CS257788B2

CS257788B2 - Method of tonic pharmacopoeical preparation production

Info

Publication number: CS257788B2
Application number: CS853235A
Authority: CS
Inventors: Roland Niedner; Dieter Marme; Erwin Schoepf
Original assignee: Goedecke Ag
Priority date: 1984-05-07
Filing date: 1985-05-05
Publication date: 1988-06-15
Also published as: DK201785D0; NZ211994A; EP0165430B1; EP0165430A1; FI851754A0; CA1258231A; AU570558B2; CS323585A2; AU4204185A; PH21464A; YU74685A; HUT38247A; ES8607734A1; DD232819A5; ES542846A0; GR851098B; FI81260B; YU44497B; HU196902B; NO851793L

Description

Vynález se týká způsobu výroby topiokého farmaceutického přípravku na^: podporu granulace ran a epithelizace, který obsahuje farmakologicky snášenlivý nosič a účinnou látku.

Z vyšetřování buněčných kultur in vitro je známo, že Ca²⁺-ionty mají vliv na dělení buněk. (Proč. Nat. Acad. Sel. 70, str. 675 až 679). Dále je známo, že depolarizace potenciálu membrán lze dosáhnout zvýšením mimobuněčné koncentrace K⁺-iontů. O vlivu těchto efektů na granulaci ran a epitelizaci není však dosud nic známo. Z rozsáhlých výzkumů však vyplynulo, že ani ty koncenrace Ca²⁺-iontů, které byly shledány jako optimální pro růst u buněčných kultur, aini vyšší koncentrace Ca²⁺-iontů, nemají podpůrný nebo brzdicí vliv na hojení ran.

Rovněž přídavek fyziologických množství draslíku v mimobuněčné oblasti nepodporuje hojení ran, i když je současně postaráno o optimální mimobuněčnou koncentraci C a²⁺-iontů.

Nyní bylo překvapivě nalezeno, že Ca²¹·a К^ь-iontу společně ve zcela určitých poměrech koncentrací vykazují neočekávaně dobrý a při ideálních molárních poměrech dokonce velice silný účinek na granulaci a epitelizaci ran a tudíž v kombinaci představují cenný prostředek к podpoře hojení ran.

Poměry koncentrací podle vynálezu lze docílit, když je splněno to, že povrch rány se uvede bezprostředně do styku s elektrolytem obsahujícím vodu, který vztaženo na vodu obsaženou v tomto elektrolytu, obsahuje 20 až 100 mM Ca²⁺-iontů a 25 až 60 mM К -iontů.

Elektrolyt samotný může sestávat z ranného sekretu a/nebo z vodného přípravku, aplikovaného) dodatečně na ránu. ·

V prvém případě se nanášejí na ránu fyziologicky snášenlivé ionizovatelné vápenaté a draselné soli spolu s pevným nosičem v molárním poměru 1 : 3 až 4 : 1 v takovém množství, aby vápenaté a draselné soli vytvořily v ranném sekretu roztoky ve výše uvedeném rozsahu koncentrací. Protože však množství uvolňovaného sekretu kolísá a lze je jen nepřesně odhadnout, není vždy suchými gely, zásypy, iontoměniči, textiliemi, impregnovanými obvazovými materiály, polysacharidy nebo podobnými suchými prostředky zajištěno, že se docílí rozsah koncentrace podle vynálezu a udrží se po delší dobu.

Vhodnější jsou tudíž takové přípravky, které se sice vyrábějí v suché formě a také částečně v této formě přicházejí do obchodu, a které jsou určeny к tomu, aby к nim bylo před použitím přidáno poměrně přesně určené množství vody. Ty jsou přikládány na ránu teprve po přijetí tohoto množství vody a proběhlé disociaci Ca²⁺- a K⁺-solí. Sem patří například suché gely podle zveřejňovacího spisu DE-OS č. 28 49 570.

Lze uvažovat i směsné formy, u kterých jsou suché*nosiče nejprve navlhčeny vodou, která obsahuje Ca²⁺- a KMonty rozpuštěné v požadovaném poměru. К těmto formám patří například iontoměniče, gely vhodné pro gelovou chromatografií (mokelulární síta), nebo jednoduché, pevné, například textilní obklady na rány, které jsou navlhčeny a nakonec sterilně uzavřeny.

Posléze uvedené přípravky představují již samy o sobě typické vodné přípravky. Rozumí se tím přípravky, u nichž jako· nosič funguje především voda, která obsahuje Ca²⁺-ionty, jakož i К⁺-ionty, případně vedle dalších pomocných nebo účinných látek, v koncentraci 20 až 100 mM, případně 25 až 60 mM. Výhodný rozsah je zde 25 až 35 mM Ca²⁺-iontů a 35 až 45 mM K⁺-iontů. Obzvláště výhodný je poměr 30 mM^! Ga²⁺-iontů a 40 mM К⁺-iontů.

Jako vodné přípravky přicházejí v úvahu všechny farmaceutické přípravky, které ma* jí obsah vody dovolující nastavení molárních koncentrací iontů podle vynálezu. Patří sem vedle jednoduchých vodných roztoků, lotionů nebo emulzí olej/voda i viskózní roztoky, dispergované systémy nebo pěny.

Výše uvedené gelovité přípravky, jako například polyakrylamid/agarové gely jsou obzvláště dobře snášeny na ranách, a proto se jim dává přednost.

Pro výše uvedené přípravky je výhodný způsob výroby, vyznačující se tím, že se к vodnému farmaceutickému nosiči jako účinná látka o sobě známým způsobem přidávají, případně vedle jiných pomocných a/nebo účinných látek, vztaženo na obsaženou vodu, až do koncentrace 20 až 100 (mMol) Ca²⁺-ionty a do koncentrace 25 až 60 (mMol) К⁺-ionty, tvořící farmakologioky přijatelné soli a tyto ionty se rovnoměrně rozdělí ve vodné fázi.

Jako farmakologicky přijatelné soli přb cházejí v. úvahu především chloridy a fosfáty, lze však použít i· jiných anorganických nebo organických solí, jako například' citrá> tů, malenátů, sukcinátů nebo podobných solí, pokud jsou snášeny tkáněmi, a. jsou.diso^ ciovatelné.

V případě vodných přípravků je vhodné nastavit vědnou fázi isotonioky. ΤοΊζβ'ρτο* vést,,aby se:vyloučily,cizí ionty, pomocí glur kozy. Efekty kationtových. elektrolytů, které jsou přidávány vedle Ca²+- arKMontů; ne* jsou ještě prozkoumány. V mnoha případech je také dobré přidávat к vodné fázi tenzidy, které zvyšují kožní permeabilitu; pro. elekt trolyty. Protože účinnost, výše uvedených přípravků, spočívá výhradně, na chráněném iontovém poměru Ca²⁺- a.K⁺-iontů:v mimo* buněčném prostoru, jsou, pochopitelně plně účinné i takové přípravky, které obsahují uvedené ionty jako jedinou účinnou látku: V mnoha případech je však žádoucí , přidání dalších účinných látek, jako například antibiotik, fungistatik a povrchových anestetik.

v

Při výzkumu mechanismu popsaných přípravku bylo dále nalezeno, že se pozitivní vliv na podporu granulace ran a epithelisaci vyskytuje nejenom v přítomnosti Ca²⁺K* -iontů, nýbrž vždy tehdy, když se zvýší prostupnost plasmatických membrán pro vápník a ionty Ca²*- mohou tedy proudit do buňky. Toho· lze dosáhnout nejenom tak, jak je to popsáno vpředu tím, že se ve farmakologicky přijatelném nosiči, případně vedle jiných účinných a/nebo pomocných látek, rovnoměrně rozptýlí 0,2 až 10 hmotnostních procent směsi účinných látek, sestávající z farmakologicky přijatelných toniZiO-vatebných solí Ca²* a K* v molárním poměru Ca²* : K⁺ od 1 : 3 až 4 : 1 a tím se použijí К*-ionty к otevření takzvaných vápníkových kanálů v plasmatické membráně, nýbrž také tím, že se místo popsané směsi účinných látek ve farmakologicky přijatelném nosiči jemně rozptýlí buď Ca²*-iontofor v koncentraci 3X10~⁸ až 3X10⁶ M v kombinaci se solemi vápníku v koncentraci 0,1—50 mM, nebo vápníkovým agonistou v koncentraci 10 ⁵ až 10 ~⁹ M v přítomnosti K⁺-iOf.ntů v koncentraci 5X10 ³ až 2X10² M a Ca** v koncentraci 10'³M až 3X10~² M a získaného přípravku se používá jako prostředek к hojení ran.

Ga²*-iontofory jsou sloučeniny, které selektivně permeabilizují plasmatickou membránu pro vápník.

Takovým iontoíorem je například antibiotikum, známé nejprve pod označením A 23 187, tj. 6S[6alfa(2S*, 3S^X), 8beita(R*J, 9beta, Haifa ] -5-methyl-amino-2- [ 3,9,11-trimethyl-8-/l-imethyl-2-oxo-2- (lH-pyrrol-2-yl) -ethyl ] -1,7-dioxaispiro (5,5/undec-2-yl )methyl]-4-be.uz'Oxazolkarboxylová kyselina (Hoechst Doc. č. 8154—1082).

V kombinaci s vápníkem působí A 23 187 podle vynálezu v koncentraci 3X10~⁸ až 3X10^tí M, přičemž vápenaté soli v mimobuněčném prostor mohou být к dispozici v koncentraci pouze 0,1 až 50 mM, aby byl zajištěn dostatečný přísun Ca²*-iontů do bu’пёк.

Protože se tím principiálně jedná o zasobo-vání buněk vápníkem skrze plasmatickou membránu, může být dosaženo efektu rychlejšího hojení ran podle vynálezu všemi dalšími Ca-iontofory.

Podobně platí i Ca-agonisté, protože rovněž zvyšují permeabilitu plasmatické membrány pro vápník. Jimi jsou otevírány v přítomnosti draslíku vápníkové kanály. Při použití Ca-agonistů podle vynálezu je zapotřebí použít jenom velmi málo draslíku, takže zejména u ran s velkou plochou hospodaření s draslíkem není rušeno. To představuje zlepšení proti použití čistých Ca¹ *- a K*-iontů, jak je to popsáno· vpředu.

Nejúčinnější rozsah koncentrace Ca-agonistů je 10~⁵ až 10’⁹ M. Potřebná koncentrace draslíku je v rozsahu od 5X10^-3 až

2X10'² M. Koncentrace vápníku by se měla pohybovat mezi ΙΟ”³ M až 3X10~² M.

Takovým kalotovým agonistou je například látka Вау К 8644, o níž je známo, že ‘Stimuluje přísun vápníku do buňky [srovnej například Arzneimittelforschung Drg. Res. 33 (113), č. 9 (1933), jakož i Biochem. and Biophys. Research Communic. (1984) 118, č. 3, str. 842 až 847].

Je rovněž mimořádně překvapující, že uvnitr buňky je vápník podstatným faktorem granulace ran. Koncentrace vápníku v mimobuněčném prostoru bez prostředků podle vynálezu zvyšujících permeabilitu nemá vliv na hojení rány. Ani odebrání vápníku přidáním chelátotvorného činidla pro vápník, jako je ethylenglyk-ol-bis (β-aminoetliyl) -N^XX-tetraoctová kyselina (EGTA), ani zvýšení koncentrace vápníkových iontů o dvacetinásobek fyziologické koncentrace v mlmobuněčném prostoru, nevede ke změně granulace ran. Z toho by mohl odborník jenom usuzovat, že vápníkové ionty se neúčastní nikterak významně při granulaci ran.

Předmětem předloženého vynálezu je tudíž způsob výroby toipického farmaceutického přípravku na podporu granulace ran a epithelizace, obsahujícího farmakologicky snášenlivý nosič a účinnou látku, který spočívá v tom, že se používá účinné látky zvyšující permeabilitu plasmatické membrány pro vápník a sestávající bud ze

a) vztaženo na nosič, 0,2 až 10 % hmotnostních ionizovatelné směsi farmakologicky snášenlivých solí Ca.²* a K* v molárním poměru Ca²* : К* 1 : 3 až 4 : 1, nebo

b) z Ca²* iontóforu v koncentraci 3X10~⁸až 3X10’⁶ M v kombinaci se solemi vápníku v koncentraci 0,1 až 50 mM, nebo

c) z agonisty vápníku v koncentraci 10~⁵až 10⁹ za přítomnosti iontů K* v koncentraci 5X10³ až 2X10’² M a Ca²* v koncentraci 10~³ M až 3X10² M, a nosič sestává v podštatě z vody a přidává se popřípadě vedle jiných pomocných nebo/a účinných látek, vztaženo na obsaženou vodu až do koncentrace 20 až '100 mM iontů Ca²* a 25 až 60 mM iontů К* a tyto ionty se rovnoměrně rozptýlí ve vodném farmaceutickém základu.

Při výhodném provedení postupu podle vynálezu setává nosič z hydratovaného gelu obsahujícího methylhydroxycelulosu.

Předmět vynálezu blíže vysvětlují následující výkresy:

Obr. 1 znázorňuje závislost tvorby granulač.ní tkáně na koncentraci mimobuněčnéli-c· vápníku. Na tomto obr. je na ose pořadnic uváděno množství vytvořené grainulační tkáně v mg na ránu. Na ose úseček jsou naneseny koncentrace Ca²* (moláriní koncentrace) Tišící se o faktor 10.

2$7788

Obr. 2 znázorňuje závislost tvorby granulační tkáně na koncentraci látpk- zvyšujících permeabilitu pro vápník. Na tomto obr. je na ose pořadnic uváděno množství vytvořené granulační tkáně v mg na ránu. Na ose úseček jsou uváděny molární koncentrace látky A 23 187 a to vždy alternativně s (3 mM) EGTA nebo¹ (1 mM) Ca²⁴, popřípadě bez tohoto přídavku (číslo 5).

Z obr. 1 vyplývá, že tvorba granulační tkáně je v podstatě nezávislá na koncentraci mimobuněčného vápníku.

Z obr. 2 vyplývá, že účinná látka zvyšující permeabilitu, tj. A 23 187, v přítomnosti vápníkových iontů v mimobuněčném prostoru zřetelně zvyšuje granulaci ran v koncentraci mezi 10 '⁷ až 3X10^-6 M, obzvláště v koncentraci 3X10^-6 M proti srovnávacímu vzorku 5. Sníží-li se koncentrace Ca²⁺ v buňce komplexací s EGTA v mimobuněčném prostoru a použije-li se jako prostředek zvyšující permeabilitu A 23 187, granulace zřetelně ubívá. Tento pokus dokazuje, že tvorba granulační tkáně, předpoklad hojení rány, je významně závislá na obsahu Ca²⁺ v buňkách a že granulaci lze významně zvyšovat, když se pomocí prostředků podle vynálezu, zvyšujících permeabilitu, zvýší obsah Ca²¹ v buňkách. Pokusy tvořící podklad pro obr. 1 a 2 byly prováděny takto:

Kůže na hřbetech morčat byla proříznuta až na fascii. Do rány byl zašit teflonový kroužek průměru 21 mm. Tím bylo zabráněno epiteliálnímu uzávěru rány. Na fascii hřbetního svalstva, které bylo v době operace prosté granulační tkáně, byl nanášen po dobu tří dnů polyakrylamidový/agarový gel, obsahující účinné látky v udané koncentraci. Po- uplynutí doby tří dnů, když bylo dosaženo optima granulace, byla pomocí ostré lžičky odebrána veškerá granulační tkáň, zvážena a histologicky zpracována. Při způsobu a), prováděném s koncentrací 30 mM Ca²⁺-iontů a 40 mM K+-iontů, přičemž ke gelu z důvodů isotonie bylo přidáno 0,9 hmot, procent NaCl, došlo к významnému vzestupu množství granulační tkáně až asi o 180 %. Histologické kontroly prokázaly pravé zmnožení buněk, nejenom snad pouhé zvětšení objemu buněk.

Následující příklady provedení slouží к dalšímu objasnění vynálezu.

Příklad 1

Isotonický roztok

Do 100 ml odběrné baňky se předloží 80 ml čištěné vody. Za míchání pomocí magnetického míchadla se přidá 20 mg benzalkoniumchloridu a rozpustí se. Potom se postupně přidá 0,3 g chloridu draselného, 0,44 g chloridu vápenatého (obě soli vyhovující Ph. Eur. I.) a 2,62 g monohydrátu glukózy (Ph. Eur. II). Baňka je vytemperována na vodní lázni na teplotun 20 °C a potom se doplní po značku rovněž 20 °C tep lou čištěnou vodou. Roztok se potom sterilně filtruje přes membránový filtr poréznosti 0,2 μκη a sterilně plní.

(0,29822 g KC1 40 mMol K ⁺ , 0,44106 g CaClz 30 mMol Ca²⁺).

Příklad 2

Emulze olej ve vodě

V prvém podílu se zahřátním na 70 °C ve vodní lázni homogenně roztaví 7 g směsi, sestávající z nasycených mastných kyselin, mastných alkoholů, lanolinu, minerálních olejů a neionogenních emulgátorů spolu s 2,5 g esteru mastné kyseliny, s polyethylenglykolem a glycerinem, 3 g monoglyceridů kyseliny stearové a palmitové, 0,3 g cetylalkoholu a 3,0 g isopropylpalmitátu.

Ve druhém podílu se smíchá za míchání 80 g čištěné vody se 3 g propylenglykolu a zahřeje se na teplotu 70 °C. К takto získané směsi se potom přidá 0,3 g chloridu draselného, 0,44 g chloridu vápenatého- a 0,2 g konzervačního prostředku. Získaný čirý roztok se za míchání při teplotě 70 °C v emulguje do prvého podílu. Takto získaná emulze se ochladí na teplotu 40 °C a ztráta vody způsobená odpařením se nahradí. Emulze ochlazená na teplotu 30 °C se potom plní.

Příklad 3

Transparentní kapalný obvazový materiál (gelová miska)

Násada A:

3,5 g akrylamidu a 0,091 g bisakrylamidu se rozpustí ve 100 čištěné vody. Roztok se potom temperuje na teplotu 60 °C.

Násada B:

0,3 g chloridu draselného a 0,44 g chloridu vápenatého se rozpustí ve 100 ml čištěné vody a přidá se 0,2 g konzervačního činidla. Po přidání 2 g agaru (OAB9) se roztok za míchání magnetickým míchadleim zahřeje к varu a potom se ochladí na teplotu 60 °C.

Potom se smíchají násady А а В při teplotě 60 °C za míchání. Potom se přidá 0,045 gramu peroxodvojsiřičitanu amonného a 0,045 g (60 ^1) tetramethylendiaminu. Po krátkém intenzívním míchání následuje nalití na Petriho misky, které byly předem v sušárně -ohřátý na teplotu 60 °C. Naplněné Petriho misky se potom uloží po dobu 30 minut při teplotě 56 °C v sušárně. Potom se nechá ochladit na teplotu místnosti a misky se získanými transparentními ztuhlými deskami se na 24 hodin uloží do termostatu při teplotě 4 °C к vyzrání. Takto získané gelo-vé misky lze použít okamžitě к pokrytí ran.

Příklad 4

Roztírací gel g čištěné vody se ohřeje na teplotu 70 °C a přidá se 0,3 g chloridu draselného a 0,44 g chloridu vápenatého. Po přidání 0,2 g konzervačního činidla se disperguje do připraveného roztoku 5 g methylhydroxyethylcelulózy. Potom se za míchání ochladí. Po ochlazení se získá vysoce viskózní vzduchovými bublinami prostoupený gel o viskozitě 90 Pa. s, kterého lze použít okamžitě к ošetření ran.

Příklad 5

Textilní kryt na rány

Sterilní ústřižky mulu velikosti 4X4 cm a tloušťky 5 mm se ponoří do· sterilního isotonického roztoku podle příkladu 1 a potom se vymačkají jenom do té míry, že z ústřižku již пекаре. Takto získané ústřižky se potom zataví za sterilních podmínek do polyethylenové fólie.

Příklad 6

Roztírací gel s látkou A 23 187

000 g čištěné vody se ohřeje na teplotu 70 °C a přidá se 1,6 mg látky A 23 187 a 560 mg chloridu vápenatého. Po přidání 2 g konzervačního činidla se disperguje do získaného· roztoku 50 g methylhydroxyethylcelulózy. Potom se za míchání ochladí. Po ochlazení se získá vysoce viskózní vzduchovými bublinami prostoupený gel o viskozitě 90 Pa . s, kterého lze okamžitě použít к ošetření ran.

Příklad 7

Roztíratelný gel s látkou Вау К 8644

000 g čištěné vody se zahřeje na teplotu 70 °C a přidá se 1,49 g chloridu draselného, 3,3 g chloridu vápenatého a 3,56 mg látky Вау К 8644. Po přidání 2 g konzervačního činidla se disperguje do získaného roztoku 50 mg methylhydroxyethylcelulosy a zpracuje se jako v příkladu 1.

Claims

PŘEDMĚT VYNÁLEZU

1. Způsob výroby topického farmaceutického přípravku na podporu granulace ran a epithelizace, obsahujícího farmakologicky snášenlivý nosič a účinnou látku, vyznačující se tím, že se používá účinné látky zvyšující permeabilitu plasmatické membrány pro vápník a sestávající buď ze

a) vztaženo na nosič, 0,2 až 10 % hmotnostních ionizované směsi farmakologieky snášenlivých solí Ca^2h a K⁺ v molárním poměru Ca²⁺ : K⁺ 1 : 3 až 4 : 1, nebo

b) z Ca²+ iontoforu v koncentraci 3X10^-8až 3X10^-6 M v kombinaci se solemi vápníku v koncentraci 0.1 až 50 mM, nebo

c) z agonisty vápníku v koncentraci 10 ⁵až 10”⁹ za přítomnosti iontů K⁴ v koncentraci 5X10^-3 až 2X10“² M a Ca²⁴ v koncentraci ΙΟ^-3 M až 3 x 10'² M, a nosič sestává v podstatě z vody a přidává se popřípadě vedle jiných pomocných látek nebo/a účinných látek, vtzaženo na obsaženou vodu až do koncentrace 20 až 100 mM iontů Ca²⁺ a 25 až 60 mM iontů K⁺ a tyto ionty se rovnoměrně rozptýlí ve vodném farmaceutickém základu.
2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se používá účinné látky zvyšující permeabilitu plastické membrány pro vápník a sestávající buď ze

a) vztaženo na nosič, 0,2 až 10 % hmotnostních ionizované směsi farmakologic- ky snášenlivých solí Ca^{2 h} a K⁺ v molárním poměru Ca²⁺ : K⁺ 1 : 3 až 4 : 1, nebo

b) z Ca²⁺ iontoforu v koncentraci 3X10“⁸až 3X10⁶ M v kombinaci se solemi vápníku v koncentraci 0,1 až 50 mM, nebo

c) z agonisty vápníku v koncentraci 10 “⁵až 10⁹ za přítomnosti iontů K⁺ v koncentraci 5X10-3 až 2X10-2 M a Ca²⁺ v kincentraci 10 ³ м až 3X10“² M, a nosič sestává z hydratovaného gelu obsahujícího methylhydroxyethylcelulosu a přidává se popřípadě vedle jiných pomocných látek nebo/a účinných látek, vztaženo na obsaženou vodu až do koncentrace 20 až 100 mM iontů Ca²⁴ a 25 až 60 mM iontů К ¹ a tyto ionty se rovnoměrně rozptýlí ve vodném farmaceutickém základu.
3. Způsob podle bodu 1, vyznačující se Lim, že se používá účinné látky zvyšující permeabilitu plasmatické membrány pro vápník a sestávající, vztaženo na nosič, z 0,2 až 10 °/o hmotnostních ionizovatelné směsi farmiakologicky snášenlivých solí Ca²+ a K⁴* v molárním poměru Ca²⁺ : K⁺ 1 : 3 až 4:1a nosič sestává v podstatě z vody a přidává se popřípadě vedle jiných pomocných látek nebo/a účinných látek, vztaženo na obsaženou vodu až do koncentrace 20 až 100 mM iontů Ca²⁺ a 25 až 60 mM iontů K ⁺a tyto ionty se rovnoměrně rozptýlí ve vodnéžm farmaceutickém základu.
4. Způsob podle bodu 3, vyznačující se tím, že se používá účinné látky zvyšující

II permeabilitu plasmatické membrány pro vápník a sestávající, vztaženo na nosič, z 0,2 až 10 % hmotnostních ionizovatelné směsi farmakologicky snášenlivých solí Ca²⁺ a K⁺ v molárním poměru Ca²⁺ : K⁺ 1 : 3 až 4:1a nosič sestává z hydratovaného gelu obsahujícího methylhydroxyethylcelulosu a přidává se popřípadě vedle jiných pomocných látek nebo/a účinných látek, vztaženo na obsaženou vodu až do koncentrace 20 až 100 mM iontů Ca²⁺ a 25 až 60 mM iontů K⁺ a tyto ionty se rovnoměrně rozptýlí ve vodném farmaceutickém základu.
5. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se používá účinné látky zvyšující permeabilitu plasmatické membrány pro vápník a sestávající buď z Ca²⁺ iontoforu v koncentraci 3X10⁸ až 3X10⁶ M v kombinaci se solemi vápníku v koncentraci 0,1 až 50 mM, nebo z agonisty v koncentraci 10⁵ až 10⁹ za přítomnosti iontů K⁺ v koncentraci 5X10³ až 2X10² M a Ca²⁺ v koncentraci 10³ M až 3X10² M, a nosič sestává v podstatě z vody a přidává se popří padě vedle jiných pomocných látek nebo/a účinných látek, vztaženo na obsaženou vodu až do koncentrace 20 až 100 mM iontů Ca²⁺a 25 až 60 mM iontů K+ a tyto ionty se rovnoměrně rozptýlí ve vodném farmaceutickém základu.
6. Způsob podle bodu 5, vyznačující se tím, že se používá účinné látky zvyšující permeabilitu plasmatické membrány pro vápník a sestávající buď z Ca²⁺ iontoforu v koncentraci 3X10⁸ až 3X10~⁶ M v kombinaci se solemi vápníku v koncentraci 0,1 až 50 mM, nebo z agonisty vápníku v koncentraci 10⁵ až 10⁹ za přítomnosti iontů K⁺ v koncentraci 5X10’³ až 2X10² M a Ca²⁺ v koncentraci 10³ M až 3X10² M, a nosič sestává z hydratovaného gelu obsahujícího methylhydroxyethylcelulosu a přidává se popřípadě vedle jiných pomocných látek nebo/a účinných látek, vztaženo na obsaženou vodu až do koncentrace 20 až 100 mM iontů Ca²⁺ a 25 až 60 mM iontů K+ a tyto ionty se rovnoměrně rozptýlí ve vodném farmaceutickém základu.