CN217103918U - 一种细胞色素c提取纯化系统 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了一种细胞色素C提取纯化系统，包括依次通过管路连通的粉碎提取装置、吸附洗脱装置、浓缩透析装置和洗脱透析装置，所述粉碎装置包括粉碎机和两个提取组件，所述提取组件包括相互连通的提取罐和压滤机，所述吸附洗脱装置包括吸附罐和洗脱柱，所述多孔硅胶设于吸附罐内，所述浓缩透析装置包括反应罐、离心机和透析袋，所述反应罐分别与洗脱柱和离心机连通，所述透析袋连通于离心机，所述洗脱透析装置包括相互连通的层析柱和收集罐。

Description

一种细胞色素C提取纯化系统

技术领域

本实用新型属于细胞色素加工领域，具体涉及一种细胞色素C提取纯化系统。

背景技术

细胞色素C是含铁卟啉的结合蛋白质，铁卟啉环和蛋白质部分比例1:1、猪心细胞色素C相对分子质量12200,酵母细胞色素C相对分子质量13000左右，pI10.2～10.8.因以赖氨酸为主的碱性氨基酸含量较多，故呈碱性。每个分子含一个铁原子，约为相对分子质量的0.43％。

不同原料提取的细胞色素C,在结构、组成、相对分子质量、含铁量和pI等方面可有不同：有趣的是不同种属生物细胞色素C的104个氨基酸组成比较表明，人与黑猩猩没有差异，人与猴有1处差异，人与鸡有13处差异，人与酵母则有44处差异。

细胞色素C对干燥、热和酸稳定，氧化型在pH2.5～9.35之间不发生变性反应，蛋白部分和铁卟啉环的结合不被酸性丙酮解离。细胞中以氧化型和还原型两种状态存在，除严格厌氧细菌之外，其他一切生物细胞中都含有，是唯一容易从线粒体中分离出来的活性物质。溶于水，氧化型水溶液呈深红色，在饱和硫酸铵中可溶解，还原型水溶液呈桃红色，溶解度较小。现有的细胞色素C在提取时，纯化收率低。

实用新型内容

本实用新型目的在于提供一种细胞色素C提取纯化系统，以解决上述背景技术中提出的现有的细胞色素C纯化收率低的问题。

为了解决现有技术存在的上述问题，本实用新型所采用的技术方案为：

细胞色素C提取纯化系统，包括依次通过管路连通的粉碎提取装置、吸附洗脱装置、浓缩透析装置和洗脱透析装置。

所述粉碎装置包括粉碎机和两个提取组件，所述提取组件包括相互连通的提取罐和压滤机。

所述吸附洗脱装置包括吸附罐、洗脱柱和多孔硅胶，所述多孔硅胶设于吸附罐内。

所述浓缩透析装置包括反应罐、离心机和透析袋，所述反应罐分别与洗脱柱和离心机连通，所述透析袋连通于离心机。

所述洗脱透析装置包括相互连通的层析柱和收集罐。

进一步的，所述提取组件包括第一提取组件和第二提取组件，所述第一提取组件包括第一提取罐和第一压滤机，所述第二提取组件包括第二提取罐和第二压滤机，所述压滤机的进口连通于提取罐的出口。

进一步的，所述粉碎机连通于提取罐。

进一步的，所述吸附罐内设有多孔硅胶。

提取工艺：

步骤一：绞碎、提取、压滤；

步骤11：取新鲜或冷冻猪心，去血块、脂肪和肌腱等，切成条块洗去血液，用粉碎机将猪心绞碎，获得碎肉；

步骤12：将碎肉加入第一提取罐，加1.5倍量蒸馏水搅拌均匀，用1mol/L硫酸调整pH至2-5，常温搅拌2.5h，获得混合液a。

步骤13：将混合液a通入第一压滤机内，1mol/L氨水调节pH至6.1-6.3,过滤，得提取液b和心渣c；

步骤14：将心渣c通入第二提取罐，加1.5倍量蒸馏水搅拌均匀，用1mol/L硫酸调整pH至2-5，常温搅拌2.5h，获得混合液d。

步骤15：将混合液d通入第二压滤机内，1mol/L氨水调节pH至6.1-6.3,过滤，得提取液e和心渣f。

步骤16，将提取液b和提取液e混合，获得混合液g。

步骤二：中和、吸附、洗脱

步骤21：将混合液g通入吸附罐内，加2mol/L氨水中和至pH7-8；

步骤22：在冰浴中静置沉淀杂蛋白，吸取上层清液h。

步骤23：向上层清液h中，加入多孔硅胶，搅拌吸附30-50min,静置倾去上层清液。

步骤24：对多孔硅胶进行洗涤，先用蒸馏水洗涤3次，再用2g/L(0.2％)氯化钠洗涤4次，最后用蒸馏水洗至洗液澄清为止。

步骤25：将洗涤后的多孔硅胶放入洗脱柱内，用25％硫酸铵溶液洗脱，得洗脱液i。

步骤三：盐析、浓缩、透析

步骤31：向洗脱液i中加入固体硫酸铵达到45％(相对密度为1.21～1.23)，使杂蛋白析出，过滤，收集透明液j。

步骤32：向透明液j中缓缓加入20％三氯乙酸(25ml/L,按体积计算)，边加边搅拌使细胞色素C沉淀析出，获得混合液k。

步骤33：将混合液k离心，收集沉淀l。

步骤34：将沉淀l荣誉蒸馏水，装入透析袋中透析(先用常水，再用蒸馏水透析至无硫酸根为止)，获得溶液m。

步骤35：将溶液m过滤，得到细胞色素C粗品溶液。

步骤四：吸附、洗脱、透析

步骤41：将细胞色素C粗品溶液通过层析柱吸附，所述层析柱为处理好的Amberlite IRC-50(NH4+)树脂柱。

步骤42：将层析柱取出，水洗至澄清。

步骤43：将层析柱装好，用0.6mol/L磷酸氢二钠和0.4mol/L.氯化钠混合液洗脱，获得洗脱液n。

步骤44：洗脱液用蒸馏水透析去氯离子，得细胞色素C精品。

本实用新型的有益效果为通过对加工系统的改进，使得细胞色素C的纯化收率更高。

附图说明

图1为本实用新型的结构示意图。

1-粉碎机；21-第一提取罐；22-第一压滤机；23-第二提取罐；24-第二压滤机；3-吸附罐；4-洗脱柱；5-反应罐；6-离心机；7-透析袋；8-层析柱；9-收集罐。

具体实施方式

下面结合附图及附图标记对本实用新型作进一步阐述。

为了能够更清楚地理解本实用新型的上述目的、特征和优点，下面结合附图和具体实施例对本实用新型进行详细描述。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

术语“第一”、“第二”、“第三”等仅用于区分描述，而不能理解为指示或暗示相对重要性。

在本实用新型的描述中，还需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“设置”、“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本实用新型中的具体含义。

以下结合附图对本实用新型的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本实用新型，并不用于限制本实用新型。

实施例1：

如图1所示，细胞色素C提取纯化系统，包括依次通过管路连通的粉碎提取装置、吸附洗脱装置、浓缩透析装置和洗脱透析装置。

所述粉碎装置包括粉碎机1和两个提取组件，所述提取组件包括相互连通的提取罐和压滤机。

所述吸附洗脱装置包括吸附罐3和洗脱柱4。

所述浓缩透析装置包括反应罐5、离心机6和透析袋7，所述反应罐5分别与洗脱柱4和离心机6连通，所述透析袋7连通于离心机6。

所述洗脱透析装置包括相互连通的层析柱8和收集罐9。

所述提取组件包括第一提取组件和第二提取组件，所述第一提取组件包括第一提取罐21和第一压滤机22，所述第二提取组件包括第二提取罐23和第二压滤机24。

所述第一压滤机22的进口连通于第一提取罐21的出口。

所述粉碎机1连通于第一提取罐21。

所述吸附罐3内设有多孔硅胶。

提取工艺：

步骤一：绞碎、提取、压滤；

步骤11：取新鲜或冷冻猪心，去血块、脂肪和肌腱等，切成条块洗去血液，用粉碎机1将猪心绞碎，获得碎肉；

步骤12：将碎肉加入第一提取罐21，加1.5倍量蒸馏水搅拌均匀，用1mol/L硫酸调整pH至2-5，常温搅拌2.5h，获得混合液a。

步骤13：将混合液a通入第一压滤机22内，1mol/L氨水调节pH至6.1-6.3,过滤，得提取液b和心渣c；

步骤14：将心渣c通入第二提取罐23，加1.5倍量蒸馏水搅拌均匀，用1mol/L硫酸调整pH至2-5，常温搅拌2.5h，获得混合液d。

步骤15：将混合液d通入第二压滤机24内，1mol/L氨水调节pH至6.1-6.3,过滤，得提取液e和心渣f。

步骤16，将提取液b和提取液e混合，获得混合液g。

步骤二：中和、吸附、洗脱

步骤21：将混合液g通入吸附罐3内，加2mol/L氨水中和至pH7-8；

步骤22：在冰浴中静置沉淀杂蛋白，吸取上层清液h。

步骤23：向上层清液h中，加入多孔硅胶，搅拌吸附30-50min,静置倾去上层清液。

步骤24：对多孔硅胶进行洗涤，先用蒸馏水洗涤3次，再用2g/L(0.2％)氯化钠洗涤4次，最后用蒸馏水洗至洗液澄清为止。

步骤25：将洗涤后的多孔硅胶放入洗脱柱4内，用25％硫酸铵溶液洗脱，得洗脱液i。

步骤三：盐析、浓缩、透析

步骤31：向洗脱液i中加入固体硫酸铵达到45％(相对密度为1.21～1.23)，使杂蛋白析出，过滤，收集透明液j。

步骤32：向透明液j中缓缓加入20％三氯乙酸(25ml/L,按体积计算)，边加边搅拌使细胞色素C沉淀析出，获得混合液k。

步骤33：将混合液k离心，收集沉淀l。

步骤34：将沉淀l荣誉蒸馏水，装入透析袋7中透析(先用常水，再用蒸馏水透析至无硫酸根为止)，获得溶液m。

步骤35：将溶液m过滤，得到细胞色素C粗品溶液。

步骤四：吸附、洗脱、透析

步骤41：将细胞色素C粗品溶液通过层析柱8吸附，所述层析柱8为处理好的Amberlite IRC-50(NH4+)树脂柱。

步骤42：将层析柱8取出，水洗至澄清。

步骤43：将层析柱8装好，用0.6mol/L磷酸氢二钠和0.4mol/L.氯化钠混合液洗脱，获得洗脱液n。

步骤44：洗脱液用蒸馏水透析去氯离子，得细胞色素C精品。

本实用新型不局限于上述可选实施方式，任何人在本实用新型的启示下都可得出其他各种形式的产品，但不论在其形状或结构上作任何变化，凡是落入本实用新型权利要求界定范围内的技术方案，均落在本实用新型的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种细胞色素C提取纯化系统，其特征在于：包括依次通过管路连通的粉碎提取装置、吸附洗脱装置、浓缩透析装置和洗脱透析装置；

所述粉碎提取装置包括粉碎机(1)和两个提取组件，所述提取组件包括相互连通的提取罐和压滤机；

所述吸附洗脱装置包括吸附罐(3)和洗脱柱(4)；

所述浓缩透析装置包括反应罐(5)、离心机(6)和透析袋(7)，所述反应罐(5)分别与洗脱柱(4)和离心机(6)连通，所述透析袋(7)连通于离心机(6)；

所述洗脱透析装置包括相互连通的层析柱(8)和收集罐(9)。

2.根据权利要求1所述的细胞色素C提取纯化系统，其特征在于：所述提取组件包括第一提取组件和第二提取组件，所述第一提取组件包括第一提取罐(21)和第一压滤机(22)，所述第二提取组件包括第二提取罐(23)和第二压滤机(24)。

3.根据权利要求2所述的细胞色素C提取纯化系统，其特征在于：所述第一压滤机(22)的进口连通于第一提取罐(21)的出口，第一压滤机(22)的出口连通于第二提取罐(23)。

4.根据权利要求2所述的细胞色素C提取纯化系统，其特征在于：所述粉碎机(1)连通于第一提取罐(21)。

5.根据权利要求1所述的细胞色素C提取纯化系统，其特征在于：所述吸附罐(3)内设有多孔硅胶。

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