CS270593B2 - Method of 7 beta-/2-(r)-2-(p-hydroxyphenyl)-2-aminoacetamido/-3-chloro-3-(carbadethiacephem)-4-carboxylic acid's crystalline monohydrate form preparation - Google Patents

Description

Vynález se týká nové krystalické monohydrátové formy ^-laktaaového antibiotika, 7^ - [2*-(R)-2 *-(p-hydroxyfenyl-)-2 -aminoacetamldoj-3-chlor-3-(l-karbadethláceťem)-4-karboxylové kyšeliny vzorce I

kde hvězdička ukazuje R-absolutní stereochemi1. Sloučenina vzorce I je novým silným orálně účinným antibiotikem. Toto antibiotikum je například popsáno v US patentu C. 4 335 211. Z ekonomických důvodů je bezvodá forma této sloučeniny v dalším textu označována pořadovým číslem firmy ELI LILLY LY213735.

Krystalický monohydrát LY213735 je z farmaceutického hlediska výhodným hydrátem LY213735. Monohydrát představuje potřebnou formu LY213735, která je užitečná při výrobě různých dávkovačích forem tohoto antibiotika. Výhodnými meziprodukty při výrobě LY213735 obecně a krystalického monohydrétu zvláště jsou krystalické mono- a bis-(N,N'-dimethylformamidové solváty (dále mono(DMF) a bis-(DMF) solváty) LY213735.

Monohydrát představuje stabilní formu LY213735, se kterou se snadno manipuluje. LY213735 je sloučenina, která byla až dosud obtížné čietitelná a nesnadno se získávala ve formě vhodné pro farmaceutické použití·

Do rozsahu solvátů amOnohydrátů sloučeniny vzorce I náleží i zwitteriontová forma sloučeniny vzorce I· Monohydrát a oba solváty sloučeniny vzorce I mohou být jak v krystalické, tak v mikrokrystallcké formě.

V přednostním provedení vynálezu má krystalický monohydrát práškový rentgenový difrakční obrazec definovaný daty uvedenými v tabulce 1.

Tabulka 1

Monohydrát

I/Ii

12,99

10,76

9,11

7,43

6,65

0,17

1,00

0,33

0,14

0,12

5,75

5,24

5,06

4,87

4,74

0,05

0,04

0,16

0,24

0,23

CS 270 593 B2

4,41

4,30

4,13

3,90

3,59

0,23

0,13

0,12

0,27

0,22

3,37

3,20

2,94

2,86

2,73 /0,53

0,12

0,10

0,06

0,06

Ohybový obrazec definovaný v tabulce 1 byl získán za použití záření o vlnové délce 0,15406 nm filtrovaném niklem. Ve sloupci označeném “d jsou uvedeny mezirovinové vzdálenosti a ve sloupci označném I/If” jsou uvedeny hodnoty relativní intenzity. .

Krystalický mono(DMF)solvát vykazuje práškový rentgenový difrakční obrazec definovaný daty uvedenými v tabulce 2.

Tabulka 2

Mono(DMF)solvát •d Ι/Ι_χ

13,18

10,90

7,69

6,80

6,02

5.37

5,12

4,90

4,69

4.37

3,93

3,57

3,40

3,22

3,08

2,85

2,74

0,12

1,00

0,11

0,07

0,20

0,07

0,10

0,07

0,27

0,43

0,25

0,15

0,23

0,10

0,05

0,07

0,15

Rentgenová data uvedená v tabulce 2 byla získána za stejných instrumentačních podmínek, jako data v tabulce 1.

Krystalický bis(DMF)solvát vykazuje práškový rentgenový difrakční obrazec definovaný daty uvedenými v tabulce 3.

CS 270 593 B2

	Tabulka 3 . Bis(DMF)solvát
d	. IZIi
20,1	: ; 0,03
12,44	1,00
10,27	• 0,07
8,50 6,91	0,08 0,03
6,60	0,05
6,23	0,08
5,43	0,13
4,74 4,41	0,09 0,09
4,19	0,40
3,62 3,52 3,39	0,05 0,05 0,03
3,34	0,03
3,14 3,02	0,10 0,07
2,86	0,06

Rentgenová data uvedená v tabulce 3 byla získána za stejných instrumentačních podmínek jako data v tabulce 1.

Krystalický monohydrát sloučeniny vzorce I se obvykle zpracovává na farmaceutické přípravky a přitom se mísí s jedním nebo více farmaceuticky vhodnými nosiči, vehikuly nebo excipiencil. Získané farmaceutické přípravky se hodí pro potlačování gram-positivních a gram-negativních bakteriálních infekcí u teplokrevných živočichů a obsahují kromě therapeuticky účinného množství monohydrátu LY213735 shora uvedené pomocné přísady.

V případě přípravků určených pro orální podávání (jako jsou tablety a kapsle) zahrnuje termín ''vhodné nosiče, vehikula excipiencia běžná excipiencia, jako jsou pojivá, například sirup, arabská guma, želatina, sorbitol, tragant, polyvinylpyrrolidon (Povidone), methylceluloza, ethylceluloza, sodná sůl karboxymethylcelulózy, hydroxypropylmethylcelulóza, sacháróza a Škrobí plniva a nosiče, jako je například kukuřičný škrob, želatina, laktóza, sacharóza, mikrokrystalická celulóza, kaolin, mannitol, střední fosforečnan vápenatý, chlorid sodný a kyselina .alginová; desintegrátory, jako je sodná sůl kroakarmelózy, mikrokrystalická celulóza, kukuřičný škrob, sodná sůl glykolétu škrobu, kyselina alginová a různá smáčedla, jako je natriumlaurylsúlfét; lubrikační látky, jako je stearan hořečnatý a jiné stearany kovů, kyselina stearová, kapalné polysiloxany, mastek, vosky, oleje a koloidní oxid křemičitý. Rovněž se může používat aromatizačních přísad, jako je pepermintová silice, olej z llbavky položené, třešňová příchuť apod. Někdy se mohou účelně přidávat také barvící látky za účelem zvýšení estetické přitažlivosti dávkovači formy na pohled nebo pro zlepšení identifikatelnosti produktu. Tablety se rovněž mohou povlékat způsobem dobře známým v tomto oboru.

CS 270 593 B2

Farmaceutické přípravky podle tohoto vynálezu mohou být rovněž ve formě orálních kapalných přípravků. Takovými přípravky mohou být a) vodné nebo olejové suspenze, roztoky, emulze nebo sirupy nebo b) suchý prášek, z něhož se kapalný přípravek vytváří před použitím pomocí vody nebo jiného vhodného vehikula. .Pokud se termínu “vhodné nosiče, vehikula a excipiencia” používá ve spojení s takovými orálními kapalnými přípravky, rozumějí se pod ním obvyklé přísady, jako suspenzní činidla, jakQ je například arabská guma, methylcelulóza, hydroxyethylcelulóza, karboxymethylcelulóza,‘celulóza se sodnou solí karboxymethylcelulózy (Avicel^), xanthanová pryskyřice nebo škrob; sladidla, jako je sacharóza, sirup, glukóza, sacharin, sorbital nebo aspartam; smáčedla, jako je natriumlaurylsulfát, silikonový olej, různá povrchově aktivní činidla řady Pluronic⁴ nebo glycerin; konzervační látky, jako jsou methyl-, propyl- nebo butyl-p-hydroxybenzoáty nebo kyselina‘sorbová, barviva, aromatické přísady a soli, jako je chlorid sodný, kyselina citrónová, nebo citran sodný, olej z libavky položené, vodné kapaliny, oleje a estery, jako je mandlový olej, frakcionovaný kokosový olej, hydrogenovaný ricinový olej, lecitin, stearan hlinitý apod.

• Farmaceutické přípravky mohou mít rovněž podobu přípravků pro intravenosní (IV) podávání. Přitom se může vodorozpustná forma monohydrátové sloučeniny rozpustit v některé z běžně používaných intravenózních kapalin za vzniku roztoku, který se podává infuzí. Pokud se označení vhodný nosič, vhodná vehikulum nebo vhodné excipiencium používá ve spojení s přípravky pro intravenózní použití, rozumí se jím takové kapaliny, jako fyziologický solný roztok, Ringerův roztok nebo 5% roztok dextrosy. ' ·

Jako vhodné nosiče, vehikula a excipiencia v případě topikálních přípravků přicházejí v úvahu hydrofobní a hydrofilní báze. Tyto báze zahrnují masti, krémy a lotiony.

Veterinární farmaceutické přípravky obsahující antibiotické sloučeniny podle vynálezu se mohou podávat v krmivu nebo pitné vodě pro hospodářská zvířata. Alternativně se mohou tyto sloučeniny zpracovávat na intramammární přípravky a v tomto případě jsou “vhodnými nosiči, vehikuly a excipiencii báze s dlouhodobým nebo rychlým uvolňováním.

Krystalický monohydrát sloučeniny vzorce I se může rovněž zpracovávat na jednotkové dávkovači formy tvořené sterilními lahvičkami, sterilními plastovými zásobníky obsahujícími vstupní otvor se šeptem nebo sterilními hermeticky zatavenými injekcemi. Množství krystalického monohydrátu v jednotkové dávce může kolísat od asi 100 mg do asi 10 g.

Therapeuticky účinné množství krystalického monohydrátu vzorce I leží v rozmezí přibližně od 2,5 mg do asi 70 mg sloučeniny na 1 kg tělesné hmotnosti v Jedné dávce. U dospělého člověka činí celková denní dávka od asi 1 g do asi 5 g.

Během léčení krystalickým monohydrátovým antibiotikem podle vynálezu se může antibiotická sloučenina podávat ve formě jediné denní dávky nebo ve formě několika dílčích dávek za den. Léčebný režim může vyžadovat dlouhodobé podávání, například po dobu několika dnů nebo po dobu dvou až tří týdnů. Množství látky podávané v jedné dávce nebo celkově podané množství závisí na takových faktorech, Jako je druh a prudkost infekce, stáří a celkový zdravotní stav pacienta a tolerance vůči antibioticky účinnému krystalickému monohydrátu vzorce I jak ze strany pacienta, tak ze strany mikroorganismu nebo mikroorganismů, které se podílejí na infekci.

Přednostní skupinu farmaceutických přípravků tvoří přípravky obsahující vhodný nosič, vehikulum nebo excipiencium a krystalický monohydrát vykazující rentgenový difrakční obrazec definovaný v tabulce 1.

Předmětem vynálezu Je způsob přípravy krystalické monohydrátové formy 7/i-[j2'-(R)-2'-(p-hydroxyfenyl)-2*-aminoacetamidoJ-3-chlor-3-(l-karbadethiacefem)-4-karboxylové kyseliny vzorce I, charakterizované shora uvedeným rentgenogramem, který se vyznačuje tím, že se hodnota pH vodného roztoku obsahujícího sloučeninu vzorce I nastaví na 2 až 7, a vzniklý krystalický monohydrát sloučeniny vzorce I se izoluje. '

CS 270 593 B2

Krystalický monohydrát se může vyrobit buď z mono(DME) nebo bis(DMF)solvátu. Přitom se například postupuje tak, že se bis(DMF)solvát smísí ve vodě s tetrasodnou solí ethylendiamintetraoctové kyseliny (FOTA) a malým množstvím koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Poté čo suspenze přejde na roztok se roztok ochladí (na přibližné 10 °C) a hodnota pH se pomalu zvyšuje (přídavkem báze, jako triethylaminu), dokud se nevytvoří suspenze (přednostně pH 3,6). Suspendovaná pevná látka (monohydqátji se obvyklým způsobem odfiltruje, promyje a vysuší. Alternativně se může monohydrát· vyrobit: z mono(DMF)solvátu postupem, který je analogický konverzi bis(DMF)solvátu na monohydrát. Při podávání báze stoupá pH přednostně к vyšším hodnotám než v případš bis(DMF).(například na pH 5,8) při podobném množství báze.

Krystalický bis(hl,N '-dimethylformamidový)solvát sloučeniny vzorce I se připravuje tak, že se -aminosloučenina obecného vzorce XI

kde představuje ochrannou skupinu karboxyakupiny, nechá reagovat v N,N'-dimethylformamidu, s acylačním činidlem obecného vzorce

kde

X představuje odštépitelnou skupinu a

R představuje ochrannou skupinu, načež se provede odštěpení ochranných skupin.

Bis(DMF)solvát se může získat acylací Ίβ -aminosubstituované sloučeniny (označované jako ••Jádro?··) obecného vzorce II

(XI) kde R^ má shora uvedený význam,

CS 270 593 B2 načež se odštěpí ochranná skupina karboxyskupiny, označené jako Rp Jádro a jeho synthesa jsou zveřejněny v US patentu č. 4 734 494,

Ochrannou skupinou karboxyskupiny ve významu R^ v obecném vzorci II je obvyklá ochranná skupina karboxyskupiny a přednostně se jedná, o skupinu, která není stericky bráněná. Jako příklady takových skupin je možno uvést beňzylskupinua substituované benzylskupiny, jako je 4-methoxybenzyl, 4-nitrobenzyl, 4-methyibenzyl, 3₉5-dimethylbenzyl a 4-chlorbenzylskupina; silylskupiny, jako je trialkylsilylskupina (zejména triměthylsilylskupina), a halogensubstituované alkylskupiny, jako .Je 2,2,2-trichlorethyl-, 2,2,2-tribromethyl- a

2-jodethylskupina. Přednostní esterovou skupinou Je benzyl- nebo substituovaná benzylesterová skupina (jako například p-nitrobenzylskupina).

Acylace sloučeniny p-nitrobenzyljádro (R^ = p-nitrobenzyl) se provádí v dimethylformamidu za chlazení (například na -20 °C). Acylační činidlo, aktivovaný derivát 2-(R)-2-(p-hydroxyfenyl)-2-aminooctové kyseliny, se přidá к ochlazenému DMF. Přednostním acylačním činidlem je sloučenina vzorce III·

Reakční roztok se chladí a pokud je acylačnía činidlem sloučenina vzorce III, přidá se rychle po sobě kyselina methansulfonová, dimethylbenzylamin a methylester kyseliny chlormravenčí. Roztok se za míchání udržuje při velmi nízké teplotě (přibližně -50 °C) a pak se za míchání přidá p-nitrobenzylester jádra. Reakční směs se míchá při nízké teplotě (například -45 °C), dokud není acylační reakce v podstatě ukončena (což se zjistí obvyklým způsobem, například chromatografií na tenké vrstvě). Směs se pak pomalu zahřeje na přibližně -10 °C a za stálého udržování počáteční teploty roztoku se pomalu přidají reakční činidla sloužící к odštěpení ochranných skupin karboxyskupiny a aminoskupiny (jako voda, koncentrovaná kyselina chlorovodíková a zinkový prach v případě p-nitrobenzylesteru). Roztok se míchá při teplotě místnosti až do dokončení reakce. Pokud R^ představoval p-nitrobenzylskupinu, zvýší se pH (například na 2,9) přídavkem báze, jako triethylaminu a zbytek zinku se odstraní filtrací. Hodnota pH se postupně zvyšuje, dokud nevznikne bílá suspenze a hodnota pH se bez přídavku báze ustálí (obvykle okolo asi pH 5,6). Směs se naočkuje LY213735 při pH asi 4,6, aby se vyvolala krystallzace. Pevná fáze suspenze se odfiltruje, Mokrý filtrační koláč se suspenduje ve směsi DMF/voda 90 : 10 a suspenze se převede na roztok koncentrovanou kyslinou chlorovodíkovou. Roztok se ochladí a pH se zvyšuje malými přídavky zásady (triethylaminu), dokud se nevytvoří suspenze a pH roztoku se stabilizuje dalšími přídavky báze (například pH přibližně 5,7). Krystaly se znovu odfiltrují a vysuší. Získá se bis-(OMF)solvát.

Alternativně se může bis(DMF)solv^t vyrobit z koncentrovaného DMF roztoku mono(DMF)solvátu. Konkrétně se postupuje tak, že se ke koncentrovanému DMF roztoku přidá stejný objem srážedla (přednostně acetonitrilu) a 'směs se ochladí (například na 0 °C). Pevný bis(DMF)solvát, který se vysráží, se opět odfiltruje. V souladu s tím je předmětem vynálezu rovněž způsob výroby krystalického bis(N,N'-dimethylformamid)solvátu sloučeniny vzorce

I, který se vyznačuje tím, že se ke koncentrovanému roztoku mono(0MF)solvátu sloučeniny.

CS 270 593 02 vzorce I v DMF přidá srážedlo.

Mono(DMF)solvát se rovněž často získá acylační reakcí použitou pro tvorbu bis(DMF)solvátu. V souladu s tím je předmětem tohoto vynálezu rovněž způsob výroby mono(N,N'-dimethylformamid)solvátu sloučeniny vzorce I, který se vyznačuje tím, že se 7 -aminosloučenina obecného vzorce II ,

(II) kde .

představuje ochrannou skupinu karboxyskupiny, nechá v dimethylformamidu reagovat s acylačním činidlem vzorce .

kde _________________

X představuje odštěpitelnou skupinu a '

R představuje ochrannou skupinu, načež ee z produktu odstraní ochranná skupiny·

Podle dalšího způsobu výroby mono(DMF)eolvátu se bl8(DMF)eolvát suspenduje v minimálním množství kyseliny (jako koncentrované kyseliny chlorovodíkové). Hodnota pH se pomalu zvyšuje bází (jako triethylamlnem) dokud nevznikne svštlá suspenze (obvykle okolo pH 3,0)· Suspenze ee přefiltruje (tím ee odstraní triethylamoniumchlorid) a pak se pH filtrátu pomalu zvýší na asi 5 až 6, přednostně 5,6 přídavkem báze. Získané krystaly se odfiltrují a vysuší. V souladu s tím je předmětem vynálezu také způsob výroby mono(N,N'-dimethylformamid)solvátu sloučeniny vzorce I definovaného shora, který se vyznačuje tím, že se hodnota pH roztoku bis(DMF)solvátu sloučeniny vzorce I ve směsi DMF : voda (objemově 9 : 1) nastaví na;si 5 až 6. .

Pro acylaci jádra (sloučeniny vzorce II), vedoucí ke vzniku LY213735 existuje mnoho alternativních metod. LY213735 připravené těmito alternativními metodami se může převést na kterýkoliv ze dvou shora uvedených OMF solvétů tak, že se acylovaný produkt suspenduje ve směsi voda/OMF, pak ee suspenze působením kyseliny převede na roztok a působením báze se vyvolá srážení, jak je to uvedeno shora. Způsoby acylace za účelem získání LY213735 se podobají způsobům acylace é-aminopenlcllanové kyseliny, 7-amlnodesacetoxycefalosporanové kyseliny a 7-aminocefalosporanové kyseliny. Podle jednoho způsobu acylace se jednoduše 7β-amlnosubstltuované jádro smísí s chloridem kyseliny nebo bromidem kyseliny v přítomnosti akceptorú kyseliny. Chlorid kyeeliny nebo bromid kyseliny se může vytvořit “in šitu*. Podle Jiného způsobu se 70 -amlnosubstltuované Jédro smísí s prekursorem postranního řetězce ve formě volné karboxylov.é kyseliny (nebo její soli) a kondenzačním činidlem. Vhodnými

CS 270 593 B2 kondenzačními činidly jsou N,N'-disubstituované karbodiimidy, jako je N,N'-dicyklohexylkarbodiimid, N,N '-diethylkarbodiimid, N,N '-di(n-propyl)karbodiimid, N,N'-di(isopropyl)karbodiimid, N,N -diallylkarbodiimid, N,N'-bis(p-dimethylaminofenyl)karbodiimid, N-ethyl-N*-(4-ethylmorf olinyDkarbodiimid apod. Jiná vhodná karbodiimidová kondenzační činidla jsou popsána Sheehanem v US patentu č. 2 938 892 a Hofmannem a dalšími v US patentu č. 3 065 224. Rovněž azolidů, jako N,N '-karbonyldlimftdazolu a N,N '-tionyldiimidazolu, se může používat jako kondenzačních činidel. Pro kopulaci volné kyseliny nebo její soli kyseliny se 7 -areinojádrem se může použít dehydratačních činidel, jako oxychloridu fosforu, alkoxyacetylenů a 2-halogenpyridiniových solí (jako 2-chlorpyridinlummethýljodidu, 2-fluorpyridiniummethyljodidu apod.). . ,.-ύ.

Podle jiného způsobu acylace se nejprve prekursor acylového postranního řďtězce ve torně volné karboxylová kyseliny (nebo*odpovídající soli) převede na odpovídající reaktivní esterový derivát, kterého se pak použije pro acylacl jádra. Reaktivní esterový derivát se vyrobí esterifikací volné kyseliny látkami ze skupiny zahrnující p-nitrofenol, 2,4-dinltrofenol, trichlorfenol, pentachlorfenol, 2-chlor-476-dimethoxytrlazin, N-chlorsukcinimid, N-chlormaleinimid, N-chlorftalimid, 1-hydroxy-lH-benzotrlazol a l-hydroxy-6-chlorlH-benžotriazol. Reaktivním esterovým derivátem může být též směsný anhydrid, který může zahrnovat taková zbytky jako je methoxykarbonyl, ethoxykarbonyl, iao-butoxykarbony1, trichlormethylkarbonyl a isobut-2-ylkarbonyl spolu se zbytkem karboxylová kyseliny tvořícím acylový postranní řetězec. Směsné anhyďridy se syntetizují acylací karboxylová kyseliny acylového postranního řetězce. .

• Alternativně eo může 7$-amino jádro aoylovat N-ethoxykarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinolinovým (EEOQ) derivátem acylového postranního řetězce. Obvykle se postupuje tak, že se volné kyseliny acylového postranního řetězce a EEOQ nechají reagovat v inertním polárním organickém rozpouštědle (Jako je tetrahydrofuran, acetonltrll apod.). Výsledného derivátu EEOQ se použije in sítu pro acylacl 7^-amlnosubstltuovaného Jádra.

Ještě další metoda acylace 7β-aminosloučenin zahrnuje použití enzymaticky urychlovaného postupu. Tento postup Je popsán v US patentu č. 4 335 211 (Hashlmoto a další, uděleném 15. června 1982).

Ochranné skupiny amlnoskuplny a karboxyskuplny se odstraňují způsoby dobře známými v tomto oboru. Příklady podmínek, za kterých probíhá odštěpování těchto dvou typů ochranných skupin, je možno nalézt ve standardních pracích týkajících se tohoto tématu, jako je například E. Haslam, Protective Groups In Organlc Chemlstry, J.G.W. McOmie, vyd. Plenům Press, New York, N.Y., 1973, kapitoly 2 a 5, a T.W.Greene Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, New York, N.Y. 1981, kapitoly 5 a 7.

Příklady postupů vhodných pro odštěpení ochranných skupin amino a karboxyskuplny je možno rovněž najít v experimentální části tohoto popisu. Tak například terc.butoxykarbonylskuplna chránící amlnoskuplnu se může odstranit kyselinou trlfluorctovou a p-nitrobenzylskuplna chránící karboxyskuplnu se může odstranit hydrogenolýzou.

V následujících postupech a příkladech se používá těchto zkratek:

DMF = dimethylformamid n.m.r. = spektrum nukleární magnetické rezonance.

V souvislosti se spektry nukleární magnetické rezonance se používá těchto zkratek: s ‘ = singlet d ’ dublet * dd * dublet dubletů t = triplet q = kvartet m = multiplet

CS 270 593 B2

Spektra n.m.r. byla získána na zařízení Generál Electric QE-300 300 MHz. Chemický posun se vyjadřuje v hodnotách £(ppm směrem dolů od tetramethylsiíanu).

Experimentální ; část j r

Příklad V

LY213735 bis(OMF)solvát

A. Acylace

DMF (81,2 ml) se ochladí ná -20 °C a pak se přidá 2-(R)-2-(p-hydroxyfenyl)-2-(((Z)-methyl-but-2-en-2-yloát)amino)acetát sodný (5,70 g, 19,84 mmol) za vzniku bílé suspenze. Suspenze se ochladí na -45 °C. (Hodnota roztoku je přibližně 7,5). K.suspenzi se přidá methansulfonová kyselina (17,1 %, 3,08 mmol, 0,2 ml) a ihned nato dimethylbenzylamin (2 %, 0,054 ml, 0,37 mmol) a msthylchlorformlát (1,42 ml, 18,4 mmol), přičemž mezitím se teplot? 'Suspenze udržuje stále pod -45 °C. Suspenze se míchá dalších 50 minut při teplotě kolísající mezi -50 a -45 °C. Pak se přidá к suspenzi p-nitrobenzyl 7-(R)-7-amino-3-chlor-3-(l-karbadethiacefem)-4-karboxylát (6,33 g, 18,4 mmol, rozpuštěný v DMF (20 ml), přičemž teplota suspenze se udržuje pod -45 °C. Suspenze se další 1,5 hodiny míchá a pak se v průběhu 10 minut zahřeje na 0 °C, přičemž se získá acylovaný produkt.

B. Odštěpování ochranných skupin

К roztoku získanému podle odstavce A (acylace) se přidá voda (6,48 ml), koncentrovaná kyselina chlorovodíková (11,6 ml) á zinkový prach (3,34 g, 51,05 mmol, 2,83 ekviva- $ lentu), přičemž teplota směsi se udržuje v rozmezí od 0 do 10 °C. Pak se reakční směs míchá při teplotě místnosti přibližně po dobu 5 hodin, přičemž se získá roztok Cervenooranžového zabarvení o pH 3,8· Zavede se další koncentrovaná kyselina chlorovodíková (8,9 ml) a reakční směs se míchá po dobu dalších 15 minut přibližně při teplotě 20 °C.

Pak se reakční směs ochladí ha 15 °C a hodnota pH směsi se zvýší z 0,99 na 2,9 přídavkem triethylaminu (přibližně 14 ml)· Smšs ее míchá po dobu 15 minut a pak se přefiltruje přes filtr s filtračním papírem Wh8tman e skleněný filtr, které se dodatečná promyjí DMF (10 ml). Filtrát se umístí do čistá baňky, ochladí se na 15 °C a pH roztoku se upraví přídavkem triethylaminu na 4,6. Roztok se naočkuje krystaly LY213735. Naočkovaný roztok se míchá po dobu 30 minut a pak se jeho pH upraví přídavkem triethylaminu na 5,6. Vznikající směs se míchá po dobu 35 minut a pak se přefiltruje. Oddělená pevná látka se suší za vakua při teplotě místnosti po dobu 3 dnů. Získá se LY213735 bis(DMFsolvát (2,99 g, výtěžek fe . 32,4 %).

Vysušený LY213735 bls(DMF)solvát se suspenduje ve směsi 9 : 1 DMF t voda (30 ml) a pH suspenže ?se upraví přídavkem koncentrovaná kyseliny chlorovodíkové na 1,1. Suspenze se míchá'přibližně 10 minut, dokud nevznikne roztok. Hodnota pH roztoku ae pomalým přidáváním triethylaminu zvýěí na 5,6, přičemž teplota roztoku se udržuje na 5 °C. Poté co dosáhne pH 5,6 se směs ještě 30 minut míchá a pak se přefiltruje. Oddělená pevná látka se suší za vakua při*teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Získá se krystalický LY213735 bla(DMF)solvát, n.m.r. (300 MHz, O2OOCD1 £ 0,1 (в, 7H) (přebytek OMF>| 7,6 (2И, d),

7,1 (2H, d), 6,5 (1H, d), 6,3 (1H, s)_t 4,0 (1H, m), 3,1 (25H(OMF), s), 2,9 (27HCDMF), s), 2,6 (2H, m).

CS 270 593 B2

Příklad 2

LY213735 mono(DMF)solvát

A. Acylace i *

Pod dusíkovou atmosférou se 2-(R)-2-(p-hydroxyfenyl)-2-(((Z)-methyl but-2-en-2-yloát)amino)acetát sodný (40,57 g, 141,2 mmol) suspenduje v DMF (578 ml) předchlazeném na -20 °C. Suspenze se dále ochladí na -45 °C a přidá se methansulfonová kyselina (0,33 ml. 5,14 mmool), dimethylbenzylamin (0,41 ml, 2,69 mmol) a methylchlorformiát (10,62 ml, 137,4 mmol) (pomocí injekční stříkačky). Během přidávání se teplota dimethylformamidového roztoku udržuje v rozmezí od -45 do -50 °C. Výsledná suspenze se dalěích 15 minut míchá při -50 °C. V průběhu 50 minut se přidá N-nitrobenzyl 7-(R)-7-amino-3-chlor-3-(l-karbádethiacefem)-4-karboxylát (126,4 mmol v DMF (190 ml)) a výsledná reakční směs se po dobu 2 hodin míchá při -45 °C. Reakční směs se zahřeje během 20 minut na -10 °C za vzniku roztoku acylovaného · produktu s chráněnou karboxyskupinou. . .

B. Odětěpení ochranné skupiny a krystalizace

К roztoku z odstavce A se přidává voda (48,8 ml), koncentrovaná kyselina chlorovodíková (87,3 ml) a zinkový prach (25,18 g, 385,2 mmol) v průběhu 15 minut, přičemž teplota reakční směsi se udržuje v rozmezí od asi 0 do 10 °Č. Po přidání poslední části koncentrované kyseliny chlorovodíkové (63,3 ml) к roztoku se roztok míchá 4,75 hodiny při teplotě místnosti. Pak se roztok ochladí na 15 °C, jeho pH se upraví přídavkem triethylaminu (přibližně 100 ml) na 2,9 a směs se míchá po dobu dalěích 15 minut. Směs se přefiltruje, aby se oddělil zbytek zinku, filtrát se ochladí na 15 °C a hodnota pH filtrátu se zvýší přídavkem triethylaminu na 4,6. Směs se naočkuje nesolvatovanou formou LY213735 a míchá se po dobu 15 minut. Na vznikající suspenzi se pomalu působí triethyleminem (1 kapka každé 3 sekundy) až do dosažení pH 5,65, Výsledná suspenze se několik minut míchá. Pak se přidá další triethylamin, kterým se zvýší pH suspenze na 5,866. Výsledná hustá suspenze se míchá po dobu 20 minut, během kteréžto doby se pH stabilizuje na 5,833. Suspenze se přefiltruje přes filtrační papír Whatman Páper č. 1 a oddělená pevná látka se suší za vakua při teplotě místnosti přes noc..Získá se vlhká hmota o hmotnosti 46,49 g.

Mokrý koláč se suspenduje ve směsi 9 t 1 DMF : voda .(425 ml) a hodnota pH suspenze se nastaví na 1,1 přídavkem koncentrované kyseliny chlorovodíkové (14 ml), což má za následek vznik roztoku. Když vznikne roztok a jeho pH se stabilizuje, přefiltruje se filtračním papírem Whatman Páper С. 1. Filtrát se ochladí na 5 °C a jeho hodnota pH se přídavkem triethylaminu zvýší na 5,2. Směs se míchá po dobu přibližně 30 minut, která se počítá od okamžiku, kdy se poprvé začala tvořit suspenze. Během těchto 30 minut pH směsi poklesne na 4,4 a pak se vrátí zpět na 5,7 přídavkem triethylaminu (celkem 22 ml). Suspenze se míchá tak dlouho, dokud není pH směsi poměrně stálé, a pak se přefiltruje. Oddělená pevná látka se promyje směsí 9 : 1 DMF : voda (20 ml). Promytá pevná látka se vysuší za vakua při teplotě místnosti v proudu dusíku přes noc. Získá se 1,83 g, 27,9 % krystalického LY213735 mono(DMF)solvátu. n.m.r.: (300 MHz, D2O/DCI) ζ : 7,94 (1H, s, (DMF)), 7,24 (2H, d), 6)94 (2H, d), 5,14 (2H,d), 3,94 (1H, m), 2,97 (3H, s (OMF)), 2,89 (s,(DMF)), 2,50 (2H, m), a 2,61 (1H, m).

Příklad 3

LY213735 monohydrát z bis(DMF)solvátu

Smísí se voda (16,4 ml) a roztok tetrasodnó soli ethylendiamintetraoctové kyseliny

CS 270 593 B2 (EDTA) (0,03 g) v koncentrované kyselině chlorovodíkové (0,8 ml) a pak se přidá LY213735 bis(DMF)solvát (3,0 g). Výsledná suspenze se míchá tak dlouho, dokud nevznikne roztok. Přidá se aktivní uhlí (Darco^\ 0,03 g) a suspenze se dalších 15 minut míchá při 15 °C, (R) načež se přefiltruje ve filtru s podložkou z pomocného filtračního materiálu Hyflo . Filtrační koláč se promyje vodou (3 ml). Filtrát s promývací kapalinou se ochladí na 10 °C. Hodnota pH ochlazeného filtrátu se upraví Jpř^davkem triethylaminu na 3,6, přičemž vznikne hustá bílá suspenze. Suspenze se míchá pa dobu 2 hodin a pak se přefiltruje. Filtrační koláč se promyje chladnou vodou a pak se přes noc za vakua suší při teplotě místnosti. Získá se 1,05 g krystalického LY213735 monohydrátu; Karl Fischer: 3,12 % vody, n.m.r.i (300 MHz, 0₂0(0Cl) 5 s 7,03 (2H, d), 6,6 (2H, d), 5,0 (1H, d), 4,95 (1H, S),

3,6 (1H, m), 2,1 (2H, m), 1,0 (2H, m), 0,94 (1H, t).

Rentgenové záření: difrakční data vztahující se к práškovému ohybovému obrazci jsou uvedena v tabulce 1 shora.

Analýza pro ^C16^H18W^1! vypočteno C 50,07, H 4,73, N 10,95, nalezena C 50,20, H 5,02, N 11,17.

Příklad 4

LY213735 mono(DMF)solvát z odpovídajícího bis(DMF)solvátu

Smísí se mono(N,'N-dimethylformamid)solVát a bis(N,N'~dimethylformamid)solvát (celkem 70,64 g) v minimálním množství DMF (250 ml). Suspenze se ochladí na teplotu od 10 do 15 °C. Hodnota pH ochlazené suspenze se nastaví přídavkem koncentrované kyseliny chlorovodíkové na 1,1. Okyselená suspenze se míchá tak dlouho, dokud nevznikne roztok. Hodnota pH roztoku se pomalu přídavkem triethylaminu zvýší na 5,8, přičemž po celou dobu se roztok velmi pomalu míchá (přibližná 1 otáčka za sekundu). Výsledná suspenze se pomalu míchá po dobu 15 minut, přičemž jejípHse udržuje v rozmezí od 5,7 do 5,8 a pak se přefiltruje. Filtrační koláč se promyje ethylacetátem a za vakua se suší přes noc. Získá se 47,3 g krystalického LY213735 mono(DMF)solvátu. Karl Fischer: 8,72 % vody, n.m.r.: (300 MHz, D₂O(DC1) ζ ·. 7,9 (1/2 H, s(OMF))), 7,4 (2H, d), 6,75 (2H, d), 5,45 (1H, d), 4,6 (1H, a), 3,75 (lH,m), 2,75 (2H, s(0MF)), 2,4 (2H, s(DMF)), 2,55 (2H, m), 1,45 (2H, m).

Rentgenové záření: difrakční data z práškové analýzy této sloučeniny, vztahující se к ohybovému obrazci, jsou shora uvedena v tabulce 2.

Příklad 5

LY213735 monohydrát z odpovídajícího mono(0MF)solvátu

Smísí se deionizovaná voda (300 ml), tetrasodná sůl kyseliny ethylendiaminoetraoctové (EDTA) (0,52 g, 1,2 mmol), a koncentrovaná kyselina chlorovodíková (14,2 ml) a směs se míchá nejprve při teplotě místnosti a pak se ochladí na 15 °C. К roztoku se přidá LY213735 mono(0MF)solvát (47,0 g, 0,107 molu) a po asi 10 minutách míchání přejde vzniklá suspenze na roztok. Přidá se aktivní uhlí (Darco(^R\ 0,5 g) a suspenze se míchá po dobu 10 minut při teplotě v rozmezí od asi 15 do 20 °C. Suspenze se přefiltruje přes 1,25 cm vrstvu filtračního materiálu Hyflo^\ Filtrační koláč se promyje vodou (přibližně 60 ml). Spojený filtrát a promývací kapalina se ochladí na 15 °C a hodnota pH se pomalu zvýěí (0,1 jednotky za 5 minut) na 1,7 přídavkem triethylaminu. Zakalený roztok se míchá po dobu asi 10 minut, přičemž vznikne hustá bílá suspenze. Suspenze se míchá po dobu dalších 45 minut. Hod

CS 270 593 B2 nota pH suspenze se pak pomalu zvýší na 3,5 přídavkem triethylaminu. Hodnota pH suspenze samovolně vzrůstá až na 5,8, kdy se přidá několik kapek kyseliny chlorovodíkové pro ustálení pH na 5,75. Suspenze se míchá 1,5 hodiny při pH 5,75, přičemž teplota suspenze se udržuje v rozmezí od asi 13 do asi 16 °C a pak se přefiltruje. Filtrační koláč se promyje vodou (60 ml) a suší se za vakua při teplotě místnosti přes noc. Získá se 36,06 g bílé pevné látky.

Filtrát z poslední filtrace uvedené v předchozím odstavci se zředí асеtonitrilem (400 ml) a chladí přes noc, přičemž vznikne bílá suspenze. Suspenze se přefiltruje a přes noc suší za vakua. Získá se 2,48 g bílé pevné látky.

Dva podíly bílé pevné látky (z prvního a druhého odstavce uvedeného shora) se spojí ve vodě (200 ml). Výsledná suspenze se míchá přibližně při 10 °C po dobu 1 hodiny a pak se přefiltruje. Filtrační koláč se promyje vodou (přibližně 50 ml) a suší za vakua při teplotě místnosti přes noc. Získá se 28,39 g krystalického LY213735 monohydrátu: analýza podle Karla Fischera: 2,6 4 vody.

n.m.r.: (300 MHz, D₂0/DCl) : 7,20 (2H, d), 6,75 (2H, d), 5,1 (1H, d), 5,0 (1H, s), 3,7 (1H, m), 2,7 (1/3 H, s), 2,35 (2H, m), 1,05 (2H, m).

Příklad 6

Vyrobí se tvrdé želatinové kapsle za použití následujících složek:

množství (mg/kapsli)

LY213735 krystalický monohydrát 200 škrob ve formě sypkého prášku 200 škrob ve formě sypkého prášku s 54 polysiloxanu 50 stearan hořečnaný 2,5

Uvedené složky se smísí a směsí se naplní tvrdé želatinové kapsle v množství 452,5 mg na kapsli.

Příklad 7

Předpis pro výrobu tablet zahrnuje následující složky:

A

	množství (mg/tableta)
LY213735 krystalický monohydrát celulosa, mikrokrystalidká oxid křemičitý sublimovaný kyselina stearová	200 200 10 5

Složky se smísí a směs se slisuje do tablet o hmotnosti 415mg.

CS 270 593 B2

Příklad 0

Čípky, z nichž každý obsahuje 200 mg účinné složky se vyrobí podle následujícího předpisu:

LY213735 krystalický monohydrát í , 200 mg glyceridy nasycených mastných kyselin . 1 2000 mg

Účinná látka se prošije sítem ze standardní US sady sít (velikost ok 0,25 mm) a suspenduje v glyceridech nasycených mastných kyselin, které byly předem roztaveny za použití minimálního množství tepla. Směs se pak vlije do formy na čípky o nominálním obsahu 2 g a nechá se vychladnout.

Příklad Vodná suspenze pro okamžité použití 200 mg/5 ml	9
LY213735 krystalický monohydrát	200 mg
celulóza se sodnou solí karboxyaethylcelulózy	95 mg
sacharóza	1,85 g
parafens	3 mg
silikonová emulze	2,5 mg
pluronic	5 mg
aroma	2 mg
barvivo	0,5 mg
přečištěná voda do	5 ml

Složky se prošijí. Parafens se rozpustí v horké přečištěné vodě a po ochlazení se přidají další složky. Přidá se přečištěná voda do stanoveného objemu. Suspenze se pak může nechat projít koloidním mlýnem nebo homogenizátorem, aby vznikla homogennější disperze.

Příklad 10

Suspenze pro rekonstituci

LY213735 krystalický monohydrát	210 mg
sacharóza·	3 g
xanthanová pryskyřice	5 mg
modifikovaný škrob	10 mg
silikonová emulze	5 mg
natrium laurylsulfát	0,5 mg
methylcelulóza	2 mg
aroma	0,5 mg

barvivo

Složky se prošijí a smísí se ve vhodném mísiči, jako je například dvoupláštová, dvoujádrová míchačka typu Nauta^ nebo mísič s pásovým míchadlem. Před použitím se suspenze rekonstituuje přidáním požadovaného objemu přečištěné vody.

CS 270 593 Й2

Způsob přípravy krystalické morrohy drátové formy 7 β -[2 *-CR)-2 - (p-hydroxyfenyi)-2 *· aminoacetamido]-3-chlor-3-(l-karbadethiacefem)-4-karboxylové kyseliny vzorce I

Claims (2)

1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU vykazující práškový rentgenogram definovaný následujícími hodnotami mezirovinových vzdáleností d a reaktivních intenzit I/I^

   I/Il

   12,99

   10,76

   9,11

   7,43

   6,65

   5,75

   5,24

   5,06

   4,87

   4,74

   4,41

   4,30

   4,13

   3,90

   3,59

   3,37

   3,20
2. 2,94

   2,86

   2,73

   0,17

   1,00

   0,33

   0,14

   0,12

   0,05

   0,04

   0,16

   0,24

   0,23

   0,23

   0,18

   0,12

   0,27

   0,22

   0,53

   0,12

   0,10

   0,06

   0,06 vyznačující se tím, že se pH vodného roztoku obsahujícího sloučeninu vzorce I nastaví na 2 až 7 a vzniklý krystalický monohydrát sloučeniny vzorce I se izoluje.