CS225117B2 - The purification of insulin - Google Patents
The purification of insulin Download PDFInfo
- Publication number
- CS225117B2 CS225117B2 CS695548A CS554869A CS225117B2 CS 225117 B2 CS225117 B2 CS 225117B2 CS 695548 A CS695548 A CS 695548A CS 554869 A CS554869 A CS 554869A CS 225117 B2 CS225117 B2 CS 225117B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- insulin
- antibodies
- column
- collecting
- substance
- Prior art date
Links
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 244
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 title claims abstract description 120
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 title claims abstract description 120
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 title claims abstract description 120
- 238000000746 purification Methods 0.000 title description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 16
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 10
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 6
- 101001011741 Bos taurus Insulin Proteins 0.000 claims description 4
- IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N bovine insulin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 4
- 230000002608 insulinlike Effects 0.000 claims description 4
- 108010005991 Pork Regular Insulin Proteins 0.000 claims description 3
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 10
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 abstract description 4
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 abstract description 3
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 abstract 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 abstract 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 abstract 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- -1 acetic acid Chemical class 0.000 description 3
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- 101000993800 Sus scrofa Insulin Proteins 0.000 description 2
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 2
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 1
- 206010021001 Hypoglycaemic conditions Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012801 analytical assay Methods 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 150000001993 dienes Chemical class 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000005868 electrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000009938 salting Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Jestliže se ze surového nebo komerčního vepřového nebo hovězího inzulínu odstraní pankreatické bílkoviny o molekulové hmotnosti vyšší než 6 000 a inzulínu podobné látky o přibližně stejné molekulové hmotnosti, jakou má inzulín, vyvolává takto získaný výsledný inzulín podstatně sníženou nebo vůbec nevyvolává tvorbu protilátek proti insulinu po jeho injekčním podání. Uvedené bílkoviny se odstraňují gelovou filtrací, přičemž se jímá frakce eluátu odpovídající střední hlavní části inzulínového maxima. Sloupcovou chromatografií na iontoměniči se odstraňují inzulínu podobné látky o přibližně stejné molekulové hmotnosti, jakou má inzillín, 2a jímání té frakce eluátu, která odpovídá střední hlavní Části inzulínového maxima. Inzulín se pak izoluje. Výhodně se provádí nejprve gelová filtnace a poté sloupcová chromatografie na iontoměniči.
Vynález se týká způsobu jiátání inzulínu za účelem .vyloučení nebo snížení tvorby inzulínových protilátek po jeho injikování.
Původně panoval názor, že vhodně překrystalovaoý inzulín ve formě ostrohraoných rhomboedrů spojených rovnými krystalovými plochami představuje čistou bílkovinu, inzulín, jehož konfigurace byla staAovena Sangerem a sppO., viz například Biochemical Journal 60 (1955), 556. Později však bylo shledáno, že tomu tak není. Vědecké analytické zkoumání UtázaXo, že krystalický inzulín obsahuje bílkoviny palnireatlckého původu s molekulovou hmoonnotí vyěší než u čistého inzulínu (asi 6 000) a mimoto inzulínu příbuzné lát^ky asi téže motekulové hmoonnosi jako u čistého inzulínu.
Tak bylo dokázáno, že krystalický inzulín rozpuštěný v . 1 M kyselině octové lze frakciooovat ve složky (a), (b) a popřípadě (c) gelovou filtrací ne koloně Sephadexu 0-50, což je dextran zesítěoý epichlorhydrOneo s limitem penetrace asi 10 000 (iiniiiání molekulová hmotnost vylučované látky), který je ve formě zrn (o průměru. 20 až 80 mikronů ů.
Tyto tři složky lze . izolovat z jejich roztoků obvyklými způsoby, například vysolením, vysrážením zinečnatou soží při neutrální reakci, lyoOilizecí atd. Jak složka (a) tak i složka . (b) obsahují bílkoviny pankreatického původu s molekulovou hmoonnosi nad 6 000.
ΜιοΟ^νί složky (a) může činit 2 až 5 % hmot, krystatováného inzulínu a méně než 1 % hmot, překrystatověrného inzulínu. Mioossví složky (b) může být v obou případech 4 až 8 % hmot.
Složka (c) obsahuje hlavní frakci, která je pokládána za čistý inzulín a některé veddejší frakce látek příbuzných inzulínu, například ěe.8amiděOnoutíny a inzulínu příbuznou látku obsshhujcí více argininu než je oožssví přítomné v ootekule inzulínu a nazývá se tudíž argininový inzulín.
Frakce iooožěetmiděinoutíou ve složce (c) je variabilní a závisí oa původu inzulínu. Je to obvykle 3 až 10 % hmot, složky (x). Argioinový inzulín může představovat 2 až 3 % hmot, složky (c).
Ačkotiv bylo shledáno, že krystalický inzulín obsahoval různé uvedené nečistoty, nebyla zkoušena výroba inzulínu izolovaného z pajOkeatických Žláz, které by byl prostý všech ne- > čistot nebo taoěř všech nečistot; nález. oečtatot, jejich vědecká ^akMonaice a taenti^kace většiny z nich, nejedly k pokusům o změnu složení inzulínu prt potMií v terapii cukrovky.
Důvody prt nedbání přítomnooU nečistot v používaném inzulínu a důvody pro neměnění složení injekčních inzulOnových preparátů jsou pochhtptelné, když se uváží, jaké byly klinické znalossi před koncipováním tohoto vynálezu.
Přeectlivělost (alergie) proti dostupným inzulOtov^m preparátům prakticky zcela zmizela po obecném používáni.krystatovaného nebo překrystatoveného inzulínu. Jinak existovalo a stále ještě existuje mnoho vedlejších účinků způsobených tím, že v séru diabetických pacientů po léčbě' po dobu někotika měsíců bylo nalezeno, že obsahuje imuooglObuiioy, které se slučuj in vitro i in vivo s inzulOneo, což znamená, že inzulOnové preparáty vyvoOávaaí tvorbu inzulOnových protilátek. Jejich tvorba je považována z mooha důvodů za nežádoucí.
1. Tvorba inzulOnových protilátek naznačuje stav trvalého antagonismu těla vůči základní- _mu hormonu, inzulínu. '
2. Tento stav pravděpodobně škodí buňkám ' těla, například beta-btnkcái, které jsou u králíků ničeny imuOzací iozulOneo a pomocnými látkami. Bylo poddzřenO, že požární komppikace diabetů, například aingopaahie, se mohou zhoršovat*
3. Bylo zjištěno, že vysoká hladina inzulínových protilátek někdy vede k insulinové rtsistenci, tj. nutnosti vysokých dávek a k nedostatku metebálické kontroly.
4. Odhaduje se, že skutečně nutná výše dávek u nemocných cukrovkou značně převyšuje požadavek, který by byl nutný, kdyby bylo možno zabránit tvorbě protilátek.
5. U některých pacientů vázají protilátky hovězí inzulín pevněji než vepřový inzulín, a byly popsány hypoglykemické stavy po změně druhového složení inzulínových preparátů..
6. Nehromedí-ii se inzulínové protilátky u pacientů, nastává současné zvýšení končen- r trece cirkulujícího tiogenního sérového inzulínu, část sérového inzulínu se bude vázat na protilátky. Kooícnírace celkového a dokonce i volného inzulínu může dosáhnout hodnot, které jsou deseti- až stonásobkem normální fyziologické koncentrace. Tyto vysoké koncŘnnrace trnnou být škodlivé tkání.m. Mohou vyvooat etrtrsεklerózu a mohou poškozovat dosud existující beta-buňky. Bylo zjištěno, že vysoké koncentrace inzulínu mohou mít negativní účinek na sekreci beta-buněk.
Nežádoucí tvorba inzulínových protilátek uvedená výše byla považována až do koncipování tohoto vynálezu ze nevyhnutelnou, protože bylo pokládáno za sk^teč^í^říit, že čistý inzulín je an^tn. Toto bylo podepřeno Deckrttem v disertační práci Insulin Annibodits (Kodaň 1964), která zahrnuje frakcionacl a izolaci některých nečistot nalezených v krystalickém vepřovém inzulínu, a biologické a chemické výzkumy ukazující, že nečistoty vyvooávají tvorbu protilátek odlišných od inzulínových protilátek, že tvorba inzulínových protilátek ' by však m^ohLa být usnadněna tehdy, když inzulínové preparáty jsou nečisté.
Imunologické pokusy prováděné na zvířatech a tvořící základ tohoto vynálezu ukázaly, že tvorbě inzulínových protilátek lze jestliže inzulín je prostý nejenom pankreatických bílkovin a rmSnístní vyěěí než 6 000, ale i anti-genních inzulínu příbuzných ' látek o téměř stejné moSelkλlooé hmoOnísti jako inzulín.
Je ekutečnootí, že nečistoty izolované z krystal^kého inzulínu, viz složky (a) a · (b) uváděné výše a do určité míry látky příbuzné inzulínu ve složce (c)5 ·jsou · v podstatě odpovědné za antigenní chování známých inzulínových preparátů, přičemž samotný čistý inzulín není antigenem.
Účelem vynálezu je připravit inzulín, který by nevykazoval žádnou nebo podstatně sníženou tvorbu inzulínových protilátek při kli^ncd^f^m použití.
Toho se dosáhne způsobem čištění inzulínu pro vyloučení nebo snížení · tvorby inzuHnových protilátek po jeho iíjiksoáíí podle přítomného vynálezu. Jeho podsitata spočívá v tom, že se surového nebo komečního vepřového nebo hovězího inzulínu se odstraňují •pankreatické bílkoviny o ooOtkulooé rmoSnísSi vyšší než 6 000 golovou filtrací, přičemž se jímá frakce eluátu sdpooOd.íjící střední hlavní části inzuinnového maxima, sloupcovou chrsmo.ttornaií na ioítsoěr.iči se odstraňují inzulínu podobná _ látky o přibližně stejné ocOι.ekulové r!monísti, jakou má inzulín, za jímání frakce tluátu sdpooOάíeí.cícr střední hlavní části inzulínovéhs maxima a inzulín obsažený ve zjímané frakci se izoluje, přičemž se 3 výhodou provátí nejprve gelová filtrace a poté sloupcové crrsjsrosgafie na .ióntsoOnnči.
S výhodou se př^om používá kationtoměniče a tlutntu s obsahem látky fja^ou je například močovina) zabraňující vytváření shluků · inzulínu se sebou samým nebo s přísomnýo:i nečiststaoi<>
Gelová ΓϊΙ^ί^ο inzulí^nu je jako taková o sobě známá, viz například J. Clin. Zavést.
sv. 42, č. 12 1069 až 1871 (1963) a 2, 461 až 464 (1963); není však známa koml^nace gtlové И^Ггс^^о s iontoměničovou· tUčního maxima obsahnuícího inzulín.
Iontoměničová chromatografie krystalického inzulínu je rovněž o sobě známá, není vštC známa chromatooratie spojená s gelovou filtrací elučního maxima obsatuUícího inzulín.
Komminace gelové fittaice s - iontoměničovou chromatooratií je tedy nová a poskytuje inzulín překvappjících vlfstnosSí.
Gelové fití^ce se provádí s výhodou ve vodném prostředí, které může obsthovat nevodné ktpatiny smíístelné s vodou, gelovou- filtrecí lze vštk provádět rovněž v organický,ch rozpouštědlech obest^ících malé moossví vody, je-li to žádoucí. V příptdě, že se používá vodného prostředí, je výhodná hodnott pH v rozmezí 2 tž 4. Sta^i^t inzulínu při hodnotě pH nižší - než 2 t - otd hodnotu 9 je nízká, ttkže v rozmezí tohoto pH dochází během procesu ke tvorbě degrtdtčních produktů. Velmi nízké nebo velice vysoké pH je tudíž méně vhodné. Hodnoty pH v rozmezí 4 tž 9 lze pouužvat, jestliže se zvýší rozpustnost inzulínu, ^ppíC^U přidáním mc>ooviny, která má rovněž schopnost rozrušovat produkty tsocitce, které mohou vzniCtt mezi moUtkcltmi inzulínu a mezi molekultmi inzulínu a neδisOutami při ne^rdlní retkci. Prstcuj-li se při nízkém pH je výhodné pouští orgtnické kyseliny, oapříklad kyseliny octové k nastav-ní hodnoty pH, může vštk být rovněž pou^Oo siliých minerálních Cysee.in. Je výhodná 0,5 tž 4 M koncentrtce kyseliny octové.
Teplott- při gelové není rozhodu^cí t je limiUována pouze stabilitcu t rozpustnootí inzulínu. Je tudíž výhodné prtcovat přibližně při t-pldOě mstnooti, nepř^^d při 20 tž 25 °C. cteré se vymrvoaí před slohou obsa^u^í lozu!^ jsou odstrandvány. Ertkce·, které jsou prosté mattrálu o molekulové Umodnodti převyš^ící 6 000 se smísí t inzulín - lze izolovtí, napPíClaU odpařením, vysolením nebo vysrážením ionty - zinku.
Pokud se týká sloupcové iUroIníaovrβti- ot iooOdmёnnδi lze používat téměř všech komerčně Uos0cpnýcU iontoměničů UoooOujíiíiU penn-raci m^oelc^ly inzulínu zt př-UpoklaUc, že způsob podle vynálezu se provádí v prostředí, ve kterém mooekuly inzulínu netvoří spolu nebo s nečistotami tgregáty. .
Vhodné míaoeiály pro čištění inzulínu jsou udáoy níže v 1ι^1^, vit str. 5.
Iontoměničový proces lze provádět ketoonoovým nebo miontovým měničem, zt pOL^žtí vodného prostředí - jtko elučního činidlt. Eluční činidlo může obsthovat mo^olou nebo jiné látky inzulínu v tvorbě tgregátů meei olasOnííi mooeJkultmi nebo s přítom^o^ýmL oečisMoooviou lze pouuívat v ttkovém mnnUitví, tby se zísCtly 4 tž 8 mooární, s výhodou tsi 7 mooární roztoky. Jestliže se pou^je roztoku moočoloy, oesmí obsthovat kymtlm-amonný, proOoie kymál^ové ionty by reagovaly s aminoskupiooc v inzulinové mooekule.
Elučoí činidlo obsahuje vždy pufr zt účelem Coni^iroLy hodnoty pH lučního činidlt.
Je výhodné pucovat při Constmtní hodnotě pH. Poojivá-li se Catiootuvý mmnič, hodoott pH žlučního činidlt by mělt být cdrždvánt v rozmezí 3 tž 6,5, s výhodou 4 tž 6, t pooužíž-li se anidnOový m^ič, hodnott pH lučního činidlt by mělt být udržov^nt v rozmezí 5,5 tž 10, s výhodou 6 tž 9.
Zíměoé hodnoty pH se ííPí skleněnou elektrodou otstavenoc obvyklým způsobem ot sOto^^ηί pufr.
Vhodné pufry lze ntlézt v dostupné lltetatuře.
Zásadní významná udržování Constmtní - teploty během iondoměničovéUo procesu. Teplotu lze vyvoolt v rozmezí od +10 do +40 0 C, s výhodou 0 tž 30 °C t v příj^ě kdy eluční čin.^o . obsahuje mc)oovonc, je ^leži^ utonovat spíše tá^ou teplot, овр?·^1^ 5 ^0. · • JaCo výchozí míaotiál se používá v čistícím stupni obvykle ^ι^^ηί inzulín, Oj. amoufní
2251 Π inzulín nebo krystalický inzulín, který může být i několikrát krystalován. Může však být použito i surového' inuzínu, například koláče solí, obsahnU^cího inzulín, který vzniká během izolace inzulínu z paincreatickýcO žláz e obsahuje obvykle 10 až 30 % hmot, inzulínu, avšak pro vysoký obsah nečistot je tento výchozí maateiál méně vhodný pro čištění podle vynálezu. Vhodnnjší výchozí maateiál lze získat tak, že roztok koláče solí se podrobí is^^^rickému srážen:! nastavením hodnoty pH roztoku na 5,5 a sraženina se izoluje odstředěním.
Výsledkem čisticího stupně bude vždy iiětěná frakce inzulínového roztoku, ze které se inzulín získává obvyklým způsobem, například odpařením, vysolením nebo vysrážením v přítomno o ti iontů zinku. Je-'li to žádoucí, inzulín lze krystalovat a upravovat do injekčních inzulínových přípravků stejným způsobem, jak se to používá v oboru.
Známými analyticlými testy lze stanovit, že způsobem podle vynálezu se získává požadovaná · čistota inzulínu, čištěný inzulín musí vykazovat při gelové filtrací jediné maximum a v poc^s^ltatě jedinou látku, když se podrobí nisklntinuální elektrolýze na polyekrylamidovém gelu (DISC PAGE), jak je to popsáno B. J. Davisem a L. Ornsteinem v Ann. N. Y. Aced. Sci. 121, str. 321· až 349 a 404 až · 427 (1964).
Podle jednoho provedení způsobu podle vynálezu se inzulín podrobí nejprve gelové filtraci, jímají se frakce eluátu ldp□oidnaící střednímu hlavnímu dílu inzuinnovéOo maxima a izoluje se v nich obsažený inzulín, načež se izolovaný inzulín podrobí sloupcové iOrlmaaodraaii ne měnnči ketim^ a jímají se frakce eluátu odp^vídaící st^Í^f^(^nmu hlavnímu dílu inzuinnového maxima a izoluje se v nich obsažený inzulín.
Následnuící·příklad ilustruje toto provedení.
Příklad provedení kg Sephadexu E 50 jemného zrnění se nechá nabobtnat v 1 M kyselině octové a · nejjemnější částice se odstraní děkannací. Maatriálu se použije k naplnění kolony o průměru 15 cm a výšky 130 cm. Kolona se eCvilibruje 1 M kyselinou octovou.
g inzulínu, který byl jednou krystalován z citrálové0l pufru, se rozpuutí ve směsi 390 ml 1 M kyseliny octové a 8 ml 1 N HCC. Tento roztok se nanese na kolonu. Vymývání se provádí 1 M kyselinou octovou rychlostí 1 ШгЛиП. Jímají se frakce po 200 ml.
Extinkce se měří při 276 nm a vyrážejí proti číslům frakcí. Frakce ldpooidnaicí střednímu hlavnímu dílu inzuinnového maxima (největší maximum) se spojí a inzulín se vysráží přidáním 200 g chloridu sodného na 1 litr spojených frakcí. Sraženina se izoluje odstředěním a podrobí izlelektricéému vysrážení a kr^f^lta^izaci ze urási aietln-iitráloiý piufr obvyklým způsobem. Výtěžek je 8 g kry.stalickéOo inzulínu prostého bílkovin pankreatického původu 3 mooelkiulární hmoOnj>ltí vyšší než asi 6 000.
Krystalický čištěný inzulín, získaný výše uvedeným způsobem, se čistí déle iontoměničovou chromaaodraafí na kationoovém měnn-či iontů. Připraví se 7 M roztoky močoviny a deimizují se průchodem kolonami se směsí iontoměniilvé pryskyřice. Tato neiojizliαná mooovina se Dotom používá k přípravě pufru: 0,13 M fosforečnan·sodný - 7 M mooovina -·1% n-butanolu, ludnota pH 6,0 při teplotě 25 °C. Pufr se skladuje a používá při teplotě 4 °C. 1,5 kg Anbeexitu CE typu II, který je měničem katilntl na bázi kyseliny vé zesítěné d^^y^e^enem, která má · ihrombαografi.cCou kvaKtu se preparuje: 1. vodou, 2. acetonem, 3. vodou + hydroxidem sodným, 4. vodou, 5. vodou + kyselinou·chlorovodíkovou a 6. vodou. Promytá pryskyřice se potom rozmíchá s 5 litry pufru. Hodnota pH suspenze okaT^ž^ kleáá a · vždy během několika miraut se · přidávají přibližně 30 ml dávky 40% roztoku hydroxidu sodného J(hbolnílt/objeb), aby se udržovala hodnota pH asi na 6,00. Když hodnota pH suspenze zůstává po 15 minutách míchání na 6,00, áměs se míchá při teplotě 4 °C přes noc. Prysk^ice se ldnfltruje a promyje 30 litry pufru v průběhu 8 hodin. Hodnota pH konečného filtrátu by měla být stejná jako u přitékajícího pufru. Maatelálu se použije k naplnění kolony o průměru 7,5* cm a o ' výšce 80 cm. Kolona se ekvilibruje pomocí pUfru.
g inzulínu čištěného výše uvedeným způsobem se nanese ne ’ kolonu ve formě 10% roztoku (hmotnost/objem) v pxUfru. Vyrvání se provádí pufrem při teplotě 4 °C rychlostí 200 ml/hod. Jímají se frakce po 100 ml.
Extinkce se měří pí*! 276 nm a vynášeei prooi číslům frakcí. Sppoují se frakce odpovídající střednímu hlavnímu dílu inzulínového maxima (největší maximum) a inzulín se vysráží přidáním 2 litrů vody, 15 ml 4 N kyseliny chlorovodíkové a 600 g chloridu sodného na 1 . litr spojených frakcí. Sraženina se izoluje odstředěním a podrobí isoelektrccéému vysrážení a krystalizaci ze směti aceeon-cctrátový pufr obvyklým způsobem.
Výtěžek je 10 g krystal^kého inzulínu, který ' obsahuje pouzz 'jedinou složku, jestliže se podrobí. DISC .PAGE. Krystalický inzulín je, řečeno jinak pokládán za čistý inzulín.
Claims (2)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU1. Způsob čištění inzulínu pro vyloučení nebo snížení tvorby.inzulínových protilátek pq. jeho i^n;Jk^(^v^án2í, vyznaaující se tím, že ze surového nebo komerčního vepřového nebo hovězího inzulínu se odstraňují pankreatické bílkoviny o molekulové hmotnossi vyšší než 6 000 gelovou fiiraací, přičemž se jímá frakce eluátu oappovídaící střední hlavní čássi inzulínového maxima, sloupcovou ctartmoňotraňfí.na itnttoёnnči se odstraňuj inzulínu podobné látky o přiblžžně stejné oo0elklltvé hmotnntti, jakou má .inzulín, za jímání frakce eluátu odpoovídajcí střední hlavní čássi inzulítovéht maxima a inzulín obsažený ve zjímané frakci se izoluje, pMeemž s· výhodou se provádí nejprve gelová fittacce a poté sloupcová ο^ός^ο^^!' na itnlto0níčU.
- 2. Způsob . podle bodu 1 vyzn^^ící se tím, že se používá kňtiontooěničč a čIučoIu s obsahem látky, n^p^p^^íkl^a^d moočoiny, zabraňujcí vytváření shluků inzulínu se sebou sáným nebo s přítomnými nečistotami.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS78849A CS225134B2 (cs) | 1969-08-11 | 1978-02-09 | Způsob SiStSní komerčního nebo surového inzulínu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB38081/68A GB1285023A (en) | 1968-08-09 | 1968-08-09 | Improvements in or relating to injectable insulin preparations |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS225117B2 true CS225117B2 (en) | 1984-02-13 |
Family
ID=10401047
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS695548A CS225117B2 (en) | 1968-08-09 | 1969-08-11 | The purification of insulin |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS543931B1 (cs) |
| AT (1) | AT354634B (cs) |
| BE (1) | BE737257A (cs) |
| BG (1) | BG25638A3 (cs) |
| BR (1) | BR6911403D0 (cs) |
| CA (1) | CA920946A (cs) |
| CH (1) | CH526958A (cs) |
| CS (1) | CS225117B2 (cs) |
| CU (1) | CU33401A (cs) |
| DE (1) | DE1940130C2 (cs) |
| ES (1) | ES370345A1 (cs) |
| FR (1) | FR2015369A1 (cs) |
| GB (1) | GB1285023A (cs) |
| HK (2) | HK51077A (cs) |
| IE (1) | IE33239B1 (cs) |
| IL (1) | IL32665A (cs) |
| KE (2) | KE2774A (cs) |
| MT (1) | MTP620B (cs) |
| MY (1) | MY7800209A (cs) |
| NL (1) | NL141377B (cs) |
| PH (1) | PH12571A (cs) |
| SE (1) | SE7901917L (cs) |
| YU (2) | YU204569A (cs) |
| ZM (1) | ZM12069A1 (cs) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK140801B (da) * | 1975-01-15 | 1979-11-19 | Nordisk Insulinlab | Fremgangsmåde til fremstilling af et stabilt langtidsvirkende insulinpræparat. |
| DE2505306C2 (de) * | 1975-02-07 | 1984-06-07 | Eli Lilly And Co., Indianapolis, Ind. | Verfahren zur Reinigung eines Alkali- oder Ammoniuminsulins |
| NL7713966A (nl) * | 1976-12-27 | 1978-06-29 | Univ Minnesota | Werkwijze voor het behandelen van insuline. |
| DK374579A (da) * | 1979-09-07 | 1981-03-08 | Nordisk Insulinlab | Fremgangsmaade til fremstilling af et injucerbart insulinpraeparat |
| NL193099C (nl) * | 1981-10-30 | 1998-11-03 | Novo Industri As | Gestabiliseerde insuline-oplossing. |
| FI78616C (fi) * | 1982-02-05 | 1989-09-11 | Novo Industri As | Foerfarande foer framstaellning av en foer infusionsaendamaol avsedd stabiliserad insulinloesning, som har en foerhoejd zinkhalt. |
| WO1995016708A1 (en) * | 1993-12-17 | 1995-06-22 | Novo Nordisk A/S | Proinsulin-like compounds |
| CO4750643A1 (es) | 1997-06-13 | 1999-03-31 | Lilly Co Eli | Formulacion estable de la insulina que contiene l-arginina y protamina |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1940130U (de) | 1966-02-26 | 1966-06-08 | Heinrich Emil Budesheim | Vorrichtung zum filtern von flussigen oder gasfoermigen medien. |
| DE1966573U (de) | 1967-06-01 | 1967-08-17 | Rainer Sahli | Zylinderschloss an tueren u dgl. raumabschlussorganen. |
-
1968
- 1968-08-09 GB GB38081/68A patent/GB1285023A/en not_active Expired
-
1969
- 1969-07-21 IE IE1012/69A patent/IE33239B1/xx unknown
- 1969-07-21 IL IL32665A patent/IL32665A/xx unknown
- 1969-07-22 CA CA057646A patent/CA920946A/en not_active Expired
- 1969-07-24 ZM ZM120/69A patent/ZM12069A1/xx unknown
- 1969-07-31 CU CU33401A patent/CU33401A/es unknown
- 1969-08-06 BG BG012830A patent/BG25638A3/xx unknown
- 1969-08-06 YU YU02045/69A patent/YU204569A/xx unknown
- 1969-08-06 CH CH1195769A patent/CH526958A/de not_active IP Right Cessation
- 1969-08-07 PH PH10600A patent/PH12571A/en unknown
- 1969-08-07 DE DE1940130A patent/DE1940130C2/de not_active Expired
- 1969-08-07 FR FR6927255A patent/FR2015369A1/fr not_active Withdrawn
- 1969-08-08 BE BE737257D patent/BE737257A/xx not_active IP Right Cessation
- 1969-08-08 JP JP6283469A patent/JPS543931B1/ja active Pending
- 1969-08-08 ES ES370345A patent/ES370345A1/es not_active Expired
- 1969-08-08 MT MT620A patent/MTP620B/xx unknown
- 1969-08-08 AT AT768769A patent/AT354634B/de not_active IP Right Cessation
- 1969-08-08 NL NL696912142A patent/NL141377B/xx not_active IP Right Cessation
- 1969-08-08 BR BR211403/69A patent/BR6911403D0/pt unknown
- 1969-08-11 CS CS695548A patent/CS225117B2/cs unknown
-
1977
- 1977-06-30 YU YU1622/77A patent/YU40003B/xx unknown
- 1977-09-13 KE KE2774A patent/KE2774A/xx unknown
- 1977-09-29 HK HK510/77A patent/HK51077A/xx unknown
- 1977-11-28 KE KE2801A patent/KE2801A/xx unknown
- 1977-12-15 HK HK619/77A patent/HK61977A/xx unknown
-
1978
- 1978-12-31 MY MY1978209A patent/MY7800209A/xx unknown
-
1979
- 1979-03-02 SE SE7901917A patent/SE7901917L/ unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KE2774A (en) | 1977-10-21 |
| HK51077A (en) | 1977-10-07 |
| NL141377B (nl) | 1974-03-15 |
| FR2015369A1 (cs) | 1970-04-24 |
| CU20627L (es) | 1971-08-06 |
| MTP620B (en) | 1970-01-31 |
| CA920946A (en) | 1973-02-13 |
| YU162277A (en) | 1982-05-31 |
| GB1285023A (en) | 1972-08-09 |
| NL6912142A (cs) | 1970-02-11 |
| PH12571A (en) | 1979-06-20 |
| IL32665A0 (en) | 1969-09-25 |
| MY7800209A (en) | 1978-12-31 |
| DE1940130C2 (de) | 1983-12-08 |
| BE737257A (cs) | 1970-02-09 |
| KE2801A (en) | 1978-01-06 |
| BR6911403D0 (pt) | 1973-03-13 |
| YU204569A (en) | 1982-05-31 |
| CU33401A (es) | 1971-08-06 |
| YU40003B (en) | 1985-06-30 |
| IE33239L (en) | 1970-02-09 |
| DE1940130A1 (de) | 1970-02-12 |
| BG25638A3 (bg) | 1978-11-10 |
| JPS543931B1 (cs) | 1979-02-28 |
| IE33239B1 (en) | 1974-05-01 |
| AT354634B (de) | 1979-01-25 |
| IL32665A (en) | 1973-05-31 |
| SE7901917L (sv) | 1979-03-02 |
| ES370345A1 (es) | 1972-01-01 |
| ZM12069A1 (en) | 1970-02-16 |
| CH526958A (de) | 1972-08-31 |
| HK61977A (en) | 1977-12-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3950517A (en) | Insulin derivatives | |
| EP0471701B1 (de) | Neue proteine mit tnf-hemmender wirkung und ihre herstellung | |
| US4183849A (en) | Therapeutic insulin preparation and a process for the production of a stable insulin preparation with protracted effect | |
| DE69127657T2 (de) | Proteinreinigungsmethode | |
| US3869437A (en) | Mono-, di, and N{HD A1{B , N{HU B1{B , N{HU B29{B -tri-acylated insulin | |
| Matsuzawa et al. | Crystallization of ornithine transaminase and its properties | |
| JPS61212598A (ja) | インシユリン化合物 | |
| MXPA05001042A (es) | Un metodo para purificar preproinsulina. | |
| US3907676A (en) | Process for purifying insulin | |
| FI77876B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av humaninsulin eller en treoninb30-ester av humaninsulin eller ett salt eller komplex daerav. | |
| US2174862A (en) | Process of producing crystalline insulin | |
| CS225117B2 (en) | The purification of insulin | |
| US4624804A (en) | Process of preparing relaxin from milk | |
| CA2506594A1 (en) | A method for the crystallization of human serum albumin | |
| GB1576344A (en) | Process for purifying glucagon | |
| EP0013826A1 (en) | Process for purifying insulin and insulin so prepared | |
| EP0966482B1 (en) | Crystallisation of proteins | |
| EP0089218B1 (en) | A process for purifying human chorionic gonadotropin | |
| US4617376A (en) | Process for recovering glucagon from pancreas glands | |
| US6770455B1 (en) | Metal-containing ribonucleotide polypeptides | |
| US4495096A (en) | Process for producing and obtaining anaphylatoxin-and cocytotaxin-containing leucotaxine preparations and of anaphylatoxin and cocytotaxin proteins in molecularly homogeneous, biologically active form | |
| FI73130C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av renat insulin laempat foer beredning av foer kliniskt bruk anvaendbara injicerbara insulinberedningar. | |
| US2974088A (en) | Method of preparing growth hormone | |
| EP0207727A2 (en) | A process for recovering glucagon from pancreas glands | |
| Ely et al. | Accessible intrachain disulfide bonds in hybrids of light chains |