SU810720A1

SU810720A1 - Способ получени иммобилизованныхпРОТЕОлиТичЕСКиХ фЕРМЕНТНыХ пРЕ-пАРАТОВ

Info

Publication number: SU810720A1
Application number: SU782649427A
Authority: SU
Inventors: Игорь Федорович Мишунин; Ирина Николаевна Баширова; Вячеслав Брониславович Вишневский; Наталия Ивановна Семенюк
Original assignee: Ордена Трудового Красного Знамениинститут Биохимии Им.A.B.Палладина
Priority date: 1978-07-26
Filing date: 1978-07-26
Publication date: 1981-03-07

Description

легко осуществим в иромыииюнных услоliliHX .

Промывные воды, полученные в результате промывки препарата буфером, могут быть объединены, упарены в вакууме до исходного содержани фермента и повторпо использованы в процессе.

Пример 1. 100 мг порошка фторамфнболового асбеста суспендируют в 25 мл 0,01 М фосфатного буфера с рН 5,5 и при бавл ют 20 мг трипсина марки «Spofa. Смесь выдерживают при 5°С 18 ч при перемешивании , после чего центрифугируют цри 2000 об/мнп в течение 20 мин.

Осадок промывают трижды тем же фосфатным буфером. Промывные воды объедин ют, упаривают в вакууме до исходного содержани трипсина и внос т новую порцию носител дл св зывани остатка фермента из промывных вод.

Контроль за содержанием фермента в промывных водах подтверждает, что после третьей промывки в надосадочной жидкости протео.тнтпчеека активност1 не обнаруживаетс , т. е. фермент закреилен на носителе .

Полученный осадок иммобилизованного фермента выеушнвают при комнатной температуре в потоке воздуха. Из осадка отбирают 5 мг высушенного препарата, суспендируют в 1 мл того же фосфатного буфера н определ ют протеолитическую активность по Кунитпу.

Дл определени белка по Хартри 2 мг препарата суспендируют в 1 мл фосфатного буфера и анализ провод т по обш,еприп той методике.

Анализы подтве|)ждают, что нротеолитическа активность иммобилизоваппо1о ферментного препарата в пересчете па 1 мг белка составл ет 63-65% от активности исходного трипсина. Активность ио Куиитиу на 1 м|- белка иммобилизованною трипсина составл ет 1,0-1,2 единиц.

Пример 2. 100 мг порошка фторамфиболового асбеста суспендируют в 25 мл 0,0001М фосфатного буфера с рН 5,5, прибавл ют 40 мг ферментного препарата протеназы-1, выпускаемого опытным производством ИОХ АП УССР, нредставл юшего собой комплекс протеолитических ферментов . Дальнейшую обработку, провод т, как в примере 1.

Протеолитическа активность иммобилизованного препарата протеназы-1 составл ет 20-30% от исходной. Активность по Куннтцу на 1 мг белка им.мобилизоьаиной протеназы составл ет 0,4-0,5 единиц.

Полученные предлагаемы.м способом иммобилизованные ферментные препараты способны многократно гидролизовать казеин (13-16 раз). При этом сохран етс до 60-70% исходной активности.

Ф о |5 м у л а изобретен и

Способ получени иммобилизованных протеолитических ферментных иренаратои, включающий св зывание фермента с носителем при перемешивании, промывку полученного препа)ата и его высушиваннс, о т л и ч а ю щ и и с тем, что, с целью упрощени ироцесса, в качестве носител исцользуют фторамфиболовый асбест в виде суспензии в lO -10-М буферном растворе , а св зывание провод т ири соотношении фермент : носитель 1 ; 2,5--5,0 при 4-10°С в течение 18-20 ч.

Источники информации, ирни тые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР ,NO 425936, кл. С 07 G 7/02, 1972 (прототип ) .

Claims

Формула изобретен и я

Способ получения иммобилизованных протеолитических ферментных препаратов, включающий связывание фермента с носителем при перемешивании, промывку полученного препарата и его высушивание, 30 отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, в качестве носителя используют фторамфиболовый асбест в виде суспензии в 10 ’²—10^_4М буферном растворе, а связывание проводят при соотно35 шении фермент : носитель 1 : 2,5---5,0 при 4—10°С в течение 18—20 ч.