CZ195393A3 - Quinazoline derivative process of its preparation and a pharmaceutical preparation in which it is comprised - Google Patents

Description

Předložený vynález se týká antikancerogenních činided. - 9 a konkrétněji se týká chinazolinových derivátů, kteri vykazují antikancerogenní aktivitu. —-----Dosavadní stav techniky

Jedna skupina pantikancerogenních Činidel zahrnuje antímetabolity, mající antifolátovou aktivitu, jako je aminopterin a methotrexát* Novější sloučenina tohoto typu, která se v klinických testech jevila jako nadějná, je známa jako CB3717 a je popsána a nárokována v popisu UK patentu č. 20656538, Bez ohledu na nadějnou účinnost vůči rakovině prsu, vaječníků a jater u lidí však C93717 vykazuje sy^péomy toxi, city u lidí, zejména pokud se jedné o játra a ledviny. Tyto nežádoucí účinky jsou sníženy u sloučenin, ve kterých 2aminosubstituent CB3717 jé buá nepřítomen nebo je nahražeiT^Tdirím~ž~rŮznyďiral't''ernatrvních“Subat-i-tu&n-tůr--jak—jsou-popsány a nárokovány v UK patentech Č. 2175903 a 2188319« sloučeninách tohoto typu se předpokládá, že působí jako antikancerogenní činidla inhibici enzymu thymidylét syntasy, který katalýzuje methyláci deoxyuridin monofosfátu za vzniku thymidin monofosfátu, který je vyžadován pro syntézu DNA. Anti kancerogenní aktivity CB3717 a podobných sloučenin může být hodnoceny in vitro stanovením jejich inhibičního účinku na tento enzym, a v buněčných kulturách jejich inhibičním účinkem na rakovinové buněčné linie, jako je myší lymfomová buněčná linie LI 210 a buněčná linie MCF-7 rakoviny lidského prsu.

Antimetabolity jako je aminopterin a methotrexát,které

-2jsou inhibitory enzymů, které využívají deriváty kyseliny folové/byly také shledány nadějnými při léčbě různých aler gických chorob, jako je alergická rýma, atopická dermatitis a lupénka.

Nyní bylo zjištěno, že některé chinazolinové deriváty nejen vykazují dobrou hladinu aktivity, zejména vzhledem ke své schopnosti inhibovat thymidylát syntasu, ale mají také jiný mechanismus působení vzhledem k CB3717 a jiným odvozeným chinazolinovým derivátům, které byly popsány. Předpokládá se, Se CB3717 a zejména jeho 2-methyl-analogy, který je popsán a nárokován v UK patentu č. 2188319, mé protinédorovou aktivitu díky intracelulární polyglutamátová formě, ale že sloučeniny podle předloženého vynálezu působí přímo bez toho, Se by byly gama-glutamylověny. Tento alternativní způsob působení sloučenin podle předloženého vynálezu poskytuje možnost přesnější kontroly při podání sloučenin pacientům s rakovinou, odvozenou.zejména od ktratší periody intracelulární retence následující po podání a ztráty závislosti na polyglutamylaci, která se může—velmi—měni-t-pod-le-pacÍentů-.—Nav-íc-nahrazení—zby-tkuL-glutamové kyseliny CB3717 alternativní skupinou ve sloučeninách podle předloženého vynálezu způsobí rozdílné fyzikální vlastnosti, čímž ovlivní celkové charakteristiky sloučenin.

Podstata vynálezu

Předložený vynález se týká chinazolinů obecného vzorce I

Vl, »

ΐι kde je . vo.dík.nebo..amino.,..... ...........

nebo R¹ je alkyl, alkoxy nebo alkylthio, každý až se 6 atomy uhlíku, nebo je R^ aryl nebo aryloxy, vždy s až 1 0 atomy uhlíku, nebo je R¹ , halogen, hydroxy nebo merkapto, nebo je R¹ alkyl s až 3 atomy uhlíku, který nese jeden nebo více substituentů vybraných ze skupiny, zahrnující halogen, hydroxy a alkanoylamino, vždy s až 6 atomy uhlíku, nebo je R¹ alkoxyl s až 3 atomy uhlíku, který nese jeden nebo více substituentů vybraných z hydroxy a alkoxy s až 6 atomy uhlíku, kde R je vodík nebo alkyl, alkenyl, alkinyl, hydroxyalkyl, alkoxyalkyl, merkaptoalkyl, alkylthioalkyl, halogenalkyl, kyanoalkyl, aminoalkyl, alkylaminoalkyl, dialkylaminoalkyl, alkanoy1alkyl, karboxyalkyl, karbamoylalkyl nebo alkanoyl, každý s až 6 atomy uhlíku, kde Ar je fenylen nebo heterocyklen, který je nesubstituovaný nebo který nese jeden nebo více substituentú vybraných ze skupiny, zahrnující halogen , kyano, nitro, hydroxy, amino a karbamoyl a alkyl, alkoxy, halogenalkoxy, alkanoylamino a alkoxykarbonyl, každý s až 6 atomy uhlíku,

-4Fp je zbytek dipeptidu, ve kterém první, N-terminální aminokyselinový zbytek, připojený ke karbonylové skupině COR^ je L- nebo D-aminokyselinový zbytek -NHCH(C0₂H)-A-C0-, ve kterém A je alkylenová skupina s až 6 atomy uhlíku a druhý aminokyselinový zbytek je zbytek (/-aminokyseliny, která má D-konfiguraci na svém asymetrickém í\-atomu uhlíku, je vodík nebo alkyl až se 4 atomy uhlíku,

R^ je vodík nebo alkyl s až 4 atomy uhlíku a kde každý z R^, R? a R® je vodík nebo alkyl nebo alkoxyl vždy s až 4 atomy uhlíku, nebo je halogen, ť' a chinazoliny jsou popřípadě ve formě farmaceuticky přijatelné sole, esteru nebo amidu.

-1' ·

Na rozdíl od odpovídajících dipeptidů D,L a zejména

L,.L-konfigurací, vykazují chinazolin-dipeptidy podle předloženého vynálezu odolnost vůči štěpení centrální amidové vazby dipeptidu in vivo.

V tomto popisu výrazy alkyl, alkenyl, alkinyl a alkylen zahrnují skupiny s přímým i rozvětveným řetězcem, ale odkazy na individuální alkylové nebo alkylenové skupiny jako propyl nebo ^M propy len'¹ jsou specifické pouze pro skupinu s přímým řetězcem. Analogická konvence platí pouze pro jiné generické výrazy. Navíc se používá konvenčního systému číslování chinazolinového jádra, které je uvedeno dále.

-54 5

Chinazoliny podle vynálezu mají alespoň dva asy-met3 rické atomy uhlíku (přítomné v peptidovém zbytku Ir) a mohou proto existovat v opticky aktivních formách. Vynález se týká tedy i různých opticky aktivních forem chinazolinu, vzhledem k výše uvedeným omezením, a podle.běžných znalostí mohou být takové opticky aktivní formy získány s.tereospecif ickou syntézou nebo. dělením směsi isomerních sloučenin. Jeden isomer může nicméně být zajímavější než druhý díky charakteru aktivity, kterou vykazuje nebo díky vynikajícím fyzikálním vlastnostem, například rozpustnosti ve vodě.

Vhodná hodnota pro jakýkoliv z r\ R^, R²*', r?

nebo R je alkyl, nebo pro alkylový substituent v Ar je například methyl, ethyl, propyl nebo isopropyl.

Vhodné hodnota pro R , je-li tento alkenyl, je například, prop-2-enyl, but-2-enyl, but-3-enyl, 2-methylprop2- enyl, hex-2-enyl, hex-5-enyl nebo 2,3-dimethylbut-2-enyl.

Vhodná hodnota pro R , je-li tento alkinyl, je například prop-2-inyl, but-2-inyl, but-3-inyl, pent-2-inyl,

3- methylpent-4-inyl, hex-4-inyl nebo hex-5-inyl.

-6ϊ 16 7 8 i Výhodné významy pro jakýkoliv z R , R , R' nebo R , í známe na jí-li alkoxy, nebo í^>o alkoxysubstituent v Ar jsou například methoxy, ethoxy nebo isopropoxy, í

έ Vhodným významen pro R^, znamená-li alkylthio, je r

například methylthio nebo isopropylthio.

Vhodným významen pro R¹ , znamená-li aryl, je například fenyl nebo tolyl.

Vhodným významem pro R¹, znamená-li aryloxy, je například fenoxy nebo tolyloxy.

7 β

Vhodným významem pro jakýkoliv z R , R , R -nebo R , ~ znamená-li halogen, je například fluor, chlor, brom nebo jod. ~

Vhodným významen pro R¹, znamená-li substituovaný alkyl, je například fluormethyl, difluormethyl, trifluormethyl, 2-fluorethyl, 3-fluorpropyl, chlormethyl, dichlormethyl, hydroxymethyl, 2-hydroxyethyl, 3-hydroxypropyl,

-acetamidomethyi-y—l-acetamidOpropyTAnebo pr opi onamfdome thyl.

Vhodným významem pro R^, znamená-li substituovaný alko xy, je například 2-hydroxyethoxy, 4-hydroxybutoxy, 3-hydroxy-2-methylpropoxy, 2-methoxyethoxy, 3-methoxypropoxy nebo ‘ 2-ethoxyethoxy.

Vhodným významem pro R , znamená-li hydroxyalkyl, alkoxyalkyl, merkaptoalkyl nebo alkylthioalkyl, je· například

2- hydroxyethyl, 3-hydroxyprop,yl, 2-methoxyethyl, 2-ethoxyethyl, 3-methoxypropyl, 2-methoxypropyl, 2-merkaptoethyl,

3- merkaptopropyl, 2-methylthioeth.yl, 3-methylthiopropyl nebo 2-ethyIthioethyl.

Vhodným významem pro R , znamená-li halogenalkyl, kyanoalkyl, aminoalkyl, alkylaminoalkyl nebo dialkylaminoalkyl je, například, 2-fluorethyl, 2-chlorethyl,

2- bromethyl, 3-fluorpropyl, 3-chlorpropyl, kyanomethyl, 2kyanoethyl, 3-kyanopropyl, 2-aminoethyl, 3-aminopropyl,

3- amino-2-methylpropyl, 2-methylamino®thyl, 2-dimethylaminoethyl, 2-ethylaminoethyl, 2-diethylaminoethyl, 3methylaminopropyl nebo 3-dimethylaminopropyl.

Vhodným významem pro R , znamená-li alkanoylalkýl, karboxyalkyl, karbamoylalkyl nebo alkanoyl je, například, acetonyl, 2-acetylethyl, propionylmethyl, 2-propionylethyl, 3-acetylprópyl, 4-acetylbutýl, karboxymethyl, 2karboxyethyl, karbamo.y lme thyl, ace tyl, propionyl nebo butyryl. ........

Výhodným vý2namen pro Ar, znamená-li feny len, je například 1,3- nebo výhodně 1,4-fenylen.

Výhodným významem pro Ar, znamená-li heterocyklen, je například 5-ti nebo 6-ti členný aromatický (tj.plně nenasycený) heterocyklenový diradikál, který obsahuje až do 2 heteroatomú vybraných ze skupiny, zahrnující kyslík, dusík a síru, například thienylen, pyridylen, pyrimidinylen, thiazolylen nebo oxazolylen. Zvláště zajímavé jsou sloučeniny, ve kterých Ar je pyrimidinylen, zejména pyridylen nebo zvláště fenylen.

Výhodným halogenovým, halogenalkylovým, alkanoylaminovým nebo alkoxykarbonylovým substituentem v Ar je například fluor, chlor, brom, jod, fluormethyl, difluormethyl, trif luormethyl, acetamido, propio.namido, isopropionamido, methoxykarbonyl, ethoxykarbonyl nebo isobutoxykarbonyl.

Výhodně substituci Ar, je-li přítomna, tvoří tři substituenty, zejména dva substituenty nebo zvláště jeden substituent, a jeden nebo dva substituenty mohou výhodně

-8í být v polohách připojených k atomu vázanému ke skupině ΐ 3

-COR , preferovány jsou halogen-substituenty jako je fluor.

První aminokyselinový zbytek peptidového zbytku H může být v konfiguraci D na svém asymetrickém o(-uhlíkovém atomu s tím, že pak je konfigurace peptidu D,D, ale výhodně je tento první zbytek v L-konfiguraci a pak je konfigurace peptidu L,D.

I když sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou existovat v racemické formě je výhodné, jsou-li opticky aktivní. Zvláště L,D- nebo D,D-chinazolin-dipeptid je výpo.dstátě prostý L,L-dipeptidu a výhodně je v podstatě prostý jak L,L- a D,L-dipeptidů. Výhodně může být také v podstatě prostý jiné formy D,D nebo L,D. Ve své preferované formě je dipeptid v podstatě prostý všech jiných tři isomerních forem. Výraz v podstatě prostý, který je zde použit, představuje přítomnost ne více než 20 % a zejména ·-' ¹ · 'ííl ne více než 10 % hmotnostních jiného isomeru nebo isomerů, _které .jsou_zde_uv.ed.eny..---Jak bylo uvedeno, druhý aminokyselinový zbytek R^ je -aminokyselina, ve které o( -uhlíkový atom je asymetrický, tj. atom uhlíku ve zbytku aminokyseliny je vázán ke ; čtyřem skupinám, které se vzájemně od sebe liší, jedna z i nich je karboxyskupina a další z nich obsahuje skupinu - N-, * navázanou k atomu uhlíku. . ' .

Výhodným významem R je dipeptidový zbytek, ve kterém první, N-terminální aminokyselinový zbytek -NH-CH(C0₂H)-A-COje připojen ke druhému aminokyselinovému zbytku -NH-CH(Y)-C0₂H za poskytnuti ;skupiny vzorce -NH-CH(CO₂H)-A-CONHCH(Y)-CO₂H kde A je definováno dříve,

Y je alkyl, alkeny1 nebo alkinyl, každý s až 6 atomy uhlíku, nebo

-9linováno výše,

Y je alkyl 3 až 6 atomy uhlíku, který nese jeden nebo více substituentů vybraných ze skupiny, zahrnující amino, karboxy, hydroxy a merkapto, nebo je Y fenyl nebo benzyl. Alternativním významem pro je dipeptidový zbytek, ve kterém první, N-terminální aminokyselinový zbytek -NH-CHÍCOjHj-A-CO-, kde A je deaainokyselínovému je připojen k zbytku než jsou popsány výše, který odpovídá zbytku přirozeně se vyskytující aminokyseliny, ale v D-konfiguraci,

Výhodným významem pro A je skupina 1,3 nebo výhodně 2 uhlíkovýchatomů,· napříkladGH₂, - CH₂CH₂CH₂ a ze jména CH₂CH₂·

Výhodným významem pro Y, je-li tento alkyl, je význam specifikovaný pro r\ atd., ale zvláště butyl a propyl a jejich isomery s rozvětveným řetězcem, ethyl a zvláště methyl.

Výhodným významem pro Y, je alkinyl, je význam specifikovaný 2-enyl a prop-2-inyl.

-li tento alkenyl nebo 2 u R , ale výhodně propVýhodným významem pro Y, je-li to substituovaná alkylové skupina, je skupina, která nese pouze jeden substituent, Zejména karboxyskupinu, s tím, že substituent je obvykle umístěn na koncovém atomu alkylové skupiny. Takové skupiny jsou zvláště zajímavé z hlediska různých možností Y, Zvláště zajímavé jsou alkylové skupiny až do 3 atomů uhlíku, tj. methyl, ethyl, propyl a isopropyl, i když větší skupiny mohou být zajímavé, zvláště jsou-li rozvětvené. Výhodnými skupinami Y tohoto typu sjou CH₂CO₂H nebo CH₂CH₂CH₂CO₂H , zejména CH₂CH(CH₃) COjH nebo CH(CH₃)CH₂CO₂H a zvláště CH₂CH₂C0₂H.

-ιοί Příklady přirozeně se vyskytujících aminokyselin

HgNCHÍYJCOjH, obsyhujících skupinu Y, které mohou být přítomny ve skupině R^ chinazolinů podle předloženého vyná1 lezu (jedná se buá o skupinu Y jak je specificky diskutována výše nebo další formy skupiny) jsou alanin (Y CHj), arginin (Y - (CH^)jNHC(NH^)=NH), aspartová kyselina (Y = CH₂C0^H), cystein (Y = CH₂SH), glutamová kyselina (Y = CH₂CH₂CO₂H), isoleucin (Y = CHÍCH-j )CH₂CH-j) , leucin (Y - CH₂CH(CH₃)CH₃), ornithin (Y = (CH₂).jNH₂}, fenylalanin (Y = HH₂C₆H₅), serin (Y= CH₂OH) a valin (Y = CHÍCHjJj), (Je třeba vzít v úvahu, že skupina Y je jednou z přítomných v přirozeně:.se vyskytující aminokyselině a samotný zbytek druhé aminokyseliny je v D-konf iguraci)..

Příklady aminokyselin H₂NCH(Y)C0₂H, které nejsou přirozeně se vyskytující a které obsahují skupiny Z a mohou být přítomny ve skupině R sloučenin podle předloženého vynálezu jsou norvalin (Y = CHgCH^CH^), norleucin (Y = (CHjJ^CH^), 2-fenylglycin (Y = CgH^) a terč.leucin ⁷ (Y = C(CH₃)₃). '

Výhodné jsou skupiny R^ vzorce 1,

-NHCH(COOH)CH₂CH₂CONHCH(Y')-C0₂H (1) a zejména vzorce 2

-NHCH(COOH)CH₂CH₂CONHGH(CO₂H)-(CH₂)_mCO₂H (2) kde Y* je methyl, ethyl, propyl, hydroxymethyl, fenyl nebo benzyl a m je 1, výhodně 3 a zejména 2 s tím, že první zbytek glutamové kyseliny je obvykle v L-konfiguraci a druhý aminokyselinový zbytek je v konfiguraci D.

-11f

Specifickými příklady R^ jsou zbytky dipeptidů λ ýi -glutamyl-aspartové kyseliny, ý^glutamyl-2-aminoadipové kyseliny a zejména /ýi-glutamyl-alaninu a zvláště -glutamylglutamové kyseliny, v D,D nebo výhodně L,Dformě.

Vhodné farmaceuticky přijatelná sůl chinazolinu podle vynálezu je, například, adiční sůl s kyselinou anorganickou nebo organickou, například kyselinou chlorovodíkovou, bromov©dikovou, trifluoróctovou nebo maleinovou; nebo s alkalickým kovem, například sodíkem, kovem alkalické zeminy., například vápníkem, nebo amoniakem, například tetra(2-hydroxyethyl)amoniovó sůl.

Vhodným farmaceuticky přijatelným esterem chinazolinu podle vynálezu je například ester s alifatickým alkoholem až do 6 atomů uhlíku, například methyl, ethyl nebo terc.butylester.

Shodným farmaceuticky přijatelným amidem chinazolinu podle vynálezu je, například, nesubstituovaný amid vzorce -CONHj, nebo zejména benzylem substituovaný amid vzorce -conhch₂c₆h₅.

R může obsahovat několik karboxyskupin. Jestliže obsahuje tři karboxyskupiny jak tomu je v případě různých výhodných dipeptidových zbytků r\ například jestliže R^ obsahuje dva zbytky glutamové kyseliny, může být solí nebo esterem di-sůl-monokyselina nebo ester nebo amid nebo se může jednat o di-kyselinu-mono-súl nebo -ester nebo amid nebo i o tri-sůl nebo ester nebo amid.

8

Zvláště výhodné významy pro různé symboly R až R a Ar jednotlivě jsou vyjádřeny u výhodných chinazolinů popsaných dále. Nicméně v případě R^, R^, R^ a R® jsou zvláště zajímavé ty sloučeniny, kde tyto substituenty jsou vodík.

-127

Pro R jsou zvláště zajímavé ty sloučeniny, kde jeho význam je jiný než vodík, například význam ze skupiny, zahrnující methoxy, fluor a chlor a zejména alkylové skupiny jako je methyl.

Výhodné chinazoliny podle vynálezu mají výše uvedený vzorec, kde R¹ je halogen- nebo hydroxy-substituováný alkyl nebo zejména vodík, amino, alkyl nebo alkoxy, J zvláště fluormethyl, hydroxymethyl, vodík, amino, methyl, Y ethyl nebo methoxy, kde R je methyl, ethyl, prop-2-enyl, prop-2-inyl,

2-hydroxyethyl, 3-hydroxypropyl, 2-fluorethyl nebo acetony 1, kde Ar je 1,4-fenylen, 2-fluor-1,4-fenylen nebo

2,6-dif luor-1 ,4-fenylen, ¹ >

kde R-3 je zbytek dipeptidu ýi-glutamyl-aspartové kyseliny, -glutamové kyseliny, -2-aminoadipové kyseliny nebo -alaninu buá ve formách L,D nebo D,D, r kde R⁴· je vodík nebo methyl, kde iř je vodík, kde_r6 je vodík nebo chlor.,*7 kde R je vodík, methyl, fluor nebo chlor a kde R je vodík, methoxy nebo chlor.

Zvláště výhodné chinazoliny podle vynálezu mají vzorec uvedený výše, kde R¹ je methyl, kde R je methyl, ethyl nebo výhodně prop-2-inyl, kde Ar je 1,4-fenylen nebo 2-fluor-1,4-fenylen, kde R^ je -L-glutamyl-D-glutamová kyselina, kde R^ je vodík nebo methyl, kde R^ je vodík, kde R^ je vodík nebo chlor, kde R je vodík, methyl, methoxy, fluor nebo chlor a kde R je vodík, methyl, methoxy nebo chlor.

-13Jiné chinazoliny podle vynálezu, které jsou zvláště zajímavé, mají hodnoty r\ R², až Εθ a Ar v kombinaci uvedené výše, ale s R^, které má jakoukoliv hodnotu uvedenou dříve. Nicméně, specificky zvláště výhodné chinazoliny podle vynálezu jsou:

N-p-/N- (3,4-dihydro-2°amino-4-oxochÍnazolÍn-6-methyl )-Hmethylamino/benzoyl-L-.^-glutamyl-D-glutamová kyselina, /

> N-p-/N-(3,4-dihydro-2-amino-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)N-ethylamino/benzoyl-L-/v-glutamyl-D-glutamová kyselina,

N-p-/N-(3,4-dihydro-2-amÍno-4-oxochina2olin-6-ylmethyl)-N(prop-2-inyl )amino/benzoyl-L- f^-glutamyl-O-gl utamové kyselina,

N-p-/N- (3,4-dihydro-2-me thylM-oxochinazolin-ó-y Imethy 1 )N-methylamino/benzoyl-L- /^-glutamyl-D-glutamová kyselina,

N-p-/N- (3_f4-dihydro-2-methyl-4-oxoohinazolin-6-ylmethyl)N-ethylamino/benzoyl-L-/^-glutamyl-D-glutamová kyselina,

N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyDN-(prop-2-inyl)amino/benzoyl-L- <j\-glutamyl-D-glutamová kyselina,.

N-p-/N-(3,4-ďihydro-2,7-dimeth.yl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl) N-methylamino/benzoyl-L--glutamyl-D-glutamová kyselina,

N-p-/N- (3,4-dihydro-2,7-dimethyl-4-oxochinazolin-6-,ylmethyl) N-ethylamino/benzoyl-L-fy -glutamyl-D-glutamová kyselina,

N-p-/IT-C3,4-dihydro-2_t7-dimethyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)amino/benzoyl-D- -glutamyl-Dglutamová kyselina,

-14N-p-/N-Í3,4-dihydro-2-methoxy-4-oxochinazolin-6-ylmethyl )N-methylamino/benzoyl-L- ^-glutamyl-D-glutamová kyselina,

N-p-/N- (3,4-dihydro-2-methoxy-4-oxochinazolin-6-ylmethyl )N-ethylamiho/benzoyl-L-/^-glutamyl-Ď-glutamovó kyselina,

N-p-/N- (3,4-dihydro-2-methoxy-4-oxochinazolin-6-ylmethyl )N-(prop-2-inyl)amino/benžoyl-L- ^-glutamyl-D-glutamové kyselina,

N-p-/N- (3,4-dihydro-2-amino-4-oxochinazolin-6-y lmethy DN-methylamino/-o-fluonbenzo,yl-L-^ -glutamyl-D-glutamové kyselina, 'ů ' &?

N-p-/N- (3,4-dihydro-2-amino-4-oxochinazolÍn-6-ylmethy1)N-ethylamino/-o-fluorbenzoyl-L- J^-glutamyl-D-glutamová kyselina, . t

N-p-/N-(3,4-dihydro-2-amino-4-oxochÍnazolin-6-ylmethyl)- i

N-(prop-2-inyl )amino/-o-fluor*benzoyl-k- Q^-glutamyl-Dglutamové kyselina,

N-p-/N- (3,4-dihydro. 2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl )N-methylamino/-o-fluorbenzoyl-L-/y_k-glutamyl-D-glutamové kyselina,,

N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6ylmethyiyN-ethylamino/-o-fluorbenzoyl-L- -glutamyl-D-glutamová kyselina,

N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)- I

N-(prop-2-inyl)amino/-o-fluorbenzoyl-L-/^-glutamyl-D- I glutamové kyselina, I

-15N-p-/N-(3,4-dihydro-2, 7-dimethyl-4-oxochinazolin-b-ylmethyl )-N-meth,ylamino/-p-fluorbenzoyl-L- .^-glutamyl-Dglutamová kyselina,

N-p-/N- (3,4-dih.ydro-2, 7-dimethyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-ethylamino/-o-fluorbenzoyl-L- f^-glutamyl-Dglutamůvá kyselina,

N-p-/N- (3,4-dihyí ro-2,7-dimethyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl )-N-(prop-2-in,yl)amino/-o-fluorbenzoyl-L- Q,-glutamyl-D-glutamová kyselina,

N-p-/N- (3,4-dihydro-2-methoxy-4-oxochínazolín-6-ylméthyl)-N-methylamino/-o-fluorbenzoyl-L- ^-glutamyl-Dglutamová kyselina,

N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methoxy-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-ethylamino/-o-fluorbenzoyl-L--glutamyl-Dglutamová kyselina a

N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methoxy-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)N-(prop-2-inyl)amino/-o-fluorbenzoyl-L-.^ -glutamyl-Dglutamová kyselina;

jakož i jejich farmaceuticky přijatelné soli, estery a amidy.

V tomto popise jsou aminokyselinové zbytky označeny standardním způsobem (Pure and Applied Chemistry,

1974, 40, 31 7 a European Journal of Biochemietry, 1984, 138, 9). Pro zabránění omylům je nicméně nutno poznamenat, že -glutamyl znamená radikál HgNCHÍCOgHJCHgCHgCO-· nebo -NHCH(CO₂H)CH₂CH₂CO- podle kontextu.

-16Chinazolin pddle vynálezu může být připraven jakýmkoliv způsobem známým pro použití pro přípravu chemicky příbuzných sloučenin.

Zvláště výhodný způsob výroby chinazolinů podle vynálezu zahrnuje reakci kyseliny obecného vzorce

N - Ar - CO₂H R² nebo jejím reaktivním derivátem, s_terminé-lní—aminoskupinou_dipep-tidu__vz.orce__R_j^H, p< kde r\ R^, r\ r'_í R^, R'_t Εθ a Air mají výše uvedené významy, jakékoliv merkapto, amino a alkylaminoskupina τ R _t β\ Ar a jakákoliv karboxyskupina v R¹, R^ a Ar je chráněna obvyklou chránící skupinou a jakákoliv hydroxyskupina v R , R , R a Ar a jakákoliv karboxyskupina v R^ může být chráněna obvyklou chránící skupinou nebo alternativně není nutné takovoz hydroxy nebo karq boxyskupinu chránit, R je vodík nebo chránící skupina a potom se jakékoliv nežádoucí chránící skupina včetně jakékoliv chránící skupiny R^ se odstraní obvyklými způsoby. Chránění jakékoliv aminoskupiny nelze samozřejmě aplikovat na terminální aminoskupinu dipeptidu R^-H,

V tomto způsobu a jiných zde popsaných, sloučenina

-17R-}-H a také chinazolinkyselina, kde je to možné, mé obvykle stereochemickou konfiguraci na asymetrických atomech uhlíku, která je žádoucí ve finálním chinazolinu obecného vzorce 1«

Vhodné reaktivní deriváty kyseliny vzorce uvedeného výše mohou být například, acylhalogenidy, například acylchlorid vytvořený reakcí kyseliny a chloridu, anorganická kyseliny, například thionylchloriduj směsný anhydrid, například anh.ydrid vytvořený reakcí kyseliny a chlorformiótu jako je isobutylchlorformiátJ aktivní ester, například ester vytvořený reakcí kyseliny a fenolu jako je pentafluorfenol nebo alkoholu jako je 1-hydroxybenzotriazolj produkt reakce kyseliny a karbodiimidu, například dicyklohexylkarbodiimid, nebo zejména acylaziď, například azid vytvořený reakcí kyseliny a azidu jako je difenylfosforylaziď nebo acylfosfonét, například acylfosfonát vytvořený reakcí kyseliny a fosfonét jako je diethylkyanofosfonát nebo (1H-I,2,3-benzotríazol-l-yloxy)-tris(pyrrolidino)-fosfonium-hexafluorfosfonét.

Vhodné chránící skupiny pro hydroxyskupinu jsou například acetylová nebo benzoylová skupina, která může být odstraněna hydrolýzou bází, například hydroxidem sodným, nebo jestliže R neobsahuje alkenylovou nebo alkinylovou skupinu, může být chránící skupinou například y-arylalkylové skupina, například benzylová skupina, \ která může být být odstraněna hydrogenaci nad katalyzátorem, například palladiu na uhlí.

Vhodnou chránící skupina aminoskupiny může být například alkoxykarbonylová skupina, například terc.butyloxykarbonylová skupina, která může být odstraněna zpracováním s organickou kyselinou, například trifluoroctovou kyselinou f nebo může jí může být například benzyloxykarbonylová skupina, která může být odstraněna zpracováním s Le-18wisovou kyselinou, například bor-tris(trifluoracetétem).

Vhodnou alternativní chránící skupinou pro primární aminoskupinu je, například, ftaloylová skupina, která může být odstraněna zpracováním s alkylaminem, například dimethylaminopropylaminem nebo hydrazinem.

Vhodnou chránící skupinou pro’ karboxyskupinu může být esterifikující skupina, jako je terč.butylová skupina, která může být odstraněna zpracováním s organickou kyselinou, například kyselinou trifluoroctovou, čímž se vyloučí možnost racemizace, ke které může dojít u skupin odstranitelných bází.

S-J.

Vhodná chránící skupina pro merkaptoskupinu je, například esterifikující skupina, například acetylová skupina, která může být odstraněna hydrolýzou bází, například hydroxidem sodným.

R je výhodněji vodík než chránící skupina, ale _ 9__ vhodným významem pro R , je-li jím chránící skupina je, například, pivaloyloxymethylová skupina. Taková skupina může být odstraněna hydrolýzou bází, například hydroxidem sodným, ale je třeba se pelivě vyhnout racemizaci.

Chránící skupiny pro různé karboxyskupiny v R^ mohou být esterifikující skupiny jaké umožňuje produkt ]oo odstranění jakékoliv nežádoucí chránící skupiny v. R , R^,

R a Ar a jakékoliv chránící skupiny R , spadající do definice chinazolinu podle vynálezu. V takovém případě este3 rifikovanÓ karboxyskupinyr v R může být žádoucí v konečném produktu zachovat. Alternativně může být použita jiná chránící skupina v R^, která bude odstraněna.

Dipeptid vzorce R^-H může být získán jakoukoliw z různých obecných metoď peptidové syntézy, která je popsána v literatuře peptidové chemie. Klasické metody zahrnují

-19reakci v roztoku nebo mohou být použity metody v pevné fázi. Výhodně se dipeptid připraví reakcí dvou vhodných aminokyselin v roztoku, aminoskupina kyseliny poskytuje Nterminélní zbytek R-^-H a karboxyskupina kyseliny poskytuje C-terminální zbytek R^-R chráněný, například chránícími skupinami jak byly popsány dříve, zejména vhodnými chránícími skupinami jako je benzyloxykarbonylová skupina a terc.butyl esterifikující skupina. Ačkoliv aminochránící skupina je nezbytně nutné odstranit před reakcí R^-H s karboxylovou kyselinou, může být vhodné zachovat chránící skupinu karboxyskupiny, která je vždy přítomny. - Karboxylová kyselina použitá jako výchozí materiál může být získána reakcí sloučeniny vzorce

kde r\ R⁴, R^, R⁶, R?, R® a R^ mají výše uvedené významy a 2 je odštěpitelné skupina, se sloučeninou obecného vzorce

HNR²-Ar-CO₂R¹⁰

10 kde R a Ar mají výše uvedené významy a R je chránící skupina, která může být odstraněna za poskytnutí karboxylóvé kyseliny.

-202 může být například halogenová nebo sulfonyloxyskupina, například chlor, brom, methansulfonyloxy nebo toluen-p-sulfonyloxyskupina.

může být například, methyl nebo ethylskupina, která může být odstraněna hydrolýzou bází, například hydroxidem sodným nebo R¹^ může být, například, terc.butylová skupina, která může být odstraněna Štěpením organickou kyselinou, například kyselinou trifluoroctovou.

Chránící skupina karboxyskupiny v R^ může být, napři klad esterifikující skupina, které může být odstraněna, zatímco chránící skupina merkapto, amino, karboxy a 1 2 hydroxyskupina v R , R a Aj* je zachována.

Alternativní způsob přípravy karboxylové kyseliny jako výchozího materiálu zahrnuje použití karboxypeptidásy G2 enzymu pro odstranění zbytku L-glutamové kyseliny ze sloučeniny vzorce I, ale ve kterých je R^ mimo takový zbytek.

Další výhodný postup pro přípravu chinazolinů podle vynálezu, kde fi’ je alkoxy, aryloxy nebo alkoxy s až 3 ato my uhlíku, který nese jeden nebo více substituentů vybraných ze skupiny, zahrnující hydroxy, alkoxy s až 6 atomy uhlíku, zahrnuje reakci sloučeniny obecného vzorce

se sloučeninou obecného vzorce

HNR²-Ar-COR³ kde R¹ mé poslední výše uvedený význam, kde R², R\ R⁴, R^, R^, R?, S⁸, Ar a Z mají významy uvedené výše s tou podmínkou, že jakákoliv merkapto, amino,

3.

alkylamino a karboxyskupina v R , R a Ap je chráněna obvyklou chránící skupinou, například jak je uvedeno výše a ja1 2 3 kákoliv hydroxyskupina v R , R , R a Ar může být chráněna obvyklou chránící skupinou, například jak je uvedeno výše, nebo alternativně jakákoliv hydroxyskupina nemusí být chráněna$

Další výhodný postup pro výrobu chinazolinu podle vynálezu, kde R¹ je merkapto nebo alkylthio, zahrnuje reakci chinazolinu vzorce

kde R¹ je merkapto a R^, r\ _r6, r?, _r®, a Ar mají výše uvedené významy, s tou podmínkou, že jakákoliv merkapto, amino, alkylamino, karboxy a hydroxyskupina v R , R a Ar může být chráněna obvyklou chránící skupinou, například jak je uvedena výše, nebo alternativně jakákoliv amino, alkylamino, karboxy a hydroxyskupina nemusí být chráněna; s bází, například hydroxidem amonným, s následující alkylsroí vzniklé thiolótové soli, alkylhalogenidem, například methyljodidem; a potom se jakékoliv nežádoucí chránící skupina včetně jakékoliv chráQ ?

nící skupiny R odstraní obvyklými způsoby, například jak—jsou-uvedeny~výše·?Alternativní proces pro výrobu chinazolinu podle vynálezu zahrnuje reakci sloučeniny obecného vzoroe

-23se sloučeninou obecného vzorce

HNR²-Ar-COR³ kde v těchto sloučeninách R¹, R²r r3₍ r4, R^_f ^6, R?,

Q Q

R . R^? a Ar mají výše uvedené významy, s tou podmínkou, 13.

že je-li hydroxyskupina v R , R nebo Air, je-li hydroxyalkylová skupina v R nebo R , je-li hydroxyalkoxyskupina v R¹, je-li aminoskupina v R¹, R³ nebo Ar, je-li aminoalkylové skupina v R ,je-li alkylaminoalkylové skupina v R , je-li karboxylové nebo karboxyalkylová sku2 3 pina v R nebo R nebo je-li merkapto nebo merkaptoali ' 2 3 kýlová skupina v R _r R nebo R , je jakákoliv amino, karboxy a merkaptoskupina chráněna obvyklou chránící skupinou, například jak je uvedena výše a jakákoliv hydroxyskupina může být chráněna obvyklou chránící skupinou, jak je například uvedena výše, nebo alternativně jakákoliv hydroxyskupina nemusí být chráněna; 2 je odŠtěpitelná skupina; a potom se jakákoliv nežádoucí, chráq nící skupina R odstraní obvyklými způsoby, jak jsou například uvedeny výše.

Jestliže je nová sloučenina vzorce I vyžadována ve formě farmaceuticky přijatelné soli, může být získána, například reakcí uvedené sloučeniny se vhodnou kyselinou nebo bází za použití obvyklého postupu. Jestliže je nová sloučenina vzorce I vyžadována ve formě farmaceuticky přijatelného esteru, může být získána například reakcí uvedené sloučeniny se vhodnou kyselinou nebo alkoholem za použití obvyklých postupů- Jestliže je vyžadována nová sloučenina vzorce I ve formě farmaceuticky přijatelného amidu, může být získána, například reakcí uvedené sloučeniny nebo jejích vhodného ddrivátu, jako je chlorid kyseliny s amoniakem nebo vhodným aminem.

Jestliže je vyžadována opticky aktivní forma sloučeniny vzorce 1, může být získána provedením některého z výše uvedených postupů za použití opticky aktivního vý-24chozího materiálu, nebo resolucí racemické formy uvedené sloučeniny za použití obvyklých postupů.

Jak bylo dříve uvedeno předpokládá se, že chinazoliny budou působit jako protirakovinová činidla, což bude alespoň z části způsobeno jejich schopností inhibovat enzym thymidylát syntásu. Tato protirakovinová aktivita může být studována například za použití jednoho nebo více déle uvedených postupů:

a) Tn vitro zkouška, která stanoví schopnost testované sloučeniny inhibovat enzym thymidylát syntásu. Thymidylát syntáza může být získána v částečně čištěné formě z buněl L1210 myší leukemie a být použita ve studii použitím postupu, který popsal Jackmam a spol., (Cancer Res., 1986, 46, 2810);

te) Zkouška, která stanová schopnost testované sloučeniny inhibovat růst leukemické buněčné linie LI 210 v buněčné kultuře. Test může být podobný testu popsanému v UK patentovém popise č. 2065653^ a ~c)—Zkouška·,—které-stanoví—schopnos_t^_t es to váné sloučeniny inhibovat růst rakovinové buněčné linie MCF-7 lidského prsu v buněčné kultuře. Test může být obdobný jako je test popsaný Lippoanem a spol., (Cancer Res., 1976, 36, 4595).

a Ačkoliv farmakologické vlastnosti chinazolinů podle vynálezu se mění se strukturní změnou, poskytují obecně chinazoliny podle vynálezu vlastnosti inhibice thymidylát syntásy v. následujících koncentracích: Ιβ^θ v rozmezí, například 0,001-10 nebo 20 nebo chinazoliny podle vynálezu poskytují vlastnosti inhibice LI210 buněčné linie v následujících koncentracích: IC^q v rozmezí například 0,001-50 nebo 100 ^uM.

-26Gbecně ty chinazoliny podle vynálezu, které jsou zvláště účinné, vykazují inhibici thymidylát syntásy v následujících koncentracích: ΙΟ^θ méně než 1 ^uM, nebo vykazují inhibici LI 210 buněčné linie v následujících koncentracích: ΙΟ^θ méně než 10 ^uM.

Pokud se jedné o inhibici MCF-7 rakovinové buněčné linie, obecně chinazoliny podle vynálezu vykazují vlastnosti inhibice v následujících koncentracích: ΙΟ^θ v rozsahu, například 0,1->0 nebo -100 ^uM. Zvláště výhodné chinazoliny vykazují inhibiční vlastnosti MCF-7 buněčné · linie v následující koncentraci: IC^₀ méně než 5 ^uM.

Tak, jako příklad, chinazoliiN-p-/N-(3,4-dihydro2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)amino/ benzoyl-L-glutamyl-D-glutamové kyseliny, měl IC^ rovnou 0,0046 /uM vůči thymidylát synthetase, ΙΟ^θ 0,18 /uM vůči LI210 buněčné linii a IC_5Q 0,3 vůči MCF-7 buněčné linii.

In vivo testy v myší v dávce 100 mg/kg s různými sloučeninami podle vynálezu vykázaly podstatnou ztrátu ště pění centrální amidové vazby dipeptidu, jak ukazují měření množství štěpného produktu jako procenta celkového množství původní sloučeniny a štěpného produktu přítomného v játrech nebo v plasmě myši, které byla usmrcena 1 hodinu po intraperitoneálním podání dipeptidu, tj. štěpení bylo v mezích experimentální detekce, která je. asi 9 I když je malý stupeň štěpení tohoto amidového spojení chinazolinů přijatelný při praktickém použití, je výhodná hladina štěpení při podání in vivo menší než 1 0 56, s tím, že žádoucí je hodnota ne větší než 5 56, zejména 2 56 nebo 1 56 nebo méně.

-27Chinazolin podle vynálezu může být podáván bud teplokrevnému živočichovi, včetně člověka, ve formě farmaceutického přípravku, který zahrnuje chinazolin ve spojení s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.

Přípravek může mít formu vhodnou pro orální podání, jako je tableta nebo kapsle, nebo zejména, pro parenterélní injekci nebo infuzi, být jako sterilní roztok, suspenze nebo emulze, nebo pro topické podání, být ve formě masti nebo krému, nebo pro rektální podání být ve formě čípku»

Přípravek může obsahovat navíc, k chinazolinu podle? ,_u vynálezu, jednu nebo více jiných protirakovinových substancí vybraných, například z mitotiokých inhibitorů, například vinblastin; alkylačních činidel, např. cisplatiny, karboplatiny a cyklofosfamiduj jiné antimetabolity, například 5-fluorouracil, cytosin-arabinosid a hydroxymočovinuj interkalatační antibiotika, například adriamyein a bleomycin} enzymy, například asparaginázu} ±nhihitory^opO^,tsotter6syv-napřfk3^d--e^rtoposlď-a-modifiká-tory biologické odezvy, například interferon.

Chinazolin se normálně podává teplokrevnému živočichovi v rozmezí 50-25000 mg na metr čtvereční tělesné plochy živočicha, tj. přibližně v dávce 1-500 mg/kg,

Lze použít 1 dávku mimo toto rozmezí a, zejména, se použije výhodný způsob podání, zahrnující subkutánní infuzi, pak může být dávka zvýšena na 1-1000 mg/kg. Používá se výhodné denní dávka v rozmezí 1-50 nebo 1-150 mg/kg, zejména 30-80 mg/kg.

Předložený vynález také zahrnuje způsob regrese a zmírnění rakoviny u teplokrevného Živočicha,který v případě potřeby takového ošetření zahrnuje podání takovému živočichovi účinného množství výše definovaného chinazolinu

-28Předložehý vynález také poskytuje použití takového chinazolinu při výrobě nových léčiv pro použití při léčbě rakoviny.

Chinazoliny podle předloženého vynálezu jsou zajímavé pro široký okruh protinádorových aktivit, zejména u lidí, zahrnujících léčbu rakoviny prsu, vaječníků a jater. Déle jsou zajívamé v souvislosti s léčbou mnoha leukémií, lymfoidních malignit a pevných tumorů jako je karcinom a sarkom.

hlediska aktivity prokázané 'antimetabolity jako je aminopterin a metotrexát, které jsou diskutovány výše, jsou chinazoliny podle předloženého vynálezu také zajímavé pro použití při léčbě jiných stavů, například alergických stavů jako je lupénka. Při použití chinazolinu podle vynálezu pro takové účely bude sloučenina normálně podávána v dávce v rozmezí 50-25000 mg na čtvereční metr tělesné.plochy živočioha, tj. přibližně 1-500 mg/kg. Může však být použita i dávka mimo toto rozmezí. Obecně pro léčbu alergického stavu jako je lupénka, je výhodné topické podání chinazolinu podle předloženého vynálezu. Například pro topické podání může být použita denní dávka v rozmezí, například, 1-50 nebo 1-150 mg/kg, výhodně 3080 mg/kg.

Přípravky obsahující chinazoliny mohou být formulovány v jednotkové dávkové formě, tj. ve formě diskrétních podílů, kde každý obsahuje jednotkovou dávku, nebo násobné nebo subnásobné jednotkové dávce, například v rozsahu množství chinazolinu v rozmezí 1 -250 nebo 500 mg.

Vynález je ilustrován následujícími příklady.

-29Přiklady provedeni vynálezu

Struktury všech sloučenin podle vynálezu byly potvrzeny protonovou magnetickou rezonanční a hmotovou spektroskopií a elementární analýzou. Protonová magnetická rezonanční a hmotová speiftra byla stanovena za použití Bruker WM250 spektrometru, pracujícího při 250 MHz. Chemická posuny jsou uváděny v dílech na milion (parts per million) vzhledem k tetraměthylsilanu jako vnitřnímu standardu stupaioe) a multiplicity píků jsou následující i s singlet; d dublet, d nebo d*s dublet dubletů; t triplet; m multiplet, také jsou uvedena hodnocení před- b’ · pokládaná jako vhodná pro každý signál. Hmotová spektra * byla získána použitím spektrometru VG analytical ZAB SE s ionizací bombardováním rychlými atomy (fast atom bombardment - FAB) nebo spektrometru Finnigan TSQ 700 s elektrospfejovou ionizací (ESI). Tam, kde je to vhodné, jsou uvedeny hodnoty bud pozitivního iontu nebo negativního iontu.

Sloupcová chromatografie byla provedena za použití silikagelu Merch Art 15111.

Meziprodukty pro přípravu sloučenin podle vynálezu,

O A 8 obsahující jiné skupiny R , R , λ až R a Ar jsou popsány v UK patentech 2065653, 2175903, 2188319 a 2202847 a v Uk přihlášce 2217709, 2227016 a 2244708 a v jejich ekvivalentech podaných v jiných zemích.

Příklady

Příklad 1

N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)N- (prop-2-inyl)amino/benzoyl-k- -glutamyl-D-glutamová kyselina

-301) tri-terc.Butyl-L-^-glutamyl-D-glutarnát kyselina D-glutamová (5,θθ g), terč.butylacetát (100 ml) a 70% vodná kyselina chloristá (6,3 g) se míchá při teplotě místnosti 4 dny. Směs se pak ochladí na lázni Ιθά-voda a extrahuje se 0_t5N kyselinou chlorovodíkovou (j 100 ml). Spojené vodné extrakty se ihned neutralizují pevným hydrogenuhličitanem sodným. Vodný roztok se extrahuje diethyletherem (3 x 100 ml), etherové extrakty se spojí, suší nad bezvodým síranem sodným a ether se odpaří ve vakuu, získá se di-terc.butyl-D-glutamát (0,855 g)

K míchanému roztoku o^-terc.butyl-N-benzyloxýkarbonyl -L-glutamátu (org.Prep.Proo.Int., 1985, 17, 416; 1,011 g) a N-methylmorfolinu (0,303 g) v suchém tetrahydrofuranu (10 ml) ochlazenému na -20 °C se přidá isobutylchlorformiát (0,408 g). Po 10 minutách sepĎidá roztok di-terc. butyl-D-glutamátu. V míchání se pokračuje 10 minut při -20 °C a pak při laboratorní teplotě po l hodinu. Odfiltruje se hydrochlorid N-methylmorfolinu a filtrát se odpaří ve vakuu. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu (100 ml) a promyje se 10% vodnou kyselinou citrónovou (2 x 50 ml), nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a zředěným vodným chloridem sodným (100 ml), potom se suší nad bezvodým síranem sodným, zfiltruje a odpaří se ve vakuu. Zbytek se čistí chromatografií na sloupci silikagelu za použití 2% MeOH v dichlormethanu jako elučního činidla. Produkt se trituruje v hexanu a fil trací se izoluje bílá pevné látka.Promyje se hexanem a suší ve vakuu. Získá se tak tri.terc.butyl-N-/N-(benzyloxykarbonyl)-L-^-glutamyl/-D-glutamát (1,363 g), t.t.

110 °C.

NMR spektrum (CD^SOCDp: 1,39 (s, 27H, C(CH₃)₃), 1,73,

1,89 (<x m, 4H,^-CH₂), 2,23 (m, 4H, ,j_A -CHg), 3,89 (m,

1H, glu^ <Z-CH), 4,10 tm, 1H, glu_D o( -CH), 5,03, 5,04

-31(A3q 14,0 Hz, 2H, ArCHg), 7,36 (m, 5H, ArH), 7,63 (d, 7,7 Hz, 1H, glu_L NH), 8,13 (d, 7,7 Hz, 1H, glujj NH).

Hmotové spektrum (pozitivní ion FAB): m/e 579 (M+H)⁺. Elementární analýza pro ^30^45^2¾ vypočteno 62,27 % C, 8,01 % H, 4,84 % N nalezeno 62,30 % 0, 7,95 % H, 4,85 % N.

Roztok tri-terč.butyl-N-/N-(benzyloxykarbonyl)-Lglutamyl/-D-glutamátu (0,867 g) v ethylacetátu, obsahující 10% Pd/C (0,1 g) se míchá pod vodíkem 2,5 hodiny. Katalyzátor se odstraní filtrací a filtrát se odpaří do- ’ sucha ve vakuu, získá se tri-terc.butyl-L-q^-glutamyl-Dglutamát (0,666 g).

2) Kyselina p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin6-ylmethyl/-N-(prop-2-inyl)benzoová

Směs terc.butyl-p-aminobenzoátu (Synth.Commun., 1984, Ϊ4, 921, 10,5~gΓ, propargylbromidu—(-77-3-ml—80%~roztoku~v— toluenu), uhličitanu draselného (7,5 g) a N,N-dimethylaoet amidu (85 ml) se zahřívá na 50 °C 24 hodin, ochladí a filtruje a odpaří. Zbytek se Čistí chromatografii na sloupci silikagelu za použití 6:1 obj./obj. směsi hexanu a ethylacetátu jako elučního Činidla.

Směs produktu (7,3 g), 6-brommethyl-3,4-dihydro-2methylchinazolin-4-onu (8 g, připravený jak je popsáno v příkladu 3 UK patentu 2188319B), uhličitanu vápenatého (3,2 g) a dimethylformamidu (100 ml) se míchá při teplotě místnosti 65 hodin, zfiltruje se a odpaří. Zbytek se čistí chromatografii na sloupci silikagelu za použití ethylacetátu jako elučního činidla.

-32Směs produktu (2,5 g) a kyseliny trifiuoroctové (25 ml) se míchá při teplotě místnosti 10 minut a odpařením se získá kyselina p-aminobenzoové jako sůl s kyselinou trifluoroctovou (2,5 g).

3) Kyselina N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin.6-ylmethyl)-N-(pro-2-inyl)amino/benzoyl-L- ^-glutamyl-D-glutamová

Směs trifluoracetátové soli kyseliny p-/Ň-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)“N-_prop-2-xnyl)amino/benzoové (0,461 g) a tri-terc.butyl-L--glutsmyl-Dglutamátu (0,666 g) se rozpustí v suchém dimethylformamidu (15 ml) při teplotě místnosti a k tomuto roztoku se přidá diethylkyanofosfát (0,359 g) a pak triethylamin (0,222 g). Směs se míchá pod dusíkem a ve tmě 2,5 hodiny a pak se zředí ethylacetátem (100 ml) a vodou (1.00 ml). Vodná vrstva se oddělí a extrahuje se ethylacetátem (2 x 100 ml). Spojené ethylacetátové extrakty se promyjí 10% vodnou kyselinou citrónovou (2 x 50 ml), nasyceným vodným hydrogenuhličitanem sodným (lOOml) a zředěným vodným chloridem sodným (100 ml), potom se suší nad bezvodýqi síranem sodným, zfiltrují a odpaří se ve vakuu. Zbytek se čistí chromatografií na sloupci silikagelu za použití 1% methanolu v ethylacetátu jako elučního činidla. Produkt se krystaluje ze směsi diohlormethan/hexan a získá se tak: tri-terc.butyl-N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4oxochinazolin-6-ylmethyl )-N- (prop-2-inyl )amino/benzoyl-L-glutamyl-D-glutamát (obsahující 0,5 ekvivalentu vody, 0,467 g), t.t. 116 až 117 °C.

NMR spektrum (CD-jSOC^): 1,38, 1,40 (2 x s, 27H, (CH-jJ-j),

O=CH), 4,10 (a, 1H, glu_D << -CH), 4,25 (m, 1H, glu_L<< -OH), 4,34 (s, 2H, CH₂C=C), 4,78 (s, 2H, chinazolin-60H₂),

-336,84 (d, J=8,8 H_Z, 2H, 3',5'-ArH), 7,54 (d, J=8,4 H_z, 1H, chinazolin θ-Η), 7,70 (dd, J= 1,6 Hz, 1H, chinazolin 7-H), 7,74 (d, J= 8,8 Hz, 2',6'-ArH), 7,96 (s, 1H, chinazolin

5-H), 8,15 (d, J= 7,5 H_z, 1H, glu_D NH),. 8,ji (d, J= 7,2 Hz, 1H, glu^ NH), 12,18 (s, 1H, laktam NH).

Hmotové spektrum (pozitivní ion FAB): m/e 733 (M⁺)

Elemetární analýza pro C^H^N^O^.Q, 5H₂O vypočteno 64,43 % C, 7,2Γ % H, 8,95 % N nalezeno 64,51 % C, 7,12 % H, 8,97% N.

Směs tri-terc.butyl-N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4oxochinazolin-6-yltnethyl )-N- (prop-2-inyl )amino/benzoyl-l*-glutamyl-D-glutamótu (0,235 g) a kyseliny trifluoroctové (10 ml) se míchá při teplotě místnosti 1 hodinu ve tmě a pod atmosférou dusíku. Roztok se pak odpaří ve vakuu a zbytek se trituruje s diethyletherem (30 ml). Bílé pevné látka se izoluje filrací, promyje se diethyletherem (4 χ 10 ml) a suSí ve vakuu. Získá se tak N-p-/N(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylínethyl)-N-(prop2-inyl) amino/benz oyl-L--glu tamyl-D-glu tamo vá kyselina (obsahující 1,4 ekvivalentu kyseliny trifluoroctové, 0,231

g), t.t. 146 až 148 °0.

NMR spektrum (CD-jSOCD^: 1,74, 1,92, 2,04 (3 x m, 4H, ft-CH₂),

2,26 (t, J=7,3 Hz, 4H, <b-CH₂), 2,39 (s, 3H, chinazolin _> 2-CH.j), 3,23 (s, 1H, feOH), 4,18 (m, 1H, glu_D * -CH),

4,31 (m, 1H, glu^ Λ-CH), 4,35 (s, 2H, 0H₂C=C), 4,80 (s, < 2H, chinazolin 6-CJi,), 6,84 (d, 0= 8,8 Hz, 2H, 3*,5^f-ArH),

7,57 (d, J=8,4 H_z, 1H, chinazolin 8-H), 7,75 (d, J= 8,7 H_z, 1H, chinazolin 8-H), 7,75 (d, J=8,7 H_z, 3H, 2',6'-ArH, chinazolin 7-H), 7,99 (s, 1H, chinazolin 5-H), 8,15 (d, σ» 7,7 Hz, 1H, glu_D NH), 8,31 (d, J= 7,5 H_z, 1H, glu^NH), 12,48 (bd, CO₂H).

-34Hmotové spektrum (pozitivní ion FAB); m/e 606 (M+H)\ Elementární analýza pro ^C3q^31^N5^9’ ¹ CF^COgfí; vypočteno 51,48%C, 4,27% H, 9,15% N nalezeno 51,49 % C, 4,46 % H, 9,49 % N.

Příklad 2

N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4—oxochinazoiin-6-yimethyl )=

N- (prop-2-inyl )amino/benzoyl-L- ^-glutamyl-2-alanin

1) Di-terc.butyl-L-Z^-glutamyl-D-alanin

K míchanému roztoku ΰί,-terc.butyl-N-karbobenzoxy-Lglutaaátu (2,022 g) a N-methylmorfolinu (0,606 g) v suchém tetrahydrofuranu (10 ml) ochlazeném na -20 °C se přidá isobutylchlorformiát (0,816 g). Po 10 minutách se přidá kašovitá směs D-alanin-!)(-terc.butylester-hydrochloridu (1,09 g) a N-methylmorfolinu (0,606 g) v tetrahydrofuranu (10 ml). V míchání se pokračuje 10 minut při -20 °0. a pak při teplotě místnosti 1 hodinu. Odfiltruje se hydrochlorid N-methylmorfolinu a filtrát se odpaří dosucha ve vakuu. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu ílOO ml) a promyje se 10% vodnou kyselinou citrónovou (2 x.50 ml), nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (100 ml) a zředěným vodným chloridem sodným (100 ml), potom se suší naď bezvodým síranem sodným, odfiltruje a odpaří ve vakuu. Zbytek se čistí chromátografií na silikagelovém sloupci za použití směsi dichlormethan:ethylacetát (poměr 2:1) jako elučního činidla. Získá se tak di-terc.butyl-N-/N-(benzyloxykarbonyl )L- γ-glutamylAD-alanin (2,3 g), t.t. 78-80 °C. NMR spektrum (CD-jSOCD^): 1,21 (d, J=7,3 Hz, 3H, als~CH₃), 1,38, 1,39 (2 x s, 18H, CÍCH-jÍ-j), 1,74, 1,90 (2 x m, 2ff, ^-CH₂), 2,18 (t, J=7,5 Hz, 2H,A-CH₂), 3,88 (m, 1H, glu<-CH), 4,06 (a, IH, ala tZ-CH), 5,02, 5,03 (ABq,

12,5 Hz, 2H, ArCH₂), 7,35 (a, 5H, ArH), 7,64 (d, J=7,7H_Z, IH, glu NH), 8,17 (ά, J= 7,0 Hz, 1H, ala NH).

-35'

Hmotové spektrum (pozitivní ion FAB) í m/e 465 (Ií+H)⁺. Elementární analýza pro Cj γΗ₂jNOg vypočteno 62,05 % C, 7,81 % H, 6,03 %' N nalezeno 61,74 % C, 7,73 % H, 6,11 % N.

Roztok produktu (0,696 g) v ethylacetátu, obsahující 10% Pd/C (0,1 g) se míchá pod vodíkem 2,5 hodiny. Katalyzátor se odstraní filtrací a filtrát se odpaří dosucha ve vakuu, získá se di-terc.butyl-L-^-glutamyl-Dalanin (0,480 g).

2) N-p-/tt-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)amino/benzoyl-L- 'u-glutamylD-alanin

Λ

Způsob popsaný v přikladu 1(3) se opakuje za použití di-terc.butyl-L-j^-giutamyl-D-alaninu (0,48 g) jako výchozího materiálu místo tri-terc.butyl-L-z^-giutamyl-Dglutamátu. Získá se tak di-terc.butyl-N-p-A-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-(prop-2- ^ψ InylAamino/benzjoyl=D=J^_=gl.u±.amy.l=I)=alan.in_(.0-^2.9-1_g.)-,_t.±. 166 až 168 °C.

NMR spektrum (CD-jSOCD-j): 1,19 (d, J=7,3 Hz, 3H, ala-CH-j), 1,37, 1,40 (2 x s, 18H, 1,96 (m, 2H, /S-CHp,

2.23 (m, 2H, ^-CH₂), 2,32 (s, 3H, chinazolin 2-CH^),

3.23 (s, 1H, <5=CH), 4,07 (kvintet, J=7,3 Hz, ala o<-OH),

4.24 (m, 1H, glu «Λ-CH), 4i?34 (s, 2H, CH₂=C), 4,78 (s,

2H, chinazolin-6-CH₂), 6,83 (d, J= 8,8 H_z, 2H, 3*,5^#-ArH),

7,54 (d, J» 8,4 Hz, 1H), chinazolin 8-H), 7,69 (dd,

1H, chinazolin 7-H), 7,73 (d, J= 8,9 Hz, 2H, 2*,6*-ArH), 7,96 (s, 1H, chinazolin 5-H), 8,19 (d, J=7,0 Hz, 1H, ala NH), 8,31 (d, J= 7,2 H_z, 1H, glu NH), 12,19 (s, 1H, laktam NH).

< -'HA' ’’ '^ζ¹·

-36Hmotové spektrum (pozitivní ion FAB): m/e 660 (M+H)⁺, elementární analýza pro °36^H45^N5°7 vypočteno 65,54 # C, 6,87 % H, 10,61 % N, nalezeno 65,45 % °, 7,Ol % H, 10,43 % N.

Di-terc.butvl-N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-čylmethyl)-N-(prop-2-Ínyl)amino/benzoyl-Lfjx -glutamyl-D-alanin (0,1 g) se zpracuje s kyselinou trifluoroctovou jak je popsáno v příkladu 1(3)· Získá se tak N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochÍnazolin-6ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)amino/benzoyl-L- ^-glutamyl-Dalanin (obsahující 1 ekvivalent CF^CC^H á 0,7 ekvivalentů etheru, 0,084 g), t.t. 180 °C (rozkl.).

NMR spektrum: (CD^SOCD-,), 1,21 (d, J= 7,3 Hz, 3H, ala-CH-j), 1,94, 2,03 (2 x m, 2H,A-CH₂), .2,22 (m, 2H, fk-CHg)., 2,38 (s, 3H, chinazolin 2-CH^), 3,23 (s, 1H, C=CH), 4,16 (m,

1H, ala X.-CH), 4,30 (m, 1H, glu ^-CH), 4,34 (s, 2H,

CH₂C=C), 4,80 (s, 2H, chinazolin ó-CHg), 6,83 (d, J=

8,3. Hz, 2H, 3',5'-AtH), 7,57 (d, J= 8,4 Hz, chinazolin 8-H), 7,74 (d, J= 8,4 Hz, 3H, 2*,6^#-ΑρΗ, chinazolin 7-H),

7,99 (s, 1H, chinazolin 5-H), 8,17 (d, J= 7,3 Hz, 1H, ala NH),

8,30 (d, J= 7,1 Hz, 1H, glu NH).

Hmotové spektrum (pozitivní ion FAB): m/e 548 (M+H)⁺ Elementární analýza pro ¢28^29^^7^3^2^^7^2¾^⁰ vypočteno 55,22 % C, 5,19 % H, 9,82 % N nalezeno 55,09 X C, 5,43 3» H, 9,79 % N_o

Příklad 3

N-p-/N-(2-Amino-j,4-dihydro-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)N- (prop-2-inyl) amino/benzo.yl-L-/^ -glutamyl-D-glutamové kyselina

1) Trifluoracetátová sůl kyseliny p-/N-(2-amino-3,4-dihyd ro-4-oxochinazolin-6-ylmethyl) -N- (pr op-2-iny 1 )amino/benzoové

-37Zósobní roztok tris-pufru se připraví rozpuštěním Trizma báze (12,11 g) a chloridu zinečnatého(0,035 g) v destilované vodě (1 litr). Disodné sůl kyseliny N-p-/N(2-amino-3,4-dihydro-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-(prop2-inyl)amino/beazoyl-L-giutaínové (1 g) (připravena jak je popsáno v příkladu 4 UK patentu 2065638) se rozpustí v tris- pufru (100 ml) při pH 10,4 a roztok se upraví na pH 7,3 použitím 2N kyseliny chlorovodíkové. Roztok se třepe při 37 a reakce se iniciuje přídavkem karboxypeptidásy G2 (200 yul zásobního roztokui 1000 j/ml, Eur. J.Siochem., 1985, 148, 447)· Po 12 hodinách se směs ochladí ledem a upraví se pH na 4 2N kyselinou chlorovodíkovou. Sraženina se odfiltruje, promyje se vodou (2x50 ml) a suší se ve vakuu nad oxidem fosforečným. Získá se taká* kyselina p-/N-(2-amino-3,4-dihydro-4-oxochinazolin-6- A ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)-amino/benzoové (0,579 g), t.t.' >300 °C (rozkl.).

NMR spektrum (CD^SOCD-j): 3,24 (d, 2,0 H_z, 1H, C=CH),

4,30 (s, 2H, CH₂C=C), 4,68 (s, 3H, chinazolin ó-CHg), * 6,40 (s, 2H, chinazolin 2-NHg), 6,84 (d, J= 7,3 H_z, 2H, 3^z,5'-ArH), 7,17 ťdď, d= 8,3, 1,5 Hz, 1H, chinazolin 7-H), 7,49 (d, 8,5 Hz, 1H, chinazolin 8-H), 7,76 (d, J= 8,2

H_z, 3H, 2* 6'-ArH, chinazolin 5-H), 11,30 (s, 1H, laktam NH).

Směs produktu (0,579 g) a kyseliny trifluoroctové (10 ml) se míchá při teplotě místnosti 1 h za tmy a pod atmosférou dusíku. Roztok se pak odpaří ve vakuu a zbytek se trituruje s diethyletherem (50 ml). Pevné látka se izoluje filtrací, promyje se diethyletherem (4x10 ml) a suší se ve vakuu. Získá se tak trifluoracetátová sil kyseliny p-/N-(2-amino-3,4-dihydro-4-oxochinazolin-6ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)amino/benzoové (0,765 g), t.t.

251 °C.

NMR spektrum (CD-jSOCDpi 3,27 (s, 1H, C=CH), 3,70 (s, 1H, COgH), 4,35 (s, 2H, CH₂C=C), 4,76 (s, 2H, chinazolin

6-CH₂), 6,82 (d, J= 8,7 H_Z, 2H, 3,* 5*-A_rH), 7,38 (d,

8,4 H_z, 1 Η), chinazolin 8-H), 7,70 (m, 1H, chinazolin Mí), 7,75 Cd, J- 8,7 H_Z, 2H, 2',6*-A_rH), 7,88 l_s, 1H,

-38chinazolin 5-Η), 8,04 (s, 2Η, chinazolin 2-NH₂), 12,2© (s, 1H, laktam NH).

2) N-p-/N-(2-Amino-3,4-dih,ydro-4-oxochinazolin-6-ylmethyl )-N-(prop-2-inyl )amino/benzo,yl-L- -γ,-glutamyl-Dglutamová kyselina.

Způsob popsaný v příkladu 1(3) se opakuje za použití trifluoracetátové soli kyseliny p-/N-(2-amino-3,4-dihydro-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)amino/benzoové (0,46 g) jako výchozího materiálu místo trifluoracetátové soli kyseliny N-p-/N-(3,4-dihydro-2- methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)amino/benzoové. Takto se získá tri-terč.butyl-N-p-/N-(2-aminoJ,4-dihydro-4-oxochinazolin-6-ylmethylM-(grop-2-inyl)amino/benzoyl-L-^-glutamyl-D-glutamát (0,532 g), t.t.

123 až 125 °C.

NMR spektrum (CD-jSOCD^): 1 ,38, 1,40 (2 x s,. 2?H, CCCH^,

1,71 , 1,89, 1,97 (3 x m, 4H, ^-0¾), 2,24 (m, 4H, /k-CH₂),

3,22 (s, 1H, C=CH), 4,10 (m, 1H, gluDo<-CH), 4,24 (m, 1H, gluL 4,28 (s, 2H, CH C=C), 4,66 (a, 2H, chinazolin 6-CH₂), 6,31 (s, 2H, chinazolin 2-NHg), 6,84 (d, J*

8,8 Hz, 2H, 3*,5*-ArH), 7,16 (d, J= 8,5 Hz, 1H, chinazolin 8-H), 7,49 (dď, J 8,3, 1,0 Hz, 1H, chinazolin 7-H)_t 7,74 (d, J= 8,8 H_Z, 2H, 2',6'-A_rH), 7,78 (d, J= 1,4 H_z,

1H, chinazolin 5-H), 8,16 (d, J= 7,6 Hz, 1H, glujj NH),

8,32 (d, J= 7,3 Hz, 1H, gluL NH), 10,94 (s, 1H, laktam NH).

Hmotové spektrum (pozitivní ion FAB): m/e 775 (M+H)⁺. Elementární analýza pro C₄0,5^0 vypočteno 62,81 % C, 7,07 % H, 10,27 % N nalezeno 62,84 % C, 7,09% H, 10,74 % N.

Tpi-terc.butyl-N-p-/N-(2-amino-3,4-dihydro-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)amino/benzoyl-L- glutamyl-D-glutamát (0,1 g) se zpracuje s kyselinou trifluoroctovou jak je popsáno v příkladu 1(3)· Získá se

-39tak N-p-/řJ- (2-amino-3,4-dih,ydro-4-oxochinazolin-6_Tylmethyl )-N-(prop-2-inyl )amino/benzoyl-L- <^-glutamyl-Bglutamová kyselina (obsahující 0,7 ekvivalentu CFjCOOH a 1 ekvivalent HgO, 0,099 g), t.t. 211 až 213 °C·.

NMR spektrum (CD-^SOCL-j); 1,74, 1,93, 2,04 (3x m, 4H, /3-CH₂), 2,25 (m, 4H, ^-CH-₂), 3,23 (_s, 1H, fcCH), 4,18 (m, 1H, glu_D*-CH), 4,32 (m, 3H, CH₂C=C a glu_L^-CH),

4,73 (s, 2H, chinazolin 6-CH₂), 6,83 (a, J= 8,4 Hz, 2H, 3*,5*-ArH), 7,33 (d, J=8,3 Hz, 1H, chinazolin 8-H),

7,65 (d, Ja 8,6 Hz, 1H, chinazolin 7-H), 7,75 (d, J=

8,2 Hz, 4H, 2',6*_ArH a chinazolin 2-NH₂),7,87 (s, 1H, chinazolin 5-H), 8,16 (d, J= 7,5 H_z, 1H, glu^ NH), 8,32 Cd, Ja 7,3 H_z, 1H, glu_LNH), 12,44 (br, COpH). <

Hmatové spektrum (pozitivní ion FA8): m/e 629 (M+Na) . / Elementární analýza pro Ο^Η^θΝ^Ο^.Ο, 7 CFjCOOH.^O vypočteno 51,83 % C, 4,68 % H, 11,93 % N, 5,66 % C, nalezeno 51,71 % C, 4,54 % H, 11,81 % N, 5,65 % F.

Příklad 4

N-.p-./N—(-3_T4~d-i-^y d-r c-2-me thy-l--4'-oxo uh±n azO±i'n-ó-aylmethyT)”

N-(prop-2-inylůamino/benzoyl-L-/^-glutamyl-D-fenylalanin ) Pi-terc.butyl-L-/j\-giutamyl-B-fenylalanin

N-Benzyloxykarbonyl-D-femylalanin (ě,99 g) se rozpustí v dichlormethanu (83 ml) v 500ml tlakové nádobě. K tomuto roztoku se přidá koncentrovaná kyselina sírová (0,37 ml) a pak kapalný isobutylen (41 ml) při -20 °C. Výsledný roztok se třepe při teplotě místnosti 28 hodin a pak se neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Přidá se ethylacetát (150 ml), oddělí se dvě vrst vy a vodná vrstva se promyje dalším ethylacetátem (1 x 100 ml). Spojené organické extrakty se postupně promyjí nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2x100 ml) a vodou (2 x 100 ml). Po sušení, nad síranem hořečnatým

-40se rozpouštědlo odstraní ve vakuu a získá se bílá pevné látka. Tato látka se čistí chromatografií na sloupci silikagelu za použití 5% ethylacetátu v dichlormethanu jako elučního činidla. Získá se terc.butyl-N-benzyloxykarbonyl-D-fenylalanin (2,53 g), t.t. 80-81 °C.

NMR spektrum (CD₃SOCD₃): 1,33 (s, 9H, C(CH₃)₃, 2,90 (šd a, 2H, (P-CH₂), 4,13 (a, 1H, 4,99 (m, 2H,

7,29 (a, 10H, 2 x Ar), 7,72 (d, J= 7,7 H_z, 1H, NH).

Hmotové spektrum (C.I.): m/e 356 (M+H)⁺.

Elementární analýza pro vypočteno 70,96 % C, 7,09 % H, 3,94 % N nalezeno 70,80 %-C, 7,02 % H, 3,91 % N. .....

Roztok produktu (2,45 g) v ethylacetátu (220 ml), obsahující 10% Pd/3 (0,26 g) se míchá pod vodíkem 15 hodin. Katalyzátor se odstraní filtrací a filtrát se zahustí za vakua, získá se terč.butyl-E-fenylalanin (1,50 g).

K míchanému roztoku cís-terc.butyl-N-benzyloxykarbonyl-L-giutamátu (1,051 g) a N-methylaorfolinu (0,315 g) v suchém tetrahydrofuranu (5 ml) ochlazeném na -20 °C) se přidá isobutylchlorformiát (0,424 g). Po 10 minutách se přidá roztok terč.butyl-D-fenylalaninu (0,69 g) v suchém tetrahydrofuranu (5 ml). V míchání se pokračuje 10 minut při -20 °C a potom při teplotě místnosti 2 hodiny. Hydrochlorid N-methylmorfolinu se odfiltruje a filtrát se koncentruje ve vakuu, Zbytek se čistí chromatografií na sloupci silikagelu za použití gradientu (10% ethylacetát v dichlormethanu a 20% ethylacetát v dichlormethanu) jako elučního činidla. Získá se di-terc.butyl-/N-(benzyl oxykarbonyl)-L- ^-glutamyl/-D-fenylalanin (1,45 g), t.t. 79 až 80 °C.

NMR spektrum (CDjSOCD^,-1,31, 1,38 (2 x s, 13H, 2 x C<CHj>₃) 1,69, 1,85 (2 x m, 2H, glu/J-OHg), 2,16 (t, 7,0 H_z, 2H), glu ^-CH₂), 2,90 (a, 2H, phe), 3,87 (a, 1H, glu <X-CH), 4,32 (a, 1H, phe ^-CH), 5,02 (m, 2H, ArCH OCO),

-417.23 (m, 5H, phe Ar), 7,35 (®, 5H, ArCH₂OCO),

7,62 (d, 7,7 H_z, 1H, gluNH), 8,24 (d, J= Z,7 Hz, 1H, phe NH).

Hmotové spektrum (C.I,) m/e 541 (M+H)⁺.

Elementární analýza pro ^G3Q^H4QN₂0y vypočteno 66,65 % C, 7,46 % H, 5,18 % N.

nalezeno 66,61 % C, 7,50 % H, 5,13 % N.

Roztok di-terc. but.yl-N-/N-(benzyloxykarbon.yl)-L- ¹ glutamyl/-D-fenylalaninu (0,700 g) v ethylacetátu (90 ml), obsahující 10% Pd/C (0,96 g) se míchá pod vodíkem 2,5 hodiny. Katalyzátor se odstraní filtrací a filtrát se zahustí ve vakuu, získá se di-terc.butyl-L- -glutamyl-Dfenylalanin (0,514 g). _s |

2) N-p-/N-(3,4-óihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl )-N-(prop-2-inyl)amino/benzoyl-L-,y\-glutamyl-Dfenylalanin ,

Opakuje se postup popsaný v příkladu 1(3) za použití S# di-terc.butvl- -glut.amy-l^D-£eny^alaninuU0.,jL4-7-g-)místo tri-terc.butyl-D-glutamátu. Získá se di-terc.butylN-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)N-(prop-2-inyl)amino/benzoyl-L- ^-glutamyl-D-fenylalanin (obsahující 1,5 ekvivalentu vody, 0,377 g), t.t. 115117,5 °C.

NMR spektrum (CD-jSOCD-j): 1 ,29, 1,39 (2x s, 18H, 2 χ CfCH^)^,

1,92 (m, 2H, glu7)-CH₂), 2,20 (t, J= 7,3 H_z, 2H, gluň -0¾).

2,32 (s, 3H, chinazolin 2-CH^), 2,89 (m, 2H, phe ^-CHgAr),.

3.23 (s, 1H, C=CH), 4,33 (m, 4H, CH₂C=C, gluX-CH a phe ck-CH), 4,78 (s, 2H, chinazolin 6-CHg), 6,83 (d, J= 8,6

Hz, 2H, 3*,5'ArH), 7,20 (m, 5H, phe Ar), 7,54 (d, J= 8,4

Hz, chinazolin 8-H), 7,71 (t, J= 8,6 Hz, 3H, 2',6'-ArH a chinazolin 7-H), 7,96 (s, 1H, chinazolin 5-H), 8,28 Ct,

J= 7,0 H_z, 2H, glu NH a Phe NH), 12,19 (s, 1H, laktam NH).

Dí-terc. butyl-N-p-/N- (3,4-d ihydro-2-me thyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-(prop-2-inyl )amino/benzoyl-Líy\-glutamyl-D-fenylalanin (0,208 g) se zpracuje s kyselinou trifluoroctovou jak je popsáno v příkladu 1(3)*

Získá se tak N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl )-N-(prop-2-inyl)amino/benzOyl-L- -glutamyl-D-fenylalanin (obsahující 1 ekvivalent kyseliny trifluoroctová a 0,7 ekvivalentu vodyf 0,193 g), t.t. 130 ’C (rozkl.).

NMR spektrum (CD₃SOCD₃)i 1,92 (bd m, 2H, glu β-CHg),

2,17 (t, Js 7,3 H_Z, 2H, glu /b-CHg), 2,41 (s, 3H, chinazolin 2-CHj), 2,81 (dd, = 13,6 Hz, dg= 9,® Hz, IH) a 3,02 (dd, d₄= 13,6 Hz, J₂= 4,9 Hz, ÍH, ArCHg),.

3,24 (s, 1H, C=CH), 4,35 (o, 4H, CH₂C=C, gluA-CH a phe X-Cff), 4,81 (s, 2H, chinazolin 6-Cffg), 6,82 (d, d=S,8 Hz, 2H, 3*,5*ArH), 7,21 (m, 5H, phe Ar), 7,58 Cd,

8,4 Hz, 1H, chinazolin &rH), 7,74 (m, 3H, 2',6'-ArH a chinazolin 7-H), 8,00 (s, 1H, chinazolin 5-H), 8,22 (d, d=

8,9 Hz, ?TH_r amidiffiký NH), 8,29 (d, J= 7,4 H_z, 1H_T amidický NH),

Hmotové spektrum (pozitivní ion FAB): m/e 624 (M+H)’, Elementární analýza pro C^H^N^O^.CFjCOOH.G^HgO vypočteno 57,63 % C, 4,75 % H, 9,33 % N, 7,60 % F, nalezeno 57,41 % 0, 4,77 % H, 9,41 % N, 7,77 % F.

Příklad 5

N-p-/N-(3,4-dihydro-2,7-dimethyl-4-oxochinazolin-6ylmethyl )N-prop-2-inyl )amino/benzoyl-i*- /‘p-glutamyl-Dglutamová kyselina

Opakuje se postup popsaný v příkladu 1 (3) za použití p-/N-(3,4-dihydro-2,7-dimethyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl) N-(prop^2-Ínyl)aminobenzoové kyseliny ve formě trifluoracetétové soli /0,475 g, její příprava je popsána v příkladu 10 UK patentu 22028478/ jako výchozí látky místo Np- (3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl )-N-43(prop-2-in,yl)amino/benzoové kyseliny jako trifluoracetétové soli. Získá se tri-terc.butyl-N-p-/ří-(3,4-dihydro-2,7dimethyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl4-N-(prop-2-inyl )amino/benzoyl-L-/)|\-glutamyl-D-glutamát (obsahující u,5 ekvivalentu vody, 0,460 g), t.t. 159 až 161,5 °C,

NMR spektrum (CD^SOCD-j): 1,37 , 1 ,40 (2 x s, 27H, 3 x

C(CH₃)₃), 1,71, 1,90 (2 x m, 4H, 2 χ /i-CH₂), 2,24 (t,

J= 7,0 Hz, 4H, 2 χ ^-0Η₂), 2,3¼ 2,44 (2 x s, bH, ohinazolin 2-CH₃a chinazolin 7-CH₃), 3,21 (s, 1H, C=CH), 4,06 (m, 1H, glUjj dl-CH), 4,28 (m, 3H, CH^C a glu_L^-CH), 4,67 (s, 2H, chinazolin 6-CřL,), 6,80 (d, J= 7,9 Hz, 2H, 3*,5*ArH), 7,43 (s, 1H, chinazolin &rH), 7,72 (s, 1H, chinazolin 5-H), 7,75 (d, J= 7,6 H_z, 2H, 2*,6'-ArH), 8,16 (d, ₅ J= 7,3 Hz, 1H, glu_D NH), 8,34 (d, J= 7,1 H_z, 1H, glu_L NH), . 12,09 (a, 1H, laktam NH). .«·

Hmotové spektrum (pozitivní ion FAB): m/e'810 (M+Na)⁺.

Elementární analýza pro ¢43^570^.0,5^0 vypočteno 64,81 % C, 7,34 % H, 8,7% N I nalezeno 64,91 % C, 7,34 % 5, 8,80 % N. .

Tri-tere. butyl-N-p-/tt-(3,4-aihydro-2,7-dimethyl-4oxoohinazolin-6-ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)amino/benzoylL-γ-glutamyl-D-glutamát (0,218 g) se zpracuje s kyselinou trifluoroctovou jak je popsáno v příkladu 1(3).

Získá se tak N-p-/tt-(3,4-dÍhydro-2,7-dimethyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-(prop-2-inylJamino/benzoyl-L- glutamyl-D-glutamové kyselina (obsahující 1 ekvivalent kyseliny trifluoroctové, 0,5 ekvivalentu diethyletheru a 1,3 ekvivalentu vody, 0,198 g), t.t. 160 °C (rozkl.).

NMR spektrum (CD₃SOCD₃): 1,74 , 1,91 (2 x m, 4H, 2 x^-CHg),

2,23 (m, 4H, 2 x qfs-CHg), 2,42, 2,48 (2 χ a, 6H, chinazolin 2-CH₃ a chinazolin 7-CHp, 3,22 (s, 1H, C=CH), 4,18 (m, 1H, glu_Ddk-CH), 4,31 (m, 3H, CH C=C a glu_L X-CH),

4,71 (s, 2H, chinazolin 6_TCH₂), 6,80 (d, J= 8,6 H_z, 2H,

-443*,5*-ArH), 7,47 (s, 1Η, chinazolin θ-Η), 7,76 (d, <J=

8,7 Hz, 3H, chinazolin 5-H a 2',6'-A_rH), 8,15 (d, J=

7,6 H_z, 1H, glup NH), 8,34 (<3, J= 7,4 Hz, 1H, glu_L NH), hmotové spektrum (pozitivní ion FAB): m/e 642 (M+Na)⁺. Elementární analýza pro C^^H^N^O^.OPjOOOH.OjSXCgN^®·

1.3ΗΛ) vypočteno 52,94 % 0, 5,28 % H, 8,82 % N, 7,18 % F nalezeno 53,00,% C, 5,41 % H, 8,65 % N, 7,10 % F.

Příklad 6

N-p-/W-<3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylme.thyl )N-(prop-2-inyl )amino/-o-fluorbenzoyl-L-^-glutamyl-Dglutamovó kyselina

Opakuje se postup popsaný v příkladu 1(3) za použití pvN-(3,4-dihydro-2-meth.yl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N(prop-2-inyl)amino/-o-fluorbenzoové kyseliny jako trifluoracetétové soli, t.ti > 300 °C /0,479 g, připravena analogickým postupem jak je popsán.v příkladu 1(2) za použití terc.butyl-p-N-(prop^2-inyl)aaino-o-fluorbenzoátu, který se získá reakcí terc.butyl-p-amino-o-fluorbenzoátu 3 propargylbromidem/ jako výchozího materiálu, místo p-/to-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)N-(prop-2-lnyl)-amino/benzoové kyseliny jako trifluoracetátové soli· Získá se tak tri-terc.butyl-N-p-/N-(3,4dihydro-2-methyl-4-oxochÍnazolin-6-ylmethyl)-N-(prop-2inyl )amino/-o-fluorbenzoyl-L- í^-glutamyl-D-glutamát (obsahující 0,5 ekvivalentu vody, 0,650 g), t.t. 105 až 108 °0. NO spektrum (CDjSOCDp: 1,37, 1,40 (2 x s, 27H, 3 x C(CH₃)₃), 1,70, 1 ,88 (2 x m, 4E, 2 x 0-0¾).. 2,22 (m, 4H, x_t-0H₂), 2,32 (s, 3H, chinazolin 2-OH,), 3,26 (s, 1H, C=CH), 4,11 (m, 1H, glu_D X-CH), 4,25 (m, 1H, glu_L ?\~CH),

4,36 (s, 2H, CH₂C=C), 4,79 <s, 2H, chinazolin*S-CH₂),

6,65 (m, 2H, 3*,5'-ArH), 7,52 (t, J= 9,0 H_z, 2H, chinazolin 8-H a ό'-ΑτΗ), 7,68 íd, U= 8,4 Hz, 1H, chinazolin

-457-H), 7,95 (m, 2H, chinazolin 5-H a glu^ NH), 8,14 (d, Js 7,6 Hz, 1H, glu_D NH), 12,20 (s, 1H, laktam NH). Hmotové spektrum (pozitivní ion FAB); m/e 814 (M+Na)⁺, Elementární analýza pro C^H^N^F.0,5 HgO vypočteno 62,98 % 0, 6,93 % H, 8,74 % N, 2,3 % F nalezeno 63,09 % C, 6,93 % H, 8,58 % Ν’, 2,32 % F.

Tri-terc.butyl-N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)amino/-o-fluorbenzoylL- ^-glutamyl-D-glutamát (0,247 g) se zpracuje s kyselinou trifluoroctovou jak je popsáno v příkladu 1(3).

Získá se tak N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxoohinazo- .,._w lin-6-ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)amino/-o-fluorbenzoyl-LI ίγ-glutamyl-D-glutamová kyselina (obsahující 1,5 ekviva- ·',. ·'$ lentu kyseliny trifluoroctové, 0,6 ekvivalentu diethyletheru a 0,5 ekvivalentu vody, 0,170 g), t.t. 115 °C (rozkl,).

te spektrum (CD^SOCD^Jí 1,74, 1,91 (2x m, 4H, 2 χ fr-ΡΗ^), |

2,22 (m, 4H, 2 x ^-0H₂), 2,45 (s, 3H, chinazolin 2-0¾). ..

3,27 (s, 1H, QaOH), 4,16 (m, 1H, glu_p A-OH). 4.38 (m,_ 3H._

0Η₂σ=Ο a glu_L«-CH), 4,84 (s, 2ff, chinazolin 6-0¾). 6,66 (a, 2H, 3*,5*-ArH), 7,57 (m, 2H, chinazolin 8-H a 6'-Arff),

7,79 (d, J= 3,6 H_Z, 1H, chinazolin 7-H), 8,01 (m, 2H, chinazolin 5-H a glu^ NH), 8,15 (d, J“ 7,6 Hz, 1H, glujj NH).

Hmotové spektrum (pozitivní ion Fab)í m/e 646 (M+Na)⁺.

Elementární analýza pro Ο^θΗ^θΝ^Ο^Ρ. 1,50^00011.0,6(02¾¾°.

0,5H₂O vypočteno 50,13 % C, 4,58 % H’, 8,25 % N, 12,32 % F nalezeno 50,06 % C, 4,73 % B, 8,04 % N, 12,02 % F.

Příklad 7

N-p-/N-(3,4-dihydro-2,7-dimethyl-4-oxochinazolin-6ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)amÍno/-o-fluorbenoyl-L-^,glutamyl-D-glutamová kyselina

-46Opakuje se postup podle příkladu 1(3) za použití p-/říA3,4-dihydro-2,7-dimethyl-4-oxochinazolin-6-y lme thyl )N-(prop-2-inyl )amino/-o-fluorbenzoové kyseliny jako trifluoracetétové soli (0,493 g> připravené analogickým postupem jak je popsán v příkladu 14 UK patentové přihlášky 2244708A, ale za použití 6-brom£thyl-3,4-dihydro-2,7* dimethylchinazolin-4-onu) jako výchozí látky místo trifluoracetátové soli p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-óxochinazolin-6-ylmethyl )-N-(prop-2-inyl)amino/benzoové kyseliny. Získá se tak tri-terc.butyl-N-p-/N-(3,4-dihydro-2,7dimethyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)amino/o-f luor benz oyl-D-/^-giutamyl-D-glutamát (obsahující 0,5 ekvivalentu vody, 0,660 g), t.t. 149,5 až 150,5 °C.

NMR spektrum (CD^SOCD·,) í 1,37’ , 1,40 (2 x &, 27ΪΓ, 3 x C(Cff₃)₃), 1,71, 1,88 (2 x m, 4H, 2 x/J-CHp, 2,23 (m, 4H, x -CH₂), 2,30 , 2,43 (2 x s, 6H, chinazolin a

7-Cffp, 3,25 (s, 1H, C=CH), 4,09 (m, 1H, glu_D<-0H), 4,30 (m, 3H, CH₂Qš.C a glu_ij^-CH’), 4,69 (s, 2H, chinazolin 6-CH₂),

6,65 (a, 2H, 3*,5*-ArH), 7,44 (s, 1H, chinazolin 8-H),

7,54· (t, Hz, 1H, 6*-ArH), 7,69 (s, 1H, chinazolin

5-H), 8,01 (t, J= 6,5 Hz, 1H, glu_L NH), 8,14 (d, J= 7,5 Hz, 1H, glu_D NH), 12,10 (s, 1H, laktam NH).

Hmotové spektrum (pozitivní ion FAB).’m/e 828 (M+Na)⁺. Elementární analýza pro C^HijgNj-O^F.OjSHgO vypočteno 63,38 % C, 7,00 % H, 8,59 % N, 2,33 % F nalezeno 63,37 % C, 6,93 % H, 8,59 % N, 2,51 % F.

Tri-terc. butyl-N-p-/N-(3,4-dihydro-2,7-dimě thyl-4oxochinazolin-6-y lme thyl) -N- (prop-2-inyl) amino/ -o-f luorbenzoyl-L-i^-giutamyl-D-glutamát (0,243 g) se zpracuje s kyselincu trifluoroctovou jak je popséno v příkladu 1(3)· Získá se tak N-p-/N-(3,4-dihydro-2,7-dimethyl-4oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)amino/-0-fiuorbénzoyl-L-''Jx-glutamyl-D-glutamová kyselina (obsahující 1 ekvivalent kyseliny trifluoroctové, 0,5 ekvivalentu diethyletheru a 0,6 ekvivalentu vody, 0,220 g), t.t.

-Μ'

155 °C (rozkl).

NMR spektrum· (CDjSOCD₃)í 1,73, 1,91 (2 x m, 4H, 2 χ ^0Η₂), 2,04 (m, 4H, 2 x- -0¾), 2,41 , 2,47 (2 x s, 6H, chinazolin 2-0¾ a. 7-CH₃), 3,26 (s, 1H, C=OH>, 4,16 (m, 1H, glu_D ol-CH), 4,33 (s, 3H, CH₂C=C a glu_L<=<-CH), 4,73 (s,

2H, chinazolin 6-0¾), 6,62 (m, 2H, 3',5*-ArH), 7,47 (s,

1H, chinazolin 8-H), 7,57 (t, J= 8,7 H_z, 1H, 6'-A_rH),

7,71 (s, 1H, chinazolin 5-H), 8,00 (t, J= 6,4 H_z, 2H, glu_L NH), 8,15 (d, 8,2 H_z, 1H, glu_D NH).

Hmotové spektrum (pozitivní ion FAB): m/e 660 (M+Na)⁺,

Elementární analýza pro ^C31^H32^N5°9^F*^CF3^COOH‘°’^5ÍC2^S?⁾ 0-0,6¾⁰ vypočteno 52,58 % C, 4,'94 % H, 8,76 % N, 9,14 % F í nalezeno 52,62 % C, 5,09 % H, 8,74 % N, 9,14 % F.

Příklad 8

N-p-/to-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl )N-ethylamino/benzoyl-L-^-glutamyl-D-glutamová kyselina

Opakuje se postup z příkladu 1(3) za použití trifluoraoetátové soli kyseliny p-/N-(l,4-dihydro^2-me.thyl-__

4-oxochinazolin-6*ylmethyl)-N-ethylamino/benzoové /0,466 g, příprava je popsána v příkladu 2 UK patentové přihlášky 2227016A/ jako výchozí látky místo trifluoracetátové soli kyseliny N-p-/tí-(3,4-dihydro-2-methyl~4~oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)amino/benzoové.

Získá se tak tri*terc.butyl-N-p-/Íí-(3,4-dihydro-2-methyl4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-ethylamino/benzoyl-L-/^glutamyl-D-glutamét (obsahující 0,5 ekvivalentů vody, 0,394 g), t.t. t10,5 až 113,5 °C.

NMR spektrum (CD^OCDp: 1,16 (t, J= 6,8 H_z, 3H, N10-CH₂ CH₃), 1,37, 1,39 (2 x s, 27R, 3 x 0(0¾¾}. 1,72, 1,89 (2 x a,

4H, 2 x fi)-CH₂),. 2,23 (a, 4H, 2 x^-CH₂), 2,32 (s, 3H, chinazolin 2-0¾), 3,57 (q, 6,8 Hz, 2H, N10-CH₂CH₃), 4,11 (m, 1H, glu_D -CH), 4,26 (m, 1H, glu_L -CH), 4,73 (s,

-482H, chinazolin 6-CH₂), 6,70 (d, J= 8,8 Hz, 2H, 3',5'-ArH),

7,54 (d, J= θ£4 Hz, ih, chinazolin &rH), 7,63 (d, J= δ,4 Hz, 1H, chinazolin 7-H), 7,70 (d, 7 H_z, 2H,

2*,6*-ArH), 7,88 (s, tH, chinazolin 5-H), 8,10 (d, J= 7,5 Hz, glu_D NH), 8,18 (d, J= 7,3 H_z, 1H, glu_L NH), 12,14 (s, 1H, laktam NH).

Hmotové spektrum (pozitivní ion FAB): m/e 763 (M+Na)⁺. Elementární analýza pro C^iH^^N^u^.OpHgO vypočteno 63,71 % C, 7,56 % H, 9,06 % FT halezeno 63,92 % C, 7,55 % H, 8,74 % N.,

Tri-terc.butyl-N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-óylmethyl)-N-ethylamino/benzoyl-L- j^-glutamyl-D-glutamát (0,210 g) se zptacuje s kyselinou trifluoroctovou jak je popsáno v příkladu 1(3). Získá se tak N-p/N-(3,4-dihydro-2-methy1-4-oxochinaz olin-6-yloethyl)-Nethylamino/benzoyl-L- Y*-glutamyl-D-glutamové kyselina (obsahující 0,95 ekvivalentů kyseliny trifluoroctové, Oj5 ekvivalentu diethyletheru a 1,3 ekvivalentu vody, 0,165 g), t.t. 140 °C (rozkl.).

Hmotové spektrum (CDjSOCD^): 1,17 (t, J= 6,2 Hz, 3H, N10CH₂CH₃), 1,75 , 1,95 (2 x m, 4H, 2 x/^-CHp,. 2,25 (a, 4H, x ^-CH^), 2,39 (s, 3H, chinazolin 2-CHj), 3,58 (q, J=

6,9 Hz, 2H, N10-CH CH ), 4,19 (m, 1H, glu_D sÁ -CH), 4,33 (m, 1H, glu_L fl^-CH), 4,75 (s, 2H, chinazolin 6-Cff₂), 6,71 (d, J= 8,9 >, 2H), 3*,5'-ArH), 7,58 (d, J* 8,4 H_g> 1H, chinazolin 8-H), 7,70 (m, 3H, chinazolin 7-H a 2',6*-ArH), 7,90 (s, 1H, chinazolin 5-H), 8,09 (d, J= 7,8 Hz, 1H, glu_D NH), 8,18 (d, J= 7,5 Hg, 1H, glu_L NH).

Hmotové spektrum (pozitivní ion FAB):m/e 596 (lí+Na)⁺.

Elementární analýza pro ^C29^H33^N5°9¹⁰»⁹5 OFjCOOH. 0,1.5( C₂H₅) ₂<λ 1, 3^0 vypočteno 51,23 % C, 5,19 % H, 9,48 % N, 7,33 % F nalezeno 51,34 % C, 5,03 % ff, 9,39 % N, 7,12 % F.

-49Příklad 9

N-p-/N-(3,4-£>ihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylniethyl)N-methylamino/benzoyl-L-/|\-.glutamyl-D-glutamová kyselina

Opakuje se způsob popsaný v příkladu 1(3) za použití trifluoracetátové soli p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl )-N-tnethylamino/benzoové kyseliny (0,466 g, příprava je popsána v příkladu 8 UK patentové přihlášky 2227016A) jako výchozího materiálu místo trifluoracetátové soli p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazo1Ín-6-ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)-amino/benzoové kyseliny.

Získá se tak tri-terc.butyl-N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl4-oxochinazolin-6-ylmethyl )-N-methylamino/benzoyl-L- -]\glutamyl-D-glutamát (0,480 g), t.t* 104,5 až 108,5 °C.

NMR spektrum ÍCD^OCD^): 1,45, 1,47 (2 x s, 27H, 3 x C(CH·^), 1,72, 1,91 (2 x m, 4H, 2 x ^-0¾), 2,23 (m, 4H, 2 x v-CHg·);

2,32 (s, 3H, chinazolin 2-CH-j), 3,12 (s, 1H, C=CH), 3', 16 (s, 3H, NIO-CH^), 4,12 (m, 1H, glu^^-CH), 4,2? (m, 1H, glu_L -CH), 4,77 (s, 2H, chinazolin ó-CHg), 6,75 (d, J8,9 Hz, 2H, 3*,5*-ArH), 7,53 (d, J= 8,4 Hz, 1H, chinazoJi lin 8.H), 7,61 (dd, 8,3 Hz_f J₂ ^S L,.9_Hz.,__1.H,_china=·zolin 7-H), 7,72 Cd, J= 8,7 H_z, 2H, 2',6'-ArH), 7,86 (s, 1H-chinazolin 5-H), 8,09 (d, J= 7,5 Hz, 1H, glu_D NH), 8,19 Cd, J= 7,3 Hz, 1H, glu_L NH), 12,12 (s, 1H, laktamNH). Hmotové spektrum (pozitivní ion FAB): m/e 750 (M+H)⁺. Elementární analýza pro ^qH^N^O^ vypočteno 64,07 % C, 7,39 % H, 9,34 % N nalezeno 63,88 % C, 7,50 % H, 9,10 % N.

Tri-terc.butyl-N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-methylamino/benzoyl-L- /^-glutamyl-D-glutamét (0,210 g) se zpracuje s kyselinou trifluorootovou jak je popsáno v příkladu 1(3), Získá se N-p-/N(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-Nmethylamino/benzoyl-L-/^-glutamyl-D-glutamová kyselina (obsahující 1,5 ekvivalentu kyseliny trifiuoroctové, 0,55

-50ekvivalentu diethyletheru a 1,1 ekvivalentu vody, 0,160 g), t.t. 105 °O (rozkl.).

NMR spektrum (CD-jSOGD-j) í 1,75, 1,95 (2 x a, 4H, 2 x/i-CH₂),

2,25 (m, 4H, 2 xí^-CH₂), 2,41 (s, 3H, chinazolin 2-0¾), 3,12 (s, 3H, N10-CH₃), 4,19 (a, IH, glu^cX-CH), 4,33 (m, IH, glu_LC\-0H), 4,80 (s, 2H, chinazolin 6-0¾), 6,76 (d,

J= 9,0 Hz, 3*,5*=ArH), 7,57 (d, Js8,4 Hz, IH, chinazolin

8-H), 7,67 (dd, J^ = 8,4 Hz, Jg= 1,9 Hz, IH, chinazolin

7-H), 7,73 (d, J= 8,8 H_z, 2H, 2*,6'-ArH),7,89 (d, J=1,5 Hz, IH, chinazolin H-5), 8,09 (d, J= 7,7 Hz, IH, glu^ NH), 8,20 (d, J* 7,5 H_z, IH, glu_T NH).

Hmotové spektrum (pozitivní ion FAB): m/e 582 (M+H) ... .

Elementární analýza pro

C2₈H₃iN₅°₉.1 ,5GF3C^OOH.°,55(C2^H5).₂ ⁰.1 ,.1H₂Q .....

vypočteno 49,04 % C, 4,92 % H, 8,61 % N, 10,51 % F nalezeno 49,27 % C, 5,10 % H, 8,41 % N, 10,24 % F.

Příklad 10

N-p-/H-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)N- (prop-2-inyl)amino/benzoyl-D- ')*-glutamyl-D-glutamová kyselina

1) TrÉ-terc.butyl-D-^-glutamyl-D-glutamát

Opakuje se postup popsaný v příkladu 1(1) za použití ’Χ-terc.bútyl-N-benzyloxýkarbonyi-D-glutamótu /2,022 g, připravený postupem prdL^-terc. butyl-N-benzyloxykarbonyl-L-glutamát (Org.Prep.Proč.Int., 1985, 17, 416/ jako výchozí látka místo <Á-terc.butyl-N-benzyloxykarbonylL-glutamátu. Získá se tak tri-terc.buty1-N-/N-(benzyloxykarbonyl)-D-^/y\-glutamyl/-D-glutamét (1,50 g), t.t. 84 až 86 °C.

NMR spektrum (CD^SOCD^); 1,38 (s, 27H, 3 x 0(0¾)₃), 1,72,

1.89 (2 x m, 4H, 2 x /2)-OH₂), 2,26 (m, 4H, 2 x^-CHg),

3.89 (λ, IH, ZNHCH), 4,10 (a, IH, CR GONHGH), 5,03 (m, 2H, ArCH₂), 7,35 (a, 5H, Ar), 7,64 (d, J= 7,7 HzJ 1H, ZNHCH), 8,12 Cd, ď® 7,4 H_z, IH, CH^CONHCH).

-51Hmotové spektrum (pozitivní ion FAB): m/e 579 (M+H)⁺. Elementární analýza pro vypočteno 62,27 % C, 8,01 % H, 4,84 % K nalezeno 62,21 % C, 7,98 % H, 4,80 % N.

Roztok tri^terc.butyl-N-/N- (benzyloxykarbonyl )-D- γχτglutamyl/-D-glutamát (0,718 g) v ethylacetátu (90 ml), obsahujícím 10% Pd/Q (0,1 g) se míchá pod vodíkem 2 hodiny. Katalyzátor se odstraní filtrací a filtrát se zahustí ve vakuu, získá se tri-terc.butýl-D-z^-glutamyl-D-glutamát (0,460 g).

2) N-p-/to-(3,4-<jihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)amino/benzoyl-D-^-glutamyl-Dglutamové kyselina *’

Opakuje se postup popsaný v příkladu 1(3) za použití tri-terc.butyl-D-^-glutamyl-D-glutamétu (0,444 g) jako; výchozí látky místo trÍ-terc.butyl-L-/jn-glutamyl-D-glutamátu. Získá se tri-terc.butyl-N-p-/N-(3,4-dihydro-2methyl-4-oxochinazolin-b-ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)amino/benzoyl-D-^-glutarayl-D-glutamét (0,400 g), t.t. 110 až*

116 °C.___

NMR spektrum (OD^SOCD,): 1,37, 1,39 (2 x s, 27H, 3 x C(CH₃)₃), 1,71, 1,89 (2 x m, 4H, 2 x , 2,24 (m, 4H, x/)v-CIT₂), 2,33 (s, 3H), chinazolin 2-CEj), 3,23 (s, 1H, C=0H), 4,10 (m, 1H. GE CONHCE), 4,24 (m, 1H, -C.₆E₄-CONBCH), 4,34 (s, 2H, CH₂=C), 4,78 (s, 2H, chinazolln-6-CE₂),

6,83 (d, Js 8,7 Hz, 2H, 3*,5*-ArH), 7,54 (d, J=8,4 H_z,

1E, chinazolin 8rH), 7,72 (m, 3H, chinazolin 7-H a 2',6*ArH), 7,96 (s, 1H, chinazolin 5-H), 8,13 (d, J= 7,5 Hz,

1H, CE₂GONHCH), 8,32 (d, J=7,4 Hz, 1H, -C^-CONH), 12,19 (s, 1H, laktam NH).

Hmotové spektrum (pozitivní ion FAB): m/e 773 (M⁺), Elementární analýza pro 042^55^^9 vypočteno 65,18 % C, 7,16 % H, 9,05 % N nalezeno 64,90 % C, 7,27 % H, 8,90 % N.

-52Tri-terc.butyl-N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-(prop-2-Ínyl)amino/benzoyl-D- glutamyl-D-glutamát (0,208 g) se zpracuje s kyselinou trifluorootovou jak je popsáno v příkladu 1(3). Získá se tak N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N- (2-prop-2-inyl)amino/benzoyl-D-^ -glutamyl-Dglutamové kyselina (obsahující 1,15 ekvivalentu kyseliny trifluoroctová a 1 ekvivalent vody, 0,180 g), t.t. 95 °C (rozkl.).

NMR spektrum (CDjSOCD^): 1,72, 1,74 (2 x m, 4H, 2 x/VC^),

2,23 (m, 4B, 2 x^-CB^·), 2,42 (s, 3H, chinazolin 2-CH₃),

3,24. (s, 1ff, C=CH), 4,18 ím, 1 ff, C^CONHCH), 4,36 (o, 3H, -σ₆Η₄-ΟΟΝΗΟΗ a 01^0=0, 4,81 (s, 2B, chinazolin 6-CHg),

6,83 (d, «fc 8,8 Hz, 2H, 3',5*-ArH), 7,60 (d, J* 8,4 Hz,

1iT, chinazolin 8-H), 7,77 (m, 3H, chinazolin 7-H a 2*,6*ApH), 8,00 (s, 1H, chinazolin 5-H), 8,13 (d, 7,7 H_z,

1H, CHgCONHSH), 8,33 (d, J= 7,5 Hz, 1H, -CgH^CONH).

Hmotové spektrum (pozitivní ion FAB).: m/e 606 (M+H)⁺. Elementární analýza pro Ο^Η^Ν^Ο^.Ι, IíCHjCOOH. IHgO vypočteně 51,40 % C, 4,5« % B, 9,28 % N, 8,68% F nalezeno 51,37 % C, 4,52 % K, 9,07 % N, 8,64 % F.

Příklad 11

N-P-/N- (3,4-dihydro-2,7-dimethyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl )N-methylamino/benzoyl-L-^-glutamyl-D-glutamová kyselina 1 ) p-/N-(3,4-dihydro-2,7-dimethyl-4-oxochÍnazolin-6~ ylmethyl)-N-methylamino/benzoová kyselina p-N- (3,4-Dihydro-2,7-dimethyl-4-oxo-3-pivaloyloxymethyl-chinazolin-6-ylmethylJ-N-methylamino/benzoová kyselina (4,8 g) se připraví jak je popsáno v příkladu 22 UK patentové přihlášky 2244708A.

Směs produktu, ethanolu (60 ml), vody (50 ml) a IN hydroxidu sodného (30 ml) se míchá při teplotě místnosti 1,5 hodiny, potom se okyselí na pH 4 IN kyselinou chloro-53vodíkovou. Pevná látka se oddělí filtrací a suší ve vakuu nad oxidem fosforečným. Získá se p-/H-(3,4-dihydro-2,7dimethyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-methylamino/benzoová kyselina.

Směs produktu a trifluoroctové kyseliny (30 ml) se míchá při teplotě místnosti 15 minut a pak se odpaří.

Zbytek se trituruje s diethyletherem (60 ml) a hnědá pevná látka se odfiltruje a suší ve vakuu, získá se p-aminobenzoová kyselina jako trifluoracetátová sůl (2,9 g), t.t. >270 °C.

2) N-p-/N-(3,4-dihydro-2,7-dimethyl-4-oxochinazolin-6ylaethyl)-N-methylamino/benzoyl-D_ ^-glutamyl-D-glu- ₄ tamová kyselina

Opakuje se postup popsaný r příkladu; 1 (3) za použití p-/N-(3,4-dihyčro-2,7-dimethyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl )Nf-methylamino/benzoové kyseliny ve formě trifluoracetátové soli (0,580 g) jako výchozího materiálu místo trifluoracetétové soli kyseliny p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-^lprop-2-inyl Jaaino/benzoová. Získá se tak trÍ-terc.butyl-N-p-/N-(3,4-dihydro-2,7-dimethyl4-oxochinazolin-6-ylmethylJ-N-methylamino/benzoyl-D-^ glutamyl-D-glutamét (obsahující 0,6 ekvivalentu vody, 0,288 g), t.t. 243,5 až 245 °C.

NMR spektrum (CD-jSOCD^): 1,37, 1,40 (2 x s, 27H, 3 x CfCH^), 1,83-2,03 (m, 4H, 2 x^-CH₂), 2,23 (t, 6,8 Hz, 4H, Qx-CE^),

2,30 (s, 3H, chinazolin 2-Cffj), 2,43 (a, 3H, chinazolin 7-Cff₃), 3,13 ts, 3H, N10-CH₃), 4,09 (m, 1H, gluX-CH),

4,24 (m, 1H, glu_L l^-CH), 4,70 (s, 2H, chinazolin 6-CH₂),

6,70 (d, J= 8,5 H_z, 2H, 3',5*-ApH),, 7,44, 7,52 (2x s, 2H, chinazolin 5-H a chinazolin 8-H), 7,73 (d, J= 8,3 Hz, 2H, 2',6*-ArH), 8,17 íd, J= 7,5 Hz, 1H_r glu_D NH), 8,28 (d, J=

7,2 Hz, 1H, glu_L NH), 12,10 (s, 1H, laktam NH).

-54Hmotové spektrum: (ESI) m/e 764 (M+H)⁺.

Elementární analýza pro Η^γΝ^Ο^.Ο,6 H₂0 vypočteno 63,56 % C, 7,57 % H, 9,04 % N nalezeno 63,58 % C, 7,51 % H, 8,97 % N.

Tri-terč. butyl-N-p-/N- (3,4-dihydr o-2,7-dime thy 1-4oxoohinazolin-6-y lmethyl )-N-methylamino/benzoyl-L- -^-glutamyl-D-glutamát <0,219 g) se zpracuje s kyselinou trifluoroctovou jak je popsáno v příkladu 1(3)· Získá se tak kyselina N-p-/N-(3,4-dihydro-2,7-dimethyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl )-N-methylamino/benzoyl-L- /y\-glutamyl-D&lutamová (obsahující 1,1 ekvivalentu CF^COOH, I ekvivalent ffgO a 0,2 ekvivalenty EtgO, 0,19 g), t.t. > 150 °G (rozklad).

NMR spektrum (C^SOCD^): 1,70-2,09 (m, 4H, 2 x/$-CH₂),

2,25 (m, 4H, 2 x^-Cffg), 2,42, 2,48 (2 x s, 6H, chinazolin 2-0¾ a chinazolin 7-0¾), 3,14 (s, 3H, NIO-CH^), 4,17 U, 1®, glu_D *-CH), 4,31 (a, 1H, glo^ 0( -CH), 4,73 (s, 2H, chinazolin 6-0¾), 6,71 (ď, J» 8,9 Hz, 2H, 3',5'ArH), 7,48, 7,52 (2 x s, 2®, chinazolin 5-H. a chinazolin

8-H), 7,74 (d, Js 8,9 Hz, 2H, 2',6'-AcH), 8,17 (d, Js 7,7 Hz, 1H, glu_D NH), 8,29 (d, J« 7,5 Hz), 1H, glu_L NH). Hmotové spektrum: (ESI) m/e 596 (M+H)⁺,

Elementární analýza pro

0₂9®₃₃Ν₅0₉.1,ΐαΕ₃α° H^P,0,2Et₂0 vypočteno 50,$8 % O, 5,09 % H, 9,29 % N, 8,32 % F nalezeno 50,98 % C, 5,05 % H, 9,12 % N, 8,18 % F.

Příklad 12

N-p-/N-(3,4-dÍhydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)N-methylamino/-o-fluorbenzoyl-H-^-giutamyl-D-glutamová kyselina

1) p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl )N-methylamino/-o-fluorbenzoová kyselina

-55Směs 6-brommethyl-3,4-dihydro-2-methyl-3-pivaloyloxymethylchinazolin-4-onu (9,2 g, připravený jak je popsáno v příkladu 1 UK patentu 2188319B),terč.butyl^ámino-o-fluorbenzoátu (5,® g, příprava je popsána v příkladu 3 UK patentové přihlášky 2227016A/, 2,6-lutidinu (2,94 g) a dimethylacetamidu (30 ml) se míchá při 95 °C 10 hodin. Dimethylacetamid se pak odstraní ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a vodu. Vodná vrstva se promyje ethylacetátem, a spojené organické fáze se promyjí vodou a suší nad síranem hořečnatým, Ethylacetát se odstraní ve vakuu a žůutý olej se čistí„chromatografií na sloupci silikagelu za použití gradientu ethylacetátu v hexanu jako elučního činidla. Získá se tak terc.butyl-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxo-3-pivaloyloxymethylchinazolin-6ylmethyl)amino/-o-fluorbenzoát (10,3 g), t.t. 149 až 150 °C,

K roztoku produktu (10,3 g) v ledové kyselině octové (150 ml) se přidá 37½ vodný formaldehyď (17 ml). Po míchání při teplotě místnosti po 10 minut se po částech přidá kyanoborohydris sodný (2,83 g) & směs se dále míchá

1,25 h. Kyselina octová se pak odstraní ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a voda. Ethylacetát se promyje-nasyceným—hydrogenufrtičitanem^-scdným—vodou^—apotom se suší. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se čistí chromatografií na silikagelu za použití 30%

a.

ethylacetátu v dichlormethanu· jako elučního činidly.

Získá se terc.butyl-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxo-3pivaloyloxymethylchinazolÍn-6-ylmethyl)-N-meth,ylamino/o-fluorbenzoát.

Směs produktu (6,6.g) a kyseliny trifluoroctové (35 ml) se míchá při teplotě místnosti 1 hodinu a pak se odpaří ve vakuum Zbytek se zpracuje s diethyletherem (50 ml) a bílá pevné látka se odfiltruje a suáí ve vakuu. Získá se p-/N-(3»4-dihydro-2-methyl-4-oxo-3-pivaloyloxymethylohÍnazolin-6-ylmethyl)-N-methylamino/-o-fluorbenzoová kyselina.

—56—

Směs produktu (4,3 g), ethanolu (200 ml), vody (60 ml) a IN hydroxidu sodného (34 ml) se míchá při teplotě místnosti 34 hodin, potom se okyselí na pH 4 2N’kyselinou chlorovodíkovou. Pevná látka se oddělí filtrací a suší ve vakuu nad oxidem fosforečným, získá se p-/N-(3,4-dihydro-2methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-methylamino/-ofluorbenzoové kyselina.

Směs produktu (1 g) a kyseliny trifluoroctové (40 ml) se míchá při teplotě místnosti 10 minut a pak se odpaří. Zbytek se trituruje s di ethyle the rem (50 ml) a odfiltruje se světle žluté pevná látka a sušením ve vakuu se získá p-amino-o-fluorbenzoová kyselina jako trifluoracetátové sůl, t.t. 297 až 298 °O.

2) N-p-/N- (3,4-Dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylme thyl)-N-me thylamino/-o-f1 uor benz oyl-L~ -glu t amylD-glutamová kyselina

Opakuje se postup podle příkladu 1(3) za použití trifluoraoetátové soli kyseliny p-/N-(3,4-díhydro-2-aethy1-4oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-methylamino/-o-fluorbenzoové (0,455 g), jako výchozího materiálu místa trifluoracetátové soli kyseliny p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4ox ochinazolin-6-ylmethyl )-N- (pr op-2-inyl) amino/benzoové. Získá se tak tri-tero.butyl-N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl4-oxoohinazolin-6-y lme thyl )-N-me thylamino/-o-f luorbenzoyl-L- j\-glutamyl-D-glutamát (0,564 g), t.t. 100 až 102 ®C.

NMR spektrum (CDjSOCDj)i 1,38, 1,41 (2 x s, 27H, CÍCH^) , 1,72, 1,89, 2,00 (3 x m, 4H, -0¾), 2,22 (t, J=6,7 Hz,

4H, cp-QH₂), 2,33 ⁽s, 3H, chinazolin 2-Cff^), 3,12 (s, 3H, N10-Cff₃), 4,10 (m, 1H, glu_D^-CH), 4,29 <m, 1H, glu_L^-CH), 4,78 (s, 2H, chinazolin 6-CH₂), 6,55 (dd, J=t5,4, 2,1Hz,

1H, 3*-ArH), 6,63 (dd, J« 8,9, 2,2 Hz, 1H, 5*ArH), 7,57 (m, 3H, 6**ArH a chinazolin 7-H a 8-H), 7,80 (t, J- 6,9 Hz, 1H, glu_L NH), 7,86 (s, 1H, chinazolin 5-H), 8,08

-57(d, J=7,6 Hz, 1H, glu_D NH), 12,14 (s, laktam NH).

Hmotové spektrum (ESI)i 768 (M+H)⁺.

Elementární analýza pro ^C40^H54^9 ' vypočteno 62,57 %. O, 7,09 % H, 9,12 % N, 2,47 % F nalezeno 62,70 % C, 7,32 % H, 8,87 % N, 2,44 % F.

Tri-terc.butyl-N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-methyíamino/-o-fluorbenzoyl-L-^glutamyl-D-glutamát (0,212 g) se zpracuje s kyselinou trifluoroctovou jak je popsáno v příkladu 1(3). Získá se tak N-p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochÍnazolin-6-ylmethyl )-N-methylamino/-o-f luorbenzoyl-I»- -glutamyl-Dglutamát (obsahující 1,3 ekvivalentu CF^COgH, 0,75 ekvivalentu H_O a 1 ekvivalent EtgO , 0,218 g), t.t.

1<5 až 147

NMR spektrum (CD^SOCD^): 1,75, 1,92, 2,04 (3 x m, 4H, Ziř-CH^), 2,23 (m, 4H,/^-CRg), 2,38 (s, 3H, chinazolin 2-CB₃), 3,12 (s, 3H, NIO-Cffj), 4,17 (m, Iff, glu_D/ -CH),

4,37 (m, 1H, glu^-CH), 4,80 (s, 2ff, chinazolin 6-CH^),

6,56 (dď, J= 15,4, 2,1 Hz, 1H, 3*-ArH), 6,63 (dď, J=

8,9, 2,2 Hz, IR, 5'-ArH), 7,57 (m, 2H, 6*-ArH plus chi.nazolin 8-H), 7,64 (dd, J« 8,5, 1,8 Hz, 1H, chinazolin 7-H), 7,78 (t, J= 6,9 Hz, 1H, glu^ NH), 7,87 (d, 1H, chinazolin

5-H), 8,08 (d, J= 7,8 Hz, 1H, glu^ NH), 12,40 (bd, COgff). Hmotově spektrum (ESI): 600 (M+H) .

Elementární analýza pro ^C28^H30^IÍ5^O9^F *¹ *^{3 CP}3^CO2^H· ⁰ > ^75H2°· ^Et2° vypočteno 49,74 % C, 5,16 % H, 8,39 % N, 11,14 % F nalezeno; 49,77% C, 5,25% H, 8,10 % N, JO,95 % F.

Přiklaď 13

N-p-/N-(3.,4-Dihydro-2,7-dimethyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-methylamino/-o-fluorben2oylvL-^-glutamyl-Dglutamová kyselina t

Opakuje se postup z příkladu 1(3) za použití trifluoraeetétová soli kyseliny p/N-(3,4-dihydro-2,7-dl-58methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-methylamino/-ofluorbenzoové,t.t. 312 až 314 °C (rozkl.) /0,469 g, připraveno analogicky postupu popsanému v příkladu 12(1) za použití 6=brommethyl-3,4-dihydro-2,7-dÍmeth,yl-3-pivaloyloxymethyl-chinazolin-4-onu jako výchozí látky, jejíž příprava je popsána v příkladu 13 UK patentové přihlášky 2244 708A ) místo trífluoraeetátové soli kyseliny p-/N(3,4-dih,ydro-2-oethyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl )-N- (prop2-inyl)amino/benzoové. Získá se tak tri.terč.butyl-N-p/ΪΓ- (3,4-dihydro-2,7-dimethyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl )-Nmethylamino/-o-fluorbenzoyl-L- ^-glutamyl-D-glutamót (0,572 g), t.t. 172 až 173 °C. .....

NBtR spektrum (CD^OCD^): 1 ,37, 1,40 (2 x s, 27H, 0(0¾¾). 1,7t, 1,89, 1 ,99 <3 x m, 4H, ^-0¾), 2,23 (m, 4H, -0¾).

2,31 (s, 3H, chinazolin 2-0¾), 2,43 (s, 3H, chinazolin 7-0¾), 3,12 (s, 3H, NI 0-0¾). 4,08 (m, 1H, glu_D/,-CH),

4,27 (m, 1H, glu_L X -CH), 4,70 (s, 2H, chinazolin? 6-0¾).

6.53 («, 14,2 Hz, 1H, 3*-ArH), 6,57 (d, J=7,9 Hz, IR,

5*-A_rH), 7,45, 7,48 (2 xs každý 1H, chinazolin 8-B a 5-H),

7.54 ít, <1=8,9 Hz, 6'-Acfí), 7,90 (d, J= 6,4 H_z, 1H, glu_L NH), 8,16 (d, J=7,6 Hz, 1H, glUpNH), 12,12 (s, 1H, laktam: NH).

HHHtové spektrum (ESI): 782 (JS+H)⁺.

Elementární analýza pro ^C4lW°9 vypočteno 62,98 % C, 7,22 % H, 8,96 % N, 2,43 % F nalezeno 62,68 % 0, 7,25 % H, 8,97% N, 2,42 % F.

Tri-terc·butyl-N-p-/N-(3,4-díhydro-2,7-dimethyl-4oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-methylamino/-p-fluorbenzoyl-Lf^-glutamyl-D-glutamát (0,20 g) se zpracuje s kyselinou trifluoroctovou jak je popsáno v příkladu 1(3)* Získá se tak N-p-/N-(3,4-dihydro-2,7-dimethyl-4-oxochinazolin-6ylmethyl )-N-methylamino/-o-f luorbenzoyl-L- j^-glutamylD-glutamét (obsahující 1 ekvivalent kyseliny trifluoroctové a 1 ekvivalent vody, 0,175 g), t.t. 159 až i61 °C.

-59NMR spektrum (CD-jSOCD-j): 1,75, 1,92, 2,04 (3 x m, 4H, /i-CHg),

2,24 (m, 4H, /\-CH₂), 2,38 (s, 3«, chinazolin 2-CH₃), 2,45 (s, 3H chinazolin 7-CHp, 3,12 (s, 3H, NIO-CRj), 4,17 (m, 1H, glu_D

4,37 (m, 1H, glu^ -CH), 4,72 (s, 2H, chinazolin

6-CH₂), 6,53 (d, J=15,1 Hz, 1H, 3*-ArH), 6,58 (d, J= 10,2 Hz, 1H, 5*-ArH), 7,46 (s, ífí, chinazolin 8-H), 7,52 (s, 1H, chinazolin 5-H), 7,58 (t, J- 6,9 Hz, 1H, 6*-ArH), 7,80 (t,-J= 6,9 Hz, 1H, glu_LNH), 8,10 (d, J=7,7 H_z, 1H, glUpNH),

12,42 (bd, CO₂H).

Hmotové spektrum (ESI): 614 (M+H)⁺.

Elementární analýza pro ^G29^H32^Fír5^O9* ^ΟΡ3°^θΟΓΓ· ^ff2° vypočteno 49,93 % C, 4,73 % ff, 9,40 % N, 10,19 % F nalezeno 50,14 % C, 4,72 % H, 9,21 % N, 10,24 % F.

Příklad 14

Testy biologické aktivity

Sloučeniny z příkladu 1 a 10, deriváty kyseliny glutamyl-D-glutamové kyseliny a D-ý^-glutaoyl-D-glutamové kyseliny, respektive p-/N-(3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-(prop-2-inyl)amino/benzoové kyseliny a pro srovnání odpovídající deriváty kyseliny L-ý^-glutamyl-L-glutamové kyseliny a D-Z^-glutamyl-L-glutamové kyseliny se testují na své vlastnosti inhibice thymidylát syntásy a na svoji schopnost inhibovat růst Ll210 v testech i uvedených pod a) a b) na str.24*

Čtyři sloučeniny se také testují na in vivo stabilitu vůči štěpení centrální;·:; amidové; vazby“ ' dipeptidu. Tento test zahrnuje injekci sloučeniny intraperitoneélně samci C57/DBA₂ (í*₁ hybrid) myši při standardní dávce 100 mg/kg, usmrcení myši po 1 hodině, odebrání plasmy, jater a ledvin, jejich individuální homogenizaci v devítinásobku objemu

-600,1 M tria HCl při pH 10, vysrážení proteinu a analýzu produktu v 0,5 M NaHCO^ pomoci HPLC na Sperisorb C-6 koloně za eluce acetonitrilem/octaném sodným při pH 5,0.

Pro detekci dipeptidů a produktu štěpení byla použita UV měření při 280 a 313 nm (pro štěpení centrální amidové vazby dipeptidů), tj. derivátů L-glutamové kyseliny nebo D-glutamové kyseliny. Identifikace původní sloučeniny a jakéhokoliv produktu štěpení byla provedena porovnáním rt vůči standardním vzorkům těchto sloučenin, které bylyz zpracovány stejně jako vzorky jater, ledvin a plasmy.

Získané výsledky jsou uvedeny v tabulce, identifikace sloučeniny, které je neštěpena^M porovnáním se sloučeninou, která je štěpena, byly provedeny na bázi množství dipeptidů a jeho štěpného produktu; nalezeného v plasmě a játrech. Typický pokus s L-glu-D-glu sloučeninou ukazuje jak procenta celkového podaného léčiva, 27±2 % přítomného původního dipeptidů v játrech a žádné štěpný produkt, zatímco podobný pokus s L-glu-L-glu sloučeninou ukazuje 1,6+0,8 %.původního dipeptidů a 40+13 % Štěpného produktu. Zbylá část původního dipeptidů, která byla detegována byla nalezena nejvíce v plasmě jak pro L-glu-D-glu tak pro L-glu-L-glu sloučeniny, přičemž v případě první ze sloučenin nebyl nalezen žádný štěpný produkt, ale významné množství štěpného produktu bylo nalezeno v případě druhé sloučeniny.

Podobné testy na různé jiné sloučeniny z příkladů ukazují, že ve všech případech byla sloučenina v podstatě neštěpena.

Tabu 1ka

Dipeptid

L-glu-D-glu

D-glu-D-glu

L-glu-L-glu

D-glu-L-glu

- 61 -	> cr co G ··?	.-'j — ; σ η: { — 0 í.^< x -·;
		c, — *·>	tC 0 |
			>, i -U 1
TS	L1210	stabi1 ita
mM<i>	IC50 uM
0.0046		0,18	neštěpeno
0,0260		1,30	neštěpeno
0,0020		0,10	štěpeno
0,0360		3,40	štěpeno

1) IC50 hodnoty byly převedeny na převrácené relativní hodnoty účinnosti IC50, podělením hodnoty IC50, získané pro sloučeninu, hodnotou ICso, získanou ve stejném pokusu pro sloučeninu CB3717, pro kterou je typicky tato hodnota 0,02 (Ki = 3 nM).

Průmyslová využitelnost ·’1;

' ’Λ*

Derivát chinazolinu nebo jeho farmaceuticky vhodná sůl, ester ne- 3 bo amid, kt-e-eé jsou terapeuticky hodnotné zejména při léčbě rakoviny.

·-·£

Λ ·' . * • « ./j¹

o o

C/>e

-I

ZI

Claims (15)

1. PATENTOVÉ

   NÁROKY

   Derivát chinazolinu obecného vzorce I _r6 R⁴ R⁵

   I V

   R ,8 c—N- Ar- COR /1/ kde znaeraá .....

   R¹ vodík nebo amino, nebo alkyl, alkoxy nebo alkylthio vždy s až 6 atomy uhlíku, nebo aryl nebo aryloxy vždy s až 10 atomy uhlíku, nebo halogen, hydroxy nebo merkapto, nebo alkyl s až 3 atomy uhlíku s jedním nebo více substituenty ze souboru zahrnujícího halogen, hydroxy a alkanoylamino s až 6 atomy uhlíku, nebo alkoxy š až 3 atomy uhlíku s jedním nebo více substituenty ze souboru zahrnujícího hydroxy a alkoxy s až 6 atomy uhlíku.

   R² vodík, alkyl, alkenyl. alkinyl, hydroxya1ky1, alkoxyalkyl, merkaptoalky!, alkylthioalky1, halogenoalky1, kyanoalkyl, aminoalkyl, alkylaminoalky1, dialkylaminoalky1, alkanoylaiky 1, kárboxyalkyl. karbamoytaIky1 nebo alkanoyl vždy s as 6 atomy uhlíku.

   Ar feny len nebo heterocyklen, který je popřípadě substituován jedním nebo více substituent/ ze souboru zahrnujícího halogen, kyano. nitro, hydroxy, amino, karbamoy1 a alkyl, alkoxy, halogenalkyl. alkanoylamino a alkoxykarbonyl vždy s až 6 atomy uh- vý zbytek, připojený ke karbonylové skupině COR³ je L-aminokyselinový nebo D-aminokyse línovy zbytek obecného vzorce

   -NHCIKCQzΗ)-A-CQ-, kde A je alkylenová skupin s až 6 atomy uhlíku a druhým aninokysel inovým zbytkem je zbytek ^-aminokyseliny, která má D-konf iguraci na svém asymetrickém ti-uhlíkovém atomu,

   R⁴ vodík nebo alkyl s až 4 atomy uhlíku,

   R⁵ vodík nebo alkyl s až 4 atomy uhlíku a

   R⁶ , R⁷ , R⁸ vždy vodík nebo alkyl nebo alkoxyl s až 4 atomy uhlíku nebo halogen, a jeho farmaceuticky přijatelné soli, estery nebo amidy.
2. 2- Derivát chinazolinů podle nároku 1 obecného vzorce li kde znamená

   R¹ vodík, amino, methyl, ethyl, isopropyl, methoxy, ethoxy, methylthio, fenyl, tolyl, fenoxy, chlor, brom, hydroxy, merkapto, fluormethyl, difluormethyl, trifluormethyl, chlormethy1, hydroxymethyl, acetamidowethy1, 2-hydroxyethoxy, 2-methoxyethoxy nebo 2-ethoxyethoxy,

   S² vodík, methyl, ethyl, propyl, prop-2-enyl, but-2-enyl,' prop-2inyl, but-2-inyl, 2-hydroxyethyl, 3-hydroxypropy1, 2-methoxyethyl, 3-methoxypropyl, 2-merkaptoethy1. 2-methylthioethy1, 2fluorethyl, 2-chlorethyl, 2-bromethyl, 3-fluorpropy1, kyanomethyl, 2-kyanoethy1, 2-aminoethyl. 2-methylaminoethy1, 2-dimethylaminoethy1, acetony!, karboxymethy1, karbamoyImethy1 nebo ačety 1,

   Ar 1,4-fenylen. thienylen, pyrldylen. pyrimidilen, thiazolylen nebo oxazolylen, který je popřípadě substituován jedním nebo dvěma substituenty ze souboru zahrnujícího fluor, chlor, brom, fenyl, kyano, nitro, hydroxy, amino, karbamoyl, methyl, ethyl, methoxy, ethoxy, iluormethyl, difInormethy1, trifluormethyl a ace tami do,

   R³ skupinu obecného vzorce

   -NH-CH<COOH)-A-CONHCIKY>-COOH kde A má význam uvedený v nároků 1, '/ alkyl, alkenyl nebo alkinyl vždy s až 6 atomy uhlíku nebo alkyl s až 6 atorny uhlíku s jedním nebo s několika substituenty ze souboru zahrnujícího amino, karboxy, hydroxy a merkapto,.

   64 nebo f eny1 nebo benzy1,

   R⁴ vodík, methyl nebo ethyl,

   R⁵ vodík, methyl nebo ethyl a

   R⁶ , R⁷ , R® vždy vod í k, methy1, ethy1, methoxy, ethoxy, f1uor. chlor nebo brom.

   a jeho farmaceuticky přijatelné soli, estery nebo amidy.
3. 3. Derivát chinazolinů podle nároku i obecného vzorce I, kde znamena

   R¹ vodík, amino, methyl, ethyl nebo methoxy,

   R² methyl, ethyl, prop-2-enyl, prop-2-inyl. 2-hydroxyethyl, 3hydroxypropy1, 2-fluorethyl nebo acetony1,

   Rt 1,4-fenylen. 2-fluor-1,4-fenylen, nebo 2,6-difluor-1,4-fenylen R³ skupinu obecného vzorce i

   R⁴

   R⁵

   R⁶

   R⁷

   R®

   -NH-CHCC00H>CH2CH₂C0NHCH<C00Hi-CCIfe imCOOH kde m znamená 1, 2 nebo 3 vodík nebo methyl, vodík, vodík nebo chlor.

   vodík, methyl, fluor nebo chlor a vodík, methoxy, nebo chlor, jeho farmaceuticky přijatelné soli, estery nebo amidy.
4. 4. Derivát chinazolinů podle nároku 1 obecného vzorce I, kde znamená

   R¹ amino, methyl nebo methoxy,

   R² methyl, ethyl, prop-2-enyl, prop-2-inyl, 2-hydroxyethyl, 3hydroxypropy1, 2-fluorethyl nebo acetony 1,

   Ar 1,4-fenylen, 2-f luor-1·,4-f eny len, nebo 2,6-difluor-1,4-fenylen. R³ zbytek dipeptidu gama-glutamylaspartové kyseliny, gama-glutamy lglutamové kyseliny, gama-glutamy1-2-aminoadipové kyseliny nebo gama-.g iu tamy lalan 1nu.

   R⁴ vodík nebo methyl,

   R⁵ vodík,

   R® vodík nebo chlor.

   ; R⁷ vodík, methyl, fluor nebo chlor a

   R⁸ vodík, methoxy nebo chlor.

   a jeho farmaceuticky přijatelné soli. estery nebo amidy1
5. 5. Derivát chinazolinu podle nároku 1 až 4 obecného vzorce I.

   * kde první, N-terminální aminokyselinový zbytek má L-konfiguraci, a jeho farmaceuticky přijatelné soli, estery nebo amidy.
6. 6- Derivát chinazolinu podle nároku 5 obecného vzorce I, kde aminokyselinovým zbytkem je zbytek L- -glutamové kyseliny, a jeho farmaceuticky přijatelné soli, estery nebo amidy.
7. 7- Derivát chinazolinu podle nároku 4 obecného vzorce I, kde R³ znamená zbytek dipeptidu L- j -glutamy1-D-aspartové kyseliny, a jeho farmaceuticky přijatelné soli. estery nebo amidy.

   B- Derivát chinazolinu podle nároku 4 obecného vzorce I, kde

   R³ znamená zbytek d i pept idu L- / -g 1utamy1-D-g1utamové kyše1 i ny, a jeho farmaceuticky přijatelné soli, estery nebo amidy.
8. 9. Derivát chinazolinu podle nároku 4 obecného vzorce I, kde R³ znamená zbytek dipeptidu L~ jf-glutaiuyl-D-2-aminoadipové kyseliny, a jeho farmaceuticky přijatelné soli, estery nebo amidy.
9. 10. Derivát chinazolinu podle nároku 4 obecného vzorce I, kde R³ znamená zbytek dipeptidu L- ^-glutamy1-D-aianinu. a jeho farmaceuticky přijatelné soli. estery nebo amidy.

   .(b
10. 11- Derivát chinazolinu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde znamená

    R¹ methyl, R^? methyl nebo prop-2-inyl. Ar 1,4-fenylen nebo 2fluor-1,4-fenylen, R³ zbytek L-gama-gIutamyl-D-glutamové kyseliny. R^x* vodík nebo methyl. R⁵ vodík, [-Τ' vodík nebo chlor, R⁷vodík, methyl, methoxy, fluor nebo chlor a R⁸ vodík- methyl, methoxy nebo chlor, a jeho farmaceuticky přijatelné soli, estery nebo amidy.
11. 12. Derivát chinazolínu podle nároku 1 obecného vzorce I, kterým je

    N-p-[N-<3,4~d i hydro-2-amino-4-oxochinazol in-6-y Imethy 1)-N-methy 1 amino)benzoyl-L- Γ -glutamyl-D-glutamová kyselina.

    N-p-t N-C3,4-dihydro-2-amino-4-oxochinazol in-6-y Imethy l )-N- ethy 1 am i no J benzoyl-L- ý -glutamyl-D-glutamová kyselina,

    N-p-[N-<3,4-dihydro-2-amino-4-oxochinazol in-6-y Imethy 1 )-N- Cprop2-inyl)amino)benzoyl-L- ý -glutamyl-D-glutamová kyselina,

    N-p-tN-C3,4-dihydro-2-methy1-4-oxochinazolin-ů-yImethy1>-N-methy1 amino]benzoyl-L- V -glutamyl-D-glutamová kyselina.

    N-p-[N-<3.4-dihydro-2-methy1-4-oxochinazolin-6-yImethy1)-N-ethylamino]benzoyl-L- Jf-glutamyl-D-glutamová kyselina.

    N-p-tN-C3,4-dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-<prop2-iny1)amino]benzoyl-L- Γ -glutamyl-D-glutamová kyselina,

    N-p-tN- C3,4-dihydro-2,7-dimethy1-4-oxochinazolin-6- yImethy1)-Nmethylamino]benzoyl-L-jf-glutamyl-D-glutamová kyselina,

    M-p-t N- C3,4-dihydro- 2.7-dimethy1-4-oxochinazolin-6-yimethy1>-Nethylamino]benzoyl-L- jf-glutamyl-D-glutamová kyselina,

    N-p-tN- <3,4-dihydro- 2,7-dimethy1-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-NCprop-2-iny1)amino]benzoyl-L- Jf-glutamyl-D-glutamová kyselina, N-p-1N- ¢3,4-dihydro-2-raethoxy-4-oxochinazolin-6-yImethy1)-N-methy lam i no) benzoyl-L- ÍT-glutamyl-D-glutamová kyselina,

    N-p-t N-(3,4-d i hydro-2-methoxy-4-oxoch i nazoli n-6-yImethy1>-N-ethy1 amino]benzoyl-L- ,f -glutamyl-D-glutamová kyselina,

    N-p-( N-<3,4-dihydro-2-methaxy-4-oxochinazol in-6-y Imethy 1 )-N-(prop 2-inyl)amino]benzoyl-L jf -glutamyl-D-glutamová kyselina, a její farmaceuticky přijatelné soli, estery nebo amidy.
12. 13. Derivát chlnazolinu podle nároku 1 obecného vzorce I, kterým je

    N-p-[ N-<3,4-dihydro-2-amino-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-N-methylamino]-o-fluorbenzoyl-L- y -glutamyl-D-glutamová kyselina.

    N-p-tN-GJ ,4-dihydro-2-amino-4-oxochinazolin-6-yImethy1)-N- ethylamino]-o-fluorbenzoyl-L- .ý -glutamyl-D-glutamová kyselina,

    N-p-1N-C3,4-dihydro-2-amino-4-oxochinazolin-6-yImethy1)-N- Cprop2-inyl)amino]o-fluorbenzoyl-L- f -glutamyl-D-glutamová kyselina,

    N-p-í N-<3,4-di hydro-2-methy1-4-oxochinazolin-6-y1methylj-N-methy1 amino]-o-fluorbenzoyl-L- A -glutamy1-D-glutamová kyselina,

    N-p-E N-<3,4-di hydro-2-methy1-4-oxochlnazo1in-6-ylmethy1)-N-ethy 1 amino]-o-fluorbenzoy1-L- A -glutamy1-D-glutamová kyselina. N-p~EN-C3,4-dihydro-2-methy i -4-oxochinazol ln-6-y lmethy 1 j-N-Cprop2-inyljarnino]-o-fluorbenzoy1-L- jf -glutamy1-D-glutamová kyselina N-p-[ N- C3,4-di hydro- 2,7-dimethy 1-4-oxochinazo i in-6-y lmethyD-Nmethylaminol-o-fluorbenzoy1-L- jf -glutamyl-D-glutamová kyselina, N-p-EN- (3,4-dihydro- 2,7-dimethy1-4-oxochinazolin-6-ylmethyl)-Nethylamino]-o-fluorbenzoyl-L- < -glutamyl-D-glutamová kyselina,

    N-p-[M-C 3,4-d i hy dro-2,7-d imethy1-4-oxoch i nazo1 i n-6-y1methy1)-N<prop-2-iny1Jamino]- o-fluorbenzoy1-L- f -glutamyl-D- glutamová kyselina,

    N-p-[N-< 3,4-d i hydro-2-methoxy-4-oxochi nazo1in-6-ylmethy1)-N- methylamino]o-fluorbenzoy1-L- f -glutamy 1-D-glutamová kyselina,

    N-p-[N-f3,4-dihydro-2-methoxy-4-oxochinazo1in-6-ylmethy1>-N-ethy1 amino]-o-fluorbenzoy1-L- J -glutamy1-D-glutamová kyselina,

    N-p-E N-C3,4-dihydro-2-methoxy-4-oxochinazo1in-6-ylmethy1>-N-<prop 2-inyljaminol-o-fluorbenzoy1-L- Γ -glutamy1-D-giutamová kyselina, a její farmaceuticky přijatelné soli, estery nebo amidy.
13. 14. Derivát chinazolinu podle nároku 1 až 13 obecného vzorce L,_ který je prost z více než hmotnostně 20 % odpovídající sloučeniny, ve které první a druhý aminokyselinový zbytek R³ je každý v L-konfiguraci.

    13. Způsob přípravy derivátu chinazolinu obecného vzorce I,kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam, podle nároku 1 až 11, v y z n a č u j í c í se tím, že

    a) nechává se reagovat kyselina obecného vzorce

    J* si nebo její reaktivní derivát s terminální aminoskupinou dipeptidu obecného vzorce

    R³ - H kde R¹ , R². R³, R⁴ , R⁵, R^ri . R⁷ , R^e a Ár mají v nároku 1 uvedený význam, za podmínky, že jakákoliv raerkapto, amino a a1kýlaminoskupina ve skupině symbolu R¹, R² , R³ a Ar a jakákoliv karboxyskupina ve skupině symbolu R¹, R² a Ar je chráněna obvyklou chránící skupinou a jakákoliv hydroxyskupina v R¹, R² , R³ a Ar a jakákoliv karboxyskupina ve skupině symbolu R³ může být chráněna obvyklou chránící skupinou pro takové skupiny nebo taková hydroxy nebo karboxy nemusí být chráněná, a R⁹ znamená vodík nebo chránící skupinu, nebo

    b) jestliže v obecném vzorci I znamená R¹ alkoxy, aryloxy nebo alkoxy s až 3 atomy uhlíku s jedním nebo s několika substituenty ze souboru zahrnujícího hydroxy a alkoxy s až 6 atomy uhlíku, nechává se reagovat sloučenina obecného vzorce se sloučeninou obecného vzorce HNR² - Ar - COR³ kde R¹ má shora uvedený význam v odstavci <bl a kde R² , R³ , R⁴, R⁵. R⁶, R⁷ , R^rt a Ar mají v odstavci <a> uvedený význam, za podmínky, že jakákoliv raerkapto, amino, alkylamino a karboxyskupina ve skupině symbolu R² , R³ a Ar je chráněna obvyklou chránící skupinou a jakákoliv hydroxyskupina v R¹, R² , R³ a Ar může být chráněna obvyklou chránící skupinou nebo nemusí být chráněna, a Z znamená odštěpítelnou skupinu, nebo

    c) jestliže v obecném vzorci I znamená R¹merkapto nebo alkylthio, nechává se chinazolin obecného vzorce

    Ar - COR³ kde R¹žnamená halogen nebo halogenalkyl a kde R² , R³ , R⁴, R®, R⁶ R⁷, R® , R⁹ a Ar mají v odstavci Ca) uvedený význam, za podmínky, že jakákoliv merkapto, amino, alkylamino, karboxy a hydroxyskupina ve skupině symbolu R². R³a Ar může být chráněna obvyklou chránící skupinou nebo jakákoliv amino, alky lamino, karboxy a hydroxyskupina nemusí být chráněna, reagovat s thiomočovinou za získání derivátu sloučeniny obecného vzorce I. kde R¹ znamená_memr.

    kapte nebo se nechává reagovat s alkylthiolem za získání derivátu obecného vzorce I, kde znamená R¹ alkylthio, nebo

    d) jestliže v obecném vzorci I znamená R¹ alkylthio nechává se chinzolin obecného vzorce

    R kde R¹ znamená merkapto a kde R² , R³ , R⁴, R⁵, R⁶ , R⁷, R⁸ , R⁹ a Ar mají v odstavci Ca) uvedený význam, za podmínky, že jakákoliv merkapto, amino. alkylamino, karboxy a hydroxyskupina ve skupině symbolu R² , R³ a Ar je popřípadě chráněna obvyklou chránící skupinou nebo jakákoliv merkapto, amino, alkylamino, karboxy a hydroxyskupina nemusí být nechráněna, reagovat s bází a získaná thiolátová sul se alkyluje alkylhalogenidem, nebo

    e) nechává se reagovat sloučenina obecného vzorce se sloučeninou obecného vzorce HNR² - Ar - COR³ kde R¹ , R² , R³ , R⁴, R⁵, R⁶ , R⁷, R⁸ , R⁹ a Ar mají v odstavci Ca) uvedený význam, za podmínky, že v případě hydroxyskupiny ve skupině symbolu R¹, R³ nebo Ar, v případě hydroxyalkylové skupiny ve skupině symbolu R¹ nebo R², v případně hydroxyalkoxylové skupiny skupině symbolu R¹, v případě aminoskupiny ve skupině symbolu R³ nebo Ar, v případě aminoa1kýlové skupiny ve skupině symbolu R². v případně alkylaminoalkylové skupiny ve skupině symbolu R². v případe karboxy nebo karboxyalkylové skupiny ve skupině symbolu R² nebo R³, nebo v případně merkapto nebo merkaptoalkýlové skupiny ve skupině symbolu R¹, R² nebo R³ , je jakákoliv amino, karboxy, a merkaptoskupina chráněna obvyklou chránící skupinou a hydroxyskupina může být chráněna obvyklou chránící skupinou nebo hydroxyskupina nemusí být rranena, a znamená oďčtěpiLelnou skupinu, načež se popřípadě v jakémkoliv postupu a) až e), jakákoliv nežádoucí chránící skupina včetně chránící skupiny symbolu R⁹. odstraňuje o sobě známými způsoby a při způsobu podle odstav71 ce b) se skupina symbolu R¹ v poloze 4 chinazolinového kruhu odštěpí hydrolýzou bází a/nebo jakákoliv sloučenina obecného vzorce I podle způsobu a) až e) se převádí na farmaceuticky přijatelnou sůl, ester nebo amid.

    ·>
14. 16- Způsob podle nároku 15, v y z n a č u j í c í se t i m , že jakákoliv karboxyskupina ve skupině symbolu R³ z dipeptidu obecného vzorce R³ - H, použitého jako reaktant v postupu podle odstavce a) je v chráněné formě.
15. 17- Farmaceutický prostředek pro ošetřování rakoviny, vyznačující se tím, že obsahuje derivát chinazolinu podle nároku 1 až 14 spolu s farmaceuticky přijetelným ředidlem nebo nosičem 18- Použití derivát chinazolinu podle nároku 1 až 14 pro výrobu farmaceutického prostředku pro ošetřování rakoviny-