gly

Ile

Asp

Val

Trp

Gly

Gin

Gly

Thr

Thr

Val

Thr

Val

100

105

110

Ser

Ser

Ala

Ser

Thr

Lys

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Pro

Leu

Ala

Pro

Cys

115

120

125

Ser

Arg

Ser

Thr

Ser

Glu

Ser

Thr

Ala

Ala

Leu

Gly

Cys

Leu

Val

Lys

130

135

140

Asp

Tyr

Phe

Pro

Glu

Pro

Val

Thr

Val

Ser

Trp

Asn

Ser

Gly

Ala

Leu

145

150

155

160

Thr

Ser

Gly

Val

His

Thr

Phe

Pro

Ala

Val

Leu

Gin

165

170

<210> 22 <211> 96 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22

Glu 1

Ile

Val

Leu

Thr 5

Gin

Ser

Pro

Gly

Thr 10

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro 15

Gly

Glu

Arg

Ala

Thr 20

Leu

Ser

Cys

Arg

Ala 25

Ser

Gin

Ser

Val

Ser 30

Ser

Ser

Tyr

Leu

Ala 35

Trp

Tyr

Gin

Gin

Lys 40

Pro

Gly

Gin

Ala

Pro 45

Arg

Leu

Leu

Ile

Tyr

Gly

Ala

Ser

Ser

Arg

Ala

Thr

Gly

Ile

Pro

Asp

Arg

Phe

Ser

··

0 0

0 9

0 0 0

0 « <000 • ·00 ··» » »

9

00« • 9

0

00*0 00«

0«

0

0 * ·

0 *0 ·»

50

55

60

Gly

Ser Gly

Ser Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Arg

Leu

Glu

65

70

75

80

Pro

Glu Asp

Phe Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Gin

Gin

Tyr

Gly

Ser

Ser

Pro

85

90

95

<210> 23 <211> 141 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23

Gin Ser 1

Pro

Gly Thr 5

Leu

Ser

Leu

Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu

10

15

Ser

Cys

Arg

Ala

Ser

Gin

Ser

Ile

Ser

Ser

Ser

Phe

Leu

Ala

Trp

Tyr

20

25

30

Gin

Gin

Arg

Pro

Gly

Gin

Ala

Pro

Arg

Leu

Leu

Ile

Tyr

Gly

Ala

Ser

35

40

45

Ser

Arg

Ala

Thr

Gly

Ile

Pro

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

50

55

60

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Arg

Leu

Glu

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

65

70

75

80

Val

Tyr

Tyr

Cys

Gin

Gin

Tyr

Gly

Thr

Ser

Pro

Trp

Thr

Phe

Gly

Gin

*

85

90

95

Gly

Thr

Lys

Val

Glu

Ile

Lys

Arg

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

-

100

105

110

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gin

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

115

120

125

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

130

135

140

<210> 24 <211> 141 • · · · · · · · • < · ·«· · · ···· · · · * 4 · · • · · · ····«· * · • · · · # · 4 4 ···· ··· ·· ·· ·· ···· <212> PRT <213> Hotno sapiens <400> 24

Gin 1

Ser

Pro

Gly

Thr 5

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr

Leu

10

15

Ser

Cys

Arg

Thr

Ser

Val

Ser

Ser

Ser

Tyr

Leu

Ala

Trp

Tyr

Gin

Gin

20

25

30

Lys

Pro

Gly

Gin

Ala

Pro

Arg

Leu

Leu

Ile

Tyr

Gly

Ala

Ser

Ser

Arg

35

40

45

Ala

Thr

Gly

Ile

Pro

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

50

55

60

Phe

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Arg

Leu

Glu

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Val

Tyr

65

70

75

80

Tyr

Cys

Gin

Gin

Tyr

Gly

Ile

Ser

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

85

90

95

Lys

Val

Glu

Ile

Lys

Arg

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

100

105

110

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gin

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

115

120

125

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gin

130 135 140 <210> 25 <211> 139 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25

Gly 1

Thr

Leu

Ser

Leu 5

Ser

Pro

Gly

Glu

Arg 10

Ala

Thr

Leu

Ser

Cys 15

Arg

Ala

Ser

Gin

Ser 20

Val

Ser

Ser

Tyr

Leu 25

Ala

Trp

Tyr

Gin

Gin 30

Lys

Pro

Gly

Gin

Ala 35

Pro

Arg

Leu

Leu

Ile 40

Tyr

Gly

Ala

Ser

Ser 45

Arg

Ala

Thr

Gly

Ile

Pro

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

• · • · · ·

Leu

Thr

lle

Ser

Arg

Leu

Glu

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

65

70

75

80

Gin

Gin

Tyr

Gly

Arg

Ser

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

Pro

Gly

Thr

Lys

Val

85

90

95

Asp

lle

Lys

Arg

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

lle

Phe

Pro

Pro

100

105

110

Ser

Asp

Glu

Gin

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

115

120

125

Asn

Asn

Phe

Tyr

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gin

130

135

<210> 26

<211> 142

<212> PRT

<213> Homo ι

sapiens

<400> 26

Gin

Ser

Pro

Gly

Thr

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Glu

Arg

Ala

Thr

Leu

1

5

10

15

Ser

Cys

Arg

Ala

Ser

Gin

Ser

Val

Ser

Ser

Tyr

Leu

Ala

Trp

Tyr

Gin

20

25

30

Gin

Lys

Pro

Gly

Gin

Ala

Pro

Arg

Pro

Leu

lle

Tyr

Gly

Val

Ser

Ser

35

40

45

Arg

Ala

Thr

Gly

lle

Pro

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

50

55

60

Asp

Phe

Thr

Leu

Thr

lle

Ser

Arg

Leu

Glu

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Val

65

70

75

80

Tyr

Tyr

Cys

Gin

Gin

Tyr

Gly

lle

Ser

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

Pro

Gly

85

90

95

Thr

Lys

Val

Asp

lle

Lys

Arg

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

lle

100

105

110

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gin

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

115

120

125

• · ♦

• · · • · • · « ·

• « « •

> * · · • · · • · ·

• · • · • ·

c

• ·

♦ ·

• ·

Cys Leu Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gin

130

135

140

<210> 27

<211> 142

<212> PRT

<213> Homo i

sapiens

<400> 27

Ser Pro Gly

Thr

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Glu

Arg

Ala

Thr

Leu

Ser

1

5

10

15

Cys Arg Ala

Ser

Gin

Ser

Ile

Ser

Ser

Asn

Phe

Leu

Ala

Trp

Tyr

Gin

20

25

30

Gin Lys Pro

Gly

Gin

Ala

Pro

Arg

Leu

Leu

Ile

Tyr

Arg

Pro

Ser

Ser

35

40

45

Arg Ala Thr

Gly

Ile

Pro

Asp

Ser

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

50

55

60

Asp Phe Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Arg

Leu

Glu

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Leu

65

70

75

80

Tyr Tyr Cys

Gin

Gin

Tyr

Gly

Thr

Ser

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

Pro

Gly

85

90

95

Thr Lys Val

Asp

Ile

Lys

Arg

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

100

105

110

Phe Pro Pro

Ser

Asp

Glu

Gin

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

115

120

125

Cys Leu Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gin

130

135

140

<210> 28

<211> 146

<212> PRT

<213> Homo i

sapiens

<400> 28

Gin Ser Pro

Gly Thr

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Glu

Arg

Ala

Thr

Leu

1

5

10

15

Ser Cys Arg Ala

Ser

Gin

Ser

Val

Ser

Ser

Tyr

Leu

Ala

Trp

Tyr

Gin

*·· · • · · t » • · · · ·

0 · 0 0 0 0 • · · ·

Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser 35 40 45

Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 50 55 60

Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val 65 70 75 80

Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Gly Arg Ser Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly 85 90 95

Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile 100 105 110

Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val 115 120 125

Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys 130 135 140

Gly Gly

145 <210> 29 <211> 95 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29

Asp Ile Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80 • 9 9 9 ·· · · * · · · · · φ · t 9

9 9 9 · · · · · φ • · ♦ · ·····<* · 4 • · · · 9 9 · 9 ···· ··· ·9 ·· 99 99··

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95 • ·· · <210> 30 <211> 152 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30

Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile 15 10 15

Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser Ile Asn Thr Tyr Leu Ile Trp Tyr Gin 20 25 30

Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Phe Leu Ile Ser Ala Thr Ser Ile 35 40 45

Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr 50 55 60

Asn Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu His Pro Glu Asp Phe Ala Thr 65 70 75 80

Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly 85 90 95

Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile 100 105 110

Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val 115 120 125

Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys 130 135 140

Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly

145 150 <210> 31 <211> 139 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31

Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys ♦ · 4 4

4 · • 4 4 4 4 4 • · ·

4444 4 44 · 4 4 • 4 4 4 4 444 4 4 φ 4 • 444 4444

1

5

10

15

Arg

Ala

Ser

Gin

Ser

Ile

Asn

Ser

Tyr

Leu

Asp

Trp

Tyr

Gin

Gin

Lys

20

25

30

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Leu

Leu

Ile

Tyr

Ala

Ala

Ser

Ser

Leu

Gin

35

40

45

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

50

55

60

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gin

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

65

70

75

80

Cys

Gin

Gin

Tyr

Tyr

Ser

Thr

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

Pro

Gly

Thr

Lys

85

90

95

Val

Glu

Ile

Lys

Arg

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

100

105

110

Pro

Ser

Asp

Glu

Gin

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

115

120

125

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

130 135 <210> 32 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32

Thr 1

Gin

Ser

Pro

Ser 5

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser 10

Val

Gly

Asp

Arg

Val 15

Thr

Ile

Thr

Cys

Arg 20

Ala

Ser

Gin

Asn

Ile 25

Ser

Arg

Tyr

Leu

Asn 30

Trp

Tyr

Gin

Gin

Lys 35

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro 40

Lys

Phe

Leu

Ile

Tyr 45

Val

Ala

Ser

Ile

Leu 50

Gin

Ser

Gly

Val

Pro 55

Ser

Gly

Phe

Ser

Ala 60

Ser

Gly

Ser

Gly

Pro 65

Asp

Phe

Thr

Leu

Thr 70

Ile

Ser

Ser

Leu

Gin 75

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala 80

·· ···· ftft ·* ·· *· ft·· · · ♦ ft ·»· ftftftft ft ftft ft ft · • ··· ftftftft·· · «

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gin

Gin

Ser

Tyr

Ser

Thr

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

Pro

85

90

95

Gly

Thr

Lys

Val

Asp

Ile

Lys

Arg

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

100

105

110

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gin

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

115

120

125

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

130 <210> 33 <211> 150 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33

Thr Gin Ser Pro 1

Ser 5

Ser Leu

Ser

Ala

Ser Val Gly Asp Arg Val

Thr

10

15

Ile

Thr

Cys

Arg

Ala

Ser

Gin

Ser

Ile

Cys

Asn

Tyr

Leu

Asn

Trp

Tyr

20

25

30

Gin

Gin

Lys

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Arg

Val

Leu

Ile

Tyr

Ala

Ala

Ser

35

40

45

Ser

Leu

Gin

Gly

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

50

55

60

Ile

Asp

Cys

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gin

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

65

70

75

80

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gin

Gin

Ser

Tyr

Ile

Thr

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

Pro

85

90

95

-

Gly

Thr

Arg

Val

Asp

Ile

Glu

Arg

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

100

105

110

•

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gin

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

115

120

125

«

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gin

Trp

130

135

140

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Tyr

145 150 »· 90 9· ·· 99 09 ♦ · • 9 9999 »00 • 999 9 99 9 « 9 • 909 9999·· 9 · » 0 9 9 9 9 9 9 »00 909 09 *· 9* 9994

<210> 34 <211> 96 <212> PRT <213> Homo

sapiens

<400> 34

Glu Ile Val 1

Leu Thr 5

Gin

Ser

Pro

Asp

Phe 10

Gin

Ser

Val

Thr

Pro 15

Lys

Glu Lys Val

Thr Ile 20

Thr

Cys

Arg

Ala 25

Ser

Gin

Ser

Ile

Gly 30

Ser

Ser

Leu His Trp 35

Tyr Gin

Gin

Lys

Pro 40

Asp

Gin

Ser

Pro

Lys 45

Leu

Leu

Ile

Lys Tyr Ala 50

Ser Gin

Ser

Phe 55

Ser

Gly

Val

Pro

Ser 60

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser Gly Ser 65

Gly Thr

Asp 70

Phe

Thr

Leu

Thr

Ile 75

Asn

Ser

Leu

Glu

Ala 80

Glu Asp Ala

Ala Thr 85

Tyr

Tyr

Cys

His

Gin 90

Ser

Ser

Ser

Leu

Pro 95

Gin

<210> 35 <211> 155 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35

Ser 1

Pro

Asp

Phe

Gin 5

Ser

Val

Thr

Pro

Lys 10

Glu

Lys

Val

Thr

Ile 15

Thr

Cys

Arg

Ala

Ser 20

Gin

Ser

Ile

Gly

Ser 25

Ser

Leu

His

Trp

Tyr 30

Gin

Gin

Lys

Pro

Asp 35

Gin

Ser

Pro

Lys

Leu 40

Leu

Ile

Lys

Tyr

Ala 45

Ser

Gin

Ser

Phe

Ser 50

Gly

Val

Pro

Ser

Arg 55

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly 60

Ser

Gly

Thr

Asp

•· ·«*· ·· · © »· ·· ··· © © © . © 9 * · ··©· · · · · · · • ©»« ······ © · • · · © · · · ·

Phe

Thr

Leu

Thr

Ile

Asn

Ser

Leu

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

65

70

75

80

Tyr

Cys

His

Gin

Ser

Ser

Ser

Leu

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

85

90

95

Lys

Val

Glu

Ile

Lys

Arg

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

100

105

110

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gin

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

115

120

125

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gin

Trp

Lys

Val

130

135

140

Asp

Asn

Ala

Leu

Gin

Ser

Gly

Asn

Ser

Gin

Glu

145 150 155 <210> 36 <211> 100 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36

Αερ- Ι

Val

Val

Met

Thr 5

Gin

Ser

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Pro

Val

Thr

Leu 15

Gly

Gin

Pro

Ala

Ser 20

Ile

Ser

Cys

Arg

Ser 25

Ser

Gin

Ser

Leu

Val 30

Tyr

Ser

Asp

Gly

Asn 35

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp 40

Phe

Gin

Gin

Arg

Pro 45

Gly

Gin

Ser

Pro

Arg 50

Arg

Leu

Ile

Tyr

Lys 55

Val

Ser

Asn

Arg

Asp 60

Ser

Gly

Val

Pro

Asp 65

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser 70

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp 75

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile· 80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Met

Gin

Gly

90 95

Thr His Trp Pro 100 <210> 37 •0 0000

• ·»« • · · • · <211> 139 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37

Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly Gin Pro Ala Ser 15 10

Arg Ser Ser Gin Ser Leu Val Tyr Ser Asp Gly Asn Thr 20 25

Trp Phe Gin Gin Arg Pro Gly Gin Ser Pro Arg Arg Leu 35 40 45

Val Ser Asn Trp Asp Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60

Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu 65 70 75

Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin Gly Ser His Trp Pro 85 90

Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105

Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser 115 120 125

Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 130 135

Ile Ser Cys 15

Tyr Leu Asn 30

Ile Tyr Lys

Gly Ser Gly

Ala Glu Asp 80

Pro Thr Phe 95

Ala Pro Ser 110

Gly Thr Ala <210> 38 <211> 100 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38

Asp

Ile

Val

Met

Thr

Gin

Ser

Pro

Leu

Ser

Leu

Pro

Val

Thr

Pro

Gly

1

5

10

15

Glu

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Arg

Ser

Ser

Gin

Ser

Leu

Leu

His

Ser

20

25

30

Asn

Gly

Tyr

Asn

Tyr

Leu

Asp

Trp

Tyr

Leu

Gin

Lys

Pro

Gly

Gin

Ser

40 45

44 ···· • » ·

4 · 4 ·

• 4 4 4

• 1 •

4 · ♦ 4 4

4 4 • 4 4 4 Gly

4 4 4 4 4 4 Val

• 4 •

Pro

Gin

Leu

Leu

Ile

Tyr

Leu

Gly

Ser

Asn

Arg Ala Ser

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp Phe Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr Tyr Cys

Met

Gin

Ala

85

90

95

Leu

Gin

Thr

Pro

100 <210> 39 <211> 133 <212> PRT

<213> Homo !

sapiens

<400> 39

Pro

Gly

Glu

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Arg

Ser

Ser

Gin

Ser

Leu

Leu

1

5

10

15

His

Ser

Asn

Gly

Tyr

Asn

Tyr

Leu

Asp

Trp

Tyr

Leu

Gin

Lys

Pro

Gly

20

25

30

Gin

Ser

Pro

Gin

Leu

Leu

Ile

Tyr

Leu

Gly

Ser

Asn

Arg

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Val1

Pro

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

50

55

60

Lys

Leu

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Met

65

70

75

80

Gin

Ala

Leu

Gin

Thr

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

Val

Glu

85

90

95

Ile

Lys

Arg

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

100

105

110

Asp

Glu

Gin

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

115

120

125

Asn Phe Tyr Pro Arg

Claims (15)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Použití lidské anti-CTLA-4 protilátky pro přípravu léčiva k léčení rakoviny u savce, kde uvedená rakovina je zvolena ze souboru, zahrnujícího následující onemocnění: rakovina plic, rakovina kostí, rakovina slinivky břišní, rakovina kůže, rakovina hlavy nebo krku, kožní nebo intraokulární maligní melanom, rakovina dělohy, rakovina vaječníků, rektální rakovina, rakovina anální oblasti, rakovina žaludku, rakovina trakčníku, rakovina prsu, rakovina varlat, rakovina dělohy, karcinom vejcovodů, karcinom endometria, karcinom čípku děložního, karcinom vagíny, karcinom vulvy, Hodgkinova nemoc, ne-Hodgkinův lymfom, rakovina jícnu, rakovina tenkého střeva, rakovina endokrinního systému, rakovina štítné žlázy, rakovina příštítného tělíska, rakovina nadledvinek, sarkom měkké tkáně, rakovina močových cest, rakovina penisu, rakovina prostaty, chronická nebo akutní leukemie, pevné nádory u dětí, lymfocytový lymfom, rakovina močového měchýře, rakovina ledvin nebo močovodu, karcinom ledvinových buněk, karcinom ledvinné pánvičky, neoplasmy centrálního nervového systému (CNS), primární CNS lymfom, nádorová angiogenese, nádory na páteři, gliom kmene mozkového, adenom hypofýzy, Kaposiho sarkom, rakovina epidermoidu, rakovina skvamózních buněk, lymfom T-buněk a kombinace uvedených rakovin.
2. 2. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání protilátky savci v kombinaci s činidlem zvoleným ze souboru, zahrnujícím chemoterapeutické činidlo, rakovinovou vakcinu, imunomodulační činidlo, činidlo proti • · · ·

   - 48 • · · · · · angiogenesí, anti-vaskulární činidlo, inhibitor přenosu signálu, antiproliferativní činidlo, činidlo indukce apoptózy a inhibitor dráhy přežívání.
3. 3. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání protilátky v kombinaci s činidlem proti angiogenesi, kde uvedené činidlo proti angiogenesi je zvoleno ze souboru, zahrnujícího inhibitor MMP-2 (matrixmetaloproteináza 2), inhibitor MMP-9 (matrixmetaloproteináza 9) a inhibitor COX-II (cyklooxygenáza II).
4. 4. Použití protilátky v kombinaci s chemoterapeutickým činidlem, kde uvedené činidlo je zvoleno ze souboru, zahrnujícího inhibitor mitózy, alkylační činidlo, antimetabolit, interkalační antibiotikum, inhibitor růstového faktoru, inhibitor buněčného cyklu, enzym, inhibitor topoisomerázy, modifikátor biologické odezvy, anti-hormon, inhibitor angiogenese a anti-androgen.
5. 5. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání protilátky v kombinaci s inhibitorem přenosu signálu, kde uvedený inhibitor je zvolen ze souboru, zahrnujícího inhibitor receptorú epidermálního růstového faktoru (EGFR - epidermal growth factor receptor), inhibitor vaskulárního endoteliálního růstového faktoru (VEGF - vascular endothelial growth factor) a inhibitor erbB2 receptorú.
6. 6. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání savci množství uvedené protilátky v kombinaci s radiační terapií, kdee množství protilátky v kombinaci s radiační terapií je účinné pro inhibicí abnormálního buněčného růstu nebo léčbu hyperproliferativní poruchy u savce.
7. 7. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že protilátka která se váže k CTLA-4 má následující vlastnosti:

   vazebná afinita pro CTLA-4 přibližně 10’⁹ nebo více; inhibice vazby mezi CTLA-4 a B7-1 s IC₅₀ přibližně 100 nM nebo méně; a inhibice vazby mezi CTLA-4 a B7-2 s IC₅o přibližně 100 nM nebo méně; a zahrnuje sekvenci aminokyselin těžkého řetězce ze souboru, který zahrnuje lidské FR1, FR2 a FR3 sekvence aminokyselin, které odpovídají sekvencím genu V_H 3-33 nebo jejich konzervativní substituce nebo somatické mutace, kde FR sekvence jsou spojeny s CDRl, CDR2 a CDR3 sekvencemi a kde protilátka také zahrnuje CDR oblasti v lehkém řetězci z genu A27 nebo 012.
8. 8. Použití podle nároku 7, vyznačující se tím, že uvedené FR1, FR2 nebo FR3 sekvence jsou výsledkem somatické mutace genu V_H 3-33.
9. 9. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že protilátka je v kompetici o vazbu s CTLA-4 s protilátkou, která má těžký a lehký řetězec sekvencí aminokyselin ·· ···· protilátky ze souboru, zahrnujícího 4.1.1, 4.8.1, 6.1.1 a

   11.2.1. ' • · ··
10. 10. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, ze protilátka zahrnuje aminokyselin CDR-1, těžký řetězec zahrnující CDR-2 a CDR-3 a lehký zahrnující sekvence aminokyselin CDR-1, CDR-2 sekvence řetězec a CDR-3 protilátky, zvolené ze souboru, zahrnujícího 3.1.1,. 4.1.1,

    4.8.1, 4.10.2, 4.13.1, 4.14.3, 6.1.1, 11.2.1, 11.6.1,
11. 11.7.1, 12.3.1.1 a 12.9.1.1 nebo sekvence, které se liší od uvedených CDR sekvencí změnami, zvolenými ze souboru, zahrnujícího konzervativní změny, kde uvedené konzervativní změny jsou zvoleny ze souboru, zahrnujícího nahrazení nepolárních zbytků jinými nepolárními zbytky, nahrazení zbytků jinými polárními nenabitými polárních nabitých zbytků jinými zbytky a substituce strukturálně podobných zbytků; a nekonzervativní substituce, kde uvedené nekonzervativní substituce jsou zvoleny ze souboru, zahrnujícího substituce polárního nabitého zbytku za polární nenabité zbytky a substituce nepolárních zbytků za polární zbytky, adice a delece.

    polárních nabitých zbytky, nahrazení polárními nabitými

    11. Použití podle nároku 10, vyznačující se tím, že protilátka zahrnuje těžký řetězec, zahrnující sekvence aminokyselin CDR-1, CDR-2 a CDR-3 a lehký řetězec zahrnující sekvence aminokyselin CDR-1, CDR-2 a CDR-3 protilátky, zvolené ze souboru, zahrnujícího 3.1.1, 4.1.1,

    4.8.1, 4.10.2, 4.13.1, 4.14.3, 6.1.1, 11.2.1, 11.6.1,

    11.7.1, 12.3.1.1 a 12.9.1.1.

    • · • 4 4444

    4 ·

    4 · • 444

    44 4444 • 4 4 • 4 · · 4 • · 4 • 44
12. 12. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že protilátka je zvolena ze souboru, zahrnujícího protilátku zahrnující sekvencí aminokyselin těžkého řetězce z lidského genu 3-33 a sekvenci aminokyselin lehkého řetězce z lidského genu A27 nebo 012.
13. 13. Farmaceutická kompozice pro léčení rakoviny u savce, vyznačující se tím, že zahrnuje množství lidské anti-CTLA-4 protilátky, které je účinné při léčení uvedené rakoviny a farmaceuticky přijatelný nosič, kde uvedená rakovina je zvolena ze souboru, zahrnujícího následující onemocnění: rakovina plic, rakovina kostí, rakovina slinivky břišní, rakovina kůže, rakovina hlavy nebo krku, kožní nebo intraokulární maligní melanom, rakovina dělohy, rakovina vaječníků, rektální rakovina, rakovina anální oblasti, rakovina žaludku, rakovina trakčníku, rakovina prsu, rakovina varlat, rakovina dělohy, karcinom vejcovodů, karcinom endometria, karcinom čípku děložního, karcinom vagíny, karcinom vulvy, Hodgkinova nemoc, ne-Hodgkinův lymfom, rakovina jícnu, rakovina tenkého střeva, rakovina endokrinního systému, rakovina štítné žlázy, rakovina příštitného tělíska, rakovina nadledvinek, sarkom měkké tkáně, rakovina močových cest, rakovina penisu, rakovina prostaty, chronická nebo akutní leukemie, pevné nádory u dětí, lymfocytový lymfom, rakovina močového měchýře, rakovina ledvin nebo močovodu, karcinom ledvinových buněk, karcinom ledvinné pánvičky, neoplasmy centrálního nervového systému (CNS), primární CNS lymfom, nádorová angiogenese, nádory na páteři, gliom kmene mozkového, adenom hypofýzy,

    Kaposiho sarkom, rakovina epidermoidu, rakovina skvamózních buněk, lymfom T-buněk a kombinace uvedených rakovin.

    00 0000 ·· ·♦··

    0 0 ···

    0 0 9 9

    00 00
14. 14. Farmaceutická kompozice podle nároku 13, vyznačující se tím, že dále zahrnuje.množství chemoterapeutického činidla, rakovinové vakciny, imunomodulačního činidla, činidla' proti angiogenesi, anti-vaskulárního činidla, inhibitoru přenosu signálu, antiproliferativního činidla, činidla indukce apoptózy a inhibitoru dráhy přežívání které, v kombinaci s uvedenou protilátkou, je účinné při léčení uvedené rakoviny.
15. 15. Použití množství lidské anti-CTLA-4 protilátky pro přípravu kompozice pro léčení rakoviny u savce, které je účinné při léčení uvedené rakoviny, kde uvedená rakovina je zvolena ze souboru, zahrnujícího následující onemocnění: rakovina plic, rakovina kostí, rakovina slinivky břišní, rakovina kůže, rakovina hlavy nebo krku, kožní nebo intraokulární maligní melanom, rakovina dělohy, rakovina vaječníků, rektální rakovina, rakovina . anální oblasti, rakovina žaludku, rakovina trakčníku, rakovina prsu, rakovina varlat, rakovina dělohy, karcinom vejcovodů, karcinom endometria, karcinom čípku děložního, karcinom vagíny, karcinom vulvy, Hodgkinova nemoc, ne-Hodgkinův lymfom, rakovina jícnu, rakovina tenkého střeva, rakovina endokrinního systému, rakovina štítné žlázy, rakovina příštitného tělíska, rakovina nadledvinek, sarkom měkké tkáně, rakovina močových cest, rakovina penisu, rakovina prostaty, chronická nebo akutní leukemie, pevné nádory u dětí, lymfocytový lymfom, rakovina močového měchýře,

    99 9999

    9 9 ·

    99 ···

    99 ·· • · · · · • 9 9 9 • · 9 9 9 • 99 ·

    99 9999 rakovina ledvin nebo močovodu, karcinom ledvinových buněk, karcinom ledvinné pánvičky, neoplasmy centrálního nervového systému (CNS), primární CNS lymfom, nádorová angiogenese, nádory na páteři, gliom kmene mozkového, adenom hypofýzy, Kaposiho sarkom, rakovina epidermoidu, rakovina skvamózních buněk, lymfom T-buněk a kombinace uvedených rakovin.