CN2735340Y - Sars抗体筛选多肽芯片的制备与检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本实用新型涉及一种SARS冠状病毒(SARS)多肽蛋白芯片和快速检测试剂盒，其中采用蛋白芯片技术阵列固定SARS病毒蛋白抗原决定族部分的多肽片段，直接检测SARS病人血清中特异性的抗SARS病毒的IgG或IgM抗体。该检测芯片可以同时测定和筛选SARS病人血清中18种特异的IgG或IgM抗体，可用于临床上SARS病人的快速筛查。该芯片采用酶标显色技术，肉眼可直接观察结果，不需特殊仪器设备，适宜于现场筛选检查。

Description

SARS抗体筛选多肽芯片的制备与检测试剂盒

所属领域

本实用新型涉及一种SARS冠状病毒性肺炎(非典型性肺炎，SARS)抗体多肽蛋白芯片的制备和快速筛选检测试剂盒，是将SARS病毒蛋白抗原决定族部分的多肽片段阵列固定，制成蛋白芯片，用于检测SARS病人血清中抗体。该检测芯片及其试剂盒采用18个特异的SARS多肽片段，可以筛选SARS病人血清中可能出现的特异的IgG或IgM抗体，可用于临床上SARS病人的快速筛查。该芯片采用酶标显色技术，肉眼可直接观察结果，不需特殊仪器设备，适宜于现场筛选检查。

背景技术

历史上传染病的大规模爆发，它不仅夺去了数以亿计的人的生命，并在短期内给社会经济造成严重破坏。历史上大规模爆发的传染病，曾给人类社会带来巨大创痛。公元6世纪，在东罗马帝国爆发的瘟疫肆虐了50年之久，造成上亿人死亡；1348～1351年在欧洲爆发的黑死病，三年时间夺去了6200万人的生命，几乎占当时欧洲人口的1/4；1918年9月～1919年6月，在美国爆发的流感，10个月内造成世界范围内4000万人以上的死亡；1980年后出现的艾滋病迄今已经夺去超过2500万人的生命......。

2003年年初，中国内地24个省区市先后发生非典型肺炎(SARS冠状病毒性肺炎，Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS；严重急性呼吸综合症)疫情，共波及266个县和市(区)，累计报告非典型肺炎临床诊断病例5327例，治愈出院4959例，死亡349例。这场突如其来的疫病灾害，严重威胁了人民健康和生命安全，也影响了我国经济发展、社会稳定和对外交往，造成了巨大损失，据远东经济评论估计，由SARS引起的直接经济损失超过39亿美元。

因此，对爆发性SARS传染病的控制，早期的明确诊断非常关键。这种早期快速、大规模的筛选技术，是预防和控制爆发性SARS冠状病毒性肺炎的重要手段，有了这些手段，就可以及时隔离、治疗确诊病例，并及时排除疑似病例、减少被隔离的人数，较少经济损失。

SARS冠状病毒的检测主要有两大类：

1.RT-PCR直接检测SARS病毒

通过逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)可检查出病人各种标本如血、便、呼吸道分泌物或组织中的SARS冠状病毒(SARS-CoV)特有的RNA。有效的阳性PCR结果提示标本存在SARS-CoV的基因物质核糖核酸(RNA)。

2.灭活SARS病毒直接检测病人血清抗体

在感染过程中，出现不同类型的抗体(IgM和IgG)，抗体水平也发生变化。感染的早期可能测不到抗体。SARS发病1-2周后，可在血清出现可检测到的抗体，疾病治愈后通常仍能测到IgG。SARS抗体的检测主要有以下方法：

——酶联免疫吸附分析(ELISA)：该试验可测SARS病人血清IgM和IgG的混合物，并可能在发病后21天左右产生阳性结果。

——免疫荧光分析(IFA)：这需要把SARS-CoV感染的细胞固定在显微镜的载玻片上；病人抗体与病毒抗原结合，然后用免疫荧光显微镜测由免疫荧光素标记的抗人IgG或IgM或两者的二抗。发病后约10天IFA产生典型的阳性结果。通过病人血清连续滴定，可对结果进行定量。

现有SARS病原体或抗体检测技术存在以下不足：

1)RT-PCR检测方法，尽管现存的PCR试验有时高度敏感，但其并不能确定地排除病人SARS病毒的存在。反之，实验室污染的标本可导致假阳性结果。

2)酶联免疫吸附分析和免疫荧光分析，均需要病原体的抗原物质，因此对SARS病毒的采集和培养相当困难，只有在极少数实验室才能完成。基于该原因，利用病原体的检测方法很难在现场使用。

为了克服现有检测技术的缺陷和不足，本发明采用SARS病毒蛋白抗原决定族部分的多肽片段作为固定相，制成蛋白芯片，集成检测筛选SARS抗体。本发明收集来18种SARS多肽，可以同时筛选或检测病人体液中的IgG和IgM抗体，由于采用的酶标显色技术，还可以实现快速的检测。

发明内容

本实用新型提供了一种SARS冠状病毒(SARS)多肽蛋白芯片和检测试剂盒。

一方面，本实用新型提供了一种SARS冠状病毒多肽蛋白芯片，它包括：

(a)膜片，所述的膜片是硝酸纤维膜或尼龙膜；

(b)阵列式固定在所述膜片上的SARS病毒蛋白抗原决定族部分的多肽片段。

在另一优选例中，所述的SARS病毒蛋白是S蛋白。

在另一优选例中，所述的SARS病毒蛋白是M蛋白。

在另一优选例中，所选择的SARS病毒蛋白是N蛋白。

在另一优选例中，所述的SARS病毒蛋白抗原决定族部分的多肽片段选自下组：

N1多肽：对应于N蛋白第21-44位，序列为PTDSTDNNQNGGRNGARPKQRRPQ；

N2多肽：对应于N蛋白第138-160位，序列为GALNTPKDHIGTRNPNNNAATVL；

M1多肽：对应于M蛋白第3-22位，序列为DNGTITVEELKQLLEQWNLV；

M2多肽：对应于M蛋白第145-166位，序列为RGHLRMAGHSLGRCDIKDLPKE；

M3多肽：对应于M蛋白第190-210位，序列为SGFAAYNRYRIGNYKLNTDHA；

S1多肽：对应于S蛋白第34-54位，序列为TSSMRGVYYPDEIFRSDTLYL；

S2多肽：对应于S蛋白第94-113位，序列为KSNVVRGWVFGSTMNNKSQS；

S3多肽：对应于S蛋白第197-216位，序列为YKGYQPIDVVRDLPSGFNTL；

S4多肽：对应于S蛋白第273-293位，序列为TDAVDCSQNPLAELKCSVKSF；

S5多肽：对应于S蛋白第297-316位，序列为KGIYQTSNFRVVPSGDVVRF；

S6多肽：对应于S蛋白第332-351位，序列为TKFPSVYAWERKKISNCVAD；

S7多肽：对应于S蛋白第436-455位，序列为YNYKYRYLRHGKLRPFERDI；

S8多肽：对应于s蛋白第540-559位，序列为PSSKRFQPFQQFGRDVSDFT；

S9多肽：对应于S蛋白第731-753位，序列为CANLLLQYGSFCTQLNRALSGIA；

S10多肽：对应于S蛋白第758-780位，序列为RNTREVFAQVKQMYKTPTLKYFG。

在另一优选例中，所述的膜片是硝酸纤维素膜，并且所述的硝酸纤维素膜固定于玻片或培养板上；或者所述的膜片是尼龙膜，所述的尼龙膜附着在玻片上。

在另一优选例中，所述的膜片是10mm×12mm或1.5mm×2.5mm的硝酸纤维膜。

在另一优选例中，所述的膜片上同时固定有以下SARS病毒蛋白多肽片段：N1、N2、M1、M2、M3、S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、S8、S9、S10。

在另一优选例中，在膜片上还设有阳性对照阴性对照点样区，并且在所述的阳性对照阴性对照点样区分别固定有人Ig质控血清、人IgG、羊抗人IgG、BSA。

另一方面，本实用新型还提供了一种SARS抗体检测试剂盒，其特征在于，它含有本实用新型上述的SARS冠状病毒多肽蛋白芯片和操作说明书。

本实用新型的芯片采用阵列固定SARS病毒蛋白抗原决定族部分的多肽片段，用来筛选SARS病人血清中IgG或IgM抗体，该SARS病毒多肽芯片制备与检测包括以下过程：

A)候选SARS病毒蛋白抗原的选择，并应用特定软件对SARS病毒蛋白进行抗原决定族的预测分析、合成多肽抗原片段；

B)多肽抗原阵列设计和固定，将SARS多肽阵列于玻片或硝酸纤维膜表面；

C)将芯片与被检血清孵育，让IgG或IgM与特异性的SARS多肽结合，再用荧光或酶标记的兔、羊、马等抗人IgG或IgM抗体与之反应，若被检血清中有相应的Ig存在，便在相应的SARS多肽位点出现被检信号。

在一优选例中，将18种SARS病毒蛋白多肽制成一种蛋白芯片，可以同时测定SARS病人血清中18种特异抗体，可用于临床上SARS病人的快速筛查。

在另一优选例中，芯片采用酶标显色技术，肉眼可直接观察结果。

本发明根据抗原抗体特异识别的原理，采用计算机预测抗原决定族的方法，提取SARS病毒表面蛋白的抗原决定族部分，合成多个相应的多肽片段。并将SARS病毒表面可能具有抗原决定族的多肽片段以阵列方式，以机器喷点或手工点样的方式排列在约10mm×12mm或1.5mm×2.5mm的硝酸纤维膜上，硝酸纤维膜片则固定在玻片、12孔培养板或6孔细胞培养板的孔底面，经固定处理后，加入被检的SARS病人的血清，经酶标显色，肉眼观察结果。

本发明采用了人工合成的抗原多肽，避免使用具有传染性的病毒作为检测抗原，可以在获得病毒基因序列后立即进行分析预测，合成抗原决定族多肽片段，可以在短时间内建立病毒的筛选方法。

以下根据附图和实施例详细说明本发明的具体实施方法。

图1.SARS病毒结构

图2.SARS蛋白抗原决定族分析结果

图3.SARS多肽芯片构造

图4.SARS多肽芯片检测结果的示意图

图5.SARS多肽筛选蛋白芯片试剂盒一个实例的示意图

图例

1  蛋白预测的Coil结构          9   固定在芯片上的人IgG、IgM

2  N-糖蛋白结构                10  质控位点(人Ig质控血清)

3  预测的抗原决定族结构        11  质控位点(人IgG)

4  与二抗连接的标记物          12  质控位点(羊抗人IgG)

5  羊抗人第二抗体              13  S7阳性

6  被检测的SARS抗体            14  S2阳性

(IgG，IgM)

7  固定在芯片上的多肽片段        15  S6阳性

8  芯片基片                      16  S10阳性

具体实施方法

1.SARS病毒蛋白多肽片段的选择

1)S蛋白

S蛋白(Spike蛋白)是膜蛋白(图1)，其构成病毒的包膜子粒，是病毒感染宿主细胞的主要成分。冠状病毒要感染细胞，首先要将其遗传物质RNA导入到宿主细胞中，这一过程主要是通过S蛋白来完成的。一个冠状病毒颗粒在膜上一般包括200个左右S蛋白分子，这些S蛋白的突起是其与受体相互作用和膜融合的关键部位。利用PSORT(蛋白质亚细胞定位预测软件，http：//psort.cbi.pku.edu.ch/)分析发现，此蛋白含有信号肽，位于13-14之间；含有跨膜区，位于1202-1218之间；膜拓扑结构分析表明该蛋白属于第一类膜蛋白(N端在外)；在亚细胞定位上此蛋白有67％的可能性是属于内质网或高尔基体蛋白，有22％的可能性为胞外蛋白。

2)M蛋白

M蛋白是冠状病毒外膜最主要的成分(图1)，尽管不同病毒的M蛋白在序列上变化很大，但在蛋白整体的化学性质上则存在很大的保守性。其一般特征是3个疏水域以及伴随交叉出现的亲水域。C端(M蛋白的一半左右)大部分为两性的氨基酸残基，但其末端为亲水氨基酸。利用PSORT分析：此蛋白含有3个跨膜区，位于21-37，50-66，79-95之间；膜拓扑结构分析表明该蛋白属于第3类膜蛋白，即整合膜蛋白，且C端位于病毒内部；在亚细胞定位上此蛋白有89％的可能性是属于分泌途径蛋白。

3)N蛋白

N蛋白是冠状病毒中另一种重要的结构蛋白(图1)。在冠状病毒颗粒中，N蛋白处于病毒颗粒的核心部分，以与基因组RNA结合的形式存在。N蛋白是结构蛋白质区第二大的编码蛋白，长度为423个氨基酸。

2.SARS病毒蛋白多肽免疫原性分析

SARS病毒表面具有多个主要多肽折叠部分，其中部分多肽可能为构成病毒壳蛋白的主要抗原多肽，可诱生中和抗体。因此可以应用蛋白质结构分析软件进行分析，预测蛋白质的抗原决定族部分(图2)。

应用分析软件对上述SARS蛋白序列进行分析，找出可能暴露在病毒细胞外的病毒蛋白部分，并应用抗原决定族分析设计相应抗原决定族多肽片段。

例如对S蛋白的抗原决定族的预测(图2)，图2选取了S蛋白的前300氨基酸进行分析。图中Pred表示二级结构预测结果，H是helix，E是sheet，C是螺旋结构或者环状结构1；Conf示二级结构预测的可信度，数字9表示最大，数字0表示最小。Loca表示残基位于表面还是内部的预测结果，h表示内藏，e表示外露。AA表示氨基酸残基，带虚线框3是预测的抗原决定簇，带实线框2的是N-glycosylation位点。所以，在螺旋结构，带虚线框，和带实线框比较密集的地方，可能就是潜在的抗原决定簇部分，截取抗原决定族部分的共11-20个氨基残基的多肽片段，进行合成。

多肽合成

SARS多肽的合成主要是根据Fmoc固相肽合成技术，仪器可选用EcosynD-3000 DNA合成仪(Eppendorf Biotronik Maintal)或Expedite 8909核酸合成系统(Applied Biosystem)，使用这些仪器合成，操作非常简单，只要在将试剂加到机器之前将溶剂加到氨基酸单体和激活体即可。在商用系统中，这些试剂均包装成试剂盒，按照操作说明操作即可。本发明所使用的多肽均为商业服务公司合成。

SARS多肽点样构建蛋白芯片

多肽芯片的制作采用标准玻片或6孔、12孔细胞培养板等为支撑物，玻片表面有醛基修饰，或粘贴硝酸纤维膜，在玻片的一段可以留有标签的位置，标签上有生产公司名称，芯片名称以及目前通用的条形码记录。多肽和阳性对照阴性对照点样区域位于膜的中央，其大小视探计数量和探针之间的间距而定。本案采取中密度点样技术，其点样区域在2×2.5cm左右，点直径2mm左右，点间距3mm左右。为减少点样的误差，一般每个探针重复2～4次，这种格式的固定有利于开发相应的分析软件和程序。

应用三维点样机器人点样法，是将预先制备好的SARS多肽溶液，通过由阵列点样机(arrayer)，准确、快速地将不同SARS多肽样品定量点样于经过硝酸纤维膜粘贴的玻片或培养板上，再经封闭、漂洗、干燥等过程制成SARS多肽蛋白芯片。点样的方式分两种，其一为接触式点样，即点样针直接与固相支持物表面接触，将SARS多肽样品留在固相支持物上；其二为非接触式点样，即喷点，它是以压电原理将蛋白质样品通过毛细管直接喷至固相支持物表面。点样机器人有一套计算机控制三维移动装置、多个打印/喷印头、一个减震底座，上面可放内盛蛋白探针的多孔板(384孔)和多个芯片。根据需要还可以有温度和湿度控制装置、针洗涤装置。打印/喷印针将探针从多孔板取出直接打印或喷印于芯片上。

标准化的SARS多肽溶液，一般用50mM PBS(pH7.0)调节到1mg/ml的浓度。稀释后将SARS多肽(3-10μl)加到微孔板内，启动点样机器人进行点样。高密度点样机(如Cartesian Technology公司的MicroSys 5100小型台式芯片工作站；PixSys 5500 PA Workstation)可以制造每平方厘米2500探针的芯片；而中密度点样机(喷印机)可以在每平方厘米上排列25-400个探针。为了防止点样的误差，一般SARS多肽需点样2-4次。

可以采用S&S公司的CAST Slides(Cat.No.10484181)将SuperCharge正电荷尼龙膜附着在玻片上，这种特殊的玻片综合了尼龙膜的高亲和力和玻片刚性的优点，而FAST Slides(Cat.No.10484182)则是在玻片表面包被一种硝酸纤维膜材料，能与蛋白质以非共价但是不可逆的方式结合。由于表面包被层的多孔性和厚度使单位面积的蛋白质结合能力比常规化学表面处理玻片要高得多，使得检测更加灵敏。

如果缺乏点样机器人，也可采用手工方法进行点样，一般用微量移液器取0.3-0.5μl SARS多肽溶液点于硝酸纤维膜的指定部位。

芯片检测原理

图3表示SARS多肽芯片的检测原理。在本发明的检测方法中，检测位点是将SARS多肽物质7按一定排列顺序排列在芯片表面，与病人血清孵育时，抗SARS病毒的抗体6与芯片表面上的相应的多肽7特异性结合，由于抗SARS抗体是人源性的，可以利用FITC或酶标记4的羊抗人抗体5进行检测，出现阳性信号。控制位点是将人IgG或IgM 9直接固定在芯片的表面，或者利用羊抗人抗体9固定在芯片表面，当被检测血清中有相应的IgG或IgM6存在时，就会在相应的控制位点出现阳性信号，从而可以排除因操作不当而出现的假阴性的结果。

芯片与SARS病人血清的孵育

荧光标记扫描方法：

A.取20-30μl对照和各种稀释度(1∶10至1∶100)病人血清，加到SARS多肽阵列区。

B.在湿盒内室温下放置60分钟。

C.从湿盒取出，用装有PBS缓冲液的洗瓶小心轻轻冲洗。

D.加入1滴(20-30μl)FITC标记羊抗人抗体在湿盒内室温下孵育20-60分钟。

E.从湿盒取出，用装有PBS缓冲液的洗瓶小心轻轻冲洗。

F.在荧光显微镜下观察记录结果。

酶标HRP显色方法：

A.向每个反应孔内加入0.9ml稀释液将膜片浸湿，室温孵育5分钟；

B.每孔加入50-100μl被检血清标本，置于摇床上(60转/min)，室温孵育1小时；

C.用1ml移液器吸干血清标本稀释液；

D.每孔加入3-5ml稀释后的洗涤液，在摇床轻微振荡中洗涤，洗涤3次，每次2分钟；

E.吸干洗涤液，在每孔中加入1ml稀释(取1ml稀释液加5μl酶结合物)后的酶结合物，置于摇床上在轻微振荡中室温孵育30分钟；

F.同步骤D洗涤；

G.每孔加1ml底物液I和100μl底物液II，混合；

H.根据膜片上方格位置1、2、3点以及背景显色情况进行反应，一般需要5-30分钟；

I.反应完成后，用移液器吸干底物液，加2ml洗液洗涤膜条；

J.最后每孔中加入0.5ml终止液，混匀后，室温孵育5分钟，并用蒸馏水洗涤膜条，吸干后，肉眼观察结果，或采用一般扫描仪将图像扫入电脑进行分析。

质量控制：

A.为了保证实验可重复性、敏感性和准确性，每天的检验要应用阳性和阴性照。

B.阴性对照结果应显示为弱于+荧光或显色深度。否则，对照、抗原、标记抗体或操作其中误。

C.阳性对照结果应显示为3+-4+荧光或显色深度。否则，对照、抗原、标记抗体或操作其中有误。

D.除了用阳性和阴性对照，还要做一个PBS对照(空白对照)，确保标记抗体未受血清等污染。

7.结果解读

1)荧光扫描，结果报告。

采用激光扫描仪扫描，根据所标记的荧光物质，选择适当的波长扫描。激光扫描技术，是目前最敏感也是最复杂的检测技术，需要昂贵的扫描仪(例如ScanArray 5000)，这些扫描仪具有很高的分辨率，可用于高密度蛋白芯片的检测。

2)显色

肉眼观察，直接判断结果。如图4，应用该多肽芯片对SARS进行检测后，我们发现在SARS多肽芯片上，控制位点人IgG质控血清10、人IgG 11、羊抗人IgG 12以及相应的S713、S214、S615、S1016等位点出现阳性。

实施例：SARS抗体筛选多肽芯片的检测试剂盒

SARS多肽芯片抗体筛选试剂盒(图5)是将SARS蛋白抗原经计算机分析筛选出可能具有抗原性的多肽片段，经人工合成以后，包被于硝酸纤维素膜上并经封闭处理，与待检测血清中的抗SARS蛋白抗体反应后，加入酶标记的抗人IgG，再加入底物显色。阳性者在相应位置出现蓝色点(加入终止液后为棕色条带)。

试剂盒组成

1.包被NC膜的6孔板             2.稀释缓冲液(即用型)

3.洗涤缓冲液(10×)            4.酶结合物(200×)

5.底物液I(即用型)             6.底物液II(即用型)

7.终止液：2N H₂SO₄(即用型)    8.操作说明书

试剂保存

4℃冷藏。至少6孔板、酶结合物和底物液I、II需要冷藏。

操作注意事项

A.在膜条温育过程中，注意不要使反应膜片干燥。

B.不要用手直接接触抗原膜条。

C.在多孔平行操作时，完成血清孵育后，去除反应液时应注意避免交叉污染。

操作前准备

A.准备一个500ml试剂瓶，将洗涤缓冲液按1∶10稀释；

B.摇床一台，最好是上下摆动型摇床。

操作步骤

A.向每个反应孔内加入0.9ml稀释液将膜片浸湿，室温孵育5分钟；

B.每孔加入50-100μl被检血清标本，置于摇床上(60转/min)，室温孵育1小时；

C.用1ml移液器吸干血清标本稀释液；

D.每孔加入3-5ml稀释后的洗涤液，在摇床轻微振荡中洗涤，洗涤3次，每次2分钟；

E.吸干洗涤液，在每孔中加入1ml稀释(取1ml稀释液加5μl酶结合物)后的酶结合物，置于摇床上在轻微振荡中室温孵育30分钟；

F.同步骤4洗涤；

G.每孔加1ml底物液I和100μl底物液II，混合；

H.根据膜片上方格位置1、2、3点以及背景显色情况进行反应，一般需要5-30分钟；

I.反应完成后，用移液器吸干底物液，加2ml洗液洗涤膜条；

J.最后每孔中加入0.5ml终止液，混匀后，室温孵育5分钟，并用蒸馏水洗涤膜条，吸干后，观察结果。

结果判断

膜片上方格所代表的SARS多肽抗原位置(注意6孔板的方向，圆端在右边)。

1	2	3	4	5	6	7	8
								9	10	11	12	13	14	15	16
17	18	19	20	21	22	23	24
								25	26	27	28	29	30	31	32
33	34	35	36	37	38	39	40

每个方格相应的抗原：

位置	固定物质	位置	固定物质
				1	人Ig质控血清	19、20	S8多肽
2	人IgG	21、22	S9多肽
				3	羊抗人IgG	23、24	S10多肽
4	BSA	25、26	M1多肽
				5、6	S1多肽	27、28	M2多肽
7、8	S2多肽	29、30	M3多肽
				9、10	S3多肽	31、32	N1多肽
11、12	S4多肽	33、34	N2多肽

13、14	S5多肽	35、36	N3多肽
				15、16	S6多肽	37、38	NP1多肽
17、18	S7多肽	39、40	NP2多肽

其中15种SARS多肽片段氨基酸序列：

多肽名称	蛋白名称	氨基酸位置	多肽序列
				N1	N蛋白	21-44	PTDSTDNNQNGGRNGARPKQRRPQ
N2	N蛋白	138-160	GALNTPKDHIGTRNPNNNAATVL
				M1	M蛋白	3-22	DNGTITVEELKQLLEQWNLV
M2	M蛋白	145-166	RGHLRMAGHSLGRCDIKDLPKE
				M3	M蛋白	190-210	SGFAAYNRYRIGNYKLNTDHA
S1	S蛋白	34-54	TSSMRGVYYPDEIFRSDTLYL
				S2	S蛋白	94-113	KSNVVRGWVFGSTMNNKSQS
S3	S蛋白	197-216	YKGYQPIDVVRDLPSGFNTL
				S4	S蛋白	273-293	TDAVDCSQNPLAELKCSVKSF
S5	S蛋白	297-316	KGIYQTSNFRVVPSGDVVRF
				S6	S蛋白	332-351	TKFPSVYAWERKKISNCVAD
S7	S蛋白	436-455	YNYKYRYLRHGKLRPFERDI
				S8	S蛋白	540-559	PSSKRFQPFQQFGRDVSDFT
S9	S蛋白	731-753	CANLLLQYGSFCTQLNRALSGIA
				S10	S蛋白	758-780	RNTREVFAQVKQMYKTPTLKYFG

对照结果解读意义

	正常信号状态	异常结果及可能原因
			IgG质控血清	阳性	异常结果：阴性原因：二抗失效、二抗效价不对

IgG羊抗人IgGBSA

阳性阳性阴性

异常结果：阴性原因：二抗失效、二抗效价不对异常结果：阴性原因：被检血清变质IgG、IgG质控血清和羊抗人IgG都阴性：芯片失效异常结果：阳性原因：检测系统失效

多肽位点阳性结果解读

相应多肽位点出现阳性结果，表明该多肽具有免疫原性，病人血清中有相应的IgG抗体存在。

Claims (10)

1.一种SARS冠状病毒多肽蛋白芯片，其特征在于，它包括：

(a)膜片，所述的膜片是硝酸纤维膜或尼龙膜；

(b)阵列式固定在所述膜片上的SARS病毒蛋白抗原决定族部分的多肽片段。

2.根据权利要求1所述的芯片，其特征在于，所述的SARS病毒蛋白是S蛋白。

3.根据权利要求1所述的芯片，其特征在于，所述的SARS病毒蛋白是M蛋白。

4.根据权利要求1所述的芯片，其特征在于，所选择的SARS病毒蛋白是N蛋白。

5.根据权利要求1所述的芯片，其特征在于，所述的SARS病毒蛋白抗原决定族部分的多肽片段选自下组：

N1多肽：对应于N蛋白第21-44位，序列为PTDSTDNNQNGGRNGARPKQRRPQ；

N2多肽：对应于N蛋白第138-160位，序列为GALNTPKDHIGTRNPNNNAATVL；

M1多肽：对应于M蛋白第3-22位，序列为DNGTITVEELKQLLEQWNLV；

M2多肽：对应于M蛋白第145-166位，序列为RGHLRMAGHSLGRCDIKDLPKE；

M3多肽：对应于M蛋白第190-210位，序列为SGFAAYNRYRIGNYKLNTDHA；

S1多肽：对应于S蛋白第34-54位，序列为TSSMRGVYYPDEIFRSDTLYL；

S2多肽：对应于S蛋白第94-113位，序列为KSNVVRGWVFGSTMNNKSQS；

S3多肽：对应于S蛋白第197-216位，序列为YKGYQPIDVVRDLPSGFNTL；

S4多肽：对应于S蛋白第273-293位，序列为TDAVDCSQNPLAELKCSVKSF；

S5多肽：对应于S蛋白第297-316位，序列为KGIYQTSNFRVVPSGDVVRF；

S6多肽：对应于S蛋白第332-351位，序列为TKFPSVYAWERKKISNCVAD；

S7多肽：对应于S蛋白第436-455位，序列为YNYKYRYLRHGKLRPFERDI；

S8多肽：对应于S蛋白第540-559位，序列为PSSKRFQPFQQFGRDVSDFT；

S9多肽：对应于S蛋白第731-753位，序列为CANLLLQYGSFCTQLNRALSGIA；

S10多肽：对应于S蛋白第758-780位，序列为RNTREVFAQVKQMYKTPTLKYFG。

6.根据权利要求1所述的芯片，其特征在于，所述的膜片是硝酸纤维素膜，并且所述的硝酸纤维素膜固定于玻片或培养板上；或者所述的膜片是尼龙膜，所述的尼龙膜附着在玻片上。

7.根据权利要求1所述的芯片，其特征在于，所述的膜片是10mm×12mm或1.5mm×2.5mm的硝酸纤维膜。

8.根据权利要求5所述的芯片，其特征在于，所述的膜片上同时固定有以下SARS病毒蛋白多肽片段：N1、N2、M1、M2、M3、S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、S8、S9、S10。

9.如权利要求1所述的芯片，其特征在于，在膜片上还设有阳性对照阴性对照点样区，并且在所述的阳性对照阴性对照点样区分别固定有人Ig质控血清、人IgG、羊抗人IgG、BSA。

10.一种SARS抗体检测试剂盒，其特征在于，它含有根据权利要求1所述的SARS冠状病毒多肽蛋白芯片和操作说明书。

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