CN204177807U - 幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM/IgG联合金标检测卡 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了一种幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM/IgG联合金标检测卡，属于临床医学检测领域。所述试剂盒由试纸条与卡盒两部分组成：卡盒包括盒盖(3)与盒底(4)，卡盒内置检测试纸条。卡盒正面可见加样孔(1)和检视窗(2)，盒盖正面印有加样孔标注(5)、结果判别说明(6)、检测项说明及信息记录栏(7)。本实用新型采用胶体金免疫层析技术，以工程表达的幽门螺杆菌尿素酶B作检测抗原，以高效抗人IgM和抗人IgG单克隆抗体作为捕获抗体，应用“间接免疫法”制备检测试剂盒，可同时检测幽门螺杆菌的首次感染和既往感染，具有检测方法简单，结果显示准确、快速，无需特殊仪器设备的优点。

Description

幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM/IgG联合金标检测卡

技术领域

本实用新型属临床医学检测技术领域，具体涉及胶体金免疫层析检测技术。

背景技术

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的革兰氏阴性微需氧杆菌，细菌常排列成 S 形或海鸥状，通常在胃壁黏液层下的黏膜上皮表面，胃小凹内及腺腔内，呈不均匀的集团状分布。Hp可经粪-口、口-口、密切接触和动物源性等途径传播，感染有家族聚集现象。Hp感染呈全球性分布，和一些上消化道疾病发生有紧密联系，是慢性胃炎、胃十二指肠溃疡的重要致病因素，与胃癌、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤发生密切相关，世界卫生组织已将其列为I类致癌因子。Hp尿素酶丰富，可迅速分解尿素释放氨，是鉴定该菌的主要依据之一。尿素酶亦是Hp感染时主要免疫抗原之一。

目前，Hp的检测方法分为侵入性检测方法和非侵入性检测方法两类。侵入性方法包括组织学检查、细菌培养等，胃粘膜组织的细菌培养是诊断Hp感染的最可靠方法，但其需要特殊设备和试验条件，耗时较长，不太适用于临床快速诊断，且侵入性方法对患者有损伤，应减少使用。非侵入性检测方法主要包括尿素呼气试验、血液抗体检测、粪便抗原检测、基因分子生物学检测等。尿素呼气试验被认为是除培养之外诊断Hp感染的“金标准”，但其缺点在于该检查需要质谱仪且试剂较昂贵，此外¹⁴C具有放射性，对部分患者不适用。粪便抗原检测是一种优良的体外诊断技术，但是可能存在与其他病原微生物的交叉反应，特异性较弱。本实用新型检测血浆、血清或全血中的幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM/IgG，利用人体免疫反应进行幽门螺杆菌的诊断。

微生物进入人体后引起机体的免疫反应，人体免疫细胞会识别微生物细胞表面抗原，产生相应抗体，其中包括各类免疫球蛋白（Immunoglobulin, Ig）。免疫球蛋白M（IgM）是初次免疫应答中最早出现的抗体，感染后1~3周在血清中检出，提示新近发生感染，再次感染IgM一般不出现，故可作为感染早期的诊断标志；免疫球蛋白G（IgG）是机体再次免疫应答的主要抗体，感染后7~8周达高峰，具有重要的免疫效应，可作为感染中后期及再次感染的诊断标志。本实用新型可对血浆、血清或全血中的幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM/IgG进行同时检测，确定感染阶段。

免疫胶体金技术（immunocolloidal gold technique）是一种新型诊断技术，将其与免疫层析技术结合制作的检测试剂盒具有操作简单、无需特殊辅助仪器，结果判读快速等优点，其基本原理如下：以高电子密度的酒红色胶体金颗粒标记抗原（或抗体），若样品中存在待检抗体（或待检抗原），则标记后的抗原与样品中待检抗体形成 抗原-抗体-胶体金复合物，由毛细作用在硝酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane，简称NC膜)上泳动，并与包被在NC膜上的另一表位抗原（或抗体）结合，形成肉眼可见的红色线条，从而判定待检抗体的存在；若样品中无待检抗体存在，则不会在NC膜上形成可见红线。本实用新型以此技术为基础。

发明内容

本实用新型旨在提供一种幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM/IgG联合金标检测卡，用于检测患者幽门螺杆菌感染情况。本实用新型可解决幽门螺杆菌检测需特殊仪器及耗时长等问题，提供一种检测特异性强、操作简单快速的试剂盒，可广泛用于各级医疗机构的临床检测。

本实用新型由卡盒和试纸条两部分组成。

所述卡盒分为盒盖与盒底两部分，材质为ABS树脂（丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物）；盒盖与盒底由柱槽和柱以插接方式连接，盒盖与盒底均为圆角长方形；卡盒正面可见圆形的加样孔和长方形的检视窗；在加样孔位置可见试纸条样品垫，在检视窗位置可见反应膜、检测线T和质控线C；盒盖正面印有加样孔标注、结果判别说明、检测项说明及信息记录栏 的文字说明。

所述试纸条置于卡盒内部，具体位置在盒底上的卡槽中，由基板、双面胶、样品垫、胶体金垫、胶带、反应膜、吸样垫组成，胶体金垫上吸附有胶体金标记的单克隆抗体，反应膜上包被有检测抗原（显示为检测线T）和质量控制抗体（显示为质控线C）。基板材质为PVC塑料（聚氯乙烯），样品垫及胶体金垫材质为无纺布，反应膜为硝酸纤维素膜，吸样垫材质为吸油纸。

本实用新型应用胶体金免疫层析技术，分别检测血清、血浆或全血中幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM/IgG。所述试纸条分别使用鼠源高效抗人IgM单克隆抗体和鼠源高效抗人IgG单克隆抗体作为捕获抗体。IgM检测试纸条，将鼠源高效抗人IgM单克隆抗体用胶体金标记形成抗人IgM-胶体金复合物并固化于IgM检测试纸条的胶体金垫上；IgG检测试剂条，将鼠源高效抗人IgG单克隆抗体用胶体金标记形成抗人IgG-胶体金复合物并固化于IgG检测试纸条的胶体金垫上；两个检测试纸条的反应膜检测线T位置均包被有工程表达的幽门螺杆菌尿素酶B，质控线C位置均包被有羊抗鼠IgG抗体。

当检测IgM时，若待测样品中含有达到阈值的幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM，足量的IgM与胶体金标记的鼠源高效抗人IgM单克隆抗体形成 IgM-抗人IgM-胶体金复合物，在毛细作用下，IgM-抗人IgM-胶体金复合物在NC膜上移动，在检测线T处与幽门螺杆菌尿素酶B结合形成肉眼可见的红色检测线T，而未与IgM结合的抗人IgM-胶体金复合物则越过检测线T与包被在NC膜质控线C位置的羊抗鼠IgG抗体结合形成红色质控线C；若样本中无达阈值的幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM，则检测线T不可见，只见红色质控线C。当检测IgM时，若待测样品中含有达到阈值的幽门螺杆菌尿素酶抗体IgG，足量的IgG与胶体金标记的鼠源高效抗人IgG单克隆抗体形成 IgG-抗人IgG-胶体金复合物，在毛细作用下，IgG-抗人IgG-胶体金复合物在NC膜上移动，在检测线T处与幽门螺杆菌尿素酶B结合形成肉眼可见的红色检测线T，而未与IgG结合的抗人IgG-胶体金复合物则越过检测线T与包被在NC膜质控线C位置的羊抗鼠IgG抗体结合形成红色质控线C；若样本中无达阈值的幽门螺杆菌尿素酶抗体IgG，则检测线T不可见，只见红色质控线C。

本实用新型采用的标记抗体为鼠源高效抗人IgM单克隆抗体和鼠源高效抗人IgG单克隆抗体，捕获抗原为工程表达的幽门螺杆菌尿素酶B，提高了幽门杆菌的检出率和特异性。

本实用新型可同时检测血清、血浆或全血中的幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM/IgG，可检测幽门螺杆菌的感染时期。

本实用新型调整胶体金标记技术，有效组合抗原抗体，使所述试剂盒可在常温下保存（4℃~30℃）；同时，本实用新型具有免疫胶体金技术操作简单、结果判读快速、无需特殊设备的优点。

附图说明

图1是本实用新型的外观立体示意图。

图2是本实用新型的盒底（4）正面示意图。

图3是本实用新型的盒盖（3）背面示意图。

图4是本实用新型的试纸条正面示意图。

图5是本实用新型的试纸条侧面示意图。

图中各数字表示内容如下：1.加样孔； 2.检视窗； 3.盒盖； 4.盒底； 5.加样孔标注； 6.结果判别说明； 7.检测项说明及信息记录栏； 8.柱槽； 9.卡槽； 10.柱； 11.样品垫； 12.胶带； 13.反应膜； 14.检测线T； 15.质控线C； 16.吸样垫； 17.基板； 18.双面胶； 19.胶体金垫。

具体实施方式

提供下述实施例是为了进一步理解本实用新型，并不局限于所述最佳实施方式，不对本实用新型的内容和保护范围构成限制，任何人在本实用新型的启示下或是将本实用新型与其他现有技术的特征相组合而得出的任何与本实用新型相同或相似的产品，均落在本实用新型的保护范围之内。

本实用新型由卡盒和试纸条两部分组成，卡盒选择有资质的供应商进行定制，现结合说明书附图，对试剂盒及试纸条构造进行描述：图1所示为所述试剂盒外观立体图，卡盒分为盒盖（3）与盒底（4）两部分，盒盖与盒底均为圆角长方形；卡盒正面可见加样孔（1）和检视窗（2），加样孔为圆形，检视窗为长方形；在加样孔位置可见图3所示试纸条样品垫（11），在检视窗位置可见反应膜（13）、检测线T（14）和质控线C（15）；盒盖正面印有加样孔标注（5）、结果判别说明（6）、检测项说明及信息记录栏（7）。

图2和图3分别是卡盒打开后，盒底（4）正面与盒盖（3）背面的示意图，卡盒由图3所示柱槽（8）和图4所示柱（10）以插接方式连接；图4所示试纸条置于卡盒内部，具体位置在图2所示盒底（4）上的卡槽（9）中；将盒底、试纸条与盒盖组装接合后呈图1所示。

图4所示为试纸条正视图，图5所示为试纸条侧视图，IgM和IgG两个试纸条结构相似。试纸条最底层为基板（17），材质为PVC塑料（聚氯乙烯）；基板上附着一层双面胶（18）用于固定基板与其他部件；试纸条前端（图4、图5所示左侧）放置胶体金垫（19），并覆盖一层较长样品垫（11），样品垫及胶体金垫材质为无纺布，胶体金垫上吸附有不同的胶体金标记单克隆抗体；胶体金垫右端压在反应膜（13）上，并以胶带（12）在上端固定，反应膜材质为硝酸纤维素膜，反应膜上包被有幽门螺杆菌尿素酶B（即检测线T（14））和羊抗鼠IgG抗体（即质控线C（15））；试纸条末端（图4、图5所示右侧）为吸样垫（16），吸样垫左端覆盖反应膜右端，以提供毛细作用力并吸收样品余液，吸样垫材质为吸油纸。

所述幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM试纸条（置于图1所示试剂盒上侧）的胶体金标记单克隆抗体为高效抗人IgM单克隆抗体；所述幽门螺杆菌尿素酶抗体IgG试纸条（置于图1所示试剂盒下侧）的胶体金标记单克隆抗体为高效抗人IgG单克隆抗体；反应膜上的检测抗原为基因工程表达的幽门螺杆菌尿素酶B；所述两个试纸条质量控制抗体均为羊抗鼠IgG抗体。下面以幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM试纸条为例，对试纸条的加工方法进行简述。

所述试纸条的胶体金垫制备方法如下：① 胶体金的制备：在浓度为0.004%~0.012%的氯金酸中加入其体积的1.3%~2%、浓度为1%~3%的柠檬酸三钠，煮沸10~20分钟，得到胶体金溶液；② 胶体金标记抗人IgM：将①中所得胶体金溶液中用0.2M碳酸钾溶液调pH 至8.0~9.0，加入一定量抗人IgM，置磁力搅拌器上搅拌均匀后，按0.1~0.6g/100ml在溶液中加入动物血清蛋白，4℃静置2小时；③ 将②中所得抗人IgM-胶体金混合溶液经1000转/分钟离心30分钟，弃上清液，取沉淀物；④ 将③中所得沉淀物按4~10ml/100ml溶于0.02M pH 7.4 Tris-Hcl缓冲液（含0.2%~0.6%的动物血清蛋白和0.01%~0.06%叠氮钠）中，得到抗人IgM-胶体金复合物溶液；⑤ 将无纺布浸入④中所得胶体金溶液中，待浸入的无纺布有液体渗出后，37℃干燥，即得包被有抗人IgM-胶体金复合物的胶体金垫。

所述试纸条反应膜上的检测线T和质控线C的包被方法如下：取高浓度尿素酶单克隆抗体，调浓度至1mg/ml，加入适量甲醛，用专用喷膜机在反应膜中段包被检测线T；取高浓度羊抗鼠IgG抗体，调浓度为2mg/ml，加入适量甲醛，用专用喷膜机在反应膜中段距检测线T 4~5mm处包被质控线C；检测线T和质控线C均按10~20μl/ml设置喷量，反应膜完成包被后，立即置入45℃烘箱中，干燥1小时即得。

所述幽门螺杆菌尿素酶抗体IgG试纸条制备方法与上述方法类似。

本实用新型使用时需添加一定浓度的磷酸盐稀释液，稀释液成分如下：每1000mL稀释液含0.004M Na₂HPO₄，0.001M NaH₂PO₄，0.15M NaCl，溶剂为蒸馏水。

使用所述试剂盒检测方法如下：将干燥密封的试剂盒从包装内取出，平放在实验室台面上，用移液器分别吸取待测样本（血清、血浆或全血）10μL加入两个加样孔，再向每个加样孔中滴加稀释液100μL，同时将样本编号填写在盒盖正面信息记录栏，开始观察结果；20分钟内，观察两个检视窗处质控线C和检测线T是否显红色；若IgM检测项质控线C和检测线T显红色，则说明样本中有达到阈值的幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM，检测结果呈阳性；若IgG检测项质控线C和检测线T显红色，则说明样本中有达到阈值的幽门螺杆菌尿素酶抗体IgG，检测结果呈阳性；若仅质控线C显色，则检测结果呈阴性。

Claims (3)

1.一种幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM/IgG联合金标检测卡，其特征在于：包含卡盒和试纸条两部分；其中，所述卡盒分为盒盖（3）与盒底（4）两部分；盒盖与盒底由柱槽（8）和柱（10）以插接方式连接，盒盖与盒底均为圆角长方形；卡盒正面可见加样孔（1）和检视窗（2），加样孔为圆形，检视窗为长方形；在加样孔位置可见试纸条样品垫（11），在检视窗位置可见反应膜（13）、检测线T（14）和质控线C（15）；盒盖正面印有加样孔标注（5）、结果判别说明（6）、检测项说明及信息记录栏（7）。

2.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM/IgG联合金标检测卡，其特征在于：所述试纸条置于卡盒内部的盒底（4）上的卡槽（9）中，由基板（17）、双面胶（18）、样品垫（11）、胶体金垫（19）、胶带（12）、反应膜（13）、吸样垫（16）组成，胶体金垫上吸附有胶体金标记的单克隆抗体，反应膜上包被有检测抗原和质量控制抗体。

3.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM/IgG联合金标检测卡，其特征在于：将检测幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM的试纸条和检测幽门螺杆菌尿素酶抗体IgG的两个试纸条平行置于同一个检测试剂盒中。