CN1994372A

CN1994372A - 一种治疗肝纤维化的药物及其制备方法

Info

Publication number: CN1994372A
Application number: CN 200610000500
Authority: CN
Inventors: 屠鹏飞; 曾祥腾; 李寅增; 陈京京; 姜勇
Original assignee: HUAYI-SHENNONG MEDICINE SCIENCE-TECHNOLOGY Co Ltd BEIJING
Current assignee: Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2006-01-05
Filing date: 2006-01-05
Publication date: 2007-07-11
Anticipated expiration: 2026-01-05
Also published as: CN100571720C

Abstract

本发明公开了一种治疗肝纤维化的药物及其制备方法。该药物的原料配方包括下述重量份数比的组分：黄芪5－25份，丹参1－2份，甘草1－4。上述药物中添加的黄芪、丹参和甘草优选为各自的提取物。其制备方法包括以下步骤：1)制备黄芪提取物、丹参提取物和甘草提取物；2)将黄芪提取物、丹参提取物和甘草提取物按重量份数比5－25∶1－2∶1－4混匀，得到治疗肝纤维化药物。本发明的各组分均为常见中草药，成本低，在减轻了患者病痛的同时，还降低了患者的经济负担。此外，该药具有服用方便，生产成本低廉的优点，便于进行推广应用。本发明将在肝纤维化及相关疾病的治疗中发挥巨大作用。

Description

一种治疗肝纤维化的药物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种治疗肝纤维化的药物及其制备方法，特别是一种以中草药为原料制备的治疗肝纤维化的药物及其制备方法。

背景技术

肝纤维化是由病毒、酒精、药物、毒物等多种病因引起的慢性肝病的共同的病理状态，主要病理特征表现为肝组织的反复损伤和修复交替的过程。肝纤维化是肝硬化的早期和必经阶段，因此在对其原发疾病(如我国最常见的慢性乙型肝炎)尚无有效治疗方法的情况下，减缓或阻止肝纤维化进程是一相当重要的治疗对策，对防治肝硬化具有重要意义。近年来，随着人们对其发生机制研究的深入，已明确提出此阶段是可逆的病理过程，因此寻找有效药物，阻断、延缓甚至逆转肝纤维化的发生和发展是目前医学攻关中的热点。如能阻断、减轻乃至逆转肝纤维化，就能在很大程度上改善肝病的预后，使其不发展为肝硬化，这是影响慢性肝病预后的重要环节，也是目前医学肝病学界关注的重大课题。

近10年来，肝纤维化的研究在分子生物学和细胞内信号传导领域又有了飞速地发展。国外研究的重点集中于基础研究，以期从逐渐明了的肝纤维化形成机理中寻找突破口，研制新的药物和治法。

虽然，肝纤维化中医临床证型多种多样，但核心的中医病机为正虚邪实，如肝郁脾虚，痰瘀阻络，二者互为因果，交替变化是导致肝病迁延不愈，并形成痞块和积聚，最终形成肝纤维化的关键所在。中医临床及中药药理研究提示：益气药，活血药或益气活血复方可抑制肝纤维化的形成与进展，并改善其临床症状和体征。

发明内容

本发明的目的是提供一种疗效确切的治疗肝纤维化的药物。

为实现上述目的，本发明采取以下设计方案：一种治疗肝纤维化的药物，它的原料配方包括下述重量份数比的组分：黄芪5-25份，丹参1-2份。

上述配方是本发明药物的君药和臣药，为了加强本发明药物的疗效，本发明的药物配方中还包括下述重量份数比的佐药：甘草1-4份。

为使得药品更纯，疗效更好，如上所述药物中添加的黄芪、丹参和甘草优选为各自的提取物，其重量份数配比优选为：黄芪提取物15-25份，丹参提取物1-2份，甘草提取物3-4份。

上述药物中各组分更优选的重量份数配比为：黄芪提取物18-21份，丹参提取物1份，甘草提取物3份。

上述黄芪提取物为黄芪总苷和黄芪多糖，其重量份数配比为：黄芪总苷1份，黄芪多糖4-6份。

本发明的第二个目的是提供一种上述治疗肝纤维化药物的制备方法。

本发明所提供的上述药物的制备方法，包括以下步骤：

1)制备黄芪提取物、丹参提取物和甘草提取物；

2)将黄芪提取物、丹参提取物和甘草提取物按重量份数比为5-25∶1-2∶1-4混匀，得到治疗肝纤维化药物。

在上述制备方法中，所述步骤1)中的黄芪提取物为黄芪总苷和黄芪多糖，其重量份数配比为：黄芪总苷1份，黄芪多糖4-6份，其中，黄芪总苷的提取方法为：将黄芪药材用水提取2-4次，收集水提取液，浓缩，将浓缩液用乙醇调至含醇量为60-80％，分离沉淀(留待制备多糖用)和上清液，将上清液浓缩至无醇味，上大孔吸附树脂，依次用水洗，30-50％乙醇洗，60-80％乙醇洗，收集60-80％乙醇洗脱液，浓缩蒸干，得到总苷含量＞50％的黄芪总苷；黄芪多糖的提取方法为：取上述黄芪总苷提取过程中分离出的沉淀，用水溶解过滤，再用乙醇调至含醇量为60-80％，回收乙醇，蒸干，得到多糖含量＞50％的黄芪多糖。

丹参提取物的提取方法为：将丹参药材用水提取1-3次，收集水提取液，浓缩，将浓缩液用乙醇调至含醇量为60-80％，分离沉淀和上清液，将上清液浓缩至无醇味，上大孔树脂，用水洗脱至无糖反应，再用30-50％乙醇洗脱，洗至加三氯化铁、铁氰化钾试剂变绿并无沉淀生成为止，收集30-50％乙醇洗脱液，喷雾干燥，得到丹参总酚酸含量不低于50％的丹参提取物。

甘草提取物的提取方法为：将甘草饮片用含0.2-0.6％氨水的10-30％乙醇提取2-4次，浓缩，调pH值至1.5-3.0，冷藏，离心，将沉淀用40-80％乙醇回流，过滤，上清液浓缩至无醇味，调pH值至1.5-3，冷藏，倾去上清液，将沉淀用冰水洗至pH值为4.8-5.2，将沉淀用0.2-0.6％(稀氨水)氨水溶解后蒸干，得到甘草皂苷含量不低于50％的甘草提取物。

所述步骤2)中黄芪提取物、丹参提取物和甘草提取物的重量份数比优选为18-21∶1∶3。

本发明在祖国传统医学的基础上，结合现代医学对肝纤维化治疗方面的临床研究，并参考现代药理学研究成果，对筛选出的补脾益气、活血化瘀的中草药物合理配伍，获得了一种治疗肝纤维化的中成药物。该药以补脾益气药黄芪为主药，活血化瘀药丹参为辅药，甘草为佐助药。黄芪补脾益气，扶助正气，遏制或清除痰浊，湿热、疫毒，从而消除了导致肝病迁延不愈的关键病机。以黄芪配伍丹参，益气活血，加强活血化瘀的功效，旨在祛除痰瘀，软化或抑制痞块和积聚。肝纤维化为“久病”“顽疾”，患者需长期用药，益气药黄芪药性“温燥”，佐以甘草，不仅可加强益气活血的功效，还可以牵制或减弱因长期使用黄芪而产生的不良反应。动物实验表明，用本药治疗肝纤维化，可以在一定程度上逆转已经形成的肝纤维化，且无毒副作用。本发明的各组分均为常见中草药，成本低，在减轻了患者病痛的同时，还降低了患者的经济负担。此外，该药具有服用方便，生产成本低廉的优点，便于进行推广应用。本发明将在肝纤维化及相关疾病的治疗中发挥巨大作用。

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

具体实施方式

下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。

实施例1、制备治疗肝纤维化的药物

1)制备黄芪提取物、丹参提取物和甘草提取物：

黄芪总苷的提取：将黄芪药材用水提取3次，收集水提取液，浓缩，将浓缩液用乙醇调至含醇量为80％，分离沉淀(留待制备多糖用)和上清液，将上清液浓缩至无醇味，上大孔吸附树脂，依次用水洗，30％乙醇洗，70％乙醇洗，收集70％乙醇洗脱液，浓缩蒸干，比色法测定结果表明得到了总苷含量＞50％的黄芪总苷。

黄芪多糖的提取：取上述黄芪总苷提取过程中分离出的沉淀，用水溶解过滤，再用乙醇调至含醇量为80％，回收乙醇，蒸干，比色法测定结果表明得到了多糖含量＞50％的黄芪多糖。

丹参提取物的提取：将丹参药材用水提取2次，收集水提取液，浓缩，将浓缩液用乙醇调至含醇量为80％，分离沉淀和上清液，将上清液浓缩至无醇味，上大孔树脂，用水洗脱至无糖反应，再用40％乙醇洗脱，洗至加三氯化铁、铁氰化钾试剂变绿并无沉淀生成为止，收集40％乙醇洗脱液，喷雾干燥，检测结果表明得到了丹参总酚酸含量不低于50％的丹参提取物。

甘草提取物的提取：将甘草饮片用含0.5％氨水的10％乙醇提取3次，浓缩，用3M硫酸调pH值至2.0，冷藏12小时，离心，将沉淀用60％乙醇回流，过滤，上清液浓缩至无醇味，用3M硫酸调pH值至2.0，冷藏，倾去上清液，将沉淀用冰水洗至pH值为5.0，将沉淀用0.5％氨水溶解后蒸干，比色法测定结果得到了甘草皂苷含量不低于50％的甘草提取物。

2)取步骤1)的黄芪总苷420mg、黄芪多糖105mg，丹参提取物25mg和甘草提取物75mg混匀，得到治疗肝纤维化药物。

实施例2、制备治疗肝纤维化的药物

1)制备黄芪提取物、丹参提取物和甘草提取物：

黄芪总苷的提取：将黄芪药材用水提取2次，收集水提取液，浓缩，将浓缩液用乙醇调至含醇量为70％，分离沉淀(留待制备多糖用)和上清液，将上清液浓缩至无醇味，上大孔吸附树脂，依次用水洗，25％乙醇洗，80％乙醇洗，收集80％乙醇洗脱液，浓缩蒸干，比色法测定结果表明得到了总苷含量＞50％的黄芪总苷。

黄芪多糖的提取：取上述黄芪总苷提取过程中分离出的沉淀，用水溶解过滤，再用乙醇调至含醇量为70％，回收乙醇，蒸干，比色法测定结果表明得到了多糖含量＞50％的黄芪多糖。

丹参提取物的提取：将丹参药材用水提取3次，收集水提取液，浓缩，将浓缩液用乙醇调至含醇量为70％，分离沉淀和上清液，将上清液浓缩至无醇味，上大孔树脂，用水洗脱至无糖反应，再用50％乙醇洗脱，洗至加三氯化铁、铁氰化钾试剂变绿并无沉淀生成为止，收集50％乙醇洗脱液，喷雾干燥，检测结果表明得到了丹参总酚酸含量不低于50％的丹参提取物。

甘草提取物的提取：将甘草饮片用含0.6％氨水的20％乙醇提取3次，浓缩，用3M硫酸调pH值至1.5，冷藏12小时，离心，将沉淀用70％乙醇回流，过滤，上清液浓缩至无醇味，用3M硫酸调pH值至2.0，冷藏，倾去上清液，将沉淀用冰水洗至pH值为5.0，将沉淀用0.4％氨水溶解后蒸干，比色法测定结果得到了甘草皂苷含量不低于50％的甘草提取物。

2)取步骤1)的黄芪总苷384mg、黄芪多糖64mg，丹参提取物25mg和甘草提取物75mg混匀，得到治疗肝纤维化药物。

实施例3、制备治疗肝纤维化的药物

1)制备黄芪提取物、丹参提取物：

黄芪总苷的提取：将黄芪药材用水提取2次，收集水提取液，浓缩，将浓缩液用乙醇调至含醇量为60％，分离沉淀(留待制备多糖用)和上清液，将上清液浓缩至无醇味，上大孔吸附树脂，依次用水洗，40％乙醇洗，60％乙醇洗，收集60％乙醇洗脱液，浓缩蒸干，比色法测定结果表明得到了总苷含量＞50％的黄芪总苷。

黄芪多糖的提取：取上述黄芪总苷提取过程中分离出的沉淀，用水溶解过滤，再用乙醇调至含醇量为60％，回收乙醇，蒸干，比色法测定结果表明得到了多糖含量＞50％的黄芪多糖。

丹参提取物的提取：将丹参药材用水提取3次，收集水提取液，浓缩，将浓缩液用乙醇调至含醇量为60％，分离沉淀和上清液，将上清液浓缩至无醇味，上大孔树脂，用水洗脱至无糖反应，再用50％乙醇洗脱，洗至加三氯化铁、铁氰化钾试剂变绿并无沉淀生成为止，收集50％乙醇洗脱液，喷雾干燥，检测结果表明得到了丹参总酚酸含量不低于50％的丹参提取物。

2)取步骤1)的黄芪总苷360mg、黄芪多糖90mg和丹参提取物30mg混匀，得到治疗肝纤维化药物。

实施例4、治疗肝纤维化的药物配方中组合物配比的筛选实验

动物模型的制备：实验动物为SD系大鼠，雄性，体重130-160g，232只，大鼠每周2次腹注0.5mL/只猪血清，每隔3或4天一次。空白对照组腹注生理盐水0.5mL/只，每隔3或4天一次。造模5周和8周时，模型组和对照组各随机取5只大鼠检测造模效果，8周造模成功。

现对治疗肝纤维化的药物配方中组合物的配比进行筛选实验，具体方法为：将造模动物按笼随机分为11组，即：生理盐水组(对照组)：10只，配比A，B，C，D，E组，黄芪组，丹参组，甘草组，秋水仙碱组，免疫性肝纤维化模型(模型组)，每组各22只。每日经口给药一次，给药体积1mL/100g Bw，连续给药3个月。按表1所示的给药配比及剂量给药，给药期间每周腹注猪血清0.5mL/只，每周一次，持续至实验结束。分别于第5周、第8周、和3个月时取样，按如下方法检测不同药物配比的抗肝纤维化效果：

1、大体观察：称肝、肾、腺、胸腺、肾上腺重量并计算脏/体比值。肝组织大体检查后，取左叶肝剪取小块肝组织，固定于carnoy固定液中；横向剪取左叶肝1/3及右叶肝1/2，固定于10％福尔马林液中。

2、肝组织中羟脯氨酸(HYP)含量检测：将肾、肾上腺、胸腺、脾等脏器固定于10％福尔马林液中。将2/3左叶肝及1/2右叶肝液氮冻固，-30℃冰箱保存，参照文献(周少春等.大鼠肝组织羟脯氨酸的测定.上海第二医科大学学报.1997，17(6).458-460.)中的方法检测肝组织中羟脯氨酸(HYP)含量：称取肝组织1.0g，加Tris缓冲液2.0mL，冰浴中18000r/min，间隙匀浆1.5min.用少许Tris缓冲液洗涤匀浆机，合并液体。加2.5％胰蛋白酶溶液0.5mL。用Tris缓冲液定容至5mL。于37℃水浴锅中加热30min。取上清液2.5mL加入浓盐酸1.5mL，混匀，盖塞置100℃烤箱水解15小时。水解后液体加入10mol/L氢氧化钠1.5mL，再用2mol/L氢氧化钠调pH值至6.0。用蒸馏水稀释至10mL。混匀过滤为测试液，进行测量。

HYP含量反映肝内胶原纤维含量做为衡量肝内纤维化程度。将carnoy固定后肝组织常规脱水、石蜡合埋，5μm制片，天狼星红染色，镜检肝组织纤维化程度，以半定量法测定肝内纤维化程度。10％福尔马林固定后各脏器，常规脱水，石蜡包埋，5μm制片，HE染色、镜检。

上述检测结果如表2所示，表明配比A，D和配比E具有较好的抑制肝纤维化效果，与对照药乙酰胆碱没有统计学意义上的差别。各个配比中以配比A，D和E效果较好，且配比A和D的效果优于配比E，因此本发明药物中各组分重量份数配比优选为：黄芪18-21份，丹参1份，甘草3份。

表1 三种中药提取物及三种配比各组大鼠给药剂量及分组

药物组别	黄芪提取物		丹参提取物mg	甘草提取物mg	总计提取物mg/kg	比例
	黄芪提取物						黄芪多糖mg	黄芪总皂苷mg
	配比A配比B配比C配比D配比E黄芪丹参甘草秋水仙碱对照组	420288216386360680					黄芪多糖mg	黄芪总皂苷mg	10572546490170	2540452530100	75120135750640	6255204505504808501006400.1510	21∶1∶39∶1∶36∶1∶318∶1∶315∶1

注：各配比及生药均相当于原生药10g。

表2三种中药提取物及配比经口给药3个月对免疫性肝纤维化大鼠肝组织HYP含量及病理镜检假小叶形成影响

t检验：与对照组比较：^＝＝p＜0.01，^＝＝＝p＜0.001；与模型组比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001；与秋水仙碱组比较：^△p＜0.05。

x²检验：与对照组比较，⁺p＜0.05，⁺⁺p＜0.01，⁺⁺⁺p＜0.001；与模型组比较：^○p＜0.05，^○○p＜0.01；与秋水仙碱组比较，^△p＜0.05；与配比A比较，^×p＜0.05；与8周对照组比较：^ap＜0.05。

Claims

1、一种治疗肝纤维化的药物，它的原料配方包括下述重量份数比的组分：黄芪5-25份，丹参1-2份。

2、根据权利要求1所述的药物，其特征在于：所述原料配方中还包括重量份数比为1-4份的甘草。

3、根据权利要求2所述的药物，其特征在于：所述药物组分中的黄芪、丹参和甘草为各自的提取物。

4、根据权利要求3所述的药物，其特征在于：所述药物中各提取物重量份数配比为：黄芪提取物15-25份，丹参提取物1-2份，甘草提取物3-4份。

5、根据权利要求4所述的药物，其特征在于：所述药物中各组分重量份数配比为：黄芪提取物18-21份，丹参提取物1份，甘草提取物3份。

6、根据权利要求3或4或5所述的药物所述黄芪提取物为黄芪总苷和黄芪多糖，其重量份数配比为：黄芪总苷1份，黄芪多糖4-6份。

7、一种制备权利要求3所述的治疗肝纤维化药物的方法，包括以下步骤：

1)制备黄芪提取物、丹参提取物和甘草提取物；

8、根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中的黄芪提取物为黄芪总苷和黄芪多糖，其重量份数配比为：黄芪总苷1份，黄芪多糖4-6份，其重量份数配比为：黄芪总苷1份，黄芪多糖4-6份；黄芪总苷的提取方法为：将黄芪药材用水提取2-4次，收集水提取液，浓缩，将浓缩液用乙醇调至含醇量为60-80％，分离沉淀和上清液，将上清液浓缩至无醇味，上大孔吸附树脂，依次用水洗，30-50％乙醇洗，60-80％乙醇洗，收集60-80％乙醇洗脱液，浓缩蒸干，得到黄芪总苷；黄芪多糖的提取方法为：取黄芪总苷提取过程中分离出的沉淀，用水溶解过滤，再用乙醇调至含醇量为60-80％，回收乙醇，蒸干，得到黄芪多糖。

9、根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中丹参提取物的提取方法为：将丹参药材用水提取1-3次，收集水提取液，浓缩，将浓缩液用乙醇调至含醇量为60-80％，分离沉淀和上清液，将上清液浓缩至无醇味，上大孔树脂，用水洗脱至无糖反应，再用30-50％乙醇洗脱，洗至加三氯化铁、铁氰化钾试剂变绿并无沉淀生成为止，收集30-50％乙醇洗脱液，喷雾干燥，得到丹参提取物。

10、根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中甘草提取物的提取方法为：将甘草饮片用含0.2-0.6％氨水的10-30％乙醇提取2-4次，浓缩，调pH值至1.5-3.0，冷藏，离心，将沉淀用40-80％乙醇回流，过滤，上清液浓缩至无醇味，调pH值至1.5-3，冷藏，倾去上清液，将沉淀用冰水洗至pH值为4.8-5.2，将沉淀用0.2-0.6％氨水溶解后蒸干，得到甘草提取物。