CN102478571A - 一种新的过敏原体外诊断实验方法及其装置 - Google Patents
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Abstract
本发明是一种提供同时检测人体对多种过敏原产生特异性IgE和IgG4不同抗体的体外诊断实验方法及其装置，属医学实验领域。方法采用辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP)二种酶分别标记二种不同抗人IgE和抗人IG4抗体，固相载体在同一种免疫反应体系中与之作用结合。孵育洗涤后，再将固相载体等量分别放入比色反应杯中，用HRP和ALP二种不同酶促化学发光底物检测其发光强度。同时检测受试者对多种过敏原产生特异性IgE和IgG4的抗体。其配套的装置有免疫珠装载结构系统，清洗系统，移取免疫珠或微磁珠系统。达到控制免疫珠的加入量，移取免疫珠，定量加入和移取微磁珠颗粒等功能。
Description
技术领域：
本发明是一种提供同时检测人体对多种过敏原产生特异性IgE和IgG4不同抗体的体外诊断实验方法及其装置，方法和配套装置可应用于全自动过敏原检测系统，实现大规模、高通量、快速、准确检测患者血清中过敏原抗体，及时作出疾病诊断。属医学实验领域。
背景技术：
近年来过敏性疾病发病率呈逐年上升的趋势。每年有超过20％的人受过敏性疾病的困扰，据统计我国该病的发病率要高于发达国家。过敏性疾病早期诊断很重要，其最为关健的是找出引起个体过敏反应的过敏原，采取有针对性的预防和治疗。体外实验诊断过敏原是一种快速、经济而又准确的方法。现已研制出许多过敏原检测试剂盒及检测过敏原的半自动和全自动检测仪器。目前，体外实验诊断过敏原的基本原理仍是基于抗原抗体反应。方法有酶联免疫法、化学发光法及免疫微阵列、蛋白质芯片、生物传感等。现应用最多的为酶联免疫法和化学发光法。体外实验诊断主要是检测患者的特异性IgE抗体，其浓度升高提示有变态反应过敏的存在。大量临床研究证明，除IgE外，其它免疫球蛋白如IgG4也参于变态反应，很多食物过敏患者特异性IgE检测为阴性，而特异性IgG4检测为阳性。将特异性IgE和IgG4同时纳入检测范围，可提高过敏性疾病的诊断。现有的过敏原检测方法，不能同时检测特异性IgE和IgG4。本发明提供的一种新的实验方法及其装置，可同时检测IgE和IgG4二种抗体，将其在半自动和全自动过敏原检测仪器中加以使用，可实现检测过敏原特异性抗体范围广，结果快速而又准确。
发明内容：
1.检测方法：采用辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP)二种酶分别标记二种不同抗人IgE和抗人IG4抗体。用生物素标记过敏原类抗原，亲和素包被固相载体(可以是顺性微磁珠、塑料球、塑料酶标板等)，与被检血清中特异性IgE、IG4抗体和生物素标记的过敏原类抗原结合。再和酶标抗人IgE和抗人IG4抗体结合，固相载体亲和素与过敏原类抗原标记上的生物素结合，形成多种免疫复合物，用双份固相载体在同一反应体系中进行孵育和免疫反应。洗涤固相载体去掉未结合的免疫复合物，再分别加入HRP和ALP二种不同酶促化学发光底物，检测化学发光强度。不同酶促化学发光底物对应不同的标记酶而形成发光物质，对应IgE和IG4抗体标准品浓度，由产生的发光强度判断被检者血清中特异性IgE和IG4抗体的浓度。
2.检测装置：免疫珠存储仓及装载系统。固相载体用亲和素包被塑料材料包夹的铁粒块制成的免疫珠，也可制成免疫顺性微磁珠。免疫珠存储仓及装载结构可控制免疫珠的加入量，自动开启和关闭如图1所示。清洗系统，主要清洗掉反应杯中未和固相载体包被的亲和素结合的反应物质。此部分主要依靠磁铁或电磁场将免疫珠移至管壁一侧，在管外间隔产生磁场以便于设备进入反应杯底进行加样、混匀和清洗，其结构如图2所示。移取免疫珠或微磁珠系统，免疫珠或微磁珠经洗涤后，利用电磁学原理，吸取免疫珠，一个比色杯加一粒放入二个比色杯内，结构见示意图3。免疫顺性微磁珠采用管底部产生电磁场将微磁珠沉积于底部，用吸样装置定量加入微磁珠颗粒，经搅拌棒混匀，反应体系经孵育洗涤 后，反应管底部再产生电磁场，定量吸取原微磁珠总量三分之一分别放入二个比色杯内，加入不同酶促化学发光底物，检测发光强度。
附图说明：
图1塑料材料包夹的铁粒块制成的免疫珠存储仓及装载系统示意图。
图2清洗系统示意图。
图3免疫珠移取示意图。
具体实施方式：
制备亲和素包被塑料材料包夹的铁粒块制成的免疫珠或顺性微磁珠。用辣根过氧化物酶(HRP)标记抗人IgE的多克隆或单克隆抗体，再用碱性磷酸酶标记(ALP)抗人IgG4的多克隆或单克隆抗体，用生物素标记各种过敏原蛋白抗原。检测时于反应管内加入患者检测血清(特异性IgE和IG4)，生物素标记的过敏原蛋白抗原，酶标抗人IgE和IG4抗体，再加入用亲和素标记的固相载体免疫珠二粒，37℃孵育30分钟左右，洗涤去掉未结合的免疫复合物，吸取免疫珠，每杯一粒，于二个比色杯内(顺性微磁珠可取总量的三分之一，分别定量加入)再于比色杯内分别加入HRP和ALP二种不同酶促化学发光底物。测定各化学发光强度。计算特异性IgE和IG4抗体浓度。其标准曲线可用抗人IgE和IG4抗体包被固相载体，加入IgE和IG4抗体标准品，再加入酶标抗人IgE和IG4抗体。用双抗体夹心法检测IgE和IG4抗体浓度所形成的标准曲线计算特异性IgE和IG4抗体浓度。
Claims (6)
1.一种新的过敏原体外诊断实验方法及其装置是采用辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP)二种酶分别标记二种不同抗人IgE和抗人IG4抗体，并用不同酶促化学发光底物，同时检测受试者对多种过敏原产生特异性IgE和IgG4的抗体的一种实验方法以及与之配套的系列装置。
2.按照权利要求1所述，一种新的过敏原体外诊断实验方法及其装置其特点是二种不同抗人IgE和抗人IG4抗体可以用不同的酶标记，也可用不同的发光物质和不同的直接化学发光物质以及酶、直接化学发光物分别标记，可以不用底物也可用一种或二种不同底物。
3.按照权利要求1所述，一种新的过敏原体外诊断实验方法及其装置其特点是免疫珠存储仓及装载结构可控制免疫珠的加入量，自动开启和关闭功能。
4.按照权利要求1所述，一种新的过敏原体外诊断实验方法及其装置其特点是同样的固相载体在同一种免疫反应体系中与之作用结合，孵育洗涤后，再将固相载体等量分别放入比色反应杯中。
5.按照权利要求1所述，一种新的过敏原体外诊断实验方法及其装置其特点是采用磁铁或电磁场将免疫珠移至管壁一侧，在管外间隔产生磁场以便于设备进入反应杯底进行加样、混匀和清洗。
6.按照权利要求1所述，一种新的过敏原体外诊断实验方法及其装置其特点是采用管底部产生电磁场将免疫顺性微磁珠沉积于底部，用吸样装置定量加入实验用微磁珠颗粒于反应体系中，经孵育免疫反应和洗涤后，再于反应管底部产生电磁场，将微磁珠沉于管底部，定量吸取分装于比色杯内。
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