CS200200B2 - Method of liquid processing containing blood components - Google Patents

Description

Vynález .se týká způsobu zpracování kapalin s obsahem krevních -složek, zejména globinu a sloučenin železa, pocházejících z hemoglobinu.

Tyto kapaliny jsou jatečným . produktem a je možno je rozdělit odstředěním na dvě kapalné fáze, a to plazmu, a dřeň červených krvinek. Tato dřeň -se někdy nazývá také krevní odpad. Tento krevní odpad obsahuje ' 70 % původního obsahu bílkovin v krvi. Hlavní část těchto bílkovin je ve formě hemoglobinu, který sestává z bílkovinné části, tj. globinu a části s obsahem železa, tj. feroproto-porfyrinu. Tato složka je příčinou specifické chuti a- barvy krve, která je červená v kapalném stavu a černá v práškovitém stavu.

Roztok globinu je bezbarvý až slabě žlutý, globin v práškovitém -stavu je bílý až světle žlutý.

V případě, že se ferroprotoporfyrin oddělí od hemoglobinu, přechází železo· často do dvojvaznáhO' stavu. Chlorid této- sloučeniny má název heímin a má intezívně černou barvu.

Krevní bílkovina, a zejména globin, oddělený od železnaté složky se užívá pro svou výživnou hodnotu při výrobě krmiv a v případě, - že jsou zachovány jeho funkční vlast2 nois.ti také jako komplexotvorný prostředek.

Složka s obsahem· železa, která sestává ze čtyř pyrrolových kruhů okolo atomu železa se užívá pro svůj obsah železa v lékárenském průmyslu a při výrobě krmiv.

Dřeň, červených krvinek ise zpracovává obvykle tak, že se rozdrtí buněčné membrány a získá -se roztok hemoglobinu. Zlomky buněčných membrán se pak odstraní odstředěním.

Je známo v laboratorním měřítku oddělovat složku s obsahem železa od globinu chromatograficky nebo extrakcí, -při nichž se užívá rozpouštědel jako methylethylkeťonu, acetonu a dimethylformamidu.

Chromatografie je méně vhodná pro použití v průmyslovém měřítku, pří provádění extrakčního způsobu je -produkt nezpůsobilý pro použití jako krmivá.

Předmětem vynálezu je způsob zpracování kapalin s obsahem krevních složek, a to sloučenin -železa, pocházejících z hemoglobinu, bílkoviny, převážně- globinu, vyznačující se tím, že se kapalina zchladí na teplotu 0 až —20°C, přidá se kapalný ethanol až do obsahu 90 objemových %, vztaženo· na celkové množství kapaliny, pH kapaliny se upraví na hodnotu 4,5- až 1, s výhodou na 'hodnotu 2,5 až 4,5 při udržová200200 ní svrchu uvedené teploty, přičemž se s výhodou usnadní vznikající shlukování sloučenin železa přidáním anorganických solí sodíku nebo draslíku, například chloridu sodného, například ve formě vodných roztoků a vytvořené shluky sloučenin železa se oddělí, přičemž globin zůstává v roztoku, z něhož se izoluje.

Takto získaný globin je vzhledem k jeho čistotě možno . užít v potravinářství.

Způsobem podle vynálezu je tedy možno snadno- oddělit složku s obsahem železa od globinu a tak využít globin pro krmné ' účely a železnatou složku pro výrobu krmiv a léků.

Roztok hemoglobinu se smísí s ethanolem a vodou a pak se okyselí na pH nižší než 4,5. Ferroprotoporfyrin se oddělí od hemoglobinu ve formě různých sloučenin s obsahem železa, které mají černou barvu. Chlorid ve formě trojvazného železa, tzv. hemin pravděpodobně tvoří hlavní část výsledných sloučenin železa. Je také možno·· předpokládat polymeraci, adsorpci nebo reakci s krevními složkami, zejména bílkovinou.

V případě dostatečně vysoké koncentrace sloučenin s obsahem železa a při vyšším obsahu · ethanolu v roztoku než 40 objemových o/o tvoří sloučeniny železa shluky, které je možno· oddělit od roztoku. Bílkovina, v první řadě globin zůstává v roztoku v rozpuštěném stavu.

V případě, že se zvýší koncentrace železa, například přidáním soli, je možno dosáhnout většího shlukování sloučenin železa a tím· vysrážení bílkovinné složky.

Podle výhodného provedení způsobu podle vynálezu je možno po snížení hodnoty pH tuto hodnoitu znovu zvýšit, čímž se dosáhne objemné sraženiny krevních složek, zejména bílkoviny s rekonstrukcí hemoglobinu ze· složky s obsahem železa a z globinu. Při tomto srážení dochází k adsorpci předem dispergované sloučeniny železa, výslednou sraženinu je možno snadno společně s touto sloučeninou oddělit od roztoku.

Oddělení je možno dosáhnout zejména přidáním dalšího absorpčního materiálu, například fragmentů buněčných stěn červených krvinek.

Vysrážení části bílkoviny, zejména hemoglobinu se současnou adsorpci složky s obsahem železa je možno dosáhnout také zvýšením obsahu ethanolu se současným snížením teploty.

Podle dalšího provedení způsobu podle vynálezu je možno malý podíl ethanolu nahradit methanolem, propanolem, isopropanolem, butanolem, ethylenglykolem, glycerinem, ethylacetátem nebo acetonem, přičemž se dosáhne téhož účinku.

Snížením pH se dosáhne úplnějšího štěpení hemoglobinu a shlukování sloučenin železa, současně však · dochází k poruše funkčních vlastností bílkoviny a pravděpodobně ke zvýšené polymeraci sloučenin s obsahem železa. Při vyšším pH k těmto jevům nedochází, zvyšuje se však množství sraženiny bílkoviny se složkami · železa.

Funkční vlastnosti těchto sloučenin je možno· nejsnáze udržet tak, že se kapalina udržuje s výhodou při teplotě nižší než —5 °C.

Barva reakční směsi za uvedených podmínek je černá až hnědočerná. Po · odstředění této směsi při 10 000 g se získá intenzívně černá pasta s obsahem většiny sloučenin železa z · původní směsi. Supernatant byl světle žlutý až světle hnědý a obsahuje většinu bílkovin. Toto zbarvení supernatantu je známkou úplného oddělení bílkoviny od sloučenin s obsahem železa.

Shluky sloučenin s obsahem železa je možno ze směsi oddělit běžným způsobem, například odstředěním, usazením, pomocí cyklonu, filtrací, ultrafiltrací, a adsorpci na objemný nebo pevný materiál.

Bílkovinu je možno získat z roztoku běžným způsobem, například vysrážením, adsor.pcí na pevný nebo· objemný materiál, odpařením roztoku, sušením, zahuštěním ultrafiltrací nebo· lyofilizací.

Bílkovina v roztoku po oddělení od shluků sloučenin s obsahem železa za uvedených podmínek je vzhledem k obsahu železa, barvě a chuti vhodná pro· krmné účely.

Vynález bude osvětlen následujícími příklady.

Příklad 1

Dřeň červených krvinek z jatečně krve s citronanem sodným proti srážení se smísí s ethanolem a vedou, takže dojde k rozrušení buněných membrán. Zlomky těchto membrán se odstraní odstředěním. Výsledný roztok hemoglobinu obsahuje 15 % sušiny,· převážně hemoglobinu, 33 objemových proč, ethanolu a zbytek vody. Směs měla pH 5,3 a temně červenou barvu.

g této směsi se zchladí na teplotu —12 st. Celsia v kádince, načež se po kapkách přidá za stálého· míchání a chlazení roztok 0,5 ml 1 M · kyseliny chlorovodíkové a 10 ml 96% ethanolu při teplotě —12 °C. Po· skončeném přidávání je teplota· vzniklé směsi —12 °C a hodnota pH 3,1. Směs má obsah ethanolu 78 · objemových %.

Hodnota pH se stanoví tak, že vzorky směsi se ředí 3 objemy vody před stanovením. *

Hnědočerně zbarvená směs se odstředí při 27 000 g 10 minut v Sorvallově odstředivce při teplotě —12 °C. Získá se černá pasta s obsahem 1,5 g sušiny (2,9 %) a světle hnědý supernatant. Supernatant se doplní vodou na 50 % a jeho pH se upraví na 7,5, čímž dojde při · teplotě — 70 °C ke vzniku světle šedé sraženiny, která se odstraní odstředěním, čímž se získá 0,95 g šedé pasty s obsahem 28 % sušiny.

Analýzou je možno prokázat, že šedá pas200200 ta sestává z bílkoviny s obsahem 5% železa v hemoglobinu.

Černá pasta obsahuje většinu sloučenin s obsahem železa pocházejících z hemoglobinu. Tyto látky mají pravděpodobně formu heminu.

Příklad 2 g roztoku hemo-globinu, stejného jako v příkladu 1 se při teplotě —7 °C za stálého míchání a chlazení po kapkách přidávají do kádinky s roztokem. 0,45 ml 1 M kyseliny chlorovodíkové, 7,5 ml vody a 10 ml 96 objemových % ethanolu při teplotě —7 st. Celsia. Po skončeném přidávání je teiplota směsi —6 °C a pH 3,3. Obisah ethanolu ve směsi stoupne na 50 objemových %.

Hnědočerná isměs se odstředí 10 minut při 10 000 g, čímž se získá černá pasta s obsahem sušiny 0,03 g a světle hnědý supeirnatant.

Tento supernatant se rozdělí na dva stejné díly. Z jednoho dílu se získá při pH 7,5 šedá sraženina, která se odstředí, čímž se získá 0,12 g isušiny.

Druihá část se smísí s 5 ml ethanolu a 0,2 ml chloridu sodného ve foirmě 10% vodného¹ roztoku za stálého míchání a chlazení. Dále se podrobí ulitrafiltraci >při teplotě —6°C v přístroji Ami-con Diaflo-cell při použití membrány XM 300. Filtrát má světle žlutou barvu, membrána se potáhne tmavým filmem. Z filtrátu se po zředění vodou na obsah 50 ’% při <pH 7,5 získá bílá až světleš-edá sraženina, která váží po usušení 0,11 g.

Příklad 3 g roztoku hemoglobinu z příkladu 1 se při teplotě — 4°C po kapkách přidá za stálého chlazení do kádinky s 0,45 ml ledové vody kyseliny octové, 0,8 ml vody a 5 ml ethanolu o koncentraci 9o objemových proč, při teplotě —4 °C. Po skončeném přidávání je teplota směsi —4 °C a pH 3,8. Obsah ethanolu ve směsi stoupne na 62 objemových %.

Černohnědá isměs se odstředí 10 minut při 27 00Ю g, čímž se získá černá pasta s obsahem 0,11 g sušiny a světle hnědý supernatant.

Ze supernatantu se po zředění vodou až do obsahu 50 % při pH 7,5 získá světle hnědá až šedá sraženina, která se odstředí a usuší, čímž se získá 0,25 g sušiny.

Příklad 4 g roztoku hemoglobinu z příkladu 1 o teplotě — 8 °C se po kapkách přidá za stálého chlazení do kádinky, která obsahuje

0,45 ml 1 M kyseliny chlorovodíkové, 0,2 ml chloridu sodného ve formě 20% vodného roztoku a 10 ml 96% ethanolu o teplotě —15°C. Po skončeném přidávání je teplota —10 °C a pH 3,3. Obsah ethanolu ve směsi stoupne na 77 objemových %.

Černohnědá směs se 10 minut odstředí při 10 00Ό g, čímž se získá černá pasta, s obsahem sušiny 0,09 g a světle žlutý až světle hnědý supernatant.

Ze supernatantu se po zředění vodou na objem. 5i0 % při pH 7,5 získá šedá sraženina, která se oddělí odstředěním a usuší, čímž se získá 0,30 g sušiny.

Příklad 5 ml 96-% ethanolu se po kapkách přidá za stálého chlazení a míchání do· kádinky s obsahem 3 g roztoku hemoglobinu stejného· složení jako v příkladu 1. Teplota směsi je —10°C. Do vzniklé suspenze hemoglobinu sa po kapkách přidá za stálého- míchání a -chlazení 0,4 ml 1 M kyseliny chlorovodíkové ve 3 ml 90% ethanolu. Po skončeném přidávání je teplota —10 °C a pH 3,4. Obsah ethanolu ve směsi stoupne na 77 objemových %.

Černohnědá siměs se odstředí 10 minut při 20 000 g, čímž se získá černá pasta s obsahem 0,08 g sušiny a světle hnědý supernatant.

0,19 ml 0,5 M hydroxidu sodného v 10 ml 96% ethanolu se po kapkách přidá za stálého míchání a chlazení do supernatantu, teplota po přidání je —10 °C a pH 4,35. Obsah ethanolu ve směsi stoupne na 85 objemových %.

Výsledná sraženina, která je frakcí krevní bílkoviny s adsorbovanou sloučeninou železa se odstraní odstředěním, čímž se získá černočervená pasta s obsahem 0,08 g sušiny.

Z velmi světle žlutého supernatantu se po přidání vody do obsahu 50 % při zvýšení pH ma 7,5 za stálého chlazení získá světle šedá sraženina, ktorá se odstředí a Usuší, čímž se získá 0,22 g sušiny.

Příklad 6 g roztoku hemoglobinu z příkladu 1 o teplotě —8 °C s-е po kapkách přidá za stálého míchání a chlazení do kádinky, která obsahuje 0,45 ml 1 M kyseliny chlorovodíkové a 10 ml 96% ethanolu o teplotě —8 °C. Po- skončeném přidávání je teplota —8 °C a pH 3,3. Obsah ethanolu ve směsi se zvýší na 78 objemových %.

Hnědo-černá směs se odstředí 10 minut při 10 000 g, čímž se získá černá pasta s obsahem 0,06 g sušiny a světle hnědý supernatant.

ml suspenze s obsaheem 0,1 g dřeně červených krvinek ve stejných dílech ethanolu a vody při teplotě —8 °C a pH 5,3 se po kapkách přidá za stálého míchání a chlazení к supernatantu, po skončeném přidávání je teplota —8 °C a obsah ethanolu objemových %.

Směs se odstředí 10 minut při 10 000 g, čímž se získá malé množství černé pasty a světle hnědý až světle žlutý supematant. Ze supeirnatantu se vysráží stejně jako v příkladu 5 světle šedá sraženina, tato sraženina se odstředí a usuší, čímž se získá 0,25 g sušiny.

Příklad 7 g roztoku hemoglobinu z příkladu 1 se při teplotě —6 °C za stálého míchání a chlazení po kapkách přidají do kádinky s obsahem 0,50 ml 1 M kyseliny chlorovodíkové, 8 ml 96'% eithanolu a 2 ml glycerinu při teplotě —8 ^qC. Po skončeném přidávání je teiplota směsi —8 °C a pH 3,1. Celkové množství ethanolu a glycerinu ve směsi je 82 objemových %.

Hnědočerná směs se 10 minut odstředí při 27 000 g, čímž se získá černá pasta s obsahem 0,09 g sušiny a světle hnědý až světle žlutý supematant.

Ze supematantu se stejným způsobem jako v příkladu 5 vysráží světle žlutá sraženina, která se oddělí odstředěním a usučí, čímž se získá 0,26 g sušiny.

Obdobným způsobem je možno provádět sthora uvedený postup při přidání ethylenglykolu, propanolu, iisopropanolu, .meithanolu, acetonu a ethylacetátu ve stejném množství jako glycerin. Při provádění těchto postupů byly získány stejné výsledky.

Příklad 8

Do roztoku 20 ml ethanolu o koncentraci 96 objemových % a 1,1 ml 1 M kyseliny chlorovodíkové o teplotě —12 °C se po kapkách přidá za stálého míchání a chlazení 5 g roztoku hemoglobinu, stejného jako· v příkladu 1. Po skončeném přidávání je pH

2,9 a teplota —12 °C. Obsah ethanolu ve směsi stoupne na 80 objemových %. Hnědočerná směs se 10 minu/t odstředí při 27 000 g, čímž se získá 2,2 g černé pasty s obsahem 2,7 % sušiny a světle hnědý supernatant. Tento supematant má gelo-vltou konzistenci.

Do· supeirnatantu se po kapkách, tpřidá za stálého míchání a chlazení 70 ml chladného 96% eithanolu a pak 0,8 ml 40% vodného roztoku síranu amonného a 8 ml vody. Po skončeném přidávání je teplota —6 °C. Sraženina se oddělí odstředěním 10 minut •při 8000 g, čímž se získá 1,7 g bílé pasty s obsahem 36 % sušiny.

Příklad 9 g roztoku hemoglobinu, stejného jako v příkladu 1 o teplotě +8 °C se po kapkách přidá za stálého míchání do kádinky s obsahem 0,80 ml 1 M kyseliny chlorovodíkové, 2 ml vody a 10 ml 96% ethanolu o teplotě +2 °C. Po skončeném přidávání je teplota -J-8 °C a pH 2,5. Obsah ethanolu ve směsi stoupne na 67 objemových %.

Hnědočerná směis se odstředí 10 minut při 2,7 0010 g při teplotě Ц-8°С, čímž se získá černá pasta s obsahem 0,06 g sušiny a žlutý supeirnatant.

Ze supematantu se vysráží obdobným způsobem Jako v příkladu 5 světle šedá sraženina, která se oddělí odstředěním a usuší, čímž se získá 0,27 g sušiny.

Příklad 10 g roztoku hemoglobinu stejného- složení jako v příkladu 1 o teplotě —12 °C se po· kapkách přidá za stálého míchání a chlazení do kádinky s obsahem 0,35 ml 2 M kyseliny chlorovodíkové a 5 ml absolutního eithanolu při teplotě —12 °C. Po skončeném přidávání je teplota —12 °C a pH 2,9.

Obsah ethanolu ve směsi je 71 objemových %. Hnědočerný roztok se odstředí 10 minut při 27 000 g při teplotě —12 °C, číirnž se získá černá pasta s obsahem 0,07 g sušiny a světle žlutý supernatanit.

Do supematantu se za stálého míchání a chlazení po kapkách přidá při teplotě —18 st. Celsia 15 ml 90% ethanolu. Po skončeném přidávání je teplota směsi —18 °C. Obsah eithanolu ve směsi stoupne na 86 objemových %.

Po 10 minutách stání při teplotě —18 °C se směs odstředí stejně jako shora, čímž se získá černá a červená pasta s obsahem 0,08 g sušiny.

Slabě světle žlutý supematant se rozdělí na dva stejné díly.

Z prvního dílu ise stejným způsobem jako v příkladu 5 získá světle šedá až bílá sraženina, která se odstředí a usuší, čímž se získá 0,11 g sušiny.

Druhý díl se podrobí ultrafiltraci (na přístroji Amicon Diaflo-Cell) při použití membrány pM 10 při teplotě —8 ^qC. Koncentrát se smísí s 10 ml vody při teplotě 0°C a zfiltruje. Roztok bílkovin, zbavený tímto způsobem ethanolu se neutralizuje a vysuší, čímž se získá 0,06 g sušiny.

Příklad 11

Výchozí látkou byl roztok hemoglobinu, připravený stejně jako· v příkladu 1 s obsahem 12 % cukru. К 'tomuto roztoku se po kapkách přidá 0,45 ml 1 M kyseliny chlorovodíkové v 5 ml 96% ethanolu (objemová %) při teplotě —10 °C za istáléiho· míchání a chlazení do nádoby, která obsahuje roztok 4 g hemoglobinu, zchlazený na —10 st. Celsia. Pak se přidá 1,4 ml 30% chloridu sodného ve formě vodného roztoku a 30 ml 40% ethanolu (objemová %) při teplotě —l,0°C. Po skončeném přidávání je teplota směsi —10 °C, pH 3,45 a obsah ethanolu 45 objemových %. Hnědavá isměs se ro-zdělí na dva stejné díly.

V druhé části směsi se přidá 1 ml suspenze 0,2 g buněčných stěn červených kr200200

I vlnek ve 45% ethanolu (objemová %) při pH 3,45 a při teplotě — 10'0 po kapkách za stálého míchání a hrubá sraženina se oddělí filtrací. Na filtračním papíře zůstane vločkovitá černá .pastovitá sraženina, filtrát je světle žlutý a čirý.

Z filtrátu se vysráží při . pH 7,5 bílá sraženina, z níž se po odstředění a usušení získá C,13 g sušiny.

Ze druhé části směisi se po filtraci stejným způsobem získá hnědý filtrát, z něhož se vysráží při pH 7,5 černohnědá sraženina s obsahem C,16 g sušiny.

Suspenze buněčné drti krevních buněk měla obsah sušiny 3C % a byla získána z krve odstředěním a slitím plazmy.

Příklad 12

Do nádoby s obsahem 4 g roztoku hemoglobinu při teplotě —5 °C se přidá C,6 ml 1 M kyseliny chlorovodíkové v 8 ml 96% ethanolu (objemová %) po kapkách za stálého míchání při teplotě —5 °C. Po· skončeném přidávání byla 'teplota — 5 °C a hodnota pH 3,C5. Obsah ethanolu byl 72 objemových '%.

Hnědočerná směs ise odstředí ipři 9000 g po· dobu 5 minut, čímž se získá černá pasta s obsahem 0,09 g sušiny a hnědý supernatant. K supernatantu se · jpridá 30· ml 4θ% ethanolu (objemová %) při teplotě —5·· °C při pH 3,05. Supernatant se pak rozdělí na dva stejné díly.

K jednomu dílu supernatantu se přidá po kapkách za stálého míchání 1 ml suspenze s obsahem 0,3 g fragmentů buněčných stěn ve 45% ethanolu /objemová %) při pH 3,05. Pak se sníží pH na 2,8 kyselinou chlorovodíkovou a zvýší se na 3,4 hydroxidem sodným. Pak se suspenze zfiltruje přes filtrační papír, na němž zůstane tmavě hnědá pastovitá sraženina, filtrát je světle žlutý, postup se provádí při teplotě — 5°C a · při pH 3,4. .·

Z ' filtrátu se vysráží při pH 7,5 bílá sraženina s obsahem 0,14 g' sušiny.

Ke druhé části supernatantu se přidá 1 ml 45% ethanolu (objemová %), pH se· sníží a znovu zvýší stejně jako· svrchu a po filtraci se 'tímto 'způsobem získá hnědý filtrát, z něhož se vysráží hnědá sraženina při pH 7,5. Tato sraženina obsahuje 0·,18 g sušiny.

Buněčné fragmenty byly připraveny působením ethanolu a vody ve stejném poměru na suspenzi krevních buněk při pH 5,15 a při teplotě —4°C, takže došlo· k rozrušení buněčné membrány. Fragmenty buněčné membrány byly odděleny odstředěním a opakovaně promyty vodou, čímž byla získána šedohnědá pastovitá sraženina s obsahem 23 % sušiny a 8 % sušiny ze suspenze krevních buněk.

Příklad 13

Ke 2 g suspenze krevních buněk, získané odstředěním krve ipři teplotě 0 °C se ;po kapkách přidá za stálého· chlazení a. míchání roztok 1,10 ml 1 M kyseliny chlorovodíkové, 3,0 ml vody, 13 ml 96% ethanolu (objemová %) a 1,8 ml 30% chloridu sodného ve vodném roztoku . při teplotě —10 °C. Po skončeném. přidávání je teplota —5 °C a hodnota pH 3,2. Obsah ethanolu ve směsi je 60 objemových %. Hnědočerná směs se odstředí při 9000 g po dobu 10^! minut, čímž se získá černá pastovitá usazenina s obsahem 0,19 g sušiny a mimoto žlutý · supernatant.

Ze supernatantu se vysráží při pH 7,5 světle šedá .sraženina, z níž .se po odstředění získá šedý pastovitý. produkt s obsahem 0,43 g sušiny.

Claims (8)

1. Způsob zpracování ' kapalin s obsahem krevních složek, a 'to sloučenin železa, pocházejících z hemoglobinu, bílkoviny, převážně globinu, vyznačující se tím, že se kapalina zchladí na teplotu 0 až —20 '°C, přidá se kapalný ethanol až do obsahu 90 objemových %, vztaženo¹ ' na celkové množství kapaliny, pH kapaliny se upraví na hodnotu 4,5 až 1, s výhodou na hodnotu 2,5 až 4,5 při u-cdržtování shora uveedeTié teploty, přičemž se s výhodou usnadní vznikající shlukování sloučenin železa přidáním anorganických solí sodíku nebo' draslíku, například chloridu sodného, například ve formě vodných roztoků, a vytvořené shluky sloučenin železa se oddělí, přičemž globin zůstává v roztoku, z něhož se izoluje.

2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se pH ve směsi s obsahem. shluků sldučenin železa před jejich oddělením ne- vynalezu bo po jejich oddělení zvýší na nejvýš 4,5 a frakce krevních bílkovin, vysrážená spolu se sloučeninami železa nebo s adsorbovanými sloučeninami železa se ze směsi oddělí.

3. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se ke směsi obsahující shluky sloučenin železa přidá před nebo po jejich oddělení malé množství dřeně červených krvinek a takto· vzniklý vyvločkovaný materiál s obsahem- zlomků buněčných membrán spolu se sloučeninami železa, které jsou na tyto fragmenty absorbovány st ze směsi oddělí.

4. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se 0 až 20' % ethanolu nahradí glycerinem, Tthylenglykolem, methanolem, acetonem, Tthylacetátem, propanolem, isopropanolTm nebo butanolem.

.

5. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se sloučeniny železa ze směsi izolují odstředěním, pomocí cyklónu, filtrací, ultrafiltrací, usazením· nebo absorpcí na objemný nebo· pevný materiál.

6. Způsob podle bodů 1 až 3, vyznačující se tím, že se bílkovina z roztoku izoluje vysrážením, adsor.pcí na pevný nebo objemný materiál, ultrafiltrací, odpařením roztoku, vysušením nebo lyofilizací.

7. Způsob podle bodů 1 a 2, vyznačující se tím, že· se zvýší obsah ethanolu vs směsi s obsahem shluků sloučenin železa na 90 objemových % před nebo po jejich oddělení, s výhodou za současného . snížení 'teploty a takto· vysrážená frakce krevních bílkovin s obsahem sloučenin železa ve formě směsí nebo v adsorbované ' formě se ze směsi oddělí.

8. Způsob podle bodu 1 . . vyznačující se tím, že se kapalina před přidáním ethanolu a snížením pH zchladí na 0 až —2O°C a na této teplotě se udržuje v průběhu dalšího zpracování.