CZ100593A3 - Recombinant proteins expression in weakened bacteria - Google Patents
Recombinant proteins expression in weakened bacteria Download PDFInfo
- Publication number
- CZ100593A3 CZ100593A3 CZ931005A CZ100593A CZ100593A3 CZ 100593 A3 CZ100593 A3 CZ 100593A3 CZ 931005 A CZ931005 A CZ 931005A CZ 100593 A CZ100593 A CZ 100593A CZ 100593 A3 CZ100593 A3 CZ 100593A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- attenuated
- bacterium
- attenuated bacterium
- protein
- promoter
- Prior art date
Links
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 78
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title claims abstract description 23
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 title 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 title 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 69
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims abstract description 62
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 39
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 23
- 101100404144 Bacillus subtilis (strain 168) nasD gene Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 101150044129 nirB gene Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 28
- 101150037081 aroA gene Proteins 0.000 claims description 25
- 241001167018 Aroa Species 0.000 claims description 20
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 20
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 19
- 101100491986 Emericella nidulans (strain FGSC A4 / ATCC 38163 / CBS 112.46 / NRRL 194 / M139) aromA gene Proteins 0.000 claims description 18
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 claims description 14
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 13
- 101150102858 aroD gene Proteins 0.000 claims description 13
- 101150040872 aroE gene Proteins 0.000 claims description 13
- 101150108612 aroQ gene Proteins 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 9
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 claims description 9
- 101150042732 aroC gene Proteins 0.000 claims description 8
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 claims description 7
- 101100216993 Bacillus subtilis (strain 168) aroD gene Proteins 0.000 claims description 6
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000006353 environmental stress Effects 0.000 claims description 6
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 claims description 5
- 244000045947 parasite Species 0.000 claims description 5
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 4
- 108010044241 tetanus toxin fragment C Proteins 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims description 3
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 claims description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 32
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 12
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 11
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 7
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 6
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 6
- -1 aromatic amino acid Chemical class 0.000 description 6
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 229940126578 oral vaccine Drugs 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 4
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 4
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 description 4
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 3
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 3
- 241001607429 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium str. SL1344 Species 0.000 description 3
- 229940124842 Salmonella vaccine Drugs 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 206010016952 Food poisoning Diseases 0.000 description 2
- 208000019331 Foodborne disease Diseases 0.000 description 2
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 2
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 2
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 150000001491 aromatic compounds Chemical class 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- WTFXTQVDAKGDEY-UHFFFAOYSA-N (-)-chorismic acid Natural products OC1C=CC(C(O)=O)=CC1OC(=C)C(O)=O WTFXTQVDAKGDEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 1
- 101100163490 Alkalihalobacillus halodurans (strain ATCC BAA-125 / DSM 18197 / FERM 7344 / JCM 9153 / C-125) aroA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100404147 Bacillus subtilis (strain 168) nasE gene Proteins 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101100439426 Bradyrhizobium diazoefficiens (strain JCM 10833 / BCRC 13528 / IAM 13628 / NBRC 14792 / USDA 110) groEL4 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010041397 CD4 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 101000874088 Centruroides noxius Toxin Cn3 Proteins 0.000 description 1
- 241000242722 Cestoda Species 0.000 description 1
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 1
- 108010003662 Chorismate synthase Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 101100491553 Escherichia coli (strain K12) arcA gene Proteins 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 206010018612 Gonorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 1
- 241000709704 Human poliovirus 2 Species 0.000 description 1
- 241000709727 Human poliovirus 3 Species 0.000 description 1
- 102000004867 Hydro-Lyases Human genes 0.000 description 1
- 108090001042 Hydro-Lyases Proteins 0.000 description 1
- 101000761023 Loxosceles intermedia U2-sicaritoxin-Li1a Proteins 0.000 description 1
- 241000701076 Macacine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 101100456571 Mus musculus Med12 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100178822 Mycobacterium tuberculosis (strain ATCC 25618 / H37Rv) htrA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 101000675481 Naja sputatrix Neurotoxin 3 Proteins 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 101100278084 Nostoc sp. (strain PCC 7120 / SAG 25.82 / UTEX 2576) dnaK1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 1
- 101000723129 Oxyuranus scutellatus scutellatus Short neurotoxin 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000935974 Paralichthys dentatus Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010090127 Periplasmic Proteins Proteins 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 101100277437 Rhizobium meliloti (strain 1021) degP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 101100117145 Synechocystis sp. (strain PCC 6803 / Kazusa) dnaK2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100002724 Thermus thermophilus aroH gene Proteins 0.000 description 1
- 241001467018 Typhis Species 0.000 description 1
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 1
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000002096 anti-tetanic effect Effects 0.000 description 1
- 101150076125 aroG gene Proteins 0.000 description 1
- 230000001651 autotrophic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003578 bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000004970 cd4 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 229940038705 chlamydia trachomatis Drugs 0.000 description 1
- WTFXTQVDAKGDEY-HTQZYQBOSA-N chorismic acid Chemical compound O[C@@H]1C=CC(C(O)=O)=C[C@H]1OC(=C)C(O)=O WTFXTQVDAKGDEY-HTQZYQBOSA-N 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 101150095807 cpxA gene Proteins 0.000 description 1
- 101150105804 cysG gene Proteins 0.000 description 1
- 101150088237 dctD gene Proteins 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 101150018266 degP gene Proteins 0.000 description 1
- 101150052825 dnaK gene Proteins 0.000 description 1
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 description 1
- 238000009505 enteric coating Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 208000028104 epidemic louse-borne typhus Diseases 0.000 description 1
- 235000020774 essential nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 101150065098 glnG gene Proteins 0.000 description 1
- 101150051351 glnL gene Proteins 0.000 description 1
- 108010064177 glutamine synthetase I Proteins 0.000 description 1
- 208000001786 gonorrhea Diseases 0.000 description 1
- 101150077981 groEL gene Proteins 0.000 description 1
- 101150006844 groES gene Proteins 0.000 description 1
- 101150053330 grpE gene Proteins 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- 101150007310 htrA gene Proteins 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 101150100899 nirC gene Proteins 0.000 description 1
- 101150045642 nirD gene Proteins 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 101150046736 ntrB gene Proteins 0.000 description 1
- 101150012415 ntrC gene Proteins 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 101150091444 ompR gene Proteins 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 101150068006 phoB gene Proteins 0.000 description 1
- 101150022503 phoR gene Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L phthalate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C([O-])=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003938 response to stress Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 101150088454 sfrA gene Proteins 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 108091006106 transcriptional activators Proteins 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 1
- 206010061393 typhus Diseases 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 101150075472 ycf27 gene Proteins 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/025—Enterobacteriales, e.g. Enterobacter
- A61K39/0275—Salmonella
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/235—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bordetella (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/33—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Clostridium (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/522—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/523—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells expressing foreign proteins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Vynález se týká oslabených bakterií schopných exprese heterologního proteinu, jejich přípravy a vakcín, které je obsahují.
Dosavadní stav techniky
Virulentní kmeny Salmonella mohou být oslabeny zavedením specifických mutací do genů potřebných pro přežívání a růst in vivo. Zeslabené varianty, které ustaví samoomezující, klinicky nevýznamné infekce, mohou být uvažovány jako potenciální živé orální vakcíny vůči infekcím Salmonellou.
Ty21a je oslabenou variantou Salmonella typhi, která přechovává mutace v galE a jiné neznámé oslabující léze a je povolena pro použití v mnoha zemích jako živá orální tyfoidní vakcína.
Nedávno byly zkoušeny geneticky vymezené kmeny Salmonella přechovávající individuální specifické mutanty v rozdílných genech, jako experimentální orální vakcíny v několika cílených druzích. Například Salmonella aro mutanty, které mají auxotrofní požadavek na některé aromatické sloučeniny, se ukázaly jako účinné orální vkkcíny u myší, ovcí, dobytka, kuřat a nedávno se ukázaly jako oslabené a imunogenní u dobrovolníků. Salmonella dvojité aro mutanty jsou uvedeny v EP-A-O322237. Salmonella cya crp dvojité mutanty jsou také účinnými orálními vakcínami.
Stejně jako jsou vakcínami v jejich vlastním smyslu vůči salmonelóze, mohou být oslabené Salmonelly považovány jako nosiče heterologních antigenů do imunního orálního systému.
To je proto, že Salmonelly mohou být předávány orální cestou a jsou potentními imunogeny schopnými stimulovat systemické a lokální buněčné a protilátkové odezvy.
Heterologní antigeny z bakterií, virů a parazitů mohou být .zaváděny. do. hosti.tele .pomocí salmonelových vakcín.___________________
Jedním potenciálně vážným nedostatkem při použití těchto živých vakcín pro antigenní předávání jsou problémy se stabilitou cizí antigenní exprese in vivo. Neregulovaná exprese vysokých úrovní cizího proteinu v bakteriích z mnohonásobné kopie plasmidů má obvykle za následek rychlou ztrátu plasmidu nebo exprimovaného genu z buňky.
Tento problém může být kontrolován ve fermentorech pomocí indukovatelných promotorových systémů jako je trp nebo lac, k umožnění řízené indukce genové exprese když se získá příslušná biomasa. Samozřejmě tyto promotory nemohou být indukovány exogenně aplikovanými induktory jako je PP nebo IPTG když bakterie narůstají v hostitelských tkáních během samoomezeného růstu následujícího vakcinaci.
In vivo plasmidová nestabilita během vakcinace živými bakteriálními vektory byla ve skutečnosti uváděna mnoha pracovníky /Maskell a kol., Microb.Path.2, 295-305, 1987; Nakayama a kol. Bio/technology 6_, 693-697, 1988; Tite a kol., Immunology 70, 540-546, 1990/. Byly prováděny početné postupy k překonání tohoto problému včetně použití integračních systémů pro expresi heterolognáho antigenu z bakteriálního chromosomu /Hone a kol., Microbiol.Páht .5., 407-418, 1988; Strugnell a kol., Gene 88, 57v63, 1990/.
Avšak tento postup je pouze vhodný pro použití u některých antigenů, protože expresní úrovně jsou často zcela nízké /Maskell a kol., 1987/. Nakayama a kol. popsali použití připojení esenciálního genu k expresnímu plasmidu pro stabilizaci exprese in vivo. Ačkoli to je vysoce účinný postup, nezabraňuje tvorbě plasmidu prostých variant, ale pouze zajištuje, že nepřežívají. Další stabilní, ale konstitutivně vysoká úroveň exprese cizího antigenu v salmonelovém vakcinačním kmenu by mohla zpomalit rychlost růstu imunogenecitu živé vakcíny.
a tudíž potenciálně ovlivnit
Podstata vynálezu
Podle předloženého vynálezu je vytvořena oslabená bakterie, která je schopna exprese heterologního proteinu, přičemž tato exprese heterologního proteinu je pod kontrolou promotoru, jehož aktivita je vyvolána anaerobními podmínkami.
Stabilní exprese heterologního proteinu může být získána in vivo. Zeslabená bakterie může být tudíž použita jako vakcína. Jakákoli vhodná bakterie může být použita, například Gram-negativní bakterie. Některé Gram-negativní bakterie, jako je Salmonella, vnikají a rostou uvnitř eukariontních buněk a kolonizují mukózní povrchy.
Oslabená bakterie může být tudíž vybrána z rodů Salmohella, Bordetella, Vibrio, Haemophillus, Neisseria a Yersinia. 'Alternativně oslabená bakterie může být oslabeným kmenem enterotoxinoger.ní Escherichia coli.
Zejména mohou být uvažovány následující druhy:
Es.typhi - příčina lidského tyfu; Es.typhimurium - příčina salmonelózy u některých živočišných druhů; Es.enteritidis - příčina potravinové otravy u lidí; Es.choleraesuis - příčina salmonelózy u vepřů; Bordetella pertussis - příčina černého kašle; Haemophylus ínfuensae - příčina mengitidy; Neisseria gonorhoeae - příčina kapavky; a Yersinia - příčina otravy potravinami.
Oslabení bakterie může být přisouditelné nerevertující mutaci v genu v aromatické aminokyselinové biosyntetické dráze bakterie.
Je tam alespoň 10 genů zahrnutých při syntéze chorismatu, .odvětvené Sloučeniny v. aromatické aminokyselinové biosynte-_____ tické dráze. Některé z těchto map ve velmi rozdílných místech na bakteriálním genomu, například aroA /5-enolpyruvilshikimate-3-fosfatsynthasa/, aroC /chorismat synthasa/, aroD /3-dihydrochinat dehydratasa/ a aroS /shikimat dehydrogenasa/. Mutace se tudíž mohou vyskytnout v aroA, aroC, aroD nebo aroE genu.
Výhodně však oslabené, bakterie přechovává nerevertujicí mutaci v každém ze dvou diskrétních genů ve své aromatické aminokyselinové biosyntetické dráze. Takovéto bakterie jsou zveřejněny v E.P-A-O322237. Dvojité aromutanty, které jsou vhodné, jaou aroA. aroC, aroA aroD a aroA aroE mutantní bakterie. Jiné bakterie, mající mutace v jiných kombinacích aroA, aroC, aroD a aroE genů jsou však také užitečné. Zvláší výhodné jsou dvojité aro butanty Salmonella, například dvojité aro mutanty S.typhi nebo S.typhimurium, zejména aroA aroC, aroA aroD a aroA aroE mutanty.
Alternativně může oslabená bakterie přechovávat nerevertující mutaci v genu, který má spojitost s regulací jednoho nebo více jiných genů /E.P.-A-O4OO958/. Výhodně se mutace vysky tuje u ompRgenu nebo dalšího genu zapojeného v regulaci. Existuje velký počet jiných genů, které jsou spojeny s řízením a jsou známy jejich odezvy na stimuly prostředí. /Ronson a kol., Cell. 49, 579-581./
Tento typ oslabené bakterie může přechovávat druhou mutaci v druhém genu. Výhodně je druhý gen takový gen, který kóduje pro enzym zapojený v esenciální biosyntetické dráze, v příslušných genech zapojených v prechorismatové dráze zahrnuté při biosyntéze aromatických sloučenin. Druhá mutace je tudíž výhodná v aroA, aroC nebo aroD genu.
Dalším typem oslabené bakterie je ta, ve které oslabení je způsobeno přítomností nerevertující mutace v DNA bakterie, která kóduje nebo která reguluje expresi DNA kódování proteinu, který je produkován v odezvu na stres prostředí. Takovéto bakterie jsou zveřejněny v WO 91/15572. NerevertU’jící mutace může být vypuštění, inserce, inverze nebo substituce. Deleční mutace způsobená vypuštěním může být vytvořena pomocí transposonu.
Příklady proteinu, které jsou produkovány v odezVu na stres prostředí zahrnutí tepelně šokové proteiny (které jsou produkovány v odezvu na zvýšení teploty nad 42 °C); výživově deprivační proteiny (které jsou produkovány v odezvu na úroveň esenciálních živin jako jscu fosfáty nebo dusík, které Jsou pod úrovněmi, které mikroorganismus potřebuje pro přežití); toxickostresové proteiny (které jsou produkovány v odezvu na toxické sloučeniny jako jsou barviva, kyseliny nebo případné rostlinné exudáty); nebo metabolickédisrupční proteiny (které jsou produkovány v odezvu na fluktuace například iontových úrovní ovlivňujících schopnosti mikroorganismů k osmoregulaci nebo vitaminové nebo kofaktorové úrovně, které přeruší mebolismus).
Výhodně je tepelně šokový protein .. .(kódovaný htrA genem také charakterizovaným jako degP. Jiné proteiny jsou zakódovány geny známými tím, že jsou zahrnuty ve stresové odezvě jako je grpE, groEL, (moPA), dnaK, groES, Ion a dnaj.
Existuje mnoho jiných proteinů k (kódovaných geny, které jsou známy tím, že jsou vyvolány v odezvu na stres prostředí. (Sonson a kol., Cell. 49, 579-581).
Mezi těmito mohou být vzpomenuty následující: ntrB/ntrC systém E.coli, který je indukován v odezvu na dusíkovou deprivaci a pozitivně reguluje glnA a nifLA (Buck a kel., Nátuře 320, 374-378, 1986; Kirschman a kol., Proč.Nati.Acat.Sci.
USA 82, 7525, 1985; Nifcjon a kol., Proč.Nati.Acat.Sci USA 83,
7850-7854, 1986, Reitzer a Magansanik, Cell., 45, 785,
1986;); phoR/phoB systém E.coli, který je indukován v odezvu na fosfátovou depriyaci (’.ja/kino a kol. , J.Mol.Biol. 1 92, 549-556, 1986b); cpxA/sfrA systém E.coli, který je indukován v odezvu na barviva nebo jiné toxické sloučeniny (Albin a kol., J.Biol.Chem. 261, 4698, 1986; Drury a kol., J.Biol. Chem. 260, 4236-4272,.1985).
Analogický systém u Rhisobium je dct3/dctD, který je citlivý na 4C-dikarboxylové kyseliny (Ronson a kol., J.Eacteriol. 1 69, 2424 a Cell. 49, 579-581, 1987). Virulentní systém tohoto typu je popsán u Agrobacterium. Je to virA/virG systém, který je indukován v odezvu na rostlinné exudáty (leRoux a kol., EIfflO J. 6^, 849-856, 1987; Štachel a Zambryski, Am.J.Vet.Res. 45, 59-66, 1986; Winans a kol., Proč.Nati.Acat. Sci. USA, 83, 8278, 1986).
Podobně 0 bvgC-bvgA systém u Bordetella pertussis (dříve známý jako vir) reguluje produkci virulentních deternnnantů v odezvu na fluktuace úrovní Mg1- a kyseliny nikotinové (Arico a kol. 1.989, Proč. Nati.Acat.Sci USA 86, 66716675).
Pro použití ve formě živé vakcíny by se oslabená bakterie neměla vracet zpět do virulentního stavu. Pravděpodobnost tohoto dění u mutace v jednoduché DNA sekvenci se považuje sa malou. Ovšem riziko reverse vyskytující se u oslabené bakterie přítomností mutací v každé ze dvou diskrétních DNA sekvencí se považuje za nevýznamné. Výhodná oslabená bakterie je tudíž taková, ve které oslabení je provedeno přítomností mutace v DNA sekvenci, která kóduje nebo která reguluje exprasi DNA kódování proteinu, který se vytvoří v odezvu na stres prostředí a přítomností mutace v druhé DNA sekvenci.
--- ‘-Druhé DNA sekvence’'výhodně kóduje enzym zavedený v esenciální autotrofní dráze nebo je to sekvence, jejíž produkt řídí regulaci osmoticky resooazivních genů, to je ompR (Infect and Immun, 1989, 2136-2.1 40). Ne jvýhodně ji . je mutace v DNA sekvenci zavedena v aromatické aminokyselinové biosyntetieké dráze, zejména DNA sekvence kódující aroA, aroC nebo aroD.
Oslabené bakterie mohou být vytvořeny zavedením mutace do DNA sekvence způsoby známými odborníkům v oboru (Maniatis, Molecular Cloning and Laboratory Manual, 1982). Nevertující mutace mohou být vytvořeny zavedením hybridního transposonu TnphoA do, například, S.typhimurium kmenů.
TnphoA může vytvářet enzymaticky aktivní proteinové fúze alkalické fosfataci do periplasmických nebo membránových proteinů. TnphoA transposon nese gen, kódující kanamycinovou resistenci. Transdukanty jsou vybrány tak, že jsou kanamycinově resistentní růstem kolonií na příslušném selekčním medliu.
Alternativní metody zahrnují klonování DNA sekvence do vektoru, například plasmidu nebo kosmidu, zavádějící selektovatelný markerový gen do klonované DNA sekvence, což vede k její inaktivaci. Plasmid nesoucí inaktivovanou DNA sekvenci a rozdílný selekt/ovatelný markér může být zaveden do organismu známými postupy (Maniatis Molecular Cloning and Labo ratory Manual, 1982). Pak je možné vhodnou selekcí identifikovat mutant, v němž inaktivovaná DNA sekvence rekombinovala do chromosomu mikroorganismu a divoký typ DNA sekvence byl učiněn nefunkčním postupem známým jako allelická výměna. Zejména použitý vektor je výhodně nestabilní v mikroorganismu a bude spontánně ztracen. Mutovaná DNA sekvence na plasmidu a divoký typ DNA sekvence mohou být vyměněny genetickým cross-over účinkem.
Další způsoby eliminují zavádění cizí DNA do vakcinových kmenů v poloze mutací a zavádění antibiotických resistentních markérů do těchto kmenů. ~~
Heterologní antigen, který je oslabená bakterie schopna exprimovat, může například obsahovat antigenní determinant patogenního organismu. Antigen může být odvozen z viru, bakterie, houby, kvasinky nebo parazitu. Heterologní protein tudíž typicky obsahuje antigenní skevenci odvozenou z viru, bakterie, houby, kvasinky nebo parazitu. Zejména může být antigenní sekvence odvozena z typu viru lidské ztráty imunity (HIV) jako je HIV-1 nebo HIV-2 viru, viru hepatitidy A nebo B, lidského viru rýmy typu 2 nebo typu 14, viru oparu, viru dětské obrny typu 2 nebo 3, viru kulhavky a slintavky, viru chřipky, viru koxsaekie, buněčného povrchového antigenu CD4 a Chlamydia trachomatis. Antigen může obsahovat CD4 recepior vázající místo z HIV například z HIV-1 nebo 2. Jiné vhodné antigeny zahrnují E. coli tepelně labilní toxin 3 podjednotku (LT-B), E.coli K88 antigeny, P.69 protein z B.pertussis, tetanový toxinový fragment C a antigeny motolice, mykoplasmy, hlístic, tasemnic, virus vztekliny a rotaviru.
Výhodný promotor pro použití při řízení exprese heterologního proteinu je nirB promotor. Tento nirB promotor byl izolován z E. coli, kde řídí expresi operonu, který zahrnuje nitritreduktasový gen nirB (Jayraman a kol., J. Mol. Biol.
196, 781-788, 1987), a nirD, nirC a cysG (Peakman a kol.,
Eur. J. Bio. Chem. 191. 315-323, 1990). Je regulován jak nitritem, tak změnami v tlaku kyslíku v prostředí, přičemž se stává aktivním, když je nedostatek kyslíku. (Cole, Biochim. Biofys. Acta, 162, 356-368, 1968). Odezva na anaerobiosu je zprostředkována přes protein FJSřR, který působí jako transkripční aktivátor v mechanismu společném mnoha anaerobním respiračním genům.
I
- 9 'Děleční a mutační analýzou byla izolována část promotoru, která odpovídá pouze za anaerobiosu a srovnáním s jinými anaerobicky regulovanými promotory bylo identifikováno souhlasné FNR vazebné místo -(Bell a kol. ,· Nucl.
Acid. Res. 17, 3865-3874, 1989; Jayraman a kol. Nucl. Acids. Res. £7, 135-145, 1989).
Bylo také ukázáno, že vzdálenost mezi domnělým FNR vazebným místem a -10 homologní oblastí je kritická.
(Bell a kol., Molec. Microbiol. 4, 1753-1763, 1990.)
Je tedy výhodné použít jen tu část nirB promotoru, která odpovídá pouze za anaerobiosu.
Jak je zde použito, reference k nirB promotoru se vztahují k promotoru samotnému nebo k jeho části nebo jeho derivátu, 'který je schopen promoční exprese kódující sekvence za anaerobních podmínek. Sekvence, kterou jsme ve skutečnosti použili a která obsahuje nirB promotor je:
AATTCAGGTAAATTTGATGTACATCAAATGGTACCCCTTGCTGAATCGTTAAGGTAGGCGGT
AGGGCC.
Oslabená bakterie podle tohoto vynálezu může být připravena transformováním oslabené bakterie s DNA strukturou obsahující promotor, jehož aktivita je vyvolána anaerobními podmínkami, jako je nirB promotor funkčně připojený k DNA sekvenci kódující heterologní protein. Může být použita vhodná trans formační technika jako je elektroporace. Tímto způsobem může být získána oslabená bakterie schopná exprese proteinu heterologního k této bakterii. Kultura oslabené bakterie může být pěstována za aerobních podmínek. Dostatečné množství bakterie se takto připraví pro formulaci ve formě vakcíny s vyskytující se minimální expresí heterologního proteinu.
DNA konstrukce je typicky replikovatelný expresní vektor obsahující nirB promotor funkčně zapojený do DNA sekvence, kódující heterologní protein. Tento nir3 promotor může být zaveden v expresním vektoru, který již začleňuje gen kódující heterologní protein,--místo- existu jící-no-promotoru -řídícího expresi tohoto proteinu. Expresní vektor by mel ovšem být kompatibilní s oslabenou bakterií, do které má být tento vektor zaveden.
Expresní vektor je opatřen příslušnými transkripčními a translačními řídicími elementy, zahrnujícími kromě nir3 promotoru, transkripční terminační místo a translační startovací a zakončovací kodony. Je vytvořeno příslušné ribosomové vazebné místo. Vektor obvykle obsahuje počátek replikace a je-li třeba selektovatelný markerový gen jako je antibiotický resistenční gen. Vektor může být plasmid.
Oslabená bakterie tohoto vynálezu může být použita jako vakcína. Tato vakcína obsahuje farmaceuticky vhodný nosič nebo ředidlo a aktivní složku, oslabenou bakterii.
Vakcína se výhodně podává v lyofilizované formě, například ve formě tobolek pro orální podání pacientovi. Takovéto tobolky mohou být opatřeny enterosolvním povlakem obsahujícím například Eudragate S, Eudragate L, acetat celulosy, ftalat celulosy nebo hydroxypropylmethylcelulosu.
Tyto tobolky mohou být použity jako takové nebo alternativně může být lyofilizovaný materiál rekonstituován před podáním například do formy suspenze. Rekonstituce se výhodně provádí v pufru při vhodném pH, aby se zajistila životnost organismů. Aby se chránila oslabená bakterie a vakcína před žaludeční kyselostí, podává se výhodně hydrogenuhličitan sodný ve formě přípravku před každým podáním vakcíny. Alternativně může být vakcína připravena pro patenterální podání, intranasální podání nebo intramammární podání.
1
Oslabená bakterie tohoto vynálezu může být použita při profylaktickém ošetřen?; hostitele, zejména lidského hostitele, ale také případně živočišného hostitele. A Infekci vyvolané mikroorganismem,-zejména patogenem, může tudíž = být zabráněno podáním účinné dávky oslabené bakterie podle vynálezu. Tato bakterie pak vytváří heterologní protein schopný zvýšit protilátky v organismu. Použitá dávka bude závislá na různých faktorech včetně velikosti s hmotnosti hostitele, typu formulované vakcíny a druhu heterologního proteinu. Avšak pro oslabenou S.typhi je vhodná dávka obsa. > o 11 hubící orální podání od 10 do 10 S. typhi organismů obecně pro dospělého člověka o hmotnosti 70 kg.
Příklady provedení vynálezu
Následující příklad zobrazuje vynález. V přiložených výkresech:
obr. 1 až 4 zobrazuje schopnosti izolátů S. typhimurium růst in vivo v játrech, slezině, Peiers ložiscích a mesenterních mízních uzlinách u BALB/c myší. Osa x označuje dny po infekci, osa y označuje logjQ živých organismů na orgán, A označuje izolát BRD509, Ϊ3 označuje izo lát BRD847, Q označuje izolát BRD747, označuje žádný ampicilin a ·—-— označuje přidaný ampicilin, znázorňuje titry antitetanového toxinového fragmentu C myšího séra.
obr. 5
Osa x uvádí typy bakterií použitých z myšího séra, osa x ukazuje typy bakterií použitých _k.._expo.zici..myš.í ,._Eoče.t_ dávek- je________ uveden v závorkách. Osa y označuje hodnoty absorbance při 492 nm.
Příklad
Konstrukce pTETnirl5
Expresní plasmid pTETnirl5 byl. vytvořen z pTETtac!15 (Makoff a kol., Nucl.Acids .Res.J_7, 10191-10202, 1989) náhradou EcoRI-Apal oblasti (1354bp) obsahující láci gen a tac promotor následující dvojicí oligos 1 a 2:
Oligo-1 5’-AATTCAGGTAAATTTGATGTACATCAAATGGTACCCCTTGCTGAATC
Oli go-2 3’-GTCCATTTAAACTACATGTAGTTTACCATGGGGAACGACTTAG GTTAAGGTAGGCGGTAGGGCC-3’
CAATTOCATCCGCCATC-5’.
Oligonukleotidy byly syntetizovány na farmaceutickém genovém zařízení a výsledné plasmidy byly potvrzeny sekvencováním /Makoff a kol,Bio/Technology 1043-1046, 1989/.
Konstrukce SL1334 aroA aroD přechovávající pTETnirl5
Aby se sestavil Salmonella vakcinový kmen exprimující tetanový toxinový fragment C pod kontrolou nirB promotoru, byl přechodný kmen S. typhimurium LB5010 (r~m+) ÍBullas a Ryo, J.Bact. 156, 471-474, 1983) transformován pTETnirl5. Kolonie exprimující fragment C byly zjištovány antibiotickou selekcí následovanou imunoblotací kolonie antitetanovým
- 13 toxinovým fragmentem C sera. Kolonie byly pěstovány pres noc na nitrocelulosových filtrech aerobicky a pak indukovány inkubací za anaerobních podmínek po dobu. 4 hodin před imuno- . blokací.
Jeden kmen, který byl stabilní v expresi fragmentu C, byl použit pro přípravu plasmidu DNA. Ten byl použit pro transformování isolátu S. typhimurium SL1344 aroA aroD označeného 3RD5O9 elektroporací. Kmen, který stabilně exprimoval fragment C (kontrola imunoblotací, jak bylo výše popsáno), byl zvolen pro studie in vivo a byl označen 3RD847.
Srovnání kině tik in vivo BRD743 a BRD847 u BALB/c myší
Schopnost BRD743 (BRL5Q9 přechovávající pTET85) a BRD847 růst in vivo byla porovnávána po orálním podání BALB/c myším. pTET85 byl vytvořen z pTETtac115 (Makoff a kol. Nucl. Acids Res. 1 7, 10191-10202, 1989) vypuštěním 1.2kb EcoRI fragmentu nesoucího láci gen. To vedlo k podstatné expresi fragmentu C u salmonelových kmenů. Početné bakterie byly zjištěny v játrech, slezině, Peyers skvrnách a mesenterních lymfatických uzlinách.
Bakterie izolované z myší byly také zkoušeny na jejich schopnost růst na deskách obsahujících ampicillin jako indikátor procenta organismů stále zadržujících plasmid exprimující fragment C. Výsledky jsou uvedeny v obr. 1 až 4.
Když byly podobné počáteční počty organismů (5.10^) použity k infikaci myší, bylo zjištěno, že jak 3RD743 tak 847 byly schopny napadnout a vytrvat ve všech myších tkáních, které byly zkoušeny, ale v nižších úrovních než 3RD509.
Avšak zajímavým rysem je, že počet organismu resistentních na ampicilin, získaných z myší, infikovaných BRD743 se rychle snižuje a všechny- organismy,- které-byly. -získány.,.. byly citlivé na ampicillin do 14» dne. To indikuje, že selekce in vivo rychle vede ke ztrátě pTET85 ze salmonelového vakcínového kmene.
Na rozdíl od toho počty s ampicillinem a bez ampicillinu pro BRD847 byly v podstatě tytéž po dobu infekcí, které byly sledovány. To demonstruje ..dodatečnou výhodu pTETnirl5 v
S. typhimurium vakcínovém kmeni vedoucí k organismům s potenciálem pro expresní fragment C in vivo po delší dobu se zřejmými výhodami pokud jde o imunogenitu.
ImunizaceBALB/c myší pomocí salmonelových kmenů přechovávajících pTET85 (3SD743) nebo pTETnirl5 (BRL847)
Skupiny 20 myší byly orálně inkubovány 5.10 buňkami na myš buS BED743 nebo 3RD847 nebo 3RD509. 25.den byla odebrána séra od všech myší a analyzována zařízením ELISA pro na antitetanové protilátky. Všechny myši vakcinované BRD847 měly zjistitelnou protilátku antifragment G ve 25 dnech, zatímco myší, vakcinované BRD743 nebo 3RD509 neměly (obr.5).
25.den bylo 10 myší z každé skupiny posíleno orální inokulací stejným množstvím· homologových organismů. ELISA analýza séra odebraného od těchto myší 46. den ukázala, že antifragment C odezvy byl posílen pro skupiny inokulované BRD743 a 3RD847. Titry oro myši posílené 3RD847 byly významně vyšší než u myší posílených BRD743. 2íyši posílené orálně BRD5O9 selhaly v produkci zjistitelné protilátkové odezvy vůči fragmentu 0.
Odezva na tetanový toxin u myší oráln a 3RD743 imunizo váných 3RDS47
Myši vakcinované orálně 3RD743, 347 a 509 byly testová ny na imunitu vůči tetanotoxinové odezvě po jedné nebo dvou dávkách imunizujícího kmene.
Skupiny 20 myší dostaly jednu orální dávku 5.10 organismů a skupiny 10 myší byly aktivovány 25. den 55C&ními letálními dávkami tetanového toxinu (viz tabulka 1).
Myši vakcinované 3RD347 byly úplně chráněny vůči aktivaci po jedné orální dávee, zatímco myši vakcinované 3RD743 byly pouze částečně chráněny (2/10 přeživších). Zbývající skupiny 10 myší dostaly druhou dávku organismů (5.10^) 25. den a byly aktivovány 46.den (po první dávce). Myši imunizované BRD S47 byly úplně chráněny po aktivaci tetanovým toxinem, zatímco myši imunizované BRD743 byly chráněny jen zčásti (5/10).
Myši imunizované jednou nebo dvěma dávkami 3RI55Q9 a aktivované tetanovým toxinem všechny zahynuly. 3RD347 je účinná jednorázově dávková orální vakcína vůči aktivaci tetanovým toxinem u myší. Skupiny myší byly také aktivovány tetanovým toxinem po přijetí jedné a dvou intravesnosních dávek 10? organismů 3RD347 a BRD743. Všechny myši byly plně chráněny vůči aktivaci tetanovým toxinem po jedné nebo dvou dávkách vakcinového kmene.
Tabulka 1
Orální imunizace myší vůči tetanu za použití S. typhimuřium SL1344 aroA aroD pTET85 θ S. typhimurium SL1344 aroA aroD pTETnirl5
Vakcína dávka počet počet myší dávek přeživších aktivaci tetanem
SL1344 aroA aroD (BRD5O9)
SL1344 aroA aroD pTET85 (BRD743)
SL344 aroA aroD pTETnirl5 (BRD847)
| 8,6x1O9 | 1 | O/1O |
| 7,4x109 | 2 | 0/10 |
| 6,4x109 | 1 | 2/10 |
| 8,2x109 | 2 | 5/10 |
| 9,5x1O9 | 1 | 10/10 |
| 7,5xlO9 | 2 | 9/9 |
PATE N Τ O V á N Á R O K Ϊ . Oslabená bakteria schopná exprese heterologního proteinu, přičemž tato exprese heterologního proteinu je pod kontrolou promotoru, jehož účinnost je vyvolána anaerobními podmínkami.
2. Oslabená bakterie podle bodu 1 , kterou je oslabený kmen Salmonella.
3. Oslabená bakterie podle bodu 2, kterou je oslabený kmen Salmonella typhi nebo Salmonella typhimurium.
4. Oslabená bakterie podle kteréhokoli z předcházejících bodů 1 až 3, u které je oslabení přisouditelné nerevertující mutaci v genu v aromatickoaminokyselinové biosyntetické dráze.
5· Oslabená bakterie podle kteréhokoli z předcházejících bodů 1 až 4, u které je oslabení přisouditelné nerevertující mutaci v DNA bakterie, která kóduje,nebo která reguluje expresi DNA kódování, protein, který je vytvořen v odezvu na stres prostředí.
6. Oslabená bakterie podle bodu 4, která přechovává nerevertující mutaci v každém ze dvou diskrétních genů v jejich aromatickoaminokyselinové biosyntetické dráze.
7· Oslabená bakterie podle bodu 6, která je aroA aroG, aroA aroD nebo aroA aroE mutantem.
8.
bodů
Oslabená bakterie podle kteréhokoli z předcházejících až 7, ve ktéréjě' prometorenrnirB'promotor·;'' ~ “
9. Oslabená bakterie podle kteréhokoli z předcházejících bodů, ve které heterologní proteiún obsahuje antigenní sekvenci odvozenou z viru, bakterie, houby, kvasinky nebo parazitu.
10. Oslabená bakterie podle bodu 9, ve které je heterologní protein P.69 protein z Bordetella pertussis nebo je to tetanový toxinový fragment C.
11. Způsob přípravy oslabené bakterie podle kteréhokoli z předcházejících bodů 1 až 10 vyznačený tím, že zahrnuje transformaci oslabené bakterie s DNA konstrukcí obsahující promotor funkčně vázaný na DNA sekvenci kódující heterologní protein.
12. Vakcína obsahující farmaceuticky vhodný nosič nebo ředidlovyznačená tím, že jako aktivní složku obsahuje osla benou bakterii nárokovanou v kterémkoli z bodů 1 až 10.
Zastupuje: JUDr. Ivan Koreček
Claims (12)
- PATENTOVÉ NÁROKY1 . Oslabená bakterie, která obsahuje promotor, jehož aktivita je vyvolána anaerobními podmínkami, funkčně vázaný do DNA sekvence kódující heterologní protein.
- 2. Oslabená bakterie podle bodu 1, kterou je oslabený kmen Salmonella.
- 3. Oslabená bakterie podle bodu 2, kterou je oslabený kmen Salmonella typhi nebo Salmonella typhimurium.
- 4. Oslabená bakterie podle kteréhokoli z předcházejících bodů 1 až 3, u které je oslabení přisouditelné nerevertující mutaci v genu v aromatickoaminokyslinové biosyntetické dráze.
- 5. Oslabená bakterie podle kteréhokoli z předcházejících bodů 1 až 4, u které je oslabení přisouditelné nerevertující mutaci v DNA bakterie, která kóduje, nebo která reguluje expresi DNA kódování, protein, který je vytvořen v odezvu na stres prostředí.’
- 6. Oslabená bakterie podle bodu 4, která přechovává nerevertující mutaci v každém ze dvou diskrétních genů v jejich aromatickoaminokyselinové biosyntetické dráze.
- 7. Oslabená bakterie podle bodu 6, která je aroA aroC, aroA aroD nebo aroA aroE mutantem.20
- 8. Oslabená bakterie podle kteréhokoli z předcházejících bodů 1 až 7, ve které je promotorem nirB promotor.__
- 9. Oslabená bakterie podle kteréhokoli z předcházejících bodů, ve které heterologní protein obsahuje antigenní sekvenci odvozenou z viru, bakterie, houby, kvasinky nebo parazita.
- 10. Oslabená bakterie podle bodu 9, ve které je heterologní protein P.69 protein z Bordetella perussis nebo je to tetanový toxinový fragment C.
- 11 . Způsob přípravy oslabené bakterie podle kteréhokoli z předcházejících bodů 1 až 10 vyznačený tím, že zahrnuje transformaci oslabené bakterie s DNA konstrukcí obsahující promotor funkčně vázaný na DNA sekvenci kódující heterologní protein.
- 12. Vakcína obsahující farmaceuticky vhodný nosič nebo ředidlo vyznačená tím, že jako aktivní složku obsahuje oslabenou bakterii nárokovanou v kterémkoli z bodů 1 až 10.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB919104596A GB9104596D0 (en) | 1991-03-05 | 1991-03-05 | Production of recombinant proteins |
| GB919121208A GB9121208D0 (en) | 1991-10-04 | 1991-10-04 | Vaccines |
| PCT/GB1992/000387 WO1992015689A1 (en) | 1991-03-05 | 1992-03-05 | Expression of recombinant proteins in attenuated bacteria |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ100593A3 true CZ100593A3 (en) | 1994-01-19 |
| CZ285118B6 CZ285118B6 (cs) | 1999-05-12 |
Family
ID=26298523
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ931005A CZ285118B6 (cs) | 1991-03-05 | 1992-03-05 | Exprese rekombinačních proteinů v oslabených bakteriích |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5547664A (cs) |
| EP (1) | EP0574466B1 (cs) |
| JP (1) | JP3415145B2 (cs) |
| KR (1) | KR100240182B1 (cs) |
| AT (1) | ATE180280T1 (cs) |
| AU (1) | AU664360B2 (cs) |
| CA (1) | CA2099841C (cs) |
| CZ (1) | CZ285118B6 (cs) |
| DE (1) | DE69229221T2 (cs) |
| DK (1) | DK0574466T3 (cs) |
| ES (1) | ES2131069T3 (cs) |
| FI (1) | FI110008B (cs) |
| GR (1) | GR3030778T3 (cs) |
| HU (1) | HU219535B (cs) |
| NO (1) | NO309331B1 (cs) |
| PL (1) | PL170938B1 (cs) |
| SK (1) | SK55593A3 (cs) |
| WO (1) | WO1992015689A1 (cs) |
Families Citing this family (47)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9209118D0 (en) * | 1992-04-28 | 1992-06-10 | Sb 120 Amsterdam Bv | Vaccine compositions |
| EP0863211A1 (en) * | 1992-07-31 | 1998-09-09 | Medeva Holdings B.V. | Expression of recombinant fusion proteins in attenuated bacteria |
| GB9401787D0 (en) | 1994-01-31 | 1994-03-23 | Medeva Holdings Bv | Vaccine compositions |
| EP0712442B1 (en) * | 1993-07-30 | 2002-03-27 | Medeva Holdings B.V. | Vaccine compositions |
| GB9401795D0 (en) * | 1994-01-31 | 1994-03-23 | Medeva Holdings Bv | Vaccines |
| GB2295394B (en) * | 1994-01-31 | 1997-09-24 | Medeva Holdings Bv | DNA encoding a fusion protein comprising the C fragment of tetanus toxin |
| AUPM612494A0 (en) * | 1994-06-08 | 1994-06-30 | Csl Limited | Treatment or prevention of helicobacter infection |
| US6254874B1 (en) * | 1995-04-13 | 2001-07-03 | President And Fellows Of Harvard College | Attenuated auxotrophic microorganisms having a combination of non-attenuating mutations and method for making same |
| US6190657B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-02-20 | Yale University | Vectors for the diagnosis and treatment of solid tumors including melanoma |
| GB9521568D0 (en) * | 1995-10-20 | 1995-12-20 | Lynxvale Ltd | Delivery of biologically active polypeptides |
| US20030125278A1 (en) * | 1997-08-13 | 2003-07-03 | Tang De-Chu C. | Immunization of animals by topical applications of a salmonella-based vector |
| US6080849A (en) | 1997-09-10 | 2000-06-27 | Vion Pharmaceuticals, Inc. | Genetically modified tumor-targeted bacteria with reduced virulence |
| IL134936A0 (en) | 1997-09-10 | 2001-05-20 | Vion Pharmaceuticals Inc | Genetically modified tumor-targeted bacteria with reduced virulence |
| US6905691B1 (en) | 1997-12-11 | 2005-06-14 | Celltech Pharma Europe Limited | Vaccines containing attenuated bacteria |
| GB9806449D0 (en) * | 1998-03-25 | 1998-05-27 | Peptide Therapeutics Ltd | Attenuated bacteria useful in vaccines |
| US6585975B1 (en) * | 1998-04-30 | 2003-07-01 | Acambis, Inc. | Use of Salmonella vectors for vaccination against helicobacter infection |
| FR2778922A1 (fr) * | 1998-05-19 | 1999-11-26 | Pasteur Institut | Polynucleotides contenant des sequences de regulation de la synthese de toxines de clostridium, et microorganismes les comprenant |
| US6413768B1 (en) * | 1998-12-02 | 2002-07-02 | University Of Maryland | Expression plasmids |
| US6790950B2 (en) * | 1999-04-09 | 2004-09-14 | Pharmacia & Upjohn Company | Anti-bacterial vaccine compositions |
| JP4892134B2 (ja) * | 1999-04-09 | 2012-03-07 | ファルマシア・アンド・アップジョン・カンパニー・エルエルシー | 抗菌ワクチン組成物 |
| US20040009936A1 (en) * | 1999-05-03 | 2004-01-15 | Tang De-Chu C. | Vaccine and drug delivery by topical application of vectors and vector extracts |
| US6962696B1 (en) | 1999-10-04 | 2005-11-08 | Vion Pharmaceuticals Inc. | Compositions and methods for tumor-targeted delivery of effector molecules |
| GB0024203D0 (en) * | 2000-10-03 | 2000-11-15 | Peptide Therapeutics Ltd | Stabilisation of plasmid inheritance in bacteria |
| AU2002213681A1 (en) * | 2000-11-09 | 2002-05-21 | The University Of Queensland | Bacterial expression systems |
| US7780961B2 (en) * | 2001-05-03 | 2010-08-24 | Actogenix N.V. | Self-containing Lactococcus strain |
| GB0121998D0 (en) | 2001-09-11 | 2001-10-31 | Acambis Res Ltd | Attenuated bacteria useful in vaccines |
| AUPR977601A0 (en) * | 2001-12-28 | 2002-01-31 | Delta Biotechnology Limited | Defective entities and uses therefor |
| GB0205376D0 (en) * | 2002-03-07 | 2002-04-24 | Royal Holloway University Of L | Spore germination |
| JP2005529622A (ja) * | 2002-06-19 | 2005-10-06 | ヴェーイーベー・ヴェーゼットウェー | 腸吸収を促進するための方法および手段 |
| AU2003298291A1 (en) * | 2002-11-15 | 2004-06-15 | Universiteit Gent | Self-containing lactobacillus strain |
| US8029777B2 (en) | 2004-08-13 | 2011-10-04 | Marshall Barry J | Helicobacter system and uses thereof |
| WO2006015445A1 (en) | 2004-08-13 | 2006-02-16 | Marshall Barry J | Bacterial delivery system |
| ES2405552T3 (es) | 2005-11-29 | 2013-05-31 | Actogenix N.V. | Inducción de tolerancia mucosa a antiantígenos de células beta de islotes pancreáticos |
| EP2066339B1 (en) * | 2006-09-18 | 2014-08-13 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Compositions and methods of enhancing immune responses |
| CN101605559B (zh) | 2007-01-25 | 2014-04-23 | 阿克图杰尼斯公司 | 使用遗传修饰的乳杆菌通过抗原的粘膜递送治疗免疫疾病 |
| AU2008318615A1 (en) * | 2007-10-30 | 2009-05-07 | Texas A&M University System | Compositions and methods of enhancing immune responses to flagellated bacterium |
| PT3097926T (pt) * | 2007-11-01 | 2020-01-08 | Univ Guelph | Composições e métodos de potenciação das respostas imunitárias frente a eimeria |
| WO2011091255A1 (en) | 2010-01-21 | 2011-07-28 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Vaccine vectors and methods of enhancing immune responses |
| US9597379B1 (en) | 2010-02-09 | 2017-03-21 | David Gordon Bermudes | Protease inhibitor combination with therapeutic proteins including antibodies |
| WO2011156619A2 (en) | 2010-06-09 | 2011-12-15 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Vaccine and methods to reduce campylobacter infection |
| CN102477440A (zh) * | 2010-11-29 | 2012-05-30 | 南京大学 | 治疗基因在厌氧组织靶向递送和选择性稳定表达方法及应用 |
| US10183069B2 (en) | 2011-03-21 | 2019-01-22 | Altimmune Inc. | Rapid and prolonged immunologic-therapeutic |
| CA2829916C (en) | 2011-03-21 | 2019-08-20 | Vaxin Inc. | Intranasal administration of an adenovirus vector to induce a protective immune response to an inhalation pathogen |
| CN105142665A (zh) | 2013-02-14 | 2015-12-09 | 阿肯色大学评议会 | 增强对艾美球虫的免疫应答或限制艾美球虫感染的组合物和方法 |
| US10376571B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-08-13 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Compositions and methods of enhancing immune responses to enteric pathogens |
| KR20230070521A (ko) | 2016-05-03 | 2023-05-23 | 더 보드 오브 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 아칸소 | 면역자극 및 항원 폴리펩티드를 포함하는 효모 백신 벡터, 및 그를 이용하는 방법 |
| US11180535B1 (en) | 2016-12-07 | 2021-11-23 | David Gordon Bermudes | Saccharide binding, tumor penetration, and cytotoxic antitumor chimeric peptides from therapeutic bacteria |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4837151A (en) * | 1980-05-19 | 1989-06-06 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University, Stanford University | Live vaccines comprising two mutations and foreign antigen |
| DE3735381A1 (de) * | 1987-03-31 | 1989-05-03 | Boehringer Mannheim Gmbh | Rekombinante dna zur reprimierbaren und induzierbaren expression von fremdgenen |
| GB8730037D0 (en) * | 1987-12-23 | 1988-02-03 | Wellcome Found | Vaccines |
| JPH0284172A (ja) * | 1988-07-21 | 1990-03-26 | Smithkline Beckman Corp | 異種遺伝子の発現能を有し、組換え型ワクチンとして有用なサルモネラ形質転換体 |
| DE3926076A1 (de) * | 1989-04-21 | 1990-10-25 | Boehringer Mannheim Gmbh | Rekombinante dna und expressionsvektor |
| GB8912330D0 (en) * | 1989-05-30 | 1989-07-12 | Wellcome Found | Live vaccines |
| GB9007194D0 (en) * | 1990-03-30 | 1990-05-30 | Wellcome Found | Live vaccines |
| GB9104596D0 (en) * | 1991-03-05 | 1991-04-17 | Wellcome Found | Production of recombinant proteins |
-
1992
- 1992-03-05 ES ES92905914T patent/ES2131069T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-05 DK DK92905914T patent/DK0574466T3/da active
- 1992-03-05 AU AU13508/92A patent/AU664360B2/en not_active Expired
- 1992-03-05 AT AT92905914T patent/ATE180280T1/de active
- 1992-03-05 CZ CZ931005A patent/CZ285118B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-03-05 PL PL92296702A patent/PL170938B1/pl unknown
- 1992-03-05 JP JP50556392A patent/JP3415145B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-05 EP EP92905914A patent/EP0574466B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-05 KR KR1019930702594A patent/KR100240182B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-03-05 SK SK55593A patent/SK55593A3/sk unknown
- 1992-03-05 WO PCT/GB1992/000387 patent/WO1992015689A1/en active IP Right Grant
- 1992-03-05 DE DE69229221T patent/DE69229221T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-05 HU HU9302492A patent/HU219535B/hu unknown
- 1992-03-05 CA CA002099841A patent/CA2099841C/en not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-07-02 NO NO932423A patent/NO309331B1/no not_active IP Right Cessation
- 1993-08-26 FI FI933757A patent/FI110008B/fi not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-12-12 US US08/354,776 patent/US5547664A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-06-06 US US08/469,507 patent/US5683700A/en not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-07-14 GR GR990401865T patent/GR3030778T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU1350892A (en) | 1992-10-06 |
| US5547664A (en) | 1996-08-20 |
| FI933757A (fi) | 1993-08-26 |
| EP0574466B1 (en) | 1999-05-19 |
| SK55593A3 (en) | 1993-10-06 |
| WO1992015689A1 (en) | 1992-09-17 |
| JPH06505158A (ja) | 1994-06-16 |
| US5683700A (en) | 1997-11-04 |
| NO932423L (no) | 1993-07-02 |
| FI110008B (fi) | 2002-11-15 |
| NO309331B1 (no) | 2001-01-15 |
| GR3030778T3 (en) | 1999-11-30 |
| DE69229221D1 (de) | 1999-06-24 |
| DK0574466T3 (da) | 1999-11-08 |
| CA2099841A1 (en) | 1992-09-06 |
| HUT66833A (en) | 1995-01-30 |
| CA2099841C (en) | 2003-02-25 |
| NO932423D0 (no) | 1993-07-02 |
| FI933757A0 (fi) | 1993-08-26 |
| ES2131069T3 (es) | 1999-07-16 |
| HU219535B (hu) | 2001-05-28 |
| DE69229221T2 (de) | 1999-09-23 |
| HU9302492D0 (en) | 1993-11-29 |
| AU664360B2 (en) | 1995-11-16 |
| PL170938B1 (pl) | 1997-02-28 |
| ATE180280T1 (de) | 1999-06-15 |
| PL296702A1 (en) | 1993-07-26 |
| CZ285118B6 (cs) | 1999-05-12 |
| KR100240182B1 (ko) | 2000-01-15 |
| JP3415145B2 (ja) | 2003-06-09 |
| EP0574466A1 (en) | 1993-12-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5547664A (en) | Expression of recombinant proteins in attenuated bacteria | |
| CA1335661C (en) | Non-reverting shigella live vaccines | |
| AU584963B2 (en) | Non-reverting double mutant salmonella live vaccines | |
| JP3024982B2 (ja) | 生菌ワクチン | |
| US5210035A (en) | Non-reventing live vaccines | |
| US5424065A (en) | Vaccines containing avirulent phop-type microorganisms | |
| US4837151A (en) | Live vaccines comprising two mutations and foreign antigen | |
| AU754795B2 (en) | Attenuated mutants of salmonella which constitutively express the Vi antigen | |
| US5643771A (en) | Non-reverting live bacterial vaccines | |
| KR100242798B1 (ko) | 안정한 pur A 벡터 및 이의 사용 | |
| WO2002030457A9 (en) | Microbes having an attenuating mutation comprising a transcription terminator | |
| RU2126447C1 (ru) | Способ получения аттенуированного штамма бактерий salmonella и вакцина | |
| PL171476B1 (en) | Method of obtaining attenuated salmonella bacterium | |
| WO1997040169A1 (en) | Non antibiotic selectable markers for live vaccines |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20120305 |