KR20050059263A - 에리트로포이에틴 수용체 결합 항체 - Google Patents

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데이비드 에이취 오스트로우
에드워드 비 레일리
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Abstract

본 발명은 에리트로포이에틴 수용체와 결합하여 이를 활성화시키는 항체 및 이의 항체 단편에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 상기 항체를 사용하여, 포유류에게서 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 조정하는 방법 뿐만 아니라 상기 항체를 함유하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.

Description

에리트로포이에틴 수용체 결합 항체{Erythropoietin receptor binding antibodies}
본 발명은 에리트로포이에틴 수용체를 인식하고, 이와 결합하며, 바람직하게는 이를 활성화시키는 항체에 관한 것이다.
에리트로포이에틴("EPO")은 조혈(erythropoiesis)의 주요 조절인자인 당단백질이다. 구체적으로 언급하면, EPO는 적혈구를 성숙하게 만드는 적혈구계 전구 세포(erythroid progenitor)의 성장, 분화 및 생존을 증진시키는데 책임이 있다. 혈액과 조직 내의 산소 수준 상의 변화에 반응하여, 에리트로포이에틴은 미성숙 적혈구아세포(erythroblast)의 증식과 분화 모두를 자극하는 것으로 여겨진다. 이는 또한 적혈구 대집락 형성 단위 및 콜로니 형성 단위와 같은, 적혈구계 전구 세포의 유사분열 활성을 자극하는 성장 인자로서 작용한다. 이는 적혈구 콜로니 형성 단위를 전적혈구아세포(proerythroblast)로 변환시키는 것을 촉발시키는 분화 인자로서 작용하기도 한다[참조: Erslev, A., New Eng. R Med., 316: 101-103 (1987)].
EPO는 분자량이 약 34,000 달톤이고, 3가지 형태, 즉 알파, 베타 및 아시알로 형태로 발생될 수 있다. EPO는 임신 중반 내지 말기에 태아 간에서 합성된다. 연속해서, EPO는 신장에서 합성하여, 혈장을 순환한 다음 뇨로 배출된다.
사람의 뇨 EPO가 분리 및 정제된 것으로 당해 분야에 보고되었다[참조: Miyake et al., J Biol. Chem., 252:5558 (1977)]. 더우기, EPO를 암호화하는 유전자를 동정, 클로닝 및 발현하는 방법[참조: 미국 특허 제4,703,008호] 뿐만 아니라 세포 배지로부터 재조합 EPO를 정제시키는 방법[참조: 미국 특허 제4,667,016호]이 당해 분야에 공지되어 있다.
EPO의 활성은 에리트로포이에틴 수용체로서 지칭되는 세포 표면 수용체의 결합과 활성화를 통하여 매개된다. 이러한 EPO 수용체는 사이토킨 수용체 슈퍼-계열(superfamily)에 속하고 2가지 이상의 별개의 폴리펩타이드, 즉 55 내지 72 kDa 폴리펩타이드와 85 내지 100 kDa 폴리펩타이드를 함유하는 것으로 여겨진다[참조: 미국 특허 제6,319,499호, Mayeux et al., J. Biol. Chem, 266:23380 (1991), McCaffery et al., J. Biol. Chem., 264:10507 (1991)]. 기타 연구 결과, 분자량이 예를 들어, 110, 130 및 145 kDa인 EPO 수용체의 기타 폴리펩타이드 복합체가 밝혀졌다[참조: 미국 특허 제6,319,499호].
쥐과(murine) EPO 수용체와 사람 EPO 수용체 둘 다를 클로닝하고 발현하였다[참조: D'Andrea et al., Cell, 57:277 (1989); Jones et al., Blood, 76:31 (1990); Winkelmann et al., Blood, 76:24 (1990); WO 90/08822/U.S.Patent 5,278,065]. 완전한 길이의 사람 EPO 수용체는 대략 25개의 아미노산 시그날 펩타이드를 갖는 483개 아미노산 막관통 단백질이다[참조: 미국 특허 제6,319,499호]. 이러한 사람 수용체는 상기 쥐과 수용체와 약 82% 아미노산 서열 상동성을 나타낸다.
리간드의 부재 하에서는, EPO가 기형성된 이량체로 존재한다. EPO가 이의 수용체에 결합하면 입체 형태 상의 변화가 유발되어, 세포질 영역들이 서로 근접하게 위치한다. 완전히 이해되지는 않지만, 이러한 "이량체화"가 수용체를 활성화시키는 역할을 하는 것으로 여겨진다. EPO 수용체를 활성화시키면, 수 많은 생물학적 효과가 유발된다. 이들 활성 중 몇 가지의 예를 들면, 증식이 자극되고, 분화가 자극되며 세포소멸(apoptosis)이 억제된다[참조: 미국 특허 제6,319,499호, Liboi et al., PNAS USA, 90:11351 (1993), Koury, Science, 248: 378(1990)].
EPO 수용체 이량체화와 활성화 간에는 상관 관계가 있어, 이를 (1) EPO 수용체를 이량체화할 수 있고; (2) 이러한 수용체를 활성화시킬 수 있는, EPO 이외의 화합물(즉, 예를 들면, 항체)를 동정하는데 사용할 수 있다. 이들 화합물은 빈혈로 고통받는 포유류를 치료하고, 기능장애 EPO 수용체를 갖는 포유류를 동정하는데 유용할 것이다.
발명의 요약
한 양태에서, 본 발명은 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합하는 항체에 관한 것이다. 한 양태에서, 이러한 항체는 서열 번호 3, 7, 11, 15, 19, 31, 35, 39, 43, 47, 51, 55 및 이의 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 또 다른 양태에서는, 상기 항체가 서열 번호 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57 및 이의 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체에 관한 것이다. 이러한 항체는 CDR1에서 부터 CDR3 까지의 연속 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역을 포함한다. CDR1에서 부터 CDR3 까지의 연속 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 58, 서열 번호 59, 서열 번호 60, 서열 번호 61 및 이의 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. CDR1에서 부터 CDR3 까지의 연속 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 62, 서열 번호 63, 서열 번호 64, 서열 번호 65, 서열 번호 66, 서열 번호 67, 서열 번호 68 및 이의 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키지만, PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와는 상호 작용하지 않는 항체에 관한 것이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시킬 수 있는 항체에 관한 것인데, 이러한 항체 또는 이의 항체 단편은 에리트로포이에틴 수용체에 대한 내인성 사람 에리트로포이에틴의 결합 친화성의 100배 범위 내의 결합 친화성을 나타낸다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키는 항체 또는 이의 항체 단편에 관한 것이다. 이러한 항체 또는 이의 항체 단편은 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 사람 중쇄 가변 영역, 및/또는 서열 번호 5의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 사람 경쇄 가변 영역을 포함하는데, 단 상기 항체 또는 이의 항체 단편은 PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와 상호 작용하지 않는다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키는 항체 또는 이의 항체 단편에 관한 것이다. 이러한 항체 또는 이의 항체 단편은 서열 번호 7의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 중쇄 가변 영역, 및/또는 서열 번호 9의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는데, 단 상기 항체 또는 이의 항체 단편은 PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와 상호 작용하지 않는다.
상기 항체는 또한, 서열 번호 11, 15, 19, 31, 35, 39, 43, 47, 51 및 55, 또는 전술된 서열 번호의 모든 항체 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 기타 중쇄 가변 영역을 포함하는데, 이러한 항체 또는 이의 항체 단편은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와 상호 작용하지 않는다. 상기 양태에 포함되는 기타 경쇄 가변 영역은 서열 번호 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53 및 57, 또는 전술된 서열 번호의 모든 항체 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택될 수 있는데, 이러한 항체 또는 이의 항체 단편은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와 상호 작용하지 않는다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키는 항체 또는 이의 항체 단편을 제공하는데, 이러한 항체는 서열 번호 11/서열 번호 13, 서열 번호 15/서열 번호 17, 서열 번호 19/서열 번호 21, 서열 번호 11/서열 번호 23, 서열 번호 11/서열 번호 25, 서열 번호 11/서열 번호 27, 서열 번호 11/서열 번호 29, 서열 번호 31/서열 번호 33, 서열 번호 35/서열 번호 37, 서열 번호 39/서열 번호 41, 서열 번호 43/서열 번호 45, 서열 번호 47/서열 번호 49, 서열 번호 51/서열 번호 53 및 서열 번호 55/서열 번호 57, 또는 이의 항체 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 중쇄 가변 영역과 하나 이상의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 포함하는데, 이러한 항체 또는 이의 항체 단편은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와 상호 작용하지 않는다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키는 방법에 관한 것이다. 이러한 방법은 EPO 수용체를 활성화시키기에 치료학적으로 유효한 양의 항체 또는 이의 항체 단편을 포유류에게 투여하는 단계를 포함한다. 상기 항체 또는 이의 항체 단편은 PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와 상호 작용하지 않는다.
추가의 양태에서, 본 발명은 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 조정하는 방법에 관한 것이다. 이러한 방법은 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 조정하지만, PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와 상호 작용하지 않기에 치료학적으로 유효한 양의 항체 또는 이의 항체 단편을 포유류에게 투여하는 단계를 포함한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 항-에리트로포이에틴 항체를 중화시킴으로써 유도된 순수한 적혈구 형성부전증(aplasia)으로 고통받는 포유류를 치료하는 방법에 관한 것이다. 이러한 방법은 상기 수용체를 활성화시키기에 치료학적으로 유효한 양의 항체 또는 이의 항체 단편을, 치료가 필요한 포유류에게 투여하는 단계를 포함하는데, 이러한 항체 또는 이의 항체 단편은 PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와 상호 작용하지 않는다.
추가의 양태에서, 본 발명은 약제학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 약제학적 조성물은 치료학적 유효량의 항체 또는 이의 항체 단편과 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함한다. 당해 약제학적 조성물 내에 함유된 항체 또는 항체 단편은 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키지만, PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와는 상호 작용하지 않는다.
추가의 양태에서, 본 발명은 에리트로포이에틴 수용체와 결합하여 이를 활성화시키는 IgG2 항체 또는 항체 단편에 관한 것이다. 이러한 양태의 IgG2 항체 또는 항체 단편은 EPO 수용체를 활성화시키는데 관여하는 모든 에피토프와 결합하여 이와 상호 작용한다. 이러한 항체는 폴리클로널 또는 모노클로널 항체, 또는 이의 모든 항체 단편일 수 있다. IgG2 항체는 키메라, 사람 적응화(humanized) 또는 사람 항체일 수 있다.
추가의 양태에서, 본 발명은 사람 에리트로포이에틴 수용체를 활성화시키기에 치료학적으로 유효한 양의 본 발명의 IgG2 항체 또는 항체 단편을 포유류에게 투여하는 단계를 포함하여, 이러한 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키는 방법을 제공한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 사람 에리트로포이에틴 수용체를 조정하기에 치료학적으로 유효한 양의 본 발명의 IgG2 항체 또는 항체 단편을 포유류에게 투여하는 단계를 포함하여, 이러한 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 조정하는 방법을 제공한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 사람 에리트로포이에틴 수용체를 활성화시키기에 치료학적으로 유효한 양의 본 발명의 IgG2 항체 또는 항체 단편을, 치료가 필요한 포유류에게 투여하는 단계를 포함하여, 형성부전증으로 고통받는 포유류를 치료하는 방법을 제공한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 사람 에리트로포이에틴 수용체를 조정하기에 치료학적으로 유효한 양의 본 발명의 IgG2 항체 또는 항체 단편을, 치료가 필요한 포유류에게 투여하는 단계를 포함하여, 형성부전증으로 고통받는 포유류를 치료하는 방법을 제공한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 사람 에리트로포이에틴 수용체를 활성화시키기에 치료학적으로 유효한 양의 본 발명의 IgG2 항체 또는 항체 단편을, 치료가 필요한 포유류에게 투여하는 단계를 포함하여, 형성부전증으로 고통받는 포유류를 치료하는 방법을 제공한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 치료학적 유효량의 본 발명의 IgG2 항체 또는 항체 단편과 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
최종적으로, 본 발명은 분리 및 정제된 폴리뉴클레오타이드 및 아미노산 서열에 관한 것이다. 이러한 분리 및 정제된 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 32, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 56, 및 이의 단편, 상보체 및 축퇴성 코돈(degenerate codon) 등가물로 이루어진 그룹 중에서 선택될 수 있다.
본 발명은 추가로, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 25, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 53, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 59, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 62, 서열 번호 63, 서열 번호 64, 서열 번호 65, 서열 번호 66, 서열 번호 67, 서열 번호 68, 및 이의 단편 및 상보체로 이루어진 그룹 중에서 선택된, 분리 및 정제된 아미노산 서열에 관한 것이다.
도 1은 사람 항체 Ab12의 중쇄의 아미노산 서열, 및 분리 및 정제된 폴리뉴클레오타이드(상부 쇄와 하부 쇄는 각각 서열 번호 69 및 70이다)를 도시한 것이다. 이러한 아미노산 서열은 서열 번호 71 내지 74를 포함한다. 불변 영역 만의 서열이 서열 번호 75로써 제시되어 있다. 가변 쇄는 뉴클레오타이드 1283번에서 종결된다. 가변/불변 연결 영역(밑줄쳐져 있음)은 뉴클레오타이드 1284번에서 부터 1289번 까지이다. 불변 영역은 뉴클레오타이드 1290번에서 부터 2826번 까지이다.
도 2는 사람 항체 Ab12의 경쇄의 아미노산 서열, 및 분리 및 정제된 폴리뉴클레오타이드(상부 쇄와 하부 쇄는 각각 서열 번호 76 및 77이다)를 도시한 것이다. 이러한 아미노산 서열은 서열 번호 78을 포함한다. 불변 영역 만의 서열이 서열 번호 79로써 제시되어 있다. 가변 쇄는 뉴클레오타이드 1363번에서 종결된다. 가변/불변 연결 영역(밑줄쳐져 있음)은 뉴클레오타이드 1364번에서 부터 1369번 까지이다. 불변 영역은 뉴클레오타이드 1370번에서 부터 1618번 까지이다.
도 3은 사람 항체 Ab198의 중쇄의 아미노산 서열, 및 분리 및 정제된 폴리뉴클레오타이드(상부 쇄와 하부 쇄는 각각 서열 번호 80 및 81이다)를 도시한 것이다. 이러한 아미노산 서열은 서열 번호 82 및 서열 번호 72 내지 74를 포함한다. 가변 쇄는 뉴클레오타이드 1304번에서 종결된다. 가변/불변 연결 영역(밑줄쳐져 있음)은 뉴클레오타이드 1305번에서 부터 1310번 까지이다. 불변 영역은 뉴클레오타이드 1311번에서 부터 2847번 까지이다.
도 4는 사람 항체 Ab198의 경쇄의 아미노산 서열, 및 분리 및 정제된 폴리뉴클레오타이드(상부 쇄와 하부 쇄는 각각 서열 번호 83 및 84이다)를 도시한 것이다. 이러한 아미노산 서열은 서열 번호 78을 포함한다. 가변 쇄는 뉴클레오타이드 1351번에서 종결된다. 가변/불변 연결 영역(밑줄쳐져 있음)은 뉴클레오타이드 1352번에서 부터 1357번 까지이다. 불변 영역은 뉴클레오타이드 1358번에서 부터 1606번 까지이다.
도 5는 재조합 EPO 수용체를 발현하는 중국산 햄스터 난소 세포와 결합하기 위한, Ab12와 125I-표지된 EOP 간의 경쟁을 도시한 것이다.
도 6은 Ab12와 Ab198를 사용한 EPO 의존성 사람 세포 증식 검정의 결과를 도시한 것이다.
도 7은 Ab12를 4℃에서 20일 이하 동안 저장한 후에도, 이것이 F36E 세포의 증식을 유도하는데 있어 여전히 활성이라는 사실을 보여준다.
도 8은 Ab12가 사람 36+ 전구 세포로부터 CFU-E(콜로니 형성 단위-적혈구계)의 형성을 유도한다는 것을 보여준다.
도 9는 Ab198를 이용하여 사람 적혈구계 생산 세포의 증식을 유도한다는 것을 보여준다.
도 10은 Ab198이 사이노몰구스(cynomologous) 골수-유래된 적혈구계 전구 세포로부터 CFU-E 콜로니의 형성을 유도한다는 것을 보여준다.
도 11은 Ab12가 SE-3 펩타이드와 상호 작용하지 않는다는 것을 보여준다. Ab71A는 SE-3 펩타이드와 상호 작용한다.
도 12는 1차 하이브리도마에 의해 분비된 사람 Abs가 F36E 세포의 증식을 유도한다는 것을 보여준다.
도 13은 1차 하이브리도마에 의해 분비된 사람 Ab 상등액이 본래의 EPO 수용체와는 상호 작용하지만, 펩타이드 SE-3과는 상호 작용하지 않는다는 것을 보여준다.
도 14는 UT7/EPO 세포의 증식에 대한 각종 농도의 Ab12의 활성을 보여준다.
도 15는 UT7/EPO 세포의 증식에 대한 각종 농도의 Ab198의 활성을 보여준다.
도 16은 UT7/EPO 세포의 성장과 증식에 대한 각종 농도의 Ab198[2차 염소(goat) 항-사람 FC 항체를 부가하거나 부가하지 않음]의 활성을 보여준다.
도 17은 UT7/EPO 세포의 성장과 증식에 대한 각종 농도의 Ab12[2차 염소 항-사람 FC 항체를 부가하거나 부가하지 않음]의 활성을 보여준다.
도 18은 본 발명의 ABT2-SCX-003으로 명명된 세포주에 의해 발현된 사람 항-EPO-R 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 일련으로 나타낸 것인데, 도 18A(서열 번호 10)는 중쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 18B(서열 번호 11)은 도 18A에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타내며, 도 18C(서열 번호 12)는 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 18D(서열 번호 13)은 도 18C에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타낸다.
도 19는 본 발명의 ABT2-SCX-012로 명명된 세포주에 의해 발현된 사람 항-EPO-R 항체(본원에서 Ab12로서 지칭되기도 함)의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 일련으로 나타낸 것인데, 도 19A(서열 번호 2)는 중쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 19B(서열 번호 3)은 도 19A에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타내며, 도 19C(서열 번호 4)는 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 19D(서열 번호 5)은 도 19C에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타낸다.
도 20은 본 발명의 ABT2-SCX-022로 명명된 세포주에 의해 발현된 사람 항-EPO-R 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 일련으로 나타낸 것인데, 도 20A(서열 번호 14)는 중쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 20B(서열 번호 15)은 도 20A에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타내며, 도 20C(서열 번호 16)는 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 20D(서열 번호 17)은 도 20C에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타낸다.
도 21은 본 발명의 ABT2-SCX-054로 명명된 세포주에 의해 발현된 사람 항-EPO-R 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 일련으로 나타낸 것인데, 도 21A(서열 번호 18)는 중쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 21B(서열 번호 19)은 도 21A에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타내며, 도 21C(서열 번호 20)는 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 21D(서열 번호 21)은 도 21C에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타낸다.
도 22는 본 발명의 ABT2-SCX-060으로 명명된 세포주에 의해 발현된 사람 항-EPO-R 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 일련으로 나타낸 것인데, 도 22A(서열 번호 10)는 중쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 22B(서열 번호 11)은 도 22A에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타내며, 도 22C(서열 번호 22)는 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 22D(서열 번호 23)은 도 22C에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타낸다.
도 23은 본 발명의 ABT2-SCX-102로 명명된 세포주에 의해 발현된 사람 항-EPO-R 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 일련으로 나타낸 것인데, 도 23A(서열 번호 10)는 중쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 23B(서열 번호 11)은 도 23A에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타내며, 도 23C(서열 번호 24)는 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 23D(서열 번호 25)은 도 23C에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타낸다.
도 24는 본 발명의 ABT2-SCX-135로 명명된 세포주에 의해 발현된 사람 항-EPO-R 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 일련으로 나타낸 것인데, 도 24A(서열 번호 10)는 중쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 24B(서열 번호 11)은 도 24A에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타내며, 도 24C(서열 번호 26)는 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 24D(서열 번호 27)은 도 24C에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타낸다.
도 25는 본 발명의 ABT2-SCX-145로 명명된 세포주에 의해 발현된 사람 항-EPO-R 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 일련으로 나타낸 것인데, 도 25A(서열 번호 10)는 중쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 25B(서열 번호 11)은 도 25A에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타내며, 도 25C(서열 번호 28)는 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 25D(서열 번호 29)은 도 25C에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타낸다.
도 26은 본 발명의 ABT2-SCX-198로 명명된 세포주에 의해 발현된 사람 항-EPO-R 항체(본원에서 Ab198로서 지칭되기도 함)의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 일련으로 나타낸 것인데, 도 26A(서열 번호 6)는 중쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 26B(서열 번호 7)은 도 26A에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타내며, 도 26C(서열 번호 8)는 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 26D(서열 번호 9)은 도 26C에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타낸다.
도 27은 본 발명의 ABT2-SCX-254로 명명된 세포주에 의해 발현된 사람 항-EPO-R 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 일련으로 나타낸 것인데, 도 27A(서열 번호 30)는 중쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 27B(서열 번호 31)은 도 27A에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타내며, 도 27C(서열 번호 32)는 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 27D(서열 번호 33)은 도 27C에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타낸다.
도 28은 본 발명의 ABT2-SCX-267로 명명된 세포주에 의해 발현된 사람 항-EPO-R 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 일련으로 나타낸 것인데, 도 28A(서열 번호 34)는 중쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 28B(서열 번호 35)은 도 28A에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타내며, 도 28C(서열 번호 36)는 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 28D(서열 번호 37)은 도 28C에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타낸다.
도 29는 본 발명에 따라서 생성된 항-EPOr mAbs의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열과, 이와 연관된 생식선(germline) 가변 영역 서열의 정렬을 제시해주고, 골격 영역과 상보성 결정 영역을 확인시켜 주는 표이다.
도 30은 본 발명에 따라서 생성된 항-EPOr mAbs의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열과, 이와 연관된 생식선 가변 영역 서열의 정렬을 보여주고, 골격 영역과 상보성 결정 영역을 확인시켜 주는 표이다.
도 31은 F36e 사람 적혈구백혈병 세포주에 대한, 각종 농도의 감마-1 Ab 12 모노클로널 항체(Mab) 및 감마-2 Ab 12 Mab의 조혈 활성을 비교한 그래프이다.
도 32는 비히클, 에포겐(Epogen)(5U) 또는 Ab 12 항체(5 또는 50㎍)이 수 회분 투여된 유전자 전이된 마우스에서 망상적혈구 비율(%) 증가와 적혈구 용적률(%) 증가를 보여주는 그래프이다.
도 33은 각종 농도의 Aranesp™ 또는 Ab 12를 매주 투여한(3주간에 걸쳐 투여함) 유전자 전이된 마우스에서 적혈구 용적률(%) 증가를 보여주는 그래프이다.
도 34는 각종 농도의 Aranesp™ 또는 Ab 12를 1회 투여한 것에 비해 매주 투여한 유전자 전이된 마우스에서 적혈구 용적률(%) 증가를 보여주는 그래프이다.
도 35는 본 발명의 ABT2-SCX-390으로 명명된 세포주에 의해 발현된 사람 항-EPO-R 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 일련으로 나타낸 것인데, 도 35A(서열 번호 38)는 중쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 35B(서열 번호 39)은 도 35A에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타내며, 도 35C(서열 번호 40)는 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 35D(서열 번호 41)은 도 35C에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타낸다.
도 36은 본 발명의 ABT2-SCX-412로 명명된 세포주에 의해 발현된 사람 항-EPO-R 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 일련으로 나타낸 것인데, 도 36A(서열 번호 42)는 중쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 36B(서열 번호 43)은 도 36A에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타내며, 도 36C(서열 번호 44)는 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 36D(서열 번호 45)은 도 36C에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타낸다.
도 37은 본 발명의 ABT2-SCX-430/432로 명명된 세포주에 의해 발현된 사람 항-EPO-R 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 일련으로 나타낸 것인데, 도 37A(서열 번호 46)는 중쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 37B(서열 번호 47)은 도 37A에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타내며, 도 37C(서열 번호 48)는 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 37D(서열 번호 49)은 도 37C에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타낸다.
도 38은 본 발명의 ABT2-SCX-467로 명명된 세포주에 의해 발현된 사람 항-EPO-R 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 일련으로 나타낸 것인데, 도 38A(서열 번호 50)는 중쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 38B(서열 번호 51)은 도 38A에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타내며, 도 38C(서열 번호 52)는 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 38D(서열 번호 53)은 도 38C에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타낸다.
도 39는 본 발명의 ABT2-SCX-484로 명명된 세포주에 의해 발현된 사람 항-EPO-R 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 일련으로 나타낸 것인데, 도 39A(서열 번호 54)는 중쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 39B(서열 번호 55)은 도 39A에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타내며, 도 39C(서열 번호 56)는 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 나타내고, 도 39D(서열 번호 57)은 도 39C에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 나타낸다.
도 40은 본 발명에 따라서 생성된 항-EPOr mAbs의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열과, 이와 연관된 생식선 가변 영역 서열의 정렬을 제시해주고, 골격 영역과 상보성 결정 영역을 확인시켜 주는 표이다.
도 41은 본 발명에 따라서 생성된 항-EPOr mAbs의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열과, 이와 연관된 생식선 가변 영역 서열의 정렬을 보여주고, 골격 영역과 상보성 결정 영역을 확인시켜 주는 표이다.
도 42는 사람 항체 Ab390의 중쇄의 아미노산 서열, 및 분리 및 정제된 폴리뉴클레오타이드(상부 쇄와 하부 쇄는 각각 서열 번호 86 및 87이다)를 도시한 것이다. 이러한 아미노산 서열은 서열 번호 88 및 서열 번호 72 내지 74를 포함한다. 가변 쇄는 뉴클레오타이드 463번에서 종결된다. 가변/불변 연결 영역(밑줄쳐져 있음)은 뉴클레오타이드 464번에서 부터 469번 까지이다. 불변 영역은 뉴클레오타이드 470번에서 부터 2006번 까지이다.
도 43은 사람 항체 Ab390의 경쇄의 아미노산 서열, 및 분리 및 정제된 폴리뉴클레오타이드(상부 쇄와 하부 쇄는 각각 서열 번호 89 및 90이다)를 도시한 것이다. 이러한 아미노산 서열은 서열 번호 91을 포함한다. 가변 쇄는 뉴클레오타이드 463번에서 종결된다. 가변/불변 연결 영역(밑줄쳐져 있음)은 뉴클레오타이드 464번에서 부터 469번 까지이다. 불변 영역은 뉴클레오타이드 470번에서 부터 718번 까지이다.
도 44는 사람 항체 Ab412의 중쇄의 아미노산 서열, 및 분리 및 정제된 폴리뉴클레오타이드(상부 쇄와 하부 쇄는 각각 서열 번호 92 및 93이다)를 도시한 것이다. 이러한 아미노산 서열은 서열 번호 94 및 서열 번호 72 내지 74를 포함한다. 가변 쇄는 뉴클레오타이드 469번에서 종결된다. 가변/불변 연결 영역(밑줄쳐져 있음)은 뉴클레오타이드 470번에서 부터 475번 까지이다. 불변 영역은 뉴클레오타이드 476번에서 부터 2012번 까지이다.
도 45는 사람 항체 Ab412의 경쇄의 아미노산 서열, 및 분리 및 정제된 폴리뉴클레오타이드(상부 쇄와 하부 쇄는 각각 서열 번호 95 및 96이다)를 도시한 것이다. 이러한 아미노산 서열은 서열 번호 97을 포함한다. 가변 쇄는 뉴클레오타이드 463번에서 종결된다. 가변/불변 연결 영역(밑줄쳐져 있음)은 뉴클레오타이드 464번에서 부터 469번 까지이다. 불변 영역은 뉴클레오타이드 470번에서 부터 718번 까지이다.
도 46은 사람 항체 Ab432의 중쇄의 아미노산 서열, 및 분리 및 정제된 폴리뉴클레오타이드(상부 쇄와 하부 쇄는 각각 서열 번호 98 및 99이다)를 도시한 것이다. 이러한 아미노산 서열은 서열 번호 100 및 서열 번호 72 내지 74를 포함한다. 가변 쇄는 뉴클레오타이드 463번에서 종결된다. 가변/불변 연결 영역(밑줄쳐져 있음)은 뉴클레오타이드 464번에서 부터 469번 까지이다. 불변 영역은 뉴클레오타이드 470번에서 부터 2006번 까지이다.
도 47은 사람 항체 Ab430의 경쇄의 아미노산 서열, 및 분리 및 정제된 폴리뉴클레오타이드(상부 쇄와 하부 쇄는 각각 서열 번호 101 및 102이다)를 도시한 것이다. 이러한 아미노산 서열은 서열 번호 103을 포함한다. 가변 쇄는 뉴클레오타이드 463번에서 종결된다. 가변/불변 연결 영역(밑줄쳐져 있음)은 뉴클레오타이드 464번에서 부터 469번 까지이다. 불변 영역은 뉴클레오타이드 470번에서 부터 718번 까지이다.
도 48은 사람 항체 Ab467의 중쇄의 아미노산 서열, 및 분리 및 정제된 폴리뉴클레오타이드(상부 쇄와 하부 쇄는 각각 서열 번호 104 및 105이다)를 도시한 것이다. 이러한 아미노산 서열은 서열 번호 106 및 서열 번호 72 내지 74를 포함한다. 가변 쇄는 뉴클레오타이드 463번에서 종결된다. 가변/불변 연결 영역(밑줄쳐져 있음)은 뉴클레오타이드 464번에서 부터 468번 까지이다. 불변 영역은 뉴클레오타이드 470번에서 부터 2006번 까지이다.
도 49는 사람 항체 Ab467의 경쇄의 아미노산 서열, 및 분리 및 정제된 폴리뉴클레오타이드(상부 쇄와 하부 쇄는 각각 서열 번호 107 및 108이다)를 도시한 것이다. 이러한 아미노산 서열은 서열 번호 109를 포함한다. 가변 쇄는 뉴클레오타이드 463번에서 종결된다. 가변/불변 연결 영역(밑줄쳐져 있음)은 뉴클레오타이드 464번에서 부터 469번 까지이다. 불변 영역은 뉴클레오타이드 470번에서 부터 718번 까지이다.
도 50은 사람 항체 Ab484의 중쇄의 아미노산 서열, 및 분리 및 정제된 폴리뉴클레오타이드(상부 쇄와 하부 쇄는 각각 서열 번호 110 및 111이다)를 도시한 것이다. 이러한 아미노산 서열은 서열 번호 112 및 서열 번호 72 내지 74를 포함한다. 가변 쇄는 뉴클레오타이드 469번에서 종결된다. 가변/불변 연결 영역(밑줄쳐져 있음)은 뉴클레오타이드 470번에서 부터 475번 까지이다. 불변 영역은 뉴클레오타이드 470번에서 부터 2012번 까지이다.
도 51은 사람 항체 Ab484의 경쇄의 아미노산 서열, 및 분리 및 정제된 폴리뉴클레오타이드(상부 쇄와 하부 쇄는 각각 서열 번호 113 및 114이다)를 도시한 것이다. 이러한 아미노산 서열은 서열 번호 115를 포함한다. 가변 쇄는 뉴클레오타이드 463번에서 종결된다. 가변/불변 연결 영역(밑줄쳐져 있음)은 뉴클레오타이드 464번에서 부터 469번 까지이다. 불변 영역은 뉴클레오타이드 470번에서 부터 718번 까지이다.
정의
본원에 사용된 바와 같은 용어 "항체" 또는 "면역글로불린"은 폴리클로널, 모노클로널, 키메라 및 사람 또는 사람 적응화 항체 부류에 속하는 단일 쇄, 2-쇄 및 다중-쇄 단백질 및 당단백질을 지칭한다. 용어 "항체"에는 또한, 이의 합성 및 유전 공학적으로 처리된 변이체가 포함된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "항체 단편"은 Fab, Fab', F(ab)2 및 Fv 단편 뿐만 아니라 한 가지 이상의 목적하는 에피토프에 대한 특이성을 지닌 항체의 모든 부분을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "감마-2", "감마-2 이소타입" 또는 "IgG2"는 면역글로불린 G(IgG)의 아부류 2 뿐만 아니라 이의 모든 항체 단편을 지칭한다. IgG 분자의 제4 아부류는 널리 성상 확인되었고 당업자에게 널리 공지되어 있다[참조: 예를 들면, Molecular Biology of the Cell, 2nd Edition by Bruce Alberts et al., 1989]. 사람 면역글로불린의 모든 사람 이소타입(IgA, IgG, IgD IgE, 및 IgM) 및 서브이소타입(IgAI, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4)을 인식하는 모노클로널 항체 패널이 입수 가능하다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "사람 적응화 항체"는 모 항체의 항원-결합 특성을 보유하거나 실질적으로 보유하고 있지만 사람에게서 덜 면역원성인 비-사람 항체(즉, 쥐과 항체)로부터 유래되는 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "사람 항체"는 사람 생식선 면역글로불린 서열로부터 유래되는 서열을 보유하고 있는 항체, 예를 들면, 사람 면역글로불린 유전자를 갖는 유전자 전이된 마우스(예: XenoMouse® 마우스), 사람 파아지 디스플레이 라이브러리 또는 사람 B 세포로부터 유래된 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "에피토프"는 항체 또는 T-세포 수용체와 특이적으로 결합할 수 있는 모든 단백질 결정기를 지칭한다. 에피토프 결정기는 화학적 활성 표면 분자 그룹, 예를 들면, 아미노산 또는 당 측쇄로 통상 이루어지고, 특이적 3차원 구조 특징 뿐만 아니라 특이적 전하 특징을 통상 지니고 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "내인성"은 외부로부터 유래하는 생성물 또는 활성과는 반대로, 체내 또는 세포 내에서 발생되는 생성물 또는 활성을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "유래된" 또는 "명시된 서열에 대해 특이적인" 폴리뉴클레오타이드란 명시된 뉴클레오타이드 서열의 특정 영역에 상응하는, 즉 이러한 영역과 동일하거나 이에 상보적인 대략 6개 이상의 뉴클레오타이드, 바람직하게는 약 8개 이상의 뉴클레오타이드, 보다 바람직하게는 약 10개 내지 12개의 뉴클레오타이드, 보다 더 바람직하게는 약 15개 내지 20개의 뉴클레오타이드의 연속되는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 지칭한다. 이러한 서열은 당해 분야에 공지된 기술에 의해 결정된 바와 같이 특정한 폴리뉴클레오타이드 서열에 독특한 서열에 상보적이거나 이와 동일할 수 있다. 서열이 유래되는 영역에는 특이적 에피토프를 암호화하는 영역 뿐만 아니라 비-해독되고/되거나 비-전사된 영역이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
이와 같이 하여 유래된 폴리뉴클레오타이드는 연구 중인 관심있는 뉴클레오타이드 서열로부터 반드시 물리적으로 유래되는 것은 아니지만, 해당 뉴클레오타이드가 유래되는 영역 내의 염기 서열에 의해 제공된 정보를 근거로 하여, 화학적 합성, 복제, 역전사 또는 전사를 포함하지만 이에 제한되지 않는 모든 방식으로 생성시킬 수 있다. 그 자체로서, 이는 본래 폴리뉴클레오타이드의 센스 또는 안티센스 배향을 나타낼 수 있다. 또한, 명시된 서열의 영역에 상응하는 영역의 조합물을, 의도한 용도에 부합되게 당해 분야에 공지된 방식으로 변형시킬 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 "..에 의해 암호화된"이란 특정 폴리펩타이드 서열을 암호화하는 핵산 서열을 지칭하는데, 이러한 폴리펩타이드 서열 또는 이의 일정 부분은 상기 핵산 서열에 의해 암호화된 폴리펩타이드로부터의 3 내지 5개 이상의 아미노산, 보다 바람직하게는 8 내지 10개 이상의 아미노산, 보다 더 바람직하게는 15 내지 20개 이상의 아미노산의 아미노산 서열을 함유한다. 또한, 해당 서열에 의해 암호화된 폴리펩타이드로 면역학적으로 동정 가능한 폴리펩타이드 서열이 포괄된다. 따라서, "폴리펩타이드", "단백질" 또는 "아미노산" 서열은 본 발명의 항체와 약 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상의 동일률을 나타낸다. 추가로, 본 발명의 항체는 본 발명의 항체의 폴리펩타이드 또는 아미노산 서열과 약 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 유사율을 나타낼 수 있다. 본 발명의 항체의 아미노산 서열은 서열 번호 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55 및 57로 이루어진 그룹 중에서 선택될 수 있다. 본 발명의 항체의 바람직한 아미노산 서열은 서열 번호 3, 5, 7, 9, 51 및 53으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다.
본원에 사용된 바와 같은 "재조합 폴리펩타이드", "재조합 단백질" 또는 "재조합 기술에 의해 생성된 폴리펩타이드"란 용어는 본원에서 상호 교환적으로 사용될 수 있고, 이들 용어는 이의 기원 또는 조작을 통하여, 사실상 연합되고/되거나 사실상 연결되어 있는 것 이외의 폴리펩타이드와 연결되어 있는 폴리펩타이드의 모든 또는 일정 부분과 연합되어 있지 않은 폴리펩타이드를 기술한다. 재조합 또는 암호화된 폴리펩타이드 또는 단백질이 반드시 명시된 핵산 서열로부터 해독될 필요는 없다. 이는 화학적 합성 또는 재조합 발현 시스템의 발현을 포함한 어떠한 방식으로든 생성시킬 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 "합성 펩타이드"란 당해 분야에 널리 공지된 방법에 의해 화학적으로 합성할 수 있는, 모든 길이의 중합체성 형태의 아미노산을 지칭한다[참조: 미국 특허 제4,816,513호, 제5,854,389호, 제5,891,993호 및 제6,184,344호].
본원에 사용된 바와 같은 용어 "폴리뉴클레오타이드"는 리보뉴클레오타이드 또는 데옥시리보뉴클레오타이드인, 모든 길이의 중합체성 형태의 뉴클레오타이드를 지칭한다. 상기 용어는 해당 분자의 1차 구조 만을 지칭한다. 따라서, 상기 용어에는 이본쇄 및 일본쇄 DNA 뿐만 아니라 이본쇄 및 일본쇄 RNA가 포함된다. 이에는 또한, 상기 폴리뉴클레오타이드의 변형물, 예를 들면, 메틸화 또는 캡핑 형태와, 이러한 폴리뉴클레오타이드의 변형되지 않은 형태가 포함된다. 용어 "폴리뉴클레오타이드", "올리고머", "올리고뉴클레오타이드" 및 "올리고"는 본원에서 상호 교환적으로 사용된다.
본원에 사용된 바와 같은 "정제된 폴리뉴클레오타이드"란 관심있는 폴리뉴클레오타이드와 자연히 연합되는 단백질을 본질적으로 함유하지 않는, 예를 들어, 이러한 단백질을 약 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 미만 함유하는 상기 관심있는 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 단편을 지칭한다. 관심있는 폴리뉴클레오타이드를 정제하는 기술은 당해 분야에 널리 공지되어 있고, 이러한 기술에는, 예를 들어, 상기 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 세포를 카오트로픽제(chaotropic agent)로 파열시키는 기술, 및 이온 교환 크로마토그래피, 친화 크로마토그래 및 밀도에 따른 침강에 의해 폴리뉴클레오타이드(들) 및 단백질을 분리시키는 기술이 있다.
본원에 사용된 바와 같은 "정제된 폴리펩타이드" 또는 "정제된 단백질"이란 관심있는 폴리펩타이드와 자연히 연합되는 세포성 성분들을 본질적으로 함유하지 않는, 예를 들어, 이러한 세포성 성분들을 약 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 미만 함유하는 상기 관심있는 폴리펩타이드 또는 이의 단편을 의미한다. 관심있는 폴리펩타이드를 정제하는 기술은 당해 분야에 공지되어 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "분리된"이란 이의 본래 환경(예를 들면, 이것이 천연으로 존재하는 경우에는 천연 환경)으로부터 제거(이동)시킨 물질을 지칭한다. 예를 들어, 살아 있는 동물 내에 존재하는 천연 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드는 분리되지 않은 것이지만, 천연 시스템 내에 함께 존재하는 물질 전부 또는 일부로부터 격리된, 동일한 폴리뉴클레오타이드 또는 DNA 또는 폴리펩타이드는 분리된 것이다. 이러한 폴리뉴클레오타이드는 벡터의 일부일 수 있고/있거나 이러한 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드는 조성물의 일부일 수 있는데, 이러한 벡터 또는 조성물이 이의 천연 환경의 일부가 아니라는 점에서 여전히 분리된 것이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "폴리펩타이드" 및 "단백질"은 상호 교환적으로 사용되며, 이는 공유 및/또는 비-공유 결합을 통하여 연결된 아미노산의 하나 이상의 분자 쇄를 지칭한다. 상기 용어는 특정 길이의 생성물을 지칭하지는 않는다. 따라서, 펩타이드, 올리고펩타이드 및 단백질은 폴리펩타이드의 정의 내에 포함된다. 상기 용어에는 폴리펩타이드의 해독후 변형물(이에는 당화물, 아세틸화물, 인산화물 등이 포함되지만 이에 제한되지 않는다)이 포함된다. 또한, 단백질 단편, 동족체, 돌연변이된 단백질, 변이체 단백질, 융합 단백질 등이 폴리펩타이드의 의미 내에 포함된다.
본원에 사용된 바와 같은 "재조합 숙주 세포", "숙주 세포", "세포", "세포주", "세포 배양물", 및 단세포 실체로서 배양된 미생물 또는 고등 진핵성 세포주를 의미하는 상기 기타 용어는 재조합 벡터 또는 기타 전이된 DNA에 대한 수용자로서 사용될 수 있거나 또는 사용되어 온 세포를 지칭하며, 이에는 형질감염시킨 본래 세포의 본래 자손이 포함된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "레플리콘(replicon)"은 특정 세포 내에서 폴리뉴클레오타이드 자동 복제 단위로서 행동하는 모든 유전 요소, 예를 들면, 플라스미드, 염색체 또는 바이러스를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "작동적으로 연결된"이란 해당 성분들이 의도한 방식으로 작용할 수 있도록 서로 관계를 맺고 있는 상황을 지칭한다. 따라서, 예를 들면, 암호화 서열에 "작동적으로 연결된" 조절(control) 서열은, 암호화 서열의 발현이 상기 조절 서열과 양립할 수 있는 조건 하에서 달성되는 방식으로 연결되어 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "벡터"는 또 다른 폴리뉴클레오타이드 절편이 부착되어, 예를 들어, 이와 같이 부착된 절편의 복제 및/또는 발현을 유발시키는 레플리콘을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "조절 서열"은 이에 연결된 암호화 서열의 발현을 수행하는데 필요한 폴리뉴클레오타이드 서열을 지칭한다. 이러한 조절 서열의 특성은 숙주 유기체에 따라서 상이하다. 원핵 생물에서는, 이러한 조절 서열에 일반적으로, 프로모터, 리보솜성 결합 부위 및 종결 인자, 및 몇 가지 경우에서는 증강인자가 포함된다. 따라서, 용어 "조절 서열"은 발현에 필요하여 존재하는 최소한의 모든 성분을 포함하고자 한 것이며, 이에는 존재하는 것이 유리한 부가 성분, 예를 들면, 리더(leader) 서열이 포함될 수도 있다.
용어 "형질감염(transfection)"은 외인성 폴리뉴클레오타이드를, 도입에 이용된 방법에 상관없이 원핵성 또는 진핵성 숙주 세포 내로 도입하는 것을 지칭한다. 용어 "형질감염"은 폴리뉴클레오타이드의 안정적인 도입과 일시적인 도입 둘 다를 지칭하고, 폴리뉴클레오타이드의 직접적인 흡수, 형질전환, 형질도입 및 f-교배를 포괄한다. 숙주 세포 내로 일단 도입되면, 외인성 폴리뉴클레오타이드는 비-통합된 레플리콘, 예를 들면, 플라스미드로서 유지될 수 있거나, 또는 숙주 게놈 내로 통합될 수도 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "치료"는 예방 및/또는 치료법을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "정제된 생성물"은 해당 생성물과 자연히 연합되어 있는 세포성 구성분들로부터 분리시키고, 관심있는 샘플 내에 존재할 수 있는 기타 유형의 세포로부터 분리시킨 생성물 제제를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "에리트로포이에틴(EPO) 수용체의 활성화"란 특정 시그널을 수용체-보유 세포의 내부로 형질도입시켜 주는, EPO 수용체가 진행하는 한 가지 이상의 분자 과정을 지칭한다. 궁극적으로, 상기 시그널은 세포 생리학에 있어 한 가지 이상의 변화를 유발시킨다. EPO 수용체를 활성화시키면 전형적으로, EPO 수용체-보유 세포, 예를 들면, 적혈구계 전구 세포가 증식 또는 분화된다. 수 많은 사건이 EPO 수용체의 활성화와 관련이 있으며, 이에는 해당 수용체를 이량체화하는 것이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
항체의 구조 단위는 사량체(tetramer)이다. 각 사량체는 2개의 동일한 폴리펩타이드 쇄 쌍으로 구성되는데, 각 쌍은 1개의 "경쇄"(25 kDa)와 1개의 "중쇄"(약 50 내지 70 kDa)를 갖는다. 각 쇄의 아미노-말단 부분은 항원 인식에 주로 관여하는 가변 영역을 포함한다. 상기 쇄의 카복시-말단 부분은 항체의 효과인자(effector) 기능에 관여하는 불변 영역을 규정한다. 사람 경쇄는 카파 및 람다 경쇄로서 분류된다. 중쇄는 뮤, 델타, 감마, 알파 또는 엡실론으로 분류되며, 항체 이소타입을 IgM, IgD, IgG, IgA, 및 IgE로서 규정한다. IgG 면역글로불린은 감마-1, 감마-2, 감마-3 및 감마-4 중쇄를 각각 갖는 4가지 아부류(IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4)로 추가 분류된다. 입수 가능한 대부분의 치료학적 사람, 키메라 또는 사람 적응화 항체는 IgG1 항체 유형의 것이며, 이에는 유방암 치료용 헤르셉틴(Herceptin), 비-호지킨스 림프종 치료용 리툭산(Rituxan), 및 류마티스성 관절염 치료용 후미라(Humira) 및 레미카데(Remicade)가 포함된다[참조: Glennie, M. J. et al., Drug Discovery Today, 8:503 (2003)].
경쇄와 중쇄 내에서 가변 영역과 불변 영역은 "J" 영역에 의해 연결되는데, 중쇄는 "D" 영역을 포함하기도 한다. 각 경쇄/중쇄 쌍의 가변 영역은 항원 결합 부위를 형성한다. 따라서, 본래의 항체는 2개의 결합 부위를 가지는데, 이들 부위는 이작용성 또는 이중-특이적 항체를 제외하고는 동일하다. 이작용성 또는 이중-특이적 항체는 2개의 상이한 중쇄/경쇄 쌍과 2개의 상이한 결합 부위를 갖는 인공 하이브리드 항체이다. 이작용성 또는 이중-특이적 항체는 당해 분야에 공지된 통상적인 기술을 사용하여 생성시킬 수 있다.
항체 쇄의 구조는 상보성 결정 영역 또는 CDR로 불리우기도 하는 3 가지 초가변 영역에 의해 연결된 비교적 보존된 골격 영역(FR)의 동일한 일반 구조를 나타낸다. 각 쌍의 2개 쇄로부터의 CDR는 골격 영역에 의해 정렬되어, 특이적 에피토프와 결합할 수 있게 된다. N-말단에서 부터 C-말단 까지 경쇄와 중쇄 둘 다는 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다.
미국 특허 제6,319,499호에는 에리트로포이에틴 수용체(EPO-R)과 결합하여 이를 활성화시키는 항체가 기재되어 있다. 상기 특허에서 구체적으로 동정된 항체는 Mabs 71 및 73이다. Mab 71은 PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 갖는 "SE-3"으로 명시된 펩타이드와 결합한다(실시예 3 참조). SE-3은 사람 EPO-R의 아미노산 잔사 49번에서 부터 78번 사이에 위치해 있다. 미국 특허 제6,319,499호에 따르면, 이러한 EPO-R 영역(즉, 아미노산 잔사 49번 내지 79번)이 가교 결합제, 예를 들면, Mab 71과 결합되면, 이로써 EPO 수용체가 활성화된다. 미국 특허 제6,319,499호의 실시예 6에는 Mab 71이 시험된 기타 펩타이드와 비교해서 "상당한 양의 펩타이드 SE-3"와 결합한다고 기재되어 있다. 상기 실시예에는 이러한 사실이, "Mab 71이 잔사 49번에서 부터 78번 까지를 함유하거나 이와 중복되는 사람 EPO-R 영역과 결합한다는 것을 지시한다"고 기재되어 있다. Mabs 71 및 73은 쥐과 항체이다. 설치류 항체와 사람 항체 모두가 표적 특이성에 대한 정확도를 제공할 수 있긴 하지만, 사람 항체가 천연 신체 방어와 훨씬 더 효과적으로 상호 작용하고 설치류 항체와 동일한 정도로 항-항체 반응을 유발시키지도 않는다[참조: Winter, G. and Milstein, C. Nature 349:293 (1991)]. 부가적으로, 사람 IgG 아부류의 유연성은 상이하고[참조: Roux, K. H. et al., J. Immunol. 159: 3372 (1997)], 이러한 상이성은 설치류 IgG 이소타입으로 연장되기도 하는데, 이는 설치류 IgG 이소타입이 이들의 사람 대응물과 상이하기 때문이다. 단백질 유연성은 항원-항체 인식에 영향을 미칠 수 있기 때문에[참조: Jimenez, R. , et al. Proc. Natl. Acad Sci. USA, 100:92 (2003)], 사람 IgG2 이소타입은 쥐과 항체와는 별개의 항원 인식 기전을 유발시킬 수도 있다. 쥐과 IgG 이소타입은 일반적으로 사람의 것과 상이하다.
한 양태에서, 본 발명은 에리트로포이에틴 수용체와 결합하는 항체 또는 항체 단편에 관한 것이다. 에리트로포이에틴 수용체와 결합하는 항체 또는 항체 단편은 서열 번호 3, 7, 11, 15, 19, 31, 35, 39, 43, 47, 51, 55 및 이의 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 중쇄를 포함한다. 제2 양태에서, 에리트로포이에틴 수용체와 결합하는 항체 또는 항체 단편은 서열 번호 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57 및 이의 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 경쇄를 포함한다.
제3 양태에서, 본 발명은 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체에 관한 것이다. 보다 구체적으로 언급하면, 이러한 항체는 CDR1에서 부터 CDR3 까지의 연속 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역을 포함한다. CDR1에서 부터 CDR3 까지의 연속 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 58, 서열 번호 59, 서열 번호 60 및 서열 번호 61, 및 이의 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. CDR1에서 부터 CDR3 까지의 연속 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 62, 서열 번호 63, 서열 번호 64, 서열 번호 65, 서열 번호 66, 서열 번호 67 및 서열 번호 68, 및 이의 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 또한, 본 발명은 하나 이상의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역을 포함하는 분리된 항체에 관한 것이다. 보다 구체적으로 언급하면, 상기 항체는 서열 번호 11의 아미노산 잔사 99-112, 서열 번호 3의 아미노산 잔사 26-35, 서열 번호 3의 아미노산 잔사 50-65, 서열 번호 3의 아미노산 잔사 98-105, 서열 번호 19의 아미노산 잔사 26-35, 서열 번호 19의 아미노산 잔사 50-66, 서열 번호 19의 아미노산 잔사 99-105, 서열 번호 31의 아미노산 잔사 50-66, 서열 번호 31의 아미노산 잔사 99-105, 서열 번호 39의 아미노산 잔사 26-35, 서열 번호 39의 아미노산 잔사 50-65, 서열 번호 39의 아미노산 잔사 98-105, 서열 번호 43의 아미노산 잔사 26-37, 서열 번호 43의 아미노산 잔사 52-67, 서열 번호 43의 아미노산 잔사 100-107, 서열 번호 47의 아미노산 잔사 26-35, 서열 번호 47의 아미노산 잔사 50-65, 서열 번호 51의 아미노산 잔사 26-35, 서열 번호 51의 아미노산 잔사 50-65, 서열 번호 51의 아미노산 잔사 98-105, 서열 번호 55의 아미노산 잔사 26-37 및 서열 번호 55의 아미노산 잔사 52-67로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 13의 아미노산 잔사 24-34, 서열 번호 13의 아미노산 잔사 50-56, 서열 번호 5의 아미노산 잔사 89-97, 서열 번호 27의 아미노산 잔사 24-34, 서열 번호 9의 아미노산 잔사 50-56, 서열 번호 33의 아미노산 잔사 24-39, 서열 번호 33의 아미노산 잔사 55-61, 서열 번호 41의 아미노산 잔사 24-34, 서열 번호 41의 아미노산 잔사 89-97, 서열 번호 45의 아미노산 잔사 24-34, 서열 번호 45의 아미노산 잔사 50-56, 서열 번호 45의 아미노산 잔사 89-97, 서열 번호 49의 아미노산 잔사 89-97 및 서열 번호 57의 아미노산 잔사 24-34로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
제4 양태에서, 본 발명은 에리트로포이에틴 수용체와 결합하여 이를 활성화시키는 항체 또는 항체 단편에 관한 것이다. 본 발명의 항체는 EPO 수용체를 활성화시키는데 관여하는 하나 이상의 에피토프와 결합한다(실시예 4). 에리트로포이에틴 수용체와 결합하여 이를 활성화시키는 것으로 당해 분야에 공지된 기타 항체 또는 단편, 예를 들면, 미국 특허 제6,319,499호에 기재된 항체와는 달리, 본 발명의 항체는 SE-3으로 지칭된 펩타이드와 상호 작용하지 않는다. 놀랍게도, 본 발명의 항체는 심지어 당해 항체가 SE-3 펩타이드와 결합하지 않은 경우에도 조혈성이다. 따라서, 본 발명의 사람 항체는 미국 특허 제6,319,499호에 기재된 항체 보다는 사람 EPO 수용체 상의 하나 이상의 상이한 에피토프와 상호 작용한다.
제5 양태에서, 본 발명은 에리트로포이에틴 수용체와 결합하여 이를 활성화시키는 IgG2 항체 또는 항체 단편에 관한 것이다. 이러한 양태의 IgG2 항체 또는 항체 단편은 EPO 수용체를 활성화시키는데 관여하는 모든 에피토프와 결합하고 상호 작용한다.
부가적으로, 실시예 1에 제시된 BIAcore 결과에 의해 입증된 바와 같이, 본 발명의 항체는 에리트로포이에틴 수용체에 대한 내인성 사람 에리트로포이에틴의 결합 친화성의 100배 범위 내에서 에리트로포이에틴 수용체에 대한 결합 친화성을 나타낸다. EPO 상의 2개의 비-등가 수용체 결합 부위로부터 비롯된, EPO에 대한 EPO 수용체의 높은(~1nM) 및 낮은(~1μM) 친화성이 보고되었다[참조: Philo, J. S. et al., Biochemistry, 35:1681 (1996)].
본 발명의 항체는 폴리클로널 항체, 모노클로널 항체, 키메라 항체(미국 특허 제6,020,153호 참조) 또는 사람 또는 사람 적응화 항체, 또는 이의 항체 단편일 수 있다. 전술된 모든 것의 합성 및 일반적으로 유전 공학적으로 처리된 변이체(참조: 미국 특허 제6,331,415호)가 본 발명에 또한 포괄된다. 그러나, 바람직하게는 본 발명의 항체가 사람 또는 사람 적응화 항체이다. 사람 또는 사람 적응화 항체의 이점은 이들이 숙주 수용자 내에서 항체의 면역원성을 효능적으로 저하 또는 제거시킴으로써, 생체내 이용 효율을 증가시키고 불리한 면역 반응이 일어날 가능성을 감소시켜, 잠재적으로 다중 항체 투여를 가능하게 만든다는 점이다.
사람 적응화 항체에는 키메라 또는 CDR-이식된 항체가 포함된다. 또한, 사람 항체는 동물의 항체 유전자 발현을 억제시키고 이를 사람 항체 유전자 발현으로 기능적으로 대체시킨, 유전 공학적으로 처리시킨 동물 세포주를 사용하여 생성시킬 수 있다.
사람 적응화 항체와 사람 항체의 제조 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 사람 항체를 제조하는 한 가지 방법은 유전자 전이된 동물, 예를 들면, 유전자 전이된 마우스를 이용한다. 이들 유전자 전이된 동물은 이들 자신의 게놈 내로 삽입된 사람 항체 생산 게놈의 실재 부분을 함유하고, 동물 자신의 내인성 항체 생산은 항체 생산 결핍으로 된다. 이러한 유전자 전이된 동물의 제조 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 상기 유전자 전이된 동물은 XenoMouse® 기술을 사용하거나 "미니로커스(minilocus)" 접근법을 사용함으로써 만들 수 있다. Xenomice™의 제조 방법이 미국 특허 제 6,162,963호, 제6,150,584호, 제6,114,598호 및 제6,075,181호에 기재되어 있다. "미니로커스" 접근법을 사용하여 유전자 전이된 동물을 제조하는 방법이 미국 특허 제5,545,807호, 제5,545,806호 및 제5,625,825호에 기재되어 있다. 또한, 국제공개공보 W0 93/12227를 참조할 수 있다.
XenoMouse® 기술을 사용하여, XenoMouse® 마우스(Abgenix, Fremont, California)를 관심있는 항원으로 면역시킴으로써 사람 항체를 수득할 수 있다. 항체를 발현하는 마우스로부터 림프성 세포를 회수한다. 이와 같이 회수한 세포를 골수-유형 세포와 융합시켜 불멸의 하이브리도만 세포주를 제조할 수 있다. 이들 하이브리도마 세포주를 스크리닝 및 선별하여, 관심있는 항원에 특이적인 항체를 생성하는 하이브리도마 세포주를 동정할 수 있다. 또 다른 한편, 항체는 하이브리도마 세포주 이외의 세포주에서 발현될 수 있다. 보다 구체적으로 언급하면, 특정의 항체를 암호화하는 서열은 이러한 항체를 생산하는 세포로부터 클로닝한 다음, 적합한 포유류 숙주 세포의 형질전환을 위해 사용될 수 있다.
형질전환은 폴리뉴클레오타이드를 숙주 세포 내로 도입하는 것으로 공지된 모든 방법, 예를 들면, 해당 폴리뉴클레오타이드를 바이러스 내에 패키징하거나 바이러스성 벡터 내로 패키징하고 숙주 세포를 바이러스 또는 벡터로 형질도입하는 방법, 또는 예를 들어, 미국 특허 제4,399,216호, 제4,912,040호, 제4,740,461호 및 제4,959,455호에 기재된 바와 같이 당해 분야에 공지된 형질감염 과정에 의해 수행할 수 있다. 예를 들어, 중쇄를 암호화하는 하나 이상의 유전자를 특정 세포에서 발현시킬 수 있으며, 경쇄를 암호화하는 하나 이상의 유전자는 제2 세포에서 발현시킬 수 있다. 이어서, 이로써 생성된 중쇄와 경쇄를 당해 분야에 공지된 기술을 사용하여 함께 융합시켜 본 발명의 항체를 형성시킬 수 있다. 또 다른 한편, 중쇄와 경쇄 일부를 암호화하는 유전자를, 제한 엔도뉴클레아제를 사용하여 연결시켜 각 쇄를 암호화하는 유전자를 재작제할 수 있다. 이어서, 이러한 유전자를 특정 세포에서 발현시켜 본 발명의 항체를 생성할 수 있다.
사용된 형질전환 과정은 형질전환시키고자 하는 숙주에 좌우될 것이다. 이종 폴리뉴클레오타이드를 포유류 세포 내로 도입하는 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있고, 이러한 방법으로는 덱스트란-매개된 형질감염, 인산칼슘 침전법, 폴리브렌 매개된 형질감염, 원형질체 융합법, 전기천공법, 폴리뉴클레오타이드를 리포좀 내로 피막화하는 방법 및 DNA 분자를 직접적으로 미세주사하는 방법이 있다.
발현을 위한 숙주로서 사용될 수 있는 포유류 세포주는 당해 분야에 널리 공지되어 있고, 이에는 중국산 햄스터 난소(CHO) 세포, HeLa 세포, 어린 햄스터 신장(BHK) 세포, 원숭이 신장 세포(COS), 사람 간세포성 암종 세포, 세균성 세포, 예를 들면, 이. 콜라이(E. coli), 효모 세포, 예를 들면, 삭카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 등이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
CDR-이식된 접근법을 사용하여, 사람 적응화 항체를 만들 수도 있다. 이러한 사람 적응화 항체는 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 일반적으로, 사람 적응화 항체는 EPO 수용체와 결합하는 항체의 가변 중쇄 서열과 가변 경쇄 서열을 암호화하는 핵산 서열을 수득하고, 이러한 가변 중쇄 서열과 가변 경쇄 서열 중에서 상보성 결정 영역 또는 "CDR"을 동정한 다음, 이러한 CDR 핵산 서열을 사람 골격 핵산 서열 상으로 이식시킴으로써 생성시킨다[참조: 예를 들면, 미국 특허 제4,816,567호 및 제5,225,539호].
선별되는 사람 골격은 생체내 투여에 적합한 것인데, 이는 이것이 면역원성을 나타내지 않는다는 것을 의미한다. 예를 들어, 이러한 결정은 상기 항체의 생체내 활용과 관련한 선행 경험과 아미노산 유사성에 관한 연구에 의해 이루어질 수 있다.
핵산을 클로닝하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 이들 방법은 클로닝시키고자 하는 항체 서열을 적당한 프라이머를 사용하여 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)시키는 것을 포함한다. 항체 핵산 서열 및 구체적으로는 쥐과 가변 중쇄와 가변 경쇄 서열을 증폭시키는데 적합한 프라이머는 당해 분야에 공지되어 있다.
사람 적응화시키고자 하는, 상기와 같이 클로닝된 항체 서열의 CDR 및 FR가 일단 동정되면, 이러한 CDR를 암호화하는 아미노산 서열을 동정하고 상응하는 핵산 서열을 선별된 사람 FR 상으로 이식시킨다. 이는 공지된 프라이머 및 링커(이들의 선별은 당해 분야에 공지되어 있다)를 사용하여 수행할 수 있다.
CDR를 선별된 사람 FR 상으로 이식시킨 후, 이로써 생성된 "사람 적응화" 가변 중쇄 서열과 가변 경쇄 서열을 발현시켜, EPO 수용체와 결합하는 사람 적응화 Fv 또는 사람 적응화 항체를 생성시킨다. 전형적으로, 사람 적응화 가변 중쇄 서열과 가변 경쇄 서열을 사람 불변 도메인 서열과의 융합 단백질로서 발현시켜, EPO 수용체와 결합하는 본래의 항체가 수득되도록 한다. 그러나, 불변 서열을 함유하지 않는 사람 적응화 Fv 항체가 생성될 수 있다. 사람 불변 서열이 사람 적응화 가변 영역에 융합되는 것이 바람직하다.
본 발명의 항체에 의해 결합되고 바람직하게는 이러한 항체를 사용하여 활성화시킨 EPO 수용체는 바람직하게는 포유류 EPO 수용체, 가장 바람직하게는 사람 EPO 수용체이다. 본 발명은 또한, EPO 수용체의 동족체, 예를 들면, 미국 특허 제5,292,654호에 기재된 것의 사용을 고려한다. 사람 EPO 수용체는 공급원[R & D Systems (Minneapolis, Minnesota)]로부터 구입할 수 있다.
(1) EPO 수용체와 결합하여 이를 활성화시키고; (2) PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와 상호 작용하지 않으며; (3) EPO 수용체에 대한 내인성 사람 EPO의 결합 친화성의 100배 범위 내에서 결합 친화성을 나타내는 2개 항체의 예로는 Ab12 및 Ab198로 명명된 사람 항체가 있다. Ab12 및 Ab198은 본원에 기재된 XenoMouse® XenoMax 기술을 사용하여 개발한 사람 항체이다(실시예 1 참조).
또 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 및 폴리펩타이드 서열에 관한 것이다. 바람직하게는, 이러한 폴리뉴클레오타이드가 중쇄와 경쇄 각각의 가변 영역과 불변 영역 둘 다를 암호화하지만, 기타 조합물 역시 본 발명에 의해 포괄된다.
본 발명은 또한, 상기 언급된 폴리뉴클레오타이드 및 이들 폴리뉴클레오타이드에 상보적인 핵산 서열로부터 유래된 올리고뉴클레오타이드 단편을 포괄한다. 폴리뉴클레오타이드는 RNA 또는 DNA의 형태일 수 있다. DNA, cDNA, 게놈 DNA, 핵산 동족체 및 합성 DNA 형태의 폴리뉴클레오타이드가 본 발명의 범위 내에 속한다. DNA는 이본쇄 또는 일본쇄일 수 있으며, 일본쇄일 경우에는 이것이 암호화(센스) 쇄 또는 비-암호화(안티-센스) 쇄일 수 있다. 폴리펩타이드를 암호화하는 암호화 서열은 본원에 제공된 암호화 서열과 동일할 수 있거나 또는 상이한 암호화 서열일 수 있는데, 유전 암호 축중 또는 중복성으로 인해, 암호화 서열이 본원에 제공된 DNA와 동일한 폴리펩타이드를 암호화한다.
바람직하게는, 폴리뉴클레오타이드가 본 발명의 하나 이상의 중쇄 가변 영역과 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 암호화한다. 이러한 폴리뉴클레오타이드의 예가 서열 번호 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54 및 56에 제시되어 있고, 또한 이에는 이의 단편, 상보체 및 축퇴성 코돈 등가물이 포함된다. 예를 들어, 서열 번호 2는 Ab12의 중쇄(가변 영역)를 암호화하고, 서열 번호 4는 Ab12의 경쇄(가변 영역)를 암호화한다. 서열 번호 6은 Ab198의 중쇄(가변 영역)를 암호화하고, 서열 번호 8은 Ab198의 경쇄(가변 영역)를 암호화한다.
본 발명은 또한, 폴리뉴클레오타이드 결실, 치환 또는 부가와 같은 변형을 함유하는 변이체 폴리뉴클레오타이드, 및 이러한 변이체 폴리뉴클레오타이드 서열로부터 비롯된 모든 폴리뉴클레오타이드 변형을 포함한다. 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 본원에 제공된 암호화 서열의 천연 변이체인 암호화 서열을 가질 수도 있다.
폴리뉴클레오타이드와 본원에 제공된 서열 간에 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상의 동일률을 나타내는 경우에는, 이러한 폴리뉴클레오타이드가 상기 서열과 하이브리드화하는 것으로 간주될 것으로 고려된다.
본 발명은 추가로, 본 발명의 항체를 암호화하는 폴리펩타이드 뿐만 아니라 이러한 폴리펩타이드의 단편, 동족체 및 유도체에 관한 것이다. 본 발명의 폴리펩타이드는 재조합 폴리펩타이드, 천연상 정제된 폴리펩타이드 또는 합성 폴리펩타이드일 수 있다. 본 발명의 폴리펩타이드의 단편, 유도체 또는 동족체는 1개 이상의 아미노산 잔사가 보존되거나 보존되지 않은 아미노산 잔사(바람직하게는 보존된 아미노산 잔사)로 치환되고, 이와 같이 치환된 아미노산 잔사가 유전 암호에 의해 암호화되거나 암호화되지 않은 것일 수 있거나; 1개 이상의 아미노산 잔사가 치환체 그룹을 포함하는 것일 수 있거나; 폴리펩타이드를 또 다른 화합물, 예를 들면, 폴리펩타이드의 반감기를 증가시키기 위한 화합물(예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜)과 융합시킨 것일 수 있거나; 또는 부가의 아미노산 서열, 예를 들면, 리더 또는 분비 서열, 또는 폴리펩타이드 또는 프로-단백질 서열의 정제를 위해 이용되는 서열을 폴리펩타이드에 융합시킨 것일 수 있다. 이러한 단편, 유도체 및 동족체는 본 발명의 범위 내에 속한다.
본 발명의 폴리펩타이드는 본원에 기재된 항체의 아미노산 서열과 동일하거나 또는 1개 이상의 아미노산 치환으로 인한 사소한 변이로 인해 상이한 아미노산 사열을 가질 수 있다. 이러한 변이는 전형적으로 약 1 내지 5개의 아미노산 범위 내에서 이루어지는 "보존적 변화"일 수 있는데, 이와 같이 치환된 아미노산, 예를 들면, 루이신을 이소루이신으로 대체하거나 트레오닌을 세린으로 대체시킨 것은 유사한 구조적 또는 화학적 특성을 갖는다. 이와는 반대로, 비-보존적 변화, 예를 들면, 글리신을 트립토판으로 대체시킨 것이 포함될 수 있다. 유사한 사소한 변이에는 또한, 아미노산 결실 또는 삽입, 또는 이들 둘 다가 포함될 수 있다. 생물학적 또는 면역학적 활성은 변화시키지 않으면서 어느 아미노산 잔사를 어떤 방식으로 치환, 삽입 또는 결실시킬 수 있는 가를 결정하는데 있어서의 지침은 당해 분야에 널리 공지된 컴퓨터 프로그램, 예를 들면, DNASTAR 소프트웨어(DNASTAR, Inc. , Madison, Wisconsin)에 근거할 수 있다.
바람직하게는, 상기 폴리펩타이드가 본 발명의 항체의 하나 이상의 중쇄 가변 영역 또는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 암호화한다. 보다 바람직하게는, 상기 폴리펩타이드가 본 발명의 항체의 하나 이상의 중쇄 가변 영역과 1개의 경쇄 가변 영역을 암호화한다. 이러한 폴리펩타이드의 예는 서열 번호 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 46, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68에 제시된 아미노산 서열 및 이의 단편을 갖는 것이다. 구체적으로 언급하면, Ab12의 중쇄는 서열 번호 3에 제시된 아미노산 서열을 갖고 경쇄는 서열 번호 5에 제시된 아미노산 서열을 갖는다. Ab198의 중쇄는 서열 번호 7에 제시된 아미노산 서열을 갖고 경쇄는 서열 번호 9에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
본 발명은 또한, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터, 본 발명의 벡터를 이용하여 유전 공학적으로 처리시킨 숙주 세포, 및 본 발명의 항체를 재조합 기술에 의해 생성하는 방법을 제공한다.
숙주 세포를 벡터, 예를 들면, 클로닝 벡터 또는 발현 벡터로 유전 공학적으로 처리시킨다(형질감염, 형질도입 또는 형질전환시킴). 이러한 벡터는 플라스미드, 바이러스성 입자, 파아지 등의 형태일 수 있다. 이와 같이 유전 공학적으로 처리시킨 숙주 세포를, 프로모터를 활성화시키고 형질감염된 세포를 선별하는 등에 적당한 바대로 변형시킨 통상적인 영양 배지에서 배양할 수 있다. 배양 조건, 예를 들면, 온도, pH 등은 발현을 위해 선별된 숙주 세포를 이용하여 기존에 사용된 것이며, 이는 당업자에게 명백할 것이다.
본 발명의 폴리뉴클레오타이드를 이용하여 폴리펩타이드를 생성시킬 수 있고, 이로써 본 발명의 항체를 생성시킬 수 있다. 본 발명의 폴리뉴클레오타이드 서열은 각종 발현 비히클 중의 어느 하나, 특히 폴리펩타이드를 발현하기 위한 벡터 또는 플라스미드 내에 포함시킬 수 있다. 이러한 벡터에는 염색체성, 비-염색체성 및 합성 DNA 서열, SV40의 유도체, 세균성 플라스미드, 파아지 DNA, 효모 플라스미드, 플라스미드와 파아지 DNA의 조합으로부터 유래된 벡터, 바이러스성 DNA, 예를 들면, 백시니아, 아데노바이러스, 전염성 상피종(fowl fox) 바이러스 및 슈도레비스(pseudorabies)가 포함된다. 그러나, 기타 모든 플라스미드 또는 벡터도 이들이 숙주 내에서 복제 가능하고 생육 가능한 한은 사용될 수 있다.
적당한 DNA 서열을 각종 과정에 의해 벡터 내로 삽입시킬 수 있다. 일반적으로, DNA 서열은 당해 분야에 공지된 과정에 의해 적당한 제한 엔도뉴클레아제 부위 내로 삽입시킨다. 발현 벡터 중의 폴리뉴클레오타이드 서열은 적당한 발현 조절 서열(즉, 프로모터)과 작동적으로 연결되어 mRNA 합성을 지시한다. 이러한 프로모터의 예에는 LTR 또는 SV40 프로모터, 이. 콜라이 lac 또는 trp, 파아지 람다 PL 프로모터, 및 원핵성 또는 진핵성 세포 또는 이들의 바이러스 내에서 유전자의 발현을 조절하는 것으로 공지된 기타 프로모터가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 발현 벡터는 또한, 해독 개시를 위한 리보솜 결합 부위와 전사 종결인자를 함유한다. 상기 벡터는 또한, 발현을 증폭시키는데 적당한 서열을 포함할 수도 있다. 예를 들여, 벡터는 바이러스성 기원의 전사-자극성 DNA 서열, 예를 들면, 원숭이 바이러스(예: SV40), 폴리오마 바이러스, 소의 유두종 바이러스 또는 몰로니(Moloney) 육종 바이러스로부터 유래된 DNA 서열, 또는 게놈 기원의 전사-자극성 DNA 서열인 증강인자를 함유할 수 있다. 상기 벡터는 바람직하게는, 복제 기점을 함유하기도 한다. 이러한 벡터는 외인성 복제 기점을 함유하도록 작제되거나, 이러한 복제 기점이 SV40 또는 또 다른 바이러스성 공급원으로부터 유래될 수 있도록 작제될 수 있거나, 또는 숙주 세포 염색체성 복제 기전에 의해 작제될 수 있다.
또한, 상기 벡터는 바람직하게는, 형질감염된 숙주 세포를 선별하기 위한 마커 유전자, 예를 들면, 디하이드로폴레이트 리덕타제 또는 항생제, 예를 들면, G-418(네오마이신 유도체인 제네티신) 또는 히그로마이신; 또는 숙주 세포의 유전적 병변, 예를 들면, 티미딘 키나제, 하이포크산틴 포스포리보실 트랜스퍼라제, 디하이드로폴레이트 리덕타제 등의 부재를 보충해 주는 유전자를 함유한다.
본 발명에 사용하기 적합한 벡터는 당해 분야에 공지되어 있다. 숙주 내에서 복제 가능하고 생육 가능한 한은 어떠한 플라스미드 또는 벡터도 본 발명에 사용할 수 있다. 사용될 수 있는 벡터의 예에는 포유류 숙주에 적합한 것과, 바이러스성 복제 시스템에 근거한 것, 예를 들면, 원숭이 바이러스 40(SV40), 라우스 육종 바이러스(RSV), 아데노바이러스 2, 소의 유두종 바이러스(BPV), 파포바바이러스 BK 돌연변이체(BKV), 또는 마우스 및 사람 시토메갈로바이러스(CVM)에 근거한 벡터가 포함된다.
추가의 양태에서, 본 발명은 상기 언급된 작제물을 함유하는 숙주 세포에 관한 것이다. 이러한 숙주 세포는 고등 진핵성 세포, 예를 들면, 포유류 세포, 또는 하등 진핵성 세포, 예를 들면, 효모 세포일 수 있거나, 또는 숙주 세포는 원핵성 세포, 예를 들면, 세균성 세포일 수 있다. 바람직하게는, 숙주 세포가 활성 항체의 생성에 적합한 환경을 제공해 주는데, 이는 작용성 사량체성 항체 분자를 생합성하기 위해서는 정확한 발생기(nascent) 폴리펩타이드 쇄 폴딩, 당화 및 어셈블리가 요구되기 때문이다. 적합한 숙주 세포의 예에는 포유류 세포, 예를 들면, COS-7 세포, 보웨스(Bowes) 흑색종 세포, 중국산 햄스터 난소(CHO) 세포, 배아 폐 세포 L-132, 및 림프계 기원의 포유류 세포, 예를 들면, 골수종 또는 림프종 세포가 포함된다. 숙주 세포는 H-쇄 만을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 함유하는 벡터로 형질감염시키고, 경쇄 만을 암호화하는 제2 벡터로 형질감염시킬 수 있다(예를 들면, 앞서 논의된 바와 같은 2개의 상이한 벡터를 사용함으로써 수행함). 바람직하게는, 숙주 세포를 2개의 상이한 벡터로 형질감염시킨다.
벡터를 숙주 세포 내로 도입하는 것은 인산칼슘 형질감염, DEAE-덱스트란 매개된 형질감염 또는 전기천공에 의해 수행할 수 있다[참조: L. David et al., Basic Methods in Molecular Biology 2nd Edition, Appleton and Lang, Paramount Publishing, East Norwalk, Conn. (1994)].
본 발명의 항체를 수득하기 위해서는, 본 발명의 항체의 경쇄 및 중쇄 가변 영역과 경쇄 및 중쇄 불변 영역을 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드 서열을 벡터 내로 혼입시켜야 한다. 본 발명의 항체의 경쇄 및 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 1개 또는 여러 개의 벡터 내로 혼입시킨 다음, 숙주 세포 내로 혼입시킬 수 있다.
Ab12 및 Ab467 항체를 발현하는 세포주가 부다페스트 조약 하에 2003년 9월 30일자로 국제기탁기관[American Type Culture Collection (ATCC), 10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 20110]에 수탁 번호 PTA-5554 및 PTA-5555로 기탁되었다. 이들 기탁은 당업자의 편의를 위해 제공된 것이며, 이러한 기탁이 본 발명을 실시하는데 요구된다는 것을 승인한 것이 아닐 뿐만 아니라 등가의 양태가 본 명세서 측면에서 당업자의 이해 범위 내에 있지 않다는 것도 아니다. 이들 기탁물을 공개적으로 입수 가능하다고 해서 본 특허나 기타 모든 특허 하에 기탁된 물질을 제조, 사용 또는 판매할 수 있는 권리를 허용한 것은 아니다. 기탁된 물질의 핵산 서열은 본 명세서 내에 참조로써 혼입된 것이며, 본원에 기재된 어떠한 서열과도 분쟁이 생길 경우에 통제된다.
본 발명의 항체는 수 많은 용도를 지니고 있다. 일반적으로, 본 발명의 항체를 사용하여, 에리트로포이에틴 또는 이의 생물학적 활성 변이체 또는 동족체에 의해 치료 가능한 모든 질환을 치료할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 낮은 적혈구 수준 및/또는 헤모글로빈 수준 저하를 특징적으로 나타내는 장애(예: 빈혈)을 치료하는데 유용하다. 또한, 본 발명의 항체는 혈액 또는 조직 내의 산소 수준이 감소되거나 정상 수준 이하로 되는 것을 특징적으로 나타내는 장애, 예를 들면, 저산소혈증(hypoxemia) 또는 만성 조직 저산소증(hypoxia), 및/또는 부적당한 혈액 순환 또는 혈류량 감소를 특징으로 나타내는 질환을 치료하는데 사용될 수 있다. 본 발명의 항체는 또한, 상처 치유를 증진시키는데 유용할 수 있거나, 또는 뇌/척수 손상, 발작 등으로 인해 신경 세포 및/또는 조직이 손상되는 것으로부터 보호해 주는데 유용할 수 있다. 본 발명의 항체에 의해 치료될 수 있는 질환의 비-제한적 예에는 빈혈, 예를 들면, 화학요법-유도된 빈혈, 암 관련 빈혈, 만성 질환의 빈혈, HIV-관련 빈혈, 골수 이식 관련 빈혈 등, 심부전증, 허혈성 심장 질환 및 신부전증이 포함된다. 따라서, 본 발명은 치료학적 유효량의 상기 항체를 포유류에게 투여하는 단계를 포함하여, 전술된 질병 또는 질환을 치료하는 방법을 포함한다. 바람직하게는, 포유류가 사람이다.
본 발명의 항체를 또한 사용하여, 기능장애 EPO 수용체를 갖는 포유류를 동정 및 진단할 수 있다. 기능장애 EPO 수용체를 갖는 포유류는 빈혈과 같은 장애를 특징적으로 나타낸다. 바람직하게는, 동정 및 진단되는 포유류가 사람이다. 부가적으로, 본 발명의 항체는 적혈구 형성부전증으로 고통받는 포유류에서 빈혈을 치료하는데 사용될 수 있다. 적혈구 형성부전증은 재조합 에리트로포이에틴으로 치료하는 동안 환자에게서 항-에리트로포이에틴 중화 항체가 형성됨으로써 비롯된 것일 수 있다[참조: Casadevall, N. et al., n. Eng. J. Med. 346: 469 (2002)]. 당해 방법은 치료학적 유효량의 본 발명의 항체를, 상기 형성부전증으로 고생하여 이의 치료가 필요한 포유류에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 본 발명의 EPO 수용체 항체 및 항체 단편을 또한 사용하여, 통상적인 면역검정, 예를 들면, 효소 연결 면역흡착 검정(ELISA), 방사성 면역검정(RIA) 또는 조직 면역조직화학을 이용하여 EPO 수용체를 탐지할 수 있다(예를 들면, 생물학적 샘플, 예를 들면, 조직 표본, 본래의 세포 또는 이의 추출물 중에서 수행함). 본 발명은 생물학적 샘플을 본 발명의 항체 또는 항체 단편과 접촉시키는 단계; 및 어느 한 항체(또는 항체 부분)를 탐지함으로써, 생물학적 샘플 중의 EPO 수용체를 탐지하는 단계를 포함하여, 상기 생물학적 샘플 중에서 EPO 수용체를 탐지하는 방법을 제공한다. 본 발명의 항체 또는 항체 단편을 탐지 가능한 물질로 직접 또는 간접적으로 표지시켜, 결합되거나 결합되지 않은 항체 또는 항체 단편의 탐지를 촉진시킨다. 각종 면역검정 포맷(예를 들면, 경쟁적 검정, 직접 또는 간접 샌드위치 면역검정 등)을 실시할 수 있으며, 이는 당업자에게 널리 공지되어 있다.
적합한 탐지 가능한 물질에는 각종 효소, 보결 분자단(prosthetic group), 형광성 재료, 발광성 재료 및 방사성 재료가 포함된다. 적합한 효소의 예에는 서양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제, B-갈락토시다제 또는 아세틸콜린에스테라제가 포함되고; 적합한 보결 분자단 복합체의 예에는 스트렙타비딘/바이오틴 및 아비딘/바이오틴이 포함되며; 적합한 형광성 재료의 예에는 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민, 단실 클로라이드 또는 피코에리트린이 포함되고; 발광성 재료의 예에는 루미놀이 포함되며; 적합한 방사성 재료에는 125I, 131I, 35S 또는 3H가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 치료학적 유효량의 본 발명의 항체를 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 함께 함유하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 본원에 사용된 바와 같은 "약제학적으로 허용되는 담체" 또는 "약제학적으로 허용되는 부형제"에는 생리학적으로 적합한 모든 용매, 분산 매질, 피복제, 항균 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제 등이 포함된다. 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제의 예에는 물, 식염수, 인산염 완충 식염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등 중의 하나 이상 뿐만 아니라 이들의 조합물이 포함된다. 많은 경우에 있어서, 등장성 제제, 예를 들면, 당, 폴리알코올, 예를 들면, 만니톨, 솔비톨, 또는 염화나트륨을 당해 조성물 내에 포함시키는 것이 바람직할 것이다. 본 발명의 항체 또는 항체 부분의 반감기 또는 효능을 증강시키는 약제학적으로 허용되는 물질, 예를 들면, 습윤제, 또는 소량의 보조 물질, 예를 들면, 습윤제 또는 유화제, 방부제 또는 완충제가 포함될 수도 있다. 임의로, 붕해제, 예를 들면, 가교결합된 폴리비닐 피롤리돈, 한천, 알진산 또는 이의 염, 예를 들면, 나트륨 알지네이트 등이 포함될 수 있다. 상기 부형제 이외에도, 본 발명의 약제학적 조성물은 다음 성분들 중의 하나 이상을 포함할 수 있다: 캐리어 단백질, 예를 들면, 혈청 알부민, 완충제, 결합제, 감미제 및 기타 향미제; 착색제 및 폴리에틸렌 글리콜.
본 발명의 조성물은 각종 형태로 존재할 수 있다. 이들에는, 예를 들어, 액상, 반-고형 및 고형 투여 형태, 예를 들면, 액상 용제(예: 주사 및 주입용 용제), 분산제 또는 현탁제, 정제, 환제, 산제, 리포좀 및 좌제가 포함된다. 바람직한 형태는 의도하는 투여 방식과 치료학적 용도에 따라서 결정된다. 전형적인 바람직한 조성물은 주사 또는 주입용 용제, 예를 들면, 사람을 기타 항체로 수동 면역시키는데 사용된 것과 유사한 조성물 형태이다. 바람직한 투여 방식은 비경구(예: 정맥내, 피하, 복강내, 근육내)이다. 바람직한 양태에서는, 당해 항체를 정맥내 주입 또는 주사 투여한다. 또 다른 바람직한 양태에서는, 본 발명의 항체 또는 항체 단편을 근육내 또는 피하 주사함으로써 투여한다. 당해 약제학적 조성물에 대한 기타 적합한 투여 경로에는 직장, 경피, 질내, 경점막 또는 장내 투여가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
치료학적 조성물은 전형적으로, 제조 및 저장 조건 하에 멸균성이고 안정해야만 한다. 이러한 조성물은 용제, 미세-에멀션, 분산제, 리포좀, 또는 고농도 약물에 적합한 기타 질서 구조물로서 제형화할 수 있다. 멸균 주사용 용제는, 요구되는 양의 활성 화합물(즉, 항체 또는 항체 단편)을, 필요에 따라 상기 열거된 성분들 중의 하나 또는 이들 성분의 조합물과 함께 적당한 용매에 혼입시킨 다음, 여과 멸균시킴으로써 제조할 수 있다. 일반적으로, 분산제는 활성 화합물을, 기본 분산 매질과 상기 열거된 것들 중에서 필요한 기타 성분을 함유하는 멸균 비히클 내로 혼입시킴으로써 제조한다. 멸균 주사용 용제를 제조하기 위한 멸균 산제의 경우에 바람직한 제조 방법은 진공 건조 및 동결 건조 방법으로서, 이는 전술된 이의 멸균 여과된 용액으로부터 부가의 모든 목적 성분이 활성 성분과 함께 존재하는 분말을 생성시킨다. 용액의 적당한 유동성은, 예를 들어, 레시틴과 같은 피복제를 사용하고, 분산제의 경우에는 요구되는 입자 크기를 유지시키며, 계면활성제를 사용함으로써 유지시킬 수 있다. 주사용 조성물의 흡수 연장은 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들면, 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 조성물 내에 포함시킴으로써 유발시킬 수 있다.
본 발명의 항체 및 항체 단편은 당해 분야에 공지된 각종 방법에 의해 투여할 수 있지만, 많은 치료학적 적용에 대해 바람직한 투여 경로/방식은 비경구 주사 또는 주입이다. 당업자에 의해 인지되는 바와 같이, 투여 경로/방식은 목적하는 결과에 따라서 결정될 것 이다. 특정 양태에서는, 활성 화합물을, 이러한 화합물이 신속하게 방출되지 못하게 해주는 담체와 함께 제조할 수 있는데, 예를 들면, 조절 방출 제형으로 만들 수 있으며, 이에는 이식물(implants), 경피용 패치 및 미세피막 전달 시스템이 포함된다. 생분해 가능한 생체 적합성 중합체, 예를 들면, 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르 및 폴리락트산을 사용할 수 있다. 이러한 제형을 제조하는 많은 방법이 특허 출원되었거나 당업자에게 일반적으로 공지되어 있다[참조: Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978].
특정 양태에서는, 본 발명의 항체 또는 항체 부분을, 예를 들어, 불활성 희석제 또는 동화 가능한 식용 담체와 함께 경구 투여할 수 있다. 상기 화합물(및 경우에 따라 기타 성분)을 경질 또는 연질 껍질의 젤라틴 캡슐 내에 봉입시키거나, 정제, 볼내 정제, 트로키제, 캅셀제, 엘릭서제, 현탁제, 시럽, 와이퍼 등으로 압축시킬 수도 있다. 본 발명의 항체 또는 항체 단편을 비경구 투여 이외의 방식으로 투여하기 위해서는, 해당 화합물을 이의 불활성화 방지 물질로 피복시키거나, 해당 화합물을 이러한 방지 물질과 함께 투여하는 것이 필요할 수 있다.
보충 활성 성분을 당해 조성물 내에 혼입시킬 수도 있다. 특정 양태에서는, 본 발명의 항체 또는 항체 단편을 한 가지 이상의 부가 치료제와 동시 제형화하고/하거나 동시 투여한다. 예를 들어, 본 발명의 EPO 수용체 항체 또는 항체 단편을, 기타 표적과 결합하는 한 가지 이상의 부가 항체(예: 기타 사이토킨과 결합하는 항체 또는 세포 표면 분자와 결합하는 항체) 또는 한 가지 이상의 사이토킨과 동시 제형화하고/하거나 동시 투여할 수 있다. 더우기, 본 발명의 하나 이상의 항체를 전술된 치료제 2가지 이상과 조합하여 사용할 수도 있다. 이러한 조합 치료법은 투여된 치료제의 용량을 낮추는데 유용하게 활용될 수 있으므로, 각종 단일-요법과 연관된 가능한 독성이나 합병증을 피하는데 유리할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "치료학적 유효량"은 항체 또는 항체 단편을 투여한 경우에 얻을 수 있는 효과를 가져다 주는 양을 의미한다. 정확한 용량은 당업자에 의해 확인 가능할 것이다. 당해 분야에 공지된 바와 같이, 연령, 체중, 성별, 식이, 투여 시간, 약물 상호 작용 및 질환의 중증도에 근거하여 조정하는 것이 필요할 수 있고 이는 당업자에 의해 통상적인 실험으로도 확인할 수 있을 것이다. 치료학적 유효량은 치료학적으로 유익한 효과가 당해 항체 또는 항체 단편의 어떠한 독성 효과 또는 유해한 효과도 능가하는 양이다. "예방적 유효량"은 목적하는 예방적 결과를 달성하는데 필요한 시간 동안 및 투여량에서 유효한 양을 지칭한다. 전형적으로, 예방적 용량은 질병이 발병하기에 앞서 또는 질병의 초기 단계에 대상체에게 사용하기 때문에, 예방적 유효량은 치료학적 유효량 보다 적을 것이다.
투여량 섭생은 목적하는 최적의 반응(예: 치료학적 또는 예방적 반응)을 제공하도록 조정할 수 있다. 예를 들어, 단일 일시주사(bolus)를 투여할 수 있거나, 수 회분으로 나누어 일정 시간에 걸쳐 투여할 수 있거나, 또는 치료학적 상황의 위급성에 따라 용량을 점차적으로 감소 또는 증가시킬 수 있다. 투여의 용이성과 투여량의 균일성을 위해서는 비경구 조성물을 투여 단위 형태로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에 사용된 바와 같은 투여 단위 형태는 시험하고자 하는 포유류 대상체에 대한 단일 투여형으로서 적합한 물리적으로 별개의 단위를 지칭하는데, 각 단위는 요구되는 약제학적 담체와 연합하여 목적하는 치료 효과를 가져다 주는 것으로 계산된 예정 량의 활성 화합물을 함유한다. 본 발명의 투여 단위 형태에 대한 명세는 (a) 활성 화합물의 독특한 특징과, 달성하고자 하는 특정한 치료학적 또는 예방적 효과; 및 (b) 개개인에 있어 민감한 치료를 위해 상기 활성 화합물을 화합하는 분야에 있어 본래 규정된 제한 사항들에 따라서 직접적으로 영향을 받는다.
본 발명의 항체 또는 항체 부분의 치료학적 또는 예방적 유효량에 대한 비-제한적 예시 범위는 0.1 내지 20mg/kg, 보다 바람직하게는 1 내지 10mg/kg이다. 투여량 수치는 경감시키고자 하는 질환의 유형과 중증도에 따라 다양할 수 있다는 것을 인지해야 한다. 특정의 모든 대상체에 대해 구체적인 투여량 섭생은, 개개인의 필요성과 해당 조성물을 투여하는 사람 또는 이러한 투여를 감독하는 사람의 전문가적 판단에 따라서 일정 시간에 걸쳐 조정해야만 한다는 사실과, 본원에 제시된 투여량 범위는 단지 예시적이며 이로써 본원에 청구된 조성물의 범위 또는 실시가 제한되지 않는다는 사실을 추가로 인지해야 한다.
제한되지 않는 예로써, 본 발명의 실시예가 다음에 제시될 것이다.
실시예 1: 사람 에리트로포이에틴 수용체 항체의 생성
항원 제조: XenoMouse® 동물을 면역시키는데 사용된 항원을, 2가지 상이한 방법을 사용하여 만능 T-세포 에피토프(TCE)[참조: J. Immunol., 148(5):1499 (1992)]에 커플링시킨다. 이들 각각을 등량으로 함유하는 혼합물을 면역원으로서 사용하였다.
1) 2.3mg의 디티오트레이톨(DTT)과 200mcg의 시스테인 커플링된 TCE[참조: J. Immunol., 148(5):1499 (1992)]를 실온에서 30분 동안 혼합한다. 세파덱스(Sephadex) G10(Pharmacia, Upsala, Sweden) 크로마토그래피 칼럼을 통하여 원심분리시킴으로써 DTT를 제거한다. 이와 같이 하여 환원된 시스테인 커플링된 TCE를 인산염 완충 식염수(PBS)(8.1 mM Na2HP04, 1.6 mM NaH2PO4, 136 mM NaCl, 2.6 mM KCl, pH 7.4)에 재현탁시킨 사람 EpoR(R&D Systems, Minneapolis, MN)의 200mcg 가용성 세포외 도메인, 및 33mcg의 설포석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)-사이클로헥산-1-카복실레이트(설포 SMCC)에 가하고, 4℃에서 밤새 혼합한다. 반응되지 않은 EpoR은 IOKDa 컷 오프 센트리콘(Centricon) 칼럼(Millipore, Bedford, MA)을 통하여 원심분리시킴으로써 제거하였다.
2) 상기 사람 EpoR(R&D Systems, Minneapolis, MN)의 가용성 세포외 도메인(200mcg)를 PBS에 재현탁시키고, 이를 4mcg의 TCE-BPA(p-벤조일 페닐알라닌)과 혼합한 다음, 실온하 UV 광(362 nM) 하에 45분 동안 항온 배양하였다. 반응되지 않은 EpoR은 IOKDa 컷 오프 센트리콘 칼럼(Millipore, Bedford, MA)을 통하여 원심분리시킴으로써 제거하였다.
동물을 면역시킴: Abl2 및 Abl98을 포함한 본 발명의 모노클로널 항체(본원에서 AB-ABT2-XG2-012 및 AB-ABT2-XG2-198로서 각각 지칭되기도 함)는, XenoMouse® 마우스(XenoMouse® XG2, Abgenix, Inc., Fremont, CA and Vancouver, BC)를 상기 언급된 바와 같이 TCE와 커플링시킨 가용성 EpoR로 면역시킴으로써 개발하였다. 초기 면역은 20mcg의 항원으로 수행하고, 완전 프로인트 아쥬반트(CFA)(Sigma, St Louis, MO)와 마우스당 1:1 v/v로 혼합하였다. 후속 면역은 불완전 프로인트 아쥬반트(IFA)와 1:1 v/v 혼합된 항원 20mcg로 수행하였다. 특히, 각 동물을 꼬리 밑부분에서 0일, 14일, 28일 및 42일 째에 복강내 주사함으로써 면역시켰다.
EpoR의 바이오티닐화: 300mcg의 EpoR(참조번호 RB69084:4로부터 유래된 Abbott CHO 세포)를 990mcL의 PBS pH 8.6에 재현탁시키고, 이를 실온에서 50분 동안 항온 배양된 DMSO(디메틸 설폭사이드) 중에 용해시킨 100mcg의 바이오틴-NHS (Pierce, Rockford, 111)에 가한다. 자유 바이오틴과 완충제를, PBS pH 7.4로 수회 세척하면서 50kDa 센트리콘 칼럼을 통하여 원심분리시킴으로써 제거하고, 이를 적당한 용적에 재현탁시켜 최종 농도가 600 mcg/ml이 되도록 하였다.
수거하기 위한 동물 선별: 항-EpoR 항체 역가치를 ELISA에 의해 결정하였다. 0.7mcg/ml 바이오틴 EpoR(상기 언급됨)를 실온에서 1시간 동안 스트렙타비딘 판(Sigma, St Louis, MO) 상으로 피복시킨다. 결합되지 않은 바이오틴 EpoR을 함유하는 용액을 제거하고, 모든 판을 dH2O로 5회 세척하였다. EpoR 면역시킨 동물로부터의 XenoMouse® 혈청, 또는 실험받은 적 없는 XenoMouse® 동물을, 1:100 초기 희석으로부터 1:2 희석 하에 2회 2% 우유/PBS로 연마하였다. 마지막 웰은 비어있는 상태로 두고, 판을 dH2O로 5회 세척하였다. 염소 항-사람 IgG Fc-특이적 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRP)(Pierce, Rockford, IL) 접합된 항체를 실온에서 1시간 동안 1mcg/ml의 최종 농도로 가한다. 판을 dH2O로 5회 세척하였다. TMB 발색(chromogenic) 기질(KPL, Gaithersburg, MD)을 부가하면서 30분 동안 현상하고, 1M 인산을 부가함으로써 ELISA를 중지시켰다. XenoMouse® 동물로부터 수득된 고유 역가치는 450nm의 광밀도로부터 결정하였고, 이것이 표 1에 제시되어 있다. 역가는 혈청의 역희석을 나타내므로, 숫자가 보다 높을 수록 EpoR에 대한 체액성 면역 반응은 더 커진다.
마우스 I.D. 역가
11 1600
12 12800
13 51200
14 102400
15 102400
16 0
17 102400
18 3200
19 102400
20 2560
표 1의 혈청학적 데이터를 근거로 하여 XenoMouse® 동물 14마리를 수거용으로 선별하였다.
B 세포의 배양 및 선별: 상기와 같이 수거된 동물로부터의 B 세포를 배양하고, 본질적으로 문헌[참조: Babcook et. al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93:7843-7848 (1996)]에 기재된 바와 같이, EpoR-특이적 항체를 분비하는 세포를 분리하였다. 혈청 역가에 대해 상기 언급된 바와 같이 수행된 ELISA를 사용하여 EpoR-특이적 웰을 동정하였다. 500개 세포/웰로 배양된 50개 판을 바이오틴 EpoR 상에서 스크리닝하여 항원-특이적 웰을 동정하였다. 표 2에 제시된 데이터는 ODs가 배경(0.05)에 비해 상당히 더 큰 701개 웰이 존재한다는 것을 입증해준다.
광학 밀도 양성 수
0.1 701
0.2 273
0.3 163
0.4 130
0.5 102
0.6 91
0.7 76
0.8 70
0.9 67
1.0 65
2.0 25
3.0 7
이들 데이터는 극히 낮은 빈도의 적중률을 지시해주며, 상기 웰이 항원 특이성에 대해 모노클로널이라는 것을 지시해준다. 이들 701개 양성 웰을 바이오틴 EpoR 상에서 재스크리닝한 결과, 137개 웰(다음 표 3에 굵게 표시됨)이, ODs가 배경(0.05)에 비해 상당히 더 큰 실제 항원-특이적 웰로서 반복된다는 사실을 밝혀내었다.
광학 밀도 양성 수
0.1 207
0.15 137
0.2 110
0.3 94
0.4 85
0.5 79
0.6 71
0.7 63
0.8 57
0.9 53
1.0 50
2.0 32
3.0 13
효능제 활성 검정: Epo 반응성 세포주의 증식을 효능제 스크린에 대한 기준으로서 사용하였다. 이어서, 이들 137개 웰을 대상으로 하여, 사람 적혈구백혈병 세포주 UT-7/Epo(Abbott ref#.RB29454-174)를 사용하여 효능제 활성을 알아보기 위해 스크리닝하였다. 12.5mcL의 상등액을 RPMI 1640(10% FCS) 중에서 웰당 1 x 105개 세포에 가하여 절반-면적 96 웰 판에서 최종 농도가 50mcL이 되도록 하였다. 웰 크기는 전형적인 96 웰 판 면적의 절반이다. 증식을 가시적으로 확인하고, 기준선 대조군으로서 EPO를 전혀 함유하지 않거나 사람 Epo의 역가측정치를 함유하는 배지 중의 세포와 비교하였다. 증식 활성을 나타내는 11개 웰을 동정하였다.
EpoR-특이적 용혈 플라크 검정: 본 검정을 수행하기 위해서는 수 많은 특수 시약이 필요하다. 이들 시약은 다음과 같이 제조하였다.
양(sheep) 적혈구(SRBC)의 바이오티닐화: SRBC를 RPMI 배지에서 25% 스톡으로서 저장한다. 1.0ml의 스톡을 15-ml 팔콘 튜브 내로 등분하고, 세포 아래로 방사시킨 다음, 상등액을 제거함으로써, 250㎕ SRBC 패킹된-세포 펠릿을 수득하였다. 이어서, 상기 세포 펠릿을 50ml 튜브 중에서 pH 8.6의 4.75ml PBS에 재현탁시킨다. 별도의 50ml 튜브에서는, 2.5mg의 설포-NHS 바이오틴을 pH 8.6의 45ml PBS에 가한다. 바이오틴이 완전하게 용해되면, 5ml의 SRBC를 가하고, 튜브를 실온에서 1시간 동안 회전시킨다. SRBC를 5분 동안 3000g로 원심분리시키고, 상등액을 제거한 다음, 세척액으로서 pH 7.4의 25ml PBS를 사용한다. 세척 주기를 3회 반복한 다음, 4.75ml 면역 세포 배지(10% FCS가 부가된 RPMI 1640)를 250㎕ 바이오티닐화-SRBC(B-SRBC) 펠릿에 가하여 B-SRBC(5% B-SRBC 스톡)을 온화하게 재현탁시킨다. 스톡을 필요할 때까지 4℃ 하에 저장하였다.
B-SRBC의 스트렙타비딘(SA) 피복: 1ml의 5% B-SRBC 스톡을 신선한 에펜도르프(eppendorf) 튜브에 옮긴다. B-SRBC 세포를 미세원심분리기에서 8000rpm(6800rcf)로 펄스 방사하면서 펠릿화하고, 상등액을 제거한 다음, 펠릿을 pH 7.4의 1.0ml PBS에 재현탁시키며 원심분리를 반복하였다. 세척 주기를 2회 반복한 다음, B-SRBC 펠릿을 pH 7.4의 1.0ml PBS에 재현탁시켜 5%(v/v)의 최종 농도를 수득한다. 10㎕의 10mg/ml 스트렙타비딘(CalBiochem, San Diego, CA) 스톡 용액을 가하고, 튜브를 혼합한 다음, 실온에서 20분 동안 회전시켰다. 세척 단계를 반복하고, SA-SRBC를 pH 7.4의 1ml PBS에 재현탁시켰다(5%(v/v)).
SA-SRBC의 EpoR 피복: SA-SRBC를 10㎍/ml의 바이오티닐화 EpoR로 피복시키고, 혼합한 다음, 실온에서 20분 동안 회전시킨다. SRBC를 상기와 같이 pH 7.4의 1.0ml PBS로 2회 세척한다. EpoR-피복된 SRBC를 RMMI(+10% FCS)에 재현탁시켜 5%(v/v)의 최종 농도가 되도록 한다.
면역형광(IF)에 의한 EpoR-SRBC의 양질 결정: 10㎕의 5% SA-SRBC 및 10㎕의 5% PTH-피복된 SRBC를 각각, 40㎕의 PBS를 함유하는 1.5ml 에펜도르프 튜브에 가한다. 쥐과 항-EpoR 항체(R&D Systems Cat. # MAB307)를 20㎍/ml로 SRBCs의 각 샘플에 가한다. 이 튜브를 실온에서 25분 동안 회전시킨 다음, 세포를 100㎕의 PBS로 3회 세척한다. 세포를 50㎕의 PBS에 재현탁시키고, Alexa488(Molecular Probes, Eugene, OR)에 접합시킨 40mcg/mL Gt-항 마우스 IgG Fc 항체와 함께 항온 배양하였다. 튜브를 실온에서 25분 동안 회전시킨 다음, 100㎕의 PBS로 세척하고, 세포를 10㎕의 PBS에 재현탁시킨다. 얼룩진 세포 10㎕를 청정한 유리 현미경 슬라이드 상에 스폿팅하고, 유리 커버슬립으로 덮은 다음, 형광 하에 관찰하고, 이를 0 내지 4의 임의 비율로 점수를 매겼다.
혈장 세포의 제조: 관심있는 면역글로불린을 분비하는 B 세포 클론을 함유하는 것으로 앞서 검정에 의해 동정된 단일 미세배양 웰의 내용물을 수거하였다. 100 내지 1000㎕ 피펫만을 사용하여, 37C RPMI(+10% FCS)를 부가함으로써 상기 웰의 내용물을 회수하였다. 세포를 피펫팅함으로써 재현탁시킨 다음, 신선한 1.5ml 에펜도르프 튜브에 옮겼다(최종 용적 대략 500 내지 700㎕). 이러한 세포를 실온에서 2분 동안 1500rpm(240 rcf) 하에 미세원심분리기 내에서 원심분리시킨 다음, 튜브를 180도 회전시키고 1500rpm 하에 2분 동안 다시 방사하였다. 동결 배지를 제거하고 면역 세포를 100㎕ RPMI(10% FCS)에 재현탁시킨 다음, 원심분리시킨다. 이러한 RPMI(10% FCS)로의 세척을 반복하고, 세포를 60㎕ RPMI(FCS)에 재현탁시킨 다음, 사용할 때까지 얼음 상에서 저장하였다.
플라크 검정: 유리 슬라이드(2 x 3인치)를 실리콘 테두리 보다 미리 준비하고, 이를 실온에서 밤새 경화시켰다. 사용하기 전에, 유리 표면 전반에 걸쳐 균일하게 와이핑시킨 대략 5㎕의 SigmaCoat(Sigma, Oakville, ON)로 상기 슬라이드를 처리하고, 이를 건조시킨 다음, 격렬하게 와이핑시킨다. 60㎕ 세포 샘플에, 각 60㎕의 EpoR-피복된 SRBC(5% v/v 스톡), 10% FCS이 보충된 RPMI에서 준비한 4x 기니아 피그 보체(Sigma, Oakville, ON) 스톡, 및 4x 증강성 혈청 스톡(10% FCS이 보충된 RPMI 중에서 1: 900)을 가한다. 혼합물(3 내지 5㎕)을 상기와 같이 준비한 슬라이드 상으로 스폿팅하고, 스폿을 희석되지 않은 파라틴 오일로 덮는다. 상기 슬라이드를 37℃에서 최소 45분 동안 항온 배양하였다.
플라크 검정 결과: 2차 탐지용 시약 단독과 비교하여(0/4) 피복을 탐지하기 위해 MAB307을 사용하여 면역흡착 현미경에 의해 정성적으로 측정한 결과 극히 높은(4/4) 것으로 결정되었다. 스트렙타비딘으로만 피복된(0/4) 적혈구 상에서 MAB307 항체를 사용하여 탐지된 시그널은 전혀 없었다. 이어서, 이들 적혈구는 사용하여, 표 4에서 확인된 14개 웰로부터 항원-특이적 혈장 세포를 동정하였다. 항원-특이적 혈장 세포를 구제(rescue)하기 위한 미세조작 후, 가변 영역 유전자를 암호화하는 유전자를 단일 혈장 세포 상에서 RT-PCR함으로써 구제하였다.
플레이트 ID 단일 세포 수
11G10 ABT2-SCX-251-260
21D1 ABT2-SCX-54
25C3 ABT2-SCX-134-144
29G8 ABT2-SCX-1-11
33G8 ABT2-SCX-12-18
37A11 ABT2-SCX-19-44
43H12 ABT2-SCX-185-201, 233-239
16F7 ABT2-SCX-267-278
24C3 ABT2-SCX-55-77
24F8 ABT2-SCX-82-102
34D4 ABT2-SCX-145-168
발현: 단일 혈장 세포를 분리시킨 후, mRNA를 추출하고 역전사효소 PCR을 수행하여 cDNA를 생성시킨다. 가변 중쇄와 경쇄를 암호화하는 cDNA를, 폴리머라제 연쇄 반응을 이용하여 특이적으로 증폭시킨다. 가변 중쇄 영역을 IgG2 발현 벡터 내로 클로닝시킨다. 이 벡터는 사람 IgG2의 불변 도메인을 pcDNA3.1+/Hygro(Invitrogen, Burlington, ON)의 다중 클로닝 부위 내로 클로닝시킴으로써 생성시켰다. 가변 경쇄 영역은 IgK 발현 벡터 내로 클로닝시킨다. 이 벡터는 사람 IgK의 불변 도메인을 pcDNA3.1+/Neo(Invitrogen, Burlington, ON)의 다중 클로닝 부위 내로 클로닝시킴으로써 생성시켰다. 이어서, 적당한 경쇄 발현 벡터와 중쇄 발현 벡터 쌍을 70% 밀집성 사람 배아 신장 293 세포의 60mm 디쉬 내로 동시에 리포렉션시키고, 이와 같이 형질감염시킨 세포가 24시간 동안 재조합 항체를 분비하도록 놔두었다. HEK 293 세포로부터 상등액(3ml)을 수거하고, 사람 IgG를 특이적으로 탐지해 주는 샌드위치 ELISA를 이용하여, 본래 항체(AB-ABT2- XG2-012 및 AB-ABT2-XG2-198)이 분비되었다는 것을 입증하였다(표 5, 4번째 칼럼). ELISA를 사용하여 바이오티닐화 EpoR에 대한 재조합 항체의 결합을 통하여, AB-ABT2-XG2-012 및 AB-ABT2-XG2-198의 특이성을 평가하였다(표 5, 5번째 칼럼)
웰 ID 단일 세포 수 분비 결합
11G10 ABT2-SCX-254 1:4 1:8
21D1 ABT2-SCX-054 >1:64 >1:64
25C3 ABT2-SCX-135 1:4 1:4
29G8 ABT2-SCX-003 >1:64 >1:64
33G8 ABT2-SCX-012 >1:64 >1:64
37A11 ABT2-SCX-022 >1:64 >1:64
43H12 ABT2-SCX-198 >1:64 >1:64
16F7 ABT2-SCX-267 >1:64 >1:64
24C3 ABT2-SCX-060 >1:64 >1:64
24F8 ABT2-SCX-102 >1:64 >1:64
34D4 ABT2-SCX-145 >1:64 >1:64
항원 특이성 항체 분비에 대한 ELISA는 다음과 같이 수행하였다. 대조용 판을 2mg/mL 염소 항-사람 IgG H+L O/N으로 피복시켰다. 결합성 판에 대해서는, 바이오틴-EpoR(0.7 mcg/mL)을 실온에서 1시간 동안 스트렙타비딘 96 웰 판(Sigma, St Louis, MO) 상으로 피복시킨다. 이 판을 dH20로 5회 세척한다. 재조합 항체를 희석되지 않은 미니리포펙션(minilipofection) 상등액으로부터 7 웰에 대해 1:2로 적정시킨다. 상기 판을 dH20로 5회 세척한다. 상기 분비와 결합성 ELISA를 알아보 기 위해, 염소 항-사람 IgG Fc-특이적 HRP-접합된 항체를 실온에서 1시간 동안 1㎍/ml의 최종 농도로 가한다. 상기 판을 dH20로 5회 세척한다. TMB 발색 기질(KPL, Gaithersburg, MD)을 부가하면서 상기 판을 30분 동안 현상하고, 1M 인산을 부가함으로써 ELISA를 중지시켰다. 각 ELISA 판을 분석하여 450nm에서의 각 웰의 광밀도를 결정하였다.
AB-ABT2-XG2-012 및 AB-ABT2-XG2-198의 정제: 대규모 생산을 위해, 중쇄 및 경쇄 발현 벡터(디쉬당 각 쇄 2.5㎍)을 HEK 293 세포와 70% 밀집성인 10개의 100mm 디쉬 내로 리포펙션하였다. 이와 같이 형질감염시킨 세포를 37℃에서 4일 동안 항온 배양하고, 상등액(6ml)을 수거한 다음, 이를 6ml의 신선한 배지로 대체시켰다. 7일째에, 상등액을 제거하고 초기 수확물로 모은다(10개 판으로부터 총 120ml). ABT2-XG2-012 및 ABT2-XG2-198 항체를, 단백질-A 세파로스(Amersham Biosciences, Piscataway, NJ) 친화 크로마토그래피(1mL)를 사용하여 상기 상등액으로부터 정제하였다. 이 항체를 500mcL의 0.1M 글리신 pH 2.5를 이용하여 단백질-A 칼럼으로부터 용출시켰다. 용출액을 PBS pH 7.4에 투석시킨 다음, 여과 멸균시켰다. 항체를 비-환원성 SDS-PAGE함으로써 분석하여 순도와 수율을 평가하였다.
재조합 항체의 효능제 활성: Epo 반응성 세포의 증식을 자극하는 이들 재조합 항체의 능력은, 상기 효능제 활성 검정에 기재된 바와 같이 490nm에서 측정된 MTS 시약(Promega, Madison, WI)에 의해 정량화된 증식을 수반하는 UT-7/Epo 세포를 사용하여 검사하였다. ABT2-SCX-012 및 ABT2-SCX-198은 항체를 함유하지 않는 배지 내의 세포와 비교해서 증식을 유도시켰으며, 이것이 다음에 제시되어 있다(각각 도 14 및 15).
항-사람 Fc의 효과: ABT2-SCX-012 및 ABT2-SCX-198의 효능제 활성은 자가-응집에 기인한 것일 수 있다. 이러한 주제에 역점을 두기 위해, 본 발명자들은 항-사람 Fc 2차 항체를 부가함으로써 응집을 유도시켰으며, UT-7/Epo 세포를 사용하여 ABT2-SCX-012 및 ABT2-SCX-198의 효능제 활성에 대한 효과를 결정하였다. 다음에 제시된 바와 같이, 2차 항체를 부가하는 것이 ABT2-SCX-198의 활성에는 전혀 영향을 미치지 않았으며(도 16) ABT2-SCX-012의 활성은 억제시켰다(도 4 17).
2차 Ab를 부가하는 것이 ABT2-SCX-012의 활성을 억제시켰기 때문에, 본 발명자들은 상기 항체의 응집이 자신의 활성을 방해하므로, ABT2-SCX-012가 응집에 기인하여 효능제 활성을 지닌다고는 여겨지지 않는다고 결론지었다. 그러나, ABT2-SCX-198의 결과는 해석하기가 보다 더 어렵다. 효과가 없다는 것은, ABT2-SCX-198이 완전히 응집되므로, 2차 Ab를 부가하는 것이 이의 활성에 대한 추가의 영향을 미치지 않았다는 것을 제시해줄 수 있다. 또 다른 한편, 효과가 없다는 것은 ABT2-SCX-198의 활성이 2차 항체에 의해 적용된 입체 형태적 제한에 의해 교란되지 않는 다는 것을 제시해준다.
ABT2-SCX-012 및 ABT2-SCX-198의 서열 분석: 항체 ABT2-SCX-012 및 ABT2-SCX-198에 대한 가변 중쇄 및 가변 경쇄를 서열 분석하여 이들의 DNA 서열을 결정하였다. 항-EpoR 항체에 대한 완전한 서열 정보가 도 1, 2, 및 18 내지 30에 제시되어 있는데, 이들은 중쇄 감마 및 카파 경쇄의 각 가변 영역에 대한 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 수반한다. 도 1 및 2는 불변 영역을 포함한 완전한 길이의 서열을 제공한다.
가변 중쇄 서열을 분석하여 VH 계열, D-영역 서열 및 J-서열 영역을 결정하였다. 이어서, 이들 서열을 해독하여 1차 아미노산 서열(도 29)을 결정하고, 이를 생식선 VH, D 및 J-영역 서열과 비교하여 체세포 초변이(somatic hypermutation)를 평가하였다. 모든 항-EpoR 항체 감마 쇄의 1차 아미노산 서열이 도 16에 제시되어 있다. 생식선 서열은 상기 표시되어 있고, 돌연변이는 신규한 아미노산 서열로 표시된다. 변형되지 않은 아미노산은 대쉬(-)로 표시된다. 경쇄를 유사하게 분석하여 V 및 J-영역을 결정하고 생식선 카파 서열로부터 모든 체세포 돌연변이를 동정하였다(도 30). ABT2-SCX-012의 중쇄는 VH 4-59(DP-71), DIR4rc 및 JH4a 유전자 절편을 활용하는 것으로 밝혀진 반면, 경쇄는 VkI(A30) 및 Jkl 유전자 절편을 이용하는 것으로 밝혀졌다. ABT2-SCX-198의 중쇄는 VH 3-30(V3-30), D4-23 및 JH6b 유전자 절편을 활용하는 것으로 밝혀진 반면, 경쇄는 VKI(L5) 및 Jk3 유전자 절편을 이용하는 것으로 밝혀졌다.
실시예 2: 재조합 EPO 수용체를 발현하는 CHO 세포와 결합하기 위한 Ab12와 125 I-표지된 EPO와의 경쟁
완전한 길이의 재조합 사람 EPO 수용체를 발현하는 CHO 세포를, 검정에 앞서 72시간 동안 24 웰 판에 5 x 105개 세포/웰로 도말하였다. 검정일에, RPMI 1640, 0.5% BSA, 1mM NaN3 및 5㎕(6ng)의 125I-EPO(Amersham Cat. #IM178, Arlington Heights, IL 486ci/mM) 중에 희석시킨 지시된 농도(도 5에 제시되어 있음)의 Ab12, Ab198, 또는 EPO 95㎕를 상기 웰에 가하였다. 37℃에서 1.5시간 동안 항온 배양한 후, 상기 웰을 찬 HBSS로 3회 세척하고, 0.5ml 0.1N NaOH를 사용하여 수거하였다. 샘플을 마이크로메딕(Micromedic) ME 플러스 감마 계수기에서 계수하였다. 그 결과가 도 5에 제시되어 있다. 구체적으로 언급하면, 상기 결과는 Abs 12 및 198이 에리트로포이에틴 수용체와 결합하기 위해 EPO와 경쟁하였다는 것을 보여준다.
실시예 3: 비아코어(Biacore) 연구
다음에 기재된 연구를 Biacontrol 소프트웨어 버젼 3.1.(Biacore, Uppsala, Sweden)을 활용하는 비아코어 2000 상에서 수행하였다. 항체를 칩 표면에 직접적으로 고정화시킨 다음, 다양한 농도의 수용체를 주사함으로써 결합성 분석을 수행하였다.
항체의 고정화
항체의 고정화는 비아코어 소프트웨어 패키지 내의 디폴트(default) 고정화 프로그램을 사용하여 수행하였다. 항체를 공급된 아세테이트 완중제 중에서 10㎍/ml으로 희석시켜, 고정화를 수행하기에 적당한 pH에 대해 예비-스크리닝하였다. 고정화시키기 위해, 항체를 적당한 아세테이트 완충제(10mM 아세테이트 pH 4.0) 내로 희석시키고, 3가지 상이한 단백질 수준(500, 1000 및 1500RU)에서 표준 EDC 화학을 이용하여 칩 표면에 직접적으로 커플링시켰다. 4번째로 유동하는 세포를 EDC와 모의 커플링시켜, 카복실 그룹을 캡핑하고 배경 표면을 음성 대조군으로서 제공하였다.
결합성 연구
각종 농도의 가용성 사람 EPO 수용체를 상기 칩 표면 전반에 걸쳐 연속해서 주사함으로써 결합성 연구를 수행하였다(500RU 고정화된 단백질), 결합성 분석은, 유동성 완충제(HBS-EP)를 이용하여 목적하는 농도(10 내지 200nM)으로 희석시킨 수용체를 사용하여, 공급된 HBS-EP 완충제[HBS 완충제-10mM HEPES pH = 7.4, 150mM NaCl, 3mM EDTA, 0.005% 폴리솔베이트 20(v/v), Biacore] 에서 수행하였다. 실험을 30㎕/min의 유속으로 수행하였다. 상기 수용체를 3분에 걸쳐 주사한 다음, 15분 해리 주기를 거친다. 음성 대조군으로서 창출된 상기 유동 세포 전반에 걸쳐 동시에 주사하는 것을 또한 수행하였다. 모든 주사는 3회 수행하였다.
모델 피팅
데이터를 BiaEvaluation 3.0.2 소프트웨어 패키지(Biacore)에서 입수 가능한 모델에 맞추었다. 음성 대조군 표면 전반에 걸친 동시 지점으로부터 데이터 지점을 차감함으로써, 실험용 주사로부터의 데이터 지점을 교정하였다. 이와 같이 교정된 데이터를 사용하여 1:1(Langmuir) 결합성 모델로 맞출 뿐만 아니라 BiaEvaluation 소프트웨어 패키지에서 입수 가능한 이가(bivalent) 분석물 모델을 맞추었다. Langmuir 결합성 모델에 피팅시킨 것으로부터 해리 상수를 직접 산정하였다. 이가 분석물 모델에 대해서는, 해리 상수를 역학 해리 상수와 역학 결합 상수 kd 및 ka에 대한 계산치를 사용하여 간접적으로 산정하였다.
항체 kD
Ab12 17.5nM
Ab198 13.9nM
실시예 4: EPO 의존성 사람 세포 증식 검정
사람 적혈구백혈병 세포주, F36E 세포의 스톡 배양물을 10% 태아 송아지 혈청과 1단위/ml의 재조합 사람 에리트로포이에틴이 부가된 RPMI 1640 배지에서 유지시켰다. 검정에 앞서, 세포를, EPO를 함유하지 않은 성장 배지에서 4.0 내지 5.0 x 105개 세포/ml의 밀도로 밤새 배양하였다. 세포를 회수하고, 세척하며, 검정용 배지(RPMI 1640 + 10% FBS) 중에서 1.0 x 106개 세포/ml의 밀도로 재현탁시키며, 세포 50㎕를 96 웰 미세역가 판의 웰에 가하였다. 검정용 배지 중의 Abl2, Ab 390, Ab 412, Ab 467, Ab 484, Ab 430/432 및 Ab198 또는 EPO 표준물(재조합 사람 EPO(rHuEPO)) 각각 50㎕를 웰에 가하고, 상기 판을 37℃ 및 5% CO2 대기 하의 흡습 항온 배양기에서 항온 배양하였다. 72시간 후, 20㎕의 프로메가 세포 역가 96 Aqueous® 시약(제조업자의 지시에 따라서 제조된 바와 같음, Madison, Wisconin)을 모든 웰에 가하였다. 상기 판을 37℃ 및 5% CO2 대기 하에 4시간 동안 항온 배양하고, 미세판 판독기(Wallac Victor 1420 Multilabel Counter, Wallac Company, Boston, MA)를 사용하여 490nm에서의 광밀도를 결정하였다. 그 결과가 도 6에 도시되어 있다. 모든 Abs는 F36E 세포주의 증식을 자극하였다. 최대 증식 활성은 EPO 대조군을 사용한 경우에 관찰된 것과 유사하고, 농도가 증가함에 따라 벨 모양의 곡선으로 나타났다. 도 7의 결과는 4℃에서 20일 이하 동안 저장한 후의 Ab12는 F36E 세포의 증식을 유도하는데 있어 활성이라는 것을 입증해준다. 증식 활성은 EPO 대조군을 사용한 경우에 관찰된 것과 유사하지만, 최대 반응은 몰 당량 기준으로 하여 약 10배 정도 상이하다.
실시예 5: 사람 CD36+ CFUe 검정
포이에틱스[Poietics; Biowhittaker(Walkersville, MD)]로부터 수득된 동결된 사람 CD36+ 적혈구계 전구 세포를 해동시키고 IMDM-2% FBS 중에서 104개 세포/ml로 만들었다. 세포(0.3ml)를 2.4ml 메토컬트(Methocult)(StemCell Technologies, Vancouver, Canada) Cat.#04230), 0.3ml 줄기 세포 성장 인자(Sigma, St. Louis, Missouri Cat.#S7901, 100㎍/ml), 및 0.3ml EPO(R&D Systems), Ab 12, 또는 IMDM-2% FBS를 함유하는 0.3ml 튜브에 가하였다. 혼합시킨 후, 1.1ml의 상기 메토컬트 현탁액을 35mm 비-조직 배양물 처리된 멸균 페트리 디쉬에 가하고 37℃, 5% C02 하에 2주 동안 항온 배양하였다. 콜로니를 현미경으로 확인하였다. 그 결과가 도 8에 도시되어 있다. 구체적으로 언급하면, Abl2는 사람 CD 36+ 전구 세포로부터 CFU-E 콜로니의 형성을 유도하였다. 현미경으로 확인한 콜로니는 적색이었다. 이러한 콜로니의 크기와 수는 EPO 대조군으로 관찰한 것과 비교해서 감소되는데, 이는 증식 시그널 감소에 기인한 것으로 추정된다.
실시예 6: 액상 배양물에서 조혈 활성의 입증
CD34+ 전구 세포 직접 분리용 키트(Miltenyi, Auburn, CA)를 사용하여, CD34+ 세포를 사람 말초혈로부터 증균시켰다. 회수한 세포를 알파-배지로 2회 세척하고 현탁 배양 배지(30% FCS, 1% 탈이온화 BSA, 10-5M β-머캅토에탄올, 10-6M 덱사메타손, 0.3mg/ml 사람 홀로(hollo)-트랜스페린 및 10ng/mL 사람 재조합 줄기 세포 인자가 보충된 알파 배지)에 재현탁시켰다. 세포를 시험용 항체가 0.1 내지 100ng/ml의 범위 농도로 존재하는 6-웰 미세판 중에서 1 x 104개 세포/ml의 밀도로 2회 도말하였다. 상기 판을 37℃ 및 5% C02 하에 2주 동안 항온 배양하였다. 세포 계수 및 벤지딘으로의 염색을 위해, 각 웰로부터 이중 샘플을 회수하였다[참조: Fibach, E. , 1998 Hemoglobin, 22: 5-6,445-458].
그 결과가 도 9에 도시되어 있다. 구체적으로 언급하면, Ab198은 용량 의존적 방식으로 전구 세포로부터 유래된 사람 적혈구 생산 세포의 증식을 유도하였다. 증식되는 세포 수와 헤모글로빈 발현 비율(%)은 벤지딘으로의 염색에 의해 지시된 바와 같이, EPO 처리된 대조군과 비교해서 감소되었는데, 이는 증식 시그널 감소에 기인한 것으로 또한 추정된다.
실시예 7: 사이노몰구스 골수 CFUe 검정
골수를 사이노몰구스 원숭이로부터 수거하고 PBS를 이용하여 1:2로 희석시켰다. 이와 같이 희석시킨 골수 3ml를 6ml의 림포프렙(Lymphoprep)(Gibco (Invitrogen), Carlsbad, CA Cat.#1001967) 상으로 층 형성시키고, 2700rpm으로 20분 동안 원심분리시키며, 연막을 회수한 다음, 10ml IMDM-2% FBS에서 희석시켰다. 세포를 원심분리시키고, 이를 IMDM-2% FBS 중의 106개 세포/ml로 재현탁시켰다. 세포(0.3ml)를 2.4ml 메토컬트(StemCell Technologies, Vancouver, Canada) Cat.#04230), 0.3ml 줄기 세포 성장 인자(Sigma, Cat.#S7901, 100㎍/ml), 0.3ml EPO(R&D Systems, Minneapolis, Minnesota), 시험용 항체(Ab198), 또는 IMDM-2% FBS를 함유하는 튜브에 가하였다. 혼합시킨 후, 1.1ml의 상기 메토컬트 현탁액을 35mm 비-조직 배양물 처리된 멸균 페트리 디쉬에 가하고 37℃, 5% C02 하에 2주 동안 항온 배양하였다. 콜로니를 현미경으로 확인하였다. 본 검정 결과가 도 10에 도시되어 있는데, 이는 Abl98이 CFU-E 콜로니의 형성을 유도하였다는 것을 입증해 준다(그러나 콜로니의 수는 EPO 대조군으로 관찰한 것과 비교해서 감소되었다).
실시예 8: SE-3 펩타이드의 결합을 측정하기 위한 ELISA
96 웰 폴리스티렌 판(Dynatec (Elk Grove Village, IL) Immunolon 4)을, 실온에서 2시간 동안 및 4℃에서 밤새 0.015M Na2C03, 0.035M NaHC03, pH 9.4에서 희석시킨 펩타이드 SE-3(PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHWAPTARGAV)(미국 특허 제6,319,499호에 기재되어 있음) 또는 5㎍/ml 가용성 EPO 수용체(sEPOR)(R&D Systems (Minneapolis, MN) Cat.#307-ER/LF) 80㎕로 피복시켰다. 판을 실온에서 30분 동안 PBS 중의 100㎕의 5% BSA(Gibco (Invitrogen (Carlsbad, CA) ) Cat.#10010)을 차단시켰다. 차단용 용액을 제거한 후, 1% BSA를 갖는 PBS 중의 5㎍/ml의 Ab12 50㎕를 웰에 가하고, 판을 실온에서 2시간 동안 항온 배양하였다. 판을 PBS/0.05% Tween 20으로 스카트론(Skatron) 400 판 세척기를 이용하여 3회 세척하고, 50㎕의 2차 항체를 상기 웰에 부가된 PBS/0.25% BSA/0.05% Tween 20에 희석시켰다. Abl2의 경우에는,1:1000으로 희석시킨 염소 항-사람 IgG(FC)-HRP(Caltag (Burlingame, CA) Cat.#H10507)을 사용하였고, Ab71A(American Type Culture Collection HB11689로 입수 가능하고 또한 미국 특허 제6,319,499호에 기재되어 있다)의 경우에는, 1:5000로 희석시킨 염소 항-마우스 IgG (Fc)-HRP(Jackson Laboratories (West Grove, PA) Cat.#115-035-164)를 사용하였다. 실온에서 1시간 동안 항온 배양한 후, 판을 앞서와 같이 3회 세척하고, 50㎕의 OPD 발색 시약(Sigma #P9187)을 각 웰에 가하였다. 50㎕의 IN HCl을 상기 웰에 부가함으로써 발색을 중지시키고, Victor 1420 다중-표지물 계수기 상에서 490nm 하의 광밀도를 측정하였다.
도 11은 Abl2가 SE-3 펩타이드와 상호 작용(즉, 결합)하지 않는다는 것을 보여준다. Ab 71A는 SE-3 펩타이드와 상호 작용(즉, 결합)하지 않는다. Abs 12와 71A는 둘 다 고정화된 에리트로포이에틴 수용체와 상호 작용하였다.
실시예 9: EPO 의존성 증식 검정
1차 하이브리도마 상등액을 검정용 배지에서 희석시킨 다음, 이를 대상으로 하여, 실시예 5에 기재된 바와 같이 F36E 사람 적혈구백혈병 세포의 증식을 자극하는 능력을 알아보기 위해 시험하였다. 5가지 1차 상등액을 이용한 결과가 도 12에 도시되어 있다. 이들 샘플은 F36E 세포의 증식을 자극하였다.
실시예 10: SE-3 펩타이드에 대한 하이브리도마 상등액의 결합을 측정하기 위한 ELISA
42개 1차 하이브리도마 상등액을 대상으로 하여, 실시예 10에 기재된 바와 같이 고정화된 EPO 수용체 또는 펩타이드 SE-3와 결합하는 능력에 대해 시험하였다. 도 13은 시험된 모든 하이브리도마 상등액이 고정화된 EPO 수용체와 상호 작용하는 반면, 16개의 샘플 만이 배경 이상의 수준에서 SE-3 펩타이드와 상호 작용하였다는 것을 나타낸다.
실시예 11: 감마-1 Abl2 대 감마-2 Abl2의 조혈 활성 비교
증식 검정(실시예 4에 기재된 바와 같음)을 수행하여, F36e 사람 적혈구백혈병 세포에 대한 감마-1 Ab 12의 조혈 활성과 감마-2 Ab 12의 조혈 활성을 비교하였다. 이 결과가 도 31에 도시되어 있다. 도 31에 도시된 바와 같이, 감마-2 Ab 12는 F36E 세포주의 증식을 자극하는데 있어 감마-1 Ab 12 보다 더 유효하다.
실시예 12: 생체내 조혈에 대한 Ab 12의 효과
(a) mEpoR-/-, hEopR + 유전자 전이된 마우스의 작제: 사람 EpoR 만을 생산하는 유전자 전이된 마우스(hEpoR+, 단일 대립 유전자)와 내인성 마우스 EpoR는 전혀 생산하지 않는 유전자 전이된 마우스(mEpoR -/-, 이중 대립 유전자 돌연변이)를 문헌[참조: Liu, C. et al., Jounal of Biological Chemistry, 272:32395 (1997) and Yu, X., et al., Blood, 98(2):475 (2001)]에 기재된 바와 같이 생성하였다. 조혈의 생체내 연구용 마우스를 생성시키기 위해 육종 콜로니를 정립시켰다.
(b) 다중 투여 섭생: 초기 실험에서는, 동물을 대상으로 하여 Ab 12의 다중 투여 섭생을 수행하여 이러한 항체가 망상적혈구 계수치 및/또는 % 적혈구 용적률 증가를 유발시킬 수 있는지를 결정하였다. 5마라 유전자 전이된 마우스(mEpoR-/-, hEpoR+)에게 0.2ml 비히클(0.1% 소 혈청 알부민[BSA]을 함유하는 인산염 완충 식염수[PBS]) 중의 5㎍ 또는 50㎍의 Ab 12를 피하 주사하였다. 대조군 동물에게 또한, 등용적의 상기 비히클 또는 5U Epogen®(Amgen®, Thousand Oaks, CA) 함유 비히클을 동일한 방식으로 주사하였다. 모든 동물에게, 다음 스케쥴에 따라서 3주간에 걸쳐 투여하였다:
1주째 2주째 3주째
월요일, 목요일, 수요일, 금요익 월요일, 수요일, 금요일 월요일, 수요일
망상적혈구 계수치를 결정하기 위해 4일째(1주째 목요일)에 혈액 샘플을 취하고 적혈구 용적률을 결정하기 위해 19일째(3주째 금요일)에 혈액 샘플을 취하였다. 망상적혈구 계수치와 적혈구 용적률 결정은 당해 분야에 널리 공지된 방법을 이용하여 수행하였다. 도 32에 도시된 바와 같이, Ab 12는 5㎍ 또는 50㎍의 Ab 12가 투여된 동물에게서 망상적혈구 계수치와 %적혈구 용적률의 통계상 유의적 증가(대조군에 비해 증가됨)를 유발시켰다.
(c) 주간 투여 섭생: 다중 투여 섭생 하에 관찰된 결과가 보다 적은 용량의 Ab 12를 투여한 동물에게서도 관찰될 수 있는지를 평가하기 위해, 1일, 8일 및 15일째에 유전자 전이된 마우스에게 다양한 농도(0.5, 2.5, 5.0, 50 및 250㎍)의 Ab 12 또는 대조군, Aranesp™(Amgen®, Thousand Oaks, CA), 보다 활성인 Epogen® 변이체를 주사하고(상기 (b)에 기재된 바와 같음), 망상적혈구 계수치와 적혈구 용적률을 각각 결정하기 위해 4일 19일째에 출혈시켰다. 대조군 동물에게는 1회 용량의 비히클 만을 투여하거나 사람 IgG2 이소타입 대조군을 투여하였다. 도 33은 Ab 12는 시험된 가장 낮은 용량을 제외한 모든 용량에서 적혈구 용적률에 있어 통계상 유의적 증가(비히클 및 이소타입 대조군에 비해 증가함)를 유발시켰다는 것을 보여준다.
(d) 단일 투여 섭생 대 주간 투여 섭생: 단일 용량의 Ab 12가 3주 후에 조혈에 대해 영향을 미칠 수 있는지를 평가하기 위해, 유전자 전이된 마우스에게 Ab 12(50㎍)을 3주 동안 1주 간격으로 투여하거나, 또는 단일 용량의 Ab 12(150㎍)을 투여한 다음, 적혈구 용적률을 결정하기 위해 19일째에 출혈시켰다. 대조군 동물에게는 비히클 만을 투여하는데, 단일 용량의 Aranesp™(900ng)또는 총 3회분으로 나눈 Aranesp™를 매주 주사하였다(300ng x 3). 도 34는 상기 Ab 12의 투여 섭생 둘 다가 비히클 대조군에 비해 적혈구 용적률에 있어 통계상 유의적 증가를 유발시켰다는 것을 보여준다. 이와는 달리, 단일 용량 섭생의 Aranesp™는 이러한 효과를 나타내지 않았다.
본원에 인용된 모든 초록, 참조문헌, 특허 및 공개된 특허원은 본원에 참조문헌으로써 삽입되어 있다.
본 발명은 전술된 명세서와 실시예에 의해 예시된다. 많은 변이가 전술된 명세서 측면에서 당업자에게 명백할 것이기 때문에, 전술된 명세서는 비-제한적으로 예시한 것이다.
본 발명의 개념과 범위를 벗어나지 않고서도 본원에 기재된 본 발명의 조성, 작동 및 방법 순서에 대해 변화시킬 수 있다.
출원 이력
본 출원은 2002년 10월 14일자로 출원된 미국 가특허원 제60/418,031호(이의 전문이 본원에 참조문헌으로써 삽입되어 있다)를 우선권으로 청구하고 있다.
<110> Abbott Laboratories <120> Erythropoietin Receptor Binding Antibodies <130> 6989WOO1 <150> US 10/269,711 <151> 2002-10-14 <150> US 10/684,109 <151> 2003-10-10 <160> 115 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Pro Gly Asn Tyr Ser Phe Ser Tyr Gln Leu Glu Asp Glu Pro Trp Lys 1 5 10 15 Leu Cys Arg Leu His Gln Ala Pro Thr Ala Arg Gly Ala Val 20 25 30 <210> 2 <211> 349 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgc ctccatcagt agttactact ggagctggat ccggcagccc 120 ccagggaagg gactggagtg gattgggtat atctattaca gtgggagcac caactacaac 180 ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aagctgaggt ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agagcgactg 300 gggatcgggg actactgggg ccaaggaacc ctggtcaccg tctcctcag 349 <210> 3 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr 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ctacgctcct aatctatgct gcatccagtt tgcaacgtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa ac 322 <210> 23 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Thr Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 24 <211> 322 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 24 gacatccaga tgacccaatc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtctcc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaacgtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa ac 322 <210> 25 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 26 <211> 322 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 26 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctacat ctgtaggaga cagagtctcc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattggc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggcaagccc ctacgctcct aatctatgct gcatccagtt tgcaacgtgg ggtcccatca 180 agattcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcaacag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatgtcaa ac 322 <210> 27 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Thr Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Val Lys 100 105 <210> 28 <211> 322 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 28 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtctcc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattggc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggcaagccc ctacgctcct aatctatgct gcatccagtt tgcaacgtgg ggtcccatca 180 agattcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcaacag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatgtcaa ac 322 <210> 29 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Thr Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Val Lys 100 105 <210> 30 <211> 349 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 30 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtttg atggaaataa 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120 cttcagcaga ggccaggcca gcctccaaga ctcctaattt ataagacttc taaccggttc 180 tctggggtcc cagatagatt cagtggcagt ggggcaggga cagatttcac actgaaaatc 240 agcagggtgg aagctgagga tgtcggggtt tattactgta tgcaagctac acaatttcct 300 atcacgttcg gccaagggac acgactggag attaaa 336 <210> 33 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Phe Ser Phe Val Met Ile Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Thr Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Thr Gln Phe Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 34 <211> 370 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 34 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agttgaggac acggctgtgt attactgtgc gaaagatcac 300 ggtgggaggt acgtctacga ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360 gtctcctcag 370 <210> 35 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp His Gly Gly Arg Tyr Val Tyr Asp Tyr Gly Met Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 36 <211> 322 <212> DNA <213> Homo 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tgcccctacc ccaggccctt cacacacagg ggcaggtgct tggctcagac 960 ctgccaaaag ccatatccgg gaggaccctg cccctgacct aagccgaccc caaaggccaa 1020 actgtccact ccctcagctc ggacaccttc tctcctccca gatccgagta actcccaatc 1080 ttctctctgc agagcgcaaa tgttgtgtcg agtgcccacc gtgcccaggt aagccagccc 1140 aggcctcgcc ctccagctca aggcgggaca ggtgccctag agtagcctgc atccagggac 1200 aggccccagc tgggtgctga cacgtccacc tccatctctt cctcagcacc acctgtggca 1260 ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 1320 cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accccgaggt ccagttcaac 1380 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccacggga ggagcagttc 1440 aacagcacgt tccgtgtggt cagcgtcctc accgttgtgc accaggactg gctgaacggc 1500 aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa ggcctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1560 tccaaaacca aaggtgggac ccgcggggta tgagggccac atggacagag gccggctcgg 1620 cccaccctct gccctgggag tgaccgctgt gccaacctct gtccctacag ggcagccccg 1680 agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag 1740 cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa 1800 tgggcagccg gagaacaact acaagaccac acctcccatg ctggactccg acggctcctt 1860 cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc 1920 atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc 1980 tccgggtaaa 1990 <210> 87 <211> 1990 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 87 tttacccgga gacagggaga ggctcttctg cgtgtagtgg ttgtgcagag cctcatgcat 60 cacggagcat gagaagacgt tcccctgctg ccacctgctc ttgtccacgg tgagcttgct 120 gtagaggaag aaggagccgt cggagtccag catgggaggt gtggtcttgt agttgttctc 180 cggctgccca ttgctctccc actccacggc gatgtcgctg gggtagaagc ctttgaccag 240 gcaggtcagg ctgacctggt tcttggtcat ctcctcccgg gatgggggca gggtgtacac 300 ctgtggttct cggggctgcc ctgtagggac agaggttggc acagcggtca ctcccagggc 360 agagggtggg ccgagccggc ctctgtccat gtggccctca taccccgcgg gtcccacctt 420 tggttttgga gatggttttc tcgatggggg ctgggaggcc tttgttggag accttgcact 480 tgtactcctt gccgttcagc cagtcctggt gcacaacggt gaggacgctg accacacgga 540 acgtgctgtt gaactgctcc tcccgtggct ttgtcttggc attatgcacc tccacgccgt 600 ccacgtacca gttgaactgg acctcggggt cttcgtggct cacgtccacc accacgcacg 660 tgacctcagg ggtccgggag atcatgaggg tgtccttggg ttttgggggg aagaggaaga 720 ctgacggtcc tgccacaggt ggtgctgagg aagagatgga ggtggacgtg tcagcaccca 780 gctggggcct gtccctggat gcaggctact ctagggcacc tgtcccgcct tgagctggag 840 ggcgaggcct gggctggctt acctgggcac ggtgggcact cgacacaaca tttgcgctct 900 gcagagagaa gattgggagt tactcggatc tgggaggaga gaaggtgtcc gagctgaggg 960 agtggacagt ttggcctttg gggtcggctt aggtcagggg cagggtcctc ccggatatgg 1020 cttttggcag gtctgagcca agcacctgcc cctgtgtgtg aagggcctgg ggtaggggca 1080 cccagcctgt gcctgcctgg agcctggtgg aaaaagccag aagaccctct ccctgagcat 1140 gagtggggcg ggcagaggcc tccgggtgag gagacagatg gggcctgcct tgctgccctg 1200 ggctggggct gcacagccgg ggtgcgtcca ggcaggaggg ctgagcctgg cttccagcag 1260 acaccctccc tccctgagct ggcctctcac caactgtctt gtccaccttg gtgttgctgg 1320 gcttgtgatc tacgttgcag gtgtaggtct gggtgccgaa gttgctggag ggcacggtca 1380 ccacgctgct gagggagtag agtcctgagg 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tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc 1980 cctgtctccg ggtaaa 1996 <210> 111 <211> 1996 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 111 tttacccgga gacagggaga ggctcttctg cgtgtagtgg ttgtgcagag cctcatgcat 60 cacggagcat gagaagacgt tcccctgctg ccacctgctc ttgtccacgg tgagcttgct 120 gtagaggaag aaggagccgt cggagtccag catgggaggt gtggtcttgt agttgttctc 180 cggctgccca ttgctctccc actccacggc gatgtcgctg gggtagaagc ctttgaccag 240 gcaggtcagg ctgacctggt tcttggtcat ctcctcccgg gatgggggca gggtgtacac 300 ctgtggttct cggggctgcc ctgtagggac agaggttggc acagcggtca ctcccagggc 360 agagggtggg ccgagccggc ctctgtccat gtggccctca taccccgcgg gtcccacctt 420 tggttttgga gatggttttc tcgatggggg ctgggaggcc tttgttggag accttgcact 480 tgtactcctt gccgttcagc cagtcctggt gcacaacggt gaggacgctg accacacgga 540 acgtgctgtt gaactgctcc tcccgtggct ttgtcttggc attatgcacc tccacgccgt 600 ccacgtacca gttgaactgg acctcggggt cttcgtggct cacgtccacc accacgcacg 660 tgacctcagg ggtccgggag atcatgaggg tgtccttggg ttttgggggg aagaggaaga 720 ctgacggtcc tgccacaggt ggtgctgagg aagagatgga ggtggacgtg tcagcaccca 780 gctggggcct gtccctggat gcaggctact ctagggcacc tgtcccgcct tgagctggag 840 ggcgaggcct gggctggctt acctgggcac ggtgggcact cgacacaaca tttgcgctct 900 gcagagagaa gattgggagt tactcggatc tgggaggaga gaaggtgtcc gagctgaggg 960 agtggacagt ttggcctttg gggtcggctt aggtcagggg cagggtcctc ccggatatgg 1020 cttttggcag gtctgagcca agcacctgcc cctgtgtgtg aagggcctgg ggtaggggca 1080 cccagcctgt gcctgcctgg agcctggtgg aaaaagccag aagaccctct ccctgagcat 1140 gagtggggcg ggcagaggcc tccgggtgag gagacagatg gggcctgcct tgctgccctg 1200 ggctggggct gcacagccgg ggtgcgtcca ggcaggaggg ctgagcctgg cttccagcag 1260 acaccctccc tccctgagct ggcctctcac caactgtctt gtccaccttg gtgttgctgg 1320 gcttgtgatc tacgttgcag gtgtaggtct gggtgccgaa gttgctggag ggcacggtca 1380 ccacgctgct gagggagtag agtcctgagg actgtaggac agctgggaag gtgtgcacgc 1440 cgctggtcag agcgcctgag ttccacgaca ccgtcaccgg ttcggggaag tagtccttga 1500 ccaggcagcc cagggcggct gtgctctcgg aggtgcttct agagcagggc gccaggggga 1560 agaccgatgg gcccttggtg gaggctgagg agacggtgac cagggttccc tggccccagt 1620 agtccgcgat ccccaattta tctctcgcac agtaatacac ggccgtgtcc gcggcagtca 1680 cagagatcag gttcagggag aactggttct tagacgtgtc tactgatagg gtaagtcgac 1740 tcttgaggga cggattataa taggaggtct tactgttata gatgtaccca atccactcca 1800 ggcccttccc tgggtgctgg cggatccagc tccagtagta aacaccactg ctgatggagc 1860 caccagagac agtgcaggtg agggacaggg tctgtaaagg cttcaccagt cctgggcccg 1920 actcctgcag ctgcacctgg gacaggaccc atctgggagc tgccaccagc aggaggaaga 1980 accacagatg cttcat 1996 <210> 112 <211> 235 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 112 Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 1 5 10 15 Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys 20 25 30 Pro Leu Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile 35 40 45 Ser Ser Gly Val Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Asn Ser Lys Thr Ser Tyr Tyr 65 70 75 80 Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Leu Ser Val Asp Thr Ser Lys 85 90 95 Asn Gln Phe Ser Leu Asn Leu Ile Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala 100 105 110 Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Lys Leu Gly Ile Ala Asp Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 130 135 140 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 145 150 155 160 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 165 170 175 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 195 200 205 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 210 215 220 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 225 230 235 <210> 113 <211> 702 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 113 atgagggtcc ctgctcagct cctggggctc ctgctgctct ggttcccagg tgccaggtgt 60 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 120 atcacttgcc ggacaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 180 gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 240 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 300 gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagct accctcccac tttcggcgga 360 gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 420 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgct agcgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 702 <210> 114 <211> 702 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 114 acactctccc ctgttgaagc tctttgtgac gggcgagctc aggccctgat gggtgacttc 60 gcaggcgtag actttgtgtt tctcgtagtc tgctttgctc agcgtcaggg tgctgctgag 120 gctgtaggtg ctgtccttgc tgtcctgctc tgtgacactc tcctgggagt tacccgattg 180 gagggcgtta tccaccttcc actgtacttt ggcctctctg ggatagaagt tattcagcag 240 gcacacaacg ctagcagttc cagatttcaa ctgctcatca gatggcggga agatgaagac 300 agatggtgca gccacagttc gtttgatctc caccttggtc cctccgccga aagtgggagg 360 gtagctatta tgctgtagac agtaataagt tgcaaaatct tcaggctgca ggctgctgat 420 tgtgagagtg aattctgtcc cagatccact gccgctgaac cttgatggga ccccactttg 480 caaactggat gcagcataga tcaggcgctt aggggctttc cctggtttct gctgatacca 540 gcctaaatca tttctaatgc cctgacttgt ccggcaagtg atggtgactc tgtctcctac 600 agatgcagac agggaggatg gagactgggt catctggatg tcacacctgg cacctgggaa 660 ccagagcagc aggagcccca ggagctgagc agggaccctc at 702 <210> 115 <211> 234 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 115 Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Phe Pro 1 5 10 15 Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30 Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Gly 35 40 45 Ile Arg Asn Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 50 55 60 Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn 100 105 110 Ser Tyr Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 115 120 125 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 130 135 140 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 145 150 155 160 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 165 170 175 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 180 185 190 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 195 200 205 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 210 215 220 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230

Claims (60)

  1. 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키지만, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와는 상호 작용하지 않는 항체 또는 이의 항체 단편.
  2. 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시킬 수 있는 것으로서, 에리트로포이에틴 수용체에 대한 내인성 사람 에리트로포이에틴의 결합 친화성의 100배 범위 내의 결합 친화성을 나타내는 항체 또는 이의 항체 단편.
  3. 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 중쇄 가변 영역을 포함하고 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와는 상호 작용하지 않는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키는 항체 또는 이의 항체 단편.
  4. 서열 번호 5의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하고 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와는 상호 작용하지 않는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키는 항체 또는 이의 항체 단편.
  5. 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 중쇄 가변 영역; 및
    서열 번호 5의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하고 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와는 상호 작용하지 않는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키는 항체 또는 이의 항체 단편.
  6. 서열 번호 7의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 중쇄 가변 영역을 포함하고 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와는 상호 작용하지 않는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키는 항체 또는 이의 항체 단편.
  7. 서열 번호 9의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하고 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와는 상호 작용하지 않는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키는 항체 또는 이의 항체 단편.
  8. 서열 번호 7의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 중쇄 가변 영역; 및
    서열 번호 9의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하고 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와는 상호 작용하지 않는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키는 항체 또는 이의 항체 단편.
  9. 서열 번호 11, 15, 19, 31, 35, 39, 43, 47, 51 및 55로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열, 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 중쇄 가변 영역을 포함하고 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와는 상호 작용하지 않는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키는 항체 또는 이의 항체 단편.
  10. 서열 번호 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53 및 57로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열, 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하고 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와는 상호 작용하지 않는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키는 항체 또는 이의 항체 단편.
  11. 서열 번호 11/서열 번호 13, 서열 번호 15/서열 번호 17, 서열 번호 19/서열 번호 21, 서열 번호 11/서열 번호 23, 서열 번호 11/서열 번호 25, 서열 번호 11/서열 번호 27, 서열 번호 11/서열 번호 29, 서열 번호 31/서열 번호 33, 서열 번호 35/서열 번호 37, 서열 번호 39/서열 번호 41, 서열 번호 43/서열 번호 45, 서열 번호 47/서열 번호 49, 서열 번호 51/서열 번호 53 및 서열 번호 55/서열 번호 57로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 중쇄 가변 영역과 하나 이상의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열, 또는 이의 항체 단편을 포함하고 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와는 상호 작용하지 않는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키는 항체 또는 이의 항체 단편.
  12. 서열 번호 3의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 중쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  13. 서열 번호 5의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  14. 서열 번호 7의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 중쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  15. 서열 번호 9의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  16. 서열 번호 11의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 중쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  17. 서열 번호 13의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  18. 서열 번호 15의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 중쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  19. 서열 번호 17의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  20. 서열 번호 19의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 중쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  21. 서열 번호 21의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  22. 서열 번호 23의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  23. 서열 번호 25의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  24. 서열 번호 27의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  25. 서열 번호 29의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  26. 서열 번호 31의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 중쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  27. 서열 번호 33의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  28. 서열 번호 35의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 중쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  29. 서열 번호 37의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  30. 서열 번호 39의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 중쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  31. 서열 번호 41의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  32. 서열 번호 43의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 중쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  33. 서열 번호 45의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  34. 서열 번호 47의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 중쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  35. 서열 번호 49의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  36. 서열 번호 51의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 중쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  37. 서열 번호 53의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  38. 서열 번호 55의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 중쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  39. 서열 번호 57의 아미노산 서열 또는 이의 항체 단편을 갖는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체 또는 이의 항체 단편.
  40. 서열 번호 58, 서열 번호 59, 서열 번호 60, 서열 번호 61 및 이의 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 CDR1에서 부터 CDR3 까지의 연속 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체.
  41. 서열 번호 62, 서열 번호 63, 서열 번호 64, 서열 번호 65, 서열 번호 66, 서열 번호 67, 서열 번호 68, 서열 번호 74, 서열 번호 75, 서열 번호 76, 서열 번호 77, 서열 번호 78 및 이의 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 CDR1에서 부터 CDR3 까지의 연속 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체와 결합할 수 있는 분리된 항체.
  42. 사람 에리트로포이에틴 수용체를 활성화시키기에 치료학적으로 유효한 양의 항체 또는 이의 항체 단편(이러한 항체 또는 항체 단편은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와는 상호 작용하지 않는다)을 포유류에게 투여하는 단계를 포함하여, 이러한 포유류에게서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키는 방법.
  43. 사람 에리트로포이에틴 수용체의 활성을 조정하기에 치료학적으로 유효한 양의 제1항의 항체 또는 항체 단편을 포유류에게 투여하는 단계를 포함하여, 이러한 포유류에게서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 조정하는 방법.
  44. 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와는 상호 작용하지 않는, 에리트로포이에틴 수용체를 활성화시키기에 치료학적으로 유효한 양의 항체 또는 이의 항체 단편을, 치료가 필요한 포유류에게 투여하는 단계를 포함하여, 형성부전증으로 고통받는 포유류를 치료하는 방법.
  45. 에리트로포이에틴 수용체의 활성을 조정하기에 치료학적으로 유효한 양의 제1항의 항체 또는 항체 단편을, 치료가 필요한 포유류에게 투여하는 단계를 포함하여, 형성부전증으로 고통받는 포유류를 치료하는 방법.
  46. 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와는 상호 작용하지 않는 치료학적 유효량의 항체 또는 이의 항체 단편과 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  47. 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 32, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 56, 및 이의 단편, 상보체 및 축퇴성 코돈(degenerate codon) 등가물로 이루어진 그룹 중에서 선택된 분리 및 정제된 폴리뉴클레오타이드 서열.
  48. 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 53, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 59, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 62, 서열 번호 63, 서열 번호 64, 서열 번호 65, 서열 번호 66, 서열 번호 67, 서열 번호 68, 및 이의 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 분리 및 정제된 아미노산 서열.
  49. 감마-2 이소타입인, 포유류에서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키는 항체 또는 이의 항체 단편.
  50. 제49항에 있어서, 모노클로널 항체인, 항체 또는 항체 단편.
  51. 제50항에 있어서, 사람 적응화 항체인, 항체 또는 항체 단편.
  52. 제50항에 있어서, 사람 항체인, 항체 또는 항체 단편.
  53. 제50항에 있어서, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드와는 상호 작용하지 않는 항체 또는 항체 단편.
  54. 제50항에 있어서, Ab3, Ab12, Ab22, Ab54, Ab60, Ab102, Ab135, Ab145, Ab198, Ab254, Ab267, Ab390, Ab412, Ab430/432, Ab467 및 Ab484로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체 또는 항체 단편.
  55. 사람 에리트로포이에틴 수용체를 활성화시키기에 치료학적으로 유효한 양의 제49항의 항체 또는 항체 단편을 포유류에게 투여하는 단계를 포함하여, 이러한 포유류에게서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 활성화시키는 방법.
  56. 사람 에리트로포이에틴 수용체의 활성을 조정하기에 치료학적으로 유효한 양의 제49항의 항체 또는 항체 단편을 포유류에게 투여하는 단계를 포함하여, 이러한 포유류에게서 사람 에리트로포이에틴 수용체의 내인성 활성을 조정하는 방법.
  57. 에리트로포이에틴 수용체를 활성화시키기에 치료학적으로 유효한 양의 제49항의 항체 또는 항체 단편을, 치료가 필요한 포유류에게 투여하는 단계를 포함하여, 형성부전증으로 고통받는 포유류를 치료하는 방법.
  58. 에리트로포이에틴 수용체의 활성을 조정하기에 치료학적으로 유효한 양의 제49항의 항체 또는 항체 단편을, 치료가 필요한 포유류에게 투여하는 단계를 포함하여, 형성부전증으로 고통받는 포유류를 치료하는 방법.
  59. 에리트로포이에틴 수용체의 활성을 조정하기에 치료학적으로 유효한 양의 제49항의 항체 또는 항체 단편을, 치료가 필요한 포유류에게 투여하는 단계를 포함하여, 빈혈로 고통받는 포유류를 치료하는 방법.
  60. 치료학적 유효량의 제49항의 항체 또는 항체 단편과 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
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Families Citing this family (94)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3184539A3 (en) * 2001-10-23 2017-09-13 PSMA Development Company L.L.C. Psma antibodies
AR045563A1 (es) 2003-09-10 2005-11-02 Warner Lambert Co Anticuerpos dirigidos a m-csf
AU2005320349C1 (en) * 2004-02-06 2019-06-13 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Antibodies against clostridium difficile toxins and uses thereof
US20050227289A1 (en) * 2004-04-09 2005-10-13 Reilly Edward B Antibodies to erythropoietin receptor and uses thereof
ES2750254T3 (es) 2007-09-27 2020-03-25 Amgen Inc Formulaciones farmacéuticas
EP3381445B1 (en) 2007-11-15 2023-10-25 Amgen Inc. Aqueous formulation of antibody stablised by antioxidants for parenteral administration
US9175078B2 (en) 2008-01-25 2015-11-03 Amgen Inc. Ferroportin antibodies and methods of use
MX2010011717A (es) 2008-05-01 2010-11-30 Amgen Inc Anticuerpos anti-hepcidina y metodos de uso.
EP2321350A1 (en) * 2008-08-28 2011-05-18 F. Hoffmann-La Roche AG Antibodies against human epo receptor
AU2009313902B9 (en) 2008-11-13 2014-03-27 The General Hospital Corporation Methods and compositions for regulating iron homeostasis by modulation of BMP-6
SG172927A1 (en) 2009-01-15 2011-08-29 Hoffmann La Roche Antibodies against human epo receptor
MX344382B (es) 2009-10-23 2016-12-14 Amgen Inc * Adaptador de vial y sistema.
ES2545411T5 (es) 2010-06-07 2024-04-05 Amgen Inc Dispositivo de administración de fármaco
US9480624B2 (en) 2011-03-31 2016-11-01 Amgen Inc. Vial adapter and system
LT2699293T (lt) 2011-04-20 2019-04-25 Amgen Inc. Automatinio purškimo prietaisas
AR086924A1 (es) * 2011-06-15 2014-01-29 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-receptor de epo humano y los metodos para su utilizacion
KR102084171B1 (ko) 2011-10-14 2020-04-14 암젠 인크 주사기 및 어셈블리 방법
SI3081249T1 (sl) 2012-11-21 2021-03-31 Amgen Inc. Naprava za dajanje zdravila
CN110041427B (zh) 2013-03-15 2023-05-23 本质生命科学有限公司 抗铁调素抗体及其用途
TWI639449B (zh) 2013-03-15 2018-11-01 美商安美基公司 用於注射器之匣盒
CA2904725C (en) 2013-03-15 2022-04-12 Amgen Inc. Drug cassette, autoinjector, and autoinjector system
WO2014149357A1 (en) 2013-03-22 2014-09-25 Amgen Inc. Injector and method of assembly
US11097055B2 (en) 2013-10-24 2021-08-24 Amgen Inc. Injector and method of assembly
AU2014340174B2 (en) 2013-10-24 2019-09-12 Amgen Inc. Drug delivery system with temperature-sensitive control
WO2015119906A1 (en) 2014-02-05 2015-08-13 Amgen Inc. Drug delivery system with electromagnetic field generator
CN106413779B (zh) 2014-05-07 2020-06-05 安姆根有限公司 具有减震元件的自助注射器
JP6822843B2 (ja) 2014-06-03 2021-01-27 アムジエン・インコーポレーテツド 薬物送達装置によって収集されたデータを遠隔で処理するためのシステム及び方法
AU2015321462B2 (en) 2014-09-22 2020-04-30 Intrinsic Lifesciences Llc Humanized anti-hepcidin antibodies and uses thereof
EP3943135A3 (en) 2014-10-14 2022-06-29 Amgen Inc. Drug injection device with visual and audible indicators
ES2785311T3 (es) 2014-12-19 2020-10-06 Amgen Inc Dispositivo de administración de fármacos con botón móvil o campo de interfaz de usuario
US10799630B2 (en) 2014-12-19 2020-10-13 Amgen Inc. Drug delivery device with proximity sensor
EP3258988B1 (en) 2015-02-17 2019-08-28 Amgen Inc. Drug delivery device with vacuum assisted securement and/or feedback
US11806509B2 (en) 2015-02-27 2023-11-07 Amgen Inc. Drug delivery device having a needle guard mechanism with a turnable threshold of resistance to needle guard movement
WO2017039786A1 (en) 2015-09-02 2017-03-09 Amgen Inc. Syringe assembly adapter for a syringe
EP3386573B1 (en) 2015-12-09 2019-10-02 Amgen Inc. Auto-injector with signaling cap
CN105542006A (zh) * 2015-12-11 2016-05-04 北京大学第一医院 抗epor融合蛋白抗体的制备方法和用途
US11154661B2 (en) 2016-01-06 2021-10-26 Amgen Inc. Auto-injector with signaling electronics
EP4035711A1 (en) 2016-03-15 2022-08-03 Amgen Inc. Reducing probability of glass breakage in drug delivery devices
US11541168B2 (en) 2016-04-29 2023-01-03 Amgen Inc. Drug delivery device with messaging label
US11389588B2 (en) 2016-05-02 2022-07-19 Amgen Inc. Syringe adapter and guide for filling an on-body injector
US10988284B2 (en) 2016-05-13 2021-04-27 Amgen Inc. Vial sleeve assembly
US11238150B2 (en) 2016-05-16 2022-02-01 Amgen Inc. Data encryption in medical devices with limited computational capability
WO2017209899A1 (en) 2016-06-03 2017-12-07 Amgen Inc. Impact testing apparatuses and methods for drug delivery devices
WO2018004842A1 (en) 2016-07-01 2018-01-04 Amgen Inc. Drug delivery device having minimized risk of component fracture upon impact events
US20190328965A1 (en) 2016-08-17 2019-10-31 Amgen Inc. Drug delivery device with placement detection
EP3532127A1 (en) 2016-10-25 2019-09-04 Amgen Inc. On-body injector
EP3570917A1 (en) 2017-01-17 2019-11-27 Amgen Inc. Injection devices and related methods of use and assembly
CA3048520A1 (en) 2017-02-17 2018-08-23 Amgen Inc. Drug delivery device with sterile fluid flowpath and related method of assembly
WO2018152073A1 (en) 2017-02-17 2018-08-23 Amgen Inc. Insertion mechanism for drug delivery device
CA3050927A1 (en) 2017-03-06 2018-09-13 Brian Stonecipher Drug delivery device with activation prevention feature
KR102627069B1 (ko) 2017-03-07 2024-01-18 암겐 인코포레이티드 과압에 의한 바늘 삽입
IL268386B2 (en) 2017-03-09 2023-11-01 Amgen Inc Insertion mechanism for a drug delivery device
EP3570871B1 (en) 2017-03-20 2020-11-18 H. Hoffnabb-La Roche Ag Method for in vitro glycoengineering of an erythropoiesis stimulating protein
EP4241807A3 (en) 2017-03-28 2023-10-11 Amgen Inc. Plunger rod and syringe assembly system and method
JP7200134B2 (ja) 2017-06-08 2023-01-06 アムジエン・インコーポレーテツド トルク駆動式薬物送達デバイス
AU2018280054B2 (en) 2017-06-08 2023-07-13 Amgen Inc. Syringe assembly for a drug delivery device and method of assembly
MX2019015472A (es) 2017-06-22 2020-02-19 Amgen Inc Reduccion del impacto/choque de la activacion del mecanismo.
AU2018290302B2 (en) 2017-06-23 2024-02-29 Amgen Inc. Electronic drug delivery device comprising a cap activated by a switch assembly
WO2019014014A1 (en) 2017-07-14 2019-01-17 Amgen Inc. NEEDLE INSERTION-RETRACTING SYSTEM HAVING DOUBLE TORSION SPRING SYSTEM
WO2019018169A1 (en) 2017-07-21 2019-01-24 Amgen Inc. PERMEABLE GAS SEALING ELEMENT FOR MEDICINE CONTAINER AND METHODS OF ASSEMBLY
US11484648B2 (en) 2017-07-25 2022-11-01 Amgen Inc. Drug delivery device with container access system and related method of assembly
EP4085942A1 (en) 2017-07-25 2022-11-09 Amgen Inc. Drug delivery device with gear module and related method of assembly
MA49838A (fr) 2017-08-09 2020-06-17 Amgen Inc Systèm de administration de médicaments avec pression hydraulique-pneumatique de chambre
EP3668567A1 (en) 2017-08-18 2020-06-24 Amgen Inc. Wearable injector with sterile adhesive patch
US11103636B2 (en) 2017-08-22 2021-08-31 Amgen Inc. Needle insertion mechanism for drug delivery device
EP3691717B1 (en) 2017-10-04 2023-02-08 Amgen Inc. Flow adapter for drug delivery device
EP4257164A3 (en) 2017-10-06 2024-01-17 Amgen Inc. Drug delivery device with interlock assembly and related method of assembly
IL273323B1 (en) 2017-10-09 2024-06-01 Amgen Inc Drug delivery device with drive assembly and related assembly method
EP3703778A1 (en) 2017-11-03 2020-09-09 Amgen Inc. System and approaches for sterilizing a drug delivery device
EP3706830A1 (en) 2017-11-06 2020-09-16 Amgen Inc. Drug delivery device with placement and flow sensing
EP3707075A1 (en) 2017-11-06 2020-09-16 Amgen Inc. Fill-finish assemblies and related methods
CN111225696B (zh) 2017-11-10 2023-07-18 安进公司 用于药物递送装置的柱塞
AU2018368338A1 (en) 2017-11-16 2020-04-09 Amgen Inc. Autoinjector with stall and end point detection
AU2018368340B2 (en) 2017-11-16 2024-03-07 Amgen Inc. Door latch mechanism for drug delivery device
US10835685B2 (en) 2018-05-30 2020-11-17 Amgen Inc. Thermal spring release mechanism for a drug delivery device
US11083840B2 (en) 2018-06-01 2021-08-10 Amgen Inc. Modular fluid path assemblies for drug delivery devices
WO2020023336A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with grip portion
WO2020023220A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with tacky skin attachment portion and related method of preparation
EP3826701A1 (en) 2018-07-24 2021-06-02 Amgen Inc. Delivery devices for administering drugs
US20210128844A1 (en) 2018-07-24 2021-05-06 Amgen Inc. Delivery devices for administering drugs
MA53320A (fr) 2018-07-31 2021-11-03 Amgen Inc Ensemble de trajet de fluide pour dispositif d'administration de médicament
WO2020068623A1 (en) 2018-09-24 2020-04-02 Amgen Inc. Interventional dosing systems and methods
EP3856283A1 (en) 2018-09-28 2021-08-04 Amgen Inc. Muscle wire escapement activation assembly for a drug delivery device
AU2019352616A1 (en) 2018-10-02 2021-03-18 Amgen Inc. Injection systems for drug delivery with internal force transmission
TW202408605A (zh) 2018-10-05 2024-03-01 美商安進公司 具有劑量指示器之藥物遞送裝置
US20210346596A1 (en) 2018-10-15 2021-11-11 Amgen Inc. Platform assembly process for drug delivery device
CN117138169A (zh) 2018-10-15 2023-12-01 安进公司 药物递送装置
MA54057A (fr) 2018-11-01 2022-02-09 Amgen Inc Dispositifs d'administration de médicament à rétraction partielle d'élément d'administration de médicament
TWI831847B (zh) 2018-11-01 2024-02-11 美商安進公司 部分針頭縮回之藥物遞送裝置及其操作方法
WO2020091956A1 (en) 2018-11-01 2020-05-07 Amgen Inc. Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction
US20220160972A1 (en) 2019-04-24 2022-05-26 Amgen Inc. Syringe sterilization verification assemblies and methods
WO2021041067A2 (en) 2019-08-23 2021-03-04 Amgen Inc. Drug delivery device with configurable needle shield engagement components and related methods
KR20240011135A (ko) 2021-05-21 2024-01-25 암젠 인크 약물 용기를 위한 충전 레시피를 최적화하는 방법
WO2024094457A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for producing glycoprotein compositions

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1990008822A1 (en) * 1989-02-03 1990-08-09 Genetics Institute, Inc. Erythropoietin receptor
US5885574A (en) * 1994-07-26 1999-03-23 Amgen Inc. Antibodies which activate an erythropoietin receptor
AU6163196A (en) * 1995-06-07 1996-12-30 Smithkline Beecham Corporation Method for obtaining receptor agonist antibodies
US6103879A (en) * 1996-06-21 2000-08-15 Axys Pharmaceuticals, Inc. Bivalent molecules that form an activating complex with an erythropoietin receptor
AU3492497A (en) * 1996-06-21 1998-01-07 Arris Pharmaceutical Corporation Bivalent molecules that form an activating complex with an erythropoietin receptor
WO2000061637A1 (en) * 1999-04-14 2000-10-19 Smithkline Beecham Corporation Erythropoietin receptor antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
EP1578779A4 (en) 2011-11-16
TW200418505A (en) 2004-10-01
BR0315275A (pt) 2005-08-30
WO2004035603A2 (en) 2004-04-29
WO2004035603A3 (en) 2006-04-27
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TWI320716B (en) 2010-02-21
NZ539263A (en) 2009-07-31
EP1578779A2 (en) 2005-09-28
CA2501984A1 (en) 2004-04-29
AU2003282588A1 (en) 2004-05-04
PL379985A1 (pl) 2006-11-27
JP4411472B2 (ja) 2010-02-10
AU2003282588B2 (en) 2010-06-03
AU2010214778A1 (en) 2010-09-23

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