CN1994398A - 治疗红细胞增多症的中药制剂及其制备方法和质控方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种治疗红细胞增多症的中药制剂及其制备方法和质量控制方法，按照重量组份计算：它由红景天400－600、枸杞子150－300、沙棘鲜浆30－150和适量辅料制备而成。与现有技术相比，本发明所提供的制剂对红细胞增多症的疗效好，无毒副作用，安全性强，携带、服用方便，成本低；本发明质量控制方法精密度高，稳定性好，重现性好，回收率高，提高了该制剂的质量控制标准，可有效保证产品质量，从而确保其临床疗效。
Description
技术领域：本发明涉及一种治疗红细胞增多症的中药制剂及其制备方法和质量控制方法，属于中药制药技术领域。
背景技术：随着生活节奏的加快，现代生活水平的提高，患有红细胞增多症的人越来越多。红细胞增多症是指红细胞数目、血红蛋白、红细胞压积和血液总容量显著地超过正常水平，可分为原发性与继发性两大类。其中继发性红细胞增多症主要是由于组织缺氧所引起的，给患者的正常生活带来极大的影响。因此，提供一种疗效好，无毒副作用，安全性强的治疗红细胞增多症的药物显得十分重要。
引起继发性红细胞增多症的具体原因有如下几种：1.生理性红细胞生成素适度增加，如动脉低氧血症(高海拔、慢性肺部疾病、心血管分流、过度肥胖、体位性低氧血症)、血红蛋白释放异常(遗传性高氧亲和性血红蛋白、先天性红细胞2，3-DPG降低、吸烟者红细胞增多症)、组织代谢受到干扰(钴中毒)等情况；2.生理性红细胞生成素产生失控，如某些肿瘤疾病、非肿瘤性肾脏疾病(囊肿、肾积水、Bartter综合征、肾移植后)、无明确解剖学病变的自发性红细胞生成素恒定增加(家族性)、红细胞生成素基础水平升高静脉放血后进一步增加(家族性)等情况；3.服用雄性激素或某些其他皮质类固醇，或体内这些激素生成过多。继发性红细胞增多症在中医理论上属“血证”范畴，因“气阴不足、瘀血阻滞”引起，临床上常表现有头晕、心悸、胸闷、气喘、乏力、头痛等症状。
发明内容：
本发明的目的在于：提供一种治疗红细胞增多症的中药制剂；本发明的另一个目的是提供这种治疗红细胞增多症的中药制剂的制备方法；本发明的第三个目的在于提供这种治疗红细胞增多症的中药制剂的质量控制方法。
本发明所述制剂为口服制剂，具体包括片剂、胶囊剂和颗粒剂。
本发明是这样构成的：按照重量组份计算：它由红景天400-600、枸杞子150-300、沙棘鲜浆30-150和适量辅料制备而成。
具体的说，它由红景天500g、枸杞子250g、沙棘鲜浆71.5g及适量辅料制备成片剂或颗粒剂。
本发明所述治疗红细胞增多症的中药制剂的制备方法为：红景天加8-12倍量60-85％的乙醇回流提取1-5次，合并提取液，回收乙醇后备用；枸杞子加10-12倍量水煎煮1-5次，合并煎液，滤过，滤液备用；沙棘鲜浆与上述醇提液和水煎液混合，浓缩，减压干燥，粉碎，加入辅料，混匀，按照常规方法制成不同的制剂。
准确地说，红景天加8倍量70％乙醇回流提取二次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，回收乙醇后备用；枸杞子加10倍量水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液备用；沙棘鲜浆与上述醇提液和水煎液混合，浓缩至50℃相对密度为1.30～1.35的清膏，减压干燥，粉碎成细粉，加入辅料，混匀，按照常规方法制成不同的制剂。
所述片剂这样制备：红景天加8倍量70％乙醇回流提取二次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，回收乙醇后备用；枸杞子加10倍量水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液备用；沙棘鲜浆与上述醇提液和水煎液混合，浓缩至50℃相对密度为1.30～1.35的清膏，减压干燥，粉碎成细粉，加入淀粉适量，混匀，以无水乙醇制粒、干燥、压制成片，包薄膜衣，即得。
本发明制剂由中药红景天、枸杞子和沙棘鲜浆三味药经加工研制而成。三味药配伍具有益气养阴、活血化痰的功能，用于气阴不足，瘀血阻滞所引起的头晕，头痛，心悸，气喘，乏力，缺氧引起的红细胞增多症等见上述证候者。方中红景天为组方君药，性凉主降，味辛发散，微苦涩，有破坚、消积、活血、养血、破血、改善血液循环的作用；现代药理研究证明红景天含有2种不同的超氧化物歧化酶(SOD)同功酶，具有较强的清除氧自由基的能力，具有明确、肯定的抗高原缺氧作用。方中枸杞子有滋补的功效，具有一定的降血脂、血糖作用。沙棘鲜浆有活血化瘀的功效；含有醋柳酮，具有降低血粘度的作用，可改善血液流变学，促进心、脑血液循环。诸药合用，共奏益气养阴、活血化痰之效。是一种无毒副作用，安全性强的药物。
本发明治疗红细胞增多症的片剂、胶囊剂和颗粒剂的质量控制方法为：所述质量控制方法主要包括性状、鉴别、检查以及含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别是对制剂中枸杞子的薄层色谱鉴别；含量测定是对制剂中红景天所含红景天苷的含量测定。
枸杞子的鉴别方法是以枸杞子对照药材为对照，以乙酸乙酯∶三氯甲烷∶甲酸＝1-10∶0.5-10∶0.5-5为展开剂的薄层色谱法；红景天中红景天苷的含量测定方法是以红景天苷对照品为对照，以甲醇或乙睛∶水＝1-9∶9-1为流动相的高效液相色谱法。
具体的鉴别方法为：
取片剂1-6g、或胶囊剂的内容物1-6g、或颗粒剂5-20g，研细，加水，超声处理使溶解，滤过，加乙酸乙酯振摇提取，提取液浓缩，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.1-1g，加水煮沸，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶三氯甲烷∶甲酸＝1-10∶0.5-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
更具体的鉴别方法为：
取片剂1-6g、或胶囊剂的内容物1-6g、或颗粒剂5-20g，研细，加水10-200ml，超声1-20分钟使溶解，滤过，加乙酸乙酯5-50ml振摇提取，提取液浓缩至0.5-3ml，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.1-1g，加水10-200ml，煮沸5-20分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-25μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶三氯甲烷∶甲酸＝1-10∶0.5-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
红景天苷的含量测定方法为：
照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为C18或C4或C8柱；以甲醇或乙睛∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长为200-500nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：精密称取红景天苷对照品适量，加流动相溶解，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，密塞，称定重量，超声处理10-100分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，蒸干；残渣加流动相使溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即得；
本制剂中，片剂含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于3mg/g；胶囊剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于4mg/g；颗粒剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于0.3mg/g。
更具体的含量测定方法为：
照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为C18或C4或C8柱；以甲醇或乙睛∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长为200-500nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：精密称取红景天苷对照品适量，加流动相溶解，制成每1ml含红景天苷0.05-1mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂，研细，片剂取0.1-1g、胶囊剂取内容物0.1-1g、颗粒剂取1-10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇5-50ml，密塞，称定重量，超声处理10-100分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，蒸干；残渣加流动相使溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5-25μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；
本制剂中，片剂含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于3mg/g；胶囊剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于4mg/g；颗粒剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于0.3mg/g。
本发明所述质量控制方法包括：
性状：对于片剂：产品为薄膜衣片，除去包衣后显浅褐色至褐色；气微，味淡；
对于胶囊剂：其内容物为浅褐色的粉末；气微，味淡；
对于颗粒剂：产品为浅褐色至褐色的颗粒；气微，味淡；
鉴别：取片剂1-6g、或胶囊剂的内容物1-6g、或颗粒剂5-20g，研细，加水，超声处理使溶解，滤过，加乙酸乙酯振摇提取，提取液浓缩，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.1-1g，加水煮沸，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶三氯甲烷∶甲酸＝1-10∶0.5-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
检查：应符合中国药典片剂、胶囊剂或颗粒剂项下有关的各项规定；
含量测定：红景天苷照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为C18或C4或C8柱；以甲醇或乙睛∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长为200-500nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：精密称取红景天苷对照品适量，加流动相溶解，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，密塞，称定重量，超声处理10-100分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，蒸干；残渣加流动相使溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即得；
本制剂中，片剂含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于3mg/g；胶囊剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于4mg/g；颗粒剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于0.3mg/g。
经研究发现，采用以下质量控制方法将更容易控制这种治疗红细胞增多症的中药制剂的质量，更利于保证该制剂的临床疗效。故所述质量控制方法也可包括：
性状：对于片剂：产品为薄膜衣片，除去包衣后显浅褐色至褐色；气微，味淡；
对于胶囊剂：其内容物为浅褐色的粉末；气微，味淡；
对于颗粒剂：产品为浅褐色至褐色的颗粒；气微，味淡；
鉴别：取片剂1-6g、或胶囊剂的内容物1-6g、或颗粒剂5-20g，研细，加水10-200ml，超声1-20分钟使溶解，滤过，加乙酸乙酯5-50ml振摇提取，提取液浓缩至0.5-3ml，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.1-1g，加水10-200ml，煮沸5-20分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-25μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶三氯甲烷∶甲酸＝1-10∶0.5-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
检查：应符合中国药典片剂、胶囊剂或颗粒剂项下有关的各项规定；
含量测定：红景天苷照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为C18或C4或C8柱；以甲醇或乙睛∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长为200-500nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：精密称取红景天苷对照品适量，加流动相溶解，制成每1ml含红景天苷0.05-1mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂，研细，片剂取0.1-1g、胶囊剂取内容物0.1-1g、颗粒剂取1-10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇5-50ml，密塞，称定重量，超声处理10-100分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，蒸干；残渣加流动相使溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5-25μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；
本制剂中，片剂含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于3mg/g；胶囊剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于4mg/g；颗粒剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于0.3mg/g。
经研究发现，以下质量控制方法为最优选择，更容易控制本发明治疗红细胞增多症的中药制剂的质量，保证其临床疗效。故所述质量控制方法还可以包括：
性状：对于片剂：产品为薄膜衣片，除去包衣后显浅褐色至褐色；气微，味淡；
对于胶囊剂：其内容物为浅褐色的粉末；气微，味淡；
对于颗粒剂：产品为浅褐色至褐色的颗粒；气微，味淡；
鉴别：取片剂3.6g、或胶囊剂的内容物2.5g、或颗粒剂10g，研细，加水50ml，超声5分钟使溶解，滤过，加乙酸乙酯20ml振摇提取，提取液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.5g，加水50ml，煮沸10分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶三氯甲烷∶甲酸＝3∶2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
检查：应符合中国药典片剂、胶囊剂或颗粒剂项下有关的各项规定；
含量测定：红景天苷照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水＝15∶85为流动相；检测波长为223nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：精密称取红景天苷对照品适量，加流动相溶解，制成每1ml含红景天苷0.1mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂，研细，片剂取0.6g、胶囊剂取内容物0.15g、颗粒剂取3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理45分钟，功率250W、频率33kHz，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，蒸干；残渣加流动相使溶解，转移至10ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；
本制剂中，片剂含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于3mg/g；胶囊剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于4mg/g；颗粒剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于0.3mg/g。
申请人对本发明制剂的制备工艺和质量控制方法进行了相关的试验研究，具体如下：
实验例1：提取工艺考察
1、申请人在产品研究过程中发现，本发明制剂的加水量影响到药物的出膏率和有效成分的提取率，加水量少时提取物的出膏率低，有效成分的提取率也低，加水量多时提取物的出膏率较高，均会影响药品的质量。故本发明对制剂的加水量进行考察：
(1)红景天醇提时加醇量考察
称取红景天100g，共称取3份，分别加70％乙醇6、8、10、12倍量回流提取二次，第一次3小时，第二次2小时，滤过，滤液回收乙醇、浓缩、减压干燥、得到红景天干膏。测定干膏中红景天苷的含量：
| 加醇量(倍) | 出膏量(g) | 红景天苷总量(mg/份) |
| 6 | 18.4 | 295.22 |
| 8 | 20.6 | 337.52 |
| 10 | 21.8 | 338.26 |
| 12 | 22.5 | 339.12 |
结果表明，加醇8倍量与10倍量及12倍量提取比较，无明显差异，从生产实际考虑，最佳加醇量为8倍量。
(2)枸杞子水煎加水量的考察：称取枸杞子100g，共称3份样品，分别加水8、10、12倍量煎煮二次，每次2小时，滤过，合并滤液，加水，均稀释至2500ml，搅拌均匀，各取100ml浓缩，减压干燥，计算出膏量，结果见下表。
| 加水量(倍) | 出膏量(g) |
| 8 | 26.6 |
| 10 | 31.8 |
| 12 | 32.0 |
结果表明，加水10倍量与12倍量出膏总量相差不大，从生产实际考虑，确定加水量为10倍量。
2、干燥方法的研究：称取红景天1000g、枸杞子500g、沙棘鲜浆143g，按本发明所述方法提取、混合，浓缩至相对密度为1.05～1.10(50℃)的清膏，分成两组，每组平均分成4份，其中2份浓缩至1.25～1.30(50℃)减压干燥，另2份分别加入24g淀粉，加热混匀，喷雾干燥或减压干燥，分别测定干膏得量和红景天苷的含量。
| 干燥方法 | 试验号 | 干膏量(g) | 红景天苷总量(mg) | 平均红景天苷总量(mg) |
| 喷雾干燥 | 1 | 77.6 | 767 | 770 |
| 2 | 79.1 | 774 | ||
| 减压干燥 | 1 | 89.8 | 858 | 852 |
| 2 | 90.4 | 845 |
注：喷雾干燥的干膏量已减去加入淀粉量。
结果表明，减压干燥得到的干膏量及红景天苷含量均好于喷雾干燥，故确定干燥方法为减压干燥，条件为：压力-0.1mpa，温度：60℃，干燥8小时。
3、稠膏浓缩密度考察
将沙棘鲜浆与上述醇提液和水煎液的混合液浓缩成稠膏，当相对密度大于1.35(50℃)时，稠膏流动性差，不便操作，故将其浓缩至相对密度1.30～1.35(50℃)时，备用。
实验例2：红景天含量测定方法研究：
1、仪器与试药
1.1仪器
Agilent 1100高效液相色谱仪(在线脱气机、四元泵、自动进样器、柱温箱、VWD检测器)；MILLIPORE Simplicity超纯水器；超声波清洗器(型号：SK5200H，功率350W，频率33kHz，上海科导超声仪器有限公司)。
1.2试剂
甲醇(色谱纯，Fisher，批号：031123)。
2、系统适用性试验
2.1检测波长的选择：检测波长为223nm。
2.2流动相的考察
| 序号 | 流动相 | 结果 |
| 1 | 乙腈-水-磷酸(7∶93∶0.2) | 与杂质峰未完全分离 |
| 2 | 乙腈-水-磷酸(10∶90∶0.5) | 与杂质峰未完全分离 |
| 3 | 甲醇-水(15∶85) | 与杂质峰完全分离 |
| 4 | 甲醇-水(20∶80) | 与杂质峰分离 |
| 5 | 乙睛-水(15∶85) | 与杂质峰完全分离 |
| 6 | 甲醇-水(1∶9) | 与杂质峰分离 |
| 7 | 甲醇-水(9∶1) | 与杂质峰分离 |
| 8 | 乙睛-水(1∶9) | 与杂质峰分离 |
| 9 | 乙睛-水(9∶1) | 与杂质峰分离 |
结果：以甲醇或乙睛∶水＝1-9∶9-1为流动相；阴性样品色谱图在红景天峰位置处无假阳性峰，红景天峰和相近的杂质峰分离完全(分离度＞1.5)，最佳流动相为：甲醇∶水＝15∶85。
2.3色谱柱的考察：在上述流动相条件下，考察以下色谱柱：①Kromasil C18色谱柱(5μm，4.6×250mm，北京分析仪器厂，批号：22198)；②Hypersil BDS C18色谱柱(5μm，4.6×250mm，ThermoQuest，SN：3-18541)；③ZORBAX SB C18(5μm，4.6×250mm，Agilent，SN：USCL014736)。试验结果表明：以上三种色谱柱红景天苷峰均可达到基线分离，且保留时间较合适，选择色谱柱③进行试验。
3、供试品溶液制备方法的考察
3.1提取方法的确定：取本制剂粉末，称取供试品2份，每份0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇25ml，称定重量，分别回流提取1小时和超声30分钟，取出，放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，蒸干。残渣用流动相溶解，转移至10ml容量瓶中并定容至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，即得。高效液相法测定样品中红景天苷的含量，结果见下表。
不同提取方法提取结果
| 提取方式 | 取样量(g) | 红景天苷含量(mg/g) |
| 超声30分钟 | 0.6063 | 4.591 |
| 回流60分钟 | 0.6076 | 4.422 |
由结果可知，超声提取对红景天苷的提取率较高，因此采用超声提取。
3.2溶剂用量的考察
称取供试品3份，每份0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇15、25、50ml，称定重量，各超声处理30分钟，取出，放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，分别精密量取续滤液6ml、10ml、20ml，蒸干。残渣用流动相溶解，转移至10ml容量瓶中并定容至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，即得。高效液相法测定样品中红景天苷的含量，结果见下表。
溶剂用量考察结果
| 溶剂用量(ml) | 取样量(g) | 红景天苷含量(mg/g) |
| 15 | 0.6031 | 3.696 |
| 25 | 0.6147 | 4.600 |
| 50 | 0.6048 | 4.593 |
试验结果表明溶剂用量达到25ml时，红景天苷即可提取完全。
3.3超声时间的选择
称取供试品3份，每份0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇25ml，称定重量，分别超声处理30分钟、45分钟、60分钟，取出，放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，各精密量取续滤10ml，蒸干。残渣用流动相溶解，转移至10ml容量瓶中并定容至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，即得。高效液相法测定样品中红景天苷的含量，结果见下表。
超声时间考察结果(n＝2)
| 提取时间(min) | 取样量(g) | 红景天苷含量(mg/g) |
| 10 | 0.6015 | 4.125 |
| 30 | 0.6012 | 4.578 |
| 45 | 0.6029 | 4.690 |
| 60 | 0.5980 | 4.693 |
| 100 | 0.6002 | 4.712 |
由结果可知，超声提取45分钟最佳。
4、对照品溶液的制备
精密称取红景天苷对照品适量，加流动相溶解，制成每1ml含红景天苷0.1mg的溶液，即得。
5、空白试验
取阴性样品(缺红景天)，按供试品溶液制备方法制得空白溶液，精密量取空白溶液10μl，注入液相色谱仪，记录液相图谱。结果表明，与红景天苷对照品色谱峰相应的位置上，没有出现色谱峰，说明阴性无干扰。
6、线性关系考察
精密称取红景天苷对照品13.25mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取上述溶液各10μl注入高效液相色谱仪，记录峰面积。以进样量(靏)为横坐标(X)，峰面积积分值为纵坐标(Y)，进行线性回归，红景天苷的回归方程为：Y＝1530.0138X+25.2889，r＝0.9999。拟合为过原点的回归方程为：Y＝1552.0360X，r＝0.9998，将1.590μg代入以上两个回归方程，峰面积分别为2458.011、2467.737，相对偏差为0.20％，因此采用一点法计算含量。
红景天苷含量测定线性关系考察结果
| 序号 | 进样μg | 峰面积 |
| 1 | 0.265 | 428.838 |
| 2 | 0.530 | 833.720 |
| 3 | 0.795 | 1238.602 |
| 4 | 1.060 | 1663.484 |
| 5 | 1.325 | 2048.367 |
| 6 | 1.590 | 2453.249 |
结果表明：红景天苷含量在0.265～1.590μg范围内，峰面积与进样量有良好的线性关系。
7、精密度试验
精密吸取红景天苷浓度为0.106mg/ml的对照品溶液10μl，注入HPLC仪，连续进样6针，记录红景天苷峰面积A值。
| 序号 | 峰面积 | 平均 | RSD％ |
| 1 | 1615.217 | 1610.556 | 0.15 |
| 2 | 1609.121 | ||
| 3 | 1611.154 | ||
| 4 | 1609.872 | ||
| 5 | 1609.463 | ||
| 6 | 1608.510 |
结果表明，其精密度良好。
8、稳定性试验
精密吸取供试品溶液各10μl，分别在0、2、4、6、8h进样测定，记录红景天苷的峰面积A值。
| 时间(h) | 峰面积 | 平均 | RSD％ |
| 0 | 1734.376 | 1739.465 | 0.22 |
| 2 | 1737.756 | ||
| 4 | 1739.244 | ||
| 6 | 1741.874 | ||
| 8 | 1744.073 |
结果表明，供试品溶液在8h内稳定。
9、重复性试验
取同一批号的本制剂粉末(批号：041012)0.6g，精密称定，共6份，依上述方法测定本制剂中红景天苷的含量。
| 序号 | 取样量(g) | 平均面积 | 含量(mg/g) | 平均含量(mg/g) | RSD％ |
| 1 | 0.6038 | 1748.152 | 4.674 | 4.699 | 0.79 |
| 2 | 0.6058 | 1750.952 | 4.666 | ||
| 3 | 0.6023 | 1750.758 | 4.693 | ||
| 4 | 0.5927 | 1749.686 | 4.766 | ||
| 5 | 0.6004 | 1754.033 | 4.717 | ||
| 6 | 0.6042 | 1750.918 | 4.679 |
结果表明，本方法重复性试验符合要求。
10、回收率试验
称取同一批次样品(批号：041012)6份，每份0.3g，精密称定，再分别精密添加一定量的红景天苷对照品，按供试品处理方法提取后测定，按以下公式计算加样回收率，结果见下表。
加样回收率试验结果
| 序号 | 取样量(g) | 样中含量(mg) | 加对照量(mg) | 测得量(mg) | 回收率(％) | 平均回收率(％) | RSD(％) |
| 1 | 0.3014 | 1.416 | 1.428 | 2.836 | 99.39 | 100.21 | 1.30 |
| 2 | 0.3023 | 1.421 | 1.428 | 2.869 | 101.45 | ||
| 3 | 0.3027 | 1.422 | 1.428 | 2.868 | 101.26 | ||
| 4 | 0.3103 | 1.458 | 1.428 | 2.865 | 98.50 | ||
| 5 | 0.3096 | 1.455 | 1.428 | 2.872 | 99.22 | ||
| 6 | 0.3077 | 1.446 | 1.428 | 2.895 | 101.46 |
结果表明，本方法加样回收率符合规定。
实验例3：枸杞子薄层鉴别研究
供试品溶液制备方法一：取本制剂，研细，加水50ml，超声5分钟使溶解，滤过，加乙酸乙酯20ml振摇提取，提取液浓缩，作为供试品溶液。
供试品溶液制备方法二：取本制剂，研细，加水50ml，摇匀，滤过，加乙酸乙酯20ml振摇提取，提取液浓缩，作为供试品溶液。
展开剂选择：分别以乙酸乙酯、三氯甲烷、甲酸不同比例的混合溶液；以氯仿、乙酸乙酯、甲醇不同比例的混合溶液为展开剂。
对照品溶液的制备：取枸杞子对照药材，加水煮沸10分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材液。
阴性对照溶液的制备：取缺枸杞子阴性样品，按供试品溶液制备方法分别制备阴性对照溶液。
分别吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，分别以不同的展开剂展开，取出，晾干，紫外光灯(365nm)下检视，结果如下：
| 供试品制备方法 | 展开剂 | 结果 |
| 一 | 乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸(3∶2∶1) | 斑点清晰，系统重现性好 |
| 一 | 氯仿-乙酸乙酯-甲醇(5∶4∶20) | 无对应斑点 |
| 一 | 乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸(10∶10∶5) | 斑点较清晰 |
| 一 | 乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸(1∶0.5∶0.5) | 斑点较清晰 |
| 一 | 乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸(10∶0.5∶0.5) | 斑点较清晰 |
| 一 | 乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸(1∶10∶5) | 斑点较清晰 |
| 二 | 乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸(3∶2∶1) | 斑点清晰 |
| 二 | 氯仿-乙酸乙酯-甲醇(5∶4∶20) | 无对应斑点 |
| 二 | 乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸(10∶10∶5) | 样品斑点模糊 |
| 二 | 乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸(1∶0.5∶0.5) | 样品斑点模糊 |
结果表明，采用方法一制备供试品溶液，以乙酸乙酯∶三氯甲烷∶甲酸＝1-10∶0.5-10∶0.5-5为展开剂对本制剂中枸杞子进行薄层鉴别，结果薄层色谱斑点清晰，分离效果好，重现性好，阴性对照无干扰。最佳展开剂为乙酸乙酯∶三氯甲烷∶甲酸＝3∶2∶1。
实验例5：沙棘鲜浆薄层鉴别研究
供试品溶液制备方法：取本制剂，研细，置具塞锥形瓶中，加乙醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过。滤液加盐酸7ml，在75℃水浴中加热水解1小时，立即冷却，将水解液浓缩至约5ml，加水25ml，用乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
展开剂选择：以甲苯、乙酸乙酯、甲酸不同比例的混合溶液为展开剂。
对照品溶液的制备：取异鼠李素、槲皮素对照品加甲醇制成每1ml含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。
阴性对照溶液的制备：取缺沙棘鲜浆阴性样品，按供试品溶液制备方法分别制备阴性对照溶液。
分别吸取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各2μl，分别点于同一含3％醋酸钠溶液制备的硅胶G薄层板上，分别以不同的展开剂展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光(365nm)下检视，结果如下：
| 展开剂 | 结果 |
| 甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1) | 无相同颜色的荧光斑点 |
| 甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶3∶1) | 无相同颜色的荧光斑点 |
| 甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶4∶2) | 无相同颜色的荧光斑点 |
试验表明：供试品色谱中在与异鼠李素、槲皮素对照品色谱相应的位置未显相同颜色的荧光斑点，故本鉴别项目未列入本发明质量标准中。
与现有技术相比，本发明所提供的制剂对红细胞增多症的疗效好，无毒副作用，安全性强，携带、服用方便，成本低；本发明质量控制方法精密度高，稳定性好，重现性好，回收率高，提高了该制剂的质量控制标准，可有效保证产品质量，从而确保其临床疗效。
具体实施方式：
本发明的实施例1：红景天500g、枸杞子250g、沙棘鲜浆71.5g
红景天加8倍量70％乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，回收乙醇后备用；枸杞子加10倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液备用；沙棘鲜浆与上述醇提液和水煎液混合，浓缩至相对密度为1.30～1.35(50℃)的清膏，减压干燥(压力-0.1mpa，温度60℃)8小时，粉碎成细粉，加入淀粉适量，混匀，以无水乙醇制粒、干燥、压制成1000片，包薄膜衣，即得片剂。
本发明的实施例2：红景天600g、枸杞子150g、沙棘鲜浆150g
红景天加10倍量60％的乙醇回流提取4小时，提取液回收乙醇后备用；枸杞子加12倍量水煎煮3小时，煎液滤过，滤液备用；沙棘鲜浆与上述醇提液和水煎液混合，浓缩至相对密度为1.30～1.35(50℃)的清膏，减压干燥，粉碎成细粉，加入淀粉适量，混匀，以无水乙醇制粒、干燥、压制成1000片，包薄膜衣，即得片剂。
本发明的实施例3：红景天600g、枸杞子300g、沙棘鲜浆150g
红景天加12倍量85％的乙醇回流提取5次，合并提取液，回收乙醇后备用；枸杞子加12倍量水煎煮5次，合并煎液，滤过，滤液备用；沙棘鲜浆与上述醇提液和水煎液混合，浓缩，减压干燥，粉碎，加入糊精和木糖醇，混匀，以85％乙醇制成颗粒，85℃干燥，整粒，分装，即得颗粒剂。
本发明的实施例4：红景天400g、枸杞子150g、沙棘鲜浆30g
红景天加10倍量70％的乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，回收乙醇后备用；枸杞子加11倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液备用；沙棘鲜浆与上述醇提液和水煎液混合，浓缩至相对密度为1.05～1.10(50℃)的清膏，加入淀粉，加热混匀，喷雾干燥(70-90℃)，加入淀粉，混匀，装入胶囊，即得胶囊剂。
本发明的实施例5：本发明治疗红细胞增多症的片剂的质量控制方法包括：
性状：产品为薄膜衣片，除去包衣后显浅褐色至褐色；气微，味淡。
鉴别：取片剂3.6g，研细，加水50ml，超声5分钟使溶解，滤过，加乙酸乙酯20ml振摇提取，提取液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材0.5g，加水50ml，煮沸10分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材液。照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶三氯甲烷∶甲酸＝3∶2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
检查：应符合中国药典片剂项下有关的各项规定。
含量测定：红景天苷照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水＝15∶85为流动相；检测波长为223nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备：精密称取红景天苷对照品适量，加流动相溶解，制成每1ml含红景天苷0.1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取装量差异项下的片剂0.6g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理45分钟，功率250W、频率33kHz，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，蒸干；残渣加流动相使溶解，转移至10ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
本发明片剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于3mg/g。
本发明的实施例6：本发明治疗红细胞增多症的胶囊剂的质量控制方法包括：
性状：其内容物为浅褐色的粉末；气微，味淡。
鉴别：取胶囊剂的内容物1g，研细，加水10ml，超声1分钟使溶解，滤过，加乙酸乙酯5ml振摇提取，提取液浓缩至0.5ml，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材0.1g，加水10ml，煮沸5分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材液。照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶三氯甲烷∶甲酸＝1∶10∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
检查：应符合中国药典胶囊剂项下有关的各项规定。
含量测定：红景天苷 照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为C4柱；以乙睛∶水＝1∶9为流动相；检测波长为200nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备：精密称取红景天苷对照品适量，加流动相溶解，制成每1ml含红景天苷0.05mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取装量差异项下的胶囊剂内容物0.1g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇5ml，密塞，称定重量，超声处理10分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，蒸干；残渣加流动相使溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
本发明胶囊剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于4mg/g。
本发明的实施例7：本发明治疗红细胞增多症的颗粒剂的质量控制方法包括：
性状：产品为浅褐色至褐色的颗粒；气微，味淡。
鉴别：取颗粒剂20g，研细，加水200ml，超声20分钟使溶解，滤过，加乙酸乙酯50ml振摇提取，提取液浓缩至3ml，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材1g，加水200ml，煮沸20分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材液。照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各25μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶三氯甲烷∶甲酸＝10∶0.5∶5为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
检查：应符合中国药典颗粒剂项下有关的各项规定。
含量测定：红景天苷照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为C8柱；以甲醇∶水＝9∶1为流动相；检测波长为500nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备：精密称取红景天苷对照品适量，加流动相溶解，制成每1ml含红景天苷1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取装量差异项下的颗粒剂10g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理100分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，蒸干；残渣加流动相使溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各25μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
本发明颗粒剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于0.3mg/g。
本发明的实施例8：本发明所述质量控制方法可以包括：
性状：对于片剂：产品为薄膜衣片，除去包衣后显浅褐色至褐色；气微，味淡；
对于胶囊剂：其内容物为浅褐色的粉末；气微，味淡；
对于颗粒剂：产品为浅褐色至褐色的颗粒；气微，味淡。
鉴别：取片剂1g、或胶囊剂的内容物2.5g、或颗粒剂10g，研细，加水100ml，超声10分钟使溶解，滤过，加乙酸乙酯30ml振摇提取，提取液浓缩至2ml，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材0.8g，加水100ml，煮沸15分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材液。照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶三氯甲烷∶甲酸＝2∶2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
检查：应符合中国药典片剂、胶囊剂或颗粒剂项下有关的各项规定。
本发明的实施例9：所述质量控制方法可以包括：
性状：对于片剂：产品为薄膜衣片，除去包衣后显浅褐色至褐色；气微，味淡；
对于胶囊剂：其内容物为浅褐色的粉末；气微，味淡；
对于颗粒剂：产品为浅褐色至褐色的颗粒；气微，味淡。
检查：应符合中国药典片剂、胶囊剂或颗粒剂项下有关的各项规定。
含量测定：红景天苷照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为C18柱；以乙睛∶水80∶20为流动相；检测波长为365nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备：精密称取红景天苷对照品适量，加流动相溶解，制成每1ml含红景天苷0.5mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂，研细，片剂取1g、胶囊剂取内容物0.15g、颗粒剂取3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇35ml，密塞，称定重量，超声处理60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，蒸干；残渣加流动相使溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
本制剂中，片剂含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于3mg/g；胶囊剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于4mg/g；颗粒剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于0.3mg/g。
Claims (14)
1.一种治疗红细胞增多症的中药制剂，其特征在于：按照重量组份计算：它由红景天400-600、枸杞子150-300、沙棘鲜浆30-150和适量辅料制备而成。
2.按照权利要求1所述治疗红细胞增多症的中药制剂，其特征在于：它由红景天500g、枸杞子250g、沙棘鲜浆71.5g及适量辅料制备成片剂或颗粒剂。
3.如权利要求1或2所述治疗红细胞增多症的中药制剂的制备方法，其特征在于：红景天加8-12倍量60-85％的乙醇回流提取1-5次，合并提取液，回收乙醇后备用；枸杞子加10-12倍量水煎煮1-5次，合并煎液，滤过，滤液备用；沙棘鲜浆与上述醇提液和水煎液混合，浓缩，减压干燥，粉碎，加入辅料，混匀，按照常规方法制成不同的制剂。
4.按照权利要求3所述治疗红细胞增多症的中药制剂的制备方法，其特征在于：红景天加8倍量70％乙醇回流提取二次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，回收乙醇后备用；枸杞子加10倍量水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液备用；沙棘鲜浆与上述醇提液和水煎液混合，浓缩至50℃相对密度为1.30～1.35的清膏，减压干燥，粉碎成细粉，加入辅料，混匀，按照常规方法制成不同的制剂。
5.按照权利要求3或4所述治疗红细胞增多症的中药制剂的制备方法，其特征在于：片剂这样制备：红景天加8倍量70％乙醇回流提取二次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，回收乙醇后备用；枸杞子加10倍量水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液备用；沙棘鲜浆与上述醇提液和水煎液混合，浓缩至50℃相对密度为1.30～1.35的清膏，减压干燥，粉碎成细粉，加入淀粉适量，混匀，以无水乙醇制粒、干燥、压制成片，包薄膜衣，即得。
6.一种治疗红细胞增多症的中药制剂的质量控制方法，所述制剂包括片剂、胶囊剂和颗粒剂，其特征在于：所述质量控制方法主要包括性状、鉴别、检查以及含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别是对制剂中枸杞子的薄层色谱鉴别；含量测定是对制剂中红景天所含红景天苷的含量测定。
7.按照权利要求6所述治疗红细胞增多症的中药制剂的质量控制方法，其特征在于：枸杞子的鉴别方法是以枸杞子对照药材为对照，以乙酸乙酯∶三氯甲烷∶甲酸＝1-10∶0.5-10∶0.5-5为展开剂的薄层色谱法；红景天中红景天苷的含量测定方法是以红景天苷对照品为对照，以甲醇或乙睛∶水＝1-9∶9-1为流动相的高效液相色谱法。
8.按照权利要求6或7所述治疗红细胞增多症的中药制剂的质量控制方法，其特征在于：具体的鉴别方法为：
取片剂1-6g、或胶囊剂的内容物1-6g、或颗粒剂5-20g，研细，加水，超声处理使溶解，滤过，加乙酸乙酯振摇提取，提取液浓缩，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.1-1g，加水煮沸，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶三氯甲烷∶甲酸＝1-10∶0.5-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
9.按照权利要求8所述治疗红细胞增多症的中药制剂的质量控制方法，其特征在于：更具体的鉴别方法为：
取片剂1-6g、或胶囊剂的内容物1-6g、或颗粒剂5-20g，研细，加水10-200ml，超声1-20分钟使溶解，滤过，加乙酸乙酯5-50ml振摇提取，提取液浓缩至0.5-3ml，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.1-1g，加水10-200ml，煮沸5-20分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-25μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶三氯甲烷∶甲酸＝1-10∶0.5-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
10.按照权利要求6或7所述治疗红细胞增多症的中药制剂的质量控制方法，其特征在于：红景天苷的含量测定方法为：
照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为C18或C4或C8柱；以甲醇或乙睛∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长为200-500nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：精密称取红景天苷对照品适量，加流动相溶解，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，密塞，称定重量，超声处理10-100分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，蒸干；残渣加流动相使溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即得；
本制剂中，片剂含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于3mg/g；胶囊剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于4mg/g；颗粒剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于0.3mg/g。
11.按照权利要求10所述治疗红细胞增多症的中药制剂的质量控制方法，其特征在于：更具体的含量测定方法为：
照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为C18或C4或C8柱；以甲醇或乙睛∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长为200-500nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：精密称取红景天苷对照品适量，加流动相溶解，制成每1ml含红景天苷0.05-1mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂，研细，片剂取0.1-1g、胶囊剂取内容物0.1-1g、颗粒剂取1-10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇5-50ml，密塞，称定重量，超声处理10-100分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，蒸干；残渣加流动相使溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5-25μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；
本制剂中，片剂含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于3mg/g；胶囊剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于4mg/g；颗粒剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于0.3mg/g。
12.按照权利要求6所述治疗红细胞增多症的中药制剂的质量控制方法，其特征在于：所述质量控制方法包括：
性状：对于片剂：产品为薄膜衣片，除去包衣后显浅褐色至褐色；气微，味淡；
对于胶囊剂：其内容物为浅褐色的粉末；气微，味淡；
对于颗粒剂：产品为浅褐色至褐色的颗粒；气微，味淡；
鉴别：取片剂1-6g、或胶囊剂的内容物1-6g、或颗粒剂5-20g，研细，加水，超声处理使溶解，滤过，加乙酸乙酯振摇提取，提取液浓缩，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.1-1g，加水煮沸，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶三氯甲烷∶甲酸＝1-10∶0.5-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
检查：应符合中国药典片剂、胶囊剂或颗粒剂项下有关的各项规定；
含量测定：红景天苷照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为C18或C4或C8柱；以甲醇或乙睛∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长为200-500nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：精密称取红景天苷对照品适量，加流动相溶解，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，密塞，称定重量，超声处理10-100分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，蒸干；残渣加流动相使溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即得；
本制剂中，片剂含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于3mg/g；胶囊剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于4mg/g；颗粒剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于0.3mg/g。
13.按照权利要求6或12所述治疗红细胞增多症的中药制剂的质量控制方法，其特征在于：所述质量控制方法包括：
性状：对于片剂：产品为薄膜衣片，除去包衣后显浅褐色至褐色；气微，味淡；
对于胶囊剂：其内容物为浅褐色的粉末；气微，味淡；
对于颗粒剂：产品为浅褐色至褐色的颗粒；气微，味淡；
鉴别：取片剂1-6g、或胶囊剂的内容物1-6g、或颗粒剂5-20g，研细，加水10-200ml，超声1-20分钟使溶解，滤过，加乙酸乙酯5-50ml振摇提取，提取液浓缩至0.5-3ml，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.1-1g，加水10-200ml，煮沸5-20分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-25μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶三氯甲烷∶甲酸＝1-10∶0.5-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
检查：应符合中国药典片剂、胶囊剂或颗粒剂项下有关的各项规定；
含量测定：红景天苷照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为C18或C4或C8柱；以甲醇或乙睛∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长为200-500nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：精密称取红景天苷对照品适量，加流动相溶解，制成每1ml含红景天苷0.05-1mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂，研细，片剂取0.1-1g、胶囊剂取内容物0.1-1g、颗粒剂取1-10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇5-50ml，密塞，称定重量，超声处理10-100分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，蒸干；残渣加流动相使溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5-25μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；
本制剂中，片剂含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于3mg/g；胶囊剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于4mg/g；颗粒剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于0.3mg/g。
14.按照权利要求13所述治疗红细胞增多症的中药制剂的质量控制方法，其特征在于：所述质量控制方法包括：
性状：对于片剂：产品为薄膜衣片，除去包衣后显浅褐色至褐色；气微，味淡；
对于胶囊剂：其内容物为浅褐色的粉末；气微，味淡；
对于颗粒剂：产品为浅褐色至褐色的颗粒；气微，味淡；
鉴别：取片剂3.6g、或胶囊剂的内容物2.5g、或颗粒剂10g，研细，加水50ml，超声5分钟使溶解，滤过，加乙酸乙酯20ml振摇提取，提取液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.5g，加水50ml，煮沸10分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶三氯甲烷∶甲酸＝3∶2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
检查：应符合中国药典片剂、胶囊剂或颗粒剂项下有关的各项规定；
含量测定：红景天苷照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水＝15∶85为流动相；检测波长为223nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：精密称取红景天苷对照品适量，加流动相溶解，制成每1ml含红景天苷0.1mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂，研细，片剂取0.6g、胶囊剂取内容物0.15g、颗粒剂取3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理45分钟，功率250W、频率33kHz，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，蒸干；残渣加流动相使溶解，转移至10ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；
本制剂中，片剂含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于3mg/g；胶囊剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于4mg/g；颗粒剂中含红景天以红景天苷C14H20O7计，不得少于0.3mg/g。
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| CN103316151A (zh) * | 2013-07-08 | 2013-09-25 | 三普药业股份有限公司 | 一种红景天提取物、枸杞子提取物与沙棘鲜浆粉提取物的组合药物及其制剂、应用 |
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