CN1122845C - 伤寒杆菌抗原多元检测测试条 - Google Patents
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Abstract
伤寒杆菌抗原多元检测测试条，属医用诊断用品领域。包括基材、覆盖于基材上面的纤维膜、吸水棉浆板。测试条下部纤维膜上面的无纺布中吸附有抗伤寒、甲、乙型副伤寒杆菌鞭毛抗原单克隆标记抗体，中部纤维膜上分布有一条质控线和三条检测线，分别包被有抗鼠IgG和与标记抗体配对性良好的单克隆抗体。本发明利用层析技术可在一个测试条上用同一份样品一次加样即可方便地检测出伤寒、甲、乙型副伤寒抗原，简便、快捷、准确。
Description
技术领域
本发明属于医用诊断用品领域，特别涉及一种伤寒杆菌抗原多元检测测试条。
背景技术
伤寒及甲、乙型副伤寒是由伤寒及甲、乙型副伤寒沙门氏菌引起的急性肠道传染病，目前是我国及许多发展中国家较为常见的传染病之一。该病虽属肠道传染但肠道表现多属一般症状，出现腹泻症状者为数不多，近几年来轻型和亚临床型病例增多，尤其是小儿与老人的临床症状不典型，给临床早期诊疗带来一定困难。因此，实验室检测对于确定诊断、检出带菌者、追查传染源，都具有重要意义。伤寒及甲、乙型副伤寒实验室检查方法有多种。大多依靠细菌培养和血清学检查，但细菌培养需时长达5-7天，加之目前由于早期不正规地使用抗生素，致使血培养阳性率下降。经典的血清学检查为1896年创建的肥达氏(Widal)凝集试验，系检测血清中抗体，一直为世界各地广泛使用，但该实验存在诸多缺点：抗体在发病一周才能产生，阳性率仅为20％，故不能作早期诊断；由于抗生素广泛使用或因病人免疫机制的缺陷，部分病人抗体效价较低，从而可能导致假阳性影响诊断；伤寒与副伤寒杆菌与其它沙门氏菌有共同抗原或因非特异性回忆反应而出现12.2-18.0％的假阳性，故需作间隔5-7天的二次检查方能诊断，增加了病人的痛苦；流行区和非流行区的诊断标准不一，诊断菌液制备和效价不一，不便于标准化；容易受疫苗注射的干扰，而且在经细菌学证实的病例中阳性率不高等。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能快速、简便地诊断出伤寒、甲型副伤寒、乙型副伤寒的伤寒杆菌抗原多元检测测试条。
为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：伤寒杆菌抗原多元检测测试条，包括基材、覆盖于基材上的纤维膜、覆盖于基材上部的吸水膜，测试条下部纤维膜上吸附有抗伤寒、甲型副伤寒，乙型副伤寒杆菌鞭毛抗原单克隆标记抗体；中部纤维膜上自下而上分布有一条包被有抗鼠IgG的质控线，三条包被有与下部纤维膜上吸附的标记抗体配对性良好的抗伤寒、甲型副伤寒、乙型副伤寒杆菌鞭毛抗原单克隆抗体的检测线，测试条下部纤维膜及上部吸水膜上覆盖有覆膜。
标记抗体吸附于固定在测试条下部的纤维膜与覆膜之间的无纺布上；所述下部纤维膜为玻璃纤维膜，中部纤维膜为硝酸纤维膜。
标记抗体标记物为胶金，胶金抗体浓度为(1.0-3.0)×10-3mg/cm2，包被抗体浓度为(2.0-8.0)×10-4mg/cm2。
基材选用PVC板，吸水膜选用吸水棉浆板，覆膜选用医用不干胶膜，纤维膜、吸水膜粘附于PVC板上，覆膜粘贴于纤维膜和吸水膜上。
本发明产品制备过程为：以PVC板为基材，以胶体金做标记物为例，包括①纯化单克隆抗体：采用辛酸——硫酸铵法，取1份抗血清和同体积生理盐水，加入辛酸后高速离心30分钟，取上清液加入2份饱和硫酸铵溶液，室温静置30分钟，离心取沉淀加入缓冲液稀释。②制备胶体金：采用柠檬酸还原法，在烧杯中加入1000ml蒸馏水，100℃煮沸约5分钟，再加入1％氯化金溶液1ml和1％柠檬酸三钠溶液2ml，强力搅拌至溶液呈深红色，冷至室温，调pH至8.2。③金标记单抗：取100ml调好pH的胶体金溶液，加入一定量标记抗体，搅拌2分钟后用1％牛血清白蛋白(BSA)终止反应，高速离心50分钟，取沉淀用pH＝7.4的0.01MPB稀释至原体积的10％。④金标固化：用无纺布吸取此悬浮液，冻干备用。⑤包被膜制备：取包被抗体，调至1mg/ml，包被于硝酸纤维膜上。⑥测试条装备：取基材PVC板，将玻璃纤维膜、冻干胶金、包被膜、吸水棉浆板按结构示意图固定粘贴于基材板上，覆盖上覆膜，切割成一定尺寸即可。
本发明测试条在使用时，将纤维膜一端竖向插入标本样品，或把标本样品滴至测试条上面下部纤维膜上。样品在毛细作用下，沿测试条向吸水膜方向泳动，如果标本样品中含有伤寒及甲、乙型副伤寒杆菌鞭毛抗原之一、二或三种，它们先与标记抗体(胶金抗体)反应形成标记抗体——抗原复合物。当标本样品泳动至包被有与胶体金标记抗体配对性良好的包被抗体检测带时，其中所含的标记抗体—抗原复合物进一步与包被抗体反应，形成标记抗体—抗原—包被抗体夹心复合物并聚集于检测线上，显出一条红线。有n种抗原包被膜上即显示n+1条红线，表明结果为阳性；如仅出现一条红线(质控线)，表明结果为阴性；如不显示红线，则表明测试条已失效。因此，利用本测试条，只需一次加样，1-10分钟即可对三种伤寒抗原进行检测，简单、方便、快捷。胶金标记抗体与包被抗体配对性良好，因此测试准确度高。
附图说明
图1为本发明的结构示意图。
具体实施方式
实施例1：伤寒杆菌抗原多元检测测试条，包括PVC基材1、粘附于基材上部(本实施例中上、下部以测试条使用时标本样品泳动方向为准)的吸水棉浆板2、粘附于基材下部的玻璃纤维膜3、粘附于基材中部的硝酸纤维膜4，不干胶覆膜6粘附于玻璃纤维膜3上靠近基材中间部位，覆膜6与玻璃纤维膜3之间夹持固定有一块无纺布5。吸水棉浆板2、硝酸纤维膜4、无纺布5和玻璃纤维膜3端面紧密接触。无纺布5上吸附有抗伤寒、甲、乙型副伤寒杆菌鞭毛抗原胶体金标记的单克隆抗体，胶金抗体浓度为2.0×10-3mg/cm2，中部硝酸纤维膜4上有一条质控线和三条包被抗体线，分别包被有抗鼠IgG和与无纺布上吸附的胶金标记抗体配对性良好的抗伤寒、甲、乙型副伤寒杆菌鞭毛抗原单克隆抗体，抗体浓度为6.0×10-4mg/cm2。
实施例2：本实施例中，胶体金标记抗体浓度为1.0×10-3mg/cm2，包被抗体浓度为2.0×10-4mg/cm2，其它同实施例1。
实施例3：本实施例中，胶体金标记抗体浓度为3.0×10-3mg/cm2，包被抗体浓度为8.0×10-4mg/cm2，其它同实施例1。
Claims (5)
1、伤寒杆菌抗原多元检测测试条，包括基材、覆盖于基材上的纤维膜、覆盖于基材上部的吸水膜，本发明特征在于：测试条下部纤维膜上吸附有抗伤寒、甲型副伤寒，乙型副伤寒杆菌鞭毛抗原胶体金标记单克隆抗体，中部纤维膜上自下而上分布有一条包被有抗鼠IgG的质控线，三条包被有与下部纤维膜上吸附的标记抗体配对性良好的抗伤寒、甲型副伤寒，乙型副伤寒杆菌鞭毛抗原单克隆抗体的检测线，测试条下部纤维膜及上部吸水膜上覆盖有覆膜。
2、如权利要求1所述的多元检测测试条，其特征在于：标记抗体吸附于固定在测试条下部的纤维膜与覆膜之间的无纺布上；所述下部纤维膜为玻璃纤维膜，中部纤维膜为硝酸纤维膜。
3、如权利要求1或2所述的多元检测测试条，其特征在于：标记抗体浓度为(1.0-3.0)×10-3mg/cm2，包被抗体浓度为(2.0-8.0)×10-4mg/cm2。
4、如权利要求1或2所述的多元检测测试条，其特征在于：基材选用PVC板，吸水膜选用吸水棉浆板，覆膜选用医用不干胶膜、纤维膜、吸水膜粘附于PVC板上，覆膜粘贴于纤维膜和吸水膜上。
5、如权利要求3所述的多元检测测试条，其特征在于：基材选用PVC板，吸水膜选用吸水棉浆板，覆膜选用医用不干胶膜、纤维膜、吸水膜粘附于PVC板上，覆膜粘贴于纤维膜和吸水膜上。
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