CN101082059A - 大肠杆菌o157:h7抗原快速检测测试条 - Google Patents

Abstract

大肠杆菌O157:H7抗原快速检测测试条，属于医用诊断用品技术领域。包括基材、覆盖于基材上的纤维膜、覆盖于基材上部的吸水膜，测试条下部纤维膜上吸附有大肠杆菌O157:H7抗原单克隆标记抗体，中部纤维膜上自下而上分布有一条包被有抗鼠IgG的质控线、一条包被有与下部纤维膜上吸附标记抗体配对性良好的大肠杆菌O157:H7抗原单克隆抗体的检测线。标记抗体吸附于固定在测试条下部的纤维膜与覆膜之间的基质(玻璃纤维或者无纺布)上；所述下部纤维膜为玻璃纤维膜，中部纤维膜为硝酸纤维膜。标记抗体标记物为胶体金，胶体金抗体浓度为(1.0－3.0)×10^－3mg/cm²，包被抗体浓度为(2.0－8.0)×10^－4mg/cm²。利用本发明检测速度快，准确度高。

Description

大肠杆菌O157:H7抗原快速检测测试条

技术领域

本发明属于医用诊断用品技术领域，特别涉及一种大肠杆菌O157:H7快速检测测试条。

背景技术

大肠杆菌O157:H7是肠出血型大肠杆菌的主要血清型，可通过牛肉及其制品、牛奶及其制品、鸡肉、蔬菜、水果、饮料、水等传播，人与人的密切接触也可传播。大肠杆菌O157:H7可引起出血性肠炎，感染病人的典型临床症状为血便、腹痛、低热或不发热，约有10％的病人发展为溶血性尿毒综合症及血栓性血小板减少性紫癜，并且可对被感染病人的肠道、肝、脾、肾、淋巴、脑、呼吸系统和神经系统造成损伤。老人和儿童为高危人群，易发生溶血性尿毒症，死亡率高达30％以上。世界卫生组织已把大肠杆菌O157:H7出血性肠炎列为新发传染病。目前，大肠杆菌O157:H7感染已成为一个世界性的卫生问题。

控制大肠杆菌O157:H7感染疫情的发生及蔓延的一个关键因素在于快速、准确的从不同标本中检测出病原菌，从而为综合性防治O157:H7感染提供可靠的诊断依据。目前对大肠杆菌O157:H7尚无快速检测的理想方法，国内主要通过病原分离鉴定，但细菌培养需要较长的时间，一般需要24小时以上，甚至是几天，而且经细菌学证实的病例中阳性率不高等。不利于及时确诊并实施相应控制措施。其它的一些辅助诊断方法如凝集试验、免疫荧光法等普遍存在灵敏度低、特异性差等问题，有些还需要特殊仪器、操作复杂；国外进口试剂价格昂贵。

发明内容

本发明目的在于提供一种能快速、简便地诊断出大肠杆菌O157:H7抗原的快速检测测试条。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：大肠杆菌O157:H7抗原快速检测测试条，包括基材、覆盖于基材上的纤维膜、覆盖于基材上部的吸水膜，测试条下部纤维膜上吸附有大肠杆菌O157:H7抗原(包括菌体抗原和鞭毛抗原)单克隆标记抗体，中部纤维膜上自下而上分布有一条包被有抗鼠IgG的质控线、一条包被有与下部纤维膜上吸附标记抗体配对性良好的大肠杆菌O157:H7抗原单克隆抗体的检测线。

标记抗体吸附于固定在测试条下部的纤维膜与覆膜之间的基质(玻璃纤维或者无纺布)上；所述下部纤维膜为玻璃纤维膜，中部纤维膜为硝酸纤维膜。

标记抗体标记物为胶体金，胶体金抗体浓度为(1.0-3.0)×10^-3mg/cm²，包被抗体浓度为(2.0-8.0)×10^-4mg/cm²

基质上表面覆盖有覆膜。

基材选用PVC板，吸水膜选用吸水棉浆板，覆膜选用医用不干胶膜，纤维膜、吸水膜粘附于PVC板上。

本发明产品制备过程为：以PVC板为基材、以胶体金做标记物为例，包括(1)纯化单克隆抗体：采用辛酸-硝酸铵法，取一份抗血清和同体积的生理盐水，加入辛酸后高速离心30分钟，取上清夜加入2份饱和的辛酸铵溶液，室温静置30分钟，离心取出沉淀加入缓冲液稀释。(2)制备胶金体：采用柠檬酸还原法，在烧杯中加入1000ml蒸馏水，100℃煮沸约5分钟，再加入1％氯化金溶液1ml和1％柠檬酸三钠溶液2ml，强力搅拌至溶液颜色为深红色，冷至室温。调PH至8.2。(3)金标记单抗：取100ml调好PH的胶体金溶液，加入一定量标记抗体，搅拌2分钟后用1％牛血清血蛋白(BSA)终止反应。高速离心50分钟，取沉淀用PH＝7.4的0.01M PB稀释至原体积的10％。(4)金标固化：用基质吸取此悬浮液，冻干备用。(5)包被膜制备：取包被抗体，调至1mg/ml，包被膜、吸水膜、吸水棉浆板按结构示意图固定粘贴在基材上，覆盖上覆膜，切割成一定尺寸即可。

本发明测试条在使用时，将纤维膜一端竖向插入标本样品，或把标本样品滴至测试条上面下部纤维膜上。样品在毛细作用下，沿测试条向吸水膜方向游动，如果标示样品中含有大肠杆菌O157:H7抗原，它先与标记抗体(胶金抗体)反应形成标记抗体-抗原复合物。当标本样品游动至包被有与胶体金标记抗体配对性良好的包被抗体检测带时，其中所含的标记抗体-抗原复合物进一步与包被抗体反应，形成标记抗体-抗原-包被抗体夹心复合物并聚集与检测线上，显示一条红线。包被膜上级显示2条红线，表明结果为阳性；如仅出现一条红线(质控线)，表明结果为阴性；如不显示红线，则表明测试条已失效。利用本测试条，加样后只需1-10分钟即可对O157:H7抗原进行检测，简单、方便、快捷。胶金标记抗体与包被抗体性良好，测试准确度高。因此，利用本发明测试条进行大肠杆菌O157:H7抗原检测具有特异性高、灵敏度强、操作简单快速、稳定期长、结果容易判断等优点，无需任何仪器设备，适用于大中型医院细菌室、各级卫生防疫站、出入境检疫局、食品厂等对样品的初筛。

附图说明

图1为本发明的结构示意图。

具体实施方式

实施例：大肠杆菌O157:H7抗原快速检测测试条，包括PVC基材1、粘附于基材上部(本实施例中上、下部以测试条使用时标本样品游动方向为准)的吸水棉浆板2、粘附于基材下部的玻璃纤维膜3、粘附于基材中部的硝酸纤维膜4、不干胶覆膜6粘附于玻璃纤维膜3上靠近基材中间部位，覆膜6与玻璃纤维3之间夹持固定有一块无纺布5。吸水棉浆板3、硝酸纤维膜4、基质5和玻璃纤维膜6端面紧密接触。基质5上吸附有抗大肠杆菌O157:H7抗原胶体金标记的单克隆抗体，胶金抗体浓度为2.0×10^-3mg/cm²，中部硝酸纤维膜4上有一条质控线和一条包被抗体线，分别包被有抗鼠IgG和与基质上吸附的胶金标记抗体配对性良好的抗大肠杆菌O157:H7抗原单克隆抗体，抗体浓度为6.0×10^-4mg/cm²。

Claims (5)

1、大肠杆菌O157:H7抗原快速检测测试条，包括基材、覆盖于基材上的纤维膜、覆盖于基材上部的吸水膜，其特征在于，测试条下部纤维膜上吸附有大肠杆菌O157:H7抗原单克隆标记抗体，中部纤维膜上自下而上分布有一条包被有抗鼠IgG的质控线、一条包被有与下部纤维膜上吸附标记抗体配对性良好的大肠杆菌O157:H7抗原单克隆抗体的检测线。

2、如权利要求1所述的快速检测测试条，其特征在于，标记抗体吸附于固定在测试条下部的纤维膜与覆膜之间的基质上；所述下部纤维膜为玻璃纤维膜，中部纤维膜为硝酸纤维膜。

3、如权利要求1或2所述的快速检测测试条，其特征在于，标记抗体标记物为胶体金，胶体金抗体浓度为(1.0-3.0)×10^-3mg/cm²，包被抗体浓度为(2.0-8.0)×10^-4mg/cm²

4、如权利要求3所述的快速检测测试条，其特征在于，基质上表面覆盖有覆膜。

5、如权利要求4所述的快速检测测试条，其特征在于，基材选用PVC板，吸水膜选用吸水棉浆板，覆膜选用医用不干胶膜，纤维膜、吸水膜粘附于PVC板上。

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