CN86108516A - 干粉菌苗的生产方法 - Google Patents
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Abstract
一种制造干粉菌苗的生产方法,即在菌苗生产过程中,经过灭活处理的菌液通过雾化干燥装置,使其在高温下脱水生成出仍保持该菌液抗原活性的干粉苗,还可制成联合苗。它们的效力不低于或高于相应的液体苗或盐析冻干制成的干粉苗。
Description
本发明涉及灭活菌苗生产的一种新方法。
迄今为止,所有的灭活菌苗不论在国内或国外都是液体的,而液体菌苗剂量大,不利于制造多联菌苗,也不便于保存、运输和使用。现在的防疫多用菌苗予防为主,结果菌苗的种类不断增多,予防接种的方法和程序复杂化,不仅畜主在经济和劳力上难于承受,防疫人员也深感负担繁重,强力要求用多联菌苗。但是液体灭活菌苗不利于制造成多联苗,即使制成多联苗由于剂量太大,也难于使用。这样,实际防疫工作中,在缺少多联苗的情况下,往往不得不采用把各种单价菌苗同时注射于动物体的不同部位,或事先将各种菌苗混合好再注射,以弥补无多联苗的不足。
从上所述看来,多联苗是发展方向,但多联苗生产技术复杂,况且由于至今灭活苗都是液体的,不论在生产和使用上都存在着一些不足之处,如:1)多联苗所包含的成分是固定的,不管防疫上是否需要,在制造时都要包括进去,不能根据需要来选用,不仅增加了不必要的生产工序和成本,也造成使用者的多余负担;2)菌苗的效力试验需用的动物多,每种需9-10只,三联苗需27-30只,五联苗需45-50只,联合的种类越多,使用的动物也越多,以致于难检验;3)配成多联苗前缺少可靠的有效的指标,因此配好后,如遇某一种类效力不合格,就会影响整批菌苗,联合的种类越多,出现这种情况的可能性越大,以致难于实用;4)由于菌苗都是液体的,不仅生产、保存、运输不便,更不利于防疫使用,剂量偏大对动物的反应也重;5)免疫期较短,一般为六个月,如遇多联苗所予防的疾病季节不同时,即难发挥多联苗的作用,从而失去多联苗的价值和意义。
为了改变这种传统的液体剂型,我们研究成功了固体灭活菌苗,亦即称为干粉菌苗(《家畜传染病》1981.3∶1~2)。这是一个很大的改变,但制造干粉菌苗的关键工艺在于菌液的脱水干燥,在当时是采用盐析提取后再冻干的方法,虽然大量生产,但这种方法生产工艺层次多,而且需要大量的硫酸铵,因此需要探索更适于工业化生产的方法。
本发明人以寻找新的脱水干燥方法,以新的生产方法来制取干粉菌苗作为目的,要求这种制苗的生产工艺过程简单,脱水效果好,适合自动化连续化大生产的需要;而且,生产出来的干粉菌苗的效力不低于原液体菌苗或盐析冻干生产法制造的干粉菌苗(以下简称盐析冻干菌苗)的效力,以便于按各地的需要配制成所需成分的多联干粉菌苗。
本发明人发现,采取雾化干燥的方法,即在适当的温度下对灭活的菌液进行雾化干燥,可以制得合格的干粉菌苗。由于菌液中的抗原性物质是热敏性物质,温度的不适当的变化会导致抗原性的丧失,所以雾化时的温度选择就成为制造干粉苗的关键所在,本发明人通过大量的试验,很好的解决了这一问题。
关于培养方法,各种菌液的培养方法均采用原液体灭活苗(以下简称液体菌苗)的菌液的培养方法,即可以通过各自的工艺进行,并且它们的固体培养基或液体培养基可以使用,液体培养、静止培养、振荡培养、通气培养和深层培养等也按各自的需要而采用,培养温度、培养时间及培养所需的pH范围均依各种菌的需要而定。
培养结束后菌液的灭活方法也采用制备液体菌苗中相同的灭活方法进行,灭活后菌液也需按液体菌苗同样进行无菌检验。
我们喷干菌液使用的雾化干燥装置,其最大干燥量为1小时7.5公斤水,进气温度为300℃,出口温度为90℃。
我们喷干菌液时使用的温度是:进口温度为180~220℃,出口温度为80~90℃。在这种条件下每小时可干燥菌液3000毫升。其方法是:首先加热雾化干燥装置,使进口温度达180~220℃,出口温度达80~90℃,当出口温度达到80~90℃时,即加入蒸馏水,调节水的流量使出口温度稳定在80~90℃,约20分钟,然后以无菌手续导入准备干燥的菌液,并注意调节菌液的流量以控制出口温度在80~90℃,菌液流完后,加入适量蒸馏水,然后使进口温度下降而维持出口温度仍在80~90℃,待进口温度降到130℃,停止加水,降到80℃停机,收集干燥的菌粉。
如用雾化干燥法研制成梭状芽胞杆菌属的气肿疽、快疫、羔羊痢疾、猝狙、肠毒血症、黑疫、肉毒中毒和破伤风等干燥菌苗,这些苗可以单独使用,也可以依防疫的需要选取其中的某几种配制成各种多联苗。此外,还制成了丹毒杆菌属的猪丹毒,巴氏杆菌属的猪肺疫、禽霍乱、牛出败和支原体类微生物的山羊传染性胸膜肺炎也制成了干粉菌苗,取得了很好的效果,各种干粉苗的收获量见表1。
本发明人采用以下方法测定干粉苗的效力,即将同一菌液分为两部分,其一用盐析冻干法制的菌苗作为对照,另一分菌液用雾化干燥法制成干粉苗(以下称雾化干燥菌苗)计算出与对照苗相等的抗原量进行菌苗的效力试验,经过十一种菌苗三十批试验都是用最小免疫剂量试验的,经数理统计学方法分析P>0.05证明两种方法制成的干粉菌苗差异不显著,表明本发明人采用雾K;/K干燥的温度进行菌苗的雾化干燥不影响菌苗的抗原性,完全可用于干粉苗的大生产。
雾化干燥法在制造干粉菌上有许多优点:
1.雾化干燥法适合机械化连续化大生产,并给进一步自动化生产创造了有利条件。
2.雾化干燥法效率高,不引起抗原变性,保证菌苗质量。
3.工序简便,可直接把培养好的菌液雾化干燥,省去制备盐析冻干菌苗中所必需的过滤、提取、分离、浓缩和粉碎等工序,节省了劳力。
4.全密闭不易污染杂菌。
5.使生产成本大幅度下降。
6.干粉苗的质量好:表现在(1)生产一头剂液体四联苗的培养基可制出3-5头剂相应的干粉菌苗。(2)以四联苗为例,按总保护率计算干粉苗比液体苗略有提高。(3)保存期长,八种梭菌干粉苗在普通冰箱和自然室温中保存五年,长的达五年十一个月效力未减,仍保持原菌苗的效价,对生产和使用都有利。(4)免疫期长,便于安排防疫时间,充分发挥多联苗的效果。(5)一针多防,节省劳力,减少动物因注射骚扰而引起的种种障碍。(6)剂量小反应轻。(7)好运输管理。
实施例1
气肿疽干粉菌苗
经灭活处理的气肿疽梭菌(Cl.Chauvoei)菌液4400毫升,使用丹麦安海达诺试验室一号喷雾干燥装置进行喷雾干燥,具体操作步骤为:首先加热雾化干燥装置,使进口温度达220℃,出口温度达90℃。当出口温度达到90℃时,即加入蒸馏水,调节水的流量使出口温度稳定在90℃,约20分钟,然后以无菌手续导入准备干燥的菌液,并注意调节菌液的流量控制出口温度在90℃,菌液流完后,加入适量蒸流水,然后使进口温度下降而维持出口温度仍在90℃,待进口温度降到130℃,停止加水,降到80℃停机,收集到干燥的菌粉108克。效检动物为海猪,免疫剂量:每毫升20%氢氧化铝胶盐水中含干粉苗10毫克,经攻毒,免疫动物保护4/4,对照全死。
实施例2
快疫干粉菌苗
经灭活处理的腐败梭菌(Cl.Septicum)菌液2300毫升,使用丹麦安海达诺试验室一号喷雾干燥装置进行喷雾干燥,具体操作步骤同实施例1。唯进口温度为190℃,出口温度为90℃,最后收得干燥菌粉27.4克。效检动物为家兔,免疫剂量:每毫升20%氢氧化铝胶盐水中含干粉苗7毫克,经攻毒,免疫动物保护3/3,对照全死。
实施例3
羔羊痢疾干粉菌苗
经灭活处理的B型魏氏梭菌(Cl.Welchii)菌液2500毫升,使用丹麦安海达诺试验室一号喷雾干燥装置进行喷雾干燥,具体操作步骤同实施例1。唯进口温度为200℃,出口温度为90℃,最后收得干燥菌粉123克。效检动物为家兔,免疫剂量:每毫升20%氢氧化铝胶盐水中含干粉苗4毫克,经攻毒,第一次免疫动物保护2/4,第二次免疫动物保护3/4,对照全死。
实施例4
猝狙干粉菌苗
经灭活处理的C型魏氏梭菌(Cl.Welchii)菌液2000毫升,使用丹麦安海达诺试验室一号喷雾干燥装置进行喷雾干燥,具体操作步骤同实施例1。唯进口温度为200℃,出口温度为90℃,最后收得干燥菌粉110克。效检动物为家兔,免疫剂量:每毫升20%氢氧化铝胶盐水中含干粉苗10毫克,经攻毒,免疫动物保护4/4,对照全死。
实施例5
肠毒血症干粉菌苗
经灭活处理的D型魏氏梭菌(Cl.Welchii)菌液1390毫升,使用丹麦安海达诺试验室一号喷雾干燥装置进行喷雾干燥,具体操作步骤同实施例1。唯进口温度为210℃,出口温度为80℃,最后收得干燥菌粉63克。效检动物为家兔,免疫剂量:每毫升20%氢氧化铝胶盐水中含干粉苗0.2毫克,经攻毒,免疫动物保护4/4,对照全死。
实施例6
黑疫干粉菌苗
经灭活处理的B型诺威氏梭菌(Cl.Novyi)菌液1500毫升,使用丹麦安海达诺试验室一号喷雾干燥装置进行喷雾干燥,具体操作步骤同实施例1。唯进口温度为200℃,出口温度为90℃,最后收得干燥菌粉79.5克。效检动物为家兔,免疫剂量:每毫升20%氢氧化铝胶盐水中含干粉苗0.75毫克,经攻毒,免疫动物保护4/4,对照全死。
实施例7
肉毒中毒干粉菌苗
经灭活处理的肉毒梭菌(Cl.Botulinum)菌液2200毫升,使用丹麦安海达诺试验室一号喷雾干燥装置进行喷雾干燥,其具体操作步骤同实施例1。唯进口温度为190℃,出口温度为80℃,最后收得干燥菌粉112克。效检动物为家兔,免疫剂量:每毫升20%氢氧化铝胶盐水中含干粉苗0.32毫克,经攻毒,免疫动物保护4/4,对照全死。
实施例8
破伤风干粉菌苗
经灭活处理的破伤风梭菌(Cl.Tetani)菌液900毫升,使用丹麦安海达诺试验室一号喷雾干燥装置进行喷雾干燥,具体操作步骤同实施例1。唯进口温度为210℃,出口温度为90℃,最后收得干燥菌粉46.5克。效检动物为家兔,免疫剂量:每毫升20%氢氧化铝胶盐水中含干粉苗0.22毫克,经攻毒,免疫动物保护3/3,对照全死。
实施例9
猪丹毒干粉菌苗
经灭活处理的猪丹毒杆菌(Erysipelothrix)菌液1000毫升,使用丹麦安海达诺试验室一号喷雾干燥装置进行喷雾干燥,具体操作步骤同实施例1。唯进口温度为210℃,出口温度为90℃,最后收得干燥菌粉34克。效检动物为猪,免疫剂量:每毫升20%氢氧化铝胶盐水中含干粉苗106.1毫克,经攻毒,免疫动物保护5/5,对照全死。
实施例10
猪肺疫干粉菌苗
经灭活处理的猪源多杀性巴氏杆菌(P.multocida)菌液1000毫升,使用丹麦安海达诺试验室一号喷雾干燥装置进行喷雾干燥,具体操作步骤同实施例1。唯进口温度为210℃,出口温度为90℃,最后收得干燥菌粉29.5克。效检动物为猪,免疫剂量:每毫升20%氢氧化铝胶盐水中含干粉苗61.6毫克,经攻毒,免疫动物保护5/5,对照全死。
实施例11
禽霍乱干粉菌苗菌
经灭活处理的禽源多杀性巴氏杆菌(P.multocida)菌液4000毫升,使用丹麦安海达诺试验室一号喷雾干燥装置进行喷雾干燥,具体操作步骤同实施例1。唯进口温度为205℃,出口温度为90℃,最后收得干燥菌粉97克。效检动物为鸡,免疫剂量:每毫升20%氢氧化铝胶盐水中含干粉苗50毫克,经攻毒,免疫动物保护3/4,对照全死。
实施例12
牛出败干粉菌苗菌
经灭活处理的牛源多杀性巴氏杆菌(P.multocida)菌液4500毫升,使用丹麦安海达诺试验室一号喷雾干燥装置进行喷雾干燥,具体操作步骤同实施例1。唯进口温度为220℃,出口温度为90℃,最后收得干燥菌粉116克。效检动物为家兔,免疫剂量:每毫升20%氢氧化铝胶盐水中含干粉苗13毫克,经攻毒,免疫动物保护3/4,对照全死。
实施例13
山羊传染性胸膜肺炎干粉菌苗
经灭活处理的山羊支原体(Mycoplasma Capri)菌液3000毫升,使用丹麦安海达诺试验室一号喷雾干燥装置进行喷雾干燥,具体操作步骤同实施例1。唯进口温度为200℃,出口温度为90℃,最后收得干燥菌粉83克。效检动物为山羊,免疫剂量:每毫升20%氢氧化铝胶盐水中含干粉苗138.4毫克,经攻毒,免疫动物保护2/3,对照全死。
本发明所指菌苗为菌(疫)苗的统称。
表1.各种干粉菌苗的收获量
菌苗 批号 雾化干燥mg/ml 盐析冻干mg/ml 雾化/冻干
气肿疽 1 24.5 45.1 0.54
2 21.4 52.9 0.40
快疫 1 27.4 13.3 2.06
2 34.25 11.33 3.02
3 21.26 9.13 2.33
4 33.3 54.8 0.61
5 19.6 5.5 3.56
羔羊痢疾 1 49.2 27.33 1.8
2 47.7 30.75 1.55
3 45.5 27.29 1.67
4 41.5 22.14 1.87
猝狙 1 55.0 11.33 4.85
2 48.25 5.5 8.77
3 64.0 13.8 4.64
4 39.0 15.0 2.60
肠毒血症 1 60.5 34.0 1.78
2 55.0 22.61 2.43
3 54.0 45.0 1.20
4 45.0 32.8 1.38
黑疫 1 58.57 21.4 2.74
2 62.0 32.6 1.90
续表1
菌苗 批号 雾化干燥mg/ml 盐析冻干mg/ml 雾化/冻干
肉毒中毒 1 51.0 39.75 1.28
破伤风 1 43.5 23.6 1.84
猪丹毒 1 27.5 22.3 1.29
2 34.0 25.85 1.32
3 37.5 21.46 1.75
猪肺疫 1 29.5 17.25 1.71
2 28.0 39.45 0.71
3 28.5 25.0 1.14
牛出败 1 21.75
禽出败 1 33.33 21.69 1.52
2 44.41 23.07 1.93
山羊传染性 1 27.62
胸膜肺炎 2 27.67
表2 雾化干粉菌苗的效力试验
菌苗 批号 雾化干燥苗 冷冻干燥苗
剂量(mg)动物 保护 剂量(mg)动物 保护
快疫 1 7.0 家兔 3/3 3.5 家兔 4/4
2 15.0 3/3 5.0 3/4
3 4.0 4/4 2.0 4/4
4 5.0 3/4 5.0 4/4
5 5.4 3/4 1.5 3/4
羔羊痢疾 1 4.0 家兔 2/4 3/4 2.0 家兔 3/4 2/4
2 4.0 3/4 2.0 3/4
3 3.5 3/4 2.0 3/4
4 4.0 4/4 2.0 4/4
猝疽 1 10.0 家兔 4/4 2.0 家兔 4/4
2 3.0 3/4 1.0 3/4
3 1.0 3/4 0.25 3/4
4 4.0 4/4 1.5 4/4
肠毒血症 1 0.1 家兔 3/4 0.05 家兔 3/4
2 0.2 3/4 0.1 4/4
3 0.2 4/4 0.1 4/4
4 0.2 4/4 0.15 4/4
黑疫 1 2.74 家兔 3/4 0.5 家兔 4/4
2 1.0 4/4 0.5 4/4
肉毒中毒 1 0.32 家兔 3/4 0.25 家兔 4/4
续表2
菌苗 批号 雾化干燥苗 冷冻干燥苗
剂量(mg)动物 保护 剂量(mg)动物 保护
破伤风 1 0.22 家兔 3/3 0.1 家兔 3/3
气肿疽 1 10.0 海猪 4/4 20.0 海猪 4/4
2 11.0 4/4 26.5 4/4
猪丹毒 1 89.4 猪 4/5 2.32 小鼠 3/5
2.64 5/5
2 106.1 5/5 2.69 5/5
5.83 5/5
3 117 5/5 2.24 4/5
4.47 5/5
禽出败 1 56.0 鸡 2/4 37.0 鸡 2/4
2 75.3 4/4 39.0 3/4
猪肺疫 1 61.6 猪 5/5 14.5 兔 0/4
2 58.5 5/5 33.0 2/4
3 59.5 5/5 42.0 3/4
牛出败 1 13 家兔 3/4
山羊传染性 1 138.0 山羊 2/3 液体苗 山羊 2/3
胸膜肺炎 2 138.4 2/3 液体苗 2/3
Claims (7)
1、一个生产灭活干粉菌苗的方法,其特征在于生产过程中微生物培养后经过灭活的菌液再通过于一种雾化干燥装置,在不破其中抗原物质特性的温度下使之脱水干燥而制成干粉菌苗,还包括由上述苗的组成的联合苗。
2、如权利要求1所述的方法,其特征在于方法中的不破坏抗原物质特性的温度控制在180~220℃。
3、如权利要求1所述的方法,其特征在于方法中所使用微生物是有梭状杆菌属。
4、如权利要求1所述的方法,其特征在于方法中的微生物是丹毒杆菌属。
5、如权利要求1所述的方法,其特征在于方法中的微生物是巴氏杆菌属。
6、如权利要求1所述的方法,其特征在于方法中的微生物是支原体。
7、如权利要求1及2所述的方法,其特征在于方法中的微生物是支原体内的山羊支原体。
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CN 86108516 CN1008059B (zh) | 1986-12-15 | 1986-12-15 | 干粉菌苗的生产方法 |
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---|---|---|---|---|
CN103127495A (zh) * | 2013-01-28 | 2013-06-05 | 重庆市畜牧科学院 | 羊巴氏杆菌活苗与山羊丝状支原体肺炎灭活苗及其制备 |
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1986
- 1986-12-15 CN CN 86108516 patent/CN1008059B/zh not_active Expired
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CN103127495A (zh) * | 2013-01-28 | 2013-06-05 | 重庆市畜牧科学院 | 羊巴氏杆菌活苗与山羊丝状支原体肺炎灭活苗及其制备 |
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