CN106290865A - 沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒，主要特征部位为盒座，所述盒座前端设有水平凹槽，所述盒座内横向间隔设有五条竖直定位槽，所述竖直定位槽左右挡板两端分别与所述凹槽后挡板、所述盒座后挡板固连，所述竖直定位槽与所述凹槽公用挡板中心位置设有开口，在所述定位槽内固定有反应卡，所述反应卡从左至右依次为检测伤寒杆菌O抗体反应卡、检测伤寒杆菌H抗体反应卡、检测甲型副伤寒杆菌抗体反应卡、检测乙型副伤寒杆菌抗体反应卡、检测沙门菌属抗原反应卡。本发明将免疫学方法与胶体金标记技术有机结合，提供了一种省时、省力、安全、快速、特异性高、便于广泛用于诊断沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒。

Description

沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒
技术领域
本发明属于医学诊断领域，具体是指一种沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒。
背景技术
沙门菌属广泛分布于自然界中，在人和动物中有广泛的宿主，是一种人畜共患的食源性致病菌，其中伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌等对人类有致病力。沙门菌属感染临床表现为胃肠炎型、伤寒型、败血症型和局部化脓感染型，此病在世界各国均有不同程度的流行，任何年龄均可罹患，年幼(尤以1岁左右者)、年老、有慢性消耗性疾病者及近期内服用过抗菌药物者易感性较高。
沙门菌属感染易被误诊为肠胃疾病、伤寒、血液疾病或其他多种疾病而延误了最佳治疗时机，误诊原因主要有：(1)对患者流行病学资料如病史、职业、接触史、饮食习惯或居住环境等询问不详细；(2)主治医师对沙门菌属感染认识不足；(3)病症临床表现多样化且不典型：(4)缺乏简单、快速、方便、灵敏的检测手段。
目前对沙门菌属感染的检测方法为实验室检测，主要有细菌培养、血清学反应中的肥达反应、免疫学方法(ELISA、DotELISA、Dipstick assay)、聚合酶链反应(PCR)等，在现有技术中细菌培养和肥达反应被广泛应用，其他因技术不完善或操作等问题在临床上没有得到推广，但细菌培养法和肥达反应仍然存在很大弊端：反应时间长，出结果报告慢，需要仪器设备昂贵，检测环境要求严格，操作十分繁琐，特异性低，安全性差，阴阳性结果判断难度大，临床分析不准确等。
胶体金免疫层析技术是一种成熟标记技术，目前可用于多种抗原抗体的标记，但用于标记沙门菌属抗原和抗体，组合成诊断伤寒、甲型副伤寒、乙型副伤寒及沙门菌属感染的五联试剂盒，还未见报道，本发明为该技术领域的发展填补了一项空白。
发明内容
本发明解决现有技术的不足，将免疫学方法与胶体金标记技术有机结合，对伤寒杆菌O抗原、伤寒杆菌H抗原、甲型副伤寒杆菌抗原、乙型副伤寒杆菌H抗原及沙门氏菌属抗原进行标记，提供一种省时、省力、安全、快速、特异性高、便于广泛用于诊断伤寒、副伤寒及沙门氏菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒，包括盒体、吸滴管、血清加样杯和一次性注射器，其特征在于：所述盒体由盒盖和盒座扣合而成，所述盒座前端设有水平凹槽，所述凹槽前后挡板与所述盒座左右挡板固连，所述盒座内横向间隔设有五条竖直定位槽，所述竖直定位槽左右挡板两端分别与所述凹槽后挡板、所述盒座后挡板固连，所述竖直定位槽与所述凹槽公用挡板中心位置设有开口；在所述定位槽内固定有反应卡，所述反应卡从左至右依次为检测伤寒杆菌O抗体反应卡、检测伤寒杆菌H抗体反应卡、检测甲型副伤寒杆菌抗体反应卡、检测乙型副伤寒杆菌抗体反应卡、检测沙门菌属共同抗原反应卡；
所述反应卡由吸水纸一(A)、硝酸纤维素膜及吸水纸二(B)顺次搭接黏贴在所述定位槽底板上制成，所述硝酸纤维素膜上均布三条分别包被有抗体(或抗原)的检测线(G、T、C)；所述盒盖上设有加样窗口和观察窗口，所述加样窗口设于吸水纸一(A)上方并与所述开口重合，所述观察窗口设于所述硝酸纤维素膜上方；所述沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒根据所述硝酸纤维素膜上所述三条检测线(G、T、C)包被的抗体(或抗原)不同可分别检测伤寒杆菌O抗体、检测伤寒杆菌H抗体、检测甲型副伤寒杆菌抗体、检测乙型副伤寒杆菌抗体及检测沙门菌属抗原。
进一步地，所述检测伤寒杆菌O抗体的硝酸纤维素膜上三条检测线依次包被金标伤寒杆菌O抗原(G)、抗人血清抗体(T)、伤寒杆菌O抗体(C)。
进一步地，所述检测伤寒杆菌H抗体的硝酸纤维素膜上三条检测线依次包被金标伤寒杆菌H抗原(G)、抗人血清抗体(T)、伤寒杆菌H抗体(C)。
进一步地，所述检测伤寒杆菌H抗体的硝酸纤维素膜上三条检测线依次包被金标伤寒杆菌H抗原(G)、抗人血清抗体(T)、伤寒杆菌H抗体(C)。
进一步地，所述检测甲型副伤寒杆菌抗体的硝酸纤维素膜上三条检测线依次包被金标甲型副伤寒杆菌抗原(G)、抗人血清抗体(T)、甲型副伤寒杆菌抗体(C)。
进一步地，所述检测乙型副伤寒杆菌抗体的硝酸纤维素膜上三条检测线依次包被金标乙型副伤寒杆菌抗原(G)、抗人血清抗体(T)、乙型副伤寒杆菌抗体(C)。
进一步地，所述检测沙门菌属抗原的硝酸纤维素膜上三条检测线依次包被金标沙门菌属抗体(G)、沙门菌属O抗体(T)、抗金标抗体的抗体(C)。
进一步地，所述金标沙门菌属抗体(G)若为人抗伤寒杆菌抗体，可用兔或羊抗人血清抗体；所述金标沙门菌属抗体(G)若为兔抗伤寒杆菌抗体，可用鼠抗兔血清抗体。
进一步地，所述检测伤寒杆菌O抗体、检测伤寒杆菌H抗体、检测甲型副伤寒杆菌抗体及检测乙型副伤寒杆菌抗体运用已知抗原检测血清中相应未知抗体。具体是指在加样窗口处加入待测血清，金标抗体(G)复溶于待测血清内，若血清中有相应抗原存在，一部分金标抗体(G)与待测血清中抗原结合，形成复合物，待测血清继续向前流动，金标抗体(G)、待测血清内抗原与伤寒杆菌O抗体(T)以双抗体夹心的方式结合，因结合有金标抗体，所以在T处形成红色沉淀线，待测血清继续向前流动，复溶于待测血清内的金标抗体(G)与抗金标抗体(C)结合，在C处再次形成红色沉淀线，所以阳性结果为两条红色沉淀线，阴性只有C处有沉淀线，如果无沉淀线出现，为无效。
进一步地，所述检测沙门菌属抗原运用双抗体夹心法检测未知抗原，具体是指在加样窗口处加入待测血清，金标抗体(G)复溶于待测血清内，若血清中有相应抗原存在，一部分金标抗体(G)与待测血清中抗原结合，形成复合物，待测血清继续向前流动，金标抗体(G)、待测血清内抗原与伤寒杆菌O抗体(T)以双抗体夹心的方式结合，因结合有金标抗体，所以在T处形成红色沉淀线，待测血清继续向前流动，复溶于待测血清内的金标抗体(G)与抗金标抗体(C)结合，在C处再次形成红色沉淀线，所以阳性结果为两条红色沉淀线，阴性只有C处有沉淀线，如果无沉淀线出现，为无效。
进一步地，所述盒体的形状为圆形、多边形及任意组合形状；所述加样窗口和观察窗口形状为圆形、多边形及任意组合形状。
采用以上技术方案后，本发明具有如下优点：
1、能够定性检测出沙门菌属感染抗原或抗体，达到快速筛选病人，及时诊断治疗的目的。
2、反应时间短，从检测到出结果可在30min内完成，适合大规模快速血检。
3、对检测人员专业要求低，不需要专业培训，3-5min可培养出一个操作员，有良好的基层开发应用前景。
4、不需要仪器设备，节省大量人力物力，降低检测成本。
5、与细菌培养相比不需要反复接触活菌，操作人员更安全。
6、受外界环境影响不大，阴阳性判断明显，临床意义较容易分析。
7、所需检测血清量少，患者更容易接受。
8、外形美观多变，特异性高，应用范围广，不仅可以用于医学疾病诊断、食品检测，还可以用于一些特殊人群和特殊行业人群的健康检测，有利于沙门菌属感染病早发现早治疗。
附图说明
图1是本发明试剂盒盒座结构示意图。
图2是本发明反应卡结构示意图。
图3是本发明试剂盒伤寒血清检测结果示意图。其中从左到右依次为：T、C两条线阳性；C一条线阴性；T、C无沉淀线，无效。
图4是本发明试剂盒甲型副伤寒血清检测结果示意图。其中从左到右依次为：T、C两条线阳性；C一条线阴性；T、C无沉淀线，无效。
图5是本发明试剂盒乙型副伤寒血清检测结果示意图。其中从左到右依次为：T、C两条线阳性；C一条线阴性；T、C无沉淀线，无效。
图6是本发明试剂盒沙门菌感染血清检测结果示意图。其中从左到右依次为：T、C两条线阳性；C一条线阴性；T、C无沉淀线，无效。
图7是本发明试剂盒沙门菌感染非血清标本检测结果示意图。其中从左到右依次为：T、C两条线阳性；C一条线阴性；T、C无沉淀线，无效。
图8是本发明试剂盒沙门菌早期感染血清检测结果示意图。其中从左到右依次为：T、C两条线阳性；C一条线阴性；T、C无沉淀线，无效。
图9是本发明试剂盒伤寒回忆反应或再次感染的血清检测结果示意图。其中从左到右依次为：T、C两条线阳性；C一条线阴性；T、C无沉淀线，无效。
图10是本发明试剂盒副伤寒回忆反应或再次感染的血清检测结果示意图。其中从左到右依次为：T、C两条线阳性；C一条线阴性；T、C无沉淀线，无效。
图11是本发明试剂盒三联制剂或五联制剂疫苗接种血清检测结果示意图。其中从左到右依次为：T、C两条线阳性；C一条线阴性；T、C无沉淀线，无效。
如图所示：1、水平凹槽，2、竖直定位槽，3、开口，4、检测伤寒杆菌O抗体反应卡，5、检测伤寒杆菌H抗体反应卡，6、检测甲型副伤寒杆菌抗体反应卡，7、检测乙型副伤寒杆菌抗体反应卡，8、检测沙门菌属抗原反应卡。
具体实施方式
下面结合附图1-11对本发明做进一步的详细说明。
结合附图1-11，一种沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒，包括盒体、吸滴管、血清加样杯和一次性注射器，其特征在于：所述盒体由盒盖和盒座扣合而成，所述盒座前端设有水平凹槽1，所述凹槽前后挡板与所述盒座左右挡板固连，所述盒座内横向间隔设有五条竖直定位槽2，所述竖直定位槽左右挡板两端分别与所述凹槽后挡板、所述盒座后挡板固连，所述竖直定位槽与所述凹槽公用挡板中心位置设有开口3；在所述定位槽内固定有反应卡，所述反应卡从左至右依次为检测伤寒杆菌O抗体反应卡4、检测伤寒杆菌H抗体反应卡5、检测甲型副伤寒杆菌抗体反应卡6、检测乙型副伤寒杆菌抗体反应卡7、检测沙门菌属抗原反应卡8；
所述反应卡由吸水纸一(A)、硝酸纤维素膜及吸水纸二(B)顺次搭接黏贴在所述定位槽底板上制成，所述硝酸纤维素膜上均布三条分别包被有抗体(或抗原)的检测线(G、T、C)；所述盒盖上设有加样窗口和观察窗口，所述加样窗口设于吸水纸一(A)上方并与所述开口重合，所述观察窗口设于所述硝酸纤维素膜上方；所述沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒根据所述硝酸纤维素膜上所述三条检测线(G、T、C)包被的抗体(或抗原)不同可分别检测伤寒杆菌O抗体、检测伤寒杆菌H抗体、检测甲型副伤寒杆菌抗体、检测乙型副伤寒杆菌抗体及检测沙门菌属抗原。
所述检测伤寒杆菌O抗体的硝酸纤维素膜上三条检测线依次包被金标伤寒杆菌O抗原(G)、抗人血清抗体(T)、伤寒杆菌O抗体(C)。
所述检测伤寒杆菌H抗体的硝酸纤维素膜上三条检测线依次包被金标伤寒杆菌H抗原(G)、抗人血清抗体(T)、伤寒杆菌H抗体(C)。
所述检测甲型副伤寒杆菌抗体的硝酸纤维素膜上三条检测线依次包被金标甲型副伤寒杆菌抗原(G)、抗人血清抗体(T)、甲型副伤寒杆菌抗体(C)。
所述检测乙型副伤寒杆菌抗体的硝酸纤维素膜上三条检测线依次包被金标乙型副伤寒杆菌抗原(G)、抗人血清抗体(T)、乙型副伤寒杆菌抗体(C)。
所述检测沙门菌属抗原的硝酸纤维素膜上三条检测线依次包被金标沙门菌属抗体(G)、沙门菌属O抗体(T)、抗金标抗体的抗体(C)。
所述金标沙门菌属抗体(G)若为人抗伤寒杆菌抗体，可用兔或羊抗人血清抗体；所述金标沙门菌属抗体(G)若为兔抗伤寒杆菌抗体，可用鼠抗兔血清抗体。
所述检测伤寒杆菌O抗体、检测伤寒杆菌H抗体、检测甲型副伤寒杆菌抗体及检测乙型副伤寒杆菌抗体的方法为运用直接法用已知抗原检测血清中相应未知抗体。
所述检测沙门菌属抗原方法为运用双抗体夹心法检测未知抗原。
所述盒体的形状为圆形、多边形及任意组合形状；所述加样窗口和观察窗口形状为圆形、多边形及任意组合形状。
本发明在具体实施时，用一次性注射器取待测血清放入血清加样杯内，用吸滴管从血清加样杯内取样加入盒座水平凹槽内，待测血清通过开口经吸水纸吸引进入五条反应卡内显色检测。通过对实施例中的300例样本进行检测，同时用细菌培养法、肥达反应试剂盒和本发明试剂盒分别进行检测比较，现将该检测效果比较如下：
以上对本发明及其实施方式进行了描述，这种描述没有限制性，附图中所示的也只是本发明的实施方式之一，实际的结构并不局限于此。总而言之如果本领域的普通技术人员受其启示，在不脱离本发明创造宗旨的情况下，不经创造性的设计出与该技术方案相似的结构方式及实施例，均应属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒，包括盒体、吸滴管、血清加样杯和一次性注射器，其特征在于：所述盒体由盒盖和盒座扣合而成，所述盒座前端设有水平凹槽，所述凹槽前后挡板与所述盒座左右挡板固连，所述盒座内横向间隔设有五条竖直定位槽，所述竖直定位槽左右挡板两端分别与所述凹槽后挡板、所述盒座后挡板固连，所述竖直定位槽与所述凹槽公用挡板中心位置设有开口；在所述定位槽内固定有反应卡，所述反应卡从左至右依次为检测伤寒杆菌O抗体反应卡、检测伤寒杆菌H抗体反应卡、检测甲型副伤寒杆菌抗体反应卡、检测乙型副伤寒杆菌抗体反应卡、检测沙门菌属抗原反应卡；
所述反应卡由吸水纸A、硝酸纤维素膜及吸水纸B顺次搭接黏贴在所述定位槽底板上制成，所述硝酸纤维素膜上均布分别包被有抗体或抗原的检测线G、检测线T、检测线C；所述盒盖上设有加样窗口和观察窗口，所述加样窗口设于吸水纸A上方并与所述开口重合，所述观察窗口设于所述硝酸纤维素膜上方；所述沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒根据所述硝酸纤维素膜上所述检测线G、检测线T、检测线C包被的抗体或抗原不同可分别检测伤寒杆菌O抗体、检测伤寒杆菌H抗体、检测甲型副伤寒杆菌抗体、检测乙型副伤寒杆菌抗体及检测沙门菌属抗原。
2.根据权利要求1所述的沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒，其特征在于：所述检测伤寒杆菌O抗体的硝酸纤维素膜上所述检测线G包被金标伤寒杆菌O抗原，所述检测线T包被抗人血清抗体、所述检测线C包被伤寒杆菌O抗体。
3.根据权利要求1所述的沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒，其特征在于：所述检测伤寒杆菌H抗体的硝酸纤维素膜上所述检测线G包被金标伤寒杆菌H抗原，所述检测线T包被抗人血清抗体，所述检测线C包被伤寒杆菌H抗体。
4.根据权利要求1所述的沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒，其特征在于：所述检测甲型副伤寒杆菌抗体的硝酸纤维素膜上所述检测线G包被金标甲型副伤寒杆菌抗原，所述检测线T包被抗人血清抗体，所述检测线C包被甲型副伤寒杆菌抗体。
5.根据权利要求1所述的沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒，其特征在于：所述检测乙型副伤寒杆菌抗体的硝酸纤维素膜上所述检测线G包被金标乙型副伤寒杆菌抗原，所述检测线T包被抗人血清抗体，所述检测线C包被乙型副伤寒杆菌抗体。
6.根据权利要求1所述的沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒，其特征在于：所述检测沙门菌属抗原的硝酸纤维素膜上所述检测线G包被金标沙门菌属抗体，所述检测线T包被沙门菌属O抗体，所述检测线C包被抗金标抗体的抗体。
7.根据权利要求6所述的沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒，其特征在于：所述检测线G包被的金标沙门菌属抗体若为人抗伤寒杆菌抗体，可用兔或羊抗人血清抗体；所述检测线G包被的金标沙门菌属抗体若为兔抗伤寒杆菌抗体，可用鼠抗兔血清抗体。
8.根据权利要求1所述的沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒，其特征在于：所述检测伤寒杆菌O抗体、检测伤寒杆菌H抗体、检测甲型副伤寒杆菌抗体及检测乙型副伤寒杆菌抗体运用已知抗原检测血清中相应未知抗体。
9.根据权利要求1所述的沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒，其特征在于：所述检测沙门菌属抗原运用双抗体夹心法检测未知抗原。
10.根据权利要求1所述的沙门菌属感染胶体金免疫层析五联诊断试剂盒，其特征在于：所述盒体的形状为圆形、多边形及任意组合形状；所述加样窗口和观察窗口形状为圆形、多边形及任意组合形状。
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