CN204446735U - 一种封闭式快速制备血小板裂解液装置 - Google Patents
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Abstract
一种封闭式快速制备血小板裂解液装置，它涉及一种血小板裂解液制备装置。本实用新型目的是为了克服上述手动、开放式制备血小板裂解液的不足。它包括采血袋、转移袋、冻融袋、16G采血针、针套、管道、止流夹一、止流夹二、止流夹三、连接管一和连接管二。本实用新型构思简洁，能够在封闭环境下分离血小板和血小板裂解液，没有人员和样本的直接接触，减少了被污染的机会提高了分离过程的安全性，节省了时间。
Description
技术领域
本实用新型属于生物技术领域，涉及一种血小板裂解液制备装置。
背景技术
哺乳动物的血液由55％血浆、45％血液细胞组成的，其中血液细胞又可以分为红细胞、白细胞和血小板三类。血小板在血液细胞中占比小于1％，在生理状态下，起到维持血管内皮的完整性，参与止血和凝血作用，当身体创伤后，血小板启动凝血机制，释放出凝血因子、促血管活性因子和生长因子等成分，对早期的创伤愈合、血栓形成、组织修复起着重要的调节作用。
正常人血液中血小板计数为100～300×109/升，当血液中血小板低于0.5×109/升时容易出血。有些疾病会伴随着血小板缺少症，因此在临床疾病治疗上输入血小板可以用于救治一些因各种原因造成的血小板减少或功能异常的患者，例如白血病、再生障碍性贫血、淋巴瘤、骨髓移植前等血液病患者以及因放化疗而引起骨髓抑制的癌症病人，其中有很多患者需要依靠不间断地输注血小板来维持生命。另外，研究表明，血小板中有很多细胞生长因子和调节因子，在多种生理病理条件下可以起到对机体的修复作用，比如血小板衍生生长因子(PDGF)是由血小板的a颗粒合成的糖蛋白，主要通过与成纤维细胞、内皮细胞和巨噬细胞上的a受体结合，激活衰老受损局部细胞的有丝分裂，增加细胞基质产物，使再生细胞增多，在激发新血管形成和促进已有血管生长中也起到重要作用，PDGF是一种对高效促有丝分裂的因子，尤其对中胚层来源的细胞，包括肌肉细胞和间质细胞有促进分裂和繁殖作用；转化生长因子-β(TGF-β)是一种可以控制细胞增殖和分化的糖蛋白，可以促进成纤维细胞的扩增、促进合成胶原和纤维蛋白原又掉骨基质的沉淀和抑制骨吸收，同时TGF-β参与体内许多炎症反应，是体内多功能的基础抗炎细胞因子；纤维细胞生长因子(FGF)能促进血管新生，激发新活细胞生产，加速损伤组织修复和胚胎发育；表皮生长因子(EGF)能够修复上皮细胞，加速细胞繁殖和分化；血管内皮生长因子(VEGF)能产生胶原蛋白，激生透明质酸，从而有较强修复组织作用和促进血管生成作用；胰岛生长因子-1是成纤维细胞趋化剂并能促进蛋白合成和骨形成作用。
利用血小板中营养因子进行临床治疗可以采取两种形式，一种是利用多次离心办法将血小板富集浓缩后制成的富血小板血浆，然后利用凝血酶和钙离子诱导其血小板释放细胞因子，这种诱导方式是一种缓慢释放的过程。另外一种方法就是将制备完成的尽量少含红细胞的富血小板血浆利用冻融原理进行裂解，经过离心后去除血小板膜和其他细胞碎片，上清液成为血小板裂解液，此方法是个快速血小板中营养因子释放方法，在骨、软骨修复、皮肤损伤修复、常规方法难以修复的韧带损伤修复、以及由于手术造成的骨缺损、颌面部重构、牙龈缺损修复等过程都起到重要作用。由于血小板中的各种因子有促进各类细胞增殖作用，在自体骨髓间充质干细胞培养、自体脂肪干细胞培养中，可以采用供着自身的外周血血小板裂解液代替商业化动物血清，培养完成的细胞在移植人体的过程中没有任何动物源和外源蛋白。近年来脐带血干细胞库的建立多采取体积降低方案，只需储存含有干细胞的有核细胞部分，而将多余的脐带血血浆去掉，这种方法又为富血小板来源打开了新渠道。研究对比血小板裂解液和富血小板血浆发现，富血小板血浆存在较强的免疫原性，多用于自体移植，而血小板裂解液制备过程中不仅去除了残余细胞结构，降低了免疫原性，而且还保留了其中的多种生长因子，可为异体或异种移植创造条件。因此，如作为构建组织工程化组织的潜在选择，血小板裂解液可能具有比富小板血浆更优越的应用前景。
目前进行血小板裂解液的制备方法都是通过在实验室洁净环境开放式且手动分离的，这些方法中在多次离心并去掉红细胞和大部分血浆的过程都是靠人工、用移液管或者吸管将不需要的组分分离后去除后制备得到富血小板血浆，然后在-80度低温反复冻融裂解红细胞，最终再离心取出上清液后获得血小板裂解液。这种开放式方法多次需要人工进行组分转移，容易造成制备过程污染；同时由于样本在-80度完全冻透需要几个小时的时间，因此整个过程耗时长、采用的耗材种类和数量均较多；而且人工转移红细胞的方式也会造成过多红细胞残留和血小板流失。
实用新型内容
本实用新型为克服上述手动、开放式制备血小板裂解液的不足，而提供了一种结构简单且使用方便、快捷的封闭式血小板裂解液制备装置。
本实用新型的一种封闭式快速制备血小板裂解液装置，它包括采血袋、转移袋、冻融袋、16G采血针、针套、管道、止流夹一、止流夹二、止流夹三、连接管一和连接管二；
其中，采血袋与转移袋通过连接管一连通，并在转移袋下方的连接管一上设置有止流夹二；冻融袋与采血袋通过连接管二连通，并在采血袋下方的连接管二上设置有止流夹三；
采血袋通过管道与16G采血针连通，且在采血袋上方的管道上设置有止流夹一，所述的针套包裹16G采血针；
采血袋的左上端和右上端分别设置悬挂孔三和悬挂孔四；冻融袋的左上端和右上端分别设置悬挂孔一和悬挂孔二，并且冻融袋上端中间位置设置有样本口。
本实用新型的装置由一个三联袋和三根导管组成。所述采血袋为50～200ml的无菌袋，内装抗凝剂。所述转移袋为50～200ml无菌袋。所述冻融袋为25～100ml无菌袋。所述导管一根为带有采血针的导管，一根将采血袋和转移袋连接、一根将采血袋和冻融袋连接起来。导管上均有止流夹，防止液体在袋子之间随意流动。导管可以为高频热封或超声波焊接后闭合，从而在制备完成后将三袋分离。
本实用新型包含以下有益效果：
1、采用本实用新型的装置进行操作时，全程操作人员没有在开放环境直接接触样本，使得样本出现因为人员操作带进的污染风险极小，临床应用过程中安全性高。
2、本实用新型的装置的采血袋和冻融袋均采用梯形设计，在分离血浆层和红细胞层的时候分界面窄，可以起到两相充分分离的作用。在离心完成后进行红细胞和血小板血浆分离过程、含血小板白膜层和去血小板血浆分离过程、血小板膜和血小板裂解液上清的分离过程分界面的面积小，红细胞等不需要相分离重复。
3、本实用新型的装置冻融袋选用的材质可以耐受-196度冻融，因此将血小板裂解液制备环境从-80度冰箱的几个小时，减小到了在液氮中快速冻融的几分钟，因此大大提高了制备效率，从而实现分离后的血小板在袋中直接、快速液氮冻融裂解且离心后有效分离。
本实用新型构思简洁，能够在封闭环境下分离血小板和血小板裂解液，没有人员和样本的直接接触，减少了被污染的机会提高了分离过程的安全性，节省了时间。
附图说明
图1为本实用新型的结构示意图。
具体实施方式
为进一步理解本实用新型的目的、结构、特征和功能，以下提供了结合具体实施方式的详细的描述。
具体实施方式一：结合图说明本实施方式，本实施方式的一种封闭式快速制备血小板裂解液装置，它包括采血袋1、转移袋2、冻融袋3、16G采血针4、针套5、管道6、止流夹一7、止流夹二8、止流夹三9、连接管一10和连接管二11；
其中，采血袋1与转移袋2通过连接管一10连通，并在转移袋2下方的连接管一10上设置有止流夹二8；冻融袋3与采血袋1通过连接管二11连通，并在采血袋1下方的连接管二11上设置有止流夹三9；
采血袋1通过管道6与16G采血针4连通，且在采血袋1上方的管道6上设置有止流夹一7，所述的针套5包裹16G采血针4；
采血袋1的左上端和右上端分别设置悬挂孔三14和悬挂孔四15；冻融袋3的左上端和右上端分别设置悬挂孔一12和悬挂孔二13，并且冻融袋3上端中间位置设置有样本口16。
本实施方式的悬挂孔一12、悬挂孔二13、悬挂孔三14和悬挂孔四15方便袋子的悬挂、提拉、夹紧等操作。
本实施方式的样本口16方便进行血小板计数和临床使用。
本实施方式的采血袋1在离心机内摆放方法是悬挂孔三14和悬挂孔四15端向上放置，方便在低速离心完后，打开止流夹二8，将红细胞层通过连接管一10以重力方式排放到转移袋2中，然后，在第二次高速离心完后，打开止流夹三9，将富血小板血浆以重力的方式通过连接管一10排放到冻融袋3中。装有富血小板血浆的冻融袋3浸泡到液氮中，迅速结冰，然后在37度水浴快速复苏，以此方法反复冻融后进行离心。
本实施方式的冻融袋3在离心机内摆放方法是悬挂孔一12和悬挂孔二13端向上放置，方便离心完成后，打开止流夹三9，将血小板膜和其他细胞碎片以重力的形式，排放到采血袋1中，从而使得血小板裂解液上清存留在冻融袋3中。
具体实施方式二：结合图说明本实施方式，本实施方式与具体实施方式一不同点在于：采血袋1材质为添加有偏苯三酸三(2-乙基己基)酯(Tri-(2-ethylhexyl)trimellitate,TEHTM)塑性剂的聚氯乙烯。其它组成和连接方式与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：结合图说明本实施方式，本实施方式与具体实施方式一不同点在于：采血袋1有效体积为50～200mL。其它组成和连接方式与具体实施方式一相同。
具体实施方式四：结合图说明本实施方式，本实施方式与具体实施方式一不同点在于：采血袋1的内部形状为梯形。其它组成和连接方式与具体实施方式一相同。
具体实施方式五：结合图说明本实施方式，本实施方式与具体实施方式一不同点在于：转移袋2的材质为添加有邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)塑性剂的聚氯乙烯。其它组成和连接方式与具体实施方式一相同。
具体实施方式六：结合图说明本实施方式，本实施方式与具体实施方式一不同点在于：转移袋2有效体积为50～200mL。其它组成和连接方式与具体实施方式一相同。
具体实施方式七：结合图说明本实施方式，本实施方式与具体实施方式一不同点在于：转移袋2整体形状为长方形。其它组成和连接方式与具体实施方式一相同。
具体实施方式八：结合图说明本实施方式，本实施方式与具体实施方式一不同点在于：冻融袋3材质为乙烯-醋酸乙烯酯。其它组成和连接方式与具体实施方式一相同。
本实施方式冻融袋3材质可以耐受-196度液氮环境冻、37度水浴环境复苏而不会失去其完整性和密封性。
具体实施方式九：结合图说明本实施方式，本实施方式与具体实施方式一不同点在于：冻融袋3有效体积为25～100mL。其它组成和连接方式与具体实施方式一相同。
具体实施方式十：结合图说明本实施方式，本实施方式与具体实施方式一不同点在于：连接管一10和连接管二11的材质均为乙烯-醋酸乙烯酯。其它组成和连接方式与具体实施方式一相同。
本实施方式连接管一10和连接管二11的材质既可以抗冻又可以方便热熔封闭。
本实用新型内容不仅限于上述各实施方式的内容，其中一个或几个具体实施方式的组合同样也可以实现发明的目的。
通过以下实施例验证本实用新型的有益效果：
实施例一
本实施例的一种封闭式快速制备血小板裂解液装置进行血小板裂解液制备的过程如下：
一、去除套管5，打开止流夹一7，用16G采血针4从供者上臂肘弯静脉处采血150ml到采血袋1中，与袋中抗凝剂混合均匀；
二、用高温将管道6在近采血袋1处热熔封闭，去除16G采血针4；
三、将采血袋1的悬挂孔三14和悬挂孔四15端向上放置，同时将转移袋2和冻融袋3以及附带其它管路夹在采血袋1周围，使得采血袋1以尽量平展直立的方式放进离心杯中，称量样本离心杯和对称排放的离心杯，使得两者重量之差小于0.1g，设离心机转速200g，4度，离心20分钟，进行离心；
四、将采血袋1缓慢从离心杯中取出，将孔悬挂孔三14和悬挂孔四15悬挂在实验室悬臂挂钩上，打开止流夹二8，缓慢将红细胞层排放到采血袋1中，排放过程要保持分界面平缓下移到梯形下底边，并尽可能将红细胞层全部转移，剩下在袋中的为含有血小板的血浆；
五、关闭止流夹二8，将采血袋1中样本均匀混合；
六、将采血袋1的悬挂孔三14和悬挂孔四15端向上放置，同时将转移袋2和冻融袋3以及附带其他管路夹在采血袋1周围，使得采血袋1以尽量平展直立的方式放进离心杯中，称量样本离心杯和对称排放的离心杯，使得两者重量之差小于0.1g，设离心机转速700g，4度，离心20分钟，进行离心；
七、将采血袋1缓慢从离心杯中取出，将孔悬挂孔三14和悬挂孔四15悬挂在实验室悬臂挂钩上，打开止流夹三9，缓慢将白膜层细胞层排放到冻融袋3中，并将袋中1/2～1/4的血浆也排放到冻融袋3中；
八、关闭止流夹三9，将冻融袋3中样本均匀混合；
九、从取样口16用注射器取样0.1ml，进行血小板计数；
十、准备液氮1L盛放在防冻容器中，同时准备37度恒温水浴；将冻融袋3整体浸没在液氮中，使之迅速、彻底降温后从液氮中取出，再快速放在37度水浴中复温，看到样本在水浴中重复融化后，再次放在液氮中进行急冻，如此循环进行2～5次；
十一、将冻融袋3的悬挂孔一12和悬挂孔二13端向上放置，同时将采血袋1和转移袋2以及附带其他管路夹在冻融袋3周围，使得冻融袋3以尽量平展直立的方式放进离心杯中，称量样本离心杯和对称排放的离心杯，使得两者重量之差小于0.1g，设离心机转速1000g，4度，离心20分钟，进行离心；
十二、将冻融袋3缓慢从离心杯中取出，将悬挂孔一12和悬挂孔二13悬挂在实验室悬臂挂钩上，打开止流夹三9，缓慢将细胞碎片排放到采血袋1中；
十三、用高温将连接管二11在近冻融袋3处热熔封闭，以及采血袋1和转移袋2以及连带管路；
十四、在临床应用时，先用注射器从取样口16将所需血小板裂解液吸出，注射到需要的部位，即可。
Claims (10)
1.一种封闭式快速制备血小板裂解液装置，其特征在于它包括采血袋(1)、转移袋(2)、冻融袋(3)、16G采血针(4)、针套(5)、管道(6)、止流夹一(7)、止流夹二(8)、止流夹三(9)、连接管一(10)和连接管二(11)；
其中，采血袋(1)与转移袋(2)通过连接管一(10)连通，并在转移袋(2)下方的连接管一(10)上设置有止流夹二(8)；冻融袋(3)与采血袋(1)通过连接管二(11)连通，并在采血袋(1)下方的连接管二(11)上设置有止流夹三(9)；
采血袋(1)通过管道(6)与16G采血针(4)连通，且在采血袋(1)上方的管道(6)上设置有止流夹一(7)，所述的针套(5)包裹16G采血针(4)；
采血袋(1)的左上端和右上端分别设置悬挂孔三(14)和悬挂孔四(15)；冻融袋(3)的左上端和右上端分别设置悬挂孔一(12)和悬挂孔二(13)，并且冻融袋(3)上端中间位置设置有样本口(16)。
2.根据权利要求1所述的一种封闭式快速制备血小板裂解液装置，其特征在于采血袋(1)材质为添加有偏苯三酸三(2-乙基己基)酯塑性剂的聚氯乙烯。
3.根据权利要求1或2所述的一种封闭式快速制备血小板裂解液装置，其特征在于采血袋(1)有效体积为50～200mL。
4.根据权利要求3所述的一种封闭式快速制备血小板裂解液装置，其特征在于采血袋(1)的内部形状为梯形。
5.根据权利要求1所述的一种封闭式快速制备血小板裂解液装置，其特征在于转移袋(2)的材质为添加有邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯塑性剂的聚氯乙烯。
6.根据权利要求1或5所述的一种封闭式快速制备血小板裂解液装置，其特征在于转移袋(2)有效体积为50～200mL。
7.根据权利要求6所述的一种封闭式快速制备血小板裂解液装置，其特征在于转移袋(2)整体形状为长方形。
8.根据权利要求1所述的一种封闭式快速制备血小板裂解液装置，其特征在于冻融袋(3)材质为乙烯-醋酸乙烯酯。
9.根据权利要求1所述的一种封闭式快速制备血小板裂解液装置，其特征在于冻融袋(3)有效体积为25～100mL。
10.根据权利要求1所述的一种封闭式快速制备血小板裂解液装置，其特征在于连接管一(10)和连接管二(11)的材质均为乙烯-醋酸乙烯酯。
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