CS273301B2 - 3,3,5,5-tetramethylbenzidine and 3,3,5,5-tetraethylbenzidine as oxidizing indicators during speeds - Google Patents

3,3,5,5-tetramethylbenzidine and 3,3,5,5-tetraethylbenzidine as oxidizing indicators during speeds Download PDF

Info

Publication number
CS273301B2
CS273301B2 CS862275A CS862275A CS273301B2 CS 273301 B2 CS273301 B2 CS 273301B2 CS 862275 A CS862275 A CS 862275A CS 862275 A CS862275 A CS 862275A CS 273301 B2 CS273301 B2 CS 273301B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
green
tetramethylbenzidine
solution
tolidine
test
Prior art date
Application number
CS862275A
Other languages
English (en)
Other versions
CS862275A2 (en
Inventor
Werner Rndr Mannheim- Guthlein
Walter Rndr Rittersdorf
Hugo Rndr Tiedemann
Peter Rndr Vogel
Wolfgang Rndr Werner
Original Assignee
Boehringer Mannheim Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Mannheim Gmbh filed Critical Boehringer Mannheim Gmbh
Priority to CS400977A priority Critical patent/CS273302B2/cs
Publication of CS862275A2 publication Critical patent/CS862275A2/cs
Publication of CS273301B2 publication Critical patent/CS273301B2/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N31/00—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods
    • G01N31/22—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods using chemical indicators
    • G01N31/228—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods using chemical indicators for peroxides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
    • C12Q2326/10—Benzidines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
    • C12Q2326/10—Benzidines
    • C12Q2326/12—3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine, i.e. TMB
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/805—Test papers
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
    • Y10S436/81—Tube, bottle, or dipstick
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
    • Y10T436/142222—Hetero-O [e.g., ascorbic acid, etc.]
    • Y10T436/143333—Saccharide [e.g., DNA, etc.]
    • Y10T436/144444—Glucose
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/20—Oxygen containing
    • Y10T436/206664—Ozone or peroxide

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

Vynález se týká použití 3,3', 5»5'-tetraalkylbenzidinů s 1 nebo 2 atomy uhlíku v alkylovém podílu jako oxidačních indikátorů při rychlútestech přo důkaz a stanovení peroxidu vodíku, látek reagujících za tvorby peroxidu vodíku a peroxidioky účinných látek.
Reakce peroxidu vodíku s oxidačními indikátory za katalýzy poroxidázou nebo peroxidicky účinných látek za vzniku barevných sloučenin má v analytické chemii zvláštní úlohu, neboí umožňuje kromě důkazu-peroxidu vodíku a peroxidáz stanovit četné látky reagující a kyslíkem a oxidázou za,vzniku peroxidu vodíku. Dále se uvádějí takové látky a v závorce vždy odpovídající oxidázy: glukóza (glukózooxidáza), galaktasa (galaktooxidáza), L-aminokyseliny (oxidáza L-arainokyselin), ohoíesterin (cholesterinoxidáza) a kyselina močová (urikáza). Jsou to především látky, jejiohž důkaz má velký význam v lékařské diagnostice a v chemii potravin.
Jako reakce pro důkaz peroxidáz přichází v úvahu zejména metoda stanovení hemoglobinu, přičemž se místo peroxidu vodíku mohou jako oxidační prostředky používat také organické hydroperoxidy.
Pro velký význam v lékařské rychlodiagnostice jsou téměř pro všechny shora uvedené reakoe popsány tak zvané ryohlotesty, které umožňují kvalitativní nebo kvantitativní stanovení jednotlivých reakčních složek. Přitom se používají nasákavé nosiče nebo filmy, které obsahují všechny reagenoie a na nioh probíhá po styku se zkoumanou kapalinou v případě, že je přítomná lávka, o kterou jde, barevná reakce. Vzniklé zbarvení se určuje pomocí srovnávacích tabulek barev nebo se měří pomocí remisních fotometrů, takže se z intenzity zbarvení může stanovit koncentrace reagující látky.
Jako oxidační indikátory pro tyto ryohlotesty je v literatuře a v patentech popsána řada sloučenin, avšak v praxi se jich prosadilo jen několik. Jedná se téměř výlučně o sloučeniny benzidinové řady, zejména o o-tolidin. Přes velké rozšíření tohoto indikátoru a jeho nepochybné přednosti oproti jiným známým indikátorům má ale o-tolidin i nedostatky. Za prvé není tato látka v recepturách pro ryohlotesty vždy optimálně stálá, což může vést při delším skladování k nežádoucím zbarvením a ztrátám citlivosti. Za druhé není modrozelený radikálový kation, vznikající při reakci indikátoru, příliš stálý, neboí přechází relativně snadno další oxidací v hnědý chinodiimin. Reakční zbarvení mají proto vzhledem k hnědému vedlejšímu zbarvení částečně špinavý charakter, přičemž se rychle mění, nelze je proto nejčastěji již krátce po předepsané době odečítání správně vyhodnotit. Při sériových analýzách a pro dokumentaci je to rozhodující nedostatek. Je*sice možné stabilizovat radikálový kationt anionickými smáčedly v určité míře, tato smáčedla nejsou však vždy použitelná, jelikož mohou působit destabilizačně na-oxidázy při primární reakci.
Nyní se 3 překvapením zjistilo, že se získají ryohlotesty shora uvedeného druhu, které jsou trvanlivější a poskytují stálejší radikály barviva, jestliže se místo o-tolidinu použije 3,3', 5,5'-tetramethylbenzidinu nebo 3,3', 5,5*'-tetraethylbenzidinu. Vynález se tedy týká použití 3,3', 5,5'-tetraraethylbenzidinu a 3,3', 5,5'-tetraethylbenzidinu jako indikačních indikátorů při rychlostech k důkazu a stanovení peroxidu vodíku, látek, které reagují za vzniku peroxidu vodíku a peroxidioky účinných látek.
Způsob výroby 3,3', 5,5'-tetraalkylbenzidinů je znám, avšak až dosud je přesně charakterizován toliko 3,3', 5,5'-tetramethylbenzidin například teplotou tání 168 °C a 3,3 , 5,5'-tetraethylbenzidin například teplotou tání v čisté formě 34-6 až 348 °C (ve formě dihydrochloridu 229 až 231 °C). Tetramethylbenzidin se podle V. R. Hollanda a kol. pTetrahedron 30. 3299-3302 (1974)] vyrábí o sobě známým způsobem redukcí známého tetramethylbenzenu zinkovým prachem a následným benzidinovým přesmyke. Podle R. Strohá a kol. jángew. Chem. 69, 124-131 (1957)] se 3,3', 5,5'-tetraethylbenzidin
CS 273 301 B2 připravuje ethylací benzidinu.
Zásadní schopnost: 3,3*, S.S^-tetraalkylbenzidinů s 1 nebo 2 atomy uhlíku v alkylovem podílu, kterou lze očekávat na základě struktury těchto sloučenin, pro důkaz okultního krvácení ve stolici a moči, je popsána v uvedené práoi V. R. Hollanda a kol., přičemž jako přednost se zdůrazňuje nižší kancerogenita oproti tolidinu. Neočekávatelně větší stálost aminu a jeho radikálového aniontu v rychlostech není však Hollandem popsána, jelikož neprovedl odpovídající zkoušky, a proto tuto vlastnost ani nemohl zjistit. Pro takové zkoušky nevznikl ani popud, nehoň využivatel rychlotestů nemanipuloval přímo s činidly a otázka kancerogenity pro něho tedy neměla význam.
3,3*, SjS^Tetraalkýlbenzidiny s 1 nebo 2 atomy uhlíku jsou popsány také pro rychlotesty k důkazu halogenidů, popřípadě pseudohalogenidů v tělesných tekutinách (kan. patent Č. 818 344). Při těchto rychlostech se používá ještě sloučenina dvojraocnó mědi, které reagují s halogenidy za vzniku halogenidů jednomocné mědi a volných halogenů, které oxidují benzidinové sloučeniny. Tato oxidace vede zřejmě ke stejným barevným radikálovým kationtům jako oxidace hydroperoxidy katalyzovaná peroxidázou. V uvedeném patentovém spisu je z četných nárokovaných derivátů benzidinu uváděn jako výhodný o-tolidin (3,3,-dimethylbenzidin), z čehož lze usuzovat, že tetraalkylbenzidiny se považují pro rychlotesty jako méně vhodné.
Vysoká stálost 3,3 , 5,5 -tetraalkylbenzidinů a jejich radikálových kationtů, na které je vynález založen, je překvapující také proto, že vlivem tlaku elektronů přídavných alkylových skupin by bylo možno spíše očekávat zvýšenou oxidovatelnost a tím
i.další reakci na hnědý chinondiimin.
Tetraalkylbenzidiny se podle vynálezu mohou používat ve všech případech, ve kterých byl až dosud používán-o-tolidin, přičemž se mohou popřípadě trochu modifikovat známé receptury. Popřípadě se mohou pro stabilizaci barvy použitá anionioká smáčedla nahradit méně aktivními nebo zcela vynechat. Tak se mohou použít například tetraalkylbenzidiny v testovacích papírkách pro důkaz glukózy v moči, krve v moči, chlolesterinu v séru, peroxidu vodíku v mléce nebo se mohou použít v testovacích filmech pro stanovení glukózy v krvi a séru a v mnoha jiných testech. Všechny tyto testy se vyznačují tím, že barevné reakce jsou jasnější, stálejší a zčásti lépe odstupňovány než při použití o-tolidinu, nebot modrozelená až zelená zabarvení radikálových kationtů tetraalkylbenzidinů nejsou zašpiněna podíly hnědého chinondiiminu.
U rychlotestů, popsaných v následujících příkladeůh praktického provedení, vystupují do popředí zejména překvapivé vlastnosti tetraalkylbenzidinů s 1 nebo 2 atomy uhlíku, zejména jejich zvýšená stálost ve srovnání s o-tolidinem zvláště při skladování testovacích papírků pro důkaz krve v moči. Zvýšená stálost radikálových kationtů v případe testovacích filmů pro stanovení glukózy umožňuje provádět měření v relativně dlouhém časovém období. Použití tetraethylbenzidinu-při testu glukózy v moči vede k testovacím papírkům, u kterých reakční zabarvení zůstává po celé dny téměř nezměněno, což má zvláštní význam pro časné diagnózy, při kterých diagnostici posílají použité testovací papírky do centrálních míst k vyhodnocení.
Následující praktické příklady vynález blíže objasňují, nijak jej však neomezují.
Příklad 1
Testovací papírek pro důkaz krve v moči
Filtrační papír (Schleioher a Schull č. 23SL) se impregnuje následujícími roztoky a usuší při 4θ °θ!
CS'273 301 B2
Roztok 1
1,2 molární citrátový pufr o pH 5,25 35,0 ml dvojsodná sůl etylendíamintetraoctové kyseliny 0,1 g dioktylnatriumsulfojantaran 0,5 g
2,5-dimetylhexan-2,5-dihydroperoxid 70%ní 1,6 g trimorfolid kyseliny fosforečné 12,7 g etanol 30,0 ml destilovaná voda ad 100,0 ml
Roztok 2
3,3', 5,5*-tetrametylbenzidin 0,3 g fenantridin 0,2 g toluen ad 100,0 ml
Získá se bílý testovací papírek, který se při namočení do moči obsahující krev po 5 až 20 s zbarví modrozeleně. Jestliže jsou eryťhrocyty intaktní, jsou papírky modrozeleně tečkované. Jestliže dojde k hemolýze nebo jestliže se nachází‘předem volný hemoglobin v moči, papírky se zbarví rovnoměrně modrozeleně. Citlivost se poO hybuje okolo 5 erythrocytů/mnr nebo odpovídajícího množství hemoglobinu. Nižší počet intaktních erythrooytů může za určitých okolností vyvolat ještě jednotlivé modrozelené body na testovacím papírku. Citlivost vůči myoglobinu odpovídá citlivosti hemoglobinu.
Po třídenním teplotním zatížení při 60 °C jsou testovací papírky zcela slabě nažloutle zbarveny, jejich citlivost zůstala v podstatě stejná, pouze reakčni doby se prodloužily na 60 až 90 s. Testovací papírek stejného složení s o-tolidinem namísto tetrametylbenzidinu je po stejném zatížení žlutohnědě zbarven, citlivost se
O pohybuje okolo 20 erythrooytů/mm.
Papírky se stejnou citlivostí a stabilitou, které pouze o něco pomaleji a s čistou zelenou barvou reagují, se získají při použití ekvimolárních množství 3,3', 5,5'-tetraetylbenzidinu, 3,3*-dimetyl-5,5*-dietylbenzidinu nebo 3,3*, 5,5*-tetraisopropylbenzidinu.
Příklad 2
Testovací papírek pro stanovení krve v moči
Jestliže se v receptuře z příkladu 1 nahradí dioktylnatriumsulfojantaran stejným množstvím lauroylsarkozinu nebo se zcela vynechá povrchově aktivní'prostředek, získají se testovací papírky, které jsou sice o něco méně citlivé než v příkladu 1, které jsou ale vždy ještě citlivější než odpovídající papírky s o-tolidinem. Barevné reakce s močí, která obsahuje 50 hemolyzovanýoh erythrocytů/mnr
Tabulka 1 bek smáčedla tetrametylbenzidin slabě zelené o-tolidin slabě šedohnědé jsou shrnuty v tabulce 1.
lauroylsarkosin zelené slabě hnědozelené
CS 273 301 B2
Příklad 3
Testovací papírek pro důkaz glukózy v moči
Filtrační papír (Schleieher a Sohull 597 HF) se impregnují roztoky následujícího složení a usuší při 50 °C:
Roztok 1 glukózooxidáza (70 U/mg) 222 mg peroxidáza (70 U/mg) 28 mg morfolinoetansulfonátový pufr (pH 6, 1,0 M) 50 ml tartrazin 80 mg polyvinylpyrrolidin 300 mg destilovaná voda ad 100 ml
Roztok 2
3,3', 5,5x-tetrametylbenzidin 600 mg
etanol ad 100 ml
Stejným způsobem se vyrobí testovací papírky, které obsahují ekvimolární množství 3,3', 5,S^-tetraetylbenzidinu, popřípadě o-tolidinu. Reakční zbarvení těchto testovacích papírků s močemi, obsahujícími glukózu po 60 až 120 s po namočení jsou shrnuty v níže uvedené tabulce. U tetrametylbenzidinu zůstanou tato zbarvení 10 až 15 minut konstantní, při usušení dostanou spíše namodralý charakter a v této formě zůstanou stálé po celé dny. Zbarvení s tetraetylbenzidinem zblednou poněkud při sušení, aniž by se měnila hodnota zbarvení a jsou potom po.celé dny stálé.
Zbarvení získaná s o-tolidinem počnou již po 5 až 10 minutách žloutnout a blednout a jsou po usušení během 2 až 4 hodin vždy podle koncentrace glukózy zcela vybledlé nebo slabě olivově hnědé.
Tabulka 2
% glukózy 100 ml roztoku o-tolidin tetrametylbenzidin tetraetylbenzidin
0 žluté žluté žluté
50 světle zelené světle zelené světle zelené
100 zelené modrozelené středně zelené
250 modrozelené zelenomodré zelené
500 zelenomodré modrooerné tmavozelené
1000 olivově Černé ěerné hluboce zelené
Testovací papírky, které obsahují ekvimolární množství 3,3'-dimetyl-5,5'-dietylbenzidinu, se chovají s ohledem na charakter a stálost reakčnich barev jako papírky s tetraetylbenzidinem.
CS 273 301 B2
Příklad 4
Testovací papírky pro důkaz peroxidu vodíku
Filtrační papír byl impregnován následujícími roztoky a usušen při 40 °C:
Roztok 1
trojnásobná sůl kyseliny citrónové, dihydrát 225 mg
kyselina citrónová, monohydrát 175 mg
peroxidáza (70 U/mg) 50 mg
natriumalginát 150 mg
polyoxyetylensorbitanmonolaurát (Tween 20) 1300 mg
kopolymér vinylpyrrolidinu s vinylacetátera 375 mg
destilovaná voda ad 100 mg
Roztok 2
3,3*, S^-tetrametylbenzidin 500 mg aceton ad 100 ml
Takto vyrobený testovací papírek dává s peroxidem vodíku ve vodných roztocích, například mléce, modrozelené reakční zbarvení až do koncentrace 0,1 mg na 100 ml roztoku.
Příklad 5
Testovací papírek pro důkaz oholesterinu a esterů oholesterinu v séru
Filtrační papír (Schleioher a Schull 597 MI1 Ind.) se impregnuje roztoky následujícího složení a usuší se při 40 °C:
Roztok 1 molární citranový pufr, pH 7 20,0 ml oholesterinoxidáza (60 U/mg) 0,1 g oholesterinesteráza (18 U/mg) 0,25 g peroxidáza (70 U/mg) 0,05 g destilovaná voda ad 100,0 ml
Roztok 2
3,3Z, 5,5z-tetrametylbenzidin 0,28 g polyetylenokrylfenoleter (Triton X 100) 0,5 g metylenohlorid ad 100,0 ml
Takto získané testovací papírky reagují se séry, které obsahují cholesterin a/nebo oholesterinester, za vzniku zelených barevných tónů, jejichž intenzita odpovídá konoentraci oholesterinu. Odpovídající testovací papírky, které místo tetrametylbenzidinu obsahují o-tolidin, reagují rovněž za vzniku zelených barevných tónů, které jsou ale méně intenzívní.
CS 273 301 B2
Příklad 6
Testovací film pro stanovení nižších obsahů glukózy v krvi něho seru
Komponenty disperse polyvinylacetátpropionanu (Propiofan 70 D) 45,0 g
1,85%ní roztoku natriumalginátu v 0,5 M fosforečnanovém pufru o pH 5,5 35,0 g natriumnonylsíran rozpuštěný v 5,0 ml vody 0,75 g glukózooxidáza (62,7 U/mg)·) Γοζρι1§1:§η(ί v 10 ml vody 0,189 g peroxidáza (68,8 U/mg) J 0,235 g
3,3', 5,5x-tetrametylhenzidin rozpuštěný v 5 ml acetonu 0,68 g
Složky se dohře promísí, natřou se v tloušíce vrstvy 200 /um na fólii a 35 minut se suší při 60 °C. Nakapání krve obsahující glukózu a její měření po 1 minutě poskytuje po dalších 2 minutách, při rozmezí obsahu glukózy od 5 až do 100 mg na 100 ml roztoku, modrozelené reakční zbarvení stoupající intenzity, které se může změřit běžně prodávaným remisním fotometrem. Následujíoí tabulka 3 ukazuje kinetiku vývoje zbarve· ní při 60 mg glukózy ve 100 ml roztoku ve srovnání s testovacím filmem, ve kterém je místo tetrametylbenzidinu obsaženo 500 mg o-tolidinu. Jestliže se testovací film... zahřívá 12 dní na 50 °C, nelze zjistit prakticky žádné zbarvení. Testovací film s o-tolidinem je naproti tomu velmi silně žlutohnědě zbarven.
Tabulka 3 čas (min) 1 2 3 5 10 intenzita tetrametylbenzidinu (dále TMB) 88 87 85 84 85 intenzita o-tolidinu 73 68 64 60 67
Příklad 7
Testovací film pro stanovení normálního a zvýšeného obsahu glukózy v krvi a séru
Testovací film se vyrobí podle příkladu 6, tento obsahuje dodatečně 0,050 g 9-(^-aminopropyl)-3-aminokarbazoldihydrochlorid. Nakapání krve obsahující glukózu a její setření po jedné minutě poskytuje po další minutě následující reakční zbarvení:
mg glukózy - okrové
120 mg glukózy - olivové
180 mg glukózy - modrozelené s proměnnou hloubkou zbarvení (vždy ve 100 ml roztoku)
Tyto barvy se samy o sobě nemění při dvoudenním uchovávání v atmosféře laboratoře. U analogického testovacího filmu, který obsahuje 0,600 g o-tolidinu a 0,025 g 9-(3^-amihopropyl)-3-aminokarbazoldihydrochloridu se mění modrozelené zbarvení
CS 273 301 B2 směrem k žlutozeleným tónům.
Dobu trvání stálosti barvy při obsahu 150 mg glukózy na 100 ml roztoku, měřeno na reflomatu, ukazuje následující tabulka 4.
doba (hod) intenzita TMB intenzita o-tolidinu
Tabulka 4
1 2
62 62
52 51
8 24
62 62
47 42
Jestliže se testovací film zahřívá 12 dní na 50 °C, nelze zjistit žádné změny zbarvení a vyhodnocení pomocí srovnávacích barev je nesporně možné. Testovací proužky obsahující o-tolidin jsou naproti tomu silně žlutohnědě zbarveny a srovnání s barevnou škálou již není možné.
V následujících příkladech je popsána výroba dvou až dosud neznámých sloučenin zmíněných shora.
Příklad 8
3,3'-Dimetyl-5,5'-dietylbenzidin
Varianta I
Ve dvoulitrové tříhrdlé baňce s michadlem, kapací nálevkou a teploměrem se suspenduje
96,5 g (0,564 mol) 2-metyl-6-etylanilinhydrochloridu ve směsi se 79,5 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové (d = 1,18 g/cm·5) a 330 ml vody a za dobrého chlazení ledem se při 0 až 3 °C přikape roztok 39 g dusitanu sodného ve 150 ml vody během 30 minut za míohání. Potom se míchá ještě asi 1 hodinu při 0 až 3 °C a roztok diazoniové soli se zředí přídavkem 600 ml ledové vody.
✓
Mezitím se v 6ti litrové tříhrdlé baňce s michadlem, kapací nálevkou a teploměrem (Y-kusem) se rozpustí 210 g síranu měďnatého v 900 ml vody a doplní 363 ml koncentro- «5 váného amoniaku (d = 0,88 g/cnr). Potom se rozpustí 90 g hydroxylamoniumchloridu ve 150 ml vody a za chlazení ledem se přikape roztok 95 g hydroxidu draselného v 72 ml vody. Tento dobře ochlazený roztok se přidá při 10 až 15 °C pod dusíkem během 15 minut k míchanému roztoku tetraminu měďnatého, přičemž vznikne světlemodrý komplex soli jednomooné mědi. Za chlazení ledem, mohutného míchání a pod dusíkem se při 12 až 15 °C přikape během 1,5 hodiny ochlazený roztok diazoniové solí (kapací nálevka je opatřena zaváděcí trubkou, která ohnutím ve tvaru U dosahuje pod povrch roztoku soli mědi). Po ukončeném přidávání se míchá ještě jednu hodinu, potom se reakční roztok vytřepe a 4 x 200 ml eteru. Spojené eterické extrakty se protřepou 3 x 50 ml 25% hydroxidu sodného, 2 x 100 ml vody, 3 x 100 ml 2N kyseliny chlorovodíkové a 2 x 100 ml vody. Získá se 55,4 g azosloučeniny ve formě červeného oleje. Ohromatografioké dělení na silikagelu (výška náplně 100 cm, průměr sloupce 4,8 cm) se směsí chloroformu s ligroinem 1:4 (množství silikagelu 1,5 kg, průměr 0,063 až 0,2 mm) dává 33,7 g čistého 2,2J-dimetyl-6,6'-dietylázobenzenu ve formě červeného oleje, který se rozpustí v 1,6 litru dietyleteru, přidá se 330 ml etanolu, potom roztok 135 g amoniurachloridu v 1,5 litru vody a za mohutného míchání se po částech přidá při 22 °G 300 g
CS 273 301 zinkového prachu. Po 5ti hodinovém míchání je redukce ukončena. Téměř úplně se oddělí odbarvená, organická fáze a vodná vrstva se protřepe třikrát vždy 250 ml eteru. Spojené eterické extrakty se potom doplní 210 ml 3N kyseliny sírové a míchají. Přitom se vytvoří síran ve formě bezbarvé, nejdříve lepivé sraženiny. Po přídavku 200 ml etanolu se získá 30,5 g 3,3’’-dimetyl-5!5z-dietylhenzidinsulfátu ve formě bezbarvých krystalů. Tento produkt se vnese do 150 ml vroucí vody, za míchání se ochladí na teplotu místnosti, doplní se 200 ml 2n hydroxidu sodného a extrahuje se 4 x 100 ml ohlo roformu. Spojené chloroformové extrakty se usuší síranem sodným a zahustí» Zbytek,
22,5 g světlehnědých krystalů se překfýstaluje ze směsi metanolu s vodou. Získá se 23 g = 30,4 % přibarvených krystalů, t.-t. 69 až 70 °C.
Dihydrochlorid (C1QH24N2 . 2HC1) taje při 289 až 291 °C (rozklad).
Varianta II
1,5 g hliníku a 0,1 g chloridu rtuíného se zahřívá se 75 g anilinu v autoklávu na 300 °0, přičemž se hliník rozpustí za vývoje vodíku. Po ochlazení se přidá 92 g o-tolidinu a 4,5 g bezvodého chloridu hlinitého. Potom se vše zahřeje na teplotu 280 až 300 °C a vtlačí se etylen s tlakem 20 MPa. Asi po 3 hodináoh je pohlcování etylenu ukončeno. Autokláv se ochladí a reakční hmota se vytřepe se zředěným hydroxidem sodným. Z organické fáze se ve vakuu oddestiluje 2-etylanilin a 2,6-dietylanilin (až 120 °C/1,3 kPa).
Zbytek se několikrát překrystalizuje ze zředěné kyseliny chlorovodíkové. Získá se dihydrochlorid 3,3,-dimetyl-5-5z-dietylbenzidinu.
T.t. 288 až 292 °C (rozklad).
Příklad 9
3,3', 5,5Z-Tetraisopropylbenzidin
Roztok 100 g 2,6-diisopropylanilinu ve 1 280 ml vody a 102 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové (d = 1,18 g/cnr5) ae zahřívá na 90 °C a potom se rychle přikape k 97 °C horkému roztoku složenému z hexakyanoželezitanu draselného v 5 100 ml vody a 143 g hydroxidu sodného. V důsledku vzniklé volné kyseliny kyanovodíkové se pracuje za použití dobře odtahující digestoře. Vzniklá červeně zbarvená suspense se míchá ještě 15 minut, ochladí se a vytřepe 6 x 300 ml eteru. Eterické extrakty se suší síranem sodným, odsají a zahustí. Získá se 97 g azosloučeniny ve formě červeného oleje. Ghromatografické dělení na sloupci silikagelu (výška náplně 110 cm, průměr sloupce 8 cm) se směsí chloroformu s ligroinem 1 : 4 (množství silikagelu 1,5 kg, průměr 0,05 až 0,2 mm) poskytne 32,45 g cihlově červených krystalů. T.t. 134 až 136 °C.
Azosloucenina se rozpustí v 500 ml ledové kyseliny octové, přidá se 150 g prachového zinku a 30 minut se zahřívá za míchání pod zpětným tokem. Potom se odsaje přebytečný zinkový prášek a rozpouštědlo se' ve vakuu zahustí. Získá se 17,5 g bezbarvých krystalů, tyto se smíchají se 150 ml vody, přidá se 150 ml 2N hydroxidu sodného a protřepe se třikrát vždy se 150 ml chloroformu. Přitom se získá 12,4 g surového 3,3', 5,5z-tetraisopropylbenzidinu; tento se .doplní 90 ml acetarihydridu, krátce se povaří a přebytečný acetanhydrid se odpaří na' rotačním odpařovači. Zbytek se rozpustí ve 20 ml isopropanolu, přidá se 180 ml ligroinu a vzniklé krystaly se odsají. Získaná
-diacetylsloučenina se ještě jednou překrystaluje ze směsi isopropanolu s ligroinem v poměru 2:1. Izoluje se 7,(>'sg bezbarvých krystalů, t.t. 366 °C. Tyto se
CS 273 301 B2 pro odštěpení N-acetylskupin zahřívají ve směsi složené za 180 ml ledové kyseliny octové a 50 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové v autoklávu 6 hodin na 130 až
140 °C.
Potom se reakoní roztok odpaří, odparek se doplní 200 ml 2N hydroxidu sodného a uvolt něná báze se extrahuje 4 x 50 ml chloroformu. Chloroformové extrakty se suší síranem sodným, odsají a zahustí. Přitom se získá 3,3', SjS^tetraisopropyrbenzidin ve formě nahnědlého oleje.
Výtěžek 5,6 g (mol. hmot. 352).
Dihydrochlorid (Cg^H^gN^ ’ 2HC1) ta3® P^1· 263 až 265 °C (rozklad).

Claims (1)

  1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU
    Použití 3,3', 5,5,-tetramethyl'benzidinu něho 3,3', 5,5z-tetraethylbenzidinu jako oxidačních indikátoru pri xychlotestech pro důkaz a stanovení peroxidu vodíku, látek reagujících za tvorby peroxidu vodíku a peroxidicky účinných látek.
CS862275A 1974-12-21 1975-12-17 3,3,5,5-tetramethylbenzidine and 3,3,5,5-tetraethylbenzidine as oxidizing indicators during speeds CS273301B2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS400977A CS273302B2 (en) 1974-12-21 1977-06-17 Quick tests for demonstration and determination of hydrogen peroxide and substances reacting during hydrogen peroxide or oxidatively active substances formation

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2460903A DE2460903C3 (de) 1974-12-21 1974-12-21 Neue 3,3',5,5'-Tetraalkylbenzidine

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS862275A2 CS862275A2 (en) 1990-08-14
CS273301B2 true CS273301B2 (en) 1991-03-12

Family

ID=5934292

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS862275A CS273301B2 (en) 1974-12-21 1975-12-17 3,3,5,5-tetramethylbenzidine and 3,3,5,5-tetraethylbenzidine as oxidizing indicators during speeds

Country Status (19)

Country Link
US (1) US4385114A (cs)
JP (2) JPS543394B2 (cs)
AR (1) AR206739A1 (cs)
AT (1) AT350189B (cs)
AU (1) AU504794B2 (cs)
BE (1) BE836789A (cs)
CA (1) CA1060906A (cs)
CH (1) CH619048A5 (cs)
CS (1) CS273301B2 (cs)
DD (1) DD122586A5 (cs)
DE (1) DE2460903C3 (cs)
FR (1) FR2295425A1 (cs)
GB (2) GB1464360A (cs)
HU (1) HU179930B (cs)
IT (1) IT1064063B (cs)
NL (1) NL7514628A (cs)
PL (1) PL97554B1 (cs)
SE (1) SE458687B (cs)
SU (1) SU680635A3 (cs)

Families Citing this family (58)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL7608492A (nl) * 1975-08-06 1977-02-08 Riedel De Haen Ag Diagnostisch middel voor het aantonen van bloed en andere peroxidasehoudende stoffen in lichaamsvloeistoffen.
US4211845A (en) * 1978-11-24 1980-07-08 Miles Laboratories, Inc. Glucose indicator and method
DE2853300C3 (de) * 1978-12-09 1982-12-02 Röhm GmbH, 6100 Darmstadt Schnelldiagnostica zur diagnostischen Erfassung von okkultem Blut
US4273868A (en) * 1979-02-23 1981-06-16 Miles Laboratories, Inc. Color stable glucose test
WO1980002800A1 (en) * 1979-06-21 1980-12-24 G Oster Specific impending ovulation indicator
DE2926271A1 (de) * 1979-06-29 1981-01-08 Behringwerke Ag Mittel zum nachweis peroxidatisch wirksamer substanzen
US4318984A (en) * 1979-11-13 1982-03-09 Miles Laboratories, Inc. Stabilized composition, test device, and method for detecting the presence of a sugar in a test sample
US4279993A (en) * 1979-11-13 1981-07-21 Magers Thomas A Indicator composition and test device containing amine oxide, and method of use
US4388271A (en) 1980-01-10 1983-06-14 Rohm Gmbh Rapid diagnostic agents
US4310626A (en) * 1980-06-02 1982-01-12 Miles Laboratories, Inc. Interference-resistant composition, device and method for determining a peroxidatively active substance in a test sample
US4340669A (en) 1981-02-12 1982-07-20 Miles Laboratories, Inc. System for the determination of glucose in fluids
US4391905A (en) 1981-02-12 1983-07-05 Miles Laboratories, Inc. System for the determination of glucose in fluids
US4391906A (en) 1981-02-12 1983-07-05 Miles Laboratories, Inc. System for the determination of glucose in fluids
DE3124594A1 (de) * 1981-06-23 1983-01-05 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Mittel und verfahren zum nachweis von wasserstoffperoxid
US4524133A (en) * 1981-08-03 1985-06-18 Miles Laboratories, Inc. Test device for lactase activity in a meconium sample
US4361648A (en) * 1981-08-13 1982-11-30 Miles Laboratories, Inc. Color fixed chromogenic analytical element
US4562148A (en) * 1981-11-06 1985-12-31 Miles Laboratories, Inc. Analytical element and method for preventing reagent migration
US4956300A (en) 1982-01-05 1990-09-11 Helena Laboratories Corporation Aid for determining the presence of occult blood, method of making the aid, and method of using the aid
US4503143A (en) * 1982-08-20 1985-03-05 Btc Diagnostics Limited Partnership Enzyme immunoassay with two-part solution of tetramethylbenzidine as chromogen
DE3311887A1 (de) * 1983-03-31 1984-12-20 Byk-Mallinckrodt Chemische Produkte Gmbh, 6057 Dietzenbach Verfahren zur bestimmung der peroxidase-aktivitaet durch endverduennungstitration und mittel zur durchfuehrung des verfahrens
US4543338A (en) * 1983-06-03 1985-09-24 Miles Laboratories, Inc. Wipe-off test device
US5702913A (en) 1983-12-21 1997-12-30 Helena Laboratories Corporation Chromgen-reagent test system
US5273888A (en) 1984-01-16 1993-12-28 Helena Laboratories Corporation Chemical test kit and method for determining the presence of blood in a specimen and for verifying the effectiveness of the chemicals
GB8405691D0 (en) * 1984-03-05 1984-04-11 Serono Diagnostics Ltd Methods of assay
US4810633A (en) * 1984-06-04 1989-03-07 Miles Inc. Enzymatic ethanol test
DE3425728A1 (de) * 1984-07-12 1986-01-16 Relectronic GmbH, 8045 Ismaning Teststreifen zur kolorimetrischen bestimmung der chloridionendichte
JPS6152300A (ja) * 1984-08-22 1986-03-14 Eiken Kagaku Kk 過酸化水素測定用組成物
US4824784A (en) * 1985-04-08 1989-04-25 Hygeia Sciences, Incorporated Chromogenic solution for immunoassay
US4931385A (en) * 1985-06-24 1990-06-05 Hygeia Sciences, Incorporated Enzyme immunoassays and immunologic reagents
US4673654A (en) * 1985-10-31 1987-06-16 Warner-Lambert Company Composition for determining peroxidase-like activity of hemoglobin
DE3541979A1 (de) * 1985-11-28 1987-06-04 Behringwerke Ag Mittel zur bestimmung von peroxidase-aktivitaet mit stabilisator, verfahren zur herstellung und seine verwendung
DE3541978A1 (de) * 1985-11-28 1987-06-04 Behringwerke Ag Mittel zur bestimmung von peroxidase-aktivitaet, verfahren zur herstellung und seine verwendung
US4868108A (en) * 1985-12-12 1989-09-19 Hygeia Sciences, Incorporated Multiple-antibody detection of antigen
JPS6348457A (ja) * 1986-08-19 1988-03-01 Fuji Photo Film Co Ltd 乾式多層分析要素
WO1988009824A1 (en) * 1987-06-05 1988-12-15 National Diagnostic Products (Australia) Pty. Limi Improvements in diagnostic test strips
US5081040A (en) 1987-06-29 1992-01-14 Helena Laboratories Corporation Composition and kit for testing for occult blood in human and animal excretions, fluids, or tissue matrixes
US4895798A (en) * 1987-11-13 1990-01-23 Miles, Inc. Test devices for determination of occult blood
US5102788A (en) * 1988-11-21 1992-04-07 Hygeia Sciences, Inc. Immunoassay including lyophilized reactant mixture
US5217874A (en) 1989-04-04 1993-06-08 Helena Laboratories Corporation Fecal occult blood test product with positive and negative controls
US5196167A (en) 1989-04-04 1993-03-23 Helena Laboratories Corporation Fecal occult blood test product with positive and negative controls
US5501956A (en) * 1990-03-23 1996-03-26 Molecular Devices Corporation Polyredox couples in analyte determinations
GB9113212D0 (en) * 1991-06-19 1991-08-07 Hypoguard Uk Ltd Reagent mixture
US5491094A (en) * 1994-06-03 1996-02-13 Industrial Test Systems, Inc. Test strip for free chlorine analysis
US6551791B1 (en) 1995-12-21 2003-04-22 University Of Florida Rapid diagnostic method for distinguishing allergies and infections and nasal secretion collection unit
US5910421A (en) * 1995-12-21 1999-06-08 University Of Florida Rapid diagnostic method for distinguishing allergies and infections
US5776719A (en) * 1997-07-07 1998-07-07 Mercury Diagnostics, Inc. Diagnostic compositions and devices utilizing same
US5989845A (en) 1996-04-05 1999-11-23 Mercury Diagnostics, Inc. Diagnostic compositions and devices utilizing same
US6040151A (en) * 1998-03-10 2000-03-21 Mercury Diagnostics, Inc. Diagnostic compositions and devices utilizing same
US5824491A (en) * 1996-05-17 1998-10-20 Mercury Diagnostics, Inc. Dry reagent test strip comprising benzidine dye precursor and antipyrine compound
RU2123689C1 (ru) * 1997-06-06 1998-12-20 Островская Вера Михайловна Реагентные индикаторные бумажные тесты на основе хромогенных целлюлоз и способ их получения
GB2326476A (en) * 1997-06-17 1998-12-23 Hypoguard Reagent comprising polymeric binder, chromogen, catalyst system which initiates colour change, and sulphonate or buffer
US6518034B1 (en) * 1998-06-25 2003-02-11 Abb Diagnostics, Ltd. Test strip for blood glucose determination
DE19849008A1 (de) * 1998-10-23 2000-04-27 Roche Diagnostics Gmbh Spreitschichten, Netzmittel zu ihrer Herstellung und deren Verwendung in Teststreifen
US6689618B1 (en) 2000-04-03 2004-02-10 Shuenn Tzong Chen Method and test strip of detecting oxidizing adulterant in urine
US8012761B2 (en) * 2006-12-14 2011-09-06 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Detection of formaldehyde in urine samples
US7846383B2 (en) * 2006-12-15 2010-12-07 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Lateral flow assay device and absorbent article containing same
EP3904526B1 (en) 2015-09-10 2024-07-10 Ecolab USA Inc. Self indicating antimicrobial chemistry
US10866223B2 (en) 2016-12-15 2020-12-15 Ecolab Usa Inc. Colorimetric detection and quantitative estimation of peracids using a redox sensitive leuco dye

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA818344A (en) * 1969-07-22 O. Rupe Chauncey Chloride detection paper
US2290436A (en) * 1940-09-26 1942-07-21 Miles Lab Diagnostic composition and method
US2981606A (en) * 1955-06-20 1961-04-25 Lilly Co Eli Glucose indicator and method
DE1495705B2 (de) * 1962-12-28 1972-01-13 Farbenfabriken Bayer Ag, 5090 Lever Kusen Verfahren zur herstellung von haertbaren epoxid formmassen
US3362886A (en) * 1965-04-09 1968-01-09 Miles Lab Composition and method for the detection of galactose
DE1917996U (de) 1965-04-15 1965-06-16 Wilhelm Roth G M B H Tonbandgeraet mit batterie- oder netzantrieb.
DE1917997U (de) 1965-04-15 1965-06-16 Wilhelm Roth G M B H Tonbandgeraet mit batterie- oder netzantrieb.
NL129843C (cs) * 1965-05-20
US3413197A (en) * 1966-06-30 1968-11-26 Miles Lab Controlled sensitivity galactose test composition and process
US3630847A (en) * 1967-07-20 1971-12-28 Boehringer Mannheim Gmbh Diagnostic agent for use in the determination of hydroperoxides and of peroxidate-active substances
US3627697A (en) * 1969-04-09 1971-12-14 Boehringer Mannheim Gmbh Hydroperoxide diagnostic agents containing a chromogen indicator
DE2114638C3 (de) * 1971-03-26 1980-09-18 Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt Verfahren zur Bestimmung von Peroxiden
DE2235127C2 (de) 1972-07-18 1974-08-08 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Diagnostisches Mittel zum Nachweis von Blut und anderen peroxidatisch wirksamen Substanzen in Körperflüssigkeiten
US3926732A (en) * 1973-02-16 1975-12-16 Alfa Laval Ab Method for assaying catalase in milk and other liquids

Also Published As

Publication number Publication date
DE2460903B2 (de) 1981-02-12
CH619048A5 (cs) 1980-08-29
CS862275A2 (en) 1990-08-14
PL97554B1 (pl) 1978-03-30
US4385114A (en) 1983-05-24
SE7514196L (sv) 1976-06-22
DE2460903A1 (de) 1976-06-24
FR2295425A1 (fr) 1976-07-16
GB1464359A (en) 1977-02-09
FR2295425B1 (cs) 1981-07-31
AT350189B (de) 1979-05-10
NL7514628A (nl) 1976-06-23
CA1060906A (en) 1979-08-21
AU504794B2 (en) 1979-11-01
DE2460903C3 (de) 1981-12-24
IT1064063B (it) 1985-02-18
JPS543394B2 (cs) 1979-02-22
AR206739A1 (es) 1976-08-13
ATA970075A (de) 1978-10-15
JPS5189491A (cs) 1976-08-05
SU680635A3 (ru) 1979-08-15
SE458687B (sv) 1989-04-24
AU8755775A (en) 1977-06-23
BE836789A (fr) 1976-06-18
JPS5436237A (en) 1979-03-16
GB1464360A (en) 1977-02-09
HU179930B (en) 1983-01-28
DD122586A5 (cs) 1976-10-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CS273301B2 (en) 3,3,5,5-tetramethylbenzidine and 3,3,5,5-tetraethylbenzidine as oxidizing indicators during speeds
AU781213B2 (en) 8-(anilino)-1-naphthalenesulfonate analogs and their use in analyte detection assays
US4071317A (en) Test composition and device for determining peroxidatively active substances and process for preparing same
EP1167540B1 (en) Dye couple for spectrophotometric determination of analytes
CA2192744C (en) Stable coupling dye for photometric determination of analytes
FI63637C (fi) Stabiliserade snabbdiagnostiska medel innehaollande oxideringsindikatorer
JPS583679B2 (ja) タイエキチユウノ カサンカセイサヨウブツシツオ ケンシユツスルタメノ シケンヘン
JPS6154786B2 (cs)
JPH0427839B2 (cs)
JPS60217900A (ja) メルカプト基含有化合物の定量方法
EP0038205B1 (en) Method for determination of peroxide and test reagent therefor
US4396714A (en) N-Sulfoalkylaniline derivatives
CS220789B2 (en) Diagnostic means for evidence of the leucosyte in the body liquids
US3822285A (en) 9-(ypsilon-aminopropyl)-3-aminocarbazole
FI59245C (fi) 9-substituerade 3-aminokarbazolderivat anvaendbara som indikatorer vid maetning av enzymatiska reaktioner
CS273302B2 (en) Quick tests for demonstration and determination of hydrogen peroxide and substances reacting during hydrogen peroxide or oxidatively active substances formation
US5264622A (en) Water-soluble methylenebis(dialkylaniline) derivatives and application thereof
EP0094789B1 (en) Novel method for determination of 5-aminosalicylic acid
EP0255708B1 (en) Indicator composition and method for the preparation thereof
US5194389A (en) Naphthol derivatives, processes for their production and their use
JPH0244519B2 (cs)
AU595993B2 (en) Dicyanoethylaryl derivatives and process for their preparation
HK1072616A (en) 8-(anilino)-1-naphthalenesulfonate analogs and their use in analyte detection assays
JPS631939B2 (cs)