CZ20013560A3 - Tekutý nebo zmrazený přípravek určený k uchování rekombinantních infekčních adenovirů - Google Patents
Tekutý nebo zmrazený přípravek určený k uchování rekombinantních infekčních adenovirů Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20013560A3 CZ20013560A3 CZ20013560A CZ20013560A CZ20013560A3 CZ 20013560 A3 CZ20013560 A3 CZ 20013560A3 CZ 20013560 A CZ20013560 A CZ 20013560A CZ 20013560 A CZ20013560 A CZ 20013560A CZ 20013560 A3 CZ20013560 A3 CZ 20013560A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- tris
- liquid
- acid
- glycerol
- hcl
- Prior art date
Links
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 34
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 title claims description 25
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title description 15
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 120
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 42
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 37
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 16
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 37
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 29
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 29
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 28
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 14
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 13
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 13
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 claims description 13
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 11
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 239000002585 base Substances 0.000 claims description 9
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 5
- -1 alkali metal cations Chemical class 0.000 claims description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 claims description 2
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 claims description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 claims 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 claims 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 claims 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 claims 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 abstract description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 24
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 7
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 7
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 6
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 3
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 241000701242 Adenoviridae Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 101710173835 Penton protein Proteins 0.000 description 2
- 229920002565 Polyethylene Glycol 400 Polymers 0.000 description 2
- 229920002594 Polyethylene Glycol 8000 Polymers 0.000 description 2
- 108700010877 adenoviridae proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N ethane-1,2-diol;propane-1,2-diol Chemical compound OCCO.CC(O)CO HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 2
- 102000034272 protein filaments Human genes 0.000 description 2
- 108091005974 protein filaments Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 1
- 108090000669 Annexin A4 Proteins 0.000 description 1
- 102100034612 Annexin A4 Human genes 0.000 description 1
- 102100034278 Annexin A6 Human genes 0.000 description 1
- 108090000656 Annexin A6 Proteins 0.000 description 1
- 102000007592 Apolipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010071619 Apolipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000013918 Apolipoproteins E Human genes 0.000 description 1
- 108010025628 Apolipoproteins E Proteins 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108010005939 Ciliary Neurotrophic Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100031614 Ciliary neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000001039 Dystrophin Human genes 0.000 description 1
- 108010069091 Dystrophin Proteins 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 101710145505 Fiber protein Proteins 0.000 description 1
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100031706 Fibroblast growth factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000004038 Glia Maturation Factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000495 Glia Maturation Factor Proteins 0.000 description 1
- 101710094396 Hexon protein Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 1
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 1
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- 101001055320 Myxine glutinosa Insulin-like growth factor Proteins 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000742 Neurotrophin 3 Proteins 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 102100032889 Sortilin Human genes 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 108010078814 Tumor Suppressor Protein p53 Proteins 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N Uranyl acetate Chemical compound O.O.O=[U]=O.CC(O)=O.CC(O)=O COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000006909 anti-apoptosis Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 239000003914 blood derivative Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000009920 chelation Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 1
- 238000007415 particle size distribution analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10051—Methods of production or purification of viral material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10351—Methods of production or purification of viral material
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
Tekutý nebo zmrazený přípravek určený k uchování rekombinantních infekčních adenovirů
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká uchování adenovirů ve stabilizované a skladovatelné formě a tekutých nebo zmrazených přípravků určených pro toto uchovávání.
Dosavadní stav techniky
Uchovávání adenovirů ve stabilním přípravku je známý problém, který je předmětem četných studií, aniž by se až doposud dosáhlo opravdu uspokojivého výsledku. Rekombinantní viry jsou opravdu použitelné teprve tehdy, jestliže se dosáhne toho, aby byly uchovány bez degradace a bez ztráty jejich infekčnosti.
Fyzikální stav adenovirových částic v roztoku podléhá současně a rychle v průběhu času dvěma typům změn: na jedné straně agregaci (koagulaci) částic ve formě agregátů nebo filament, což je jev mimořádně závažný, protože je ireverzibilní, a na straně druhé dezintegraci struktury ikosaedru samotných kapsid (způsobené lýzou kapsid a uvolněním kapsomér do prostředí.
V mezinárodní přihlášce WO 98/02522 je popsán způsob uchování rekombinantních infekčních virů ve formě suspenze ve vodném roztoku obsahujícím sacharózu. Popisované přípravky neobsahují glycerol a obsahují podle jednoho výhodného aspektu alespoň jednu sůl divalentního kationtu nebo alkalického monovalentního kationtu. Avšak bylo možné prokázat, že
| • · | • · · · | • | ·· | ·· | |||
| • | • | • | • · · | • | • · | • · | |
| • | • | • | • · | • | • * | ||
| • | • | • · | • · | • | • · | ||
| • e | • · | • · · | ♦ · | • · |
sacharóza neposkytuje důslednou stabilizaci ve +4 °C a podle uvedených případů stabilizace při této teplotě nepřesahuje nikdy období dvou týdnů nebo v lepším případě dvou měsíců.
V J. Virology (70(11), 7498- 7509, 1996) bylo popsáno uchovávání adenovirů ve formě pufrovanýchch roztoků založených na pufru Tris s glycerolem, ale obsahující systematicky chlorid hořečnatý. Tyto přípravky vyžadovaly uchovávání při velmi nízkých teplotách, řádově -70°C, aby se zabránilo snížení jejich infekčnosti.
V Human Gene Therapy (7, 1693-99, 1996) je taktéž použit přípravek pro uchovávání s pufrem Tris a glycerolem a obsahuje chlorid hořečnatý. Tento přípravek je uchováván v -80°C.
Obecněji, přípravky založené na Tris pufru doposud popsané v literatuře obsahují systematicky chlorid hořečnatý (obecně 1 mM) a/nebo sůl ve fyziologické koncentraci (obecně 150 mM NaCl ) . Je možné citovat ilustrativní příklady (Cell, 68, 143155, 1992, Nátuře Genetics, 3, 229-234, 1993, Human Gene Therapy, 6, 5-11, 1995, Human Gene Therapy, 6, 145-153, 1995, Human Gene Therapy, 6, 277-287, 1995, Human Gene Therapy, 6, 643-666, 1995, Human Gene Therapy, 6, 1039-1044, 1995, Human Gene Therapy, 6, 1317-1322, 1995, Human Gene Therapy, 6, 1587-
| 1593, 1995 | , Human | Gene | Therapy, | 7, 2177-2184, | 1996, J. |
| Virology, | 73, 1601- | -1608, | 1999). | Pokud to autoři | uváděj í |
| přesněj i, | je uchovávání viru | systematicky | prováděno |
v teplotách -70 °C/-80 °C.
Od té doby bylo prokázáno, že vývoj virové struktury (agregace a lýza) je jev značně závislý na takových faktorech, jako je koncentrace určitých kladných proti-iontů přidaných do roztoku, a také jaká je koncentrace adenovirů. Nad koncentracemi přibližně od 1E12 vp/ml (virových částic/ml) agregace a dezintegrace kapsid (a tedy ztráta infekčnosti) jsou pozorovány během několika hodin až několika dnů, podle •Φ φφφφ
-¼ použitých farmaceutických koncentracích tyto jevy obzvláště obtížné uchovávat zatímco přípravky virových částic.
Podstata vynálezu
Bylo vynálezu, uchovávány včetně, ve
Φ· •· • * φΦ
ΦΦ
Φ ΦΦ»
Φ · O ··
Φ · ·t
Φ « ·Φ »· · ·· přípravků, nastávaj í delší dobu pomalej i.
silně při nízkých
Toto činí konc ent rováné tedy zjištěno, a že rekombinantní je to předmětem infekční pH prostředí glycerolu kationtu předkládaného adenoviry mohou být ve vodném prostředí, při teplotách mezi +4 a + 20°C formě suspenze v pufrovaném roztoku schopném udržet v lehce alkalických hodnotách, s přídavkem a bez přidání divalentních kationtu kovů nebo alkalických kovů, mezi 8,0 udržováno
Specifičtěji je pH prostředí a 9,6.
Tekuté nebo zmrazené částice v roztoku pufru s předkládaného vynálezu, výhodu dobré stability, uchovávání přípravky obsahuj ící adenovirové přídavkem glycerolu tvoří rámec Tyto přípravky poskytuj í ale také jsou obzvláště vyšších koncentrací virových částic po vynálezu roztok pufru schopný udržet a 9,6 je tvořen bud' systémem obsahujícím Tris [tris(hydroxymethyl)aminomethan] kyselinu vybranou ze silné chlorovodíkové) nebo slabé
Podle mezi 8,0 význačnou upravené pro delší dobu.
kyseliny pH prostředí kyselina/báze nebo lysin a (například kyseliny (například kyseliny octové), nebo kyseliny nebo kyseliny [kyselina 2-(4(2maleinové, kyseliny jablečné systémem kyselina/báze obsahujícím Hepes -hydroxyethylpiperazin)-1-yl)ethansulfonová] a silnou bázi (například hydroxid sodný).
Výhodně je hodnota pH udržována mezi 8,4 a 8,8, a obzvláště výhodně 8,4 (hodnota měřená při 25 °C).
*99999 · 9 · ·· * ·« · ·· · · · a ·· • 9« · 9 » 9 9 ♦ · · · 9 9 9 9 9 9 9
9 9 · 9 · · 99 9
99 ··· 99 99 «99
- 4 Koncentrace roztoku pufru je stanovena tak, aby se projevil pufrovací účinek v daných mezích a kapacitě, aby hodnota pH nebyla ovlivněna. Molární koncentrace kyseliny + báze může kolísat mezi 10 až 500 mM, výhodně mezi 20 až 100 mM a nejvýhodněji je udržována na 20 mM. Ze systémů pufrů podle vynálezu poskytl obzvláště uspokojivé výsledky roztok pufru Tris/HCl s koncentrací 20 mM.
Podle vynálezu přípravek obsahuje 10 až 50 % glycerolu a výhodně mezi 20 až 25 % (objem/objem).
Přípravky podle vynálezu mohu kromě toho obsahovat volitelně další adjuvans. Ta mohou být vybrána z polymerů (polyethylenglykoly, například PEG 400, PEG 8000), přípravků pluronic (Pluronic F68 například, zejména v množství přibližně 1 až 20 % hmotnostních), polysorbátů (obzvláště Tween-20, například 0,01 až 1 % hmotnostních), nebo vybrána z cukrů jako je například sacharóza, manit nebo dextróza (zejména v množství přibližně 5 až 10 %) nebo ještě z alkoholů (zejména ethanol) v množství 1 až 10 % objemových).
Přípravky podle vynálezu jsou obzvláště upraveny/přizpůsobeny pro uchovávání silně koncentrovaných adenovirových preparátů. Přípravky takto stabilizované opravdu umožní uchovávat virové částice ve vodné tekuté suspenzi (zejména mezi +4 a +20 °C), přitom plně uchovávají infekčnost viru, a to dokonce i ve velmi vysokých virových koncentracích (od hodnot 1E8 vp/ml až do 1E12 vp/ml nebo až do 1E13 vp/ml a mohou dokonce zacházet až do 5E13 vp/ml).
Podle druhé alternativy vynálezu může být virus také zmrazený v -20°C, uchovávaný tak mnoho měsíců nebo ještě déle, pak v tomto přípravku rozmražen bez škodlivého vlivu jak na jeho strukturu tak jeho infekčnost.
Podle vynálezu se přípravky připraví resuspendováním adenovirových částic, které byly zpočátku ve vodném roztoku a
| • 9 | • 9 | 9* | |||||||
| • | • | 9 | ·· · | 9 | • | • | • 9 | ||
| • | • | « | 9 9 | 9 | 9 | • | |||
| • | • | 9 9 | ♦ 9 | • | • | • | |||
| • 9 | 9 9 | • 9 | • a | «9 |
pak purifikovány, v roztoku pufru, a pak následuje přidání glycerolu a eventuálně přidání adjuvans, jak bylo uvedeno výše.
Rekombinantní infekční adenovirus je možné získat metodami obvyklými pro produkci v buňkách linií transkomplementujících enkapsidaci, jako jsou například buňky linie 293 nebo linie PER-C6. Virové částice mohou být pak purifikovány například centrifugací na gradientu céziumchloridu, jako bylo popsáno například v Journal of Generál Virology (34, 19-35, 1977). Výhodněji jsou virové částice purifikovány kapalinovou chromatografií na iontoměničích, gelovou filtrací, hydrofobním způsobem nebo chelatací s kovem. Purifikace na iontoměničích je obzvláště výhodná, protože umožňuje získat v jednom stupni chromatografie čistý virový preparát, zbavený proteinů, nukleových kyselin a jiných nečistost a metabolitů pocházejících z buněčné produkce a zbavený složek vnesených z prostředí tkáňové kultury. Výhodné způsoby purifikace prostřednictvím chromatografie jsou popsány v mezinárodní přihlášce WO 98/00524 nebo jak je dále uvedeno v příkladech. Adenovirové částice jsou pak formulovány v pufru zvoleném pro uchovávání pro použití zejména dialyzačních, diafiltračních metod nebo chromatografie s filtrací přes gel. Přípravek takto získaný může být případně zmrazený a uchovávaný při zvolené teplotě uschování (například -2 0 °C) , ale tento úkon není zatím nutný pro uchovávání po dlouhé období, přípravky zůstávají stabilní v tekutém stavu mezi +4 až +20°C.
Přípravky podle vynálezu jsou stabilní bez významné degradace [fyzikální a biologická stabilita (infekčnost)] během doby alespoň 12 měsíců ve +4 °C nebo alespoň 5 měsíců ve +20 °C. Tím, že roztok je fyzikálně stabilní, se konkrétněji rozumí to, že v roztoku se neobjevuje koagulace, sedimentace částic nebo precipitace (vizuálním hodnocením, měřením optické
44·
| 44 | 4444 | ||
| 4 | • | • | 4 |
| • | • | ||
| • | • | 4 * | |
| • | 4 | • 4 | |
| 44 | 44 | 4 |
| • 4 | 44 | ||
| • | 4 | 4 4 | |
| 4 | 4 | 4 4 | |
| 4 | 4 | 4 4 | 4 |
| 4 | 4 | 4 | 4 |
| 4 | 44 | 44 |
- 6 denzity, analýzou elektronovým mikroskopem nebo analýzou distribuce velikosti částic) po době uvažovaného uchovávání.
Předkládaný vynález se konkrétněji týká uchovávání infekčního adenoviru ve stabilizované formě a tekutých nebo zmrazených přípravků určených pro toto uchovávání.
Formulace podle předkládaného vynálezu využívají výhod prvního uskutečněného přípravku umožňujícího uchovávání adenovirů v tekuté formě při teplotách od +4 do +20 °C, a umožňujícího přitom zachovat vysoké koncentrace viru. Vynález je obzvláště významný pro použití rekombinantních adenovirů, ale může být aplikován obecně na všechny adenoviry (divokého typu nebo rekombinantní).
Jako příklady mohou být vyjmenovány zejména adenoviry uvedené níže, které mohou být výhodně uchovávány v přípravku podle vynálezu: skupina lidských adenovirů divokého typu patřících k šesti podskupinám známých pod názvy A, B, C, D, E, a F, a obzvláště všech 49 odlišných sérotypů lidských adenovirů tvořících těchto šest podskupin. Stejně tak se vynález může aplikovat na opičí, hovězí, koňské, prasečí, ovčí nebo psí adenoviry divokého typu příslušející do čeledi Adenoviridae. Kromě toho se vynález může aplikovat na mutované viry pocházející z virů divokého typu patřících do čeledi Adenoviridae.
Z rekombinantních adenovirových vektorů, které se mohou použít podle předkládaného vynálezu, lze uvést všechny modifikované adenoviry obsahující jednu nebo více delecí v oblasti genomu nazvané El, nebo v oblasti E2 nebo v oblasti E3 nebo v oblasti E4, jakož i rekombinantní viry obsahující několik sdružených delecí v oblastech výše uvedených, a také rekombinantní viry úplně deletované (nazývané „gutless) [FASEB, 11, 615, 1997] .
- 7 • · · ·
Předkládaný vynález se stejně týká také rekombinantních adenovirových vektorů obsahujících dále požadovanou nukleovou kyselinu. Požadovaná nukleová kyselina může být vložena na různá místa genomu adenoviru. Výhodně je vložena do úrovně oblastí El, E3, nebo E4. Ale je jasné, která další místa mohou být použita. Obzvláště znalost nukleotidových sekvencí genomu umožňuje odborníkovi identifikovat oblasti dovolující vložení požadované nukleové kyseliny. Požadovaná nukleová kyselina může být celá sekvence zavedené DNA, zvláště celá sekvence, jejíž transfer a/nebo exprese je požadována v cílové buňce.
Konkrétně může např. obsahovat zejména jeden nebo několik terapeutických genů a/nebo jeden nebo několik genů kódujících antigenní proteiny. Terapeutické geny, které mohu být tak přeneseny, jsou všechny geny, jejichž transkripce a eventuálně translace v cílové buňce dává vznik produktům majícím terapeutický účinek. Z terapeutických produktů lze uvést obzvláště enzymy, krevní deriváty, hormony, lymfokiny: interleukiny, interferony, TNF, apod. (WO 93/19191), růstové faktory, neurotransmitery nebo jejich prekurzory, nebo enzymy syntézy, trofické faktory: BDNF, CNTF, NGF, IGF, GMF, aFGF, bFGF, NT3, NT5, apod. , apolipoproteiny: ApoAl, ApoIV, ApoE, apod. (WO94/25073), dystrofin nebo minidystrofin (WO93/06223), geny umožňující kontrolu restenózy: GAX, NOS, apod., supresorové nádorové geny: p53, Rb, RaplA, DCC, k-rev, apod. (WO94/24297), geny kódující koagulační faktory: faktory VII, VIII, IX, „sebevražedné geny: TK, apod., přírodní nebo syntetické imunoglobuliny: Fab, ScFv (WO94/29446), geny proti apoptóze: AKT, apod.
Terapeutický gen může taktéž být antisense gen nebo antisense sekvence, jejíž exprese v cílové buňce umožní kontrolovat expresi genů nebo transkripci buněčné mRNA. Takové sekvence mohou být například transkribovány v cílové buňce na « ·
• · · ·
RNA komplementární k buněčným translaci na protein, podle přihlášce EP 140 308.
Předkládaný vynález se můží adenovirové vektory umožňuj í<
mRNA a blokovat tak jejich techniky popsané v patentové stejně použít na rekombinantní produkci retroviru (Tumor
Targetting, 3, 59, 1998), na adenovirus obsahující jednu nebo více modifikací v jednom nebo více konstitutivních proteinech virové kapsidy, obzvláště vláknitý protein (protein IV) a hexonový protein (protein II) nebo na adenovirus zbavený vláknitého proteinu (Journal of Virology, 73, 1601, 1999), každá z těchto modifikací byla tropismus adenoviru 1997).
přičemž modifikovat přirozený Biotechnology, 8, 583,
Přípravky podle v případě, k ošetření vynálezu kdy mohou být použity terapeutickému nebo zavedena s úmyslem (Current Opinion in j sou pro přípravu léčiva profylaktickému pro obzvláště výhodné určeného genovou terapii.
Infekční viry mají četné možnosti použití, ze kterých je možné uvést jejich použití v oblasti vakcinace a v oblasti genové terapie. Při těchto aplikacích po přenosu svého genetického materiálu (RNA nebo DNA) do hostitelské buňky využívají viry buněčné mechanismy infikované buňky pro uskutečnění syntézy proteinů kódovaných svým vlastním genomem a vykonávají tak požadovaný specifický biologický účinek. Při aplikacích v genové terapii jsou rekombinantní infekční viry nesoucí požadovaný terapeutický gen používány pro přenos tohoto genu do specifických buněk orgánu léčeného pacienta. Byla popsána celá řada terapeutických protokolů a v současnosti probíhají klinické zkoušky přenosu a exprese terapeutických genů v pomocných virových vektorech. Z těchto vektorů v průběhu posledních let prodělávají značný rozvoj adenovirové nereplikující vektory pro přenos genů kódujících
terapeutické proteiny. Z těchto genů lze zmínit např. supresorový nádorový gen p53, který je zapojen do kontroly buněčné proliferace. V současnosti jsou rozvíjeny různé protokoly klinických zkoušek pro přenos genu p53 v pomocném adenoviru na člověka v protinádorových indikacích. Z jiných rozvíjejících aplikací se může uvést případ léčení cystické fibrózy.
použití adenovirových vektorů jako terapeutických přípravků lze uvažovat jen tehdy, jestliže jsou k dispozici metody umožňující uchovávání a uskladnění přípravků po dostatečně dlouhou dobu bez významné ztráty infekčnosti uvažovaného viru. Z tohoto důvodu je předkládaný vynález obzvláště významný.
Příklady dále uvedené neomezujícím způsobem ukazují, jak může být vynález prováděn v praxi, a demonstrují také stabilitu přípravků a infekčnost částic takto formulovaných.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Příprava přípravku podle vynálezu
Virová suspenze je připravena takto: buňky 293 jsou pěstovány v CellCube (Costar) v médiu DMEM doplněném 10% fetálním telecím sérem. Když dosáhnou buňky konfluence, jsou infikovány multiplicitou infekce 2 jedním alikvotem pracovní banky adenoviru exprimujícího gen p53. Pět dnů po infekci je vzniklý supernatant sesbírán drenáží a purifikován průchodem přes filtrovací kolonu s klesající velikostí pórů 10/1/0,80,2 m. Objem supernatantu je pak 20 krát koncentrován
prostřednictvím tangenciální ultrafiltrace na membráně Millipore mající práh 300 kD. Virus je pak purifikován prostřednictvím chromatografie na koloně Source 15Q ekvilibrované a eluované gradientem chloridu sodného v pufru 2 0 mM Tris/HCl, pH 8,0. Vrchol s virem je odebrán a virus je koncentrován prostřednictvím tangenciální ultrafiltrace na membráně Millipore mající práh 300 kD. Virové preparáty takto získané jsou velmi čisté a obsahují < 50 ng bovinního sérového albuminu a < 10 ng DNA hostitelské buňky na 1E12 virových částic. Virus je pak formulován v různých zvolených pufrech. Pro uskutečnění této operace je výměna pufru prováděna próstřednictvím chromatografie na koloně PD-10 (AmershamPharmacia Biotech) naplněné Sephadex G-25 ekvilibrované a eluované pufrem vybraným podle instrukcí dodavatele. Po chromatografickém dávkování je koncentrace viru upravena, jestliže je to nutné, na cílovou hodnotu ředěním v pufru vybrané formulace. Virová stabilita v různých formulacích je potom studována a udávána pro každou vybranou formulaci, 2 ml virové suspenze v polypropylenové zkumavce při studované teplotě (-20°C, +4°C nebo + 20°C) . Vzorky jsou pak uchovávány v této teplotě po dobu stanovenou pro každý daný pokus (viz příklady uvedené dále).
Analýzy elektronovým mikroskopem jsou prováděny vložením analyzovaného roztoku na uhlíkovou mřížku, která je pak zpracována negativním barvením 1,5% uranylacetátem. Přístroj použitý pro tyto analýzy je elektronový mikroskop Jeol 1010 pracující při napětí 50 kV až 100 kV.
Analýzy distribuce velikosti virových částic jsou prováděny korelační fotonovou spektroskopií (PCS) pomocí přístroje Coulter N4 + (Coultronics).
Analýzy HPLC (vysokoúčinná kapalinová chromatografie) umožňující kvantifikovat virové částice jsou prováděny tak, jak je popsáno dále:
Chromatgrafická kolona naplněná přibližně 1 ml Q Sepharose® XL (45-165 m; Amersham-Pharmacia Biotech) je připravena v koloně typu HR 5/5 (Amersham-Pharmacia Biotech). Tato kolona, vložená do systému HPLC vybaveného detekčním systémem pro UV/viditělně světlo operující při absorbanci 200300 nm, je použita pro separaci a kvantifikaci virových částic. Před každou analýzou je kolona ekvilibrována ve 30 °C v roztoku 20 mM Tris/HCl, pH 7,5, při průtoku 1,5 ml/min. analyzovaný vzorek obsahující virové částice je injikován na kolonu. Po injekci je kolona promyta 5 objemy stejného pufru a fixované částice jsou eluované lineárním gradientem 0 až 1M chloridu sodného v pufru 20 mM Tris/HCl, pH 7,5, 30 objemy kolony. Na konci gradientu je kolona promyta 2 objemy kolony 0,5N hydroxidu sodného před opětovanou ekvilibrací vzhledem k pozdější analýze. Kontrolní křivka ve 260 nm je konstruována s preparátem adenovirových částic purifikovaných chromatograficky. Standardní preparát je titrován vzhledem k částicím podle absorbance ve 260 nm v roztoku 0,1% SDS, kdy se užívá faktor konverze 1 x 1010 částic na jednotku absorbance ve 260 nm. Vzorky jsou filtrovány pomocí filtru (0,22 m) před chromatografickou analýzou.
Technika titrace adenovirů je popsána autory F. L. Graham et al. (Molecular Biotechnology, 3, 207, 1995). Technika měření exprese pentonového proteinu imunotitrací podle kvantifikace průtokovou cytometrií je popsána v práci autorů Boyle et al. („Determination of adenoviral vector activity using an immunotitration method, poster uvedený na konferenci 5. Annual meeting of viral vector and vaccines, 1998).
• ♦ ·♦* ♦
- 12 Příklad 2
Uchovávání přípravků podle vynálezu ve +4 °C, fyzikální stabilita virových částic
Tabulka uvedená níže ukazuje výsledky získané přirozenou funkcí roztoku pufru a fyzikální stabilitu virových částic v preparátech, zjišťovanou chromatografickou analýzou:
| Přípravek | Výchozí koncentrace (x 1012 vp/ml) | Koncentrace viru ve sledovaném čase (dny) (x 1012 vp/ml) | |||||
| 10 | 15 | 20 | 35 | 60 | 90 | ||
| *Tris/HCl + glycerol 10% | 8,9 | 9,8 | 9,7 | 10,1 | 10,2 | ||
| *Tris/HCl + glycerol 10% + Pluronic F68 10% | 8,3 | 9,0 | 8,4 | 9,0 | 8,9 | ||
| *Tris/HCl + glycerol 10% + PEG 400 10% | 6,6 | 7,2 | 7,2 | 6,9 | |||
| *Tris/HCl + glycerol 10% + PEG 8000 10% | 7,5 | 8,0 | 8,2 | 8,6 | 8,0 | ||
| *Tris/HCl + glycerol 10% + sacharóza 5% | 7,4 | 7,7 | 8,5 | 7,9 | 8,5 | ||
| L-Lysine [20 mM, pH = 8,4] + glycerol 10% | 8,7 | 10,3 | 9,2 | ||||
| Porovnání | |||||||
| *Tris/HCl + sacharóza 5% | 6,3 | 5,7 | 1,9 | 0,015 | |||
| *Tris/HCl + sacharóza 10% | 10,5 | 8,4 | 0,7 |
8,4 % glycerolu: objem/objem *Tris/HCl: 20 mM, pH sacharóza: objem/objem • · ·»♦·
- 13 Příklad 3
Uchovávání ve +4 °C přípravků
podle vynálezu, účinek koncentrace glycerolu
Tabulka uvedená níže ukazuje výsledky získané funkcí koncentrace glycerolu ve formulaci a projevovanou fyzikální stabilitu virových v preparátech, zj išéované chromatografickou analýzou:
| Přípravek | Koncentrace viru ve sledovaném čase (x 1012 vp/ml) | ||||||||
| 0 | 15 dnů | 1 měs. | 2 měs. | 3 měs. | 4,5 měs. | 6 měs. | 9 měs. | 12 měs. | |
| *TrisHCl + glycerol 10% (o/o) | 6,7 | 7,9 | 8,2 | 7,8 | 8,4 | 7,5 | 6,0 | 0,3 | - |
| *Tris/HCl + glycerol 15% (o/o) | 5,8 | 6,7 | 6,8 | 6,9 | 6,8 | 6,3 | 5,8 | 6,4 | 5,9 |
| *Tris/HCl + glycerol 20% (o/o) | 5,4 | 6,3 | 6,5 | 6,4 | 7,1 | 6,0 | 5,8 | 6,0 | 5,9 |
| *Tris/HCl + glycerol 25% (o/o) | 5,7 | 6,5 | 6,6 | 6,6 | 7,1 | 6,5 | 6,2 | 6,4 | 6,4 |
| Porovnání | |||||||||
| Tris/HCl 10 mM + MgCl2 lmM + glycerol 10% (o/o) | 11,8 | 10,4 | 0,9 | - | - | - | - | - | - |
| Tris/HCl 10 mM + MgCl2 lmM + NACI 150 mM + glycerol 10% (o/o) | 10,3 | 5,0 | 0,8 | - | - | - | - | - | - |
| Tris/HCl 10 mM + MgCl2 lmM + sacharóza 1M | 6,9 | 7,7 | 7,6 | 5,9 | 0,58 | 0,47 | 0,15 | 0,25 | - |
*Tris/HCl : 20 mM, pH = 8,4.
Výsledky uvedené v tabulce výše jasně potvrzují, že obsah od 10 % (objem/objem) je účinný pro fyzikální stabilizaci částic po období 6 měsíců. Účinnost je taktéž potvrzena pro období alespoň 1 roku pro formulace zahrnující více než 10 % • 44 4 ♦ · ·
4 4
- 14 glycerolu. Žádný z dříve známých přípravků nepodal stabilizaci po delší období: obzvláště formulace obsahující Tris/HCl 10 mM + MgCl2 1 mM + sacharózu 1M není vhodná pro stabilizaci adenovirových částic ve vysoké koncentraci (6,9 x 1012 vp/ml), koncentrace viru rychle klesá na začátku druhého měsíce.
Příklad 4
Infekčnost adenovirů uchovávaných podle vynálezu v +4 nebo +20 °C:
Infekčnost virových částic byla měřena kapacitou částic exprimovat transgen, který obsahují a vyvolat expresi odpovídajícího proteinu. Zde se jedná o penton protein (protein III), který je detekován imunotitrací používající metodu značení protilátkou (anti-penton) pomocí analýzy průtokovou cytometrií. Získaný výsledek je vyjádřen v jednotkách infekce na 1 ml roztoku (Ul/ml). Výpočet poměru vp/lU představuje druhý způsob vyjádření vývoje titru infekce v průběhu času. V použitých experimentálních podmínkách má tento poměr hodnotu přibližně 20 ± 10 pro virový preparát čerstvě získaný před uložením do úschovy.
Tabulka níže ukazuje infekčnost částic formulovaných v glycerolu nebo v sacharóze po 6 nebo 12 měsících uchovávání ve +4 °C nebo po 1 měsíci uchovávání ve +4 °C, a potom po 3,5 měsících uchovávání v +20 °C.
φ ·
| ο υ 0 0 | Η | Ο | ||||||
| ο 05 | ο ^. a | 00 γω | 00 ΓΩ | σ» ΓΩ | «φ ΓΩ | m 04 γ4 | Ο ΟΟ | |
| φ > φ | F | Λ | ||||||
| »> | ||||||||
| ♦ | Γ“Η Η ε ο | |||||||
| ω * >Φ (β | Η | «φ | <φ | C0 | C0 Ο | Ο Ο | ||
| β >α> 6 Η ιη 0 ' | η d *□ 2i | νΗ | r4 | γΗ | r4 | ο | Ο V | |
| rH η | CXJ | |||||||
| Ρ< Μ | ||||||||
| CN | ΓΩ | φ | ο | |||||
| μ 0 | ν | ΓΩ | ||||||
| -μ ft Ή Η ιβ | Μ< | tn | ΙΌ | <ο | r4 | Ο | ||
| Η | ΙΌ | |||||||
| Λ υ Ή υ | η Q. | Ο 05 | •φ γ4 | ΓΩ γ4 | 05 τ~4 | Ο ΓΩ | Ch | |
| Λ | ||||||||
| Ή | ||||||||
| « ο >φ 0 Ψ | Η 20 ε ~ <1 ο | Ο | Η | Ο | *Φ Ο Ο | k£> ΓΩ | ||
| «Λ + 0 Φ & > | H η-* | ΓΩ | Μ* | •φ | ΙΌ | ο V | Ο | |
| Μ 4J «Η | Γ-Ί CN 'ό | ο | 00 | 00 | 04 | ΙΌ Η | Ο ΓΩ | |
| Η | νο | ΙΌ | ΙΌ | ΜΟ | Ο | Ο | ||
| Λ υ | Η D | ιό | ΓΩ | νο | Ο | |||
| Μ Ο Μ ω >Φ υ | ř | cd | γ4 | 00 | Η | |||
| Γ~| r-í β 7L < ο | 04 | ΙΌ | τφ | 1 | ΓΩ ΓΩ | |||
| β 0 05 + | ||||||||
| Η Φ 0 ί> ft | j-j 2^ | κπ | <Φ | ι> | Ο | |||
| h χ) Η Η | r-Η οι ε·ο | Ch ιό | σ\ ΙΌ | φ | ΓΩ ΓΩ Ο | |||
| Ή | X-s | |||||||
| 0 Μ Μ χ) | γΗ η Ε ο | Ε> | 00 | χφ | ο | Ch | Φ | |
| Η | * | - | ·» | *> | * | |||
| ° Σ5 | Λ > Λ | kO | ΙΌ | ΙΌ | ΙΌ | ko | Ο | |
| > | ||||||||
| Μ | ||||||||
| r*4 | γ4 | |||||||
| t—1 | t-----1 | ο | ο | |||||
| 0 | rH | r-4 | 0 | σ> | σι | |||
| μ | 0 | 0 | μ | S | S | |||
| φ | μ | μ | φ | |||||
| υ | Φ | φ | υ | Jg | S | |||
| ί>1 | υ | υ | >1 | fa | fa | |||
| γΗ | ί>Ί | ί>Ί | r~4 | |||||
| λ | tn | rH | r—1 | σι | r4 | Γ_| | ||
| φ | σ> | Cn | ||||||
| > | οΥ> | οΥ> | + | + | ||||
| (9 | oV> | <λΡ | co | (ΰ | ||||
| Μ | Ο | ιό | ο | ΙΌ | Η Ν | Η Ν | ||
| ft | Η | rH | 05 | 04 | υ '0 | Ο Ό | ||
| μ μ | Μ μ | |||||||
| >μ | 4- | 4~ | 4- | + | (ΰ | <ΰ | ||
| m Λ | ω Λ | |||||||
| ι—1 | γ-1 | /-4 | Ή | η υ | •η υ | |||
| ο | υ | υ | ο | β | μ φ | μ <ΰ | ||
| Μ | Μ | Μ | Μ | '«J | Η ω | Εη οι | ||
| ''χ. | β | |||||||
| ω | ω | ω | ω | £ | 5 s | S Ε | ||
| -Η | •Η | -Η | 0 | fa | C | |||
| μ | μ | μ | μ | μ | Γ~| | γ4 | ||
| Η | Η | Η | Η | 0 | Ο | Ο | ||
| * | * | * | 4« | th | Η + | Η + |
ω •Η
Μ*
CO
II
ο CN
- 16 .. ...»
Tato studie prokázala, že virová aktivita je obzvláště dobře zachována ve +4 °C pro všechny koncentrace glycerolu rovné nebo vyšší než 10 %, a ještě lépe pro všechny koncentrace glycerolu rovné nebo vyšší než 15 %. Stejně tak přípravky uchovávané 1 měsíc ve +4 °C a pak 3,5 měsíce ve +20 °C a obsahující alespoň 10 % glycerolu měly zachovanou svou kapacitu infekce. Možnost uchovávat dlouhodobě a při teplotě okolí vysoce koncentrované adenovirové přípravky byla prokázána poprvé. Kontrolní formulace obsahující sacharózu a chlorid hořečnatý neumožnila uchovávání koncentrovaného viru (6,9 x 1012 vp/ml) ani ve +4 °C ani ve +20 °C. Formulace s nízkou koncentrací (0,36 x 1012 vp/ml) ukázala, že se titr snižoval po uchovávání jeden měsíc ve +4 °C, následovaném uchováváním 3,5 měsíce ve +20 °C. Formulace obsahující sacharózu jsou úplně nepoužitelné, když se zvyšuje koncentrace.
Po třech měsících uchovávání byly jednotlivé preparáty analyzována elektronickým mikroskopem. Tato analýza ukázala, že: ve 20% koncentraci glycerolu se částice jevily nativní, plné, celé a symetrické. V prostředí nebyla detekovatelná prakticky žádná volná podjednotka. Na rozdíl od toho v kontrolní formulaci s vysokou virovou koncentrací byly částice většinou agregovány bud' v shluky obsahující přibližně 50 částic, nebo ve vláknité struktury. Některé částice měly ztratily část jejich kapsomer a jejich struktura byla zaoblenější nebo ovoidní. Kapsomery a volná vlákna v prostředí byla zcela rozptýlena a byla velmi snadno pozorovatelná. Toto bylo také dobře pozorováno ve +4 °C a ve +20 °C.
Po 12 měsících ve 4 °C se částice uchovávané ve 2 0% glycerolu jevily nezměněné (plné, celé a symetrické).
Příklad 5
Infekčnost adenovirového přípravku formulovaného v Tris/HCl + glycerolu a uchovávaného při -20 °C
V tomto příkladu je infekčnost částic určována titrací pfu/ml. Termín pfu (plaque forming unit, jednotky tvořící plaky) se shoduje s určováním infekčnosti adenovirového roztoku. Toto určování bylo prováděno infekcí vhodné buněčné kultury a měřením, obecně po 15 dnech inkubace, množství plaků infikovaných buněk. Toto stanovení spočívalo na biologických metodách a získané hodnoty byly do určité míry měřítkem funkce použitých pracovních podmínek (J. Virol. , 70, 7498, 1996).
Tabulka uvedená níže ukazuje infekční titr, měřený testem pfu, virového preparátu uchovávaného 2 měsíce při -20 °C.
| Přípravek | Výchozí titr vp/ml (x 1012) | Titr 6 0. den vp/ml (x 1012) | Titr 60. den pfu/ml (x 1011) | Poměr vp/pfu 60. den |
| 20 mM Tris/HCl (pH 8,4) + 10% glycerol | 7,7 | 7,7 | 3,0 | 26 |
Hodnota měření infekčního titru a obzvláště poměr vp/pfu ukazují, že virové částice nebyly změněny v průběhu zmrazování - rozmrazování, ani uchováváním po dobu 2 měsíců při -20 °C. (tento poměr má hodnotu přibližně 20 až 30 pro výchozí virový preparát).
·· t • · • · · · ··♦♦·♦ * · · · ♦ · · ♦· • f ·· ··· ·· ♦*
- 18 ··· ·
Příklad 6
Uchovávání přípravků podle vynálezu ve +4 °C, fyzikální stabilita virových částic
Tabulka uvedená níže ukazuje výsledky získané přirozenou funkcí roztoku pufru a fyzikální stabilitu virových částic v preparátech, zjišťované chromatografickou analýzou:
| Přípravek | Výchozí koncentrace (x 1012 vp/ml) | Koncentrace viru ve sledovaném čase (dny) (x 1012 vp/ml) | ||
| 30 | 60 | 90 | ||
| 20 mM Tris/HCl (pH 8,4) + glycerol 20 % | 29,2 | 31,4 | 32,1 | 33,7 |
| 100 tnM Tris/HCl (pH 8,4) + glycerol 20 % | 7,7 | 8,4 | 6,0 | 8,3 |
| 20 mM Tris/HCl (pH 8,4) + glycerol 20 % + ethanol 10 % | 13,9 | 14,8 | 14,7 | 15,0 |
| 20 mM lysin/HCl (pH 8,4) + glycerol 20 % | 7,8 | 8,4 | 6,8 | 7,7 |
| 20 mM Hepes/Na (pH 8,4) + glycerol 20 % | 7,9 | 8,4 | 7,0 | 8,6 |
Příklad 7
Uchovávání přípravků podle vynálezu ve +4 °C, účinek pH roztoků pufru
Tabulka uvedená níže ukazuje účinek pH roztoku pufru na infekčnost částic formulovaných v Tris 20 mM, 10% glycerolu, po 3 měsících uchovávání.
| Přípravek Tris/HCl 20 mM + glycerol 10% | Výchozí titr (x 1012 vp/ml) | Titr po 3 měsících ve +4°C | ||
| vp/ml (xlO12) | Ul/ml (xlO11) | vp/UI | ||
| pH = 7,5 | 3,1 | 2,5 | 0,18 | 136 |
| pH = 8,0 | 6,7 | 6,1 | 1,1 | 56 |
| pH = 8,5 | 7,2 | 7,0 | 1,6 | 44 |
| pH = 9,0 | 6,4 | 5,8 | 1,2 | . 48 |
| pH = 9,5 | 6,0 | 5,5 | 2,0 | 28 |
Tato studie ukázala, že aktivita viru byla obzvláště dobře zachována ve +4 °C ve formulacích 20 mM Tris/HCl obsahujících 10% glycerol při pH pohybujícím se od 8,0 do 9,5.
V pH nižším než pH = 8,0 nebyla ve +4 °C zajištěna stabilita.
Claims (9)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Tekutý nebo zmrazený přípravek obsahující adenovirové částice vyznačující se tím, že obsahuje roztok pufru schopný udržet pH prostředí mezi 8,0 až 9,6, doplněný glycerolem, a bez divalentních kationtů kovů nebo kationtů alkalických kovů.
- 2. Tekutý nebo zmrazený přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že roztok pufru je roztok schopný udržet pH prostředí mezi 8,4 až 8,8.
- 3. Tekutý nebo zmrazený přípravek podle nároku 2, vyznačující se tím, že roztok pufru je roztok schopný udržet pH prostředí na 8,4.
- 4. Tekutý nebo zmrazený přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že roztok pufru je tvořen systémem kyselina/báze obsahujícím Tris nebo lysin a kyselinu vybranou ze silné kyseliny nebo slabé kyseliny, a nebo systém kyselina/báze obsahující Hepes a silnou bázi.
- 5. Tekutý nebo zmrazený přípravek podle nároku 4, vyznačující se tím, že roztok pufru je tvořen systémem kyselina/báze vybraného ze systémůTris/HCl, lysin/HCl, Tris/kyselina maleinová,Tris/kyselina jablečná, Tris/kyselina octová a Hepes/hydroxid sodný.• · · ·» · ·· « «······· ··* ······ * · ·· »····· · ·*·* ··· »«· ·* ·· »·» ·· »· ♦*·
- 6. Tekutý nebo zmrazený přípravek podle nároků 1 až 5, vyznačující se tím, že obsahuje navíc adjuvans vybrané z polymerů, sacharidů nebo alkoholu.
- 7. Tekutý nebo zmrazený přípravek podle nároku 6, vyznačující se tím, že polymery jsou vybrány z polyethylenglykolů, přípravků pluronic nebo polysorbátů, sacharidy jsou vybrány ze sacharózy, dextrózy nebo mannitu, a alkohol je ethanol.
- 8. Použití přípravku podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7 pro uchovávání adenoviru.
- 9. Použití přípravku virových částic podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7 pro výrobu léčiva určeného k léčbě genovou terapií.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9904443A FR2791999B1 (fr) | 1999-04-09 | 1999-04-09 | Composition destinee a la conservation d'adenovirus recombinants infectieux |
| US13212099P | 1999-04-30 | 1999-04-30 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20013560A3 true CZ20013560A3 (cs) | 2002-01-16 |
Family
ID=26234910
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20013560A CZ20013560A3 (cs) | 1999-04-09 | 2000-04-07 | Tekutý nebo zmrazený přípravek určený k uchování rekombinantních infekčních adenovirů |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6734008B2 (cs) |
| EP (1) | EP1194529A1 (cs) |
| JP (1) | JP2002541792A (cs) |
| KR (1) | KR20020013521A (cs) |
| CN (1) | CN1347450A (cs) |
| AU (1) | AU778894B2 (cs) |
| BR (1) | BR0009595A (cs) |
| CA (1) | CA2364562A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ20013560A3 (cs) |
| HK (1) | HK1045716A1 (cs) |
| HU (1) | HUP0200821A3 (cs) |
| IL (2) | IL145447A0 (cs) |
| MX (1) | MXPA01010124A (cs) |
| NO (1) | NO20014765D0 (cs) |
| NZ (1) | NZ514731A (cs) |
| PL (1) | PL351553A1 (cs) |
| WO (1) | WO2000061726A1 (cs) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7569342B2 (en) | 1997-12-10 | 2009-08-04 | Sierra Molecular Corp. | Removal of molecular assay interferences |
| CZ20013560A3 (cs) * | 1999-04-09 | 2002-01-16 | Aventis Pharma S. A. | Tekutý nebo zmrazený přípravek určený k uchování rekombinantních infekčních adenovirů |
| PL199642B1 (pl) * | 2002-11-15 | 2008-10-31 | Inst Immunologii I Terapii Do | Preparat bakteriofagowy o podwyższonej trwałości oraz zastosowanie blokowego kopolimeru tlenku etylenu i tlenku propylenu |
| EP1692279A4 (en) * | 2003-11-19 | 2006-12-27 | Merck & Co Inc | VIRUS PREPARATIONS CONTAINING A CONSERVATIVE |
| CN1961961B (zh) * | 2005-11-11 | 2010-05-26 | 深圳市源兴生物医药科技有限公司 | 一种药物制剂及其制备方法 |
| CN103173493B (zh) * | 2009-09-29 | 2014-09-24 | 成都康弘生物科技有限公司 | 一种含有重组腺病毒的制剂 |
| CN103173494B (zh) * | 2009-09-29 | 2015-02-18 | 成都康弘生物科技有限公司 | 一种含有重组腺病毒的制剂 |
| CN102031246B (zh) * | 2009-09-29 | 2013-09-11 | 成都康弘生物科技有限公司 | 一种含有重组腺病毒的制剂 |
| CA3176971A1 (en) | 2013-06-14 | 2014-12-18 | Psioxus Therapeutics Limited | A dosing regime and formulations for type b adenoviruses |
| LT3021859T (lt) | 2013-10-25 | 2018-06-11 | Psioxus Therapeutics Limited | Onkolitiniai adenovirusai su heterologiniais genais |
| KR101845715B1 (ko) * | 2015-06-03 | 2018-04-05 | (주)제노텍 | 동결방지제 조성물 |
| BR112018012179A2 (pt) | 2015-12-17 | 2018-12-04 | Psioxus Therapeutics Ltd | adenovírus de grupo b que codifica um anticorpo ou fragmento de complexo anti-tcr |
| AU2017241777B2 (en) * | 2016-03-28 | 2022-02-03 | Ultragenyx Pharmaceutical Inc. | Methods of heat inactivation of adenovirus |
| GB201713765D0 (en) | 2017-08-28 | 2017-10-11 | Psioxus Therapeutics Ltd | Modified adenovirus |
| SG11201901715UA (en) | 2016-08-29 | 2019-03-28 | Psioxus Therapeutics Ltd | Adenovirus armed with bispecific t cell engager (bite) |
| GB201801614D0 (en) | 2018-01-31 | 2018-03-14 | Psioxus Therapeutics Ltd | Formulation |
| US20220305120A1 (en) * | 2019-06-11 | 2022-09-29 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Mucosal vaccine formulations |
| CN110938603B (zh) * | 2019-12-20 | 2022-11-22 | 阿吉安(福州)基因医学检验实验室有限公司 | 一种通用型病毒样本保存缓冲液及其制备方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0831919B1 (en) * | 1995-05-16 | 2002-10-16 | TRYGGVASON, Karl | Method for pharmaceutical delivery by gene therapy |
| FR2751343B1 (fr) * | 1996-07-16 | 1998-12-18 | Transgene Sa | Procede de conservation de virus recombinants infectieux, suspension aqueuse virale et utilisation comme medicament |
| US6689600B1 (en) * | 1998-11-16 | 2004-02-10 | Introgen Therapeutics, Inc. | Formulation of adenovirus for gene therapy |
| US6225289B1 (en) * | 1998-12-10 | 2001-05-01 | Genvec, Inc. | Methods and compositions for preserving adenoviral vectors |
| CZ20013560A3 (cs) * | 1999-04-09 | 2002-01-16 | Aventis Pharma S. A. | Tekutý nebo zmrazený přípravek určený k uchování rekombinantních infekčních adenovirů |
-
2000
- 2000-04-07 CZ CZ20013560A patent/CZ20013560A3/cs unknown
- 2000-04-07 BR BR0009595-8A patent/BR0009595A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-04-07 HU HU0200821A patent/HUP0200821A3/hu unknown
- 2000-04-07 CN CN00806090A patent/CN1347450A/zh active Pending
- 2000-04-07 MX MXPA01010124A patent/MXPA01010124A/es not_active Application Discontinuation
- 2000-04-07 AU AU38255/00A patent/AU778894B2/en not_active Ceased
- 2000-04-07 HK HK02107074.2A patent/HK1045716A1/zh unknown
- 2000-04-07 CA CA002364562A patent/CA2364562A1/fr not_active Abandoned
- 2000-04-07 NZ NZ514731A patent/NZ514731A/xx unknown
- 2000-04-07 IL IL14544700A patent/IL145447A0/xx active IP Right Grant
- 2000-04-07 PL PL00351553A patent/PL351553A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2000-04-07 JP JP2000611651A patent/JP2002541792A/ja active Pending
- 2000-04-07 EP EP00917147A patent/EP1194529A1/fr not_active Withdrawn
- 2000-04-07 WO PCT/FR2000/000879 patent/WO2000061726A1/fr not_active Application Discontinuation
- 2000-04-07 KR KR1020017012805A patent/KR20020013521A/ko not_active Abandoned
-
2001
- 2001-09-13 IL IL145447A patent/IL145447A/en unknown
- 2001-10-01 NO NO20014765A patent/NO20014765D0/no not_active Application Discontinuation
- 2001-10-05 US US09/970,663 patent/US6734008B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-03-31 US US10/812,912 patent/US7202078B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US7202078B2 (en) | 2007-04-10 |
| CN1347450A (zh) | 2002-05-01 |
| WO2000061726A1 (fr) | 2000-10-19 |
| PL351553A1 (en) | 2003-05-05 |
| KR20020013521A (ko) | 2002-02-20 |
| NO20014765L (no) | 2001-10-01 |
| JP2002541792A (ja) | 2002-12-10 |
| IL145447A0 (en) | 2002-06-30 |
| HUP0200821A3 (en) | 2004-11-29 |
| US20040191909A1 (en) | 2004-09-30 |
| AU778894B2 (en) | 2004-12-23 |
| HK1045716A1 (zh) | 2002-12-06 |
| IL145447A (en) | 2006-10-05 |
| CA2364562A1 (fr) | 2000-10-19 |
| NZ514731A (en) | 2004-03-26 |
| HUP0200821A2 (hu) | 2002-07-29 |
| AU3825500A (en) | 2000-11-14 |
| NO20014765D0 (no) | 2001-10-01 |
| US20020061592A1 (en) | 2002-05-23 |
| BR0009595A (pt) | 2001-12-26 |
| MXPA01010124A (es) | 2002-06-26 |
| US6734008B2 (en) | 2004-05-11 |
| EP1194529A1 (fr) | 2002-04-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ20013560A3 (cs) | Tekutý nebo zmrazený přípravek určený k uchování rekombinantních infekčních adenovirů | |
| US8216819B2 (en) | Generation of oncolytic adenoviruses and uses thereof | |
| JP4733795B2 (ja) | ヒツジアデノウイルスベクターを用いた遺伝子治療 | |
| ES2272053T3 (es) | Composiciones que comprenden virus y metodos para concentrar preparaciones de virus. | |
| US8158599B2 (en) | Chimeric adenoviruses for use in cancer treatment | |
| ES2230820T3 (es) | Procedimiento de inactivacion de virus envueltos en una preparacion virica de adenovirus. | |
| HU221340B1 (en) | Adenoviral vectors of animal origin and use thereof in gene therapy | |
| JP2005515245A (ja) | アデノウィルスの安定化された配合物 | |
| US20030153065A1 (en) | Composition and method for maintaining non-enveloped viral vectors | |
| CA2218610A1 (en) | An adenovirus helper-virus system | |
| Ugai et al. | Thermostability/infectivity defect caused by deletion of the core protein V gene in human adenovirus type 5 is rescued by thermo-selectable mutations in the core protein X precursor | |
| CN117999353A (zh) | 无包膜病毒的药物组合物 | |
| CN114903922B (zh) | 包含腺病毒的医药配制品及其保存方法 | |
| US6867022B1 (en) | Replication deficient adenovirus vectors and methods of making and using them | |
| CN102031246B (zh) | 一种含有重组腺病毒的制剂 | |
| TW202426017A (zh) | 非包膜病毒的藥物組合物 | |
| WO2024126401A1 (en) | Tet-r expression cassettes and cell lines | |
| FR2791999A1 (fr) | Composition destinee a la conservation d'adenovirus recombinants infectieux | |
| CN115976019A (zh) | 铁死亡相关的circRNA及其应用和药物 | |
| AU2002366653B2 (en) | Composition for the preservation of viruses | |
| WO2001044484A1 (en) | Conditional replication of recombinant human adeno-virus dna carrying modified inverted terminal repeat sequences |