CN1993136A

CN1993136A - 血清淀粉状蛋白a基因在诊断和治疗青光眼和鉴定抗青光眼活性剂中的用途

Info

Publication number: CN1993136A
Application number: CNA200480037061XA
Authority: CN
Inventors: A·F·克拉克; 王万恒; L·麦克纳特
Original assignee: Alcon Universal Ltd
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2003-12-17
Filing date: 2004-12-01
Publication date: 2007-07-04
Also published as: CA2545777A1; TW200520768A; EP1694192A4; ZA200603464B; RU2365379C2; EP1694192A2; US20120064532A1; MXPA06006503A; BRPI0417732A; AU2004304944B2; US7357931B2; TWI398261B; JP4827742B2; AU2004304944A1; US20050153927A1; RU2006125428A; WO2005060542A3; AR077599A2; AR048135A1; US20090036371A1

Abstract

本发明提供了用于治疗青光眼的组合物和方法，用于诊断青光眼的方法和用于鉴定可以用于治疗青光眼的活性剂。更特别地，本发明描述了调节血清淀粉状蛋白A表达的活性剂的用途。

Description

血清淀粉状蛋白A基因在诊断和治疗青光眼和鉴定抗青光眼活性剂中的用途

发明背景

1.发明领域

本发明涉及诊断和治疗青光眼的领域。更特别地，本发明提供了用于诊断和治疗青光眼的和鉴定潜在用于治疗青光眼的活性剂的方法和组合物。

2.相关文献的描述

有许多通过视神经乳头损伤、眼组织变性和/或眼内压升高引起或恶化的眼的疾病。例如，“青光眼”是一组虚弱性眼病，是美国和其它发达国家中不可逆失明的主要原因。原发性开角型青光眼(“POAG”)是青光眼的最常见形式。该病的特征为小梁网变性，导致房水离开眼的正常能力受到阻碍而不闭合虹膜和角膜之间的间隙(例如“角”)(Vaughan，D.等人，(1992))。在这种疾病中此种阻碍的特征为眼内压(“IOP”)升高，如果不进行适当的和及时的治疗，就会导致进行性视力丧失和失明。该疾病估计影响40岁以上所有成年人的0.4％到3.3％(Leske，M.C.等人，(1986)；Bengtsson，B.(1989)；Strong，N.P.(1992))。此外，该病的患病率随年龄升高，75岁或75岁以上的人患病率在6％以上(Strong，N.P.，(1992))。

青光眼影响眼中的三种单独组织。与POAG相关的IOP升高是由于小梁网(TM)的形态学和生物化学的变化，所述小梁网是位于角膜和虹膜之间的角的组织。大部分营养性房水通过TM离开眼前段。青光眼的TM细胞的进行性丧失和TM细胞中细胞外碎片的积累导致房水流出的阻力增加，因此升高IOP。升高的IOP，以及其它因素诸如局部缺血，引起视神经乳头(ONH)的变性改变，导致ONH的进行性“杯状(cupping)”和视网膜神经节细胞和轴突的丧失。造成TM、ONH和视网膜神经节细胞的青光眼损伤的详细分子机制是未知的。

二十年前，对眼高压、局部缺血和视神经乳头的机械扭曲的相互作用作为引起青光眼中视力丧失的主要因素进行了激烈辩论。自此以后，其它因素，包括兴奋性神经毒性、氧化一氮、重要神经营养因子的缺乏、异常的神经胶质/神经元相互作用和遗传牵涉在变性性疾病的过程中。由于分子遗传学可以最终定义细胞死亡的机制和提供多种形式青光眼的区别，所以对分子遗传学的考虑值得讨论。过去10年中，已经对15种以上的青光眼基因进行了作图并鉴定了7种青光眼基因。这包括原发性开角型青光眼的6种作图的基因(GLC1A-GLC1F)和两种鉴定的基因(MYOC和OPTN)、先天性青光眼的两种作图的基因(GLC3A-GLC3B)和一种鉴定的基因(CYP1B1)、色素分散性/色素性青光眼的两种作图的基因和青光眼的发育或综合征形式的许多基因(FOXC1、PITX2、LMX1B、PAX6)。

因此，每种形式的青光眼可以具有独特的病理学，因此可能需要疾病处理的不同治疗方法。例如，影响降解视神经乳头的细胞外基质的酶的表达的药物不可能防止兴奋性神经毒性引起的RGC死亡。在青光眼中，通过称为编程性细胞死亡(编程性细胞死亡)的过程发生RGC死亡。推测可以引起死亡的不同类型损伤可以通过汇聚几种共同途径发生编程性细胞死亡。靶向共同途径的下游区是可以扩大药物的实用性和增加药物在处理不同形式疾病中的效用的可能性的策略。然而，影响多种代谢途径的药物更可能产生不希望的副作用。随着用于鉴定青光眼的特定形式的基于基因的诊断试剂盒的出现，可以检测选择性神经保护活性剂以期降低有关测定的反应的变化程度。

当前青光眼的诊断基于疾病的特定症状(特征性的视神经乳头变化和视力丧失)。然而，半数以上的青光眼患者不知道他们患有此种失明疾病，到诊断他们患此种疾病时，他们已经不可逆地丧失了他们的大约30-50％的视网膜神经节细胞。因此，需要早期诊断青光眼的改进方法。

当前青光眼的治疗针对降低IOP，所述IOP是青光眼发生和恶化的主要危险因素。然而，当前的IOP降低疗法没有一种实际上干扰负责升高的IOP的疾病过程并且对前段的进行性损伤继续进行。这就是为什么多数患者“抵抗”常规青光眼治疗的一个可能的原因。因此，需要改变(通过抑制或甚至逆转)该疾病过程的治疗方法。

发明概述

本发明通过提供诊断青光眼的方法和治疗青光眼的组合物，克服了现有技术的这些和其它缺点。一方面，本发明提供了通过向需要治疗的患者施用治疗有效量的组合物治疗青光眼的方法，所述组合物包含与编码血清淀粉状蛋白A蛋白(SAA)的基因，或与该基因的启动子序列相互作用的活性剂。该活性剂与编码SAA的基因，或与它的启动子序列之间的相互作用调节SAA的表达，使患者的青光眼状况得到治疗。在优选的实施方案中，活性剂将为蛋白质、肽、肽模拟物(peptidomimetic)、小分子或核酸。

另一方面，本发明提供了通过向需要治疗的患者施用治疗有效量的组合物治疗青光眼的方法，所述组合物包含抑制血清淀粉状蛋白A蛋白(SAA)与它的受体相互作用的活性剂。优选地，该活性剂将为过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)激动剂、速激肽和它们的非肽类似物或α-硫辛酸。最优选地，活性剂应为非诺贝特、Wy-14643、(4-氯-6-(2，3-二甲代苯氨基)-2-嘧啶基硫羟)-乙酸)、环丙贝特、2-溴代十六烷酸、必降脂和环格列酮(ciglitizone)、bafilomycin、concanamycin或pseudolaric acid B。

本发明还提供了用于治疗青光眼的药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的血清淀粉状蛋白A蛋白(SAA)拮抗剂和药物载体。组合物中含有的拮抗剂可以是以上鉴定的任意一种化合物。

在再一实施方案中，本发明提供了通过以下步骤诊断青光眼的方法：

a)自患者获得生物学样品；和

b)分析所述样品中编码血清淀粉状蛋白A蛋白(SAA)的基因或它的启动子区或它的基因产物的异常水平、异常生物活性或突变，其中编码SAA的所述基因包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3中给出的序列，其中它的启动子区包含SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：13中给出的序列，并且其中SAA包含SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4中给出的序列；

其中SAA基因或基因产物的异常的高水平、异常的高生物活性的突变指出诊断为青光眼。

在优选的方面，生物学样品为眼组织、泪液、房水、脑脊液、鼻或颊拭子或血清。最优选地，生物学样品包含小梁网细胞。

备选地，本发明提供了通过以下步骤诊断患者中青光眼的方法：

a)从患者收集细胞；

b)从所述细胞分离核酸；

c)将样品与一种或多种引物接触，所述引物在一定条件下特异杂交SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：13的至少一种等位基因的5’和3’从而发生该等位基因的杂交和扩增；和

d)检测扩增产物；

其中样品中SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：13的异常水平或突变指出诊断为青光眼。

本发明也提供了通过以下步骤鉴定潜在用于治疗青光眼的活性剂的方法：

a)获得表达SAA(SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2)的细胞或含有SAA启动子/报道基因从而该报道基因得到表达的细胞；

b)混合候选物质与细胞；和

c)确定细胞中SAA蛋白质(SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4)的水平或基因表达的水平；

其中在存在所述候选物质时SAA蛋白质的产生或基因表达的增加或减少表明所述候选物质是潜在用于治疗青光眼的活性剂。

另一方面，本发明提供了通过以下步骤鉴定潜在用于治疗青光眼的活性剂的方法：

a)形成包含：

(i)SAA蛋白质或表达SAA或通过SAA启动子驱动的报道基因的细胞；

(ii)SAA蛋白质结合配偶体；和

(iii)受试化合物的反应混合物；和

b)在存在受试化合物和不存在受试化合物时，检测SAA蛋白质与结合配偶体的相互作用或报道基因产物的水平；

其中相对于不存在受试化合物时的相互作用，存在受试化合物时SAA蛋白质与它的结合配偶体的相互作用的减少或增加表明所述受试化合物是潜在用于治疗青光眼的活性剂。

a)形成反应混合物，其包含：

(i)包含SAA重组蛋白(SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4)的细胞或包含表达载体的细胞，所述表达载体包含SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：3；和

(ii)受试化合物；

b)检测存在受试化合物和不存在受试化合物时对下游信号传递(IL-8)的影响；

其中相对于不存在受试化合物时的相互作用，存在受试化合物时下游信号传递减少或增加指出所述受试化合物是潜在用于治疗青光眼的活性剂。

在优选的方面，含有SAA蛋白质或表达载体的细胞将是HL-60细胞。

附图简述

以下附图形成本说明书的部分并且包括在本说明书中用来阐明本发明的某些方面。通过与文中给出的特定实施方案的详述相结合参考这些附图可以更好地理解本发明。

图1.12名青光眼与11名正常的TM组织中SAA表达的QPCR分析。NTM和GTM分别表示正常组和青光眼组中基因的平均表达水平。

图2A.TM细胞系中SAA表达的QPCR分析。NTM和GTM分别表示正常组和青光眼组中基因的平均表达水平。

图2B.视神经乳头组织中SAA表达的QPCR分析。NTM和GTM分别表示正常组和青光眼组中基因的平均表达水平。

图3.来自正常和青光眼供者(n＝6)的TM组织中的SAA蛋白。与正常组织相比，在青光眼TM组织中观察到SAA的显著升高(3倍)(p＝0.031)。条线表示平均数+/-s.e.m。

图4.来自正常和青光眼个体的人房水中通过ELISA确定的SAA蛋白。值表示为平均SAA(ng)/ml房水，+/-s.e.m.(p＝0.005)。

图5.HL-60细胞响应rhSAA的升高的浓度进行的IL-8分泌。

优选实施方案详述

青光眼是共有某些临床特征的视神经病的异质群。青光眼中的视力丧失是由于神经视网膜中视网膜神经节细胞的选择性死亡，所述选择性死亡在临床上诊断为视野中的特征性改变、神经纤维层缺陷和ONH的进行性杯化(cupping)。发生青光眼的主要危险因素之一是存在眼高压(升高的眼内压，IOP)。IOP似乎也涉及正常眼压性青光眼的致病原因中，所述正常眼压性青光眼的患者具有常常认为正常的IOP。与青关眼相关的升高的IOP是由于小梁网(TM)中房水流出阻力升高，小梁网是位于眼前房虹膜-角膜角中的小特化组织。TM的青关眼变化包括TM细胞损失和细胞外碎片(包括蛋白质斑状材料)的沉积和积累。此外，在青光眼性视神经乳头(ONH)中也发生变化。在青光眼的眼中，在ONH神经胶质细胞中有形态和流动性改变。对IOP升高和/或暂时的局部缺血损伤的反应是ONH细胞外基质的组成的改变和神经胶质细胞和视网膜神经节细胞轴突形态的改变。

本发明人发现在青光眼TM组织和细胞中血清淀粉状蛋白A(SAA)mRNA和蛋白质的表达显著上调。本发明人通过实时定量聚合酶链反应(QPCR)用Affymetrix基因芯片证实了所看到的差别mRNA表达并通过SAA ELISA证实了升高的SAA蛋白质水平。这是第一次表明SAA在TM中表达。

人SAA包含许多小的、差别表达的载脂蛋白，其由位于11号染色体短臂上的基因编码。有四种SAA同种型。SEQ ID NO：1编码的SAA1(SEQID NO：2)和SEQ ID NO：3编码的SAA2(SEQ ID NO：4)称为急性期反应物，如C-反应蛋白，即它们通过促炎细胞因子显著上调。也提供了SAA1和SAA2基因的5’UTR启动子区(分别为SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13)。SAA3(SEQ ID NO：5)是假基因，SAA4(SEQ ID NO：6)是编码组成型SAA4(SEQ ID NO：7)的低水平组成性表达的基因。SAA2具有两种同种型：SEQ ID NO：8编码的SAA2α(SEQ ID NO：9)和SEQ ID NO：10编码的SAA2β(SEQ BD NO：11)，这两种同种型仅仅有一个氨基酸不同。SAA1和SAA2蛋白在氨基酸水平(分别为SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4)有93.5％的同一性，这些基因在核苷酸水平(分别为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3)有96.7％的同一性。

SAA为急性期反应物，作为身体对多种损伤，包括创伤、感染、炎症和瘤形成的反应的部分，所述SAA在血液中的水平升高大约1000倍。作为急性期反应物，认为肝脏是主要表达部位。然而，最初描述了小鼠组织中肝外SAA表达，后来描述了人粥样硬化病变的细胞中SAA的表达(O′Hara等人，2000)。随后，发现在许多组织学正常人组织中SAA mRNA广泛表达。在多种组织包括乳腺、胃、小肠和大肠、前列腺、肺、胰腺、肾、扁桃体、甲状腺、垂体、胎盘、皮肤表皮和脑神经元中注意到SAA mRNA的局部表达。在淋巴细胞、浆细胞和内皮细胞中也观察到SAA mRNA的表达。在组织学正常的人肝外组织中也报道了与SAA mRNA表达共定位的SAA蛋白表达(Liang等人，1997；Urieli-Shoval等人，1998)。

SAA同种型是载脂蛋白，其成为哺乳动物血浆中高密度脂蛋白(HDL)主要组分并且转移来自HDL颗粒的A-I(ApoA-I)和磷脂(Miida等人，1999)。SAA结合胆固醇并且可以作为瞬时胆固醇结合蛋白。此外，SAA1或SAA2的过度表达导致在淀粉状蛋白沉积物中形成线性原纤维，所述线性原纤维可以导致发病(Uhlar和Whitehead 1999；Liang等人，1997)。SAA在感染、炎症和组织修复刺激中起重要作用。炎症、感染、坏死后，SAA浓度可以升高达1000倍，恢复后SAA浓度快速降低。因此，认为血清SAA浓度是监测炎性疾病活性的有用标志。SAA的肝生物合成受到促炎细胞因子上调，导致急性期反应。SAA浓度缓慢升高是继发性淀粉状蛋白病发病的必要条件，所述继发性淀粉状蛋白病是进行性的并且有时为致死性疾病，其特征为主要器官中主要由蛋白水解切割的SAA组成的不溶性斑点的沉积。此种同样的过程也可以导致动脉粥样硬化。需要正和负SAA控制机制来维持稳态。这些机制允许快速诱导SAA表达以完成宿主保护功能，但他们也必须保证SAA的表达快速返回到基线水平以防止淀粉状蛋白病。这些机制包括启动子活性的调节，例如涉及诱导物核因子kB(NF-kB)和它的抑制剂IkB，白细胞介素-6核因子(NF-IL6)家族的转录因子的上调和转录阻抑物，如yin和yang 1(YY1)。涉及mRNA稳定性和翻译效率改变的转录后调节允许实现SAA蛋白合成的进一步上调和下调控制。在AP反应的晚期阶段，SAA的表达通过细胞因子拮抗剂诸如白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-IRa)和可溶性细胞因子受体的增加的产生有效地下调，导致通过促炎细胞因子驱动的信号转导降低(Jensen和Whitehead 1998)。

有一些报导提出原发性淀粉状蛋白病可能与青光眼有关。例如，发现在原发性系统性性淀粉状蛋白病患者中淀粉状蛋白沉积在多种眼组织，包括玻璃体、视网膜、脉络膜、虹膜、晶状体和TM中(Schwartz等人，1982)。Ermilov等人(1993)报导在25至90岁，患有白内障、青光眼和/或糖尿病的313名患者的478只眼中，66只眼(14％)含有淀粉状蛋白-假片状剥落淀粉状蛋白(PEA)。Krasnov等人(1996)报导具有开角型青光眼的115名患者中44.4％显示淀粉状蛋白的细胞外沉积。82％的病例的巩膜中显示淀粉状蛋白病并且70％的病例中显示虹膜中淀粉状蛋白病。许多临床疾病，包括阿尔茨海默氏病，显示与疾病相关的异常淀粉状蛋白组织沉积。然而，淀粉状蛋白是分子异质的并且由不同的淀粉状蛋白基因编码。关于哪种淀粉状蛋白可能与青关眼相关，以前的报导是不清楚的。本发明人第一次证明在青关眼TM组织中，SAA基因表达显著升高。升高的SAA可能涉及产生升高的IOP和损伤视神经，导致青关眼患者中视力丧失。本发明提供了用升高的SAA表达的发现来诊断青光眼的方法。本发明还提供了用于筛选改变SAA表达或功能的活性剂以鉴定可能的抗青光眼活性剂的方法。另一方面，本发明提供了用拮抗SAA作用和/或与其它蛋白质相互作用的活性剂治疗青光眼的方法和组合物。

诊断青光眼

基于发明人发现某些青光眼受试者的SAA表达水平升高，本发明提供了用于诊断青光眼的多种方法。本发明的某些方法可以检测导致SAA蛋白不适当地高水平的核酸序列中的突变。基于人SAA的已知核酸序列或编码的氨基酸序列，可以开发这些诊断法(参见Miller 2001)。基于人SAA的基因组序列或调节SAA表达的基因的序列，可以开发其它的方法。基于在mRNA水平上SAA基因表达水平的改变，还可以开发其它方法。

在备选的实施方案中，本发明的方法可以检测SAA信号蛋白或编码SAA信号蛋白的基因的活性或水平。例如可以开发此类方法来检测不适当的低SAA信号活性，包括例如导致SAA信号组分的不适当功能，包括IL-8的SAA诱导的突变。此外，可以用基于非核酸的技术检测任意这些SAA信号蛋白的量或比活性的改变。

当前技术人员可以获得多种方法用于检测基因和基因产物的异常水平或活性。这些方法是技术人员公知的并成为常规方法。例如，可以获得许多方法用于检测人多态性基因座上的特定等位基因。检测特定多态性等位基因的优选的方法部分取决于多态性的分子性质。多态性基因座的多种等位基因形式可以通过DNA的单个碱基对而不同。此种单个核苷酸多态性(或SNP)是遗传变异的主要贡献者，包含所有已知多态性的大约80％，它们在人基因组中的密度估计为平均每1,000个碱基对1个。可获得多种方法用于检测个体中特定单核苷酸多态性等位基因的存在。本领域的进展提供了准确的、容易的和便宜的大规模SNP基因型分型。例如，参见美国专利号4,656,127；法国专利2,650,840；PCT申请号WO91/02087；PCT申请号WO92/15712；Komher等人，1989；Sokolov 1990；Syvanen等人，1990；Kuppuswamy等人，1991；Prezant等人，1992；Ugozzoli等人，1992；Nyren等人，1993；Roest等人，1993；和van der Luijt等人，1994)。

可以利用任意细胞类型或组织以获得用于在文中描述的诊断法中使用的核酸样品。在优选的实施方案中，通过已知技术(例如静脉穿刺术)从体液，例如血液或口腔细胞获得DNA样品。最优选地，用于本发明方法中的样品获得自血液或口腔细胞。备选地，可以对干燥样品(例如头发或皮肤)进行核酸试验。

也可以在从活组织检查或切除得到的患者组织的组织切片(固定和/或冷冻)上原位直接进行诊断步骤，这样不必进行核酸纯化。对于此类原位步骤，核酸试剂可以用作探针和/或引物(参见，例如，Nuovo 1992)。

除了主要集中于检测一种核酸序列的方法外，也可以在此类检测方案中评估分布图。例如，通过利用差异显示方法、Northern分析和/或RT-PCR可以产生指纹分布图。

优选的检测方法为等位基因特异杂交，其使用探针，所述探针与指示青光眼的SAA信号组分的至少一个等位基因的区域重叠并且具有突变或多态性区域周围大约5、10、20、25或30个连续核苷酸。在本发明优选的实施方案中，能特异杂交涉及青光眼的其他等位基因变体的几种探针附着到固相支持体例如，“芯片”(可以容纳多达约250,000个寡核苷酸)。寡核苷酸可以通过多种方法，包括平版印刷术结合到固相支持体上。例如在Cronin等人(1996)中描述了用包含寡核苷酸的这些芯片(也称为“DNA探针阵列”)进行突变检测分析。在一个实施方案中，芯片包含基因的至少一个多态区域的所有等位基因变体。然后将固相支持体与受试核酸接触并检测与特异探针的杂交。因此，在简单的杂交实验中，可以鉴定一种或多种基因的许多等位基因变体的身份。

这些技术还可以包括在分析前扩增核酸的步骤。扩增技术是本领域技术人员已知的，包括但不限于克隆、聚合酶链反应(PCR)、特定等位基因的聚合酶链反应(ASA)、连接酶链反应(LCR)、嵌套式聚合酶链反应、自动维持序列扩增(Guatelli等人，1990)、转录扩增系统(Kwoh等人，1989)和Q-Beta复制酶(Lizardi等人，1988)。

可以以多种方法测定扩增产物，包括大小分析、限制性消化后大小分析、检测反应产物中的特异标记的寡核苷酸引物、等位基因特异寡核苷酸(ASO)杂交、等位基因特异5’外切核酸酶检测、测序、杂交、SSCP等等。

基于PCR的检测方法可以包括同时对许多标记的多重扩增。例如选择PCR引物以产生大小不重叠并可以同时分析的PCR产物是本领域公知的。备选地，可以用差别标记并且因此可以区别检测的引物扩增不同标志。当然，基于检测方法的杂交允许在一个样品中差别检测多种PCR产物。其它技术是本领域已知的以允许多种标志的多重分析。

在仅仅阐明性实施方案中，该方法包括步骤(i)自患者收集细胞样品，(ii)自样品的细胞中分离核酸(例如，基因组、mRNA或基因组和mRNA)，(iii)在一定条件下将核酸样品与特异杂交指示青光眼的SAA的至少一种等位基因的5’和3’的一种或多种引物接触从而发生等位基因杂交和扩增，和(iv)检测扩增产物。如果核酸分子以非常低的数目存在，那么这些检测方案特别用于检测此类核酸分子。

在主题测定法的优选实施方案中，通过限制性内切酶切割带型的改变鉴定指示青光眼的SAA的异常水平或活性。例如，分离样品和对照DNA，扩增(任选)，用一种或多种限制性内切酶消化，通过凝胶电泳确定片段长度大小。

在再一个实施方案中，本领域已知的任意多种测序反应可以用于直接等位基因测序。代表性测序反应包括基于Maxim和Gilbert(1977)或Sanger(1977)开发的技术的测序反应。也可以预计在进行主题测定时，可以利用任意多种自动测序方法，包括通过质谱测定法测序(参见，例如WO94/16101；Cohen等人，1996；Griffin等人，1993)。本领域技术人员是显而易见的是，对于某些实施方案，在测序反应中需要确定仅仅一个、两个或三个核酸碱基的发生。例如，仅仅检测一个核酸时，可以进行A-track等等。

在另一实施方案中，对切割剂(诸如核酸酶、羟胺或四氧化锇和哌啶)的保护可以用于检测RNA/RNA或RNA/DNA或DNA/DNA异源双链体的错配碱基(Myers等人1985b；Cotton等人1988；Saleeba等人1992)。在优选的实施方案中，可以标记对照DNA或RNA用于检测。

在再一个实施方案中，错配切割反应利用识别双链DNA中错配碱基对的一种或多种蛋白质(也称为“DNA错配修复”酶)。例如，大肠杆菌(E.coli)的mutY酶切割G/A错配中的A，来自HeLa细胞的胸苷DNA糖基化酶切割T和G/T错配(Hsu等人，1994；美国专利号5,459,039)。

在其它实施方案中，电泳迁移率的改变用于鉴定指示青光眼的SAA的异常水平或活性。例如，单链构象多态性(SSCP)可以用于检测突变体和野生型核酸之间电泳迁移率的差异(Orita等人1989；Cotton 1993；Hayashi1992；Keen等人1991)。

在再一个实施方案中，用变性梯度凝胶电泳(DGGE)测定了含有变性剂梯度的聚丙烯酰胺凝胶中等位基因的移动(Myers等人1985a)。在另外的实施方案中，用温度梯度代替变性剂梯度以鉴定对照和样品DNA的迁移率中的差异(Rosenbaum和Reissner 1987)。

用于检测等位基因的其它技术的实例包括但不限于，选择性寡核苷酸杂交、选择性扩增或选择性引物延伸。例如，可以制备寡核苷酸引物，在所述寡核苷酸引物中将已知突变或核苷酸差异(例如，等位基因变体中)置于中间然后在仅仅发现精确匹配时允许杂交的条件下与靶DNA杂交(Saiki等人1986；Saiki等人1989)。寡核苷酸与PCR扩增的靶DNA杂交时，此类等位基因特异的寡核苷酸杂交技术可以用于每次反应检测一个突变或多态性区域，或当寡核苷酸附着杂交膜并与标记的靶DNA杂交时，所述技术可以用于检测许多不同突变或多态性区域。

备选地，依赖于选择性PCR扩增的等位基因特异扩增技术可以与本发明联合使用。用作特异扩增引物的寡核苷酸可以在分子的中央携带突变或目的多态性区域(从而扩增取决于差别杂交)(Gibbs等人1989)，或在一个引物的3’末端携带突变或目的多态性区域，在该情况中，在适当条件下，错配可以防止或降低聚合酶延伸(Prossner 1993)。此外希望在突变区导入新的限制性位点以产生基于切割的检测(Gasparini等人1992)。预计在某些实施方案中使用用于扩增的Taq连接酶也可以进行扩增(Barany 1991)。在此种情况下，只有在5’序列的3’末端存在完全匹配才发生连接，使得可以通过寻找扩增的存在或不存在来检测在特定位点已知突变的存在。

在另一实施方案中，如在美国专利号4,998,617和在Landegren等人1988中描述地，用寡核苷酸连接测定法(OLA)进行等位变体的鉴定。Nickerson等人描述了组合PCR和OLA性质的核酸检测测定法(Nickerson等人1990)。在此方法中，PCR用于实现靶DNA的指数扩增，然后用OLA检测靶DNA。

已经基于此种OLA方法开发了几种技术，此类技术可以用于检测指示青光眼的SAA的异常水平或活性。例如美国专利号5,593,826和Tobe等人(1996)描述了常常使用的此类技术。

在一个实施方案中，在药学可接受的组合物中可以配制过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)激动剂非诺贝特并且可以通过调节SAA表达用于治疗青光眼。研究显示非诺贝特和WY 14643治疗降低了血浆SAA浓度(Yamazaki等人2002)。认为其它PPARα激动剂，诸如环丙贝特、2-溴代十六烷酸、必降脂、环丙贝特和ciglitizone也可以用于治疗青光眼。

本发明人还假定防止淀粉状蛋白诱导的细胞死亡的活性剂可以用于保护TM和前眼球血管膜和眼后的其它的眼组织，特别是视网膜和视神经乳头。

本发明的化合物可以掺入用于递送到眼(例如，局部、intracamerally或通过植入)的多种类型的眼科制剂中。所述化合物优选掺入局部眼科制剂中用于递送到眼。所述化合物可以与眼科可接受的防腐剂、表面活性剂、粘性增强剂、渗透增强剂、缓冲剂、氯化钠和水组合以形成含水的、无菌眼科悬浮液或溶液。通过在生理学上可接受的等渗水性缓冲剂中溶解化合物可以制备眼科溶液制剂。此外，眼科溶液可以包括眼科可接受的表面活性剂以帮助溶解该化合物。而且，眼科溶液可以含有增加粘性的活性剂，诸如，羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等等以改善结膜囊中制剂的保持。也可以使用胶凝剂，包括但不限于胶凝糖(gellan)和黄原胶。为了制备无菌眼膏制剂，将活性成分与防腐剂在适当载体，诸如矿物油、液体羊毛脂或白矿脂中组合。根据相似眼科制剂的公开制剂可以在从例如carbopol-974等等的组合制备的亲水基质中悬浮所述化合物制备无菌眼科凝胶制剂；可以掺入防腐剂和张度剂。

所述化合物优选作为局部眼科悬浮液或溶液配制，pH大约为4至8。对每个个体的特定剂量方案的建立由临床医生决定。在这些制剂中含有的所述化合物的量通常按重量计为0.01％至5％，但优选0.05％至2％和最优选按重量为0.1至1.0％。剂型可以是溶液剂、混悬剂、微乳剂。因此，根据熟练临床医生的决定，对于局部施用每天1-4次，每次1至2滴将这些剂型递送到眼表面。

所述化合物也可以与用于治疗青光眼的其它活性剂诸如，但不限于β-阻断剂、前列腺素、碳酸酐酶抑制剂、α2激动剂、缩瞳剂和神经保护剂组合使用。

包括以下实施例用来阐明本发明的优选实施方案。本领域技术人员应当理解以下实施例中公开的技术代表本发明人发现的在本发明的实践中运行良好的技术，因此可以考虑组成本发明实践的优选方式。然而，根据本公开的专利，本领域技术人员应当理解可以对公开的特定实施方案进行许多修改并且仍获得相同或相似结果而不背离本发明的精神和范围。

实施例1.青光眼TM细胞和组织中SAA1和SAA2的升高的表达

用Affymetric基因芯片(GeneChips)组(HG-U133)对来自13名正常供者对9名青光眼供者的TM组织的RNA库确定基因表达。与正常TM组织相比，鉴定了青光眼中淀粉状蛋白A2的表达增加了4倍。为了证实此结果，用来自12名青光眼和11名正常TM组织的单独RNA进行QPCR。来自12名青光眼TM组织中的5名(42％)显示SAA1/2表达的显著增加。12名青光眼TM中SAA表达的平均值是11名正常TM的5.4倍(图1)。此外，在青光眼TM细胞或青光眼视神经乳头组织中观察到SAA差别表达的相似趋势。与正常TM细胞相比，青光眼TM细胞中(14名青光眼对11名正常TM细胞系，图2A)平均升高5.4倍，青光眼视神经乳头组织(14名青光眼对12名正常组织，图2B)中平均增加118倍。来自6名正常和6名青光眼供者的TM组织中SAA的ELISA显示，与正常TM组织相比，在青光眼TM组织中SAA蛋白也显著增加。青光眼组织中SAA的浓度与正常组织相比有3倍差异(分别为11.3和3.8μg/mg蛋白质)。这些数据在图3中显示。

SAA的升高的表达与青光眼的相关性在人房水中进一步证实。通过ELISA测定来自16名正常个体和20名青光眼个体的房水中的SAA蛋白质。发现SAA在青光眼房水中比正常样品中的高几乎3倍(分别为10.0ng/ml对3.7ng/ml)。此结果在图4中显示。

实施例2.用于局部应用的非诺贝特的制剂

1％非诺贝特用于局部应用以减少SAA和降低眼中的IOP。

描述浓度单位目的

非诺贝特 1％ W/V％活性成分

(AL18543)，

NOC

羟丙基甲基纤 0.5％ W/V％粘度改进剂(2910)

维素 (E4M)，USP

磷酸氢二钠 0.2％ W/V％缓冲剂(无水)，usp

氯化钠，usp 0.75％ W/V％张度剂

EDTA二钠 0.01％ W/V％螯合剂(乙二胺四乙酸

二钠)，usp

聚山梨醇酯 0.05％ W/V％湿润剂

80，nf

苯扎氯铵，nf 0.01％ W/V％防腐剂

氢氧化钠，nf q.s.pH W/V％调节pH

盐酸，nf q.s.pH W/V％调节pH

纯化水，usp q.s.100％ W/V％载体

实施例3.用于筛选和鉴定改变SAA mRNA或SAA蛋白质的表达的化合物的方法

可以用于筛选改变SAA表达和功能的活性剂的一种方法是确定SAA蛋白质水平的改变。用于定量确定动物或人血清、血浆、缓冲溶液、细胞培养基和组织或细胞提取物中的血清淀粉状蛋白A(SAA)的体外测定试剂盒可通过商业途径获得。此测定法是固相夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)。将对SAA特异的单克隆抗体包被在微量滴定板的孔上。将包括已知SAA含量的标准样品或未知SAA含量的样品加到这些孔中，一起还加入缀合碱性磷酸酶或过氧化物酶的二级抗体。构建抗体使得一种抗体不干扰另一种抗体的结合表位。在一步步骤中，将SAA通过固定化抗体捕获在板上并用缀合的二级抗体标记。孵育期后，将板清洗以除去所有未结合的材料并加入底物(PNPP或过氧化物)。有色产物的强度与未知样品中存在的SAA浓度是成比例的。

实施例4.培养细胞系中SAA的诱导用于筛选改变SAA mRNA或蛋白质表达的化合物

人肝癌细胞系HepG2广泛用于通过细胞因子对SAA诱导的研究、用于用质粒转染和报道子测定。在一些人肝癌细胞系(包括PCL/PRF/5、HepB和HepG2)中可以通过多种细胞因子诱导SAA mRNA和蛋白质合成(Uhlar和Whitehead 1999)。人主动脉平滑肌细胞(HASMC)的SAA的合成是通过糖皮质激素诱导的而不是通过促炎细胞因子IL-1、IL-6、和TNF-α诱导的，所述促炎细胞因子刺激肝癌细胞产生SAA(Kumon等人2002b；Kumon等人2001；Thorn和Whitehead 2002)。当用Chemotaxicell培养腔测定时，SAA以依赖剂量的方式刺激HASMC的趋化性移行(Kumon等人2002a)。在类风湿性关节炎滑膜细胞的原代培养物中证明了SAA mRNA表达和蛋白质产生(O’Hara等人2000)。

实施例5.培养细胞中SAA的功能分析

SAA的细胞因子样性质包括诱导嗜中性粒细胞分泌IL-8(Furlaneto和Campa，2002；He等人2003)。鉴定了早幼粒细胞细胞系HL-60细胞，其应答SAA而增加IL-8分泌，并且可用于SAA功能的体外测定。用升高浓度的重组人SAA处理HL-60细胞4小时，通过ELISA测定培养基中的IL-8。IL-8的分泌以依赖剂量的方式增加(图5)。HL-60细胞可以用作功能测定的替代细胞系以鉴定改变SAA功能和表达水平的活性剂。

按照本公开，不用过度实验就可以进行和执行文中公开的和要求专利保护的所有组合物和/或方法。尽管本发明的组合物和方法按照优选的实施方案描述，但是如本领域技术人员显而易见的，可以对文中描述的组合物和/或方法和方法步骤或步骤的顺序进行改变而不背离本发明概念、精神和范围。更特别地，显然，化学和结构相关的某些活性剂可以替代文中描述的活性剂以实现相似结果。本领域技术人员显而易见的所有此类代替和修饰都在如所附权利要求定义的本发明的精神、范围和概念内。

参考文献

将以下参考文献特别引用作为参考，它们对文中给出的参考文献示例性程序上的或者其他细节补充。

美国专利

书

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序列表

<110>爱尔康公司

<120>血清淀粉状蛋白A基因在诊断和治疗青光眼和鉴定抗青光眼活性剂中的用途

<130>2441 WO F

<140>未知

<141>2003-11-07

<160>13

<170>PatentIn版本3.1

<210>1

<211>369

<212>DNA

<213>人(homo sapiens)

<400>1

atgaagcttc tcacgggcct ggttttctgc tccttggtcc tgggtgtcag cagccgaagc 60

ttcttttcgt tccttggcga ggcttttgat ggggctcggg acatgtggag agcctactct 120

gacatgagag aagccaatta catcggctca gacaaatact tccatgctcg ggggaactat 180

gatgctgcca aaaggggacc tgggggtgtc tgggctgcag aagcgatcag cgatgccaga 240

gagaatatcc agagattctt tggccatggt gcggaggact cgctggctga tcaggctgcc 300

aatgaatggg gcaggagtgg caaagacccc aatcacttcc gacctgctgg cctgcctgag 360

aaatactga 369

<210>2

<211>122

<212>PRT

<213>人

<400>2

Met Lys Leu Leu Thr G1y Leu Val Phe Cys Ser Leu Val Leu Gly Val

1 5 10 15

Ser Ser Arg Ser Phe Phe Ser Phe Leu Gly Glu Ala Phe Asp Gly Ala

20 25 30

Arg Asp Met Trp Arg Ala Tyr Ser Asp Met Arg Glu Ala Asn Tyr Ile

35 40 45

Gly Ser Asp Lys Tyr Phe His Ala Arg Gly Asn Tyr Asp Ala Ala Lys

50 55 60

Arg Gly Pro Gly Gly Val Trp Ala Ala Glu Ala Ile Ser Asp Ala Arg

65 70 75 80

Glu Asn Ile Gln Arg Phe Phe Gly His Gly Ala Glu Asp Ser Leu Ala

85 90 95

Asp Gln Ala Ala Asn Glu Trp Gly Arg Ser Gly Lys Asp Pro Asn His

100 105 110

Phe Arg Pro Ala Gly Leu Pro Glu Lys Tyr

115 120

<210>3

<211>570

<212>DNA

<213>人

<400>3

agggacccgc agctcagcta cagcacagat cagcaccatg aagcttctca cgggcctggt 60

tttctgctcc ttggtcctga gtgtcagcag ccgaagcttc ttttcgttcc ttggcgaggc 120

ttttgatggg gctcgggaca tgtggagagc ctactctgac atgagagaag ccaattacat 180

cggctcagac aaatacttcc atgctcgggg gaactatgat gctgccaaaa ggggacctgg 240

gggtgcctgg gccgcagaag tgatcagcaa tgccagagag aatatccaga gactcacagg 300

ccatggtgcg gaggactcgc tggccgatca ggctgccaat aaatggggca ggagtggcag 360

agaccccaat cacttccgac ctgctggcct gcctgagaaa tactgagctt cctcttcact 420

ctgctctcag gagacctggc tatgaggccc tcggggcagg gatacaaagt tagtgaggtc 480

tatgtccaga gaagctgaga tatggcatat aataggcatc taataaatgc ttaagaggtc 540

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 570

<210>4

<211>122

<212>PRT

<213>人

<400>4

Met Lys Leu Leu Thr Gly Leu Val Phe Cys Ser Leu Val Leu Ser Val

1 5 10 15

Ser Ser Arg Ser Phe Phe Ser Phe Leu Gly Glu Ala Phe Asp Gly Ala

20 25 30

Arg Asp Met Trp Arg Ala Tyr Ser Asp Met Arg Glu Ala Asn Tyr Ile

35 40 45

Gly Ser Asp Lys Tyr Phe His Ala Arg Gly Asn Tyr Asp Ala Ala Lys

50 55 60

Arg Gly Pro Gly Gly Ala Trp Ala Ala Glu Val Ile Ser Asn Ala Arg

65 70 75 80

Glu Asn Ile Gln Arg Leu Thr Gly His Gly Ala Glu Asp Ser Leu Ala

85 90 95

Asp Gln Ala Ala Asn Lys Trp Gly Arg Ser Gly Arg Asp Pro Asn His

100 105 110

Phe Arg Pro Ala Gly Leu Pro Glu Lys Tyr

115 120

<210>5

<211>4286

<212>DNA

<213>人

<400>5

gatggttgac aactcccctc ctcttccccc tcttctactg tctactcctg ggaccaagtg 60

agccacgcca gctcagatac tacactgacc acagggaatc ccaccttttc caaggaatgg 120

aagttgtgta gggaatattc aaatgttgct tagcattgcc ttagataaga accaaaggga 180

cagggaaatc ctctgacagc tatctgcctt ataactttca ttttactgtg cctaaaatat 240

gctcagaacc cagaaagagg cataattcct aattttggca ggctctaatc taaaataatg 300

attctcaaac atggtgtgac ttttgtctat ttgctttatc ctgggtcact gctcctcttc 360

tgtcagatac tgggattcca atgagacaaa tggaaatgga gacgtagacc ctctgacctt 420

ctatctttta tctatacaca tacacctgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgcgtgtg 480

taaaaccgag tgggtttttt tcttggaatg aaagaatgga ctaacattac aaaaaataaa 540

aacttgaaac agaatgtgta ttatccttgg ttgtgtttcc ttggccctgc agcaggatga 600

agctctccac tggcatcatt ttctgctccc tggtcctggg tgtcagcagc caaggatggt 660

taacattcct caaggcagct ggccaaggtg aggtccacag gatagggggc aggaggctgc 720

ttctggctgc ccccaggatg cagctgagca gaggccacat ccccactggg caaaggtgct 780

agtgatgcca cagatggata gagaaggggc atggtttttc ataagcgtgg ttcctcatgc 840

ttttctggac agctttgaca ctcttctatg aggatcctcc agccgaggtc gcataaggtg 900

tgagctgcct cttttcagca ggaccatgag agagatgtgg agttgagggg tgcatgttcc 960

cataataccg gtggggctct actgccccct agtgggaaat ctgggacagt tcatgtctat 1020

gtctcctggg aagccaggaa gcaggtggat caaaagtgtg aggcgagtcc atggggaagc 1080

tgaacggagc caaccgtccc cataaaaaca accaagctta gctgagattt taatacgtac 1140

taggcactgt ttaaatgtac taatgaattg gtttccatca tttagtccta tgatgcaagc 1200

agcattatcc cttaacagag aagctaacac acacacacac acacacacac taacacacac 1260

acacacacac acacacacac aaaccccaag atacgtaaag aagttccaaa gcagagcagg 1320

attaacccag gcagtcttgc tctgcagaac ttgctcttaa tcaaggtact ctgctgcttt 1380

caaaacaaga gtttcggatt tgtgaacaca tagctcatcc tttatctaag aaatggcaaa 1440

taggatgtgg tgcctttgga aggtaagtct agctccactt atcccagtaa aacctacagt 1500

gaattacctt gatggtggtt ctactggggc ttatatatgg ccaggaaact gctagcaaga 1560

gaaatatacc ccgagggctg ggcacagtgg ctcacacctg taatcccagc actttgggag 1620

gctgaggtgg gcagatcacc tgaggtcaag agttcgagac cagcctggcc aacatggcga 1680

aatcctgtct ctactaaaaa tacagaaatt agccgggtgt ggtggcatgc gcctataatc 1740

ccagcctctc gggaggctga gggagaagaa ttgcttgaac tcaggaggca gaggttgcag 1800

tgagctgtga tcacaccact gcactccagc ctaggagaca gagcaagact ccatctagag 1860

agacagagag agagagagag ggagaaatat accccactag ccataataaa gtggcaaaat 1920

tttgttttca gaatgcagta ttttaaattt caggtattat tatttttctg agtctctgaa 1980

aaatggtttt aaggatttgc ttttaatcct atttacatgt tcacacactc aactacaaat 2040

atctttcatt ccttaggtta atatttttca aagggttgtt ctgggaccac ttgcgtgaga 2100

atcacctgga ttctgggatg ctttgtgaaa tgaaatgaag attcccgggt ccatacccta 2160

ccccctgccc ccaacagcca cagtctcttg ggacagagcc tagaaatctt gcctttgcta 2220

agcacctcgg tagattttta tgcacagcaa aggttgagaa ccactacctc ttgttttgct 2280

gctgaaagtg ataaaatgtg ccaggaattt tggaagtact tattaagcca atctgaacat 2340

caaggagcca tttaagtcag taactcagag gaataagtag agtaaaaatg tcataaactc 2400

tcaataaaag caatcaattt aacaccagga gtaataaatg cataaaatga agatgagtta 2460

tctaatagag aaattatata aaccatgatt ataactctat atttgagttc ccccttttcc 2520

gtaatcagtt aattttctaa aaaatcttcg tcacttaatt ctagcttgat cagatccctt 2580

cagtccgtaa ctccctgctc ctcatcttag tttagccctt cttttttctt atgccacctt 2640

tcctaaggac cagagaagtg aaatgataat atattggcca cctacaatgt tctagacatc 2700

atacatgtat tttctctgct cttctgcata atcactgtga ggcaggcaat actcctccat 2760

ttcattgggg aggacattga ggttctgaac tagtgggtca gttgtccttt ttctgaattt 2820

gattacccag tagtataaag ctttcttagg taactcacct ttatcacttg ctgactgaat 2880

tctgacagat gtcagtttct aattatagcc tggacattca gatgtattca ggaccaagtt 2940

gtcctcactc tacctacagg catgaatttc tctcattgac taggttagga gcgccatatg 3000

tctgcagcct ccctcagaat cccctgtgtt ctcacaccag ggaactgagg gttccctggg 3060

tccttccagg tagaagttca ttgtacaatg aaacatccct taaggaccat ttcatctctt 3120

ctttaggtgc atcacacatg gttaaaacaa agtaataaca gaacttagaa tggaatcaaa 3180

cagaatgaaa cttacaccaa gtacaattct cattacatta acccagagaa gtgaaaagta 3240

gaagaatatt tatttcaagc caatataatt tccaagggct ttgttgaagg ctgaaatctt 3300

cgggaggaaa gtagtgagaa gaaaactgtt cattcctcta ttttcccagt atataattgt 3360

tttgatcatt ttctttcctt tccagggact aaagacatgt ggaaagccta ctctgacatg 3420

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tgtacaaagg gggcttgggg ctgtctgggc tacagaagtg atcaggtaat gcacattcct 3540

gatgttgcca ggaatgagtg agcagagctt gactgccttg gacagtcagg agagaggtaa 3600

gctccttgca gagaagttag aggctgcagc ccctcctcct cttgccctct ctctgcctgt 3660

gtgcttagtg cgagggtctg agtggatggt agaagtgagt gattcctcac cctccctctc 3720

tgggtgctgt tcatccagcc taggggtgcc cagcctggct gagtggggca gtgcccaggc 3780

agggtcattg ttttcacccc tccttccttg gccttcctgg gcttctccca gagtcctccc 3840

ttggaaagca gagaatggga aggtgggctg ttgctcactg gcctggtgat taatctcctt 3900

gcttgcctgg actacagcga tgccagagag aacgtccaga gactcacagg agaccatgca 3960

gaggattcgc tggctggcca ggctaccaac aaatggggcc agagtggcaa agaccccaat 4020

cacttccgac ctgctggcct gccagagaaa tactgagctt ccttttcaat ctgctctcag 4080

gagacctggc tgtgagcccc tgagggcagg gacatttgtt gacctacagt tactgaattc 4140

tatatcccta gtacttgata tagaacacat aaaaatgctt aataaatgct tgtgaaatcc 4200

agtttgttat tggaatctgg aagcagaata tgacagtctt cctgggatca tgggcctgtt 4260

tagtaccata gggatgacca ataaac 4286

<210>6

<211>193

<212>DNA

<213>人

<400>6

gttttctgct ccttggtcct gggtgtcagc agccgaagct tcttttcgtt ccttggcgag 60

gcttttgatg gggctcggga catgtggaga gcctactctg acatgagaga agccaattac 120

atcggctcag acaaatactt ccatgctcgg gggaactatg atgctgccaa aaggggacct 180

gggggtctgg gct 193

<210>7

<211>64

<212>PRT

<213>人

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Val Phe Cys Ser Leu Val Leu Gly Val Ser Ser Arg Ser Phe Phe Ser

1 5 10 15

Phe Leu Gly Glu Ala Phe Asp Gly Ala Arg Asp Met Trp Arg Ala Tyr

20 25 30

Ser Asp Met Arg Glu Ala Asn Tyr Ile Gly Ser Asp Lys Tyr Phe His

35 40 45

Ala Arg Gly Asn Tyr Asp Ala Ala Lys Arg Gly Pro Gly Gly Leu Gly

50 55 60

<210>8

<211>369

<212>DNA

<213>人

<400>8

atgaagcttc tcacgggcct ggttttctgc tccttggtcc tgagtgtcag cagccgaagc 60

ttcttttcgt tccttggcga ggcttttgat ggggctcggg acatgtggag agcctactct 120

gacatgagag aagccaatta catcggctca gacaaatact tccatgctcg ggggaactat 180

gatgctgcca aaaggggacc tgggggtgcc tgggccgcag aagtgatcag caatgccaga 240

gagaatatcc agagactcac aggccatggt gcggaggact cgctggccga tcaggctgce 300

aataaatggg gcaggagtgg cagagacccc aatcacttcc gacctgctgg cctgcctgag 360

aaatactga 369

<210>9

<211>122

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<213>人

<400>9

Met Lys Leu Leu Thr Gly Leu Val Phe Cys Ser Leu Val Leu Ser Val

1 5 10 15

Ser Ser Arg Ser Phe Phe Ser Phe Leu Gly Glu Ala Phe Asp Gly Ala

20 25 30

Arg Asp Met Trp Arg Ala Tyr Ser Asp Met Arg Glu Ala Asn Tyr Ile

35 40 45

Gly Ser Asp Lys Tyr Phe His Ala Arg Gly Asn Tyr Asp Ala Ala Lys

50 55 60

Arg Gly Pro Gly Gly Ala Trp Ala Ala Glu Val Ile Ser Asn Ala Arg

65 70 75 80

Glu Asn Ile Gln Arg Leu Thr Gly His Gly Ala Glu Asp Ser Leu Ala

85 90 95

Asp Gln Ala Ala Asn Lys Trp Gly Arg Ser Gly Arg Asp Pro Asn His

100 105 110

Phe Arg Pro Ala Gly Leu Pro Glu Lys Tyr

115 120

<210>10

<211>369

<212>DNA

<213>人

<400>10

atgaagcttc tcacgggcct ggttttctgc tccttggtcc tgagtgtcag cagccgaagc 60

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<210>11

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<212>PRT

<213>人

<400>11

Met Lys Leu Leu Thr Gly Leu Val Phe Cys Ser Leu Val Leu Ser Val

1 5 10 15

Ser Ser Arg Ser Phe Phe Ser Phe Leu Gly Glu Ala Phe Asp Gly Ala

20 25 30

Arg Asp Met Trp Arg Ala Tyr Ser Asp Met Arg Glu Ala Asn Tyr Ile

35 40 45

Gly Ser Asp Lys Tyr Phe His Ala Arg Gly Asn Tyr Asp Ala Ala Lys

50 55 60

Arg Gly Pro Gly Gly Ala Trp Ala Ala Glu Val Ile Ser Asn Ala Arg

65 70 75 80

Glu Asn Ile Gln Arg Leu Thr Gly Arg Gly Ala Glu Asp Ser Leu Ala

85 90 95

Asp Gln Ala Ala Asn Lys Trp Gly Arg Ser Gly Arg Asp Pro Asn His

100 105 110

Phe Arg Pro Ala Gly Leu Pro Glu Lys Tyr

115 120

<210>12

<211>10001

<212>DNA

<213>人

<400>12

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ctactaaaaa tacaaaaaaa ttagccgggc gtcatggtgg gcgcctgtag tcccagctac 120

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tttttagaat agtgctaaca cactattttc atgtttcagt ctcattttct catgagtaca 1860

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tgtacgtcat gtccacagag attatatttt agcttagcaa agataccaat tctcccaaat 3180

ttatttataa attaaatgca atgtgaatca aaatttccca ctggaatttt tatcaggaag 3240

gcaacaaatt ctttctttct ttctttcttt ctttctttat ttatttattt atttatttat 3300

ttatttattt ccttccttcc ttccttcctt ccttccttcc tttctttctt tctttctttc 3360

tttctttctt tctttctctc tctctttctc tctccccccc tctctctctc tctgtctctc 3420

tctctctctc tttctttctt tctttctttc tttcttttta agacaaagtc tggctctgtc 3480

acccaggctg cagtgcagtg atacaatctc agctcactga aacctcaacc tctccggcat 3540

caggtgaacc tcccacctca gccccccgag tagctgggac tacaggtgca caccactggg 3600

cctagataac tttttgtatt tattgtaaat aaacacaaaa aataaatatt ttgctcaggt 3660

tggtctggaa ctcctgggct caagcaatcc gcctgccttg gcctcccaaa gtgctagaat 3720

tacagttgtg agccaccaca cccagccaat aaattaattc tttatgatga ataagttatc 3780

tatgaaaatt aagtcagctg ggtgcggtgg ctcacgcctg taatcccagc actttgccgg 3840

gctgaagcag gtggatcacc tgaggttggg agttcaagac cagccggacc aacatagaga 3900

aaacccgtct ctactaaaaa tgcaaaatta gctgggtgtg gtggcatatg cctgtaatcc 3960

cagatactta ggaggctgag gcaggagaat tgcttgaacc cgggcggtgg aggttgcggt 4020

gagccaagat tgcaccattg cactccagcc tgggccacaa gagcgaaact ccatctcaaa 4080

aaaaaaaaaa gagaagttaa gtcaatgaaa agttaagtca attaaaaaag taagagctgt 4140

agtgtttaga tatatacaca cacacatata tatatattta tctttatata tgtatatata 4200

tcttttcctt tttttgagac cgagtctgtt tttgttgccc aggctggaat gcagtggcgc 4260

gatctctgct tactgcaacc tctgcctccc aggttcaagc gattctcgtg cctcagcctc 4320

ccgagtagct gggattacag gtgcctgccc ccatgcccgg ctaatttttg catttttagt 4380

agagacgggg tttcaccatg ttggccaggc tggtctcaaa ctcctgacct caggtgatcc 4440

accggcctca gcctcccaaa gtgctgggat tacaggtgtg agccaccgcg cccagccata 4500

tattttgctt ttcatctgca gctcctggat cctaactcct tgttatattg ttgggcactt 4560

taggcctcag taaacagaat ctctgtctat gaccttctcc tgtccttctt ccacctgccc 4620

aaagcaggac tctaatttga ttgtgggtca aaagactctc attccagaaa gggccttgcc 4680

tcatacccta gaggaaggaa tgctgcacag aaacgccaag tctgaacaga caagccttgc 4740

tgggtttata ccatatgctt tttgtccaat cacatttctt catggttgcc aatcatgcct 4800

atgtaatgaa gcctccataa gaacccagaa ggacagggtt cagagagttt ccacatagct 4860

gaacactatc tggagagtga acacttccta gagagtggca cacccagaga gatcatgaaa 4920

gctccacgcc cctttcccct tacctcgccc tccacatctc ttcatctgta tctttcataa 4980

tatcctttat aaataaacca gcaaatgtgt ttccctgagt tatgtgagtc actctagcaa 5040

attaatcgaa cccaaagagg gggtcatggg aaccccaact tgaagccagt cagtcagaag 5100

ttccagaggc ccagacttgc aactggggag aaagaggggg aggtcttggg gactgagccc 5160

ccaacctgtg ggatctgaca ctgtctccag gtaggtagtg ttggaactgc attggaggac 5220

actcctggtg tctgctgctt ggtgtgtggg gggaaaaacc cacacctttg gttacggagg 5280

tcttctgtgt tgacgatcat tgctgtttga gggcagaggg aatacacggt ttgagagagt 5340

ttttccctga catgagcgaa caggggacat gtactggtct ctgagatggg ggatcatggg 5400

atctgccaca agtggggaga ccactgtgac ccctgccaca gtctttgggg cagagggtgt 5460

ctcgggggca gaagaagcga gagttgtttg cagtagcagt tatgtccaaa gtgggcgcca 5520

ggaaagtagg gctgcccagc tttgaagagc ctccttactc ccagcctgaa tgaaaccatt 5580

tcctgtaaag cgctaagcat aaagtttgcc aatggtgatc cacggagaag tgagtgtacc 5640

ccaccccgcc atcccacagg gaatgtcgga gtgatgttga tctgcaccta gggaaggaat 5700

ggttcatgag atgtggtgga gatgctgagg gcccgtggac atcagatcct accctacctg 5760

tgccaggaca agccatgcgc atgtgcttca gaccaccagg caacaggagt gttgcatgag 5820

gtgtgaagca ggcacctggg aaagaggagt gtgaacagca gatgggacac actgggggca 5880

gtcataggaa tgaaatgtcc caggatggat gcaggcaggt tatggaggac ttagtgagga 5940

ctgctctcct ggtgggaatt gtggagtggg agactggatg gagactggag gtgttttaag 6000

tagggaagcc aacttgcaag ggtgaccagg gaaactatgt cggccaaggg tgagacatgc 6060

actggcaaga ctctcagaca gcctggctta tctaagcaga atgcttgagc catgccaacg 6120

gtgcctcgca agttgtatta atcatgtcct ttcattttgt gtttttggtg cttggcatct 6180

gggcccttgc tgaccctaag ggaccatttc tctcagagct agtcaagtcc tagacacagt 6240

aaatgactct cctgggagca tgccttccat gtgcagacca accaatcaag agtccacact 6300

cccacccacc tcctttatcg agctctcaca tcctggggca ccatccacct gccctaatca 6360

ctcaaggacc acgtcccaaa caactaggga cagcctccat gcccctgcac ccattgaaat 6420

tattcatgct agccaatcct aaacctgtgt atgctgccac accattcctt cctgcagaaa 6480

cacagtaagg actcttccta cacctcccct acttcctctg ctccctgact tacccactta 6540

cttcctggtg cagtcccctg tggcatagtt cactctcttc ttttgggaac tgtgaggcta 6600

tcttctcaat ggcagtcatc tcctgagctg ttggccttgc catacctaac taataataaa 6660

atctatattc taaggtaaaa acaaaacaga tagggtctca ctctgttgcc caggctggag 6720

tacagtggtg tgatcatgac tcactgcagc ctcaaactcc tgggctcaag cagttctctc 6780

atctcaacct cccgagtagc tgggactaca ggcacacacc accatgcctg gctagttttc 6840

ttattttttt tgtagataca gggtcttgtt atgttgccaa ggctggtctt gaactcctgg 6900

gctcaagtga tcctcctgcc ttggcctccc aaactgctgc aattacaggc atgagccacc 6960

atgcccagat cagaaatctt actaaaaata tttcaaggag aagagaaagc caaagatgtt 7020

gaatatatat atatgtgtgt gtgtgtgtgt gtatatatat gtatatatgt gtatatatgt 7080

gtgtatatat atatgtatat atgtatatat atatgtatat atgtatatat atatgtatat 7140

tggggcaggc gtggtggctc atgcctgtgg tcctaactac ttgagagtct gaggtgggag 7200

gattgcttga gcctgggaga tcgaggctgc tgtgagctga gactacacca ctgcactcca 7260

gcttgggtga cagagtgaga ccctgtctcc aaaaaaacaa aaagaaaaag aaaaaaagat 7320

ggaaaaagac atgaaaaaac aacaacagaa atacccacac atcatcaatg ggagggaagc 7380

atcttgaggc agcaaagcgg gagtgctagt agagaggcag atagggcgtt ggacctgagg 7440

cattaaggaa agtcaggatt tggagcttac aagtctctca ttggagatgg gatggggttg 7500

gaatgaatgt ctgagcaaac acaaagcatt tccttcccta atgactcccc accagtctaa 7560

agaatcccac attaggtcga acacggtggc tcacgcctgt aatcccagca ctttgggagg 7620

ccaaggcggg tggatcacga ggtcaggaga tcgagaccat cttggctaac atggtgaaac 7680

cccgtctcta ctaaaaatac aaaaaaatta gccgggcgtc atggtgggcg cctgtagtcc 7740

cagctactcg ggaggctgag gcaggagaat ggtgtgaacc cgggaggcag aacttgcagt 7800

gagcctagat cgcgccactg cactccagcc tgggggacaa aacgagactc tgtctcaaaa 7860

aaaaaaaaaa aaattcccac attagagttg gggaaatggg cagtcctggt ggaagttagg 7920

gaacagatct gggacacgtt atagccagct ggactacagg aggccataag ctcaattctt 7980

ccttgactct gaaaccttcc actggtccta atgcctagta attccaggcc tttcccagtt 8040

gtgccaggct tggaggtgaa cacatctatg tgccaagaag gaaaggtatg ccaagcaggg 8100

gcttaagtca tccttatcct cagtctgtct atgagtggta tgtacccctg ttccccttgc 8160

aagatctgct gggcttaggt ctcctggctg tgagttcccc atacctgggc ataaatgtag 8220

tgagcctgag ctcccaaata aggttggggg ctccagagag gtggagagcc ctgtgtctgg 8280

gaagtgtgcc cacccagcag gtctgaccag gaagatacac tgctagggtt atggaaaaag 8340

actatgtgtc aaggtctctt gattctccat ctaggcagag aatcatcttt aattaatggg 8400

aaactggaag gcaaattact tggacctgaa attacttttt gtttattgaa ccactgtgtt 8460

gtaaatcaca tctctctgaa ggcaagagaa atcagggagt tacaaaatgt ttaggagaac 8520

taaacaggac tccctgtttt gctaactaat cagattgaga caggctctct ggtaaatcta 8580

caaatttgat gttgttcaac cataagcagt aaatttccta tgctggattt tcctgacaat 8640

gaatgtaaaa ggaaaaggag tctttttgac aaaatatttt attgttcatc taaactgaaa 8700

aacttctcta tttttcaaaa ttgctatacg tgtttaaaga tgtagatatt tgaatagcct 8760

aactggtaca gaaggtttaa tgatgattcc taagacatac ctataaatta cttgaaattg 8820

aaacgaaatt taagaagaat tattggaatt ttccccttct caaatgagtt cttagtttca 8880

taaatactat acaagtccat aagagatttg gggttttgag atgtcttttt tttttttttt 8940

ttttcagacg gagtttcact gttgttgcct aggctggagt gcaatggcgt gacctcagct 9000

cactacaacc tccacctccc aggttcaagc gattttcctg cctcagcctc ccaagtagct 9060

gggattacag ggacctgcca caacgccaag ctaatgtttt gtatttttag tagagatggg 9120

gttcaccatg ttggccaggc ttgtctggaa ctcctgacct caggtgatcc acccgcctat 9180

aatttattac tcccttttgc aaatgtttga aaaggaataa agtgcaatat ttttaaacag 9240

aatgcagagt tctgttgtcc tttggcaata ccagtttcag actctgagag tggctcttgc 9300

tgttgccgac agtgggctga tgaccaaatc ccaacatgcc cccgctgcga gtccttcata 9360

acctgattca gtcatcactt agaggccagc aggcttcagg gaggcgtgag cctcagccaa 9420

caacctatag gggaagagac gcagaactca atgcagacag gtttggattc tggtgcctag 9480

agaatgcaac ttggaaactc tgagccagga gaaaagggtt ctctctccat gagagagtgt 9540

gggctttgtg agaagcgaca cacagcaaac acaattaaga gtccacccct cagcggggcg 9600

caggggctca cgcctgtaat cccagcactt tgggaggccg aggcgggtgg atcacgaggt 9660

caggagatca agaccatcct ggctaacaca gtgaaaccct gtctctacta aaaatacaaa 9720

aaaattagcc gggcgtggtg gcgggcgcct gtggtcccag ctactcggga ggctgaggca 9780

ggagaatggt gtgaacccgg gaggtggagc ttgcagtgag ccgagatcgc gccactgcac 9840

tccagcctgg gcgacagagc gagactccat ctcaaaaaaa aaaagaaaaa gaaaaagaaa 9900

aagagtccgc ccctgaatta aatagttggt ccttttgtgt tcctggtgat tcacttgcta 9960

agtggaagaa acaggaggga atcttttctc ctgccctcct g 10001

Claims

1.治疗青光眼的方法，所述方法包括向需要其的患者施用治疗有效量的组合物，该组合物包含与编码血清淀粉状蛋白A蛋白(SAA)的基因相互作用的活性剂，其中所述相互作用调节SAA的表达。

2.权利要求1的方法，其中所述活性剂为蛋白质、肽、肽模拟物、小分子或核酸。

3.治疗青光眼的方法，所述方法包括向需要其的患者施用治疗有效量的组合物，所述组合物包含抑制血清淀粉状蛋白A蛋白(SAA)与它的受体相互作用的活性剂。

4.权利要求3的方法，其中所述活性剂为过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)激动剂、速激肽和它们的非肽类似物或α-硫辛酸。

5.权利要求4的方法，其中活性剂为非诺贝特、Wy-14643、(4-氯-6-(2，3-二甲代苯氨基)-2-嘧啶基硫羟)-乙酸)、环丙贝特、2-溴代十六烷酸、必降脂和环格列酮(ciglitizone)、bafilomycin、concanamycin或pseudolaric acidB。

6.药物组合物，其包含治疗有效量的血清淀粉状蛋白A蛋白(SAA)拮抗剂和药物载体。

7.诊断青光眼的方法，所述方法包括：

a)从患者获得生物学样品；和

b)分析所述样品中编码血清淀粉状蛋白A蛋白(SAA)的基因、它的启动子区或它的基因产物的异常水平、异常生物活性或突变，其中编码SAA的所述基因包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3中给出的序列，所述启动子区包含SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：13中给出的序列，并且其中SAA包含SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4中给出的序列；

其中SAA基因或基因产物的异常的高水平或生物活性或突变表明诊断为青光眼。

8.权利要求7的方法，其中所述生物学样品为眼组织、泪液、房水、脑脊液、鼻拭子或颊拭子或血清。

9.权利要求8的方法，其中所述生物学样品包含小梁网细胞。

10.诊断患者中青光眼的方法，所述方法包括：

a)从患者收集细胞；

b)从所述细胞分离核酸；

d)检测扩增产物；

其中样品中SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3的异常水平或突变表明诊断为青光眼。

11.鉴定潜在用于治疗青光眼的活性剂的方法，所述方法包括步骤：

b)混合候选物质与细胞；和

其中存在所述候选物质时SAA蛋白质产生或基因表达的增加或减少表明所述候选物质是潜在用于治疗青光眼的活性剂。

12.鉴定潜在用于治疗青光眼的活性剂的方法，所述方法包括步骤：

a)形成反应混合物，其包含：

(i)包含SAA重组蛋白(SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4)的细胞或包含表达载体的细胞，所述表达载体包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3；和

(ii)受试化合物；和

13.鉴定潜在用于治疗青光眼的活性剂的方法，所述方法包括：

a)形成反应混合物，其包含：

(ii)SAA蛋白质结合配偶体；和

(iii)受试化合物；和