CN203846028U - 一种用于鸽性别鉴定的试剂盒 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了一种用于鸽性别鉴定的试剂盒，包括盒体和盒盖，盒体与盒盖铰接，盒体包括储存盒和用具盒，用具盒位于储存盒下方，储存盒内固定衬垫，衬垫上开有四个通孔，四个通孔内分别放置用于盛放上下游引物混合物HXp的第一试剂瓶、用于盛放扩增缓冲液的第二试剂瓶、用于盛放DNAmarker的第三试剂瓶、以及用于盛放琼脂糖粉的第四试剂瓶；盒盖内放置海绵垫。本实用新型的有益效果为：本实用新型提供的试剂盒结构简单，使用方便，且盒体内同时存在与鸽性染色体W染色体和Z染色体上的CHD基因序列合理设计PCR引物，检测时，直接利用PCR-琼脂糖电泳技术和基因分型方法确定个体鸽的性别，操作简单，鉴别速度快。

Description

一种用于鸽性别鉴定的试剂盒

技术领域

本实用新型涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种用于鸽性别鉴定的试剂盒。

背景技术

鸽属于单态鸟，根据外形鉴定其性别是较为困难的，其他家禽中常用的翻肛鉴别法不仅对鸽子本身的伤害较大，而且错误率也高。雌鸽的产蛋、孵化以及哺乳必须有雄鸽的刺激，因此鸽子的性别鉴定有着生产上的实际意义。如果在早期就能够对鸽子准确地分离出性别并进行及时地配对，不仅能提高鸽场的生产效率，增加生产效益，还能及早淘汰不必要的雄鸽减少生产成本。伴随着我国养鸽业的发展，快速、及时、准确地鉴别出雏鸽的性别，成了一个亟待解决的问题。

近年来，随着分子生物技术的进步，对于动物性别检测人们大多使用试剂盒，为了防止污染，提高检测的准确性和较高的检测速率，试剂盒在不断的被运用。目前现有的用来鸽性别鉴定的试剂盒大多比较简单，使用很不方便，试剂盒内的试剂瓶与液体并不是一一对应，每次使用每次均需要清洗，若清洗不净，很可能造成试剂污染，而且在加料和观察时均不方便，在观察结果时，往往需要和专门的比色卡进行比较，使用比较繁琐，为此提供一种鸽性别鉴定专用的基因检测试剂盒成为当前的迫切需要。

实用新型内容

为解决上述问题，本实用新型的目的在于提供一种用于鸽性别鉴定的试剂盒。

为达到上述目的，本实用新型实施例中提供了一种用于鸽性别鉴定的试剂盒，包括盒体和盒盖，盒体与盒盖铰接，盒体包括储存盒和用具盒，用具盒位于储存盒下方，储存盒内固定衬垫，衬垫上开有四个通孔，四个通孔内分别放置用于盛放上下游引物混合物HXp的第一试剂瓶、用于盛放扩增缓冲液的第二试剂瓶、用于盛放DNA marker的第三试剂瓶、以及用于盛放琼脂糖粉的第四试剂瓶；盒盖内放置海绵垫。

本实用新型提供一种用于鸽性别鉴定的试剂盒，试剂盒上层的储存盒内放置试剂瓶，试剂瓶内放置相对应的检测试剂，试剂盒下层的用具盒内放置实验用具，使用时若不使用实验用具则可仅打开盒盖进行上层的实验，每次清洗后，每个对应的试剂瓶放置对应的试剂，防止错放、误放，导致试剂瓶污染，提高了实验检测的准确性，另外盒盖上的海绵垫对试剂瓶做了进一步的密封，防止试剂瓶二次污染，密封效果好。

进一步的，衬垫上放置比色卡。本技术方案中，比色卡可用于对试剂颜色进行比对，无需在实验时再次选择比色卡，使用方便，操作简单。

进一步的，衬垫上与通孔对应的位置上贴有标签。本技术方案中，在衬垫上贴上标签，可以很方便的辨别试剂，防止弄混试剂，保证了试验的正常检测，使用方便，操作简单。

进一步的，储存盒的前侧安装透明观察窗。透明观察窗用于观察试剂瓶内的试剂量和颜色，使用方便，操作简单。

优选的，用具盒与盒体通过滑道连接，且用具盒内放置试验用具。用具盒可以通过滑道从盒体内抽出，类似抽屉的结构，这样可以根据使用情况，选择所需的实验用具，使用方便。

优选的，盒体外侧连接可插入记录本的储物槽。本技术方案中，储藏槽可以防止清洁布或记录本，记录本用于记录放置在盒体内试剂瓶的种类、温度、以及时间等试验参数，使用方便，减少了实验误差。

本实用新型提供的试剂盒内的试剂瓶中，第一试剂瓶盛放的上下游引物混合物HXp为CHD基因 PCR 扩增的上下游引物混合物HXp，其中 HXp 详细信息如下：

引物混合物 HXp 表示用于 CHD基因 PCR 扩增的上下游引物混合物，引物信息如下：

上游引物  5'- TGCAGAAGCAATATTACAAGT- 3'，

下游引物  5'- AATTCATTATCATCTGGTGG - 3'。

本实用新型的有益效果为：本实用新型提供的试剂盒结构简单，可以使鸽性别鉴定实验的操作更加方便，盒体内放置有CHD基因 PCR 扩增的上下游引物混合物 HXp、扩增缓冲液、DNA marker 和琼脂糖粉，试剂齐全，可同时储存在试剂盒内，与现有的检测试剂盒相比，本实用新型根据同时存在于鸽性染色体 W 染色体和 Z 染色体上的 CHD1 基因序列合理设计的 PCR 引物，检测时，直接利用 PCR-琼脂糖电泳技术和基因分型方法，确定个体鸽的性别，具有操作简单方便、鉴别快速、结果准确和价格低廉等优点，避免了采用传统方法耗时、耗力和易出错的缺点。 

附图说明

图1为本实用新型实施例所述的一种用于鸽性别鉴定的试剂盒的结构示意图一；

图2为本实用新型实施例所述的一种用于鸽性别鉴定的试剂盒的结构示意图二；

图3为本实用新型实施例所述的一种用于鸽性别鉴定的试剂盒的使用状态参考图。

图中，

1、盒体；2、盒盖；3、储存盒；4、用具盒；5、衬垫；6、通孔；7、第一试剂瓶；8、第二试剂瓶；9、第三试剂瓶；10、第四试剂瓶；11、海绵垫；12、比色卡；13、标签；14、透明观察窗；15、储物槽。

具体实施方式

下面通过具体的实施例并结合附图对本实用新型做进一步的详细描述。

实施例1，如图1-2所示，本实用新型实施例所述的一种用于鸽性别鉴定的试剂盒，包括盒体1和盒盖2，盒体与盒盖铰接，盒体包括储存盒3和用具盒4，用具盒位于储存盒下方，储存盒内固定衬垫5，衬垫上开有四个通孔6，四个通孔内分别放置用于盛放上下游引物混合物HXp的第一试剂瓶7、用于盛放扩增缓冲液的第二试剂瓶8、用于盛放DNA marker的第三试剂瓶9、以及用于盛放琼脂糖粉的第四试剂瓶10；盒盖内放置海绵垫11。

本实用新型提供的试剂盒结构简单，可以使鸽性别鉴定实验的操作更加方便，盒体内放置有CHD基因 PCR 扩增的上下游引物混合物 HXp、扩增缓冲液、DNA marker 和琼脂糖粉，试剂齐全，可同时储存在试剂盒内，与现有的检测试剂盒相比，本实用新型根据同时存在于鸽性染色体 W 染色体和 Z 染色体上的 CHD1 基因序列合理设计的 PCR 引物，检测时，直接利用 PCR-琼脂糖电泳技术和基因分型方法，确定个体鸽的性别，具有操作简单方便、鉴别快速、结果准确和价格低廉等优点，避免了采用传统方法耗时、耗力和易出错的缺点。

实施例2，如图1-3所示，本实用新型实施例所述的一种用于鸽性别鉴定的试剂盒，包括盒体和盒盖，盒体与盒盖铰接，盒体包括储存盒和用具盒，用具盒位于储存盒下方，储存盒内固定衬垫，衬垫上开有四个通孔，四个通孔内分别放置用于盛放上下游引物混合物HXp的第一试剂瓶、用于盛放扩增缓冲液的第二试剂瓶、用于盛放DNA marker的第三试剂瓶、以及用于盛放琼脂糖粉的第四试剂瓶；盒盖内放置海绵垫。

上述技术方案中，衬垫上放置比色卡12。本技术方案中，比色卡可用于对试剂颜色进行比对，无需在实验时再次选择比色卡，使用方便，操作简单。上述技术方案中，衬垫上与通孔对应的位置上贴有标签13。本技术方案中，在衬垫上贴上标签，可以很方便的辨别试剂，防止弄混试剂，保证了试验的正常检测，使用方便，操作简单。上述技术方案中，储存盒的前侧安装透明观察窗14。透明观察窗用于观察试剂瓶内的试剂量和颜色，使用方便，操作简单。

优选的，用具盒与盒体通过滑道连接，且用具盒内放置试验用具。用具盒可以通过滑道从盒体内抽出，类似抽屉的结构，这样可以根据使用情况，选择所需的实验用具，使用方便，实验完成后，将实验用具清洗后可放置在用具盒内进行储存，方便下次对鸽性别检测的进行，使用方便，污染性小，储存方便，便于携带，防止用具丢失。

优选的，盒体外侧连接可插入记录本的储物槽15。本技术方案中，储藏槽可以防止清洁布或记录本，记录本用于记录放置在盒体内试剂瓶的种类、温度、以及时间等试验参数，操作简单，使用方便，减少了实验误差，增加了试验的便利性，提高了检测人员的工作效率，使盒体做到了统一储存，通过记录本便可直接了解盒内的用品数量以及瓶内试剂的种类，无需打开盒体一一确认，减少了盒内试剂与外界空气接触的时间，操作简单，使用方便，减少了实验误差。

本实用新型提供的试剂盒内的试剂瓶中，第一试剂瓶盛放的上下游引物混合物HXp为CHD基因 PCR 扩增的上下游引物混合物HXp，其中 HXp 详细信息如下：

引物混合物 HXp 表示用于 CHD1 基因 PCR 扩增的上下游引物混合物，引物信息如下：

上游引物  5'- TGCAGAAGCAATATTACAAGT- 3'，

下游引物  5'- AATTCATTATCATCTGGTGG - 3'。

鸽性别鉴定的检验原理：禽类的性染色体有两种——Z 染色体和 W 染色体，母禽基因型为 ZW 型，公禽基因型为 ZZ 型，Z 染色体和 W 染色体在大小上相差悬殊，因此位于 Z 染色体上的大部分基因在 W 染色体上并不存在，但是目前也发现有少数基因在禽类 Z 和 W 染色体上均存在，这些基因的某些内含子在 W 染色体和 Z 染色体中的序列大小不同，这就使得我们能够通过设计保守性引物扩增该区域序列，所得产物经过琼脂糖凝胶电泳，最后根据电泳形成的 PCR 产物的条带差异来判断个体的性别。

具体检测时，使用该试剂盒内的PCR 引物对鸽性别鉴定的方法为：以待测鸽的总 DNA 为模板，采用鸽性别鉴定用 PCR 引物进行 PCR 扩增，然后采用琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 扩增产物，当扩增产物只出现 472bp 的特异性扩增条带时判定为雄鸽（ZZ 型，一条大的 PCR 产物片段），当扩增产物同时出现 472 bp 的特异性扩增条带和 324 bp 的特异性扩增条带时判定为雌鸽（ZW 型，一大一小的两条 PCR 产物片段）。其中，条带的大小以及序列是通过将扩增产物送由测序公司测序得到的。

在具体使用时，本实用新型提供的试剂盒使用方法：

1、PCR 扩增目的片段

1）PCR 扩增反应体系准备：在 200 μL 的 PCR 薄壁管中，加入2 μL的 DNA（约50 ng）作为模板、12.5 μL的 扩增缓冲液、2 μL的引物 HXp（10 μmol/L）和 8.5 μL的水，PCR的反应体系为25 μL，充分混匀后短暂离心。

2）PCR 扩增反应程序设置：在 Eppendorf （艾本德）PCR 仪上设置PCR的反应条件为：在94 ℃的温度环境下，4 min后预变性，94 ℃ 变性 30 s、51 ℃ 复性 30 s、72 ℃ 延伸 30 s共 35 个循环，最后 72 ℃ 延伸 6 min并 4 ℃ 保存备用。程序设置完毕后，将 PCR 反应管放入 PCR 仪进行反应扩增。 

2、鉴定性别

将 2% 琼脂糖凝胶置于 1 × TBE 电泳液中，取 4-10 μL 反应产物点样于凝胶孔中。室温下，合适的电压（按照电泳槽宽度 × 6-8 V）电泳 30 分钟，根据 PCR 扩增产物电泳图谱鉴定性别。

使用该试剂盒进行如下试验：

运用本试剂盒对已知性别的 8 只石岐鸽、8 只银羽王鸽进行性别分子鉴定。

1、样品

采集 8 只石岐鸽和 8 只银羽王鸽的羽毛，应用传统的苯酚/氯仿法提取羽毛根部的 DNA，并将 DNA 浓度稀释到 50 ng/μL。

2、PCR 扩增反应及结果

1）PCR 扩增反应体系准备：在 200 μL 的 PCR 薄壁管中，加入 2 μL 模板 DNA（约50 ng ）、12.5 μL 扩增缓冲液、2 μL 引物 HYp（10 μmol/L）、和 8.5 μL 水，PCR 的反应体系为 25 μL，充分混匀后短暂离心。

2）PCR 扩增反应程序设置：在 Eppendorf PCR 仪上设置 PCR 的反应条件为：94 ℃ 预变性 4 min 后，94 ℃ 变性 30 s、51 ℃ 复性 30 s、72 ℃ 延伸 30 s 共 35 个循环，最后 72 ℃ 延伸 10 min 并 4 ℃ 保存备用。程序设置完毕后，将 PCR 反应管放入 PCR 仪进行反应扩增。

3、PCR 扩增产物的琼脂糖电泳鉴定：将 2% 琼脂糖凝胶置于1 × TBE 电泳液中。取 4-10 μL 反应产物点样于凝胶孔中。室温下，合适的电压（按照电泳槽宽度 × 6-8 V）电泳 1 小时。根据 PCR 扩增产物电泳图谱鉴定性别。

根据电泳图谱，鉴定基因型。在对应 DNA marker 500 bp 略下处出现的 PCR产物为 Z 带 472 bp，在对应 DNA marker 250 bp 略上处出现的 PCR 产物为 W 带 324 bp。因此，只在对应 DNA marker 500 bp 略下处出现一条 PCR 产物的的雄性 ZZ 型；在对应 DNA marker 250 bp 略上处出现两条 PCR 产物的雌性 ZW 型，样品个体分子性别鉴定结果分别为：石岐鸽的性别分别是公、母、公、母、公、母、公、母；银羽王鸽的性别分别是母、公、母、母、母、公、母、公。通过分子鉴定的性别结果与通过解剖观察性腺的结果没有差异。

以上所述仅为本实用新型的优选实施例而已，并不用于限制本实用新型，对于本领域的技术人员来说，本实用新型可以有各种更改和变化。凡在本实用新型的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种用于鸽性别鉴定的试剂盒，包括盒体（1）和盒盖（2），盒体与盒盖铰接，其特征在于：盒体包括储存盒（3）和用具盒（4），用具盒位于储存盒下方，储存盒内固定衬垫（5），衬垫上开有四个通孔（6），四个通孔内分别放置用于盛放上下游引物混合物HXp的第一试剂瓶（7）、用于盛放扩增缓冲液的第二试剂瓶（8）、用于盛放DNA marker的第三试剂瓶（9）、以及用于盛放琼脂糖粉的第四试剂瓶（10）；盒盖内放置海绵垫（11）。

2.根据权利要求1所述的用于鸽性别鉴定的试剂盒，其特征在于：衬垫上放置比色卡（12）。

3.根据权利要求1或2所述的用于鸽性别鉴定的试剂盒，其特征在于：衬垫上与通孔对应的位置上贴有标签（13）。

4.根据权利要求1所述的用于鸽性别鉴定的试剂盒，其特征在于：储存盒的前侧安装透明观察窗（14）。

5.根据权利要求1所述的用于鸽性别鉴定的试剂盒，其特征在于：用具盒与盒体通过滑道连接，且用具盒内放置试验用具。

6.根据权利要求1所述的用于鸽性别鉴定的试剂盒，其特征在于：盒体外侧连接可插入记录本的储物槽（15）。