CS256856B1 - Způsob výroby anorganických nosičů pro immobilizaci enzymů - Google Patents

Abstract

Způsob výroby anorganických nosičů pro imobilizaci enzymů reakcí glutaraldehydu s povrchově vázanou aminoskupinou, přičemž jako reagující aminoskupina se použije 3-aminopropyl skupina chemicky vázaná na porézní nebo neporézní keramický nosič, který byl vystaven předchozímu působení kyseliny.chlorovodíkové, bromovodíkové, případně fluorovodíkové. Tyto nosiče jsou vhodné pro imobilizaci enzymů a jiných biologicky aktivních látek.

Description

Vynález se týká způsobu výroby anorganických nosičů pro imobilizací enzymů.

Pro řadu enzymatických reakcí je účelné enzym imobilizovat vazbou na nosič. Kromě častěji používaných organických nosičů se v poslední době uplatňují i anorganické nosiče funkcionalizované vhodnými skupinami (např. R. A. Messing: Immobilized enzymes for industrial reactors, Academie Press, New York 1975; M. Lynn: Biomateriaí supports, Chim. Ind., Gen. Chim. 106.601 (1973); Η. H. Weetel: Methods in Enzymology 44, 135 (1976)). Většina anorganických nosičů však- byla velmi drahá, nebot užívala speciálních porézních skel, nebo upravených modifikací oxidu křemičitého. Látka podle vynálezu však tuto nevýhodu nemají, nebot vycházejí ze stabilních a snadno dostupných porézních i neporézních keramických materiálů.

Podstatou vynálezu je způsob výroby anorganických nosičů pro imobilizací enzymů vzniklé reakcí aminoskupiny s glutaraldehydem, přičemž se jako reagující amino skupina použije 3-aminopropyl skupina vázaná na porézní nebo neporézní keramický nosič, který byl vystaven předchozím působením kyseliny chlorovodíkové, bromovodikové, případně fluorovodíkové.

Výchozí reaktanty pro takto připravované nosiče jsou snadno přístupné, nebot glutaraldehyd je běžný komerční produkt, obvykle dodávaný jako 25% vodný roztok a keramické materiály funkcionalizované chemicky vázanou 3-aminopropyl skupinou lze snadno připravit reakcí keramického nosiče s alkoxysilylsubstituovaným propylaminem.

Ačkoliv lze použít i jiných teplot, je výhodné provádět vlastní reakci glutaraldehydu s aminoskupinou při teplotách 15 až 35 °C, rovněž je výhodné použití tlumivého vodného roztoku o pH 5 až 8,0. Vzájemný poměr glutaraldehydu a aminoskupin se sice řídi stechiometrií reakce, v zájmu jejího urychlení a dosažení vysokých konverzí je výhodné použít několikanásobného přebytku glutaraldehydu. Za tohoto uspořádání se obvyklá reakční doba pohybuje od několika hodin do několika desítek hodin.

Po skončené reakci se upravený nosič oddělí od roztoku nezreagovaného glutaraldehydu, k čemuž lze výhodně použít filtrace nebo dekantace a promyje vodou nebo tlumivým roztokem.

I když je nosič možné sušit, obvykle to není ani nutné, ani účelné a vlhký nosič lze přímo použít k emobilizaci enzymů.

Dále uvedené příklady charakterizují anorganické nosiče podle vynálezu, aniž by jej vymezovaly nebo omezovaly.

Přiklad l g porézní póroviny (Lachema Brno), která byla ošetřena nejprve kyselinou chlorovodíkovou podle čs. autorského osvědčeni 254 289 a poté 3-aminopropyltrimetoxysilanem tak, že obsahovala 1,1 umol.m chemicky vázaných aminopropyl skupin bylo suspendováno do 200 ml tlumivého roztoku pH 7,0 a ke směsi se přidá 50 ml 25% roztoku glutaraldehydu a směs se za promíchávání ponechá reagovat po 6 h. Poté se ošetřený nosič oddělí a promyje 2x200 ml tlumivého roztoku o pH 6,0. V takto připraveném nosiči byla postupem popsaným v J. Biol. Chem.

_2

195, 19 (1952) nalezena koncentrace aldehydických skupin 0,5 umol.m . Bylo získáno 9,9 g upraveného nosiče.

Příklad 2

Příklad 1 byl zopakován s tím rozdílem, že místo póroviny byly použity keramické korálky předem ošetřené směsí kyseliny bromovodikové a fluorovodíkové podle čs. autorského osvědčení č. 254 289 a jejich povrchová koncentrace aminopropyl skupin po reakci s (3-aminopropyl)—2 metyldimetoxysilanem byla 1,2 umol.m . bylo získáno 10 g nosiče o povrchové koncentraci aldehydických skupin 0,6 umol.m

PŘEDMĚT VYNÁLEZU

Claims (1)

1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU

   Způsob výroby anorganických nosičů pro imobilizaci enzymů reakcí glutaraldehydu s povrchově vázanou amino skupinou, vyznačený tím, že jako reagující aminoskupina se použije 3-aminopropyl skupina chemicky vázaná na porézní nebo neporézní keramický nosič, který byl vystaven předchozímu působení kyseliny chlorovodíkové, bromovodíkové, případně fluorovodíkové.