BRPI1004526A2 - dispositivo semi-quantitativo de immunochromatographico e método para a determinação de hiv/aids via medida de solúvel cd40 ligand/cd154, um cd4+ equivalente de célula de t e a detecção simultánea de infecção de hiv via detecção de anticorpo de hiv - Google Patents

Abstract

Dispositivo semi-quantitativo de lmmunochromatographico e método para a determinação de HIV/AIDS via medida de solúvel CD4O Ligand/CD154, Um CD4 + equivalente de célula de T e a detecção simultânea de infecção de HIV via detecção de anticorpo de HIV. lnciui um ou mais materiais de apoio capaz de fornecer fluxo lateral. O ou mais materiais de apoio incluem ao menos uma área de recepção de amostra para receber uma amostra biológica contendo um primeiro analyte de alvo, o primeiro analyte de alvo sendo um CD4 + equivalente de célula de 1, tal como solúvel CD4O ligand/CD 154 e um segundo analyte de alvo, o segundo analyte de alvo sendo um anticorpo de HIV. Uma segunda área, situada em um ou mais materiais de apoio, tem um ligand de detector movelmente contido e ou antígenos de detector, no qual o ligand detector e ou antigenos detector é capaz de formar um complexo celular com o ligand solúvel CD4O/154 e ou anticorpos de HIV, e pelo menos uma primeira área de captura tendo uma quantia determinada antecipadamente de um primeiro reagente imóvel de captura, o reagente imóvel de captura capaz de especificamente A encadernação ao complexo móvel formado pelo ligand solúvel CD4O/154 proteína e ligand de detector e fornecer um sinal visível, O ou mais materiais de apoio mais adiante têm situado nisso ao menos uma segunda área de captura tendo uma quantidade predeterminada de um segundo reagente de captura imóvel que é capaz de liga especificamente a anticorpos anti-HIV presentes na amostra biológica e proporcionar um sinal visível.

Description

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Dispositivo semi-quantitativo de Immunochromatographico e método para a determinação de HIV/AIDS via medida de solúvel CD40 Ligand/CD154, Um CD4 + equivalente de célula de T e a detecção simultânea de infecção de HIV via detecção de anticorpo de HIV

A REFERÊNCIA CRUZADA A APLICAÇÕES RELACIONADAS

[0001] Este depósito é uma continuação em parte de um depósito efetuado nos Estados Unidos da América com número de série 12/288,180, arquivado em 17 de Outubro de 2008, e intitulada " Semi- Quantitative Immunochromato graphic Device and Method for the Determination of HIV/AIDS Immune-Status Via Measurement of Soluble CD40 Ligand/CD 154, A CD4+ T Cell Equivalent", a revelação de que é incorporada nisto por referência e em que prioridade por meio deste é alegado, que aplicação prévia é baseada em EUA. Ser provisório de Aplicação. Número 60/981,110, arquivado em Outubro. 19, 2007, e intitulado, "Dispositivo de Immunochromatographic de Semi-Quantitativo e Método Para A Determinação de Imune-Estado de HIV/AIDS Via Medida de Ligand Solúvel CD40/ CD 154, um CD4 + Equivalente de Célula de T", a revelação de que também é incorporada nisto por referência e em que prioridade também por meio deste é alegado.

O FUNDO DA INVENÇÃO

[0002] 1. O campo da Invenção

[0003] A invenção presente relaciona a um método e aparelho para monitoração estado imune de sistema e função, em pacientes de HIV/ AIDS, e para detectar infecção de HIV. Mais particularmente, relaciona a um novo dispositivo melhorado e método para a detecção semi-quantitativo, análise e medida de CD4 + células de T, por seu marcador de substituto, isto é, solúvel Iigand CD40 (CD 154); uma proteína expressou nas superfícies de CD4 + células de T seguindo ativação por infecção de HIV. Tal análise semi-quantitativo e medida em volta podem ser usadas a; pacientes de HIV/ AIDS de etapa determinar seu estado imune e se tratamento de anti-retroviral deve ser iniciado, ou deve ser mudado imediatamente. Além do mais, o dispositivo e método detectam infecção de HIV via detecção de anticorpo.

[0004] 2. A descrição da Arte Prévia

[0005] Há uma necessidade real para novos melhores métodos e aparelho para assaying CD4 + níveis de célula de T em pacientes sofrendo do Vírus Humano de Imunodeficiência, independentemente de idade, e independentemente de recursos, particularmente em países de terceiro mundo onde recursos estão escassos e homens, mulheres e crianças são moribundos em números cambaleantes. Virus humano de Imunodeficiência (HIV) é um retrovírus, isto é, um virus que contém dois único-fio ácido linear de ribonucleic (ARN) moléculas por virion e transcriptase inverso, que junto permite que o vírus transcreva ARN em ADN, em vez de ADN a ARN. O vírus-produziu ADN em volta é incorporado no fio de ADN da célula de anfitrião, que então produz novos retrovírus de ARN. Em outras palavras, o retrovirus reestrutura o anfitrião célula ADN para produzir mais retrovírus e depois mata as células de anfitrião. Ao matar as células de anfitrião, particular que a imunidade de anfitrião produz células, o retrovírus deixa o anfitrião extremamente vulnerável e leva a ADQUIRIDO SÍNDROME DE IMUNODEFICIÊNCIA (AIDS), uma condição em seres humanos em que o sistema imune começa a falhar, a levar a vida-ameaça infecções oportunistas.

[0006] Infecção com HIV ocorre pela transferência de sangue, sêmen, vaginal fluido, pre-exclama, ou leite de peito. Dentro destes fluidos físicos, HIV é presente como libertam partículas de vírus e vírus infetou células imunes. As quatro rotas importantes de transmissão são relações sexuais desprotegidas, agulhas contaminadas, e transmissão de uma mãe infeccionada a seu bebê em nascimento ou por leite de peito.

[0007] HIV principalmente infeta células vitais no sistema imune humano tal como células de T de ajudante e mais especificamente CD4 + células de T1 macrophages e células de dendritic. A infecção de HIV leva a níveis baixos de CD4 + células de T por três mecanismos principais: (i) via matança viral direta de células infeccionadas; (ii) via índices aumentados de apoptosis em células infeccionadas; e (iii) via a matança de CD4 infeccionado + células de T por linfócitos de cytotoxic CD8 que reconhecem células infeccionadas. Quando CD4 + células de T decaem sob um nível crítico, declínios de imunidade de célula-mediou e o corpo tornam-se progressivamente mais suscetível a infecções oportunistas. Se sem tratamento, eventualmente a maioria de indivíduos de HlV-infetou desenvolvem AIDS e morre.

[0008] Infecção de HIV em seres humanos está agora pandêmica. A partir de 2006 de janeiro, o Programa em conjunto de Organização das Nações Unidas em HIV/AIDS e a Organização mundial de saúde calculou que AIDS tinha matado mais que 25 milhões de pessoas desde que primeiro foi reconhecido em dezembro. 1, 1981, fazendo-o um do mais destrutivo pandêmico em história registrada. Em 2005 sozinho, AIDS alegou um calculou 2,4-3,3 milhões vive, de que mais de 570.000 eram crianças. É calculado que aproximadamente 0,6% da população viva do mundo é infetado com HIV.

[0009] Um terceiro destas mortes ocorrem em áfrica submarino-saariano, retardando crescimento econômico e pobreza crescente. De acordo com as estimativas atuais, HIV é posto infetar 90 milhões de pessoas em áfrica sozinho, resulta numa estimativa mínima de 18 milhões de órfãos. [0010] Não há nenhuma cura para AIDS. Por outro lado, há tratamento de anti-retroviral (ARTÈ),que reduz tanto o mortalidade como o morbidez de infecção de HIV. O tratamento consiste em drogas qpe têm que ser tomado todos os dias para o resto da paciente vida, quando o tempo tem razão. São contraproducente a infecção de HIV se retardando a replicação do HIV no corpo.

[0011] Foi achado que para tratamento de antiretroviral (ARTE) ser eficaz durante muito tempo, foi achado que pacientes devem tomar mais que uma droga de anti-retroviral num tempo. Quando HIV duplica, isto é, faz novas cópias de si, freqüentemente comete erros. Isto quer dizer que dentro de qualquer infetou pessoa há muitas tensões diferentes do HIV. De vez em quando, uma nova tensão é produzida que acontece ser resistente ao efeito de um tipo de droga de anti-retroviral. Se o paciente não toma qualquer outro tipo de droga, então a tensão resistente pode duplicar rapidamente e os benefícios do tratamento são perdidos. Tomar dois ou mais anti-retrovirals ao mesmo tempo enormemente reduz o índice em que resistência desenvolve.

[0012] No entanto, há um problema. As ferramentas para o verdadeiramente rotina, verdadeiramente barato, rápido, mas determinação eficaz da necessidade para e implementação de tratamento de anti- retroviral (ARTE) não está somente disponível em nenhum país.

[0013] Bem é sabido que a progressão de HIV/AIDS em HIV infetou pacientes é controlado por CD4 + células de T. Especificamente, o CD4 + conta de célula de T em sangue periférico é usada para: (i) avaliando o grau de agravamento imune e velocidade de progressão em direção de AIDS; (ii) definindo, junto com informações clínicas, pontos de decisão iniciar tratamento de anti-retroviral (em seguida "ARTE"); (iii) decidindo o tempo para profilaxia de infecções oportunistas; e (iv) controlando a eficácia de tratamento. Idealmente, logo que CD4 + células de T decaem níveis críticos embaixo internacionalmente reconhecidos, tratamento de anti-retroviral deve ser começado imediatamente.

[0014] Em outras palavras, o CD4 + conta de célula de T é um parâmetro crítico em controlar doença de HIV. Especificamente, medidas de CD4 + células de T são essenciais para encenar pacientes de HIV- infetou, isto é estabelecer a etapa ou nível da infecção em pacientes soropositivos. Uma vez a etapa ou nível de infecção é estabelecido, os pacientes necessitam para medicamentos de anti-retroviral pode ser verificado, e a decisão de se terapia de anti-retroviral deve ser implementado pode ser feita com certeza. Uma vez a terapia de anti-retroviral é implementado, pode ser controlado pela medida continuada de CD4 + células de T. Abaixe números de circular CD4 + células de T implicam uma etapa mais avançada de doença de HIV e menos mecanismos competentes de defesa.

[0015] Em países desenvolvidos, CD4 + contas de célula de T geralmente são executadas cada três a seis meses para cada paciente usando o método de cytometry de fluxo. Aliás, cytometry de fluxo é considerado o padrão-ouro para a determinação de CD4 + contas de célula de Τ. O cytometry de fR&Ki usa Iasers para entusiasmar sondas fluorescentes de anticorpo específico para CD4 e outros marcadores de superfície de célula, e distinguir um tipo de linfócito de outro.

[0016] Cytometry de Fluxo não é barato. Mais adiante, tecnicamente exige, complexo e valioso. Os instrumentos

que estão comercialmente disponível de vários fabricantes são significativamente caros, em qualquer lugar de $20.000 (USD) A $95.000 (USD). Podem ser corridos só por operadores que suficientemente são treinados em ambos os aspectos técnicos e biológicos de CD4 + célula de T. contando. Necessitam espaço de laboratório dedicado especial. O contar que se é complexo e portanto tecnicamente exigindo. Exige reagentes caros e manutenção regular se as contas são ser precisas e exatas.

[0017] Todos estes fatores, inclusive o custo de um cytometer de fluxo, complexidade técnica e operacional, a necessidade para eletricidade de confiança, e o alto custo de reagentes fizeram o tratamento de pacientes de HlV/AlDS uma proposta muito cara em todos os países, independentemente de se tais países são terceiro mundo, países de recurso-pobres ou não. Em nações industriais, os fatores empurraram custos de seguros pelo telhado e seriamente taxou as nações industriais recursos, enquanto em países de recurso-pobres, estes fatores fizeram o uso destes instrumentos e/ou pouco prático difícil de apoiar. Assim, a necessidade urgente para diagnósticos CD4 acessíveis e tecnicamente 20 simples em ambos rico e recurso-escasso ou cenários de recurso-pobres largamente é reconhecido, embora a necessidade é muito mais pressionar em cenários de recurso-pobres.

[0018] Vários esforços foram feitos desenvolver alternativa, CD4 acessível + célula de T conta métodos. Único cytometers de fluxo de propósito foi projetado unicamente para contar células CD4, tal como o

Becton Dickinson FASCOUNT, o Partec CYFLOW, e instrumentos de área de trabalho de Goiaba e as Tecnologias de PointCare. Separação de baixo custo de microbead de células CD4 de outras células de sangue, seguido por célula manual normal contando técnicas usando um microscópio leve, também foi proposto. Embora o anterior faz cytometry de fluxo mais acessível em alguns cenários, custos de reagente permanecem alto, e os instrumentos permanecem caro, e nela maioria de casos, tecnicamente complexo. Enquanto os custos de reagente últimos significativamente mais baixos, como compararam fluir cytometry, são de throughput baixo, extremamente trabalha intensivo, e aparece ser menos exato que cytometry tradicional de fluxo. Assim, estas alternativa contando métodos para fazer muito pouco aliviar o esgotamento de recursos e o skyrocketing de custos de seguros em países industriais. Finalmente, em muitos países em desenvolvimentos há poucos laboratórios. Esses que existem suficientemente não são equipados. Clínicas distantes devem enviar amostras para prova e dias de espera para os resultados, assim perdendo a oportunidade de tratar pacientes iniciando ARTE, devido ao fato que os pacientes não retornam para mais tratamento uma vez as clínicas recebem os resultados. <image>image see original document page 6</image>

[0019] Assim, a falta de ferramentas para o verdadeiramente rotina, verdadeiramente barato, rápido, mas determinação eficaz da necessidade para e implementação de tratamento de anti-retroviral (ARTE) deve ser endereçada. O tratamento com anti-retrovirals, onde disponível, aumenta a expectativa de vida de pessoas infeccionadas com HIV. A corrente e tratamento futuro podem permitir que indivíduos de HIV- infetou realizassem uma expectativa de vida aproximar-se isso do público geral, por diagnóstico adequado e implementação imediata de ARTE.

[0020] Conseqüentemente, há uma necessidade real para novos melhores métodos e aparelho para assaying CD4 + níveis de célula de T, inclusive métodos e aparelho que evitarão as desvantagens de métodos prévios de arte e instrumentação enquanto ao mesmo tempo fornecem para o assaying de CD4 + células de T num custo baixo, sem complexidade técnica e operacional, sem reagentes caros, sem eletricidade, numa maneira rápida enquanto o paciente é ainda presente E capaz de receber terapia imediata de anti-retroviral, se for necessário. Ausente tais novos métodos, infecção de HIV em seres humanos continuarão a ser pandêmicos. A AIDS continuará a matar tanto adultos como crianças particularmente em territórios de recurso-pobres. Tais mortes continuarão a taxar a humanidade mundial porque continuarão a retardar crescimento econômico e pobreza de aumento. Finalmente, embora a necessidade para um assaying simplificado e barato de CD4 + células de T contam é particularmente agudo e urgente em recursos-pobres, países de terceiro mundo, tal assaying também podem ser benéficos a mundo industrial de países largo, ajudando a abaixar seu já aumentando e custos pesados médicos e de seguros infligiram sobre eles por AIDS.

[0021] Em muitos recurso cenários pobres, além da falta de um barato e fácil de executar prova imune de estado geralmente executou determinar a necessidade para e/ou a mudança de terapia de droga de anti-retroviral, há muitos indivíduos cujo estado de HlV/AlDA em general também não foi estabelecido. Geralmente, uma pessoa que pode ser suspeitado de ter HIV e/ou AIDS primeiro é examinada para anticorpos de HIV usando uma prova diagnóstica separada. Uma vez estado de infecção foi determinado, estes indivíduos então são controlados, onde disponível, para agravamento imune de estado exigindo o início de um regime de droga de anti-retroviral. Isto pode exigir várias visitas pelo paciente, o primeiro determinar se infecção de HIV é realmente presente e então acompanha visitas para estabelecer estado imune baseado na história do paciente e sintomas. Em rural, recurso cenários pobres, somente recebendo os pacientes apresentar-se para qualquer prova pode ser problemática, e quando resultados não estão disponíveis imediatamente, recebendo o paciente de volta para acompanhar pode ser uma tarefa desalentadora. Isto pode levar a agravar infecção, a extensão de infecção assim como outros assuntos associaram-se com infecção de HIV e AIDS subseqüente, onde as defesas imunes do corpo colapsam e o paciente está sujeito a infecção oportunista e eventualmente morte. OS OBJETOS DA INVENÇÃO

[0022] É portanto um objeto da invenção presente fornecer um método e aparelho que porão rotina prova imune de estado dentro do alcance de longe mais pacientes de HIV, particularmente em recurso-escasso ou áreas de recursopobres.

[0023] É um mais objeto da invenção presente fornecer um método e aparelho que fornecerá e fará disponível um extremamente acessível e fácil de usar prova rápida diagnostica para CD4 + níveis de célula de T.

[0024] É um mais objeto regular da invenção presente fornecer um método e aparelho para a determinação de CD4 + níveis de célula de T que podem ser executados sem qualquer instrumentação especial e que não exigirão pessoal altamente habilidoso, água fresca nem eletricidade.

[0025] É ainda outro objeto da invenção presente fornecer um método e aparelho para a determinação de CD4 + níveis de célula de T dentro de 20 minutos enquanto o paciente é ainda presentes, tão não há nenhuma necessidade para ligar de novo, dias mais tarde, ler resultados de prova.

[0026] Outro objeto da invenção presente é fornecer um método e aparelho que darão clínicos a capacidade rapidamente diagnosticar estado imune comprometido devido a HIV/AIDS enquanto o paciente está ainda em seu escritório e imediatamente começa ARTE, se for necessário.

[0027] É um mais objeto da invenção presente fornecer um método e aparelho para fornecer um custo meios eficazes de controlar a eficácia de ARTE e a adesão de tratamento do paciente, mesmo no mais remoto de localizações.

[0028] É mas outro objeto da invenção presente fornecer um método e aparelho para a determinação de níveis de célula CD4 num custo de $5,00 ou menos contra o custo atual de $25-$50 (calculou custo inclusive reagentes, equipamento, prova transporte, etc.), e torna-se acessível a mais pacientes em todos os cenários, ajudando a otimizar ARTE e a alocação de estoques limitados de drogas de ARTE aos pacientes que os necessitam Mais.

[0029] Outro objeto da invenção presente é fornecer um método e aparelho que permitem a determinação de CD4 + níveis de célula de T não medindo as células se mas medindo CD4 + equivalentes de célula de T, isto é, solúvel Iigand CD40, uma proteína expressada nas superfícies de CD4 + células de T seguindo ativação por infecção de HIV. Tal determinação tornar-se-á rotina em todos os países e fornece acesso oportuno a medicamento de anti-retroviral mesmo em países de récti^g; pobres.

[0030] Um mais objeto da invenção presente é fornecer um método e aparelho que permitem a determinação de níveis de célula CD4 sem a necessidade para Iysis de tais células.

[0031] Mas outro objeto da invenção presente é fornecer um método e aparelho que permitem a determinação de níveis de célula CD4 não medindo as células se, mas por um marcador de substituto disso.

[0032] É ainda outro objeto da invenção presente fornecer um dispositivo rápido de prova de diagnóstico e método que simultaneamente detecta uma paciente HIV/AIDS estado imune e detecta infecção de HIV no paciente.

[0033] Estes objetos, assim como outros objetos e vantagens, tornar-se-ão aparente da seguinte revelação.

O RESUMO DA INVENÇÃO

[0034] De acordo com a invenção presente, há fornecido um dispositivo semi-quantitativo de immuno- chromatographic e método para a determinação simultânea de HIV/AIDS estado imune, isto é, via solúvel CD40 ligand/CD 154, um CD4 + célula de T proteína equivalente, e a detecção anticorpos específicos que indicam a presença de infecção de HIV. Constitui um ou mais materiais de apoio capaz de fornecer fluxo lateral. Como divulgado em copendente de aplicação de pai Ser. Número 12/288,180, o ou mais materiais de apoio da faixa de Immunochromatographic inclui: a) uma área para receber uma amostra biológica contendo um analyte de alvo, disse que analyte sendo um CD4 + equivalente de célula de T, a saber solúvel CD40 ligand/CD .154; (b) uma área constituindo um Iigand de detector movelmente contido, em que o Iigand de detector é capaz de formar um complexo móvel com o Iigand solúvel CD40/CD 154; e c) ao menos uma área de captura constituir uma quantia determinada antecipadamente de um reagente imóvel de captura, o reagente imóvel de captura capaz de especificamente colando ao complexo móvel formado pelo Iigand solúvel CD40/CD 154 proteína e o Iigand de detector e fornecer um sinal visível. Também, de acordo com a invenção presente, detectar anticorpos que indicam infecção de HIV, o dispositivo de immunochromatographic inclui ao menos um anticorpo de HIV móvel adicional ligando complexo de tintura e uma area imóvel de captura ou faixa de detecção que é usado para indicar a presença de anticorpos de HIV. <image>image see original document page 9</image>

[0035] Com respeito a usar a faixa semi-quantitativo de immunochromatographic 10 para detectal um HIV/AIDS do paciente estado imune, e como divulgado em co-pendente de aplicação de pai Ser. Númerao 12/288,180, o método constitui os passos de colocar um soro, plasma ou amostra de sangue inteira num fim da faixa 10; depois, permitindo que a amostra migrasse via fluxo lateral por uma área na faixa 10 ter um monoclonal de encadernação de antígeno ou anticorpo de polyclonal conjugaram a uma área de partícula de ouro de colloidal, que liga com o Iigand solúvel CD40/CD 154 na amostra formar um complexo; e depois, Mover o complexo, via fluxo lateral, sobre uma combinação rara de anticorpos de polyclonal de e/ou de monoclonal imobilizou na membrana, que em volta liga o complexo produzir uma faixa cor-de-rosa/roxo ou faixas na faixa 10. O complexo restante continua a migrar a uma área de controle na faixa 10, que produz uma faixa adicional mostrar a prova foi executado corretamente. Cada um

faixa cor-de-rosa ou roxa aparecendo na área de prova da faixa 10 corresponde a um número de CD4 + equivalentes de célula de T1 que por exemplo podem ser correlacionados a um de três categorias (vê FIGOS. 3, 4, 5 e 6): Estado Imune satisfatório/normal, por exemplo, aproximadamente 500 CD4 positivo + células de Τ/μΙ; Diminuindo Estado

de Imune, por exemplo, menos que aproximadamente 500 CD4 positivo + células de Τ/μΙ mas maior que aproximadamente 350 CD4 + células de Τ/μΙ; ou Estado Reduzido de Imune, por exemplo, menos que aproximadamente 200 CD4 + células de Τ/μΙ. Níveis diferentes de detecção também podem ser realizados manipulando as concentrações dos vários reagentes empregados. Além do mais, de acordo com a invenção presente, um método de detectar e/ou quantificar a presença de CD4 + células de T inclui o passo de detectar e/ou quantificar a presença de solúvel CD40 ligand/CD 154.

[0036] A dispositivo/faixa de immunochromatographic 10 simultaneamente pode ser usada para detectar uma infecção de HIV de acordo com passos que são semelhante a esses descrito acima, onde a mistura de complexed é capturada pelo em menos uma faixa adicional de detecção, que produz uma linha colorida indicar a presença de anticorpos de HIV. Mais especificamente, um dispositivo duplo de prova é fornecido. O dispositivo duplo de prova determina uma

paciente HIV/AIDS estado imune por medir solúvel CD40 ligand/CD 154, como descrito previamente, mas mais adiante incorpora um segundo anticorpo móvel de HIV ligando complexo de tintura que liga com qualquer anticorpos de HIV apresenta na amostra que então migra ao longo da membrana sobre uma área imobilizada de captura de linha de prova constituiu de antígenos específicos de HIV que ligam com o complexo de tintura de anticorpo de anti-hiv se qualquer anticorpos de HIV são Apresente formando uma linha visível de prova indicar infecção de HIV. Os dois complexos de encadernação de tintura, um cada um para estado imune e infecção de HIV, podem ser misturados junto ou podem ser separados depender da estrutura do dispositivo, como será descrito em detalhe maior. [0037]Nu ma forma alternativa de um dispositivo duplo de prova, os HIV/AIDS que porção imune dé estado do dispositivo pode detectar e poder medir a presença de antígeno CD4 antes que o CD4 + equivalente de Célula de T, solúvel Iigand CD40 (CD154).

[0038] Integrando uma prova rápida de anticorpo de HIV nas HIV/AIDS estado imune que prova rápida descreveu acima, estaria possível determinar ambos um estado de infecção de HIV da pessoa e simultaneamente estabelece o seu ou seu estado imune, capacitando ambos ser determinado numa visita, enquanto as esperas de paciente. A prova exigiria só uma adição simples de uma amostra paciente ao dispositivo de prova. A amostra mistura com os reagentes

incorporados no dispositivo para tanto anticorpo de HIV e estado imune via os HIV/AIDS CD4 previamente descritos imune de estado dispositivo equivalente de detecção de antígeno. Como a mistura paciente de amostra/reagente migra ao longo da membrana, pretere duas linhas separadas de prova contendo detectores imobilizados, um para detecção de anticorpo de HIV e um para detecção imune de estado. Se ou ou ambos do analytes são presentes na mistura de amostra/reagente, a mistura de complexed de tintura é capturada pelas linhas imobilizadas de prova respectivamente, e uma faixa cor- de-rosa/roxo aparece, indicando a presença de anticorpos a HIV1 indicando infecção e uma quantia semi-quantitativo de antígeno de imune-estado que correlaciona a um estado imune da pessoa, que pode ser indicativo de exigir ARTE (tratamento de anti-retroviral) /HAART (terapia de anti-retroviral altamente ativa) ou não. A mistura continua a migrar ao longo da membrana a uma linha de controle que aparece, mostrando desempenho adequado da prova. Esta combinação rara de provas (infecção de HIV e estado imune)

seriam custados eficaz e fácil de executar, não exigindo nenhum equipamento, não pessoal altamente habilidoso, nenhumas instalações de laboratório, nenhuma refrigeração e nenhuma água limpa, e podem ser executadas em local enquanto o paciente é ainda presente e, se resultados indicassem, terapia de droga pode ser iniciada nem pode ser mudado, nem o paciente pode ser programado para adicional controlando se ele nem ela É só HIV positivo mas não mas sofrendo dos efeitos de AIDS se o seu nem seu estado imune é ainda satisfatórioA

DESCRIÇÃO BREVE DOS DESENHOS

[0039] Enquanto a especificação conclui com afirmações que particularmente salientam e distintamente alega a invenção presente, é acreditado que a invenção presente melhor será entendido do séquito descrição detalhada tomada junto com os desenhos que acompanham em que como algarismos representa elementos idênticos e em que:

[0040] FIG. 1 é um cruz-secional lado vê esquemático do inventivo semi-quantitativo, faixa de immunochromatographic para a detecção de uma paciente HIV/AIDS estado imune; [0041] FIG. 2 é uma vista superior de plano de um das personificações da faixa semi-quantitativo de immunochromatographic formou de acordo com a invenção presente para a detecção de uma paciente HIV/AlDS estado imune;

[0042] FIGOS. 3-6 são vistas superiores de piano de várias personificações da faixa semi-quantitativo de immunochromatographic formaram de acordo com a invenção presente para a detecção de uma paciente HIV/AIDS estado imune e exibição CD4 + equivalentes de conta de célula de T e organização do estado imune.

[0043] FIGOS. 7a e 7b são respectivamente uma vista ilustrativa lateral cruz-secional e uma vista de plano superior ilustrativa de um dispositivo duplo de immunochromatographic de prova para simultaneamente detectando, numa prova, um HIV/AIDS do paciente estado imune e uma infecção de HIV no paciente, formado de acordo com uma mais personificação da invenção presente.

[0044] FIGOS. 8a e 8b são respectivamente uma vista ilustrativa lateral cruz-secional e uma vista de plano superior ilustrativa de um dispositivo duplo de immunochromatographic de prova e faixa para simultaneamente detectando, numa prova, um HIV/AIDS do paciente estado imune e uma infecção de HIV no paciente, formado de acordo com mas outra personificação da invenção presente.

[0045] FIG. 9 é uma vista de plano superior ilustrativa de uma faixas duplas de immunochromatographic de prova e dispositivo para simultaneamente detectando, numa prova, um HIV/AIDS do paciente estado imune e uma infecção de HIV no paciente, formado de acordo com um ainda mais personificação da invenção presente.

A LISTA DE ELEMENTOS E SEU RESPECTIVO IDENTIFICAR ALGARISMOS NÚMERO ELEMENTO

.10 Semi-Quantitativo Faixa de Immunochromatographic .20 Estrutura de Apoio .22 Lado Superior da Estrutura de Apoio 20 .24 Lado de baixo da Estrutura de Apoio 20 .26 Próximo fim da Estrutura de Apoio .28 Fim de Distai da Estrutura de Apoio 20 .30 Membrana .32 Primeiro fim de Membrana .34 Segundo fim de Membrana .40 Área Biológica de recepção de amostra ou prove almofada .50 Área de linha de Controle .60 Conjuga área de Iigand de almofada/detector % < fK^ 70 Linhas de área/prova de Captura ^Vxas- 90 100 Almofada de Pia Indicia 110 Alojamento 120 Porto de Acesso de Amostra 130 Inspeção Recorte de Janela

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0046] Referindo especificamente aos desenhos, FIGOS. 1 e 2 geralmente retrata o inventivo semi- quantitativo, faixa de prova de immunochromatographic e método para uso disso em 10 (em seguida "a faixa 10"). Como foi delineado em mais detalhe nisto embaixo, é projetado fornecer um exato semi- quantitativo, membrana-baseou examinando prova para CD4 + níveis de célula de T por assaying um CD4 + equivalente de célula de T Iigand solúvel CD40/CD 154. Constitui a mais nova geração de dispositivos laterais de ensaio de immunochromatographic de fluxo, que pode ser usada em local com soro, plasma ou amostras de sangue inteiras.

[0047] Ligand solúvel CD40/CD 154 é uma proteína, que é expressado nas superfícies de CD4 + células de T seguindo sua ativação por infecção de HIV. Os níveis de soro desta proteína foram mostrados

correlacionar diretamente a CD4 + contas de célula de T. Aliás, como divulgado no artigo "Nivela de Ligand Solúvel CD40 (CD 154) em Soro São Aumentados em Vírus Humano de Imunodeficiência Bate de 1 Pacientes Infeccionado e Correspondem a CD4 + Contas de T-CÉLULA, escrevido por Nikolaos Sipsas, Petros P. Sfikakis1 Athanasios Kontos e

Theodore Kordossis, publicaram em "Clínico e Diagnóstico Imunologia de Laboratório", 2002 de maio, p. _|j5 558-561, Vol. 9, Número 3, recentemente foi determinado que os níveis de soro desta proteína aparecem ser diretamente proporcional a CD4 + contas de célula de T, fazendo esta proteína um marcador de substituto potencialmente ideal para determinar o estado imune de pacientes de HIV/AIDS.

[0048] A faixa 10 é projetada (i) pôr rotina prova imune de estado dentro do alcance de longe mais pacientes de HIV/AIDS, particularmente em recurso-escasso ou áreas de recurso-pobres; (ii) fornecer e

fazer disponível um extremamente acessível e fácil de usar prova rápida diagnóstica para CD4 + níveis de célula de T; (iii) para a determinação de CD4 + níveis de célula de T que podem ser executados sem qualquer instrumentação especial e que não exigirão altamente habilidoso o pessoal, água fresca ou eletricidade; (iv) para a determinação de CD4 + níveis de célula de T dentro de 20 minutos enquanto o paciente é ainda presentes, tão não há nenhuma necessidade para ligar de novo, dias ou semanas mais tarde, ler ou interpretar resultados de prova; (v) dar a capacidade para clínicos rapidamente diagnosticar estado comprometido imune devido a infecção de HIV enquanto o paciente é permitir ainda presente para o início imediato de ARTE, se necessário; (vi) fornecer um custo meios eficazes de controlar a eficácia de ARTE e a adesão de tratamento do paciente, mesmo no mais remoto de localizações; (vii) para a prova de CD4 + níveis de célula de T num custo de aproximadamente $5,00 ou menos? contra o custo atual de $25-$50 (calcularam custo inclusive reagentes, equipamento, prova transporte, etc.); para prova que pode ser feita mais acessível a mais

pacientes em mais cenários, a porção otimizar ARTE e a alocação de estoques limitados de drogas de ARTE aos pacientes que necessitam-nos mais; (viii) permitir para a determinação de CD4 + níveis de célula de T não medindo as células se mas medindo CD4 + equivalentes de célula de T, i. e., solúvel CD40 ligand/CD 154, e onde tal determinação é previsto tornar-se rotina em todos os países e fornece acesso oportuno a medicamento de antiretroviral

mesmo em Os países de recurso-pobres; e (ix) permitir a determinação de níveis de célula CD4 sem a necessidade para Iysis de tais células.

[0049] O processo de usar a faixa semi-quantitativo de immunochromatographic 10 constitui os passos de colocar um soro, plasma ou amostra de sangue inteira num fim da faixa 10. Depois, a amostra migra via fluxo lateral através da faixa 10 por uma área contendo monoclonal de encadernação de antígeno ou anticorpo de polyclonal conjugou a partículas de ouro de colloidal, que liga o Iigand CD40/CD 154 na amostra formar um complexo. Depois, o complexo continua a mover via fluxo lateral sobre uma combinação rara de anticorpos de polyclonal de e/ou de monoclonal imobilizou na faixa que em volta liga o complexo gerar uma faixa cor-de-rosa ou roxa ou faixas na faixa 10. O complexo restante continua a migrar a uma área de controle na faixa 10, que produz uma faixa adicional mostrar que a prova foi executada corretamente. Cada um faixa cor-de-rosa ou roxa aparecendo na área de prova da faixa 10 corresponde a um número de CD4 + equivalentes de célula de T, que em volta podem ser correlacionados por exemplo a um de três categorias (vê FIGOS. 3, 4, 5 e 6) : Estado Imune satisfatório/normal, por exemplo,

aproximadamente 500 CD4 positivo + células de Τ/μΙ; Diminuindo Estado de Imune, por exemplo, menos que aproximadamente 500 CD4 positivo + células de Τ/μΙ mas maior que aproximadamente 350 CD4 + células de Τ/μΙ; ou Estado Reduzido de Imune, por exemplo, menos que aproximadamente 200 CD4 + células de Τ/μΙ.

[0050] A faixa semi-quantitativo de immunochromatographic 10 constitui uma estrutura de apoio 20 ter um superior lateral 22, um de baixo lateral 24, um próximo fim 26, e um fim de distai 28. Em dizer lado de topo 22, no próximo fim 26 de dizer estrutura de apoio 20, disse faixa semi-quantitativo de immunochromatographic 10 mais adiante constitui uma área biológica de recepção de amostra ou amostra para acolchoar 40; um conjuga área de Iigand de almofada/detector 60, imediatamente junto a, rio abaixo de e comunicarmente conectado a dizer almofada de amostra 40; uma membrana 30 ter um primeiro fim 32 e um segundo acaba 34 em frente a dizer primeiro fim 32, disse membrana 30 ser imediatamente junto a, rio abaixo de e comunicarmente ligou para conjugar área de Iigand almofada/detector 60; e uma almofada de pia 90 localizado no fim de distai 28 da faixa 10 imediatamente junto a, rio abaixo de e comunicarmente conectado a dizer membrana 30, tal que todos os componentes acima mencionados são capazes de permitir e não impedindo fluxo lateral, isso é, fluxo na direção do flecha LF em FIG. 1.

[0051] A faixa semi-quantitativo de immunochromatographic 10 é essencialmente um composto de seus componentes acima mencionados. Os passos de formar o composto desnudar-se 10, constitui: colocar disse membrana 30 em dizer lado de topo 22 de dizer estrutura de apoio 20, tal que disse próximo fim .26, e disse fim de distai 28 estende além do perímetro exterior da área definida pela colocação de dizer membrana 30 em dizer estrutura de apoio 20; colocar disse

conjuga detector de almofada/ligand 60 em topo da borda exterior de primeiro acabam 32 de dizer membrana 30 que tal que parte de dizer conjuga área de detector de almofada/ligand 60 mentiras em parte em topo de e é apoiada por dizer membrana 30 e parte de estende contra a corrente além de dizer membrana e em parte é apoiado por dizer estrutura de apoio 20; mais colocar disse almofada de pia 90 em topo da borda exterior de dizer segundo acaba 34 de

dizer membrana 30 que tal que parte de dizer pia acolchoe 90 mentiras em topo de e em parte é apoiado contra a corrente por dizer membrana 30 e parte de estende mais além disse membrana 30 e em parte é apoiado por dizer fim de distai 28 de dizer estrutura de apoio 20; e colocar disse que área biológica de recepção de amostra ou amostra acolchoam 40 em dizer próximo fim 26 de dizer estrutura de apoio 20 e sobre dizer conjuga detector de almofada/ligand 60 que tal que parte de dizer Prove almofada 40 sobrepõe e em parte é apoiado rio abaixo por dizer conjuga detector de almofada/ligand 60 e em parte por dizer próximo fim 26 de dizer estrutura de apoio 20.

[0052] Como ilustrado em FIG. 2, disse estrutura de apoio 20 pode ser formado na forma de uma faixa. Por outro lado, disse estrutura de apoio 20 pode ser fornecido numa variedade larga de formas ou formas contanto que a forma particular permite as várias funções descritas nisto.

[0053] A estrutura de apoio 20 pode ser formada de um número de materiais convenientes diferentes, con tal que que os materiais permitem a funcionalidade de fluxo lateral acima mencionada. Por exemplo, os materiais podem ser constituídos de vinil com cola ou poliéster com cola, o ser de cola presente adicionar coesão aos componentes restantes de dizer faixa 10 e previne disse faixa 10 de desmoronar.

[0054] A membrana 30 pode ser formada de um número de materiais convenientes diferentes contanto que tais materiais permitem a funcionalidade de fluxo lateral acima mencionada ao permanecer neutro e unreactive. Por exemplo, disse membrana 30 pode constituir fibra de vidro, ester de celulose, nylon, dextran cruz-ligado, etc. De acordo com uma personificação, disse membrana 30 constitui nitrocellulose. [0055] Como delineia nisto acima, disse membrana 30 tem um primeiro fim 32 e um segundo acaba 34. A borda de dizer segundo acabam 34 estende e serve embaixo disse almofada de pia 90 que tal que parte de dizer almofada de pia 90 mentiras em topo de e em parte é apoiada contra a corrente por e comunicarmente conectado a dizer membrana 30 e parte de estende mais além disse membrana 30 e em parte é apoiado por dizer fim de distai 28 de dizer estrutura de apoio 20. A borda de dizer primeiro fim .32 estende e serve embaixo disse conjuga área de Iigand de

almofada/detector 60, contra a corrente daí e comunicarmente conectado à isso. Junto a dizer segundo acabam 34, mas espaçado de dizer almofada de pia 90, disse que membrana opcionalmente mais adiante constitui uma área de linha de controle 50. A área de linha de controle 50 define uma área que contém um reagente de controle. O reagente de controle conteve dentro da área de linha de controle 50 está imóvel, fixo sobre dizer membrana 30. De acordo com um ilustrativo exemplo que não-limitando, o reagente de controle é cabra anti-camundongo IgG.

[0056] O reagente de controle é capaz de ligar o Iigand conjugado de detector mas não é específico para o Iigand solúvel CD40/CD 154. Uma vez liga o Iigand de detector de complexed, imobiliza-o e continua o fluxo lateral. Além do mais, uma linha colorida visível aparece a fim de exposição que a faixa 10 funciona adequadamente.

[0057] Entre a área de linha de controle 50 e o conjuga área de Iigand de almofada/detector 60, disse membrana 30 mais adiante constitui ao menos uma área de captura ou prova forram 70. Por outro lado, disse membrana 30 mais adiante pode constituir uma pluralidade de áreas de captura ou testa linhas 70 (vê FIGOS. 3, 4 e 5). Cada área de captura ou linha de prova contém um reagente de captura nisso. O reagente de captura está imovelmente e fixamente contido dentro de dizer que área de captura ou prova forram 70. O reagente de captura constitui qualquer camundongo monoclonal e/ou polyclonal anti-sCD40 ligand/CD 154. De acordo com as personificações ilustrados, as areas de captura ou testam linhas 70 são distinto e separado de si na direção de LF lateral de fluxo. No entanto, é compreendido pela invenção presente aquele ou mais áreas de captura ou testam linhas 70 pode ser combinado e/ou contrariamente fundido. Adicionalmente, localização, forma, tamanho e configuração das linhas de áreas/testa de

captura 70 também podem desviar-se disso de as personificações ilustrados.

[0058] A área biológica de recepção de amostra ou amostra acolchoam 40 no próximo fim 26 do dispositivo 10 atos como o repositório do paciente ou amostra biológica ser testados. Pode ser formado de celulose, e/ou de fibra de vidro qualquer outro material que também pode fornecer para a separação de plasma ou soro de amostras de sangue inteiras. Enquanto na personificação ilustrado só uma área biológica de recepção de amostra ou amostra acolchoam 40 é mostrado localizado no próximo fim 26 da faixa 10, deve ser entendido que a invenção presente pode constituir uma pluralidade de almofadífe d$- ^ / amostra 40 no próximo fim 26 da faixa 10. Além do mais, a almofada de amostra 40 pode localizações que diferem disso de a personificação ilustrado.

[0059] O conjuga área de Iigand de almofada/detector 60 constitui, opcionalmente, uma almofada de fibra de vidro, e um Iigand de detector que é contido dentro da almofada de fibra de vidro numa maneira que deixa ele celular. Em outras palavras, o Iigand de detector é capaz de executar da área 60 pelo fluxo lateral acima mencionado. De acordo com um ilustrativo exemplo que não-limitando, uma solução adequadamente concentrada ou suspensão de Iigand de

detector são aplicadas dentro de área 60 e secado. O Iigand de detector preferivelmente constitui camundongo monoclonal e/ou polyclonal anti-sCD40 ligand/CD 154 conjugado a partículas de ouro de colloidal. Por outro lado, o Iigand de detector preferivelmente constitui camundongo monoclonal e/ou polyclonal anti-sCD40 ligand/CD 154 conjugado a partículas de selênio de colloidal; ou camundongo monoclonal e/ou polyclonal anti-sCD40 ligand/CD 154 conjugado a partículas de carvão de colloidal; ou camundongo monoclonal e/ou polyclonal anti sCD40 ligand/CD 154 conjugado a colloidal partículas de látex ou outro conveniente colorido, fluorescente ou micro partículas magnéticas.

[0060] Quando o Iigand de detector vem em contato com o Iigand solúvel CD40/CD 154 numa amostra biológica sendo analisado, forma um complexo que é também capaz de executar da área 60 por fluxo lateral. Quando os alcances complexos disseram área de captura(s)/linhas de prova 70 em dizer membrana 30, o complexo reage com dizer que reagente de captura conteve nisso e torna-se imovelmente une a dizer que reagente de captura produzir um sinal visível, quanto a exemplo uma linha cor-de-rosa ou roxa. Quando não linha cor-de-rosa nem roxa aparece, tal como mostrado em FIG. 6, isto podia ser uma indicação de um resultado inválido de prova.

[0061] À extensão que a amostra biológica contém uma quantia de solúvel CD40 ligand/CD 154 que tal que a capacidade do reagente de captura conteve na linha de área/prova de captura 70 é excedido, qualquer tal Iigand solúvel CD40/CD 154, e complexo formou assim, continua a viajar sob a influência do fluxo lateral, assim alcançando um ou área/prova adicional fornecido de captura mais opcionalmente forra 70.

[0062] Controlando a quantia de reagente de captura conteve na primeira linha de área/prova de captura .70 pode ser utilizado definir uma barreira além de que uma quantia ou concentração de solúvel CD40 ligand/CD 154 contido numa amostra biológica não pode passar. À extensão que este valor mínimo de limiar é excedido, excesso solúvel CD40 ligand/CD 154 é livre para viajar sob o fluxo lateral a um ou mais linhas de áreas/testa de captura 70 que outra vez estabelecem níveis de limiar mínimos crescentes de solúvel CD40 ligand/CD 154 sob análise. Nisto <image>image see original document page 17</image>

quantia, relativo a se. Por outro lado, a quantia de reagente de captura conteve em cada área de captura progressivamente pode aumentar ou pode diminuir.

[0063] A presença de quantia suficiente de solúvel CD40 ligand/CD 154 e o complexo formou do CD40 ligand/CD 154 e Iigand de detector no acima de-descrever ou mais linhas de áreas/testa de captura 70 é indicado pela geração de um sinal detectável. Este sinal detectável pode ser gerado num número de maneiras diferentes familiar a esses habilidoso na arte. De acordo com um exemplo, o Iigand de detector pode constituir uma substância que é imediatamente e continuamente visível ao olho nu. Assim, a mera presença física do complexo

formado entre o Iigand solúvel CD40/CD 154 e o Iigand de detector no ou mais linhas de áreas/testa de captura 70 é suficientes produzir o sinal detectável desejado. Por outro lado, o Iigand de detector pode constituir um primeiro reactant que torna-se associado com o complexo, formado com o Iigand solúvel CD40/CD 154, mas que não é visível. Um segundo reactant então pode ser fornecido no ou mais linhas de áreas/testa de captura 70 que sobre combinação e interação com o primeiro reactant produz um sinal detectável.

[0064] Na personificação ilustrado, a área 60 conter o Iigand de detector e a área biológica de recepção de amostra 40 são ilustrados como áreas separadas e distintas no dispositivo 10. No entanto, é dentro do alcance da invenção presente de que estas duas áreas podiam ser combinadas a fim define uma única área indistinta da faixa 10.

[0065] A faixa 10 também opcionalmente podia ser fornecido com um alojamento (não mostrado). O alojamento pode ser formado de qualquer material conveniente. Por exemplo, o alojamento pode ser formado de um material plástico tal como Mylar, poliestireno, ABS1 etc. O alojamento ao menos em parte anexa ou cerca a estrutura de apoio 20. Pode ser fornecido com uma janela de almofada de amostra (não mostrado), uma janela de área de linha de controle (não mostrado) e área de captura (s) /janelas de linhas de prova (não mostrado). De acordo com as personificações ilustrados, a área contendo o Iigand de detector é obscurecido de vista do operador pelo alojamento. É naturalmente compreendeu que a área contendo o Iigand de detector para ser visível pelo alojamento ao operador também. Além do mais, o alojamento pode ser formado de um material claro ou translúcido plástico.

[0066] O alojamento opcionalmente pode ser fornecido com indicia que identifica várias gradações da concentração do alvo CD40 ligand/CD 154 determinou ser presente na amostra biológica pela faixa 10. Como evidente do indicia ilustrou em FIGOS. 3, 4 e 5, é possível verificar dentro de um alcance particular de valores a concentração do CD4 + equivalentes de célula de T1 isto é, solúvel CD40 ligand/CD 154 presente numa amostra biológica, como descrito em mais detalhe nisto.

[0067] A alm ofada de pia 90 é feita de qualquer material que pode agir absorver/parada o fluxo lateral e permite o fluxo lateral dos reagentes e por conseguinte absorve tais reagentes no fim de distai da faixa de prova depois de migração 10.

[0068] Uma análise executou de acordo com a invenção presente constitui os seguintes passos:

[0069] recolher uma amostra biológica apropriada de um paciente;

[0070] aspirar um volume apropriado de amostra da amostra biológica usando um conta-gotas de amostra. A amostra biológica pode consistir em sangue inteiro, soro, ou plasma;

[0071] depositar a amostra biológica aspirado à área biológica de recepção de amostra ou amostra acolchoa 40 da faixa 10;

[0072] promovendo fluxo lateral (LF) da amostra biológica da almofada de amostra 40 em e sobre o conjuga área de Iigand de almofada/detector 60, que contém o Iigand de detector, por exemplo, camundongo monoclonal e/ou polyclonal anti-sCD40 ligand/CD 154 revestido em partículas de ouro de colloidal, ou partículas de selênio de colloidal, ou partículas de carvão de colloidal ou colloidal partículas de látex;

[0073] complexing o Iigand de detector ligando ele ao Iigand solúvel CD40/CD 154;

[0074] mover o complexo, via fluxo lateral, de dizer conjuga área de Iigand de almofada/detector 60 em e sobre ao menos uma linha de área/prova de captura 70 imobilizado em dizer membrana 30 e conter um reagente imóvel de captura configurou especificamente ligar com dizer complexo;

[0075] reagir com dizer que complexo e reagente imóvel de captura em dizer linha de área/prova de captura 70 tornar-se imovelmente une ao reagente de captura e produz um sinal detectavelmente visível, tal como uma linha cor-de-rosa ou roxa; e

[0076] uma vez um sinal visível detectável é formado em dizer membrana 30, opcionalmente promovendo o fluxo lateral de qualquer Iigand de detector é deixado uncomplexed na amostra biológica da linha de área/prova de captura 70 a uma área de linha de controle 50 conter um reagente de controle que reage com o uncomplexed Iigand de detector produzir outro sinal visível. Nesta região, a área de linha de controle serve como um controle processual interno e a detecção de um sinal nesta área verifica-se que fluxo capilar aconteceu e que a integridade funcional do dispositivo foi mantido. [0077] Os resultados de provas representadas em HIV/AIDS que amostras de sangue positivas usando o ' Λ dispositivo de immunochromatographic da invenção presente são fornecidos embaixo em Tabela eu mostrar a eficácia e operability da invenção presente determinar rapidamente e com exatidão um estado imune do paciente determinando a presença de, e quantificando, solúvel CD40 ligand/CD 154 numa amostra de sangue. A faixa particular de immunochromatographic da invenção presente usada no desempenho destas provas foi construída para fornecer uma indicação visível (na forma de uma faixa) de disco laser solúvel 40 ligand/CD 154 sincero de aproximadamente 200 CD4 + células de Τ/μί. ou maior.

[0078] Resultados para a prova rápida representada com o dispositivo de immunochromatographic da invenção presente são informados em Tabela eu como ou "positivo" quando uma faixa colorida de qualquer que intensidade é visto na área de prova do dispositivo ou "negativa" quando não faixa colorida é visível na área de prova. Como a quantia de CD4 que proteínas equivalentes aproxima-se o ponto limite dinâmico para a prova que é aproximadamente

.200 +/- 25 CD4 células, o colorido faixa no prova área do dispositivo tornar-se-á mais leve e mais leve até que desaparece em aproximadamente 200 +/- 25 CD4 células.

[0079] O dispositivo de immunochromatographic da invenção presente fornece um um passo examinando prova para a determinação semi-quantitativo de estado imune em pacientes de HIV/AIDS via detecção de proteínas específicas que diretamente correlacionam a contas CD4 (equivalentes CD4). Para reiterar, AIDS é caracterizada por mudanças na quantia de linfócitos de T-células. O vírus, em indivíduos infeccionados, causa um esgotamento das células de T-ajudante, que são uma população de submarino de T-células. Isto deixa pacientes suscetível a infecções oportunistas e malignidades potenciais. A presença do vírus que se causa o sistema imune deteriorar-se como AIDS progride. Em indivíduos normais e imunes suprimidos, há proteínas específicas que são detectável que correlacionam a contas CD4 e que pode ser detectado pelo dispositivo e método da invenção presente, como evidenciou pelos resultados de prova mostrados em Tabela I. As provas tal como contas CD4 estão entre método mais largamente usado para determinar o estado imune de HIV/AJUDAS infetou pacientes e estabelecer a sincronização de e/ou de eficácia do início de ARTE (terapia de anti-retroviral).

[0080] A invenção presente fornece uma membrana rápida baseou examinando prova para detectar a presença de proteínas específicas que correlacionam a contas CD4. Esta prova é a mais nova geração ensaio lateral de tipo de immunochromatographic de fluxo. Estes estão entre o mais simples e mais fácil de usar POC (ponto de cuidado) ensaios não exigindo nenhuma instrumentação nem indivíduos altamente habilidosos executar. Teste usando o dispositivo da invenção presente pode ser executado usando plasma fresco ou soro prova. A prova emprega o uso de um anticorpo de monoclonal de <image>image see original document page 20</image>

encadernação de antígeno conjugou a uma partícula de ouro de colloidal e uma combinação rará^y^jfc' anticorpos de monoclonal imobilizou na membrana.

[0081] Como descrito previamente, uma vez a amostra é adicionado ao dispositivo de prova, as passagens de mistura pelo complexo de encadernação/ouro de antígeno, que então liga a proteína específica de alvo na amostra. Como este complexo pretere os anticorpos imobilizados na membrana, se qualquer CD4 específico que proteínas equivalentes são presente, os anticorpos capturam-nos em volta. Isto produz uma faixa cor-de-rosa/roxo ou faixas numa área particular do dispositivo de prova. O complexo restante continua a migrar a uma área de controle no dispositivo de prova e produz uma faixa cor-de-rosa/roxo nesta área de controle. Esta faixa de controle indica que a prova foi executada adequadamente.

[0082] Em conseqüência dos componentes do dispositivo inventivo descrito nisto e suas várias personificações divulgaram nisto acima e a maneira eles cooperarmente funcionam, está claro que realizam todos os objetivos delinear nisto acima de incluir: (i) pôndo rotina prova imune de estado dentro do alcance de longe mais pacientes de HIV, particularmente em recurso-escasso ou áreas de recurso- pobres; (ii) fornecendo e fazendo disponível um extremamente acessível e fácil de usar prova rápida diagnostica para CD4 + níveis de célula de T; (iii) a determinação de CD4 + níveis de célula de T que podem ser executados sem qualquer instrumentação especial e que não exigirão pessoal altamente habilidoso, água fresca ou eletricidade; (iv) a determinação de CD4 + níveis de célula de T dentro de 20 minutos enquanto o paciente é ainda presentes, tão não há nenhuma necessidade para ligar de novo, dias mais tarde, ler resultados de prova; (v) dando a capacidade para clínicos rapidamente diagnosticar estado comprometido imune devido a HIV/AJUDAS enquanto o paciente está ainda em seu escritório e imediatamente começa ARTE, se for necessário; (vi) fornecendo um custo meios eficazes de controlar a eficácia de ARTE e o paciente a adesão de tratamento, mesmo no mais remoto de localizações; (vii) a prova de níveis de célula CD4 num custo projetado de aproximadamente $5,00 contra o custo atual de $25-$50 (calcularam custo inclusive reagentes, equipamento, prova transporte, etc.); (viii) permitindo para a determinação de CD4 + níveis de célula de T não medindo as células se mas medindo CD4 + equivalentes de célula de T, i.e., solúvel Iigand CD40; e (ix) permitindo a determinação de a célula CD4 nivela sem o Iysis de tais células.

[0083] FIGOS. 7-9 exposição várias personificações de uma faixa dupla de immunochromatographic de prova 10 para simultaneamente detectando, numa prova, um HIV/AIDS do paciente estado imune e a presença de uma infecção de HIV no paciente, formado de acordo com a invenção presente. Cada um do immunochromatographic duplo de prova desnuda-se 10 ilustrado por FIGOS. 7-9 inclui a estrutura da única prova, HIV/AIDS dispositivo imune de immunochromatographic de estado descrito previamente nisto e ilustrado por FIGOS. 1-6 dos desenhos. No entanto, com a faixa dupla de prova 10, há incluído captura constituiu de uma quantia determinada antecipadamente de um reagente imóvel de captura (também referiu a nisto como uma faixa de detecção ou linha de prova).

[0084] Uma forma da faixa dupla de prova 10 é mostrado em FIGOS. 7a e 7b. Um substrato de suporte 20 fornece apoio para as várias áreas e membranas descreveu embaixo. Uma área 40 é fornecido no substrato 20 para receber uma amostra biológica contendo o analyte de alvo ou analytes. Outra área 60 é fornecido no substrato 20 sobrepor a área de recepção de amostra 40 e a membrana 30 que constitui um ligand de detector movelmente contido que, como descrito previamente, é capaz de formar um complexo móvel com solúvel CD40 ligand/CD 154, que é ao

menos um do analytes de alvo na amostra biológica. A área 60 mais adiante inclui um anticorpo móvel de HIV ligando complexo de tintura que liga com qualquer anticorpos de HIV apresenta na amostra que migra ao longo da membrane 30. Ao menos uma área de captura 70 (mostrado como Prova Forra 2 em FIG. 7b) é usado para testar os HIV/AIDS estado imune do paciente. Isto área de captura 70 constitui uma quantia determinada antecipadamente de um reagente imóvel de captura que é capaz de especificamente colando ao complexo móvel formado pelo Iigand solúvel CD40/CD 154 proteína e o Iigand de detector e fornece uma indicação visível preferivelmente na forma de uma faixa cor-de- rosa/roxo. Ao menos uma área adicional de captura 70 (mostrado em FIG. 7b como Prova Forra 1), que é separado da área imune de captura de estado 70 (mostrado em FIG. 7b como Prova Forra 2) inclui uma quantia de reagentes imóveis de captura que causa a mistura de amostra/reagente migra ao longo da membrana 30 colar à isso se um anticorpo de HIV é presente no sangue do paciente ou amostra de soro. Esta faixa adicional de detecção ^

70 (isto é, Testa Linha 1) virará uma cor cor-de-rosa/roxo, que indica a presença de anticorpos a HlV.

[0085] Mais especificamente, a amostra paciente colocou na faixa dupla de prova 10 misturas com os reagents incorporados no dispositivo para tanto anticorpo de HIV e CD40 detecção equivalente de antígeno. Como a mistura paciente de amostra/reagente migra ao longo da membrana 30, pretere o em menos duas prova separada forra 70 conter detectores imobilizados, ao menos um para detecção de anticorpo de HIV e ao menos um para detecção imune de estado. Se ou ou ambos do analytes são presentes na mistura de amostra/reagente, a tintura que mistura complexa é capturada pela prova imobilizada forra 70 respectivamente, e uma faixa cor-de- rosa/roxo aparece, indicando a presença de anticorpos a HIV, indicando infecção e uma quantia semi- quantitativo de antígeno de imune-estado que correlaciona a um estado imune da pessoa, que pode ser indicativo de exigir tratamento de ARTE/HAART ou não. A mistura continua a migrar ao longo da membrana a uma linha de controle 50 que aparece, mostrando desempenho adequado da prova. Deve ser anotado que na personificação do dispositivo duplo de prova descreveu acima e mostrado em FIG. 7, os dois complexos de encadernação de tintura, um cada um para estado imune e infecção de HIV, sã&tyy misturados juntos.

[0086] Outra forma alternativa de um dispositivo duplo de prova 10 formado de acordo com a invenção presente é mostrado em FIGOS. 8a e 8b dos desenhos. Isto é uma configuração de multi-membrana, pelo as duas provas, HIV e estado imune, estão em membranas separadas 30 mas incorporado num único dispositivo fornecer fluxo bidirecional. A área de recepção de amostra 40 é situada no centro no apoiar alongado substrato 20, e as duas membranas separadas 30 estendem da área de recepção de amostra 40 em direções opostas no substrato 20 e estão em comunicação fluida com a área de recepção de amostra 40 ou diretamente ou por um interpôs conjuga área de Iigand de almofada/detector 60. Ao menos uma linha de prova ou área de captura 70 para detecção de anticorpo de HIV é situadas na primeira membrana 30, e uma linha de controle ou área 50 é situadas na primeira membrana 30 numa posição na primeira membrana preferivelmente mais longe longe da área de recepção de amostra 50 que a linha de prova de anticorpo de HIV 70.

[0087] Da mesma forma, a segunda membrana 30, também em comunicação fluida com a área de recepção de amostra 40 ou diretamente ou por um interpôs conjuga área de Iigand de almofada/detector 60, que é usado para HIV/AlDS determinação imune de estado, inclui ao menos uma linha de prova ou área de captura 70 ter uma quantia determinada antecipadamente de um reagente imóvel de captura capaz de especificamente colando ao complexo móvel formado pela solúvel Iigand CD40/CD154 proteína e o detector Iigand na segunda membrana 30

fornecer um indicativo visível de sinal da quantidade de e/ou de presença de HIV/AIDS CD4 imune de estado + equivalentes de célula de T. Uma linha de controle ou área 50 também é fornecido na segunda membrana 30, que é descartado na segunda membrana 30 preferivelmente mais longe longe da área de recepção de amostra 40 que a linha imune de prova de estado 70. Ambos os controle forra ou áreas 50 mudará cores indicar que as provas foram executadas adequadamente, como descrito previamente. Com o dispositivo duplo de prova 10 mostrado em FIG. 8, fluxo fluido é bidirecional, em direções opostas, de uma única área de recepção de amostra 40, com a seção de prova de anticorpo de HIV num lado da área de recepção de amostra 40, e os HIV/AJUDA área imune de prova de estado no lado diametralmente oposto da área de recepção de amostra 40. Cada uma da primeira membrana 30 e a segunda membrana 30 está em comunicação fluida com a área de recepção de amostra 40.

[0088] Outra versão do dispositivo duplo de prova 10 formado de acordo com a invenção presente é mostrado em FIG. 9 dos desenhos. Aqui, uma configuração de multi-membrana é usada, pelo as duas provas, HIV e estado imune, são executados em membranas separadas paralelamente dispostas 30 no substrato total de suporte 20 do dispositivo mas, como pode ser visto, são incorporados num único dispositivo dentro de um alojamento 110. Duas amostra separada recebendo áreas 40, cada um estando respectivamente em comunicação fluida com uma membrana correspondente 30 ou diretamente ou por um interpôs conjuga área de Iigand de almofada/detector 60, são fornecidos no substrato 20 do dispositivo. Cada área de recepção de amostra 40 é exposta por um porto respectivo de acesso de amostra 120 formado pela espessura do alojamento 110. Da mesma forma, ao menos uma porção de cada membrana 30 é exposta por uma janela de inspeção formada como um recorte 130, com ou sem capa transparente (não mostrado) em cada recorte 130, pela espessura do alojamento 110. Como descrito previamente com respeito ao fluxo bidirecional dispositivo duplo de prova 10 mostrado em FIGOS. 8a e 8b, o paralelo flui dispositivo duplo de prova 10 mostrado em FIG. 9 tem ao menos uma linha de prova ou área de captura 70 e uma linha de controle ou área 50 fornecido em cada uma das membranas 30. O em menos uma linha de prova 70 em um das membranas 30 é fornecido para detectar a presença de um anticorpo de HIV na amostra paciente, e o em menos uma linha de prova 70 na outra membrana 30 é fornecido para detectar e/ou quantificar os HIV/AIDS do paciente estado imune.

[0089] Como pode ser visto de FIG. 9 dos desenhos, o dispositivo duplo de prova 10 pode incluir etiquetas ou outro indicia 100 situado em proximidade à porção de prova de HIV e a porção imune de prova de estado de modo que o médico ou técnico administrando a prova saber que porção do dispositivo duplo de prova 10 relaciona a detecção de HIV e que porção do dispositivo duplo de prova 10 relaciona a detecção imune de estado.

[0090] Um dispositivo duplo rápido de prova formou de acordo com o maio presente de invenção, em vez de detectar e medir a presença de um CD4 + equivalente de célula de T, isso é, (CD154), solúvel de Iigand CD40 diretamente detecta e mede a presença de antígeno de célula CD4 para determinar uma paciente HIV/AIDS estado imune. A porção de detecção de anticorpo de HIV do dispositivo duplo de prova permaneceria o mesmo como descrito previamente.

[0091] A combinação rara de provas (infecção de HIV e estado imune) situado num único dispositivo seriam custados eficaz e fácil de executar, não exigindo nenhum equipamento, não pessoal altamente habilidoso, nenhumas instalações de laboratório e nenhuma água limpa, e podem ser executadas em local enquanto o paciente é ainda presente e, se resultados indicassem, terapia de droga pode ser iniciada nem pode ser mudado, nem o paciente pode ser programado para adicional controlando se ele ou é só HIV positivos mas não mas sofrendo dos efeitos de AIDS se o seu ou seu estado imune é ainda satisfatório.

[0092] Enquanto personificações particulares da invenção foram ilustrados e foram descritas em detalhe nisto, são fornecidos por maneira de ilustração só e não deve ser interpretado para limitar a invenção. Desde que certas mudanças podem ser feitas sem partir do alcance da invenção presente, é pretendido que toda a questão conteve no acima de descrição ou mostrado nos desenhos que acompanha»? e interpretado como ilustrativo e não num sentido literal. Os médicos da arte compreenderão que seqüência de passos e as personificações retratadas nas figuras podem ser alteradas sem partir do alcance da invenção presente e que as ilustrações contidas nisto estão exemplos singulares de uma multidões de possíveis descrições das invenções presentes no anticorpo de HIV na amostra biológica. A TABELA I A PROVA RESULTA

Prove Numere CD4 Conta Carga de Viral Imune-Prova Imune-Estado Resulta O ESTADO Rápido Classidicado Positivo(＞200CD4 Teste de Tipo) EQ's ou Negativa(＜200CD4 Imune- EQ'S) O ESTADO Rápida NOTA; Tela Negative=Nenhuma Linha de Prova CD4EQ200 Positivo=Qualquer Corrida visivel de Linha de Prova

.0005-041- 100 QS200 Positivo Jul. 01, 2007 .01472

.0006-041- 225 QS200 Negabvo Jul. 01, 2007 .01825

.0008-041- 174 QS200 Positivo Jul. 01, 2007 .00640

.0008-214- 528 QS200 Positivo Jul. 01, 2007 .02462

.0009-041- 354 QS200 Positivo Jul. 01, 2007 .01357

.0006-041- 994 63 QS200 Positivo Sep. 05, 2007 .00754

.0008-041- 599 188 QS200 Positivo Sep. 05, 2007 .01001

.0008-214- 200 5730 QS200 Positivo Sep. 05, 2007 .02455

.0009-041- 554 ＜25 QS200 Positivo Sep. 05, 2007 .01333

.0009-041- 376 ＜50 QS200 Positivo Sep. 05, 2007 .01345

.0010-258- 400 1640 QS200 Positivo Sep. 05, 2007 .02458

.0006-041- 402 ＜50 QS200 Positivo Sep. 24, 2007 .01826

.0009-096- 451 800 QS200 Positivo Sep. 24, 2007 .01781

.0009-214- 501 ＜50 QS200 Positivo Sep. 24, 2007 .01609

.0010-214- 456 15679 QS200 Positivo Sep. 24, 2007 .00041

.0005-041- 278 13211 QS200 Positivo Nov. 06, 2007 .01454

.0005-041- 301 6629 QS200 Positivo Nov. 06, 2007 .01695 .0006-041- 254 26801 QS200 Positivo (muito fraco) Nov. 06, 2007 .00772

.0006-041- 256 ＜50 QS200 Positivo (muito fraco） Nov. 06, 2007 .01524

.0007-041- 205 70 QS200 Negabvo Nov. 06, 2007 .01775 .0008-041- 226 4972 QS200 Negabvo Nov. 06, 2007 .00993 <image>image see original document page 26</image>

0009-214- 01940 301 39652 QS200 Positivo Nov. 06,2007 145719 1165 N/A QS200 Positivo Oct. 08, 2007 145721 920 N/A QS200 Positivo 145723 1012 N/A QS200 Positivo Oct. 08,2007 Oct. 08, 2007 145725 578 N/A QS200 Positivo 145726 641 N/A QS200 Positivo Oct. 17, 2007 146106 923 N/A QS200 Positivo Oct. 17, 2007 146108 880 N/A QS200 Positivo Oct. 17, 2007 IN01 457 N/A QS200 Positivo Dec. 06, 2007 IN02 142 N/A QS200 Positivo (muito fraco)* Dec. 06, 2007 IN03 304 N/A QS200 Positivo Dec. 06, 2007 IN04 604 N/A QS200 Positivo Dec. 20, 2007 1N05 287 N/A QS200 Negativo Dec. 20, 2007 INOS 99 N/A QS200 Positivo (muito fraco)* Dec. 20, 2007 IN07 214 N/A QS200 Positivo (muito desmaio) Dec. 20, 2007 IN08 537 N/A QS200 Positivo Dec. 20, 2007 IN09 634 N/A QS200 Positivo Dec. 20, 2007 IN10 225 N/A QS200 Positivo (linha fraca) Dec. 20, 2007 IN11 32 N/A QS200 Positivo* Dec. 20, 2007 IN12 171 N/A QS200 Positivo (muito linha de desmaio)* Dec. 20, 2007 IN13 193 N/A QS200 Positivo (muito linha de desmaio)* Dec. 20, 2007 IN14 395 N/A QS200 Positivo Dec. 20, 2007 IN15 384 N/A QS200 Positivo Dec. 20, 2007 IN16 103 N/A QS200 Negativo Dec. 20, 2007 IN17 639 N/A QS200 Positivo Dec. 20, 2007 SA1 133 N/A QS2Ü0 Positivo* Mar. 10, 2008 SA2 176 N/A QS200 Positivo Mar. 10, 2008 SA3 211 N/A QS200 Positivo Mar. 10, 2008 SA4 222 N/A QS200 Positivo Mar. 10,2008

A TABELA I-COMENTO

*Resultados marcaram com um (*) de asterisco são discordante.

Todos os resultados em 200 + /- 25 células CD4 foram consideradas positivo baseado nas provas baixo acaba ponto limite

N = 50 (a partir de 2008 de março) A correlação Fluir Cytometry = 89,1%

Claims (20)

1. Um dispositivo duplo de teste para a detecção simultânea de um HIV/AIDS CD4 + T estado imunológico equivalente celular e um anticorpo HIV, que compreende: um ou mais materiais de apoio capaz de fornecer fluxo lateral, pelo menos uma área de amostra antes receber situado em pelo menos um dos um ou mais materiais de apoio para receber uma amostra biológica contendo pelo menos um analito primeiro alvo e um analito segundo alvo, o primeiro analito alvo ser um CD4 + T equivalente célula, o analito segundo alvo sendo um anticorpo HIV, pelo menos uma segunda área situada em pelo menos um dos um ou mais materiais de apoio ter um conjugado ligante movelmente contidas detector, no qual o Iigante detector é capaz de 10 formando um complexo celular com as células CD4 + T equivalente célula, pelo menos uma área de primeira captura situado em pelo menos um dos um ou mais materiais de apoio com uma quantidade predeterminada de um reagente primeira captura imóvel, o reagente primeira captura imóvel capazes de especificamente vinculativo para o complexo móvel formado pelo CD4 + T proteína equivalente célula eo Iigante detector e fornecendo um sinal visível, e pelo menos uma área de captura segunda situado em pelo menos um dos um ou mais materiais de apoio com uma quantidade predeterminada de uma captura segundo imóvel reagente capaz de especificamente vinculativo com a presença de um anticorpo HIV na amostra biológica.

2. Um dispositivo de teste duplo como definido pela reivindicação 1, onde o T CD4 + equivalente célula é solúvel CD40 Iigante / CD 154.

3. Um dispositivo de teste duplo como definido pela reivindicação 2, em que o Iigante detector da área, pelo menos, um segundo inclui pelo menos um dos monoclonal e / ou anti-ligante sCD40 policlonal / CD 154 conjugado com partículas de ouro coloidal; monoclonal e / ou Iigante anti-sCD40 policlonal / CD 154 conjugado com partículas coloidais selênio; monoclonal e / ou anti-ligante sCD40 policlonal / CD 154 conjugado com partículas de carvão coloidal e anticorpo monoclonal e / ou policlonais anti-ligante sCD40 / CD 154 conjugado com coloidal partículas de látex.

4. Um dispositivo de teste duplo como definido pela reivindicação 2, onde o reagente primeira captura imóvel situado na área de captura, pelo menos, uma primeira inclui um mouse monoclonal e / ou anti- ligante sCD40 policlonal / CD 154.

5. Um dispositivo de teste duplo como definido pela reivindicação 1, que inclui ainda: pelo menos uma área de controle situado no primeiro, pelo menos, um dos um ou mais materiais de apoio, pelo menos, a área de controle incluindo um primeiro reagente de controlo imóvel fornecer uma indicação visível e que é capaz de ligar o Iigante detector conjugados, mas não reconhece ou ligar para o CD4 + T equivalente célula, quando então o reagente de controlo liga o Iigante detector conjugados e muda de cor, de modo a mostrar que o dispositivo está funcionando corretamente.

6. Um dispositivo de teste duplo como definido pela reivindicação 5, onde o reagente de controlo inclui cabra anti-lgG de rato.

7. Um dispositivo de teste duplo como definido pela reivindicação 1, que inclui ainda: pelo menos uma área de controle situado no primeiro, pelo menos, um dos um ou mais materiais de apoio, pelo menos, a área de controle incluindo um primeiro reagente de controlo imóvel fornecer uma indicação visível de modo para mostrar que o dispositivo está funcionando corretamente no que diz respeito a pelo menos um de um teste de status de HIV / AIDS e imune um teste de detecção de anticorpos HIV.

8. Um dispositivo de teste duplo como definido pela reivindicação 1, que inclui ainda: pelo menos uma área de controle de primeiro e segundo uma área de controle, a, pelo menos, área de controle de primeiro e segundo controle da área estar situada em pelo menos um dos um ou mais materiais de apoio , a, pelo menos, área de controle de primeira, incluindo um reagente controle primeiro imóvel fornecer uma indicação visível de modo a mostrar que o dispositivo está funcionando corretamente no que diz respeito a um teste de status de HIV / AIDS imune, pelo menos, a segunda área de controle incluindo um reagente de controlo de segundo imóvel fornecendo uma indicação visível de modo a mostrar que o dispositivo está funcionando corretamente no que diz respeito a um teste de detecção de anticorpos HIV.

9. Um dispositivo de teste duplo como definido pela reivindicação 2, em que o Iigante detector inclui um reagente primeiro que se torna associado com o complexo formado com o Iigante CD40 solúvel / CD .154, e um reagente segundo situado na área de captura, pelo menos, primeiro que ao se ligar e interação com o reagente primeiro produz um sinal detectável.

10. Um dispositivo de teste duplo para a detecção simultânea de um HIV / AIDS CD4 + T estado imunológico equivalente celular e um anticorpo HIV, que compreende: um material de suporte capaz de fornecer o fluxo de fluido lateral; uma área de amostra recebendo situado no material de apoio para receber uma amostra biológica contendo pelo menos um analito primeiro alvo e um analito segundo alvo, o analito primeiro alvo sendo um equivalente de células CD4 + Τ, o segundo analito alvo sendo um anticorpo HIV, pelo menos uma segunda área situada no material de apoio e em comunicação fluida com a área da amostra a receber, a área de pelo menos um segundo de ter um conjugado Iigante movelmente contidas detector, no qual o Iigante detector é capaz de formar uma complexo celular com o CD4 + T equivalente célula, pelo menos uma área de primeira captura situado no material de apoio e estar em comunicação fluida com a área de amostra de recepção, a área de captura primeiro ter uma quantidade predeterminada de um reagente primeira captura imóvel, a primeira captura imóvel O reagente de ser capaz de especificamente ligação ao complexo móvel formado pelo CD4 + T proteína equivalente celular e Iigante detector e fornecendo um sinal visível, pelo menos uma área de captura segunda situado no material de apoio e estar em comunicação fluida com a área de amostra de recepção, os área de captura segunda com uma quantidade predeterminada de um reagente de captura de segundo imóvel capaz de liga especificamente a um anticorpo HIV presentes na amostra biológica e fornecendo um sinal visível, e pelo menos uma área de controle situado no material de apoio, a área de controle de pelo menos um incluindo um reagente de controlo imóvel fornecer uma indicação visível de modo a mostrar que o dispositivo está funcionando corretamente no que diz respeito a pelo menos um de um teste de status de HIV / AIDS e imune um teste de detecção de anticorpos HIV.

11. Um dispositivo de teste duplo para a detecção simultânea de um HIV / AIDS CD4 estado imunológico + T equivalente celular e um anticorpo HIV, que compreende: um material de apoio capaz de fornecer o fluxo de fluido lateral; uma área de amostra primeira recepção e uma área de amostra segundo a receber, cada um da área de primeira amostra de recepção e área de segunda amostra recebendo situando-se no material de apoio e sendo fornecido para receber uma amostra biológica contendo pelo menos um analito primeiro alvo e um analito segundo alvo, o analito primeiro alvo sendo um CD4 + T equivalente celular, o analito segundo alvo sendo um anticorpo HIV, pelo menos uma segunda área situada no material de apoio e em comunicação fluida com a área de primeira amostra de receber, a área de pelo menos um segundo de ter um conjugado Iigante moveably contidas detector, no qual o Iigante detector é capaz de formar um complexo celular com as células CD4 + T equivalente célula, pelo menos uma área de primeira captura situado no material de apoio e estar em comunicação fluida com a área de primeira amostra de recepção, a área de captura primeiro ter uma quantidade predeterminada de um reagente primeira captura imóvel, o reagente primeira captura imóvel capazes de especificamente ligação ao complexo móvel formado pelo CD4 + T proteína equivalente celular e Iigante detector e fornecendo um sinal visível, pelo menos uma área de captura segunda situado no material de apoio e estar em comunicação fluida com a segunda amostra área de recepção, a área de captura de segunda ter uma quantidade predeterminada de um reagente de captura de segundo imóvel capaz de liga especificamente a um anticorpo HIV presentes na amostra biológica; uma área de controle situado no primeiro material de apoio, a área de controle incluindo um primeiro controle primeiro imóvel reagente fornecer uma indicação visível de modo a mostrar que o dispositivo está funcionando corretamente no que diz respeito a um teste de status de HIV / AIDS imunológico, e uma área de controle situado no segundo material de apoio, a área de controle incluindo um segundo reagente de controlo de segundo <table>table see original document page 30</column></row><table> imóvel proporcionando uma visível indicação de modo a mostrar que o dispositivo está funcionandd lt^" * corretamente no que diz respeito a um teste de detecção de anticorpos HIV.

12. Um dispositivo de teste duplo para a detecção simultânea de um HIV / AIDS CD4 estado imunológico +T equivalente celular e anticorpos anti-HIV, que compreende: um material de apoio capaz de fornecer o fluxo de fluido lateral; uma área de amostra de receber, a área de amostra recebendo situando-se com o apoio material e sendo fornecido para receber uma amostra biológica contendo pelo menos um analito primeiro alvo e um analito segundo alvo, o analito primeiro alvo sendo um CD4 + T equivalente célula, o analito segundo alvo sendo um anticorpo HIV, pelo menos uma segunda área situada na material de apoio e em comunicação fluida com a área da amostra a receber, a área de pelo menos um segundo de ter um conjugado Iigante moveably contidas detector, no qual o Iigante detector é capaz de formar um complexo celular com as células CD4 + T equivalente célula, pelo menos uma área de primeira captura situado no material de apoio e estar em comunicação fluida com a área de amostra de recepção, a área de captura primeiro ter uma quantidade predeterminada de um reagente primeira captura imóvel, o reagente primeira captura imóvel capazes de especificamente ligação ao complexo móvel formado pela célula CD4 + T proteína equivalente e Iigante detector e fornecendo um sinal visível, pelo menos uma área de captura segunda situado no material de apoio e estar em comunicação fluida com a área de amostra de recebimento, segundo a área de captura de ter uma quantidade predeterminada de um reagente de captura de segundo imóvel capazes de especificamente ligação a um anticorpo presente HIV na amostra biológica; uma área de controle situado no primeiro material de apoio, a área de controle incluindo um primeiro reagente de controlo de primeiro imóvel, fornecendo uma indicação visível de modo a mostrar que o dispositivo está funcionando corretamente no que diz respeito a um HIV / AIDS teste do estado imunológico, e uma área de controle situado no segundo material de apoio, a área de controle incluindo um segundo reagente de controlo de segundo imóvel fornecer uma indicação visível de modo a mostrar que o dispositivo está funcionando corretamente no que diz respeito a um teste de detecção de anticorpos HIV.

13. Um método de usar um dispositivo semi-quantitativa, imunocromatográfico para a detecção simultânea de um HIV / AIDS CD4 + T estado imunológico equivalente celular e um anticorpo HIV, que compreende as etapas de: colocação de um plasma, soro ou amostra de sangue total em uma extremidade do dispositivo em pelo menos uma área de amostra de receber no dispositivo que contém pelo menos um analito primeiro alvo e um analito segundo alvo, o analito primeiro alvo sendo um CD4 + T equivalente celular, o analito segundo alvo sendo um anticorpo HIV; movendo a amostra, via de fluxo lateral, a área de pelo menos um segundo no dispositivo que^pr um Iigante detector conjugados capaz de formar um complexo celular com o CD4 + T equivalente cel&J^^^^ movimento do complexo, através do fluxo lateral, pelo menos a área de captura a primeira sobre o dispositivo que tem uma quantidade predeterminada de um reagente primeira captura imóvel capazes de se ligar ao complexo móvel formado pelo CD4 + equivalente de células T e do Iigante detector conjugados e proporcionando um indicação visível, e movendo uma das amostras e do complexo, através do fluxo lateral, a pelo menos uma segunda área de captura do dispositivo ter uma quantidade predeterminada de um reagente de captura de segundo imóvel capazes de se ligar a um anticorpo presente HIV na amostra e fornecer uma indicação visível.

14. Um método como definido pela reivindicação 13, onde o T CD4 + equivalente célula é solúvel CD40 Iigante/CD 154.

15. Um método como definido pela reivindicação 13, que inclui ainda as etapas de: movimento do complexo, através do fluxo lateral, sobre a área de captura, pelo menos, ter a primeira quantidade predeterminada do reagente primeira captura imóvel, permitindo que uma parcela restante do complexo para continuar flua para uma área de controle sobre o primeiro dispositivo com um primeiro reagente controle nele situado, que produz uma indicação visível de que o método foi realizado corretamente.

16. Um método como definido pela reivindicação 15, que inclui ainda a etapa de: movendo um da amostra e do complexo, através do fluxo lateral, sobre a área de captura, pelo menos, segundo ter a quantidade predeterminada de reagente de captura de segundo imóvel, permitindo que uma parcela remanescente de uma das amostras e do complexo de continuar a fluir para uma área de controle segundo o dispositivo ter um nela segundo reagente de controlo situado que produz uma indicação visível de que o método foi realizado corretamente.

17. Um método como definido pela reivindicação 13, onde o Iigante detector é pelo menos um anticorpo monoclonal e / ou anti-ligante sCD40 policlonal /CD 154 conjugado com partículas de ouro coloidal; monoclonal e / ou policlonais anti-ligante sCD40 /CD 154 conjugado com partículas coloidais selênio; monoclonal e / ou anti-ligante sCD40 poligonais /CD 154 conjugado com partículas de carvão coloidal e anticorpo monoclonal e / ou policlonais anti-ligante sCD40 / CD 154 conjugado com partículas de látex coloidal.

18. Um método como definido pela reivindicação 13, onde o reagente primeira captura inclui um mouse monoclonal e / ou anti-ligante sCD40 policlonal / CD 154. <formula>formula see original document page 32</formula>

19. Um método como definido pela reivindicação 13, que inclui ainda a etapa de detectar ou quantificar a presença de Iigante CD40 solúvel / CD 154.

20. Um dispositivo de teste duplo para a detecção simultânea de um HIV / AIDS CD4 + T estado imunológico equivalente celular e um anticorpo HIV, que compreende: um ou mais materiais de apoio capaz de fornecer fluxo lateral, pelo menos uma área de amostra antes receber situado em pelo menos um dos um ou mais materiais de apoio para receber uma amostra biológica contendo pelo menos um analito primeiro alvo e um analito segundo alvo, o primeiro analito alvo sendo um antígeno CD4, o analito segundo alvo sendo um anticorpo HIV, pelo menos uma segunda área situada em pelo menos um dos um ou mais materiais de apoio ter um detector antígeno movelmente contidas CD4, onde o detector é capaz de formar um móvel complexo com o antígeno CD4, pelo menos uma área situada na primeira captura, pelo menos, um dos um ou mais materiais de apoio com uma quantidade predeterminada de um reagente primeira captura imóvel, o reagente primeira captura imóvel capaz de ligação especificamente ao complexo formado por móveis o antígeno CD4 eo detector antígeno CD4 e fornecendo um sinal visível/e pelo menos uma área de captura segunda situado em pelo menos um dos um ou mais materiais de apoio com uma quantidade predeterminada de um reagente de captura de segundo imóvel capazes de especificamente ligação com um HIV anticorpo presente na amostra biológica.