CZ172097A3

CZ172097A3 - Rapamycin 42-oximy a hydroxylaminy, způsob jejich výroby a farmaceutický prostředek s jejich obsahem

Info

Publication number: CZ172097A3
Application number: CZ971720A
Authority: CZ
Inventors: Amedeo Arturo Failli; Guy Alan Schiehser; Oleg Igorevich Bleyman
Original assignee: American Home Products Corporation
Priority date: 1994-12-07
Filing date: 1995-12-06
Publication date: 1998-01-14
Also published as: US5563145A; MX9704057A; BR9509875A; US5677295A; HK1002361A1; NZ298639A; CN1174554A; EP0796260A1; DE69521438T2; CA2206965A1; HUT77141A; UA49815C2; AU4417696A; PT796260E; ATE202357T1; AU714120B2; RU2172316C2; JPH10510270A; EP0796260B1; CN1085212C

Description

Rapamycin 42-oximy a hydroxylaminy, způsob jejich výroby a farmaceutický prostředek s jejich obsahem

Oblast techniky

Vynález se týká rapamycin 42-oximů a hydroxylaminů a způsobu jejich použití a farmaceutických prostředků pro indukci imunosuprese, léčení odmítání transplantátů, stavů vzniklých « ovlivněním hostitele štěpem, autoimunních onemocnění, zánětlivých onemocnění, leukémie z T-buněk/lymfom dospělých, pevných tumorů, houbových infekcí a hyperproliferativních vaskulárních poruch.

Dosavadní stav techniky

Rapamycin je makrocyklické trienové antibiotikum, produkované Streptomyces hygroscopicus, u kterého byla nalezena antifungální účinnost, zvláště proti Candida albicans, jak in vitro. tak i in vivo. [C.

Vezina a další, J. Antibiot. 28, 721 (1975); S. N. Sehgal a další, J. Antibiot. 28, 727 (1975); H. A. Baker a další, J. Antibiot. 31, 539 (1978), US patent 3,929,992; a US patent 3,993,749].

Ukázalo se, že samotný rapamycin (US patent 4,885,171) nebo v kombinaci s picibaniiem (US patent 4,401,653) má antitumorovou účinnost. R. Martel a další [Can. J. Physiol. Pharmacol. 55, 48 (1977)] popsal, že rapamycin je účinnýjz experimentálním modelu alergické _ _ . . =333=3 · encefalomyelitidy, roztroušené sklerózy; v modelu adjuvantní artritidy, revmatoidní artritidy; a účinně inhibuje vytváření protilátek typu IgE.

Imunosupresívní účinky rapamycinu byly popsány v FASEB 3,

3411 (1989). Jako imunosupresívní látky, použitelné při prevenci odmítání transplantátů [FASEB 3, 3411 (1989); FASEB 3, 5256 (1989);

R. Y. Calne a další, Lancet 1183 (1978); a US patent 5,100,899] byly popsány také cyklosporin A a FK-506, další makrocyklické molekuly.

Ukázalo se také, že rapamycin je rovněž použitelný při prevenci nebo léčbě systémové lupus erythematosus [US patent 5,078,999], zápalu plic [US patent 5,080,899], na inzulínu závislé diabetes mellitus [Fifth Int. Conf. Inflamm. Res. Assoc. 121 (Abstract), (1990)], proliferace buněk hladkého svalstva a ztluštění intimy po cévním poranění [Morris, R. J. Heart Lung Transplant 11 (pt. 2): 197 (1992)], leukémie z T-buněk/lymfom dospělých [evropská patentová přihláška 525.960A1] a očního zánětu [evropská patentová přihláška 532,862A1].

io Mono- a diacylované deriváty rapamycinu (esterifikované v polohách 28 a 43) se ukázaly jako užitečné protihoubové prostředky (US patent 4,316,885) a byly použity pro výrobu ve vodě rozpustných aminoacylových prekurzorů rapamycinu (US patent 4,650,803). Nedávno bylo změněno číslování ve vzorci rapamycinu; proto podle is názvosloví Chemical Abstract budou výše popsané estery v polohách 31 a 42. US patent 5,023,263 popisuje přípravu a použití 42oxorapamycinu a US patent 5,023,264 popisuje přípravu a použití 27oximů rapamycinu.

2o Podstata vynálezu

Vynález poskytuje deriváty rapamycinu použitelné jako imunosupresívní, protizánětlivé, antifungální, antiproliferativní a antitumorové prostředky se strukturou obecného vzorce

kde

X - Y znamená C=NOR¹ nebo CHNHOR²;

ιΐ'.ί.

' ΐ-W'

R¹ a R² znamenají nezávisle na sobě atom vodíku, alkyl s 1 - 6 atomy uhlíku, alkenyl s 2 - 7 atomy uhlíku, alkynyl s 2 - 7 atomy uhlíku, aminoalkyl s 1 - 6 atomy uhlíku, alkylaminoalkyl s 1 - 6 atomy uhlíku na alkylovou skupinu, dialkylaminoalkyl s 1 - 6 atomy uhlíku na alkylovou skupinu, cykloalkyl s 3 - 8 atomy uhlíku, alkyloxy s 1 - 6 atomy uhlíku, alkoxyalkyl s 1 - 6 atomy uhlíku na alkylovou skupinu, cykloalkylaminoalkyl s 4 - 14 atomy uhlíku, kyanoalkyl s 2 - 7 atomy uhlíku, fluoroalkyl s 1 - 6 atomy uhlíku, trifluoromethylalkyl s 2 - 7 atomy uhlíku, trifluoromethyl, ArO-, -(CH₂)_mAr nebo -COR³;

R³ znamená alkyl s 1-6 atomy uhlíku, -NH₂₎ -NHR⁴, -NR⁴R⁵, OR⁴ nebo Ar;

R⁴ a R⁵ znamenají nezávisle na sobě alkyl s 1 - 6 atomy uhlíku, Ar nebo, pokud jsou přítomny, mohou spolu tvořit čtyř až sedmičlenný kruh;

Ar znamená aryl nebo heteroarylový radí vytváření protilátek typu IgE kál, který může být popřípadě mono-, di-, nebo trisubstituován skupinou zvolenou z alkylu s 1 - 6 atomy uhlíku, alkenylu s 2-7 atomy uhlíku, alkynylu s 2 - 7

- 4 atomy uhlíku, arylalkylu s 7 - 10 atomy uhlíku, alkoxy s 1 - 6 atomy uhlíku, kyano, halo, hydroxy, nitro, karbaloxy s 2 - 7 atomy uhlíku, trifluormethylu, trifluormethoxy, amino, dialkylamino s 1 - 6 atomy uhlíku na alkylovou skupinu, dialkylaminoalkylu s 3 - 12 atomy uhlíku, hydroxyalkylu s 1-6 atomy uhlíku, alkoxyalkylu s 2 - 12 atomy uhlíku, alkylthio s 1 - 6 atomy uhlíku, -SO₃H a -CO₂H; a m = 0 - 6;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Farmaceuticky přijatelné soli jsou takové soli, které jsou odvozeny z anorganických kationtů jako je sodík, draslík apod.; organických bází jako jsou mono-, di-, a trialkylaminy s 1 - 6 atomy uhlíku na alkylovou skupinu a mono-, di-, a trihydroxyalkylaminy s 1 6 atomy uhlíku na alkylovou skupinu apod.; a organických a anorganických kyselin, jako kyselina octová, mléčná, citrónová, vinná, jantarová, maleinová, malonová, glukonová, chlorovodíková, bromovodíková, fosforečná, dusičná, sírová, methansulfonová a podobné přijatelné kyseliny.

Termín alkyl s 1 - 6 atomy uhlíku, alkenyl s 2 - 7 atomy uhlíku a alkynyl s 2 - 7 atomy uhlíku zahrnují molekuly jak s přímým řetězcem, tak i s rozvětvenými uhlíkovými řetězci. Příklady alkylů jako skupin nebo částí skupin, například arylalkylu, alkoxy nebo karbaloxy jsou přímé nebo větvené řetězce s 1 - 6 atomy uhlíku, s výhodou s 1 4 atomy uhlíku, například methyl, ethyl, propyl, izopropyl a n-butyl. Přítomností dvojné vazby v molekule vykazují oximy podle předkládaného vynálezu cis-trans izomerii a proto vynález zahrnuje nejen geometrické směsi izomerů, ale také jednotlivé izomery E a Z, které mohou být odděleny v oboru známými způsoby. Podobně hydroxylaminy podle předkládaného vynálezu se skládají ze směsí epimerů na C-42 a proto vynález zahrnuje nejen směs izomerů, ale také jednotlivé izomery, které mohou být odděleny v oboru známými

- 5 způsoby. Termín „aryl“ jako skupina nebo část skupiny, jako je arylalkyl zahrnuje jakoukoliv mono. nebo bikarbocyklickou aromatickou skupinu s 6 - 10 atomy uhlíku. Termín „heteroaryl zahrnuje jakýkoliv mono- nebo bícyklický heterocyklický aromatický radikál s 5 - 10 atomy v kruhu, ze kterých až 3 atomy, stejné nebo rozdílné, jsou heteroatomy zvolené z kyslíku, dusíku a síry.

Je výhodné, že aryiové a heteroarylové radikály Ar jsou fenyl, pyridyl, furyl, pyrrolyl, thiofenyl, imidazolyl, oxazolyl nebo thiazolyl, které mohou být popřípadě mono-, di- nebo trisubstituovány skupinou io zvolenou z alkylu s 1 - 6 atomy uhlíku, alkenylu s 2 - 7 atomy uhlíku, alkynylu s 2 - 7 atomy uhlíku, arylalkylu se 7 - 10 atomy uhlíku, alkoxy s 1 - 6 atomy uhlíku, kyano, halo, hydroxy, nitro, karbaloxy s 2 - 7 atomy uhlíku, trifluoromethylu, trifluoromethoxy, amino, dialkylamino s 1 - 6 atomy uhlíku na alkylovou skupinu, dialkylaminoalkylu s 3 - 12 is atomy uhlíku, hydroxyalkylu s 1 - 6 atomy uhlíku, alkoxyalkylu s 2 - 12 atomy uhlíku, alkylthio s 1 - 6 atomy uhlíku, -SO₃H a -CO₂H.

Pokud R³ je -NR⁴R⁵, skupiny R⁴ a R⁵ mohou být stejné nebo různé (jak je definováno výše) nebo mohou spolu tvořit nasycený heterocykl s 4 - 7 atomy v kruhu, z nichž 1 atom je atom dusíku a 0 - 2

2o další atomy kruhu mohou být dusík, kyslík nebo síra. V případě, že R⁴a R⁵ spolu tvoří kruh, je výhodné, když R⁴, R⁵ je uhlíkový řetězec tvořící azetidinový, pyrrolidinový, piperidinový nebo homopiperidinový kruh.

Výhodné sloučeniny podle vynálezu jsou takové, ve kterých X-Y je C=NOR¹; takové, ve kterých X-Y je C=NOR¹ a R¹ je vodík, alkyl s 1 - 6 atomy uhlíku, alkenyl s 2 - 7 atomy uhlíku, alkynyl s 2 - 7 atomy uhlíku, alkyloxy s 1 - 6 atomy uhlíku, -(CH2)mAr nebo -COR³; takové, ve kterých X-Y je CHNHOR²; takové, ve kterých X-Y je CHNHOR² a R²je atom vodíku nebo -(CH2)_mAr.

Vynález rovněž poskytuje způsob výroby rapamycinových sloučenin podle vynálezu. Vynález zvláště poskytuje způsob výroby ·· ····

-6 42-oximů a hydroxylaminových derivátů rapamycinu, který zahrnuje jeden z následujících kroků:

a) reakci 42-oxorapamycinu (popřípadě chráněné na funkci 31- hydroxy silylovou skupinou vzorce R⁶,. jak je definováno níže) s hydroxylaminem vzorce:

H₂NOR¹ kde R¹ je jak definováno výše s výjimkou skupin obsahujících karbonyl, za vzniku odpovídajícího oximu vzorce I, kde X-Y je C=NOR¹, a odstranění uvedené ochranné skupiny R⁶ io nebo

b) redukci oximu vzorce I (popřípadě chráněné na funkci 31hydroxy silylovou skupinou vzorce R⁶, jak je definováno níže), kde X-Y je C=NOR¹, kde R¹ je jak definováno výše, s výjimkou skupin obsahujících karbony, za poskytnutí hydroxylaminu vzorce I, kde is X-Y znamená CHNHOR² nebo

c) reakci sloučeniny vzorce I (popřípadě chráněné na funkci 31hydroxy silylovou skupinou vzorce R⁶, jak je definováno níže), kde X-Y je C=NOR¹, kde R¹ je atom vodíku, s kyanatanem, například

2o kyanatanem alkalického kovu, jako je kyanatan sodný, za vzniku sloučeniny vzorce I, kde X-Y znamená C=NOR¹, kde R¹ je -CONH₂, nebo

d) reakci sloučeniny vzorce I, kde X-Y znamená C=NOR¹ nebo CHNHOR², kde R¹ a R² jsou atomy vodíku (kde X-Y je C=NOR¹, popřípadě chráněná na funkci 31-hydroxy silylovou skupinou vzorce R⁶, jak je definováno níže), s izokyanátem nebo haloacylaminem vzorce

R⁴NCO, R⁴NHCOhal nebo R⁴R⁵NCOhal, ·· ·· · ·· ·· ···· ···· ···· ·· · • · · ······ • · · ♦ 9 9 99 999 · • · · ··· · · ···· ·· ··· 99 99 9

-7kde R³ je hal je halogen, jako je chlór, za poskytnutí odpovídající sloučeniny vzorce I, kde R¹ nebo R² znamená COR³ a R³znamená NHR⁴ nebo NR⁴R^S,

.......nebo -- --- - . .....____

e) reakci sloučeniny vzorce I, kde X-Y znamená C=NOH nebo

CHNHOH (kde X-Y je C=NOH, popřípadě chráněná na funkci 31hydroxy silylovou skupinou vzorce R⁶, jak je definováno níže), s alkylem nebo arylchloroformátem, za poskytnutí karbonátu vzorce I, kde R¹ nebo R² znamená COR³, kde R³ znamená alkyl nebo aryl.

io Sloučeniny podle předkládaného vynálezu je možno připravit z 42-oxorapamycinu, který je možno připravit se středním výtěžkem selektivní oxidací 42-polohy rapamycinu za přítomnosti ruthenia, jak se popisuje v US patentu 5,023,263, který se zde uvádí jako referenční. 42-oxorapamycin je možno také alternativně připravit s výtěžkem přibližně 50 % použitím tetrapropylamonium perruthenát/N-methylmorfolin N-oxidu, jak uvádí Holt v publikované PCT přihlášce US 93/0668. Na 42-oxorapamycin je pak možno působit vhodně substituovaným hydroxylaminem za poskytnutí směsi 42-(E) a (Z) oximú (X-Y znamená C=NOR¹), které je možno rozdělit standardní

2o metodologií. 42-oximy mohou dále reagovat se vhodným redukčním činidlem, jako je kyanoborohydrid sodný/THF/dioxan/pH 3,5 za vzniku hydroxylaminů podle vynálezu (X-Y znamená CHNHOR²). Sloučeniny podle vynálezu, ve kterých X-Y znamená C=NOR¹, a R¹ je skupina obsahující karbonyl, mohou být připraveny z rapamycin 42-oximu (X-Y znamená C=NOR¹ a R¹ znamená atom vodíku). Například rapamycin 42-oxim může reagovat s kyanatanem sodným za vzniku sloučeniny, ve které R¹ je -COR³ a R³ je NH₂. Podobně lze na rapamycin 42-oxim působit vhodně substituovaným izokyanátem nebo haloacylaminem [tj. R⁴R⁵NC(O)CI] za vzniku sloučenin, ve kterých R¹ znamená -COR³ a R³ znamená -NR⁴R⁵. Analogicky je možno připravit sloučeniny, ve kterých R¹ znamená -COR³ a R³ znamená -NHR⁴. Navíc reakce rapamycin 42·· .·· · ·· ·· ···· ···· · · · · ·· · ··· · · · · · · ···· · · ·· ···· ··· ··· · · ···· ·· ··· ·· ·· ·

- 8 oximu se vhodným alkyl- nebo arylchloroformátem v pyridinu a rozpouštědle jako je methylenchlorid poskytuje oximkarbonáty, ve kterých R¹ znamená -COR³ a R³ znamená alkyl nebo Ar.

Dalších funkčních derivátů je možno analogicky získat, když X-Y 5 znamená CHNHOR², přičemž se vyjde ze sloučeniny, ve které R²znamená atom vodíku (získané redukcí rapamycin 42-oximu kyanoborhydridem).

Jako alternativu k oxidativní přípravě 42-oxorapamycinu založené na rutheniu vynález také poskytuje syntetický způsob získání oximů a hydroxylaminu podle vynálezu perjodinanovou oxidací podle Dess-Martina rapamycinu, chráněného v 31-0- poloze. Ochrana polohy 31 rapamycinu se popisuje v US patentu 5,120,842, který se zde uvádí jako referenční. Například reakce rapamycinu s vhodným ochranným činidlem, jako je triethylsilyl triflát/2,615 lutidin/methylenchlorid, následovaná přídavkem kyseliny octové/THF/vody poskytne 31-0-triethylsilylrapamycin v kvantitativním výtěžku. Perjodinanová oxidace podle Dess-Martina poskytuje 31-0triethylsilyl-42-oxorapamycin při výtěžku přibližně 65 %, který může dále reagovat s vhodným hydroxylaminem (a následně derivatizován),

2o jak je popsáno výše. V případě oximů podle vynálezu může být odstraněna triethylsilylová ochranná skupina za mírně kyselých podmínek (kyselina octová/THF/voda), jak se popisuje v US patentu 5,120,842. S použitím tohoto způsobu mohou být hydroxylaminy podle vynálezu vyrobeny rovněž z odpovídajících oximů kyanoborhydridovou redukcí v kyselém prostředí s ~ následným odstraněním silylové ochranné skupiny.

Vycházeje z výše popsané Dess-Martinovy perjodinanové metodologie, jsou meziprodukty použitelnými při přípravě oximů podle tohoto vynálezu následující sloučeniny.

- 9 10

R⁷, R⁸ a R⁹ jsou nezávisle na sobě alkyl s 1 - 8 atomy uhlíku, alkenyl s 1 - 8 atomy uhlíku, fenylalkyl se 7 - 10 atomy uhlíku, trifenylmethyl nebo fenyl.

Z výše uvedených meziproduktů je výhodná sloučenina podle příkladu 1. Vynález dále poskytuje způsob přípravy meziproduktu vzorce II jak je definován výše, který zahrnuje oxidaci 31-0chráněného rapamycinu (kde ochranná skupina je výše uvedená skupina R⁶) za podmínek vhodných pro provádění Dess-Martinovy perjodinanové oxidace a následnou oxidaci uvedené ochranné skupiny.

Reagencie použité při přípravě sloučenin podle vynálezu mohou být získány komerčně nebo být připraveny standardními v literatuře popsanými postupy.

Imunosupresívní aktivita zástupců sloučenin podle vynálezu byla vyhodnocena v standardním farmakologickém testovacím postupu in vitro, kdy byla měřena inhibice proliferace lymfocytů (LAF) a ve dvou standardních farmakologických testovacích postupech in vivo.

Testem s kožními štěpy se měří imunosupresívní účinnost sloučeniny stejně jako schopnost testované sloučeniny inhibovat nebo léčit odhojení transplantátu. Standardní farmakologický test s adjuvantní

-10artritidou měří schopnost testované sloučeniny inhibovat imunologicky způsobený zánět. Testovací postup s adjuvantní artritidou je standardním farmakologickým testovacím postupem pro revmatoidní artritidu. Tyto standardní farmakologické testovací postupy se popisují níže.

Jako měřítko imunosupresívních účinků některých sloučenin in vitro byl použit postup komitogenně indukované proliferace thymocytů (LAF). Stručně, buňky thymu normální myši BALB/c se kultivují 72 hodin s PHA a IL-1 a v průběhu posledních 6 hodin se pulzně značí io tritiovaným thymidinem. Buňky se kultivují v přítomnosti různých koncentrací rapamycinu, cyklosporinu A nebo testované sloučeniny nebo bez přítomnosti těchto látek. Buňky se sklidí a změří se inkorporovaná radioaktivita. Inhibice lymfoproliferace se stanoví jako změna v procentech v počtech impulzů za minutu ve srovnání s kontrolami bez přítomnosti testovaných látek. Pro každou vyhodnocovanou sloučeninu byl za účelem srovnání rovněž vyhodnocován rapamycin. Pro každou testovanou sloučeninu i pro rapamycin byla získána hodnota IC₅o· Rapamycin měl při vyhodnocení jako srovnávací sloučenina ke sloučeninám podle vynálezu IC₅o

2o rozmezí od 0,5 do 3,3 nM. Získané výsledky jsou vyjádřeny jako hodnota ICso a jako procenta inhibice proliferace T-buněk při koncentraci 0,1 μΜ. Získané výsledky pro testované sloučeniny podle vynálezu byly rovněž vyjádřeny jako poměr vzhledem k rapamycinu. Pozitivní poměr znamená imunosupresívní aktivitu. Poměr větší než 1 označuje, žé testovaná sloučenina inhibovala proliferaci thymocytů ve větší míře než rapamycin. Dále je uveden výpočet poměru:

ICso rapamycinu_

IC₅₀ testované sloučeniny

3o Vybrané sloučeniny podle vynálezu byly také testovány in vivo testovacím postupem pro stanovení doby přežití kožního štěpu ze samců dárců BALB/c, transplantovaného samicím C₃H(H-2K) jako příjemcům. Tato metoda je upravena podle Billingham R. E.

-11 a Medawar Ρ. B., J. Exp. Biol. 28: 385 - 402 (1951). Stručně, kožní štěp dárce byl transplantován na hřbet příjemce jako alograft a pro kontrolu byl ve stejné oblasti použit izograft. Příjemci byli léčeni různými koncentracemHestovaných sloučenin intraperitoneálně nebo orálně. Jako kontrola testu byl použit rapamycin. Příjemci bez léčení sloužili jako kontrola odmítnutí. Štěp byl denně sledován a byly pořizovány záznamy pozorování, dokud štěp nevyschl a nevytvořil zčernalý strup. To bylo považováno jako den odmítnutí. Střední doba přežití štěpu (počet dnů ± SD) pro skupinu ošetřenou léčivem byla porovnána s kontrolní skupinou. Výsledky jsou vyjádřeny jako střední doba přežití ve dnech. Neléčené (kontrolní) kožní štěpy se obvykle odhojí v průběhu šesti až sedmi dnů. Sloučeniny byly testovány použitím dávky 4 mg/kg, i.p. Pro rapamycin v koncentraci 4 mg/kg i.p. byla získána doba přežití 11,67 ± 0,63 dnů.

Standardním farmakologickým testem adjuvantní artritidy se měří schopnost testovaných sloučenin zabránit imunologicky způsobenému zánětu a inhibovat nebo léčit revmatoidní artritidu. Dále je stručně popisována použitá testovací metoda. Skupina krys (samci inbredních krys Wistar Lewis) se 1 hodinu před podáním antigenu ošetří testovanou sloučeninou a potom se jim injikuje pro indukci artritidy do pravé zadní končetiny Freudovo kompletní adjuvans (FCA). Krysy potom dostávají ústy v pondělí, středu a pátek celkem 7 dávek ve dnech 0 až 14. Obě zadní končetiny se měří ve dnech 16, 23 a 30. Rozdíl v objemu končetiny (ml) mezi dnem 16 a dnem 0 se změří a vypočte se změna v procentech proti kontrole.’Zánět v levé zadní končetině (neinjikované) je způsoben zánětem prostřednictvím Tbuněk a je zaznamenán jako procento změny proti kontrole. Na druhé straně zánět pravé zadní končetiny je způsoben nespecifickým zánětem. Sloučeniny byly testovány v dávce 2 mg/kg. Výsledky jsou vyjádřeny jako procento změny neinjikované končetiny v 16. dnu proti kontrole; čím negativnější je procento změny, tím účinnější je sloučenina. Rapamycin poskytl proti kontrole hodnotu - 70 %, což

- 12ukazuje, že rapamycinem ošetřené krysy měly o 70 % menší imunologicky indukovaný zánět než kontrolní krysy.

Výsledky těchto standardních farmakologických testů jsou uvedeny po kapitole způsob výroby testovaných sloučenin. *

Výsledky těchto standardních farmakologických testů ukazují imunosupresívní účinnost sloučenin podle vynálezu jak in vitro, tak i jn vivo. Výsledky získané testem LAF ukazují supresi proliferace T-buněk a tím ukazují imunosupresívní účinnost sloučenin podle vynálezu. Další ukázka použitelnosti sloučenin podle vynálezu jako io imunosupresívních prostředků byla získána pomocí výsledků, získaných v testu s kožními štěpy a adjuvantní artritidou. Navíc výsledky pro kožní štěpy dále ukazují schopnost sloučenin podle vynálezu léčit nebo inhibovat odmítání transplantátů. Výsledky získané ve standardním farmakologickém testu s adjuvantní artritidou is dále ukazují schopnost sloučenin podle vynálezu léčit nebo inhibovat revmatoidní artritidu.

Podle výsledků těchto standardních farmakologických testů jsou sloučeniny podle vynálezu použitelné při léčení nebo inhibicí odmítání transplantátů, například u ledviny, srdce, jater, plic, kostní dřeně,

2o pankreatu (buňky ostrůvků), rohovky, tenkého střeva, kožních alograftů a xenograftů srdečních chlopní; při léčení nebo inhibicí reakcí hostitele na štěp; při léčení nebo inhibicí autoimunních onemocnění, jako je lupus, revmatoidní artritida, diabetes mellitus, myastenia gravis a roztroušená skleróza; a při zánětlivých onemocněních jako je lupenka, dermatitida, ekzém, seborea, zánětlivé onemocnění střev, záněty plic (včetně astmatu), chronického obstruktivního plicního onemocnění, emfyzému, syndromu akutní dechové nedostatečnosti, bronchitidy apod. (a oční uveitidy).

Pro svůj získaný profil účinků je možno sloučeniny podle vynálezu pokládat také za antitumorové, antifungální a antiproliferativní sloučeniny. Sloučeniny podle vynálezu jsou tedy • · • · ·· ·· · « ···· • · · ··· 9 9 »99· 99 ··· ·· ·· ·

-13také použitelné při léčení pevných tumorů, leukémie z T-buněk dospělých/lymfomy, houbových infekcí a hyperproliferativních cévních onemocnění, jako je restenóza a ateroskleróza. Při použití proti restenóze je výhodné^ když se sloučeniny podle vynálezu používají pro léčení restenozy, vyskytující se po angioplastickém zákroku. Při použití k tomuto účelu je možno podávat sloučeniny podle vynálezu před zákrokem, v průběhu zákroku, po zákroku nebo v jakékoliv případné kombinaci.

Při podávání pro léčení nebo inhibici výše uvedených stavů io mohou být sloučeniny podle vynálezu podávány savci orálně, parenterálně, intranazálně, intrabronchiálně, transdermálně, místně, intravaginálně nebo rektálně.

Předpokládá se, že pokud se sloučenin podle vynálezu používá jako imunosupresívních nebo protizánětlivých prostředků, mohou být is podávány ve spojení s jedním nebo více imunoregulačními prostředky. Tyto imunoregulační prostředky bez omezení zahrnují azathioprin, kortikosteroidy jako prednizon a methylprednizolon, cyklofosfamid, rapamycin, cyklosporin A, FK-506, OKT-3 a ATG. Při kombinaci sloučenin podle vynálezu s takovými dalšími léčivy nebo prostředky

2o pro indukci imunosuprese nebo pro léčení zánětů se pro dosažení požadovaného účinku může podávat menší množství těchto prostředků. Základy takové kombinační terapie byly položeny Stepkowskim, jehož výsledky ukazují, že použití kombinace rapamycinu a cyklosporinu A v subterapeutických dávkách výrazně prodloužilo dobu přežití srdečního alograftu [Ťransplantation Proč. 23: 507 (1991)].

Sloučeniny podle vynálezu mohou být savci podávány jako takové nebo spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem. Farmaceutickým nosičem může být pevná látka nebo kapalina. Při

3o podávání ústy se ukázalo, že přijatelný orální prostředek může obsahovat 0,01 % Tween 80 v PHOSALu PG-50 (fosfolipidový ·

- 14 koncentrát obsahující 1,2-propylenglykol, A. Nattermann & Cie.

GmbH).

Pevný nosič může zahrnovat jednu nebo více látek, které mohou rovněž působit jako ochucovací prostředky, kluzné látky, solubilizační prostředky, suspendující prostředky, plnidla, maziva, látky pro usnadnění stlačování, vazné látky nebo látky pro usnadnění rozpadávání tablet; může také jít o zapouzdřovací materiál. V případě prášků je nosičem jemně prášková pevná látka, která je ve směsi s jemně práškovou aktivní složkou. V případě tablet se aktivní složka io mísí ve vhodných poměrech s nosičem s nezbytnými stlačovacími vlastnostmi a lisuje se na požadovaný tvar a velikost. Prášky a tablety s výhodou obsahují až 99 % aktivní složky. Vhodné pevné nosné látky například zahrnují fosforečnan vápenatý, stearan hořečnatý, talek, cukry, laktóza, dextrin, škrob, želatina, celulóza, methylcelulóza, karboxymethylcelulóza jako sodná sůl, polyvinylpyrrolidin, nízkotající vosky a iontoměničové pryskyřice.

Kapalné nosiče se používají pro přípravu roztoků, suspenzí, emulzí, sirupů, elixírů a tlakovaných prostředků. Aktivní složka může být rozpuštěna nebo suspendována v farmaceuticky přijatelném

2o kapalném nosiči, jako je voda, organické rozpouštědlo, směs obou nebo farmaceuticky přijatelné oleje nebo tuky. Kapalný nosič může obsahovat buď vhodné farmaceutické přídavné látky, jako jsou solubilizátory, emulgátory, pufry, ochranné látky, sladidla, ochucovací prostředky, suspendující prostředky, zahušťující prostředky, barviva, látky regulující viskozitu, stabilizátory nebo regulátory osmotického tlaku. Vhodnými příklady kapalných nosičů pro orální a parenterální podávání jsou voda (částečně obsahující výše uvedené přídavné látky, například deriváty celulózy, s výhodou sodnou sůl karboxymethylcelulózy), alkoholy (včetně monohydroxyalkoholů a polyhydroxyalkoholů, například glykolů) a jejich deriváty, lecitiny a oleje (například frakcionovaný kokosový a podzemnicový olej). Pro

parenterální podávání může být nosičem také olejový ester, jako je ethyloleát a izopropylmyristát. Pro parenterální podávání se v prostředcích používají kapalné nosiče ve sterilní formě. Kapalnými nosiči pro tlakované prostředky mohou být halogenované uhlovodíky nebo jiné farmaceuticky přijatelné hnací plyny.

Kapalné farmaceutické prostředky ve formě sterilních roztoků nebo suspenzí mohou být použity například pro intramuskulární, intraperitoneální nebo subkutánní injekci. Sterilní roztoky mohou být rovněž podávány intravenozně. Sloučenina může být také podávána ústy, buď v kapalné nebo pevné formě.

Prostředky podle vynálezu mohou být podávány rektálně ve formě běžných čípků. Pro podávání intranazální nebo intrabronchiální inhalací nebo insuflací mohou být sloučeniny podle vynálezu ve formě vodných nebo zčásti vodných roztoků, které mohou být použity ve formě aerosolu. Sloučeniny podle vynálezu je také možno podávat transdermálně použitím transdermální náplasti obsahující aktivní sloučeninu a nosič, který je vzhledem k aktivní sloučenině inertní, je netoxický pro kůži a dovolí přenos prostředku pro systémovou absorpci do krevního řečiště přes kůži. Nosič může být také jakákoliv

2o z forem jako jsou krémy a masti, pasty, gely a okluzivní zařízení. Krémy a masti mohou být viskozní, kapalné nebo polotuhé emulze buď typu olej ve vodě nebo voda v oleji. Vhodné mohou být také pasty, obsahující absorpční prášky dispergované ve vazelíně nebo hydrofilní vazelíně s obsahem aktivní složky. Pro uvolňování aktivní látky do krevního řečiště je možno použít řady okluzívních zařízení, jako je semipermeabilní membrána kryjící zásobník s obsahem aktivní složky s nosičem nebo bez něj nebo matrix s obsahem aktivní složky. Další okluzivní zařízení jsou známa z literatury.

Navíc mohou být sloučeniny podle vynálezu ve formě roztoku,

3o krému nebo omývacího roztoku, obsahujícího farmaceuticky přijatelné nosiče a 0,1 až 5 % s výhodou 2 % aktivní sloučeniny, které mohou být podávány na oblasti postižené houbovým onemocněním.

Požadavky na dávkování se liší s použitým prostředkem, cestou podávání, vážností příznaků a konkrétního ošetřovaného pacienta, s Podle výsledků získaných ve standardních farmakologických testovacích postupech je navržená denní dávka aktivní složky 0,1 pg/kg až 100 mg/kg, výhodněji mezi 0,001 až 25 mg/kg a nejvýhodněji mezi 0,01 až 5 mg/kg. Léčení se obvykle zahajuje dávkami sloučeniny menšími než optimálními. Poté se dávka zvyšuje, dokud se nedosáhne io podle okolností optimálního účinku; přesné dávkování pro orální, parenterální, nazální nebo intrabronchiální podání určí na základě zkušeností s konkrétním léčeným pacientem ošetřující lékař. S výhodou jsou farmaceutické prostředky ve formě jednotlivé dávkovači formy, například jako tablety nebo kapsle. V této formě je prostředek rozdělen do jednotlivých dávek, obsahujících vhodná množství aktivní složky; jednotlivé dávky mohou být balíčkované prostředky, například balíčkované prášky, lahvičky, ampule, předem naplněné stříkačky nebo sáčky obsahující kapalinu. Jednotlivou dávkovači formou může být například kapsle nebo tableta jako taková, nebo může jít o vhodný

2o počet jakýchkoliv takových prostředků v balení.

Přípravu a biologické účinky reprezentativních sloučenin podle vynálezu ilustrují následující příklady.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

31-O-(triethylsilyl)-42-oxorapamycin

Krok A. 31-O-(triethylsilvl)rapamycin

K roztoku rapamycinu (15,39 g, 16,84 mmol) a 2,6-lutidinu (7,65 g, 75,76 ml) v dichlormethanu (100 ml) byl po kapkách přidáván v • · ·

- 17 průběhu 30 minut při 0 °C, triethylsilyítrifluoromethan sulfonát (10 g,

37,88 mmol). Směs byla při 0 °C míchána dalších 90 minut a zfiltrována. Filtrát byl zředěn ethylacetátem (500 ml), promyt vodou (3x250 ml) a roztokem soli (1x100 ml), vysušen (MgSO₄) a odpařen do sucha. Materiál byl rozpuštěn v bezvodém THF (40 ml), ochlazen na 0 °C a smísen s ledově chladnou ledovou kyselinou octovou ( 150 ml) a vodou (80 ml). Směs byla míchána 3 hodiny při 0 °C, zředěna ethylacetátem (500 ml) a pH bylo opatrně upraveno na hodnotu 7-8 NaHCO₃ při 0 °C. Organická vrstva byla promyta vodou (2x250 ml), ío roztokem soli (1x100 ml), vysušena (MgSO₄) a odpařena do sucha za poskytnutí v názvu uvedeného produktu v kvantitativním výtěžku.

¹H NMR (CDCIa, 400 MHz): δ 1,66 (3H, 6-CH₃C=C), 1,75 (3H, 30-CH₃C=C), 3,14 (3H, 41-OCH₃), 3,27 (3H, 7-CH₃O), 3,40 (3H, 32CH₃O), 4,12 (m,1H, 31-CH).

is MS (neg. iont FAB, m/z): 1027,4 [Μ]', 589,3.

Krok B. 31-Q-(triethvlsilyl)-42-oxorapamvcin

Směs 31-O-(triethylsiIyl)rapamycinu (17,32 g, 16,84 mmol) a Dess-Martinova perjodinanu (8,65 g, 20,35 mmol) v bezvodém

2o dichloromethanu (150 ml) byla 5 hodin míchána pod dusíkem. Směs byla zfiltrována, filtrát zředěn ethylacetátem (500 ml) a promyt vodou (3 x 250 ml) a roztokem soli (1 x 100 ml), vysušen (MgSO₄) a odpařen do sucha. Surový materiál byl předem absorbován na kolonu oxidu křemičitého Merck-60, která byla eluována směsí hexan-ethylacetát

95 : 5 a 7 : 2 za poskytnutí čistého v názvu uvedeného produktu s výtěžkem 64,9 %.

¹H NMR (CDCI₃, 400 MHz): δ 0,42-0,48 (m, 9H), 0,80-0,83 (m, 6H),1,61 (3H, 6-CH₃C=C), 1,77 (3H, 30-CH₃C=C), 3,04 (3H, 41-OCH₃), 3,16 (3H, 7-OCH₃), 3,28 (3H, 32-CH₃O), 3,90 (m, 1H, 41-CH).

MS (neg. iont FAB, m/z): 1025,3 [M]*.

Příklad 2

42-deoxo-42-(hvdroxvimino)rapamycin

Způsob A

Směs 42-oxorapamycinu (0,183 g, 0,22 mmol; připravená podle způsobu, popsaného v US patentu 5,023,263), hydroxylamin hydrochloridu (0,0143 g, 0,22 mmol) a octanu sodného (0,025 g, 0,3 mmol) v methanolu (5 ml), byla míchána 15 minut pod dusíkem. Směs byla odpařena do sucha a zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií (kolona silikagel Merck-60 eluent 50 % THF v hexanu). Čisté frakce byly spojeny, odpařeny a výsledný olej byl rekrystalizován ze směsi izopropylether/cyklohexan 20 : 80 za poskytnutí v názvu uvedeného produktu jako směsi izomerů EZ (0,075 g, výtěžek 40 %).

¹H NMR (CDCb, 400 MHz): δ 1,65 (3H, 6-CH₃C=C)), 1,75 (3H, 30-CH₃C=C), 3,13 (3H, 41-OCH₃), 3,34 (3H, 7-OCH₃), 3,41 (3H, 32OCH₃) ¹³C NMR (CDCI₃, 400 MHz): δ 215,28, 208,17, 169,26, 166,72, 158,83, 140,60, 140,07, 135,95, 135,67, 133,56, 130,18, 129,47, 126,62, 126,43, 98,48, 86,33, 84,73, 84,30, 78,90, 67,17, 59,29,

59,13, 57,51, 55,93, 55,88, 51,234, 46,58, 46,04, 44,19, 41,47,

40,65, 40,19, 38,93, 38,41, 37,71, 35,08, 33,78, 33,24, 32,05, 32,00,

31,82, 31,21, 30,92, 27,21, 27,05, 26,89, 25,27, 22,84, 21,97, 21,62,

21,46, 20,64, 16,32, 16,22, 16,09, 15,99, 14,74, 13,60, 13,18, 13,10,

10,33, 10,15.

MS (neg. iont FAB, m/z): 926 [MJ*. 590, 334

Analýza vypočtená pro 05ΐΗ₇8Ν₂0ι₃: C, 66,07; H, 8,48; N, 3,02:

Nalezeno: C, 66,25; H. 8,67; N, 3,03.

Způsob Β

Krok A. 31 -Q-(triethvlsily0-42-deoxo-42-(hydroxvimino)rapamycin

Za podmínek bez přítomnosti vody byla 30 minut míchána směs 31 -O-(triethy is i ly l)-42-oxorapamycinu z příkladu 1 (0 ,105 g, 0 ,102 mmol), hydroxylaminhydrochloridu (7,6 mg, 0,109 mmol), a octanu sodného (12,5 mg, 0,153 mmol) v bezvodém methanolu (5 ml ). Směs byla zfiltrována a filtrát odpařen do sucha. Zbytek byl znovu rozpuštěn v ethylacetátu (50 ml), promyt vodou (2 x 50 ml) a roztokem soli (1 x 50 ml), sušen (MgSO₄) a odpařen do sucha za poskytnutí v názvu io uvedeného produktu jako směsi izomerů EZ (0,114 g, výtěžek 94 %).

¹H NMR (CDCIa, 400 MHz): δ 0,47-0,55 (m, 9H), 0,84-0,88 (m, 6H), 1,65 (3H, 6-CH₃C=C), 1,75 (3H, 30-CH₃C=C), 3,14 (3H, 41OCH₃), 3,26 (3H, 7-OCH₃), 3,44 (3H, 32-OCH₃)

MS (neg. iont FAB, m/z): 1040,7 [M]'.

Krok B. 42-deoxo-42-(hvdroxyimino)rapamvcin

Roztok 31-O-(triethylsilyl)-42-deoxo-42-(hydroxyimino) rapamycinu (1 g, 0,974 mmol) ve 20 ml 10 % roztoku kyseliny ptoluensulfonové v methanolu byl míchán 1 hodinu pod dusíkem při

2o 0 °C. Roztok byl zředěn ethylacetátem a reakce ukončena 5 % vodným NaHCO₃. Organická vrstva byla promyta vodou roztokem soli, sušena (MgSO₄) a odpařena do sucha za poskytnutí v názvu uvedeného produktu, shodným s materiálem připraveným ve způsobu A (0,812 g, 89,9 % výtěžek).

Výsledky, získané při standardních farmakologických testech:

LAF IC₅₀: 3,88 nM LAF poměr: 0,85 Přežití kožního štěpu: 10,8 ± 0,4 ·· ····

9

-20 ··

Příklad 3

42-deoxo-42-(hydroxvamino)rapamvcin

K roztoku 31-O-(triethylsilyl)-42-deoxo-42-(hydroxyimino) rapa5 mycinu z příkladu 2, způsob B, krok A (2,08 g, 2 mmol) v bezvodém methanolu (75 ml) byly současně přidávány při 0 °C v průběhu 30 minut 1N-roztok kyanoborohydridu sodného v tetrahydrofuranu (2 ml) a 4N roztok HCl v dioxanu, aby se hodnota pH udržela na 3,5. Směs byla. 30 minut míchána, zředěna EtOAc a promyta 2,5 % NaHCO₃ (100 io ml), vodou (2 x 250 ml) a roztokem soli (1 x 250 ml), sušena (MgSO₄) a odpařena do sucha za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny jako směsi izomerů (0,763 g, výtěžek 41 %).

¹H NMR (CDCIa, 400 MHz): δ 1,60 a 1,63 (3H, 6-CH₃C=C), 1,72 a 1,74 (3H, 30-CH₃C=C), 3,09 a 3,11 (3H, 41-OCH₃), 3,28, 3,32, 3,34 a 3,36 (6H, 7- a 32-OCH₃).

MS (neg. iont FAB, m/z): 928,4 [M]', 590,3, 336,6.

Analýza: vypočteno pro C₅iH₈oN₂Oi₃: C, 65,92; H, 8,68; N, 3,01;

Nalezeno: C, 65,36; H. 8,53; N, 2,82.

Výsledky získané při standardních farmakologických testech:

LAF IC₅₀: 5,60 nM

LAF poměr: 0,18

Přežití kožního štěpu: 9,6 ± 0,0 .

Procenta změny adjuvantní artritidy proti kontrole: - 84 %.

Příklad 4

42-deoxv-42-oxorapamycin-42-O-karbamoyloxim

Směs 42-deoxo-42-(oxyimino)rapamycinu z příkladu 2 (0,813 g, 0,876 mmol), kyanatanu sodného (0,228 g, 3,5 mmol), ledové kyseliny

-21 »··· ·· octové (8 ml) a vody (8 ml) byla míchána pod dusíkem 1,5 hodiny.

Směs byla zředěna ethylacetátem (100 ml) a reakce ukončena vodným

NaHCO₃. Organická vrstva byla promyta vodou a roztokem soli, sušena (MgSO₄ a odpařena do sucha. Surový produkt byl rozpuštěn v dichlormethanu, předem absorbován na silikagelovou kolonu Merck60 a čištěn bleskovou chromatografií (postupný gradient od 50 % ethylacetátu v hexanu do čistého ethylacetátu) za poskytnutí v názvu uvedeného produktu jako směsi izomerů EZ (0,289 g, výtěžek 34 %).

¹H NMR (CDCI₃, 400 MHz): δ 1,66 (3H, 6-CH₃C=C), 1,75 (3H, io 30-CH₃C=C), 3,14 (3H, 41-OCH₃), 3,33 (3H, 7-OCH₃), 3,43 (3H, 32OCH₃) ¹³C NMR (CDCI₃, 400 MHz): d 215,17, 208,11, 169,67, 169,30,

166,73, 164,31, 164,25, 156,37, 156,33, 140,05, 138,34, 137,28,

136,07, 135,78, 135,09, 133,51, 133,25, 132,17, 130,61, 130,22,

130,05, 129,40, 127,33, 126,81, 126,66, 126,57, 126,44, 125,76,

125,50, 125,22, 98,70, 98,50, 84,73, 84,34, 84,28, 82,70, 78,92, 68,91, 67,21, 59,29, 57,93, 57,82, 56,34, 56,31, 56,16, 56,09, 55,85, 55,56,52,00,51,25,46,55,46,06, 45,68,44,54,44,18, 41,92,41,83, 41,48, 41,40, 41,26, 41,14, 41,01, 40,88, 40,57, 40,42, 40,35, 40,19,

2o 39,77, 39,30, 39,17, 38,97, 38,83, 38,66, 38,59, 37,98, 37,45, 37,26,

35,53, 35,13, 34,88, 34,79, 34,72, 34,57, 33,83, 33,49, 33,37, 33,31,

33,24, 32,19, 32,03, 31,98, 31,85, 31,70, 31,64, 31,20, 27,35, 27,21,

27,03, 26,80, 25,23, 25,04, 24,45, 24,31, 21,62, 21,51, 21,37, 20,99,

20,74, 20,63, 16,69, 16,30, 16,18, 15,95, 15,80, 15,71, 15,03, 14,57,

13,88,13,64, 13,18, 13,13, 13,07, 10,16.

MS (neg. iont FAB, m/z): 969,8 [M]‘, 925,8 [M-CONH₂]', 590,6. Výsledky získané standardními farmakologickými testy:

LAF IC₅₀: 2,00 nM

LAF poměr: 0,25

Přežití kožního štěpu: 9,5 ±1,1

-22 Příklad 5

42-deoxv-42-oxorapamycin-42-fQ-(pyridin-2-ylmethvl)1-oxim

V názvu uvedená sloučenina byla připravena podle příkladu 2, způsob B s tím rozdílem, že hydroxylaminhydrochlorid byl nahrazen 0(pyridin-2-ylmethyl)hydroxylamindihydrochloridem (výtěžek 71,1 %).

¹H NMR (CDCI₃, 400 MHz): δ 1,654 (3H, 6-CH₃C=C), 1,751 (3H, 30-CH₃C=C), 3,138 (3H, 41-OCH₃), 3,334 (3H, 7-OCH₃), 3.338 (3H, 32-OCH₃), 7,17-8,58 (mm, 4H, Harom).

w ¹³C NMR(CDCI₃, 400 MHz): δ 158,96 (42-C=NO-)

MS (neg. iont FAB, m/z): 1017,5 [M]‘, 590,4, 425,3.

Výsledky získané standardními farmakologickými testy:

LAF IC₅₀: 1,50 nM

LAF poměr: 0,40.

Přežití kožního štěpu: 7,8 ± 0,8

Procento změny u adjuvantní artritidy proti kontrole: - 53 %

Příklad 6

42-deoxv-42-oxorapamycin-42-f0-(pyridin-4-ylmethvl)1-oxim

V názvu uvedená sloučenina byla připravena podle příkladu 2, způsob B s tím rozdílem, že hydroxylaminhydrochlorid byl nahrazen O-(pyridin-4-ylmethyl)-hydroxylamindihydrochloridem (výtěžek

34,5 %).

¹H NMR (CDCI₃, 400 MHz): δ 1,653 (3H, 6-CH₃C=C), 1,753 (3H,

30-CH₃C=C), 3,153 (3H, 41-OCH₃), 3,29 (2x3H, 7-OCH₃ a 32-OCH₃),

7,2 (m, 2H, Harom), 8,52 (m, 2H, Harom).

MS (neg. iont FAB, m/z): 1017,2 [M]', 590,2, 425,1.

• ·'

- 23 Výsledky, získané ve standardních farmakologických testech:

LAF IC₅₀: 1,80 nM

LAF poměr: 0,31

Přežití kožního štěpu: 8,0 ± 0,9.

Příklad 7

42-deoxv-42-oxorapamvcin-42-fO-(terc.butyl')1-oxim

V názvu uvedená sloučenina byla připravena podle příkladu 2, způsob B kromě toho, že hydroxylaminhydrochlorid byl nahrazen 0io (terc.butyl)-hydroxylaminhydrochlondem (výtěžek 25,6 %).

¹H NMR (CDCla, 400 MHz): δ 1,28 (9H, terč.-butyl), 1,654 (3H,

6- CH₃C=C), 1,75 (3H, 30-CH₃C=C), 3,136 (3H, 41-OCH₃), 3,336 (3H,

7- OCH₃), 3,37 (3H, 32-OCH₃).

¹³C NMR (CDCI₃, 400 MHz): δ 155,89 (42-C=NO-) is MS (neg. iont FAB, m/z): 982,5 [MJ*. 590,3, 390,2.

Výsledky získané standardními farmakologickými testy:

LAF: 49 % inhibice při 0,1 μΜ

Příklad 8

2o 42-deoxv-42-oxorapamvcin-42-fO-(fenylmethvl)1-oxim

V názvu uvedená sloučenina byla připravena podle příkladu 2, způsob B s výjimkou toho, že namísto hydroxylaminhydrochloridu byl použit O-(fenylmethyl)-hydroxylaminhydrochlorid (výtěžek 29,9 %).

¹H NMR (CDCI₃, 400 MHz): δ 1,652 (3H, 6-CH₃C=C), 1,747 (3H, 25 30-CHaC=C), 3,136 (3H, 41-OCH₃), 3,332 (3H, 7-OCH₃), 3,35 (3H, 32OCHa), 5,134 (2H, =NOCH₂., na C-42), 7,27-7,37 (m, 5H, Harom)

_o . ·*·* ·· ··· ·· *«

- 24 ¹³C NMR (CDCI3, 400 MHz): 8 158,48 (42-C=NO-)

MS (neg. iont FAB, m/z): 1016,2 [M]', 590,2, 424,1.

Výsledky získané standardními farmakologickými testy:

' LAF IC₅₀: 21,67 nM

LAF poměr: 0,03

Příklad 9

42-deoxv-42-oxorapamvcin-42-(Q-alyl)-oxim

V názvu uvedená sloučenina byla připravena podle příkladu 2, 10 způsob B kromě náhrady hydroxylaminhydrochloridu O-(alyl)hydroxylaminhydrochloridem (výtěžek 57,1 %).

¹H NMR (CDCI3, 400 MHz): δ 1,655 (3H, 6-CH₃C=C), 1,751 (3H, 30-CH₃C=C), 3,139 (3H, 41-OCH₃), 3,336 (3H, 7-OCH₃), 3,395 (3H, 32-OCHa), 4,60 (m, 2H, =NOCH₂C=, na C-42), 5,17-5,31 (m, 2H,

-C=CH₂, na C-42), 5,94-6,03 (m,1H,-CCH=C-, na C-42).

¹³C NMR (CDCI3, 400 MHz): δ 158,1 (42-C=N-O-)

MS (neg. iont FAB, m/z): 966,5 [M]', 590,3, 374,2.

Výsledky získané standardními farmakologickými testy:

LAF 43 % inhibice při Ο,ΓμΜ

Příklad 10

42-deoxv-42-oxorapamvcin-42-rQ-(prop-2-ynyl)l-oxim

V názvu uvedená sloučenina byla připravena podle příkladu 2, způsob B kromě náhrady hydroxylaminhydrochloridu O-(prop-2-ynyl)25 hydroxylaminhydrochloridem (výtěžek 35,4 %).

• · ·· ·· • · · · ···· · · · ··· ··· ·· · ·· ·· · · ·· ··· · ··· · · · · · _ ···· ·· ··· ·· ·· ·

- 25 ¹H NMR (CDCI₃, 400 MHz): δ 1,66 (3H, 6-CH₃C=C), 1,75 (3H, 30-CH₃C=C), 3,13 (3H, 41-OCH₃). 3,33 (3H, 7-OCH₃), 3,415 (3H, 32OCH₃), 4,69 (2H, =NOCH₂C na C-42) ¹³C NMR (CDCI₃, 400 MHz): δ 159,5 (42-C=NO-)

MS (neg. iont FAB, m/z): 964,2 [M]~, 590,2, 372,1.

Výsledky získané standardními farmakologickými testy:

LAF IC₅₀: 8,13 nM

LAF poměr: 0,08

Přežití kožního štěpu: 8,0 ±1,1.

Příklad 11

42-deoxo-42-rO-(pyridin-4-vlmethvQ1-hvdroxyaminorapamycin

V názvu uvedená sloučenina byla připravena podle příkladu 3 kromě náhrady 31-O-(triethylsilyl)-42-deoxo-42-hydroxyiminorapamy15 činu 42-deoxy-42-oxorapamycin-42-[O-(pyridin-4-ylmethyl)]-oximem z příkladu 6.

MS (neg. iont FAB. m/z): 1019,5 [M]'.

Claims

1. Sloučenina obecného vzorce kde (I)

X - Y znamená.C=NOR¹ nebo CHNHOR²;

R¹ a R² znamenají nezávisle na sobě atom vodíku, alkyl s 1 - 6 atomy uhlíku, alkenyl s 2 - 7 atomy uhlíku, alkynyl s 2 - 7 atomy uhlíku, aminoalkyl s 1 - 6 atomy uhlíku, alkylaminoalkyl s 1 - 6 atomy uhlíku na alkylovou skupinu, dialkylaminoalkyl s 1 - 6 atomy uhlíku na alkylovou skupinu, cykloalkyl s 3 - 8 atomy uhlíku, alkyloxy s 1 - 6 atomy uhlíku, alkoxyalkyl s 1 - 6 atomy uhlíku na alkylovou skupinu, cykloalkylaminoalkyl s 4 - 14 atomy uhlíku, kyanoalkyl s 2 - 7 atomy uhlíku, fluoroalkyl s1 - 6 atomy uhlíku, trifluoromethylalkyl s 2 - 7 atomy uhlíku, trifluoromethyl, ArO-, -(CH₂)_mAr nebo -COR³;

R³ znamená alkyl s 1 - 6 atomy uhlíku, -NH₂, -NHR⁴, -NR⁴R^S, OR⁴ nebo Ar;

R⁴ a R⁵ znamenají nezávisle na sobě alkyl s 1 - 6 atomy uhlíku, Ar nebo, pokud jsou obě přítomny, mohou spolu tvořit čtyř až sedmičlenný kruh;

Ar znamená arylový nebo heteroarylový radikál, který může být 5 popřípadě mono-, di-, nebo trisubstituován skupinou zvolenou z alkylu s 1 - 6 atomy uhlíku, alkenylu s 2 - 7 atomy uhlíku, alkynylu s 2 - 7 atomy uhlíku, arylalkylu s 7 - 10 atomy uhlíku, alkoxy si - 6 atomy uhlíku, kyano, halo, hydroxy, nitro, karbaloxy s 2 - 7 atomy uhlíku, io trifluormethylu, trifluormethoxy, amino, dialkylamino s 1 6 atomy uhlíku na alkylovou skupinu, dialkylaminoalkylu s 3-12 atomy uhlíku, hydroxyalkylu s 1 - 6 atomy uhlíku, alkoxyalkylu s 2 - 12 atomy uhlíku, alkylthio s 1 - 6 atomy uhlíku, -SO₃H a -CO2H; a

15 m = 0 až 6;

nebo její farmaceuticky přijatelná sůl,

2. Sloučenina podle nároku 1, kde X - Y znamená C=NOR¹ nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

3. Sloučenina podle nároku 2, kde R¹ znamená atom vodíku, alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenyl s 2 až 7 atomy uhlíku, alkynyl s 2 až 7 atomy uhlíku, alkyloxy s 1 až 6 atomy uhlíku, -(CH₂)_mAr nebo -COR³ nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

4. Sloučenina podle nároku 1, kde X - Y znamená CHNHOR²nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

• · • · · · · · • · · « ·♦♦· · · · • · · ··· ··· • · ·· · · · · · · · · • · · · · · ··

- 28 - ..............

5. Sloučenina podle nároku 4, kde R² znamená atom vodíku nebo -(CH₂)_mAr nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

6. Sloučenina podle nároku 1, kterou je 42-deoxo-425 (hydroxyimino)rapamycin nebo její farmaceuticky přijatelná súl.

7. Sloučenina podle nároku 1, kterou je 42-deoxo-42(hydroxyamino)rapamycin nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

8. Sloučenina podle nároku 1, kterou je 42-deoxy-42- oxorapamycin-42-O-karbamoyloxim přijatelná sůl. nebo její farmaceuticky 15 9. Sloučenina podle nároku 1, kterou je 42-deoxy-42-

oxorapamycin-42-[O-(pyridin-2-ylmethyl)]-oxim nebo její farmaceuticky přijatelná súl.

10. Sloučenina podle nároku 1, kterou je 42-deoxy-422o oxorapamycin-42-[0-(pyridin-4-ylmethyl)]-oxim nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

11. Sloučenina podle nároku 1, kterou je 42-deoxy-42oxorapamycin-42-[O-(terc.butyl)]-oxim nebo její farmaceuticky

25 přijatelná súl.

12. Sloučenina podle nároku 1, kterou je 42-deoxy-42oxorapamycin-42-[O(fenylmethyl)]-oxim nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

5 13. Sloučenina podle nároku oxorapamycin-42-(O-allyl)oxim přijatelná sůl. 1, kterou je nebo její 42-deoxy-42- farmaceuticky 14. Sloučenina podle nároku 1. kterou je 42-deoxy-42-

10 oxorapamycin-42-[O-(prop-2-ynyl)j-oxim nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

15. Sloučenina podle nároku 1, kterou je 2-deoxo-42-[O-(pyridin-4ylmethyl)]-hydroxyaminorapamycin nebo její farmaceuticky

15 přijatelná sůl.

Způsob léčení odmítnutí transplantátů nebo onemocnění způsobeného reakcí hostitele na štěp u savce v případě potřeby, který zahrnuje podávání proti odmítnutí účinného množství sloučeniny obecného vzorce