CS210383B1

CS210383B1 - Léčivo virových infekcí

Info

Publication number: CS210383B1
Application number: CS449179A
Authority: CS
Inventors: Jiri Vanzura; Karel Palat; Milan Celadnik; Jiri Klimes; Frantisek Smejkal
Original assignee: Jiri Vanzura; Karel Palat; Milan Celadnik; Jiri Klimes; Frantisek Smejkal
Priority date: 1979-06-28
Filing date: 1979-06-28
Publication date: 1982-01-29

Abstract

Vynález se týká léčiva virových infekcí, které jako účinnou složku obsahuje alespoň jednu sloučeninu obecného vzorce ve kterém R je alkyl s 1 až 5 atomy uhlíku, benzyl nebo fenyl, R^ je alkyl s 1 až 5 atomy uhlíku, hydroxyalkyl s 1 až 3 atomy uhlíku, fenyl nebo benzyl, RJ a E^ značí atomy vodíku nebo alkyly s 1 až 3 atomy uhlíku, přičemž substituenty R1 a r3, popřípadě spojeny, mohou tvořit alkylenový řetězec s 2 až 4 methylenovými skupinami. Látky jsou účinné proti různým druhům virů, zejména proti viru chřipky AWS, viru vakcinie a herpesu.

Description

Vynález se týká léčiva virových infekcí, účinného proti RNA- a DNA-virům, zejména proti viru chřipky AWS, viru vakcinie a viru herpesu 2. Toto léčivo obsahuje jako účinnou složku alespoň jednu sloučeninu obecného vzorce I,

... • •R³

CH6 (I) ^C·⁵ ₄/^HC<

R²

2 ve kterém značí R alkyl s 1 až 5 atomy uhlíku, benzyl nebo fenyl, R alkyl s 1 až 5 atomy uhlíku, hydroxyalkyl s 1 až 3 atomy uhlíku, fenyl nebo benzyl, ΐΡ _{a a}t_omy vodíku nebo alkyly s 1 až 3 atomy uhlíku, přičemž substituenty h' a R^, popřípadě spolu spojeny, mohou tvořit alkylenový řetězec s 2 až 4 methylenovými skupinami.

Typickými příklady reprezentujícími látky obecného vzorce I jsou sloučeniny:

cyklo (L-Ala-L-Leu), chemický název 3-methyl-6-(2-methylpropyl)-2,5-piperazindion, cyklo (L-Ala-D-Val), chemický název 3-methyl-6-(1-methylethyl)-2,5-piperazindion, cyklo (D-Ala-L-Val), chemický název 3-methyl~6-(1-methylethyl)-2,5-piperazindion, cyklo (L-Ser-L-Val), chemický název 3-hydroxymethyl-6-(1-methylethyl)-2,5-piperazindion, cyklo (L-Pro-L-Leu), chemický název 1,6-trimethylen-3-(2-methylpropyl)-2,5-piperazindion, cyklo (D-Val-D-Phe), chemický název 3-(1-methylethyl)-6-benzyl-2,5-piperazindion, cyklo (L-Val-L-Leu), chemický název 3-(1-methylethyl)-6-(2-methylpropyl)-2,5-piperazindion.

Zájem o tyto látky byl vyvolán objevem fungicidní, bakterlcidní a antivirové aktivity skupiny přírodních látek typu gliotoxinu, sporidesminu, arantoinu a dalších, které obsahují jako základní skelet 3,6-epidithia-2,5-piperazindion. Zjednodušený symetrický analog tohoto typu, připravený Trownem (Trown P. W.: USA patent S. 3 562 253), substituovaný na atomech dusíku methyl-, ethyl- a propylskupinou, rovněž vykazoval antivirovou aktivitu proti některým RNA-virům. Stejně byl účinný i symetrický 3,6-difenyl-3,6-epidithia-1,4-dlmethyl-2,5-piperazindion (Svokos S. G.: NSR pat. zveřej. spis č. 2 029 305).

Protivirovou aktivitu vykazovaly pouze deriváty s epi-polysulfidickým můstkem, zatímco výchozí symetrické 2,5-piperazindiony se jevily jako neúčinné. Proto byl vysloven předpoklad, že nositelem účinku je disulfidický můstek a odpovídající dithiol a základní struktura 2,5-piperázindionu byla označena jako antivirově neúčinná. Přehled vlastností jednoduchých i substituovaných 2,5-piperazindionů a jejich přírodně se vyskytujících analogů je uveden .v souborných referátech (Sammes P. G.: Naturally Occuring 2,5-Dioxopiperazines and Related Compounds p. 51-107, in Progress in the Chemistry of Natural Products Vol. 32, Springer Verlag', Wien,· New York, 1975; Johne S., Groger D.; Pharmazie 32/H 1/, 1-16 (1977).

• Mezitím autoři Crescenci V., Cesaro A., Russo E., (Int. J. Peptide Protein Res. 5(6), 427-434 (1973)) prokázali denaturační efekt 2,5-piperazidionu na RNA-su a další autoři, ' Augustin M., Erfurt G., Mueller S. (NDR pat. 101 278; Ref. Chem. Abstr. 81 . 146895q /1974/) fungicidní aktivitu jednoduchého N,N'-disubstituovaného 2,5-piperazindionu, resp. antikancerogenní aktivitu dalšího symetrického jednoduchého derivátu (Shen Tsung-Jing, Jensen N. P., Wagner A. F.: NSR pat. zveřej. spis č. 2 257 542; Ref. Chem. Abstr. 79 42551s /1973/).

Pro vyřešení otázky, při jakém zjednodušení molekuly se ještě projevuje antivirový účinek, byla běžnými metodami peptidové syntézy připravena řada asymetrických, symetrických opticky aktivních i racemických 2,5-piperazindionů vpředu uvedeného obecného vzorce, které byly testovány za standardních podmínek proti vybraným RNA- a DNA-virům. Protivirová účinnost byla hodnocena in vitro na tkáňových kulturách kuřecích fibroblastů pomocí inhibice tvorby plaků v agarovém difúzním testu za použití 6-azauridinu jako standardu účin210383 nosti. Výsledky in vitro testů některých vybraných sloučenin (400 a 403) jsou uvedeny v tabulce. Z výsledků vyplývá, že látky obecného vzorce I představovaná příklady v tabulce jsou shodně nebo více účinné než kontrolní 6-azauridin. Žádná z testovaných látek nevykazovala cytotoxicitu.

Účinek vybraných látek byl ověřen v testech in vivo, prováděných na myších samicích o hmotnosti 11 až 12 g, infikovaných tail-metodou podle Yoshimury (Yoshimura S., Christian R. Ϊ., ISayer C. D., Krueger R. F.: progr. Arítimicrob. Antibacter. Ther., Proč. 6th Inter. Cingr. Chemother. J_, 481-484 (1970), Univ. of Tokyo Press, Tokyo 1970), léčených subkutánně 2x denně po 0,2 ml roztoku nebo suspenze ve fyziologickém roztoku s Tweenem 80 v koncentraci 250 mg/kg po dobu pěti dnů. Myši byly léčeny preventivně terapeuticky, tzn. léčba byla zahájena 3 h před infekcí, druhá dávka byla aplikována 3 h po Infekci, v dalších dnech vždy ráno a odpoledne. Oba testované deriváty snižovaly v průběhu 5· až 8. dne kožní reakce viru vakcinie 3. až 4x. Sedmého dne, kdy vrcholily kožní reakce u neléčené kontroly viru, potlačoval derivát 400 tyto příznaky ze 75 % a derivát 403 2 65 %.

Z výsledků vyplývá, že látky uvedeného obecného vzorce jsou antivirově účinné a přítomnost epidisulfidického, resp. epipolysulfidického můstku, nebo thiolových skupin v polohách 3,6 není nutnou podmínkou antivirové aktivity.

Následujícími příklady je příprava látek obecného vzorce I blíže objasněna, ale není nijak omezena.

Příklady provedení

Příklad 1

Methylester N-benzyloxykarbonyl-L-leuoyl-L-eí-alaninu

K suspenzi 7,0 g (0,05 mol) hydrochloridu methylesteru L-oí-alaninu v minimálním množství chloroformu se za míchání a chlazení přidá 65 g 2% roztoku amoniaku v suchém chloroformu. Vyloučená sraženina chloridu amonného se odfiltruje. K filtrátu se přidá nasycený roztok 13,3 g (0,05 mol) N-benzyloxykarbonyl-L-leucinu v chloroformu, směs se ochladí na -15 stupňů Celsia a smísí s chloroformovým roztokem 11,0 g Ν,Ν-dicyklohexylkarbodiimidu. Po 12 hodinách stání při 4 °C se oddělí vyloučené Ν,Ν-dicyklohexylmočovina, čirý roztok se okyselí několika kapkami kyseliny octové. Eventuální zákal se odstraní další filtrací. Filtrát se šetrně vakuově zahustí, zbytek se rozpustí ve 40 ml ethylacetátu a promývé postupně malým množstvím 1 N kyseliny chlorovodíkové, 0,5 N uhličitanu sodného a vodou. Oddělené ethylacetétová vrstva se vysuší bezvodým síranem sodným a vakuově zahustí. Výtěžek 12,7 g bílých krystalů; po rekrystalizaci poskytnou produkt o t. t. 94 až 95 °C.

P ř i k 1 a d 2

Cyklo (L-Alanyl-L-Leucyl)

50,0 g 36% roztoku bromovodíku ve 100% kyselině octové se přidá ke 12,5 g methylesteru N-benzyloxykarbonyl-L-leucyl-L-alaninu do baňky chráněné chlorkalciovým uzávěrem a třepané tak dlouho, dokud se vyvíjejí bublinky kysličníku uhličitého. Potom se kyselina octová a pře bytek bromovodíku vakuově oddestiluje a mazlavý odparek roztírá s etherem tak dlouho, dokud se neuvolní krystalky hydrobromidové soli lineárního dipeptidu. Etherová vrstva obsahující benzylbromid se opatrně dekantuje. Dekantace a roztírání s etherem se několikrát opakuje.

9,0 hydrobromidové soli methylesteru L-Leucyl-L-í'-alaninu se nechá zreagovat s 30,0 g 2% chloroformového roztoku amoniaku, ochlazeného na -5 °C. Vyloučená sraženina bromidu amonného se oddělí centrifugaeí a čirý filtrát se za sníženého tlaku zahustí do sucha a. rozpustí ve 20 ml suchého methanolu. Cyklizace probíhá spontánně po přídavku katalytického množství suchého amoniaku. Takto se získá 3,1 g bílého mikrokrystalického produktu o t. t. 258 až 259 °C, sublimujícího při 163 °C bez rozkladu. Látka se rozpouští v kyselině octové, nižších alkoholech a ve vodě. -34,5° (c = 1,2; 100% kyselina octová), (^)^ = -25,3° (c = 0,9; MeOH).

čistotě.

Stejným postupem z odpovídajícího množství příslušných složek byly připraveny tyto látky:

Cyklo (L-Ala-D-Val): Bílá krystalická látka', snadno sublimující (počátek sublimace 159 °C). T. t. 272 až 274 °C. Dobře rozpustná v kyselině octové a methanolu, méně ve vodě.

C g

Nerozpustná v etheru a petroletheru. (^)p - -23,9 (c = 1; HAc).

Cyklo (D-Ala-l-Val): bílá krystalická látka, snadno sublimující (počátek sublimace 157 °C). T. t. 271 až 273 °C. Dobře rozpustná v kyselině octové a methanolu. Nerozpustná v etheru a petroletheru. (íZ)^ = +25,4° (c = 0,8; HAc).

Cyklo (L-Ser-L-Val): bílé krystalická látka dobře rozpustná v methanolu, nerozpustná v etheru a petroletheru. T. t. 244 až 245 °C, = -46,8° (c = 0,9; HAc).

Cyklo (D-Pro-L-Leu): bílá krystalická látka, sublimující nad 130 °C. T. t. 157 až 159 stupňů Celsia. Rozpustná v methanolu a kyselině octové. Nerozpustná v etheru a petroletheru (2)^⁵ = -134° (c = 1, MeOH).

Cyklo (D-Val-D-Phe): bílá krystalická látka, sublimující při 200 °C. T. t. 268 až 269 °C. Rozpustná v methanolu a kyselině octové, nerozpustná v etheru a petroletheru.

Cyklo (L-Val-L-Leu) bílá krystalická látka, sublimující při 250 °C. Rozpustná v kyselině octové, Částečně v methanolu. Nerozpustná v petroletheru. (íť)^ = -46,8° (c = 1 , HAc).

Cyklo (D-Phg-D-Val): bílá krystalická látka, snadno sublimující, t.t. 282 až 283 °C. (¢()^5 ₌ _tj7 _± 2° (c = 0,05, MeOH). Velmi málo rozpustná v methanolu, lépe v kyselině octové.

Methylací obvyklým způsobem metyljodidem za přítomnosti kysličníku stříbrného byla připravena tato látka:

Ν,Ν'-dimethyl-cyklo(L-Ala-L-Leu): bílá krystalická látka, velmi dobře rozpustná v polárních rozpouštědlech, krystalizovatelná z n-hexanu, t. t. 53 až 54 °C. (¢()^ = 57,7° (c = 1, MeOH).

Cyklo (L-Nvs-D-Phg): bílá krystalická látka, t. t. 252 až 253 °C (rozklad). («Op’ = = -85,6° (c = 0,7, HAc).

Cyklo (L-Nle-D-Phg): bílá krystalická látka, t. t. 252 až 254 °C (rozklad). W)p^ = = -74,4° (c = 0,7 HAc).

Cyklo (D-Phg-L-Ser): bílá krystalická látka, t. t. 255 až 258 °C (rozklad).

= -48,7° (c = 0,4, HAc).

	Derivát 2,5-pipěrazin dionu	č.
Látky	Cyklo (L-Ala-L-Leu)	400
účinnější	Cyklo (D-Ala-L-Val)	401
než 6-azur	Cyklo (L-Ser-L-Val)	404
Látky	Cyklo (L-Ala-D-Val)	403
shodně účinné	Cyklo (L-Pro-L-Leu)	407
	Cyklo (D-Val-D-Phe)	420
s 6-azur	Cyklo (L-Val-L-Leu)	423
6-AzUR

Claims

Léčivo virových infekcí, vyznačující s jednu sloučeninu obecného vzorce I, tím, že obsahuje jako účinnou složku alespoň (I)

CH₆

C® 3HC

R4

R2

Ί o ve kterém značí R alkyl s J až 5 atomy uhlíku, benzyl nebo fenyl, R alkyl s 1 až 5 atomy uhlíku, hydroxyalkyl s 1 až 3 atomy uhlíku, fenyl nebo benzyl, R^ a R^ atomy vodíku nebo alkyly 3 1 až 3 atomy uhlíku, přičemž substituenty r' a ít\ popřípadě spolu spojeny, mohou tvořit alkylenový řetězec s 2 až 4 methylenovými skupinami.