CN1430052A - 过敏原检测芯片 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种过敏原检测芯片、其制备方法、包含该过敏原检测芯片的套组及其应用，以用于检测样品中的各种抗过敏原IgE及/或IgG抗体。一种过敏原检测芯片，包括固体基材以及至少一种过敏原，其固定于该固体基材之上，其中该固体基材包括：(i)基底层；(ii)粘着中间介层，其位于该基底层之上；以及(iii)表面层，其位于该粘着中间介层之上。本发明的过敏原检测芯片具有相当高灵敏度及准确性的分析结果。
Description
技术领域
本发明涉及一种过敏原检测芯片、其制备方法、包含该过敏原检测芯片的套组及其应用，以用于检测样品中的各种抗过敏原IgE及/或IgG抗体。
背景技术
过敏反应(allergic reaction)是因外来之异物(通称为过敏原(allergen))，经皮肤、呼吸道或消化道进入人体后，刺激身体免疫机制，而产生各种临床症状，例如，发疹、皮肤红肿、发痒、恶心、呕吐、食欲不振、流鼻水、鼻炎、气喘、呼吸困难、发热、关节疼痛、休克等等。过敏反应分类为四种，包括：
(1)第一型：速发型IgE引发的过敏反应。
(2)第二型：抗体依赖性细胞毒杀过敏反应。
(3)第三型：免疫复合物引发的过敏反应。
(4)延迟性T细胞引发的过敏反应。
一般的过敏症多属第一型或第三型，但也有一个症状是由数种过敏反应合并造成。目前对于过敏症的治疗，除了第一型过敏反应可利用减敏治疗之外，其余过敏反应都只能靠药物而减缓临床症状。因此，确认造成患者发病之过敏原并避免患者与其接触，是改善过敏症最有效的方式。
一般而言，目前对于过敏原的检测，主要为皮肤敏感试验以及血清IgE抗体试验。前者系将低浓度、低剂量的过敏物质注射至皮下组织，以观察其过敏反应；虽然皮肤敏感试验准确性高且成本低，但因需要皮下注射多次，易使受测者感到不适与恐惧，此外，还存在着易产生伪阳性反应而造成误判，以及因直接注射过敏原而造成过敏性休克的危险。血清IgE抗体试验则是利用酶联免疫吸附分析法(ELISA)，而检测血清中抗各种过敏原的IgE抗体及其浓度；虽然此法可一次检测多种过敏原，但因其需要大量的检体及检验材料，因此造成成本高昂而无法完全普及化。
生物芯片技术系结合许多不同领域的技术，使样品检测与分析过程连续化、微型化，以快速、准确及大量地检测核酸、蛋白质、细胞或其它生物组成份。目前的生物芯片中无任何的蛋白质芯片可直接应用于临床的检测及诊断，特别是检测造成过敏反应的过敏原的芯片。
因此，对于医学检验技术的领域而言，可快速、准确、大量、多样、低检体用量、高灵敏度及低成本的过敏原检测方法，仍有急迫之需要。
发明内容
有鉴于此，本发明结合蛋白质芯片及抗原-抗体专一性反应，而制备一过敏原检测芯片，其不仅与酶联免疫吸附分析法相同，在短时间内进行大量筛检，更重要的是，本发明的过敏原检测芯片可大量缩小所需要的检体用量，以达成上述之要求。
本发明的第一种形式是提供一种过敏原检测芯片，包括固体基材以及至少一种过敏原，其固定于该固体基材之上，其中该固体基材包括(i)基底层；(ii)粘着中间介层，其位于该基底层之上；以及(iii)表面层，其位于该粘着中间介层之上。
在另一具体实施例中，固体基材本身即可提供支持的功能，同时可与过敏原结合，因此，本发明也提供一种过敏原检测芯片，包括(i)固体基材；以及(ii)至少一种过敏原，其固定于该固体基材之上。
本发明的第二种形式是提供一种过敏原检测芯片之制备方法，包括(a)将一粘着中间介层涂布于一基底层；(b)将一表面层涂布于该粘着中间介层；以及(c)将至少一种过敏原固定在该表面层之上。
在另一具体实施例中，由于固体基材本身即可提供支持的功能，同时可与过敏原结合，因此，本发明也提供一种过敏原检测芯片之制备方法，包括将至少一种过敏原固定在一固体基材之上。
本发明的第三种形式是提供一种检测过敏原之套组，包括(i)上述任何一种过敏原检测芯片；(ii)封闭溶液，用以阻隔该检测芯片上未结合该等过敏原之部份；(ii)二次抗体，其可专一性地与抗过敏原抗体结合；(iii)清洗溶液；以及(iv)信号产生工具，其可操作性地与该二次抗体偶联而产生信号。
本发明的第四种形式是提供一种检测过敏原的方法，包括(a)提供上述任何一种过敏原检测芯片；(b)用一封闭溶液阻隔该检测芯片上未结合该等过敏原之部份；(c)将患者的血清样品与该检测芯片接触；(d)以清洗溶液进行清洗步骤；(e)提供一信号产生工具，其可操作性地与二次抗体偶联而产生信号，其中该二次抗体可专一性地与抗过敏原抗体结合；以及(f)测量该信号产生工具所产生的信号。
为了让本发明之上述和其它目的、特征，及优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例并配合所附图标，做详细说明如下：
附图说明
第1图是本发明的过敏原检测芯片的示意图。
第2(A)-(J)图是尘螨过敏原芯片所测得的结果。
第3(A)-(D)图是不同过敏原芯片所测得的结果。
第4(A)-(B)图是牛奶过敏原芯片所测得的结果。
第5(A)-(B)图是不同过敏原芯片所测得的结果。
第6(A)-(B)图是本发明具有大于100个过敏原点/平方公分的高密度过敏原检测芯片。
参考标号说明
10：过敏原芯片 20：固体基材
30：基底层 40：粘着中间介层
50：表面层 60：过敏原
具体实施方式
请参见图1，本发明的过敏原检测芯片10包括固体基材20以及至少一种过敏原60，其固定于固体基材20之上，其中固体基材20包括(i)基底层30；(ii)粘着中间介层40，其位于基底层30之上；以及(iii)表面层50，其位于粘着中间介层40之上。
适合于作为基底层30的例子包括，但并不限于，玻璃、硅芯片、陶瓷材料、金属、聚二氟乙烯(PVDF)膜或醋酸纤维膜等。表面层50系用于结合过敏原，可使用的材料包括，但并不限于，硝化纤维(NC；nitrocellulose)或聚苯乙烯(PS；polystyrene)等，较佳为硝化纤维。此外，为使表面层50能稳定地接着于基底层30，较佳是在这两层之间使用一层粘着中间介层40，可使用的粘着中间介层包括，但并不限于，环氧树脂(epoxy resin)或其它具有相似官能团之化学物质。
在本发明的另一具体实施例中，固体基材20也可以是一层可直接用于结合过敏原的材质，例如，由有机分子聚合而成之聚合物，其中这样的有机分子包括，但并不限于，苯乙烯、乙烯、丙烯、酯类、丙烯酸、丙烯酸酯、烷基丙烯酸或烷基丙烯酸酯。在本发明中，可直接用于结合过敏原的固体基材的例子，包括，但并不限于，聚苯乙烯(PS)、聚乙烯(PE)、聚丙烯(PP)、聚碳酸酯(PC)等。
本发明可检测的过敏反应，包括任何IgE-及/或IgG-引发的过敏反应，因此，可固定在上述固体基材上的过敏原，包括任何可引发哺乳动物过敏反应的物质，包括，但并不限于，尘螨、羽毛、花粉、霉菌、细菌、蛋黄、蛋白、猪草、牛奶、花生、虾、蟹、鱼、蚌、黄豆、芒果、蟑螂、狗皮屑或猫皮屑等之萃取物。
本发明之过敏原检测芯片可制备成具有高密度的芯片，较佳地，固定在芯片上的过敏原密度是大于100个过敏原点/平方公分，更佳地，是大于200、400、800、1600个过敏原点/平方公分或更多。在本发明之过敏原检测芯片上，每个检测点(过敏原点)所需使用的样品或试剂，是小于0.5微升(μL)的用量，更佳地是在纳升(nL)等级的用量。这样的过敏原检测芯片可有效地将各种不同的过敏原固定在同一芯片上，以达到大量、多样、低检体用量及低成本的目的。
在本发明的过敏原检测芯片的制备中，首先是将一粘着中间介层涂布于一基底层；接着将一表面层涂布于该粘着中间介层；然后以至少一种过敏原固定在该表面层之上，其中，基底层、粘着中间介层、表面层及过敏原是如上之定义。涂布的方式并无特别限制，且为熟悉化学工程及半导体制程领域的人士所习知，例如，旋转涂布法(spin coating)、网印涂布法(screen printing)、滚筒涂布法(roller coating)、帘幕涂布法(curtaincoating)、浸镀涂布法(dip coating)等，较佳是使用旋转涂布法以完成各层之涂布。在涂布粘着中间介层之前，可视需要地先清洁基底层的表面，以除去附着于基底层的杂质或灰尘，并且有利粘着中间介层之附着。上述清洁步骤可包括使用溶剂(例如，表面活性剂、水、酒精、丙酮等)清洗及/或超声波震荡之前处理。
如上所述，如果使用可直接结合过敏原的固体基材的话，则可将过敏原直接固定在该固体基材上，以制备本发明的过敏原检测芯片。
本发明也提供一种检测过敏原的套组(kit)，也称为试剂盒，它包括(i)上述任何一种过敏原检测芯片；(ii)封闭溶液，用以阻隔检测芯片上未结合该等过敏原之部份；(ii)二次抗体，其可专一性地与抗过敏原抗体结合；(iii)清洗溶液；以及(iv)信号产生工具，其可操作性地与该二次抗体偶联而产生信号。
此处所使用的名词“封闭溶液”，是用于阻隔检测芯片上未结合该等过敏原之部份，以避免后续检体或二次抗体或其它物质附着于芯片上，而导致产生检测上的误判。可使用的封闭溶液系为熟悉免疫检测之人士所熟知，一般如牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白(casein)或动物明胶(gelatin)等的溶液，均可作为本发明的封闭溶液。
此处所使用的名词“二次抗体”，是可以专一性地与血清中抗过敏原抗体结合的外源抗体，这样的二次抗体可包括抗IgE之抗体或抗IgG之抗体，也可以是单克隆抗体或多克隆抗体。一般而言，二次抗体可结合抗过敏原抗体的恒定区片段(Fc)或变异区片段(Fab)，并且，这些抗体均可自市面上购得(例如，Bethyl Laboratories，Inc，TX，USA；BiogenesisLtd，England；Jackson Laboratory，Maine，USA等等)。
“清洗溶液”是在添加试剂的步骤后(如下详述)，用于清洗未结合的残余试剂之目的。可适合用于本发明之清洗溶液包括，但并不限于，磷酸盐缓冲溶液(PBS)、三羟甲基胺基甲烷缓冲液(TBS)等等，并可视需要添加蛋白抑制剂(例如，苯甲脒(benzamidine))或表面活性剂(例如，NP-40、Tween-20、Tween-80等系列)。
此处所使用的名词“信号产生工具”，系可操作性地与上述二次抗体偶联而产生信号，其为在此技艺中人士所熟知，并可依需要而选择使用。例如，包括，但并不限于，放射性标记物、萤光标记物(例如，镧系萤光物)、磷光标记物、冷光标记物(例如，生物冷光标记物或化学冷光标记物)或酶等等。其中，可使用的酶包括，但并不限于，碱性磷酸酶(AP)、过氧化氢酶(HRP)或β-半乳糖苷酶等等；使用上述酶可配合一适当的底物使其反应显色，底物的选择可根据所选择的酶而定，并且是在此技艺之人士所习知。适合的底物包括，但并不限于，对-硝基苯酚磷酸盐(pNPP)、2，2′-连氮基-双-(3-乙基苯-唑-6-磺酸)(ABTS)、5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸盐/硝基蓝四唑(BCIP/NBT)或酚AS-TR磷酸盐或3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(TMB)等等。
在本发明的较佳具体实施例中，检测过敏反应之过敏原检测套组更可利用生物素(biotin)及链霉抗生物素蛋白(streptavidin)的专一性结合，而达到放大信号及提升准确性之目的。将二次抗体(例如，抗人类IgE抗体)与生物素偶联，并辨识结合至血清样品中的抗过敏原抗体，然后加入偶联一信号产生工具(如上所述)的链霉抗生物素蛋白，再利用适当的底物而呈色。藉由二次抗体与抗过敏原抗体的第一次辨识，以及生物素对于链霉抗生物素蛋白的第二次专一结合，不但可放大检测信号，并且可大幅降低误差。
本发明也提供一种检测过敏原之方法，包括(a)提供上述任何一种过敏原检测芯片；(b)用一封闭溶液阻隔该检测芯片上未结合该等过敏原之部份；(c)将患者的血清样品与该检测芯片接触；(d)以清洗溶液进行清洗步骤；(e)提供一信号产生工具，其可操作性地与二次抗体偶联而产生信号，其中该二次抗体可专一性地与抗过敏原抗体结合；以及(f)测量该信号产生工具所产生之信号。
在步骤(c)中，更可加入标准品抗体或阳性对照组或阴性对照组，以建立可用于定量之内部标准曲线，或作为参考比较之用途。上述试剂的使用及反应条件可参见Antibody：A Laboratory Manual，Ed.Harlow &Dayid Lane，1988，此处纳入为参考资料。
实施例
本发明将藉由以下的实施例而作更进一步地详细说明，但这些实施例仅是作为举例说明，而非用以限定本发明的范畴。
实施例1：过敏原检测芯片的制备
取一适当大小的玻璃载片，以表面活性剂、去离子水、丙酮、去离子水及酒精清洗，清洗的过程均在超声波震荡器中进行。将含有环氧树脂的粘着中间介层溶液，以旋转涂布的方式涂布在玻璃载片，然后烘干。分析载片的平整度及萤光背景，挑选涂布均匀且低萤光背景的载片，再以旋转涂布的方式，将表面层(含硝化纤维或聚苯乙烯的溶液)涂布在粘着中间介层上，然后烘干。同样分析并挑选涂布均匀且低萤光背景的载片，即可作为本发明的固体基材。
将各种过敏原以适当的浓度(原倍或1/10倍体积稀释)点在上述固体基材。点上过敏原后，可在37℃静置1小时或4℃静置隔夜而完成过敏原检测芯片的制作。
实施例2：尘螨过敏原芯片的分析
将尘螨过敏原(购自：Center Lab.；批号9D00242)以4℃静置隔夜的方式，分别点在表面层为NC或PS的固体基材，并以牛血清白蛋白在4℃静置隔夜封闭之后，将得自三军总医院的7位过敏患者的血清抗体(3级或4级)加入至每一载片，在30℃培养2小时。然后加入偶联生物素的抗人类IgE抗体(购自：KPL，编号074-1004)，在30℃培养2小时。接着加入偶联萤光原(Cy5)的链霉抗生物素蛋白，在30℃培养1小时，然后以扫描仪检测各点的萤光强度，结果如图2、表1A及表1B所示。
表1A：以硝化纤维为表面层的尘螨过敏原芯片分析
*萤光值(S)系以平均值表示。
| S1(4级) | S2(4级) | S3(4级) | S4(4级) | S5(3级) | S6(4级) | S7(3级) | ||||||||
| 萤光值* | S/N | 萤光值* | S/N | 萤光值* | S/N | 萤光值* | S/N | 萤光值* | S/N | 萤光值* | S/N | 萤光值* | S/N | |
| 1/10X尘螨 | 1747 | 2.1 | 3554 | 4.0 | 3318 | 7.4 | 6411 | 20.9 | 3279 | 13.1 | 2174 | 8.9 | 3515 | 10 |
| 1/10X尘螨 | - | - | - | - | - | - | 6687 | 21.8 | 4658 | 18.5 | 1725 | 7.1 | 4417 | 12.6 |
| 1X尘螨 | - | - | 1935 | 2.2 | 1513 | 3.4 | 3037 | 9.9 | 1813 | 7.2 | 1402 | 5.8 | 3036 | 8.6 |
| 背景值(N) | 839 | - | 902 | - | 448 | - | 308 | - | 252 | - | 244 | - | 353 | - |
表1B：以硝化纤维为表面层的尘螨过敏原芯片分析
| S1(4级) | S2(4级) | S3(4级) | S4(4级) | S5(3级) | S6(4级) | S7(3级) | ||||||||
| 萤光值* | S/N | 萤光值* | S/N | 萤光值* | S/N | 萤光值* | S/N | 萤光值* | S/N | 萤光值* | S/N | 萤光值* | S/N | |
| 1/10X尘螨 | - | - | - | - | - | - | 793 | 2.0 | 1904 | 2.0 | 1563 | 1.2 | 2824 | 3.4 |
| 1/10X尘螨 | - | - | - | - | - | - | 1333 | 3.3 | 1481 | 1.6 | 1907 | 1.4 | 2784 | 3.3 |
| 1X尘螨 | - | - | - | - | - | - | - | - | 1037 | 1.1 | 1463 | 1.1 | 1278 | 1.5 |
| 背景值(N) | - | - | - | - | - | - | 407 | - | 957 | - | 1402 | - | 852 | - |
*萤光值(S)系以平均值表示。
实施例3：不同过敏原芯片的分析(一)
分别以不同浓度(原倍或1/10倍体积稀释)的(1)混合猪草、(2)花生、(3)虾、及(4)大豆作为过敏原，点在表面层为NC或PS的固体基材。以购自AlerCHEK批号210901、106801及109901的血清抗体作为测试样品，其余步骤相同于实施例2。结果如图3所示，其中，“阳性对照组”表示点上原倍(未稀释)的过敏原，以患者的血清作为样品，二次抗体为偶联生物素的山羊抗人类IgE抗体，最后以偶联Cy5的链霉抗生物素蛋白反应所测得的结果。
实施例4：牛奶过敏原芯片的分析
以牛奶作为过敏原，点在表面层为NC的固体基材上。以得自台大医院的过敏患者(3级)的血清抗体作为测试样品，其余步骤相同于实施例2。结果如图4及表2所示。在图4中，“检测抗体”是将二次抗体点在芯片上，清洗后加入偶联Cy5的链霉抗生物素蛋白以检测反应结果；以及“偶联Cy5的链霉抗生物素蛋白”是将链霉抗生物素蛋白直接点在芯片上，清洗后检测反应结果。两者均可作为本实施例的阳性对照组。
表2：以硝化纤维为表面层的牛奶过敏原芯片分析
| 患者A | 患者A1 | |||
| 萤光值(S)* | S/N | 萤光值(S)* | S/N | |
| 1/10X过敏原 | 6203 | 2.0 | 4953 | 1.5 |
| 1/10X过敏原 | 7945 | 2.6 | 5184 | 1.6 |
| 1X过敏原 | 6127 | 2.0 | 4354 | 1.3 |
| 1X过敏原 | 5648 | 1.8 | 4658 | 1.4 |
| 背景值(N) | 3090 | - | 3408 | - |
*萤光值(S)系以平均值表示。
实施例5：不同过敏原芯片的分析(二)
在本实施例中，分别使用(1)猪草、(2)蛋黄、(3)蛋白、(4)牛奶、(5)花生、(6)虾、(7)大豆、(8)烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、(9)白色念珠菌(Candida albicans)及(10)青霉菌属(Pencillium notatum)作为过敏原，分别以各种不同的浓度(原倍、1/10倍稀释及10倍浓缩)点在表面层为NC的固体基材。以得自台大医院的过敏患者(3级)的血清抗体作为测试样品，其余步骤相同于实施例2。结果如图5及表3所示。其中，“检测抗体”及“偶联Cy5的链霉抗生物素蛋白”是相同于实施例4的步骤。
表3：以硝化纤维为表面层的各种过敏原芯片分析
| 蛋黄 | 念珠菌属 | 蛋白 | 牛奶 | |||||
| 萤光值* | S/N | 萤光值* | S/N | 萤光值* | S/N | 萤光值* | S/N | |
| 1/10X过敏原 | 16920 | 1.8 | - | - | 13623 | 1.2 | 9890 | 1.7 |
| 1X过敏原 | 12831 | 1.4 | 11622 | 1.2 | 13691 | 1.2 | 10020 | 1.7 |
| 10X过敏原，0.5微升 | 11688 | 1.2 | 11851 | 1.3 | 18639 | 1.6 | 9892 | 1.7 |
| 10X过敏原，1.0微升 | 12535 | 1.3 | 13324 | 1.4 | 19406 | 1.7 | 8911 | 1.5 |
| 患者血清 | - | - | - | - | - | - | - | - |
| 抗人类IgE抗体-生物素 | 30175 | 3.2 | 25831 | 2.7 | 34233 | 2.9 | 15763 | 2.7 |
| 偶联Cy5的链霉抗生物素蛋白 | 65280 | 6.8 | 63525 | 6.5 | 65280 | 5.5 | 63841 | 10.8 |
| 背景值(N) | 9687 | - | 9776 | - | 11798 | - | 5923 | - |
*萤光值(S)系以平均值表示。
实施例6：过敏原检测芯片的密度规格测试
将0.1克/毫升的大豆溶液藉由点阵机而点至实施例1所制备的过敏原检测芯片上(硝化纤维及聚苯乙烯)。点阵密度为484点/4.41平方公分(约110点/平方公分)，固定后藉由考马斯亮蓝(Coomassie Blue)染色，以鉴别各点的效能。结果如图6所示。
在上述的分析中，过敏原的级数是根据MAST-CLA试验(HITACHI化学诊断公司)所订定的标准而区分。此外，本发明藉由所测得的萤光值/背景值的比例(S/N)而决定待测样品中是否存在有抗过敏原的抗体，亦即，本发明定义当S/N的比值大于2时，则可初步判定为具有过敏的阳性反应，反之，当比值小于2时，则为阴性反应。
由以上结果可知，本发明的过敏原检测芯片可有效地将各种不同的过敏原固定在同一芯片上，藉此可大量、多样、低检体用量及低成本地检测引起患者过敏反应的过敏原的种类及浓度，以供专科医师作为后续处理及治疗之目的。此外，藉由生物素-链霉抗生物素蛋白的专一性反应，或藉由偶联其它高感度的信号产生工具，本发明的过敏原检测芯片可具有相当高灵敏度及准确性的分析结果。
虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然其并非用以限定本发明，任何熟悉此技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作各种更动与润饰，例如，其它种类过敏原、偶联二次抗体的信号产生工具以及各种可得之检测方法之改善及修正，都是在本发明的范畴之内。因此本发明的保护范围，当视后附之权利要求书所界定者为准。
Claims (53)
1、一种过敏原检测芯片，其特征在于，包括固体基材以及至少一种过敏原，其固定于该固体基材之上，其中该固体基材包括：
(i)基底层；
(ii)粘着中间介层，其位于该基底层之上；以及
(iii)表面层，其位于该粘着中间介层之上。
2、如权利要求1所述的过敏原检测芯片，其中该基底层包括玻璃、硅芯片、陶瓷材料、金属、聚二氟乙烯膜或醋酸纤维膜。
3、如权利要求1所述的过敏原检测芯片，其中该粘着中间介层包括环氧树脂。
4、如权利要求1所述的过敏原检测芯片，其中该表面层包括硝化纤维或聚苯乙烯。
5、如权利要求1所述的过敏原检测芯片，其中该过敏原系选自尘螨、羽毛、花粉、霉菌、细菌、蛋黄、蛋白、猪草、牛奶、花生、虾、蟹、鱼、蚌、黄豆、芒果、蟑螂、狗皮屑及猫皮屑所组成的组中之萃取物。
6、一种过敏原检测芯片，包括：
(i)固体基材；以及
(ii)至少一种过敏原，其固定于该固体基材之上。
7、如权利要求6所述的过敏原检测芯片，其中该固体基材包括由有机分子聚合而成之聚合物，其中该有机分子系选自苯乙、乙烯、丙烯、酯类、丙烯酸、丙烯酸酯、烷基丙烯酸及烷基丙烯酸酯所组成的组中。
8、如权利要求6所述的过敏原检测芯片，其中该过敏原系选自尘螨、羽毛、花粉、霉菌、细菌、蛋黄、蛋白、猪草、牛奶、花生、虾、蟹、鱼、蚌、黄豆、芒果、蟑螂、狗皮屑及猫皮屑所组成的组中之萃取物。
9、如权利要求1项或第6所述的过敏原检测芯片，其中在该过敏原检测芯片上之过敏原密度，是大于100个过敏原/平方公分芯片。
10、一种过敏原检测芯片的制备方法，其特征在于，包括：
(a)将一粘着中间介层涂布于一基底层；
(b)将一表面层涂布于该粘着中间介层；以及
(c)将至少一种过敏原固定在该表面层之上。
11、如权利要求10所述的制备方法，其中该基底层包括玻璃、硅芯片、陶瓷材料、金属、聚二氟乙烯膜或醋酸纤维膜。
12、如权利要求10所述的制备方法，其中该粘着中间介层包括环氧树脂。
13、如权利要求10所述的制备方法，其中该表面层包括硝化纤维或聚苯乙烯。
14、如权利要求10所述的制备方法，其中该过敏原系选自尘螨、羽毛、花粉、霉菌、细菌、蛋黄、蛋白、猪草、牛奶、花生、虾、蟹、鱼、蚌、黄豆、芒果、蟑螂、狗皮屑及猫皮屑所组成的组中之萃取物。
15、如权利要求10所述的制备方法，其中该涂布的方法包括旋转涂布、浸镀涂布、网印涂布、滚筒涂布或帘幕涂布。
16、如权利要求15所述的制备方法，其中该涂布的方法是旋转涂布。
17、如权利要求10所述的制备方法，其中在涂布该粘着中间介层之前，还包括清洁该基底层表面的步骤。
18、如权利要求17所述的制备方法，其中该清洁步骤系使用溶剂清洗及/或超声波震荡之前处理。
19、如权利要求18所述的制备方法，其中该溶剂系选自表面活性剂、水、酒精及丙酮所组成的组中。
20、一种过敏原检测芯片的制备方法，包括将至少一种过敏原固定在一固体基材之上。
21、如权利要求20所述的制备方法，其中该固体基材包括由有机分子聚合而成之聚合物，其中该有机分子系选自苯乙烯、乙烯、丙烯、酯类、丙烯酸、丙烯酸酯、烷基丙烯酸及烷基丙烯酸酯所组成的组中。
22、如权利要求20所述的制备方法，其中该过敏原系选自尘螨、羽毛、花粉、霉菌、细菌、蛋黄、蛋白、猪草、牛奶、花生、虾、蟹、鱼、蚌、黄豆、芒果、蟑螂、狗皮屑及猫皮屑所组成的组中之萃取物。
23、一种检测过敏原的套组，包括：
(i)权利要求1-9中任一项所述的过敏原检测芯片；
(ii)封闭溶液，用以阻隔该检测芯片上未结合该等过敏原之部份；
(iii)二次抗体，其可专一性地与抗过敏原抗体结合；
(iv)清洗溶液；以及
(v)信号产生工具，其可操作性地与该二次抗体偶联而产生信号。
24、如权利要求23所述的套组，其中该过敏原系选自尘螨、羽毛、花粉、霉菌、细菌、蛋黄、蛋白、猪草、牛奶、花生、虾、蟹、鱼、蚌、黄豆、芒果、蟑螂、狗皮屑及猫皮屑所组成的组中之萃取物。
25、如权利要求23所述的套组，其中该二次抗体包括抗IgE之抗体或抗IgG之抗体。
26、如权利要求25所述的套组，其中该抗体包括单克隆抗体或多克隆抗体。
27、如权利要求23所述的套组，其中该清洗溶液包括磷酸盐缓冲溶液(PBS)或三羟甲基胺基甲烷缓冲液(TBS)。
28、如权利要求27所述的套组，其中该清洗溶液还包括一表面活性剂。
29、如权利要求23所述的套组，其中该信号产生工具系选自放射性标记物、萤光标记物、磷光标记物、冷光标记物及酶所组成的组中。
30、如权利要求29所述的套组，其中该冷光标记物包括生物冷光标记物或化学冷光标记物。
31、如权利要求29所述的套组，其中该酶系选自碱性磷酸酶、过氧化氢酶及β-半乳糖苷酶所组成的组中。
32、如权利要求31所述的套组，还包括一底物，其中该底物可与该酶反应而呈色。
33、如权利要求29所述的套组，其中该信号产生工具还包括生物素。
34、如权利要求33所述的套组，还包括一抗生物素蛋白，其可操作性地与放射性标记物、萤光标记物、磷光标记物、冷光标记物或酶偶联。
35、如权利要求34所述的套组，其中该酶系选自碱性磷酸酶、过氧化氢酶及β-半乳糖苷酶所组成的组中。
36、如权利要求35所述的套组，还包括一底物，其中该底物可与该酶反应而呈色。
37、如权利要求23所述的套组，其中该封闭溶液包括牛血清白蛋白、酪蛋白或动物明胶的溶液。
38、一种检测过敏原的方法，包括：
(a)提供权利要求1-9中任一项的过敏原检测芯片；
(b)用一封闭溶液阻隔该检测芯片上未结合该等过敏原之部份；
(c)将患者的血清样品与该检测芯片接触；
(d)以清洗溶液进行清洗步骤；
(e)提供一信号产生工具，其可操作性地与二次抗体偶联而产生信号，其中该二次抗体可专一性地与抗过敏原抗体结合；以及
(f)测量该信号产生工具所产生的信号。
39、如权利要求38所述的方法，其中该过敏原系选自尘螨、羽毛、花粉、霉菌、细菌、蛋黄、蛋白、猪草、牛奶、花生、虾、蟹、鱼、蚌、黄豆、芒果、蟑螂、狗皮屑及猫皮屑所组成的组中之萃取物。
40、如权利要求38所述的方法，其中该二次抗体包括抗IgE之抗体或抗IgG之抗体。
41、如权利要求40所述的方法，其中该抗体包括单克隆抗体或多克隆抗体。
42、如权利要求38所述的方法，其中步骤(c)还包括将对照标准品抗体与该检测芯片接触。
43、如权利要求38所述的方法，其中该清洗溶液包括磷酸盐缓冲溶液或三羟甲基胺基甲烷缓冲液。
44、如权利要求43所述的方法，其中该清洗溶液还包括一表面活性剂。
45、如权利要求38所述的方法，其中该信号产生工具系选自放射性标记物、萤光标记物、磷光标记物、冷光标记物及酶所组成的组中。
46、如权利要求45所述的方法，其中该冷光标记物包括生物冷光标记物或化学冷光标记物。
47、如权利要求45所述的方法，其中该酶系选自碱性磷酸酶、过氧化氢酶及β-半乳糖苷酶所组成的组中。
48、如权利要求47所述的方法，还包括加入一底物，其中该底物可与该酶反应而呈色。
49、如权利要求45所述的方法，其中该信号产生工具还包括生物素。
50、如权利要求49所述的方法，还包括加入一抗生物素蛋白，其可操作性地与放射性标记物、萤光标记物、磷光标记物、冷光标记物或酶偶联。
51、如权利要求50所述的方法，其中该酶系选自碱性磷酸酶、过氧化氢酶及β-半乳糖苷酶所组成的组中。
52、如权利要求51所述的方法，还包括一底物，其中该底物可与该酶反应而呈色。
53、如权利要求38所述的方法，其中该封闭溶液包括牛血清白蛋白、酪蛋白或动物明胶的溶液。
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