CN1980678A

CN1980678A - 治疗黄病毒感染的化合物

Info

Publication number: CN1980678A
Application number: CNA2004800117467A
Authority: CN
Inventors: L·J·施特伊弗
Original assignee: Pharmasset Ltd
Current assignee: Pharmasset Ltd
Priority date: 2003-03-28
Filing date: 2004-03-29
Publication date: 2007-06-13
Also published as: AU2004224575A1; US20050049204A1; BRPI0408846A; CA2529311A1; JP2006524227A; WO2004084796A3; EP1626692A4; WO2004084796A2; MXPA05010419A; EP1626692A2; RU2005133093A

Abstract

所公开的发明是，使用通式(I)－(V)的核苷或N－(膦酰乙酰基)－L－天冬氨酸(PALA)，或其药学上可接受的盐或前药，在宿主，包括动物，尤其是人中，治疗黄病毒感染，例如牛病毒性腹泻病毒("BVDV")、登革热病毒(DENV)、西尼罗河病毒(WNV)和丙型肝炎病毒(HCV)，以及异常的细胞增殖的组合物及方法。

Description

治疗黄病毒感染的化合物

相关申请的交叉引用

本申请要求200.年3月28日提交的美国临时申请60/458,635的优先权

发明领域

本发明涉及治疗黄病毒感染，如牛病毒性腹泻病毒(“BVDV”)、登革热病毒(DENV)、西尼罗河病毒(WNV)和丙型肝炎病毒(HCV)以及异常细胞增殖的化合物和方法。

发明背景

黄病毒

黄病毒科家族至少包括3个不同的属：瘟病毒属，它可导致牛和猪的疾病；黄病毒属，它是导致例如登革热和黄热病的疾病的主要原因；丙型肝炎病毒属，其唯一成员是HCV。黄病毒属包括大于68个成员，基于血清学关联性分组(Calisher等，J.Gen.Virol，1993，70，37-43)。临床表现各不相同，包括发热、脑炎和出血热(野外病毒学(Fields Virology)，编者：Fields，B.N.，Knipe，D.M.和Howley，P.M.，Lippincott-Raven出版社，Philadelphia，PA，1996，第31章，931-959)。全球关心的与人类疾病相关的黄病毒属包括登革出血热病毒(DHF)、黄热病病毒、西尼罗河病毒、休克综合症和日本脑炎病毒(Halstead，S.B.，Rev.Infect.Dis.，1984，6，251-264；Halstead，S.B.，Science，239：476-481，1988；Monath，T.P.，New Eng.J.Med.，1988，319，641-643).

瘟病毒属包括牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、猪霍乱病毒(CSFV，也称为猪瘟病毒)和绵羊瘟病毒(BDV)(Moennig，V.等，Adv.Vir.Res.1992，41，53-98)。家畜(牛、猪和羊)瘟病毒感染造成世界范围内的经济损失。BVDV导致牛的粘膜病且对于家畜工业具有显著的经济重要性(Meyers，G.和Thiel，H.-J.，Advances in Virus Research，1996，47，53-118；Moennig V.等，Adv.Vir.Res.1992，41，53-98)。尚未像动物瘟病毒那样全面了解人瘟病毒。然而，血清学研究显示人中有相当多的瘟病毒接触。

瘟病毒和丙型肝炎病毒是黄病毒科家族内紧密相关的病毒属。本家族内其它紧密相关的病毒包括GB病毒A、GB病毒A-类似物、GB病毒B和GB病毒C(也称为G型肝炎病毒，HGV)。丙型肝炎病毒属(丙型肝炎病毒；HCV)包括许多可感染人体的紧密相关但不同基因型的病毒。大约有6种HCV基因型和大于50种亚型。HCV是导致全球范围内肝炎的主要原因。大多数HCV感染是永久性的且大约75％的情况将发展为慢性肝病。慢性HCV感染可导致发展为肝硬化、肝细胞癌和肝衰竭。由于瘟病毒和丙型肝炎病毒的相似性，而丙型肝炎病毒在细胞培养中很难有效生长，所以，在HCV病毒研究中常常使用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)作为代用品。

瘟病毒和丙型肝炎病毒的遗传构成非常相似。这些正链RNA病毒具有单个大的开放式读码框(ORF)，编码所有病毒复制所需的病毒蛋白。这些蛋白表达为多聚蛋白，多聚蛋白被细胞和病毒编码的蛋白水解酶同时翻译加工或翻译后加工，产生成熟的病毒蛋白。负责病毒基因组RNA复制的病毒蛋白位于ORF的羧基末端的大约的三分之二以内，称为非结构(NS)蛋白。瘟病毒和丙型肝炎病毒的ORF非结构蛋白部分的基因构成和多聚蛋白加工非常相似。对于瘟病毒和丙型肝炎病毒，从非结构蛋白编码区域的氨基末端到ORF的羧基末端的连续序列，成熟非结构(NS)蛋白包含p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B。

瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS蛋白含有相同的具有特殊蛋白质功能特征的序列区域。例如，两种病毒的NS3蛋白都含有具有丝氨酸蛋白酶和解旋酶特征的氨基酸序列基元(Gorbalenya等，(1988)Nature333：22；Bazan和Fletterick(1989)Virology 171：637-639；Gorbalenya等，(1989)Nucleic Acid Res.17.3889-3897)。相似地，瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS5B蛋白都含有具有RNA介导的RNA聚合酶特征的基元(Koonin，E.V.和Dolja，V.V.(1993)Crit.Rev.Biochem.Molec.Biol.28：375-430)。

而且，瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS蛋白在病毒生命周期中的实际作用和功能是直接类似的。在两种情况下，NS3丝氨酸蛋白酶都可用于ORF中，其下游位置的多聚蛋白前体的所有蛋白酶解加工(Wiskerchen和Collett(1991)Virology 184：34l-350；Bartenschlager等，(1993)J.Virol.67：3835-3844；Eckart等，(1993)Biochem.Biophys.Res.Comm.192：399-406；Grakoui等，(1993)J.Virol.67：2832-2843；Grakoui等，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：10583-10587；Hijikata等，(1993)J.Virol.67：4665-4675；Tome等，(1993)J.Virol.67：4017-4026)。在两种情况下，NS4A蛋白都起NS3丝氨酸蛋白酶的辅助因子的作用(Bartenschlager等.(1994)J.Virol.68：5045-5055；Failla等.(1994)J.Virol.68：3753-3760；Lin等.(1994)68：8147-8157；Xu等.(1997)J.Virol.71：5312-5322)。两种病毒的NS3蛋白还都作为解旋酶起作用(Kim等.(1995)Biochem.Biophys.Res.Comm.215：160-166；Jin和Peterson(1995)Arch.Biochem.Biophys.323：47-53；Warrener和Collett(1995)J.Virol.69：1720-1726).最后，瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS5B蛋白都具有预见到的RNA-介导的RNA聚合酶的活性(Behrens等.(1996)EMBO J.15：12-22；Lachmann等.(1997)J.Virol.71：8416-8428；Yuan等.(1997)Biochem.Biophys.Res.Comm.232：231-235；Hagedorn，PCTWO 97/12033；Zhong等.(1998)J.Virol.72.9365-9369)。

干扰素(IFNs)是市售用于治疗慢性肝炎的化合物，已使用了近十年。IFNs是由免疫系统对病毒感染反应产生的糖蛋白。IFNs能抑制许多病毒的复制，包括HCV，并且，当用作丙型肝炎病毒感染唯一的治疗剂时，IFN可抑制血清HCV-RNA水平至检测不出。此外，IFN能使血清氨基转移酶水平恢复正常。遗憾的是，IFN的作用是暂时的且只有8％-9％的HCV慢性感染的患者能持久反应(Gary L.Davis.Gastroenterology118：S104-S114，2000)。

许多专利公开了使用基于干扰素的疗法来治疗HCV。例如，授权于Blatt等的美国专利5,980,884公开了使用共有序列干扰素再次治疗HCV感染的患者的方法。授权于Bazer等的美国专利5,942,223公开了使用羊或牛干扰素τ的抗-HCV疗法。授权于Alber的美国专利公开了白细胞介素-12和α干扰素联合疗法用于治疗包括HCV感染性疾病。授权于Glue等的美国专利5,908,621公开了使用聚乙二醇修饰的干扰素用于治疗HCV。授权于Chretien等的美国专利5,849,696公开了单独使用或与干扰素联合使用胸腺激素来治疗HCV。授权于Valtuena等的美国专利5,830,455公开了使用干扰素和自由基清除剂的HCV联合疗法。授权于Imakawa的美国专利5,738,845公开了使用人干扰素τ蛋白治疗HCV。其它基于干扰素的HCV治疗公开在授权于Testa等的美国专利5,676,942、授权于Blatt等的美国专利5,372,808和美国专利5,849,696中。

利巴韦林(1-β-D-呋喃核糖基-1-1，2，4-三唑-3-甲酰胺)是合成的不诱导干扰素的广谱抗病毒核苷类似物。以商品名Virazole^TM销售(默克索引(The Merck Index)，第11版，编者：Budavari，S.，Merck & Co.，Inc.，Rahway，NJ，p1304，1989)；Rebetol(Schering Plough)和Co-Pegasus(Roche)。美国专利3,798,209和RE29,835(ICN Pharmaceuticals)公开并主张利巴韦林的权利。利巴韦林结构上类似于鸟嘌呤核苷，具有抵抗几种DNA和RNA病毒包括黄病毒科的体外活性(Gary L.Davis.Gastroenterology118：S104-S114，2000)。美国专利4,211,771(授权于ICN Pharmaceuticals)公开了使用利巴韦林作为抗病毒剂。利巴韦林能降低40％患者的血清氨基转移酶至正常水平，但其不能降低HCV-RNA的血清水平(Gary L.Davis.Gastroenterology 118：S104-S114，2000)。因此，单独使用利巴韦林不能有效降低病毒RNA水平。此外，利巴韦林具有显著的毒性且可引起贫血。

Schering-Plough以Rebetol胶囊(200mg)形式销售利巴韦林，给予HCV感染患者。美国FDA已经批准了Rebetol胶囊与Schering的干扰素α-2b产品IntronA和PEG-Intron^TM联用，以治疗慢性HCV感染，但Rebetol胶囊未被批准单独用于治疗(即与Intron A和PEG-Intron无关而单独施用)，Rebetol胶囊尚未批准单独施用(即不含IntronA或PEG-Intron而单独施用)。Hoffman La Roche在欧洲和美国以商品名Co-Pegasus销售利巴韦林，也是与干扰素联用治疗HCV。其它α干扰素产品包括Roferon-A(Hoffmann-La Roche)，Infergen(Intermune，原来是Amgen的产品)和Wellferon(Wellcome Foundation)，它们现已被FDA批准用于HCV单独疗法。现开发用于HCV的干扰素产品包括：Roche公司的Roferon-A(干扰素α-2a)、Roche公司的PEGASYS(聚乙二醇化的干扰素α-2a)、InterMune公司的INFERGEN(干扰素acon-1)、Viragen公司的OMNIFERON(天然干扰素)、Human Genome Sciences公司的ALBUFERON、Ares-Serono公司的REBIF(干扰素β-1a)、BioMedicine公司的Omega Interferon、Amarillo Biosciences公司的口服干扰素α和InterMune公司的干扰素γ-1b。

已报道组合使用IFN和利巴韦林治疗HCV感染在IFN患者的首次治疗中是有效的(Battaglia，A.M.等，Ann.Pharmacother.34：487-494，2000)。组合疗法在肝炎发展前和组织学疾病存在时都是有效的(Berenguer，M.等.Antivir.Ther.3(Suppl.3)：125-136，1998)。目前，HCV最有效的疗法是聚乙二醇化的干扰素和利巴韦林的联合治疗(2002 NIHConsensus Development Conference on the Management of Hepatitis C)。然而，联合治疗的副作用可是显著的，包括溶血、流感样症状、贫血和精神疲劳(Gary L. Davis.Gastroenterology 118：S104-S114，2000)。

目前，临床开发的治疗丙型肝炎病毒的其它化合物包括：Schering-Plough公司的白细胞介素-10、Interneuron公司的IP-501、Vertex公司的Merimebodib VX-497、Endo Labs Solvay公司的AMANTADINE(金刚烷胺)、RPI公司的HEPTAZYME、Idun Pharma公司的IDN-6556、XTL公司的XTL-002、Chiron公司的HCV/MF59、NABI公司的CIVACIR、ICN公司的LEVOVIRIN、ICN公司的VIRAMIDINE、Sci Clone公司的ZADAXIN(胸腺激素α-1)、Maxim公司的CEPLENE(二盐酸组胺)、Vertex/Eli Lilly公司的VX 950/LY 570310、Isis Pharmaceutical/Elan公司的ISIS 14803、Idun Pharmaceuticals，Inc.公司的IDN-6556和AKROSPharma.公司的JTK 003。

Idenix Pharmaceuticals，Ltd.公开了支链核苷及其在HCV与黄病毒和瘟病毒治疗中的使用，公开于美国专利出版物2003/0050229 A1和美国专利出版物2003/0060400 A1中，该专利对应于国际出版物WO 01/90121和WO 01/92282。在人和其它宿主动物中治疗丙型肝炎感染(和黄病毒和瘟病毒)的方法公开于Idenix出版物中，其包括给予有效量的生物活性1’、2’、3’或4’-支链β-D或β-L核苷或其药学上可接受的盐或其前药，单独给药或任选地与药学上可接受的载体联合给药。也可见于WO 03/026589和WO 03/026675。Idenix Pharmaceuticals，Ltd.还公开了药学上可接受的支链核苷前药，及其以前药形式在HCV与黄病毒和瘟病毒治疗中的应用。见PCT出版物WO 04/002422、WO 04/002999和WO 04/003000。

Emory University和University of Georgia Research Foundation，Inc.(UGARF)在美国专利6,348,587中公开了使用2’-氟核苷治疗HCV。也可见于国际专利出版物WO 99/43691。

BioChem Pharma Inc.(现为Shire Biochem，Inc.)在国际出版物WO01/32153(PCT/CA00/01316；2000年11月3日申请)中公开了使用多种1，3-二氧戊烷核苷来治疗黄病毒科感染。

BioChem Pharma Inc.(现为Shire Biochem，Inc.)还在国际出版物WO01/60315(PCT/CA01/00197；2001年2月19日申请)中公开了多种其它2’-卤代、2’-羟基和2’-烷氧基核苷来治疗黄病毒感染。

ICN Pharmaceuticals，Inc.在美国专利6,495,677和6,573,248中公开了多种用于调节免疫反应的核苷类似物。也可见于于WO 98/16184、WO01/68663，和WO 02/03997。

美国专利2003/083307 A1和2003/008841 A1，以及相应的国际专利出版物WO 02/18404(PCT/EP01/09633；2001年8月21目申请)；F.Hoffmann-La Roche AG申请的WO 02/100415和WO 02/094289公开了多种用于治疗HCV RNA复制的核苷类似物。

Pharmasset Limited在WO 02/32920、WO 01/79246、WO 02/48165、WO 03/068162、WO 03/068164和2004/013298中公开了多种核苷和抗代谢物来治疗各种病毒，包括黄病毒，尤其是HCV。

Merck & Co.，Inc.和Isis Pharmaceuticals在美国专利出版物2002/0147160和对应的国际专利出版物WO 02/057425(PCT/US02/01531；2002年1月18日申请)和WO 02/057287(PCT/US02/03086；2002年1月18日申请)中公开了多种核苷，尤其是几种吡咯并嘧啶核苷，来治其疗复制依赖于RNA-依赖性RNA聚合酶的病毒，包括黄病毒科，尤其是HCV。也可见于WO 2004/003138、WO 2004/007512和WO 2004/009020。

Ribapharm申请的美国专利出版物2003/028013 A1和国际专利出版物WO 03/051899、WO 03/061576、WO 03/062255、WO 03/062256、WO03/062257和WO 03/061385的目的也是使用某种核苷类似物治疗丙型肝炎病毒。

异常的细胞增殖

在多细胞生物体中，细胞的分化、生长、机能和死亡是由分子水平机制的复杂网络来调节的。在健康动物或人体中，这些机制使细胞实现其功能并以既定速率死亡。

多种因素，包括遗传突变、感染、接触毒素、自身免疫性疾病和良性或恶性肿瘤诱导，可引起异常的细胞增殖，特别是过度增殖。

许多皮肤病症与细胞过度增殖有关。例如，银屑病是人体皮肤的良性疾病，通常其特征为增厚的鳞屑覆盖的斑点。这种并是由不明原因的表皮细胞增殖引起的。在正常皮肤中，细胞从基底层移动到上面颗粒层所需的时间约为5周。银屑病时，特别是由于增殖细胞数量的增加和分裂细胞比例的增加，所需时间仅为6-9天(G.Grove，Int.J.Dermatol.18：111，1979)。在美国大约有2％的人口患有银屑病，即约3％美国白人，约1％美国黑人和很少美国土著人。湿疹也与明显的表皮过度增殖有关。由于皮肤细胞过度增殖导致的其它疾病包括特应性皮炎、扁平苔藓、疣、寻常型天疱疮、光线性角化病、基底细胞癌和鳞状细胞癌。

其它过度增殖细胞病症包括血管增殖疾病、纤维化疾病、自身免疫性疾病、移植物抗宿主反应、肿瘤和癌症。

血管增殖疾病包括生血管疾病和血管原疾病。血管组织中斑块发展过程中的平滑肌细胞增殖可导致诸如再狭窄、视网膜病变和动脉粥样硬化的疾病。对动脉管壁的内皮和平滑肌损伤的过度炎症增殖反应可导致动脉粥样硬化的晚期病变(Ross，R. Nature，1993，362：801-809)。细胞迁移和细胞增殖都在动脉粥样硬化病变中起作用。

纤维性疾病常常是由于细胞外基质的异常形成引起的。纤维性疾病包括肝硬化和肾小球系膜增殖细胞病变。肝硬化的特征在于细胞外基质成分的增加导致肝脏伤痕的形成。肝硬化可导致诸如肝硬变的疾病。病毒感染如肝炎也可导致增加的细胞外基质，增加的细胞外基质导致肝脏伤痕。脂细胞在肝硬化中起着重要作用。

肾小球系膜细胞异常增殖导致肾小球系膜疾病。肾小球系膜多度增殖细胞疾病包括各种人的肾脏病，如肾小球肾炎、糖尿病肾病、恶性肾硬化、血栓形成性微血管病、移植排斥和肾小球病。

增殖成分的另一种疾病是类风湿性关节炎。通常认为类风湿性关节炎是与自身反应性T细胞活性有关的自身免疫疾病(例如，见Harris，E.D.，Jr.，The New England Journal of Medicine，1990，322：1277-1289)，其是由抗胶原和IgE的自身抗体所导致的疾病。

可包括异常细胞增殖成分的其它疾病大体上包括Behcet’s综合症、急性呼吸窘迫综合症(ARDS)、缺血性心脏病、透析后综合症、白血病、获得性免疫缺陷综合症、血管炎、脂质组织细胞增多病、感染性休克和炎症。

肿瘤，也称为新生物，是细胞增殖不受控制且不断增加的新生组织。良性肿瘤不具有侵入和转移的特性，通常由纤维囊环绕。恶性肿瘤(即癌症)能够侵入和转移。恶性肿瘤比良性肿瘤还表现为更大程度的退行发育(即细胞分化及定向为另一种细胞和轴结构能力的丧失)。

每年大概有1,200,000美国人诊断为癌症，其中，8,000是儿童。此外，仅在美国，每年就有500,000美国人死于癌症。男性中，前列腺癌和肺癌是主要致死原因，而女性中，乳腺癌和肺癌是主要致死原因。在美国，估计癌症相关花费大约占疾病治疗总花费的10％(见CNN.Cancer.Facts：http://www.cnn.com/HEALTH/9511/conquer_cancer/facts/index.html，第2页，July 18，1999)。

目前，用各种类型的化合物，包括烷化剂、抗代谢剂、天然产物、酶、生物反应调节剂、混合药剂、放射性药物(例如，Y-90标记激素或抗体)、激素和拮抗剂来治疗增殖疾病。

与治疗异常增殖细胞(包括癌症)有关的毒性部分是由于药物对疾病和正常细胞缺乏选择性。为了克服此限制，正在研究在增殖疾病治疗中，增加特异性因而降低药物毒性的治疗发案。越来越多地研究的一种该方案是药物靶向。

考虑到这些与黄病毒科感染和/或异常增殖细胞(包括癌症)有关的疾病的严重程度，及其在动物(包括人)中的渗透性，需要提供化合物、方法和组合物来治疗感染黄病毒科，包括黄病毒、瘟病毒或丙型肝炎病毒属(如HCV)和/或异常增殖细胞的宿主，包括动物，尤其是人。

本发明的具体目的是提供化合物、方法和组合物来治疗感染黄病毒科病毒感染的宿主，包括动物，尤其是人。

本发明的目的还是提供化合物、方法和组合物来治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的的宿主，包括动物，尤其是人。

本发明的另一个目的是提供化合物、方法和组合物来治疗异常细胞增殖的的宿主，包括动物，尤其是人。

本发明的另一个目的是提供化合物、方法和组合物来治疗恶性肿瘤的宿主，包括动物，尤其是人。

发明概述

本发明提供通式(I)-(V)的β-D或β-L核苷或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯，来治疗感染黄病毒科，包括黄病毒、瘟病毒或丙型肝炎病毒属(如HCV)的宿主。可选地，β-D或β-L核苷(I)-(V)或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯，可用于治疗异常细胞增殖。

本发明还提供抗病毒或抗增殖有效的药剂，N-(膦酰乙酰基)-L-天冬氨酸(PALA)，或其药学上接受的盐和/或前药，来治疗来治疗感染黄病毒科，包括黄病毒、瘟病毒或丙型肝炎病毒属(如HCV)的宿主。可选地，PALA或其药学上可接受的盐或前药可用于治疗异常细胞增殖。

具体地说，本发明还包括治疗或预防以下疾病的方法：

(a)黄病毒科感染，包括丙型肝炎病毒属(HCV)、瘟病毒属(BVDV，CSFV，BDV)或黄病毒属(登革热病毒、日本脑炎病毒(包括西尼罗河病毒)和黄热病病毒)的所有成员；和/或

(b)异常的细胞增殖，包括恶性肿瘤。

在一个本发明实施例中，抗病毒或抗增殖有效的核苷是通式(I)-(II)的碳环核苷酸：

或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯，式中：

每个D是氢、烷基、酰基、一磷酸基、二磷酸基、三磷酸基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磷脂或氨基酸；

每个W¹和W²独立地是N、CH、CX²或CR¹；

每个X¹独立地是NH₂、NHR⁴、NR⁴R⁴’、NHOR⁴、NR⁴NR⁴’R⁴”、OH、OR⁴、SH或SR⁴；

每个X²独立地是氢、卤素(F、Cl、Br或I)、NH₂、NHR⁴、NR⁴R⁴’、NHOR⁴、NR⁴NR⁴’R⁴”、OH、OR⁴、SH或SR⁴；

每个Z是CH₂、CHR¹、NH或NHR⁴；

每个R¹独立地是氢、任选取代或未取代的低级烷基、任选取代或未取代的低级烯基、任选取代或未取代的低级炔基、卤素(F、Cl、Br或I)、CH₃(Me)、CH₂CH₃(Et)或CF₃；

每个R²独立地是氢、卤素(F、Cl、Br或I)、OH、SH、OCH₃、SCH₃、NH₂、NHCH₃、CN或N₃；

每个R³独立地是氢、卤素(F、Cl、Br或I)、OH、SH、OCH₃、SCH₃、NH₂、NHCH₃、CN或N₃；和

每个R⁴、R⁴’、R⁴”、R⁵、R⁵’和R⁵”独立地是氢、任选取代或未取代的低级烷基、低级卤烷基、任选取代或未取代的低级烯基、低级卤烯基、任选取代或未取代的芳基、芳烷基如取代或未取代的苯基或苄基、或任选取代或未取代的酰基。

在一个实施例中，碳环核苷是β-D-对映异构体。

在另一个实施例中，抗病毒或抗增殖有效的核苷是通式(IV)-(V)的核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药(包括酯)，式中：

每个W¹、W²、X¹、X²、Z、R⁴、R⁴’、R⁴”、R⁵’、R⁵’和R⁵”与前文所定义的相同；

每个D²独立地是OD，其中，D与前文所定义的相同，OH；SH；NH₂或NHR⁴；

每个W³独立地是N、CH、CX¹或CR¹’；

每个R¹’独立地是氢、任选取代或未取代的低级烷基、任选取代或未取代的低级烯基、任选取代或未取代的低级炔基、任选取代或未取代的芳基、烷基芳基、卤素(F、Cl、Br或I)、CH₃(Me)、CF₃、CH₂CH₃(Et)、Pr、i-Pr、n-Bu、i-Bu、t-Bu、CH₂CN、CH₂OH、CH₂OR⁵、酰基、烷基酰基、酰胺、烷基酰胺、CH₂CO₂CH₃、CH₂C(＝O)NH₂、CH₂C(＝S)NH₂、C(＝O)NH₂、C(＝O)NHR⁵、C(＝O)NR⁵R⁵’、C(＝S)NH₂、C(＝NH)NH₂、C(＝O)NHOH、C(＝O)NHNH₂、烷基胺、卤代烷基胺、CH₂NH₃、NH₂、NHCH₃、N(CH₃)₂、NHCH₂CH₃、NHR⁵、NR⁵R⁵’、NHOR⁵、NR⁵NHR⁵’、NR⁵NR⁵’R⁵”、OH、OCH₃、OCH₂CH₃、OR⁵、SH、SCH₃、SCH₂CH₃、SR⁵、NO₂、NO、N₃、CO₂H、CP₂R⁵或CN；

每个R²’独立地是氢、卤素(F、Cl、Br或I)、任选取代或未取代的烷基、任选取代或未取代的低级烷基、卤烷基、低级卤烷基、CH₃、CF₃、CH₂OH、CH₂F、CH₂SH、CH₂SCH₃、CH₂N₃、CH₂NH₂、OH、SH、OCH₃、SCH₃、NH₂、NHCH₃、N₃、CH＝CH₂、CN、CH₂NH₂、CH₂OH或CO₂H；

每个R³’独立地是氢、卤素(F、Cl、Br或I)、任选取代或未取代的烷基、任选取代或未取代的低级烷基、卤烷基、低级卤烷基、CH₃、CF₃、CH₂OH、CH₂F、CH₂SH、CH₂SCH₃、CH₂N₃、CH₂NH₂、OH、SH、OCH₃、SCH₃、NH₂、NHCH₃、N₃、CH＝CH₂、CN、CH₂NH₂、CH₂OH或CO₂H；

每个Z¹独立地是O、S、Se、CH₂、CF₂、C(＝O)、C(＝CH₂)、NH、NR⁵或C(＝Y¹)；和

每个Z²独立地是O、S、Se、C(＝O)、C(＝CH₂)、NH、NR⁵或C(＝Y¹)；和

每个Y¹是O、S、Se、NH或NHR⁴；

以使环中杂原子不多于三个(即环中不多于三个O、S、N或Se)。

在一个实施例中，核苷是β-D-对映异构体。

在一个具体实施例中，抗病毒或抗增殖有效核苷是通式如下的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯。

在另一个具体实施例中，抗病毒或抗增殖有效核苷是通式如下的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯。

在另一个实施例中，抗病毒或抗增殖有效药剂是N-(膦酰乙酰基)-L-天冬氨酸(PALA)或其药学上可接受的盐和/或前药。

附图简要说明

图1提供本发明抗病毒或抗增殖有效药剂的各种非限制性例子的结构，以及已知的抗病毒或抗增殖有效核苷、利巴韦林、2’-C-甲基-呋喃核糖基胞嘧啶(2C-CH₃-C)和2’-C-甲基-呋喃核糖基腺苷(2C-CH₃-A)的结构，在本文中用作对比实施例。

图2是阐明含HCV复制子的Huh7细胞生长动力学的线状图。HCV复制子细胞以约10⁵细胞/孔，接种于6孔板中。在14天的时间内，每天收集细胞并计数，用Q-RT-PCR定量rRNA和HCV RNA。■：rRNA；：HCV RNA；●：细胞计数。所示曲线是至少3次不同实验的平均值。

图3是HCV RNA和rRNA的降低与给予剂量函数的线状图。在受试化合物存在下，HCV复制子细胞以约10³细胞/孔，接种于96孔板中，孵育96小时。用Q-RT-PCR定量rRNA和HCV RNA。●：HCV RNA水平；○：rRNA水平；：HCV RNA校正后水平(＝减去rRNA)，以产生细胞毒性。A：2’-C-CH₃-C；B：利巴韦林；C：CP-C；D：3DU；E：CPE-C；F：dFdC。所示图表是至少三次独立实验的平均结果。表1中给出的EC₉₀值是从HCV细胞毒性校正曲线得到的。

图4是接触抗HCV化合物后，细胞生长动力学和HCV RNA水平的线状图。HCV复制子细胞以约10⁴细胞/孔，接种于24孔板中。在7天的时间内，每天收集细胞并计数，用Q-RT-PCR定量rRNA和HCV RNA。A：IFN-α-2a，浓度为100 IU/ml；B：利巴韦林，浓度为100μM；C：2’-C-CH₃-C浓度为100μM；D：2’-C-CH₃-A，浓度为20μM。●：不存在化合物时的细胞增殖；○：化合物存在下的细胞增殖；：未处理细胞的HCV RNA水平；：化合物存在下HCV RNA的水平。所示曲线是至少3次不同实验的平均值。

图5是接触所选择的抗代谢剂后，细胞生长动力学和HCV RNA水平的线状图。实验方案与图4相同。A：dFdC，浓度为1μM；B：3-DU，浓度为100μM；C：CP-C，浓度为25μM；D：CPE-C，浓度为2.5μM；●：不存在化合物时的细胞增殖；○：化合物存在下的细胞增殖；：未处理细胞的HCV RNA水平；：化合物存在下HCV RNA的水平。所示曲线是至少3次不同实验的平均值。

图6是接触PALA和吡唑呋喃菌素后，细胞生长动力学和HCV RNA水平的剂量-反应的线状图。实验方案与图4相同。

图7是从头合成嘧啶的生化途径示意图。不同酶的催化步骤用箭头表示，例如天冬氨酸氨甲酰转移酶：EC 2.1.3.2；二氢乳清酸酶：EC 3.5.2.3；乳清酸还原酶：EC 1.3.1.14；二氢乳清酸氧化酶：EC 1.3.3.1；二氢乳清酸酯脱氢酶：EC 1.3.99.11；乳清酸磷酸核糖基转移酶：EC 2.4.2.10；乳清苷-5′-一磷酸脱羧酶：EC 4.1.1.23；CTP合成酶：E.C.6.3.4.2。

发明详述

本发明提供通式(I)-(V)的核苷或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯，来治疗感染黄病毒科，包括黄病毒、瘟病毒或丙型肝炎病毒(如HCV)的宿主。可选地，β-D或β-L核苷(I)-(V)或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯，可用于治疗异常细胞增殖。

本发明还提供抗病毒或抗增殖有效的药剂，N-(膦酰乙酰基)-L-天冬氨酸(PALA)，或其药学上可接受的盐和/或前药，来治疗感染黄病毒科，包括黄病毒、瘟病毒或丙型肝炎病毒如HCV的宿主。可选地，PALA或其药学上可接受的盐或前药可用于治疗异常细胞增殖。

在一个实施例中，提供了治疗或预防黄病毒科感染，包括黄病毒、瘟病毒或丙型肝炎病毒如HCV以及异常细胞增殖的方法，该方法包括给予抗病毒或抗增殖有效量的本发明药剂，或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯。

在另一个实施例中，提供了治疗或预防黄病毒科感染的方法，该方法包括给予抗病毒量的本发明药剂，或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯。

在另一个实施例中，提供了治疗或预防特征为异常细胞增殖的疾病的方法，该方法包括给予抗增殖有效量的本发明药剂，或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯。

在另一个实施例中，本发明提供了使用本文描述的一种化合物，或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯，来治疗显示病毒感染或异常细胞增殖的宿主。

在另一个实施例中，本发明提供了使用本文描述的一种化合物，或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯，来制备治疗病毒感染或异常细胞增殖的药物。

在另一个实施例中，本发明提供了一种药物组合物，该组合物包含抗病毒或抗增殖有效量的本发明药剂，或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯，以及药学上可接受的载体或稀释剂。

在另一个实施例中，提供了一种药物组合物，该组合物包含本发明药剂，或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯，以及一种或多种其它抗病毒或抗增殖有效的药剂。

在一个另外的实施例中，提供了治疗患有病毒相关疾病的哺乳动物的方法，该方法包括给予哺乳动物药学上有效量的本发明药剂，或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯。

在一个另外的实施例中，提供了治疗患有与异常细胞增殖有关的疾病的哺乳动物的方法，该方法包括给予哺乳动物药学上有效量的本发明药剂，或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯。

具体地说，本发明包括所述化合物，其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯，治疗或预防方法，或治疗或预防的应用方法，或制备治疗或预防以下疾病的药物的应用：

(a)黄病毒科感染，包括丙型肝炎病毒属(HCV)、瘟病毒属(BVDV，CSFV，BDV)或黄病毒属(登革热病毒、日本脑炎病毒(包括西尼罗河病毒)和黄热病病毒)的所有成员；和

(b)异常细胞增殖，包括恶性肿瘤。

本发明的一方面，评价了用于几种核苷酸生物合成途径的抗代谢剂的抗复制子活性和对稳定转染双顺反子亚基因HCV复制子的Huh7细胞的分子毒性，并发现其具有抗HCV活性。通过同时定量HCV RNA水平和rRNA水平，并研究细胞生长动力学与每个细胞HCV RNA拷贝数之间的关系，来评价抗HCV活性。

在HCV复制子细胞中，具体的抗病毒效果的参数定义如下：试验化合物应(i)不或仅最低限度地干扰强制性指数级细胞生长，(ii)不或仅最低限度地降低细胞宿主的RNA水平，和(iii)与对照试验和处理前的样品相比，降低每个细胞的HCV RNA拷贝数。

不受理论的限制，虽然某些受试抗代谢剂在细胞生长动力学上可产生抑制细胞效应，但是发现几种核糖嘧啶从头合成抑制剂(例如，dFdC，CP-C，CPE-C，3DU，PALA和吡唑呋喃菌素)可更大地降低每个细胞HCVRNA的拷贝数；某些其它抗代谢剂，如IMPDH抑制剂(例如，利巴韦林、噻唑呋林、麦考酚酸、C2-MAD)，核糖核苷酸还原酶抑制剂(例如，tezacytabine、去铁胺)和胸腺嘧啶核苷酸合成酶抑制剂(例如2’-脱氧-5FU)，可显示抗病毒效果，但是，当校正为细胞RNA水平的降低时，特异性可显著降低。因此，核糖嘧啶从头合成途径的抗代谢剂可模拟在融合复制子细胞中所观察到的现象，即细胞生长抑制以及每个细胞复制子拷贝数的急剧降低。

本发明化合物

在本发明一个实施例中，抗病毒或抗增殖有效核苷是通式(I)-(II)的碳环核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯，式中：

每个W¹和W²独立地是N、CH、CX²或CR¹；

每个Z是CH₂、CHR¹、NH或NH⁴；

每个R⁴、R⁴’、R⁴”、R⁵、R⁵’和R⁵”独立地是氢、任选取代或未取代的低级烷基、低级卤烷基、任选取代或未取代的低级烯基、低级卤烯基、如下取代或未取代的芳基、芳烷基如未取代或取代的苯基或苄基、或如下取代或未取代的酰基。

在一个实施例中，碳环核苷是β-D-对映异构体。

在另一个实施例中，抗病毒或抗增殖有效核苷是通式(IV)-(V)的核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯，式中：

每个W¹、W²、X¹、X²、Z、R⁴、R⁴’、R⁴”、R⁵、R⁵’和R⁵”与前文所定义的相同；

每个D²独立地是OD，其中，D与前文所定义的相同；OH；SH；NH₂或NHR⁴；

每个W³独立地是N、CH、CX¹或CR¹’；

每个R¹’独立地是氢、任选取代或未取代的低级烷基、任选取代或未取代的低级烯基、任选取代或未取代的低级炔基、任选取代或未取代的芳基、烷基芳基、卤素(F、Cl、Br或I)、CH₃(Me)、CF₃、CH₂CH₃(Et)、Pr、i-Pr、n-Bu、i-Bu、t-Bu、CH₂CN、CH₂OH、CH₂OR⁵、酰基、烷基酰基、酰胺、烷基酰胺、CH₂CO₂CH₃、CH₂C(＝O)NH₂、CH₂C(＝S)NH₂、C(＝O)NH₂、C(＝O)NHR⁵、C(＝O)NR⁵R⁵’、C(＝S)NH₂、C(＝NH)NH₂、C(＝O)NHOH、C(＝O)NHNH₂、烷基胺、卤烷基胺、CH₂NH₃、NH₂、NHCH₃、N(CH₃)₂、NHCH₂CH₃、NHR⁵、NR⁵R⁵’、NHOR⁵、NR⁵NHR⁵’、NR⁵NR⁵’R⁵”、OH、OCH₃、OCH₂CH₃、OR⁵、SH、SCH₃、SCH₂CH₃、SR⁵、NO₂、NO、N₃、CO₂H、CO₂R⁵或CN；

每个Z¹独立地是O、S、Se、CH₂、CF₂、C(＝O)、C(＝CH₂)、NH、NR⁵、或C(＝Y¹)；和

每个Y¹是O、S、Se、NH是NHR⁴；

使得存在不多于三个环杂原子(即环中不多于三个O、S、N或Se)。

在一个实施例中，核苷是β-D-对映异构体。

在一个具体实施例中，Z¹是O。在另一个实施例中，Z¹是S。在另一个实施例中，Z¹是CH₂。在另一个实施例中，Z¹是CF₂。

在一个副实施例中，抗病毒或抗增殖有效核苷是通式(IV-a^*)的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯，式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个Z²独立地是O、S、Se、C(＝O)、C(＝S)、C(＝CH₂)、NH或NR⁵；

每个W¹和W²独立地是N或CR¹’；

每个R¹’独立地是氢、卤素(F、Cl、Br或I)、CH₃(Me)、CH₂CH₃(Et)、Pr、i-Pr、n-Bu、i-Bu、t-Bu、CH₂CN、CH₂CO₂CH₃、CH₂C(＝O)NH₂、CH₂C(＝S)NH₂、C(＝O)NH₂、C(＝S)NH₂、C(＝NH)NH₂、C(＝O)NHOH、C(＝O)NHNH₂、CH₂NH₃、NH₂、NHCH₃、N(CH₃)₂、NHCH₂CH₃、OH、OCH₃、OCH₂CH₃、SH、SCH₃、SCH₂CH₃、CO₂H、CN或CHR^*NH₂；

每个R^*是氢或卤素(F、Cl、Br或I)；

每个R²’独立地是氢、卤素(F、Cl、Br或I)、CH₃、CH₂OH、CH₂F、CH₂SH、CH₂SCH₃、CH₂N₃、CH₂NH₂、OH、OCH₃或NH₂；

每个R³’独立地是氢、卤素(F、Cl、Br或I)、CH₃、CH₂OH、CH₂F、CH₂SH、CH₂SCH₃、CH₂N₃、CH₂NH₂、OH、OCH₃或NH₂；

每个R⁴独立地是氢、任选取代或未取代的低级烷基、低级卤烷基、任选取代或未取代的低级烯基、低级卤烯基、任选取代或未取代的芳基、芳烷基如未取代或取代的苯基或苄基、或任选取代或未取代的酰基；和

每个R⁵独立地是氢、CH₃(Me)、CH₂CH₃(Et)、Pr、i-Pr、n-Bu、i-Bu、t-Bu、CH₂CN、CH₂CO₂CH₃、CH₂C(＝O)NH₂、CH₂C(＝S)NH₂、C(＝O)NH₂或C(＝S)NH₂；

在一个具体的实施例中，Z¹是O。在另一个实施例中，Z¹是S。在另一个实施例中，Z¹是CH₂。在另一个实施例中，Z¹是CF₂。

在另一个副实施例中，抗病毒或抗增殖有效核苷是通式(IV-b^*)的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯，式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个Y¹独立地是O、S、Se或NH；

每个W¹和W²独立地是N或CR¹’；

每个W³独立地是N、CH、CCH₃、CF、CCl、CBr、CI、CCO₂H、CCO₂CH₃、CCONH₂、CC(＝S)NH₂或CCN；

每个R¹’独立地是氢、卤素(F、Cl、Br或I)、CH₃(Me)、CH₂CH₃(Et)、Pr、i-Pr、n-Bu、i-Bu、t-Bu、CH₂CN、CH₂CO₂CH₃、CH₂C(＝O)NH₂、CH₂C(＝S)NH₂、C(＝O)NH₂、C(＝S)NH₂、NH₂、NHCH₃、N(CH₃)₂、NHCH₂CH₃、OH、OCH₃、OCH₂CH₃、SH、SCH₃、SCH₂CH₃、CO₂H或CN：

每个R³’独立地是氢、卤素(F、Cl、Br或I)、CH₃、CH₂OH、CH₂F、CH₂SH、CH₂SCH₃、CH₂N₃、CH₂NH₂、OH、OCH₃或NH₂；和

每个R⁴独立地是氢、任选取代或未取代的低级烷基、低级卤烷基、任选取代或未取代的低级烯基、低级卤烯基、任选取代或未取代的芳基、芳烷基如未取代或取代的苯基或苄基、或任选取代或未取代的酰基。

在另一个实施例中，抗病毒或抗增殖有效核苷是通式(IV-c^*)的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯，式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个Y¹独立地是O、S、Se或NH；

每个W¹、W²和W³独立地是N或CR¹’；

在另一个副实施例中，抗病毒或抗增殖有效核苷是通式(IV-d^*)的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯，式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个R¹’独立地是CN、CO₂CH₃、C(＝O)NH₂、C(＝S)NH₂或C(＝NH)NH₂；

每个R¹”独立地是OH、SH、NH₂或NHR⁵；

每个R²’独立地是氢或卤素(F、Cl、Br或I)、CH₃、CH₂OH、CH₂F、CH₂SH、CH₂SCH₃、CH₂N₃、CH₂NH₂、OH、OCH₃或NH₂；

每个R³’独立地是氢或卤素(F、Cl、Br或I)、CH₃、CH₂OH、CH₂F、CH₂SH、CH₂SCH₃、CH₂N₃、CH₂NH₂、OH、OCH₃或NH₂；

每个R⁵独立地是氢、任选取代或未取代的低级烷基、或任选取代或未取代的酰基。

或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯。

在另一个实施例中，抗病毒或抗增殖有效核苷是通式如下的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯。

在另一个实施例中，抗病毒或抗增殖有效药剂是N-(膦酰乙酰基)-L-天冬氨酸(PALA)、或其药学上可接受的盐和/或前药。

立体异构与同质多晶

具有手性中心的本发明化合物可以光学活性和外消旋体形式存在并被分离为光学活性形式。一些化合物可显示同质多晶现象。本发明包括本发明化合物的外消旋、光学活性、同质多晶、或立体异构形式、或其混合物，这些化合物具有本文所述有用的性质。光学活性形式可通过，例如，重结晶技术拆分外消旋形式、从光学活性起始物质合成、手性合成，使用手性固定相色谱分离或酶法拆分来制备。

如下所示，核苷包含至少两个关键手性碳原子(^*)。一般来说，就糖环系统而言，核苷的手性碳上的取代基[特定的嘌呤或嘧啶碱基(当使用糖环结构编号时称为C1取代基)和CH₂OH(称为C4取代基)]可为顺式(在同一侧)或反式(在相对侧)。顺式和反式外消旋体都是由一对光学异构体构成。因此，每个化合物有四个独立的立体异构体。这四个立体异构体表示为以下构型(当在水平面上面向糖部分，使-O-部分在后面)：(1)顺式，两个基团都在“上”，称为β-D；(2)镜像，即顺式，两个基团都在“下”，该镜像称为β-L；(3)反式，C4取代基在“上”，C1取代基在“下”(称为α-D)；和(4)反式，C4取代基在“下”，C1取代基在“上”(称为α-L)。两个顺式对映异构体合在一起称为β-对映异构体的外消旋混合物，两个反式对映异构体称为α-对映异构体的外消旋混合物。

所述化合物四种可能的立体异构体如下所示：

顺式(β)

反式(α)

定义

本文所用术语“烷基”，除非另有说明，是指饱和直链、支链、环状、伯、仲、叔烃，包括但不限于C₁-C₁₀，特别包括低级烷基，如甲基、三氟甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、环戊基、异戊基、新戊基、己基、异己基、环己基、环己基甲基、3-甲基戊基、2，2-二甲基丁基和2，3-二甲基丁基。烷基可任选地被一种或多种选自以下的基团取代：烷基、卤素(例如CH₂F或CF₃)、卤烷基、羟基、羧基、酰基、酰氧基、氨基、酰氨基、羧基衍生物、烷基氨基、二烷基氨基、芳氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、叠氮基、巯基、亚胺、磺酸、硫酸、磺酰基、硫烷基、亚磺酰基、氨磺酰基、酯、羧酸、酰胺、膦酰基、压膦酰基、磷酰基、膦、硫酯、硫醚、酰卤、酐、肟、hydrozine、氨基甲酸酯、膦酸、磷酸酯、膦酸酯或任何其它不抑制化合物药理活性的可获得的功能基团，不保护或需要时保护，正如本领域技术人员所知，例如，Greene等，有机合成中的保护基团(Protective Groups in Organic Synthesis)，John Wiley and Sons，第二版，1991所述，其内容参考包括在此。

本文所用术语“低级烷基”，除非另有说明，是指C₁-C₄饱和直链、支链、或合适时环状(例如环丙基)的烷基，包括取代和未取代形式。非限制性的例子包括甲基、三氟甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、丁基、异丁基和叔丁基。

术语“亚烷基”或“链烯基”是指直链或支链结构的饱和烃二基(hydrocarbyldiyl radical)，包括但不限于有2-10个碳原子的基团。包括在此术语范围内的是亚甲基、1，2-乙烷-二基、1，1-乙烷-二基、1，3-丙烷-二基、1，2-丙烷-二基、1，3-丁烷-二基、1，4-丁烷-二基等。本文所公开的亚烷基或其它二价部分可任选地被一种或多种选自以下的基团取代：烷基、卤素、卤烷基、羟基、羧基、酰基、酰氧基、氨基、酰氨基、羧基衍生物、烷基氨基、叠氮基、二烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、巯基、亚胺、磺酰基、硫烷基、亚磺酰基、氨磺酰基、酯、羧酸、酰胺、膦酰基、压膦酰基、磷酰基、膦、硫酯、硫醚、卤化酰基、酐、肟、hydrozine、氨基甲酸酯、膦酸、膦酸酯或任何其它不抑制化合药理活性的可获得的功能基团，不保护或需要时保护，正如本领域技术人员所知，例如，Greene等，有机合成中的保护基团，JohnWiley and Sons，第二版，1991所述，其内容参考包括在此。

本文所用术语“炔基”，除非另有说明，包括直链或支链，具有至少2个碳原子且包含至少一个碳碳三键的非环状烃。炔基的例子包括但不限于，乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-甲基-1-丁炔基、4-戊炔、1-己炔基、2-己炔基(hecynyl)、5-己炔基、1-庚炔基、2-庚炔基、6-庚炔基、1-辛炔基、2-辛炔基、7-辛炔基、1-壬炔基、2-壬炔基、8-壬炔基、1-癸炔基、2-癸炔基和9-癸炔基。

本文所用术语“芳基”，除非另有说明，是指苯基、联苯基或萘基，优选苯基。术语包括取代和未取代的基团。芳基可被一种或多种选自以下的基团取代：溴、氯、氟、碘、羟基、叠氮基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸、膦酸、磷酸酯或膦酸酯，不保护或需要时保护，正如本领域技术人员所知，例如，Greene等，有机合成中的保护基团，John Wiley and Sons，第二版，1991所述。

本文所用术语“芳烷基”，除非另有说明，是指通过上文所定义的烷基连接到分子的上文所定义的芳基。本文所用术语“烷芳基”或“烷基芳基”，除非另有说明，是指上文定义的烷基通过上文所定义的芳基连接到分子上。每个这种基团中，烷基可如上述任选地被取代，芳基可任选被一种或多种选自以下的基团取代：烷基、卤素、卤烷基、羟基、羧基、酰基、酰氧基、氨基、酰氨基、叠氮基、羧基衍生物、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、巯基、亚胺、磺酰基、硫烷基、亚磺酰基、氨磺酰基、酯、羧酸、酰胺、膦酰基、亚膦酰基、磷酰基、膦、硫酯、硫醚、卤化酰基、酐、肟、hydrozine、氨基甲酸酯、膦酸、膦酸酯或任何其它不抑制化合药理活性的可获得的功能基团，不保护或需要时保护，正如本领域技术人员所知，例如，Greene等，有机合成中的保护基团，John Wiley and Sons，第二版，1991所述，其内容参考包括在此。特别包括在此术语芳基范围内的是苯基；萘基；苯甲基；苯乙基；3，4，5-三羟基苯基；3，4，5-三甲氧基苯基；3，4，5-三乙氧基-苯基；4-氯苯基；4-甲基苯基；3，5-二-叔丁基-4-羟基苯基；4-氟苯基；4-氯-1-萘基；2-甲基-1-萘基甲基；2-萘基甲基；4-氯苯基甲基；4-叔丁基苯基；4-叔丁基苯基甲基等。

术语“烷基氨基”或“芳基氨基”是分别指具有一个或具有两个烷基或芳基取代基的氨基。

本文所用术语“卤素”包括氟、氯、溴和碘。

整篇说明书使用术语“对映体富集的”来描述一种核苷，该核苷包含至少约95％，优选至少96％，更优选至少97％，更优选至少98％，尤其更优选至少约99％或更多的该核苷的单个对映体。在本说明书中，如果指核苷的一种具体构型(D或L)时，除非另有说明，假定核苷是对映体富集的核苷。

关于病毒干感染，本文所用术语“宿主”，是指病毒可在其中复制的单细胞或多细胞生物，包括细胞系和动物，优选人。可选地，宿主可携带一部分病毒基因组，本发明化合物可改变其复制和功能。术语宿主尤其是指被感染的细胞，被全部或部分病毒基因组转染的细胞和动物，具体地说，是灵长类(包括黑猩猩)和人。

关于异常的细胞增殖，术语“宿主”是指可模拟异常细胞增殖的单细胞或多细胞生物。术语宿主尤其是指，由于自然或非自然原因(例如，分别由于基因突变或基因工程)异常增殖的细胞，和动物，尤其是灵长类(包括黑猩猩)和人。在大多数本发明的动物应用中，宿主是人。然而，在某些适应症中，本发明明显地期望兽医应用(如牛的牛病毒性腹泻病毒，猪的猪瘟病毒和羊的绵羊瘟病毒)。

整篇说明书使用术语“药学上可接受的盐或前药”来描述化合物任何药学上可接受的形式(如酯、磷酸酯、酯或相关基团的盐)，给予患者后，能提供活性化合物。药学上可接受的盐包括那些来自药学上可接受的无机或有机碱和酸的盐。合适的盐包括那些来自碱金属如钾和钠，碱土金属如钙和镁，药学领域公知的多种其它酸的盐。药学上可接受的前药是指，在宿主中代谢，如水解或氧化形成本发明化合物的化合物。前药典型的例子包括在活性化合物的功能基团上具有生物不稳定保护基团的化合物。前药包括可被氧化、还原、胺化、脱胺化、羟基化、脱羟基化、水解、脱水、烷基化、去烷基化、酰基化、去酰基、磷酰基化、去磷酰基化的化合物，以产生活性化合物。

药学上可接受的盐和前药

当化合物具有足够的碱性或酸性以形成稳定的非毒性酸或碱盐时，以药学上可接受的盐的形式给予化合物是合适的。药学上可接受的盐包括那些来自药学上可接受的无机或有机碱或酸的盐。合适的盐包括那些来自碱金属如钾和钠，碱土金属如钙和镁，药学领域公知的多种其它酸的盐。具体地说，药学上可接受的盐的例子是与酸形成的有机酸加成盐，它可形成生理学上可接受的阴离子，例如，甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、丙二酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、α-酮基戊二酸盐和α-甘油磷酸盐。也可形成合适的无机盐，包括硫酸盐、硝酸盐、碳酸氢盐和碳酸盐。

可使用本领域公知的标准规程，例如通过使足够的碱性化合物如胺与能提供生理学上可接受的阴离子的合适的酸反应，得到药学上可接受的盐。也可制备碱金属(例如钠、钾、锂)或碱土金属(例如钙)的羧酸盐。

本文描述的任何核苷可作为核苷酸前药给予，以提高核苷酸的活性、生物利用度、稳定性或改变其性质。已知许多核苷酸前药配基。一般来说，核苷酸的单、二或三磷酸酯的烷基化、酰基化或其它亲脂修饰将提高核苷酸的稳定性。可代替磷酸酯基团上一个或多个氢原子的取代基的例子是烷基、芳基、甾体、碳水化合物包括糖、1，2-二酰基甘油和醇。许多如R.Jones和N.Bischofberger，Antiviral Research，27(1995)1-17所述。任何这些核苷酸可与已公开的核苷联用，得到所需的效果。

也可以5’-磷酸醚脂(phosphoether lipid)或5’-醚脂的形成提供活性核苷，公开于以下参考文献中，引用包括在此：Kucera，L.S.，N.Iyer，E.Leake，A.Raben，Modest E.K.，D.L.W.和C.Piantadosi.1990.“抑制感染性HIV-1生成并诱导缺损病毒形成的新型膜相互作用醚脂类似物”(“Novel membrane-interactive ether lipid analogs that inhibit infectiousHIV-l production and induce defective virus formation.”)AIDS Res.Hum.Retro Viruses.6：491-501；Piantadosi，C.，J.Marasco C.J.，S.L.Morris-Natschke，K.L.Meyer，F.Gumus，J.R.Surles，K.S.Ishaq，L.S.Kucera，N.Iyer，C.A.Wallen，S.Piantadosi和E.J.Modest.1991.“抗HIV活性的新型醚脂核苷共轭物的合成与评价”(“Synthesis and evaluation ofnovel ether lipid nucleoside conjugate.for anti-HIV activity.”)J.Med.Chem.34：1408.1414；Hosteller，K.Y.，D.D.Richman，D.A.Carson，L.M.Stuhmiller，G.M.T.van Wijk和H.van den Bosch.1992.“在CEM和HT4-6C细胞中，通过3’-脱氧胸腺嘧啶核苷肉豆蔻酰甘油二磷酸酯，3’-脱氧胸腺嘧啶核苷的一种脂质前药，极大抑制人免疫缺陷1型病毒复制”(“Greatly enhanced inhibition of human immunodeficiency virus type 1replication in CEM and HT4-6C cells by 3’-deoxythymidine diphosphatedimyristoylglycerol，a lipid prodrug of 3’-deoxythymidine.”Antimicrob.Agents Chemother.36：2025.2029；Hosetler，K.Y.，L.M.Stuhmiller，H.B.Lenting，H.van den Bosch和D.D.Richman，1990.“叠氮胸苷和其它抗病毒核苷的磷脂类似物的合成和抗逆转录病毒活性”(“Synthesis andantiretroviral activity of phopholipid analogs of azidothymidine and otherantiviral nucleosides.”)J.Biol.Chem.265：61127。

在一个实施例中，活性核苷作为SATE前药提供。

公开可共价结合于核苷的合适的亲脂性取代基，优选核苷的5’-OH位置或亲脂制备的美国专利的非限制性例子包括：美国专利5,149,794(Sep.22，1992，Yatvin等)；5,194,654(Mar.16，1993，Hostetler等)；5,223,263(June 29，1993，Hostetler等)；5,256,641(Oct.26，1993，Yatvin等)；5,411,947(May 2，1995，Hostetler等)；5,463,092(Oct.31，1995，Hostetler等)；5,543,389(Aug.6，1996，Yatvin等)；5,543,390(Aug.6，1996，Yatvin等)；5,543,391(Aug.6，1996，Yatvin等)；and 5,554,728(Sep.10，1996,Basava等)，所有专利通过引用包括在此。公开可结合本发明核苷的亲脂性取代基或亲脂制备的国外专利申请包括：WO 89/02733、WO90/00555、WO 91/16920、WO 91/18914、WO 93/00910、WO 94/26273、WO 96/15132、EP 0 350 287、EP 93917054.4和WO 91/19721。

药物组合物

可以任何本文所述适应症，包括黄病毒科病毒感染或异常细胞增殖，的治疗有效量，任选地与药学上可接受的添加剂、载体或赋形剂组合，来制备基于通式(I)-(V)的β-D或β-L化合物或PALA，或其药学上可接受的盐和/或前药，包括酯的药物组合物。治疗有效量可随着要治疗的感染或病况、其严重性、所应用的治疗方案、所用药剂的药动学性质以及受治疗的患者而改变。

根据本发明的一方面，本发明化合物优选与药学上可接受的载体混合的制剂。一般来说，优选以口服给药形式给予药物组合物，但也可通过非胃肠道、静脉内、肌内、经皮、含服、皮下、栓剂或其它途径给予制剂。静脉内和肌内制剂优选在无菌生理盐水中给予。本领域一般技术人员可在说明书公开范围内改进制剂，提供许多具体给药途径的制剂，而不会使本发明组合物不稳定或治疗活性降低。具体地说，例如，通过常规改进(盐制剂、酯化等)可容易地达到对所需化合物的改进以增加其在水中或在其它载体中的溶解性的改进。

在某些药物剂型中，优选化合物的前药形式，尤其是包括酰基化(乙酰化或其它)和醚衍生物，磷酸酯和各种本发明化合物的盐形式。本领域一般技术人员将认识到如何容易地改进本发明化合物至前药形式，以促进活性化合物的递送至宿主生物体或患者的靶部位。应用时，技术人员也将利用在递送所需化合物至宿主生物体或患者的靶部位中，前药形式有益的药动学参数，在黄病毒科(包括HCV)感染的治疗或与异常的细胞增殖相关疾病的治疗中，使化合物的期望效应最大。

根据本发明，包含在治疗活性制剂中化合物的量是治疗感染或病症，在优选的实施例中，是黄病毒科(包括HCV)感染或与异常细胞增殖相关的疾病的有效量。一般来说，药物剂型中本发明化合物的治疗有效剂量范围通常从约0.1mg/kg到约100mg/kg及以上，根据所用的化合物、治疗的疾病或感染和给药途径而定。为了本发明的目的，本发明组合物的预防有效剂量落在上文提及的治疗有效剂量相同的浓度范围内，且通常与治疗有效剂量相同。

活性化合物的给药可连续(静脉滴注)或每天多次口服(例如Q.I.D.、B.I.D.等)，可包括口服、局部、非胃肠道、肌内、静脉内、皮下、经皮(其包含渗透促进剂)、含服和栓剂给药，及其它常规给药。也可使用肠包衣的口服片剂以提高口服给药途径化合物的生物利用度和稳定性。最有效的剂型将视所选具体药剂的药动学性质，以及患者疾病的严重性而定。因为易于给药和预期良好的患者顺应性，尤其优选口服剂型。

为了制备本发明药物组合物，优选根据常规药物制剂技术，将治疗有效量的本发明一种或多种化合物与药学上可接受的载体混合，产生制剂。载体根据所选给药途径(例如口服或非胃肠道)制剂的形式，可具有各种形式。在制备口服剂型药物组合物中，可使用任何常规药物介质。因此，对于液体口服制剂如混悬剂、酏剂和溶液剂，可使用合适的载体和添加剂，包括水、乙二醇、油、醇、矫味剂、防腐剂、着色剂等。对于固体口服制剂如粉末剂、片剂、胶囊和固体制剂如栓剂，可使用合适的载体和添加剂，包括淀粉，糖载体如葡萄糖、甘露醇、乳糖和相关载体，稀释剂，成粒剂，润滑剂，粘合剂，崩解剂等。需要时，片剂或胶囊可通过标准技术肠包衣而缓释。这些剂型的使用可显著地影响患者对化合物的生物利用度。

对于非胃肠道制剂，载体通常包含无菌水溶液或水性氯化钠溶液，虽然也可包括其它成分，如那些增加分散性的成分。当使用无菌水溶液并保持其无菌时，组合物和载体也必须灭菌。也可制备注射用混悬剂，这种情况下，可应用合适的液体载体、助悬剂等。

通过常规方法也可制备脂质体混悬液(包括靶向病毒抗原的脂质体)，以产生药学上可接受的载体。其适用于递送本发明的游离核苷、酰基核苷或核苷化合物的磷酸酯前药形式。

在本发明尤其优选的实施例中，使用化合物和组合物治疗、预防或延缓黄病毒科(包括HCV)感染或与异常的细胞增殖相关的疾病的发生。优选地，将以口服剂型，剂量从约250毫克直到约1克及以上，至少每天一次，优选一天多达四次，给予组合物，用于治疗、预防或延缓感染或疾病的发生。优选口服给予本发明化合物，但也可非胃肠道、局部或栓剂形式给予。

因为在某些情况下对宿主细胞的低毒性，本发明化合物宜用于预防性防止黄病毒(包括HCV)感染或与异常的细胞增殖相关的疾病或防止与病毒感染或疾病相关的临床症状的发生。因此，本发明也包括预防性治疗病毒感染，尤其是黄病毒(包括HCV)感染或与异常的细胞增殖相关的疾病的方法。在这方面，本发明组合物用于防止或延缓黄病毒科(包括HCV)感染或与异常的细胞增殖相关疾病的发生。这种预防性方法包括给予需要这种治疗的患者或病毒或疾病易于发展的患者，一定量的本发明化合物，以有效缓解、防止或延缓病毒感染或疾病的发生。在本发明的预防性治疗中，优选使用的抗病毒或抗增殖化合物应低毒性，优选对患者无毒性。本发明该方面尤其优选所使用的化合物必须抗病毒或疾病最有效，且必须显示对患者的毒性最小。在黄病毒科(包括HCV)感染和与异常的细胞增殖相关疾病的情况下，用于治疗这些疾病状态的本发明化合物，可以与治疗性疗法相同的剂量范围给药(即对于口服剂型，每天从一次到四次，约250微克直到1克及以上)作为预防性药剂，以防止黄病毒科(包括HCV)感染或与异常的细胞增殖相关的疾病的发展，或可选地，延长黄病毒科(包括HCV)感染或与异常的细胞增殖相关疾病的发生，这些疾病以临床症状显示。

此外，可以组合或交替使用一种或多种抗病毒、抗HBV、抗HCV或治疗疱疹药剂或干扰素、抗癌或抗细菌药剂，包括其它本发明化合物，给予本发明化合物。某些本发明化合物可通过降低新陈代谢、分解代谢或其它化合物的失活，有效提高某些本发明药剂的生物活性，因而同时给药达到预期效果。

治疗黄病毒科感染的组合和交替疗法

已认识到，抗病毒剂长期治疗后可产生病毒的耐药变异体。耐药性一般是通过编码用于病毒复制循环的酶的基因的变异而产生的，最典型地，在HCV中是RNA依赖性RNA聚合酶。已显示，化合物可通过与第二、或是第三能诱导与主要药物引起的变异不同的变异的抗病毒化合物组合或交替给予，以延长、增强或恢复药物抗病毒感染的效力。换句话说，即可通过这种组合或交替疗法改变该药物的药动学、生物分布或其它参数。一般来说，相对于交替疗法通常优选组合疗法，因为它能诱导病毒的多重同时应激。

已鉴别为抗丙型肝炎病毒的活性药剂，因而可与一种或多种通式(I)-(V)或PALA的核苷组合或交替使用的药物的例子包括：

(1)干扰素

许多专利公开了使用基于干扰素的疗法治疗，黄病毒科，包括HCV。例如授权于Blatt等的美国专利5,980,884公开了使用共有序列干扰素复治HCV感染的患者。授权于Bazer等的美国专利5,942,223公开了使用羊或牛干扰素-τ的抗HCV疗。授权于Alber等的美国专利5,928,636公开了白细胞介素-12和干扰素α的组合疗法来治疗包括HCV的感染性疾病。授权于Chretien等的美国专利5,849,696公开了单独或与干扰素组合使用胸腺素来治疗HCV。授权于Valtuena等的美国专利5,830,455公开了应用干扰素和自由基清除剂的HCV组合疗法。授权于Imakawa的美国专利5,738,845公开了使用干扰素τ蛋白治疗HCV。其它基于干扰素的HCV治疗公开于Testa等的美国专利5,676,942、Blatt等的美国专利5,372,808、以及美国专利5,849,696。许多专利还公开了干扰素的聚乙二醇化形式，例如授权于Hoffmann-La Roche Inc的美国专利5,747,646、5,792,834和5,834,594；授权于Enzon的PCT出版物WO 99/32139和WO 99/32140；授权于Schering的WO 95/13090与美国专利5,738,846和5,711,944；以及授权于Glue等的美国专利5,908,621。

目前已批准干扰素α-2a和干扰素α-2b作为治疗HCV的单独疗法。ROFERON-A(Roche)是干扰素α-2a的重组形式。PEGASYS(Roche)是干扰素α-2a的聚乙二醇化(即聚乙二醇修饰)形式。INTRONA(Schering Corporation)是干扰素α-2b的重组形式，PEG-INTRON(Schering Corporation)是干扰素α-2b的聚乙二醇化形式。

治疗HCV的扰素α，以及干扰素β、γ、τ和ω的其它形式目前处于临床研究。例如，InterMune的INFERGEN(干扰素αcon-1)、Viragen的OMNIFERON(天然干扰素)、Human Genome Sciences的ALBUFERON、Ares-Serono的REBIF(干扰素β-1a)、BioMedicine的干扰素ω、Amarillo Biosciences的口服干扰素α，以及InterMune的干扰素γ、干扰素τ和干扰素γ-1b处于研究中。

(2)利巴韦林(Battaglia，A.M.等，Ann.Pharmacother，2000，.34，487-494)；Berenguer，M.等Antivir.Ther.，1998，3(Suppl.3)，125-136).

利巴韦林(1-β-D-呋喃核糖基-1-1，2，4-三唑-3-甲酰胺)是合成的不诱导干扰素的广谱抗病毒核苷类似物。以商品名Virazole^TM销售(The MerckIndex，第11版，编者：Budavari，S.，Merck & Co.，Inc.，Rahway，NJ，p1304，1989)；Rebetol(Schering Plough)和Co-Pegasus(Roche)。美国专利3,798,209和RE29,835(ICN Pharmaceuticals)公开并要求利巴韦林的权利。利巴韦林结构上类似于鸟嘌呤核苷，具有对抗一些DNA和RNA病毒包括黄病毒科的体外活性(Gary L.Davis.Gastroenterology 118：S104-S114，2000)。美国专利4,211,771(授权于ICN Pharmaceuticals)公开了使用利巴韦林作为抗病毒剂。利巴韦林能降低40％患者的血清氨基转移酶至正常水平，但其不能降低HCV-RNA的血清水平(Gary L.Davis.Gastroenterology 118：S104-S114，2000)。因此，单独使用利巴韦林不能有效降低病毒RNA水平。此外，利巴韦林具有显著的毒性且可引起贫血。

干扰素和利巴韦林的组合

慢性丙型肝炎的现行护理标准是α干扰素和利巴韦林的组合疗法。已报道组合使用干扰素和利巴韦林治疗HCV感染在IFN患者的首次治疗中是有效的(Battaglia，A.M.等，Ann.Pharmacother.34：487-494，2000)，对组织学疾病存在时患者的治疗也是有效的(Berenguer，M.等.Antivir.Ther.3(Suppl.3)：125-136，1998)。研究显示丙型肝炎患者对聚乙二醇化干扰素-α/利巴韦林组合疗法的反应超过对非聚乙二醇化干扰素α组合疗法的反应。然而，正如单独疗法一样，组合疗法期间发生明显的副作用，包括溶血、流感样症状、贫血和疲劳。(Gary L.Davis.Gastroenterology118：S104-S114，2000)。

PEG-INTRON(聚乙二醇化干扰素α-2b)和REBETOL(利巴韦林，USP)胶囊的组合疗法得自Schering Corporation。REBETOL(ScheringCorporation)还被批准与INTRONA(干扰素α-2b，重组物，ScheringCorporation)组合。Roche’s PEGASYS(聚乙二醇化干扰素α-2a)和COPEGUS(利巴韦林)也被批准用于治疗HCV。

Schering Corporation的PCT出版物WO 99/59621、WO 00/37110、WO 01/81359、WO 02/32414和WO 03/024461公开了聚乙二醇化干扰素α和利巴韦林组合疗法用于治疗HCV。Hoffmann-La Roche Inc的PCT出版物WO 99/15194、WO 99/64016和WO 00/24355也公开了使用聚乙二醇化干扰素α和利巴韦林组合疗法用于治疗HCV。

(3)基于底物的NS3蛋白酶抑制剂(例如，Attwood等，抗病毒肽衍生物(Antiviral peptide derivatives)，PCT WO 98/22496，1998；Attwood等，抗病毒化学与化疗(Antiviral Chemistry and Chemotherapy)1999，10，259-273；Attwood等，氨基酸衍生物作为抗病毒剂的制备和使用(Preparation and use of amino acid derivatives as anti-viral agents)，德国专利DE 19914474；Tung等，丝氨酸蛋白酶，特别是丙型肝炎病毒NS3蛋白酶的抑制剂(Inhibitors of serine proteases，particularly hepatitis C virusNS3 protease)，PCT WO 98/17679)，包括α酮基酰胺和肼基脲，以及以亲电体如硼酸或膦酸酯终端的抑制剂(Llinas-Brunet等，丙型肝炎抑制剂肽类似物(Hepatitis C inhibitor peptide analogues)，PCT WO 99/07734).

(4)不基于底物的抑制剂，例如，2，4，6-三羟基-3-硝基-苯甲酰胺衍生物(Sudo K.等，Biochemical and Biophysical Research Communications，1997，238，643-647；Sudo K.等Antiviral Chemistry and Chemotherapy，1998，9，186)，包括RD3-4082和RD3-4078，前者在酰胺上被14碳链取代，后者具有对苯氧基苯基；

(5)噻唑烷衍生物，反相HPLC分析显示与NS3/4A融合蛋白和NS5A/5B底物的相关性抑制作用(例如，Sudo K.等，Antiviral Research，1996，32，9-18)，特别是化合物RD-1-6250，其具有长链烷基取代的稠合的肉桂酰基部分，RD46205和RD46193；

(6)噻唑烷和苯甲酰苯胺(for example Kakiuchi N.等J.EBS Letters421，217-220；和Takeshita N.等Analytical Biochemistry，1997，247，242-246)；

(7)菲醌，分离自链霉菌属(例如，Sch 68631)的发酵培养基，SDS-PAGE和放射自显影分析，具有抗蛋白酶活性，(Chu M.等，Tetrahedron Letters，1996，37，7229-7232)，Sch 351633，分离自真菌Penicillium griscofuluum，闪烁迫近分析显示活性(Chu M.等，Bioorganic and Medicinal ChemistryLetters 9，1949-1952)；

(8)选择性NS3抑制剂，例如，基于大分子elgin c的选择性NS3抑制剂，分离自水蛭leech(Qasim M.A.等，Biochemistry，1997，36，1598-1607)；

(9)解旋酶抑制剂(例如Diana G.D.等，治疗丙型肝炎的化合物、组合物和方法(Compounds，compositions and methods for treatment of hepatitisC)，美国专利No.5,633,358；Diana G.D.等，治疗丙型肝炎的哌啶衍生物、其组合物及其使用(Piperidine derivatives，pharmaceutical compositionsthereof and their use inthe treatment of hepatitis C)，PCT WO 97/36554)；

(10)聚合酶抑制剂如核苷酸类似物，胶霉毒素(Ferrari R.等，Journal ofVirology，1999，73，1649-1654)，和天然产物浅蓝菌素(Lohmann V.等，Virology，1998，249，108-118)；

(11)反义硫代磷酸寡聚脱氧核苷酸(S-ODN)，与病毒的5’非编码区(NCR)的一段序列互补(Alt M.等，Hepatology，1995，22，707-717)，或含有NCR 3’端的核苷酸326-348以及位于HCV RNA中心编码区的核苷酸371-388(Alt M.等，Archives of Virology，1997，142，589-599；Galderisi U.等，Journal of Cellular Physiology，1999，181，251-257)；

(12)IRES依赖性翻译抑制剂(Ikeda N等，预防和治疗丙型肝炎的药剂(Agent for the prevention and treatment of hepatitis C)，日本专利JP-08268890；Kai Y.等，病毒疾病预防与治疗(Prevention and treatment ofviral diseases)，日本专利JP-10101591)。

(13)耐核酸酶核酶(例如Maccjak，D.J.等，Hepatology 1999，3O，abstract 995)。

(14)也研究了核苷类似物用于治疗黄病毒科感染。

在美国专利出版物2003/0050229 A1和美国专利出版物2003/0060400 A1，许多相当于国际出版物WO 01/9012 1和WO 01/92282中，Idenix Pharmaceuticals，Ltd.公开了支链核苷，及其在治疗HCV和黄病毒和瘟病毒中的应用。在人和其它宿主动物中治疗丙型肝炎感染(以及黄病毒和瘟病毒)的方法公开于Idenix出版物中，它包括给予有效剂量的生物活性1’，2’，3’或4’-支链β-D或β-L核苷或其药学上可接受的盐或前药，单独或组合给药，任选结合药学上可接受的载体。

公开使用某些核苷类似物治疗丙型肝炎病毒的其它专利申请包括：BioChem Pharma，Inc.(现为Shire Biochem，Inc.)提交的国际专利出版物WO 01/32153(PCT/CA00/01316；2000年11月3日申请)和WO 01/60315(PCT/CA01/00197；2001年2月19日申请)；Merck & Co.，Inc提交的美国专利出版物2002/0147160和相应的国际专利出版物WO 02/057425(PCT/US02/01531；2002年1月18日申请)和WO 02/057287(PCT/US02/03086；2002年1月18日申请)；美国专利出版物2003/083307A1和US 2003/008841 A1，以及相应的国际专利出版物WO 02/18404(PCT/EP01/09633；2001年8月21日公开)；Hoffman-LaRoche提交的WO02/100415和WO 02/094289；Ribapharm提交的美国专利出版物2003/028013 A1和相应的国际专利出版物WO 03/062255和WO03/061385；Pharmasset提交的WO 01/79246和WO 02/32920。

(15)各种各样的化合物，包括：1-氨基-烷基环己烷(授权于Gold等的美国专利6,034,134)、烷基脂质(授权于Chojkier等的美国专利5,922,757)、维生素E和其它抗氧化剂(授权于Chojkier等的美国专利5,922,757)、角鲨烯，金刚烷胺，胆汁酸(授权于Ozeki等的美国专利5,846,964)、N-(膦酰乙酰基)-L-门冬氨酸(授权于Diana等的美国专利5,830,905)、苯二甲酰胺(授权于Diana等的美国专利5,633,388)、多聚腺苷酸衍生物(授权于Wang等的美国专利5,496,546)、2′，3′-双脱氧肌苷(授权于Yarchoan等的美国专利5,026,687)、以及苯并咪唑(授权于Colacino等的美国专利)。

(16)目前处于临床研究治疗丙型肝炎病毒的其它化合物，包括：Schering-Plough的白细胞介素-10、Interneuron的IP-501、Vertex的Merimebodib VX-497、Endo Labs Solvay的AMANTADINE(Symmetrel)、RPI的HEPTAZYME、Idun Pharma.的IDN-6556、XTL.的XTL-002、Chiron的HCV/MF59、NABI的CIVACIR、ICN的LEVOVIRIN、ICN的VIRAMIDINE、Sci Clone的ZADAXIN(胸腺素α-1)、Maxim的CEPLENE(二盐酸组胺)、Vertex/Eli Lilly的VX 950/LY 570310、IsisPharmaceutical/Elan的ISIS 14803、Idun Pharmaceuticals Inc.的IDN-6556和AKROS Pharma的JTK 003。

治疗异常的细胞增殖的组合和/或交替疗法

已鉴别为抗异常的细胞增殖的活性药剂，因而与一种或多种通式(I)-(V)或PALA的核苷组合或交替使用的例子包括：

烷化剂

氮芥类：包括但不限于氮芥(霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤)、环磷酰胺、异环磷酰胺(急性和慢性淋巴细胞性白血病、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、成神经细胞瘤、乳房、卵巢、肺、维尔姆斯瘤、子宫颈、睾丸、软组织肉瘤)、美法仑(L-沙可来新)(多发性骨髓瘤、乳房、卵巢)、苯丁酸氮芥(慢性淋巴细胞性白血病、原发性巨球蛋白血症、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤)。

乙撑亚胺和甲基蜜胺：包括但不限于六甲蜜胺(卵巢)、塞替派(膀胱、乳房、卵巢)。

烷基磺酸酯：包括但不限于白消安(慢性粒细胞白血病)。

亚硝基脲：包括但不限于卡莫司汀(BCNU)(霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、原发性脑瘤、多发性骨髓瘤、恶性黑色素瘤)、洛莫司汀(CCNU)(霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、原发性脑瘤、小细胞肺)、司莫司汀(甲基-CCNU)(原发性脑瘤、胃、结肠)、链佐星(STR)(恶性胰腺胰岛素瘤、恶性癌症)。

三氮烯：包括但不限于达卡巴嗪(DTIC；二甲基-三氮烯-咪唑甲酰胺)(恶性黑色素瘤、霍奇金病、软组织肉瘤)。

抗代谢物

叶酸类似物：包括但不限于甲氨蝶呤(氨甲蝶呤)(急性淋巴细胞性白血病、绒毛膜癌、蕈样肉芽肿病、乳房、头和颈、肺、成骨肉瘤)。

嘧啶类似物：包括但不限于氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶，5-FU)、氟尿苷(氟尿嘧啶脱氧核苷，FUdR)(乳房、结肠、胃、胰、卵巢、头和颈、膀胱、恶化前的皮肤病损)(局部)、阿糖胞嘧啶核苷(阿糖胞嘧啶核苷)(急性粒细胞和急性淋巴细胞性白血病)。

嘌呤类似物及相关抑制剂：包括但不限于巯嘌呤(6-巯嘌呤，6-MP)(急性淋巴细胞、急性粒细胞和慢性粒细胞白血病)、硫鸟嘌呤(6-硫鸟嘌呤，TG)(急性粒细胞、急性淋巴细胞和慢性粒细胞白血病)、喷司他丁(2’-脱氧胎间型霉素(deoxycyoformycin))(毛细胞性白血病、蕈样肉芽肿病、慢性淋巴细胞性白血病)。

长春花碱：包括但不限于长春碱(VLB)(霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、乳房、睾丸)、长春新碱(急性淋巴细胞性白血病、成神经细胞瘤、维尔姆斯瘤、横纹肌肉瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、小细胞肺)

表鬼臼毒素(Epipodophylotoxin)：包括但不限于依托泊苷(睾丸、小细胞肺和其它肺、乳房、霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤、急性粒细胞白血病、卡波西肉瘤)、替尼泊苷(睾丸、小细胞肺和其它肺、乳房、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、急性粒细胞白血病、卡波西肉瘤)。

天然产物

抗生素：包括但不限于放线菌素(新福霉素D)(绒毛膜癌、维尔姆斯瘤、横纹肌肉瘤、睾丸、卡波西肉瘤卡波西肉瘤)、柔红霉素(道诺霉素，红比霉素)(急性粒细胞和急性淋巴细胞白血病)、阿霉素(软组织、成骨和其它肉瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、急性白血病、乳房、泌尿生殖、肺、胃、成神经细胞瘤)、博来霉素(睾丸、头和颈、皮肤和食管肺、生殖泌尿道、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤)、普卡霉素(光神霉素)(睾丸、恶性高钙血症)、丝裂霉素(丝裂霉素C)(胃、子宫颈、结肠、乳房、胰、膀胱、头和颈)。

酶：包括但不限于L-门冬酰胺酶(急性淋巴细胞白血病)。

生物效应调节剂：包括但不限于干扰素α(毛细胞性白血病、卡波西肉瘤、黑色素瘤、类癌、肾脏细胞、卵巢、膀胱、非霍奇金淋巴瘤、蕈样肉芽肿病、多发性骨髓瘤、慢性粒细胞白血病)。

各种各样的药剂

铂配位络合物：包括但不限于顺铂(顺-DDP)、卡铂(睾丸、卵巢、膀胱、头和颈、肺、甲状腺、子宫颈、子宫内膜、成神经细胞瘤、成骨肉瘤)。

蒽二酮：包括但不限于Mixtozantrone(急性粒细胞白血病、乳房)。

取代脲：包括但不限于羟基脲(慢性粒细胞白血病、真性红细胞增多、自发性血小板增多、恶性黑色素瘤)。

甲基苄肼衍生物：包括但不限于丙卡巴肼(N-甲基苄肼，MIH)(霍奇金病)。

肾上腺皮质抑制剂：包括但不限于米托坦(邻、对’-DDD)(肾上腺皮质)、氨基格鲁米特(乳房)。

肾上腺皮质甾体(Adrenorticosteriod)：包括但不限于泼尼松(急性和慢性淋巴细胞白血病、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金病、乳房)。

黄体酮：包括但不限于羟基黄体酮己酸酯、醋酸甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮(子宫内膜、乳房)。

抗血管生成药剂(Antioangiogenesis Agents)

包括但不限于血管他丁、内皮他丁。

激素和拮抗剂

雌激素：包括但不限于二乙基己烯雌酚(乳房、前列腺)。

抗雌激素物质：包括但不限于他莫昔芬(乳房)。

雄激素：包括但不限于丙酸睾丸酮Fluxomyesterone(乳房)。

抗雄激素物质：包括但不限于氟他胺(前列腺)。

促性腺激素释放激素类似物：包括但不限于亮丙瑞林(前列腺)。

合成过程

迄今发现，自然界中仅有的碳环核苷是腺嘌呤核苷，即芒霉素和腺苷类似物，它们或是非常昂贵或是不可商购。因此，这些类型的核苷一般是化学从头合成的。首先制备碳环衍生物，接着，杂环苷原结合于糖以制备碳环核苷，或者，碱基直接与碳环衍生物缩合，例如，嘌呤碱可直接与碳环衍生物缩合。

方案1表明碳环胞嘧啶核苷(227，Type I-a)的合成。可通过任何本领域已知方式合成碳环中间体219。Ali等( Tetrahedron Letters.，1990，31，1509)公开了D-核糖内酯217转化为戊酮中间体218。然后，可通过任何已知还原剂，优选硼氢化钠甲醇溶液，0℃1小时还原酮218，得到醇219。219的磺酰化，优选使用甲磺酰氯的二氯甲烷溶液，三乙胺存在下，0℃2小时，得到220，再在140℃用叠氮化钠DMF溶液过夜处理220，得到221。用任何已知还原剂，如Ph₃P(施陶丁格方法)或催化氨解，优选钯碳，易于还原叠氮化物221。得到的胺222用β-甲氧基丙烯酰异氰酸酯DMF溶液进行Warrener-Shaw反应，然后用氢氧化铵处理，经由线性中间体223形成保护的碳环尿嘧啶核甙224。通过任何本领域已知方式可将尿嘧啶核苷224转化为保护的碳环胞嘧啶核苷(225)。用酸，优选三氟乙酸/水(2∶1 v/v)，50℃ 3小时，除去225的保护基团，得到226。

使用三氟甲磺酰氯(triflyl chloride)的二氯甲烷溶液，三乙胺存在下，得到三氟甲磺酰酯(triflate)，后者通过与嘌呤碱如腺嘌呤和氢化钠，在惰性溶剂如乙腈或DMF中反应，直接得到相应的的嘌呤核苷(I-b type)。

通过使用相同的过程，从L-核糖内酯开始，可得到相应的L-核苷。

方案1

或者，通过四氧化锇氧化，将市售(1R)-(-)-氮杂二环[2.2.1]庚-5-烯-3-酮(228，方案2)转化为2，3-二羟基-内酰胺229。用甲醇氯化氢甲醇分解229后，产物230用2，2-二甲氧基丙烷的丙酮溶液或1，1-二甲氧基环己烷的环己醇溶液处理，得到缩酮，即231，用硼氢化钠处理231，得到232。通过与β-甲氧基丙烯酰异氰酸酯反应，再用氨处理，氨基醇232转化为2’，3’-O-亚环己基-碳环尿嘧啶核苷。酸处理，优选三氟乙酸的甲醇溶液，得到碳环尿嘧啶核苷(233)。通过本领域公知的方式，从233易于得到碳环-5-氟胞嘧啶(227)。

方案2

以相似的反应顺序，从其它光学异构，(1R)-(+)-氮杂二环[2.2.1]庚-5-烯-3-酮开始，可得到相应的L-核苷酸类似物。

方案3显示了II型核苷3，4-不饱和碳环核苷酸的合成。Wolfe等( j. Org.Chem.，1990，55，4712)从D-核糖内酯制备了核苷261。用亚磺酰氯淬灭叔丁氧基甲基对261的麦克加成(方案3)，然后用碳酸钙加热产物，得到环戊酮262。用DIBAH还原262后，磺酰化得到263。用如上所述的NaH使263(优选R＝CF₃)与嘌呤碱缩合，得到嘌呤核苷II-b，即核苷类似物A(264)。用NaN₃处理263(优选R＝Me)，得到265，通过已在方案1中描述的过程，易于将265转化为各种包括266的嘧啶核苷(II-a)。

从L-核糖内酯开始，易于得到相应的L-核苷。

方案3

将在以下部分中进一步阐述本发明。提及所包含的实验细节部分和实施例以帮助理解本发明。该部分不是为了，也不应解释为，以任何方式限制下文提及的权利要求书。

以下运作实施例提供对本发明方法的进一步理解。这些实施例是示例性的，不是为了限制本发明的范围。在不背离本方法的一般范围内，对所述的那些具体的溶剂、试剂或反应条件，可替换为等价物、相似或合适的溶剂、试剂或反应条件。

实施例

在开放式毛细管中，电热数字熔点测定仪测定熔点并未校正。乙醇中的UV吸收光谱记录于Uvikon 931(KONTRON)分光光度计中。室温下，用Varian Unity Plus 400光谱仪进行¹H-NMR光谱测定。以内标四甲基硅烷作为对照，给出低场处的ppm形式的化学位移。进行氘交换，去耦试验或2D-COSY，以证实质子指认。以s(单峰)、d(双峰)、dd(双峰的双峰)、t(三峰)、q(四联峰)、br(宽峰)、m(多重峰)表示信号多样性。所有J-值是Hz。在JEOL DX 300质谱检测仪上，以正-(FAB＞0)或负-(FAB<0)离子模式记录FAB质谱。基质是3-硝基苄醇(NBA)或甘油或硫代甘油(GT)的混合物(50∶50，v/v)。在Perkin-Elmer 241分光旋光计(径长lcm)上测定比旋光，单位l0^-1deg cm² g^-1。用Atlantic Microlab Inc.(Norcross，GA)进行元素分析。以元素符号或函数表示的分析结果在±0.4％理论值范围内。在Whatman PK5F硅胶板上进行薄层色谱分析，UV吸收测定后，用10％硫酸乙醇溶液碳化并加热，使产物可见。大气压下，在硅胶(Fisher，S733-1)上进行柱色谱分析。

化学试剂和反应试剂

以下化合物由Pharmasset实验室合成：噻唑呋林、C2-MAD、胍唑、tezacytabine、3-脱氮尿苷(3DU)，6-氮杂-尿嘧啶核苷、2’-脱氧-5-氟尿苷、二氟脱氧胞嘧啶核苷(dFdC、吉西他滨)、2’-C-甲基-胞嘧啶核苷(2’-C-CH₃-C)和2’-C-甲基-腺苷(2’-C-CH₃-A)。PALA(NSC-224131)、吡唑呋喃菌素(NSC-143095)和布喹那(NSC-368390)由Drug Biosynthesis &Chemistry Branch，Developmental Therapeutics Program，Division ofCancer Treatment，National Cancer Institute(Bethesda，MD)提供。环戊基-胞嘧啶(CP-C)和环戊烯基-胞嘧啶(CPE-C)由C.K.Chu博士(Universityof Georgia，Athens，GA)(图1)合成。咪唑立宾、甲氨喋呤、2-硫代-6-氮杂尿嘧啶核苷和去铁胺购自Sigma(Milwaukee，WI)，麦考酚酸(MPA)由Takashi Tsuji博士(Ajinomoto，Inc.，Japan)友情提供，羟基脲得自Raymond F.Schinazi博士(Emory University，Atlanta，GA)。利巴韦林(1-β-D-呋喃核糖基-1，2，4-三唑-3-甲酰胺；Schering-Plough，Raritan，NJ)和重组干扰素α-2a(IFN-α-2a；Roferon-A，Hoffmann-La Roche Inc.，NJ)在复制子试验中作为对照。

实施例1

HCV复制子组织培养

在含有10％胎牛血清、1×非必需氨基酸(100units/ml)、青霉素-链霉素(100μg/ml)、谷氨酰胺(0.292mg/ml)和G418(1,000μg/ml)的DMEM培养基(高葡糖，不含丙酮酸盐)中，含HCV-复制子RNA的Huh7细胞(克隆A细胞；Apath，LLC，St.Louis，MO)保持指数生长。抗病毒测试在相同培养基(不含G418)中进行。抗病毒试验显示，G418的缺乏对HCV-RNA水平无影响(Stuyver等，“在培养基中阻断牛病毒性腹泻和丙型肝炎病毒复制的核糖核苷类似物”(“A ribonucleoside analogue that blocks thereplication of bovine viral diarrhea and hepatitis C viruses inculture”)Antimicrob.Agents Chemother.，Jan.2003，47(1)，244-254)。以10⁵细胞/孔将细胞接种于6孔板中。如(Stuyver等，“在培养基中阻断牛病毒性腹泻和丙型肝炎病毒复制的核糖核苷”(“A ribonucleoside analoguethat blocks the replication of bovine viral diarrhea and hepatitis C viruses inculture”)Antimicrob.Agents Chemother.，Jan.2003，47(1)，244-254)所述，测定候选抗病毒化合物。孵育时间随实验类型而改变。在孵育步骤结束时，用台盼蓝排斥方法计数细胞，分离总的细胞RNA(Rneasy 96 kit，Qiagen，CA)。如生产商和(Stuyver等，“在培养基中阻断牛病毒性腹泻和丙型肝炎病毒复制的核糖核苷”(“A ribonucleoside analogue that blocks thereplication of bovine viral diarrhea and hepatitis C viruses inculture”)Antimicrob.Agents Chemother.，Jan.2003，47(1)，244-254)所述，以单一步骤、多倍RT-PCR方案中放大复制子RNA和内标对照(TaqMan核糖体RNA对照试剂，Applied Biosystems，CA)。

实施例2

复制子细胞的生长与HCV RNA水平的观察

在复制子系统中，候选抗HCV化合物的评价被以下事实限制：即只能使用对数生长期的细胞。融合时的细胞-因而进入G₀/G₁细胞周期停滞-不能维持稳定的复制子RNA水平/细胞的量，正如HCV RNA而非rRNA稳定降低所证实(图2)(Stuyver等，“在培养基中阻断牛病毒性腹泻和丙型肝炎病毒复制的核糖核苷”(“A ribonucleoside analogue that blocksthe replication of bovine viral diarrhea and hepatitis C viruses inculture”)Antimicrob.Agents Chemother.，Jan.2003，47(1)，244-254)。这提示在静止细胞中复制子RNA复制和/或翻译所需的细胞因子量发生改变并受到限制。这些因子中的一种可能是足够水平的NTPs的可用性以支持复制子的合成。

已观察到在复制子细胞中HCV RNA量发生，相当的孵育时间依赖性波动(Pietschmann等，“携带自复制丙型肝炎病毒RNAs的细胞株的特征”(“Characterization of cell lines carrying self-replicating hepatitis Cvirus RNAs”)J Virol.，2001，75，1252-1264)。为了进一步详细研究这些现象，设计了一个时间过程实验，即在14天的时间内，监测Huh7细胞的细胞生长和HCV RNA动力学(Stuyver等，“在培养基中阻断牛病毒性腹泻和丙型肝炎病毒复制的核糖核苷”(“ A ribonucleoside analogue that blocksthe replication of bovine viral diarrhea and hepatitis C viruses inculture”)Antimicrob.Agents Chemother.，Jan.2003，47(1)，244-254)。在前7天的时间内，培养基中HCV RNA的量随时间增加，或多或少地与细胞计数和细胞内rRNA水平平行(图2)。这表明HCV RNA拷贝数/细胞的稳态和少量增加。从第8天起，细胞形成融合单层，从第8天到第14天，rRNA水平没有显著改变，但是观察到HCV RNA的量急剧降低，提示HCV RNA拷贝数/细胞明显下降。这些结果表明HCV复制子RNA拷贝数与宿主细胞的指数生长特征紧密相关。

实施例3

对比实验：在HCV复制子系统中，已确立的化合物的抗HCV效果

目前，只有IFN-α和利巴韦林被批准用于治疗HCV感染的患者。除了这些批准的分子，还有几种其它分子声称具有特异性抗病毒活性(Carroll等，“用2’-修饰的核苷类似物抑制丙型肝炎病毒RNA复制”(“Inhibition of hepatitis C virus RNA replication by 2′-modified nucleosideanalogs”)J Biol Chem.2003，27，27；Sommadossi，J.P.和P.Lacolla“治疗丙型肝炎病毒的方法和组合物”(“Methods and compositions for treatinghepatitis C virus”)国际专利申请WO 01/190121，Idenix Pharmaceuticals；Walker，M.P.和Z.Hong“HCV RNA依赖性RNA聚合酶作为抗病毒研究的靶点”(“HCV RNA-dependent RNA polymerase as a target for antiviraldevelopment”)Curr Opin Pharmacol，2002，2，534-40)。

在一系列对照实验中，在指数生长的复制子细胞中，接触化合物4天后，检测了一定浓度范围内的IFN-α-2a、利巴韦林、2’-C-CH₃-C和2’-C-CH₃-A以剂量依赖的方式，降低HCV RNA水平的能力。在100 IU/ml浓度下测定时，IFN-α-2a对rRNA水平仅具有最小效果(0.21±0.21 log₁₀rRNA减少)，对观察到的rRNA降低校正为HCV RNA的log₁₀减少(1.57±0.26 log₁₀)后，观察到特异的抗病毒效果，HCV RNA减少1.36±0.37log₁₀(表1).。如已出版物所述，孵育96小时后，IFN-α-2a显示校正的EC₉₀值为4.5 IU/ml(Stuyver等，“在培养基中阻断牛病毒性腹泻和丙型肝炎病毒复制的核糖核苷”(“A ribonucleoside analogue that blocks thereplication of bovine viral diarrhea and hepatitis C viruses inculture”)Antimicrob.Agents Chemother.，Jan.2003，47(1)，244-254)。对其它三种化合物进行了相似的计算(表1)。2’-C-CH₃-C(图3a)、利巴韦林(图3b)和2’-C-CH₃-A的EC₉₀值分别为10.4μM、～100μM和＜1μM(表1；图3).

然而，第4天的EC₉₀值是单一的稳态观察点，不能提供关于细胞生长动力学或对数生长细胞所需条件改变的信息。因此，进行了监测7天时间内HCV RNA水平和细胞生长动力学的实验。在IFN-α-2a6次实验的平均值的基础上，与未处理对照细胞(从第0天增加131±0.08 log₁₀；p＝0.003)相比，处理细胞明显生长更缓慢(第7天：从第0天增加1.07±0.06 log₁₀)(图4a)。虽然在第4天仅观察到细微差异，但它们是显著性的(对照：0.81±0.06；IFN-α-2a：0.67±0.06；p＝0.01)。此外，维持了7天的HCV RNA水平显著降低(对照：1.79±0.4；IFN-α-2a：-0.53±0.4；p＝0.0005)。值得注意从第4天起病毒RNA的反弹。发现2’-C-CH₃-C(图4C)和2’-C-CH₃-A(图4d)能非常有效降低HCV RNA水平，而分别对细胞增殖没有(浓度100μM)和最小-但显著不同-(浓度20μM)的作用(表1)。100μM下测定利巴韦林，发现引起细胞增殖完全停止(与第0天相比，减少0.22±0.1 log₁₀；或与第7天未处理对照组相比，减少1.53 log₁₀)(图4b)。与未处理对照组相比，虽然在第7天HCVRNA的水平明显降低2.08log₁₀，但是试验组HCV RNA拷贝数/细胞与未处理对照组的比例变化很少。

对照化合物2’-C-CH₃-C是典型的在试验浓度范围内不抑制细胞指数生长的化合物(图4c)，不影响rRNA水平如rRNA(图3a)，但是能显著降低复制子HCV RNA水平(第4天校正EC₉₀＝10.4μM，表1)。因此，对HCV RNA复制子的特异性抗病毒效果取决于至少一些，如果不是所有以下条件的组合：(i)不影响细胞指数生长(ii)不或有限降低细胞宿主的RNA水平，和(iii)与对照组相比，降低HCV RNA拷贝数/细胞。

实施例4

选择本发明抗代谢物的抗病毒效果

已知核苷酸生物合成途径的抗代谢剂可阻止NTPs或dNTPs的从头合成，导致细胞分裂变慢或停止，或是细胞死亡。本试验评价了几种类型的抗代谢剂，包括IMPDH、RNR、CTPS、OOMPDC、ATC和胸腺嘧啶核苷酸合成酶(TS)的抑制剂。已知这些类型的抑制剂可直接改变细胞内的核苷酸库(因阻断上游途径的上调；或因阻断下游途径的下调)。

不存在或存在这些抗代谢物的条件下，孵育复制子细胞96小时后，定量细胞内rRNA和HCV RNA水平(表1)。

虽然几种抗代谢物可明显降低HCV RNA水平，但是可见对rRNA水平几乎相似的抑制效果(表1)。校正为细胞毒性后，大多数抗代谢物不具有作为抗HCV药剂的特异性潜力(校正EC₉₀值＞100μM)。

然而，对负责从头合成UTP和CTP的酶(天冬氨酸酰基转移酶(ATC，E.C.2.1.3.2)；二氢乳清酸脱氢酶(DHODH，E.C.3.5.2.3)；乳清苷5’-单磷酸酯脱羧羧基(OMPDC，E.C.4.1.1.23)；CTP合成酶(CTPS，E.C.6.3.4.2))具有已知抑制作用的化合物显示某种抗病毒作用。孵育96小时后，在剂量反应分析中试验了这些抑制剂，得到以下EC₉₀值，校正为rRNA减少：CP-C＝25μM(图3C)；3-DU＝～100μM(图3D)；CPE-C＝2.5μM(图3E)；吡唑呋喃菌素＝3.8μM；PALA＝7.6μM；dFdC＝0.17μM(图3F)。dFdC已显示一些抗代谢活性，包括抑制核糖核苷酸还原酶(RNR)和CTPS(Heinemann等，“吉西他滨：一种细胞内核苷酸和脱氧核苷酸代谢的调节剂“(“Gemcitabine：a modulator of intracellular nucleotide anddeoxynucleotide metabolism”)Semin Oncol.1995，22，11-8；Plunkett等，“吉西他滨：代谢、作用机理及自身增强作用”(“Gemcitabine：metabolism，mechanisms of action，and self-potentiation″Semin Oncol.，1995，22，3-10)。

实施例5

核糖嘧啶从头合成抑制剂的抗病毒效果

评价选择的抑制剂在7天时间内的特异性抗HCV活性(图5)。在其EC₉₀值下，在含有HCV复制子的Huh7细胞株中，CTPS抑制剂引起细胞抑制。在利巴韦林试验中观察到相似的细胞抑制效应(图4b)，虽然在降低HCV RNA水平方面，CTP和UTP从头合成途径的抑制剂比IMPDH抑制剂似乎更特异。HCV RNA拷贝数/细胞的降低更明显。

与不含药物的对照组相比，7天分析中，PALA和吡唑呋喃菌素显示对HCV RNA复制非常强效的抑制作用，而对细胞生长影响最小(图6)。在后者试验中，在接近其EC₉₀值下试验化合物，以降低病毒RNA。

TS抑制剂阻断dUMP转化为TMP，因而降低可用的TTP含量。研究了该类型抑制剂对DNA病毒的作用，如疱疹和巨细胞病毒尿(Wachsman等，“治疗巨细胞病毒感染细胞甲氨喋呤及其优选累积的抗巨细胞病毒活性(“Anticytomegaloviral activity of methotrexate associatedwith preferential accumulation of drug by cytomegalovirus-infected cells”)Antimicrob Agents Chemother.，1996，40，433-6)，但是目前几乎没有证据表明，这些TS抑制剂可抑制RNA病毒。由于TTP不是RNA聚合酶的底物(包括HCV的RdRP)，该类化合物可作为应用方法的阴性对照。虽然在这些研究中未试验，但是TS抑制剂可诱导细胞毒性或细胞抑制效应。

OMPDC是催化乳清苷-5-磷酸酯转化为UMP的酶；是UTP生物合成的关键步骤。用某些该酶的抑制剂(例如6-氮杂尿嘧啶核苷；2-硫代-6-氮杂尿嘧啶核苷)的处理似乎对胞浆HCV RNA代谢几乎没有作用。从前发现6-氮杂尿嘧啶核苷具有抗不同黄病毒的活性(Crance等，抗病毒化合物体外抑制白蛉热西西里病毒(白蛉病毒属)复制”(“Inhibition ofsandfly fever Sicilian virus(Phlebovirus)replication in vitro by antiviralcompounds”)Res Virol.1997，148，353-65；Morrey等，“活性抗病毒化合物抗西尼罗河病毒的纽约隔离群的鉴定”(“Identification of activeantiviral compounds against a New York isolate of West Nilevirus”)Antiviral Res.2002，55，107-16；Neyts等，“用黄热病病毒疫苗株17D研究治疗黄热病病毒感染的对策”(“Use of the yellow fever virusvaccine strain l7D for the study of strategies for the treatment of yellowfever virus infections”)Antiviral Res.1996，3O，125-32)，在HCV RNA复制子系统中任何抗病毒作用的缺失仍然有待解释。不能排除的是，与从培养基摄取的尿嘧啶或尿苷相组合的补救嘧啶途径补偿了该抑制作用。对于6-氮杂尿嘧啶核苷，在培养基中使用经过透析的胎牛血清，重复复制子试验，基本上得到相同的结果。

然而，吡唑呋喃菌素显示抗病毒活性，正如该分子已显示具有抗某些前述病毒的活性(Neyts等，“用黄热病病毒疫苗株17D研究治疗黄热病病毒感染的对策”(“Use of the yellow fever virus vaccine strain 17D forthe study of strategies for the treatment of yellow fever virus infections”)Antiviral Res.1996，30，125-32；De Clercq等，“环戊烯基胞嘧啶，一种靶向CTP合成酶的碳环核苷的广谱抗病毒和杀细胞活性”(“Broad-spectrum antiviral and cytocidal activity of cyclopentenylcytosine，a carbocyclic nucleoside targeted at CTP synthetase”)Biochem Pharmacol.，1991，41，1821-9)。吡唑呋喃菌素除了抑制OMPDC，报道还能抑制DHODH(Balzarini等，“核苷酸代谢的抗代谢药对核苷反转录酶抑制剂的抗人免疫缺陷病毒活性的作用”(“Effect of antimetabolite drugs ofnucleotide metabolism on the anti-human immunodeficiency virus activityof nucleoside reverse transcriptase inhibitors”)Pharmacol Ther.2000，87，175-87)。OMPDC的抑制作用可能被其它细胞补救途径所补偿，因此，在该水平的抑制不能产生任何特异性抗病毒作用，而通过基本上相同的抑制剂不能补偿DHODH的抑制作用，结果观察到抗病毒作用。吡唑呋喃菌素和6-氮杂尿嘧啶核苷的生物活性在单磷酸酯水平(Suttle，D.P.和G.R.Stark，“在耐吡唑呋喃菌素和6-氮杂尿嘧啶核苷的仓鼠细胞中，乳清酸磷酸核糖基转移酶和乳清苷-5’-磷酸脱羧酶的协调过量产生”(“Coordinate overproduction of orotate phosphoribosyltransferase andorotidine-5′-phosphate decarboxylase in hamster cells resistant topyrazofurin and 6-azauridine”)J Biol Chem.1979，254，4602-7)。

某些IMPDH抑制剂可抑制嘌呤核苷酸生物合成中的关键酶步骤。虽然属于此类的几种化合物已显示在活性病毒产生中是有效抑制剂(Markland等，2000.IMP脱氢酶抑制剂VX-497的广谱抗病毒活性：利巴韦林的和α干扰素显示的抗病毒活性的对照”(Broad-spectrum antiviralactivity of the IMP dehydrgenase inhibitor VX-497：a comparison withribavirin and demonstration of antiviral additivity with alpha interferon).Antimicrob Agents Chemother.44：859-866；Stuyver等，“IMPDH酶抑制剂作为潜在的抗牛病毒性腹泻病毒药剂”(“Inhibitors of the IMPDHenzyme as potential anti-bovine viral diarrhea virus agents”Antiviral ChemChemother.2003，13，49-56)，但在评价HCV复制子时几乎没有观察到特异性。

某些CTPS抑制剂显示具有抗HCV复制子潜力，以CPE-C最为有效。这些化合物显示抗病毒作用，并在多种人和鼠肿瘤细胞株，包括人神经胶质肉瘤和星形细胞瘤细胞株中显示抗增殖作用。(Agbaria等.1997.“环戊烯基胞嘧啶(NSC 375575)在人神经胶质肉瘤细胞中的抗增殖作用”(Antiproliferative effects of cyclopentenyl cytosine(NSC 375575)in humanglioblastoma cells Oncol Res.9：l11-8；De Clercq等，1991.“环戊烯基胞嘧啶，一种靶向CTP合成酶的碳环核苷酸的广谱抗病毒和杀细胞活性”(Broad-spectrum antiviral and cytocidal activity of cyclopentenyl cytosine，acarbocyclic nucleoside targeted at CTP synthetase)Biochem Pharmacol.41：1821-9；Politi等，1995.“连续输注环戊烯基胞嘧啶的一期临床试验”(Phase I clinical trial of continuous infusion cyclopentenyl cytosine).CancerChemother Pharmacol.36：513-23)。这种作用主要是通过5′-三磷酸酯代谢物(例如CPEC-TP)产生的。CPEC-TP的剂量依赖性累积伴随着CTP库的相应降低，CPE-C水平约为0.1μM时CTP消耗50％。

dFdC起先是研究其抗病毒活性的(Bianchi等，1994.“2’-取代的脱氧胞嘧啶核苷类似物抑制核糖核苷酸还原酶：治疗AIDS的可能应用”(Inhibition of ribonucleotide reductase by 2′-substituted deoxycytidineanalogs：possible application in AIDS treatment)Proc Natl Acad Sci USA.91：8403-7)，但是，后来却发展为抗肿瘤药。dFdC是细胞周期特异性试剂，主要靶向DNA合成期(S-期)的细胞。dFdC的作用概括如下：(i)dFdC-DP抑制RNR，以降低dCTP的浓度；(ii)降低dCTP的水平以利于dFdC-TP掺入DNA，使DNA链断裂，细胞死亡；(iii)降低细胞内dCTP水平，脱氧胞嘧啶核苷激酶活性增加，引起dFdC自身增强；(iv)dFdC-TP抑制dCMP脱氨酶；最后(v)高浓度dFdC-TP抑制CTPS(Heinemann等.1995.“吉西他滨：细胞内核苷酸和脱氧核苷酸代谢的调节剂”(Gemcitabine：a modulator of intracellular nucleotide and deoxynucleotidemetabolism) Semin Oncol.22：11-8；Plunkett等.1995.“吉西他滨：代谢、作用机理和自身增强作用”(Gemicitabine：metabolism，mechanisms ofaction，and self-potentiation)Semin Onco1.22：3-10)。正如其它已试验的RNR抑制剂(HU，tezacytabine，去铁胺，三氨三唑)对复制子都没有显示任何特异性抑制作用，dFdC的抗病毒活性可归结于抑制CTPS。这与以下假设一致：由任何类型的抑制剂(PALA，吡唑呋喃菌素，CP-C，CPE-C和dFdC)导致的降低UTP和/或CTP水平不会产生抗病毒作用。

虽然几乎所有试验化合物都诱导细胞抑制，但是并非所有抗代谢物都具有降低HCV RNA复制子拷贝数/细胞的活性。通常，IMPDH抑制剂只显示最小降低，而CTPS抑制剂则更有效。因此，细胞内的核苷酸库在维持HCV RNA拷贝数稳态水平中起重要作用。当细胞进入药物诱导的细胞抑制期时，CTP水平(通常是嘧啶)的降低比GTP(通常是嘌呤)水平的降低，对HCV RNA的周转似乎具有更大的作用。

复制子RNA周转是在通过RdRP的活性产生与HCV复制子RNA半衰期之间的平衡。指数生长细胞主要依赖NTP从头合成，而融合细胞更多地使用补救途径提供所需NTP。这提示某些抗代谢物(从头合成嘧啶核苷抑制剂)可具有模拟在融合细胞中观察到的现象的能力，即在细胞抑制条件下复制子RNA库的快速降解。嘧啶的从头合成是重要的，抑制任何该合成步骤可导致病毒RNA明显降低。合成途径和已知抑制剂的概述见图7。

在融合的未处理细胞中，如果细胞内CTP的有限可获得性对复制子RNA稳态的破坏负责(如图2所示)，那么CTPS抑制剂得到观察结果可解释为非特异性抗病毒作用。

表1.

化合物	Log₁₀ RNA 降低¹(100μM)		校正HCV RNAlog₁₀降低¹100μM	校正HCV RNAlog₁₀降低10μM	校正HCV RNAEC₉₀(μM)
	Log₁₀ RNA 降低¹(100μM)					HCV	rRNA
	IMPDH抑制剂(E.C.1.1.1.205)						rRNA
利巴韦林咪唑立宾噻唑呋林MPAC2-MAD	IMPDH抑制剂(E.C.1.1.1.205)						1.96±0.280.29±0.740.86±0.271.15±0.431.09±0.21	0.91±0.120.21±0.500.99±0.351.09±0.281.00±0.15	1.05±0.290.08±0.82-0.13±0.370.07±0.470.08±0.24	0.16±0.10-0.14±0.120.04±0.100.22±0.010.36±0.21	～100＞100＞100＞100＞100
利巴韦林咪唑立宾噻唑呋林MPAC2-MAD	核糖核苷酸还原酶抑制	剂(E.C.1.17.4.1；E.C.1.17.4.2)					1.96±0.280.29±0.740.86±0.271.15±0.431.09±0.21	0.91±0.120.21±0.500.99±0.351.09±0.281.00±0.15	1.05±0.290.08±0.82-0.13±0.370.07±0.470.08±0.24	0.16±0.10-0.14±0.120.04±0.100.22±0.010.36±0.21	～100＞100＞100＞100＞100
三氨三唑羟基脲Tezacytabine去铁胺	核糖核苷酸还原酶抑制	剂(E.C.1.17.4.1；E.C.1.17.4.2)					0.25±0.110.17±0.081.59±0.081.00±0.06	0.07±0.030.25±0.201.78±0.690.92±0.08	0.32±0.08-0.08±0.16-0.19±0.490.08±0.03	0.05±0.080.06±0.040.63±0.070.17±0.11	＞100＞100＞100＞100
三氨三唑羟基脲Tezacytabine去铁胺	CTP合成酶抑制剂(E.C.6.3.4.2.)						0.25±0.110.17±0.081.59±0.081.00±0.06	0.07±0.030.25±0.201.78±0.690.92±0.08	0.32±0.08-0.08±0.16-0.19±0.490.08±0.03	0.05±0.080.06±0.040.63±0.070.17±0.11	＞100＞100＞100＞100
dFdCCP-CCPE-C3DU	CTP合成酶抑制剂(E.C.6.3.4.2.)						1.87±0.161.97±0.382.47±0.331.41±0.09	0.59±0.050.91±0.131.21±0.160.48±0.11	1.29±0.111.06±0.261.26±0.510.94±0.20	1.32±0.080.64±0.101.43±0.010.13±0.10	0.17252.5～100
dFdCCP-CCPE-C3DU	乳清苷-MP脱羧酶(E.C.4.1.1.23)						1.87±0.161.97±0.382.47±0.331.41±0.09	0.59±0.050.91±0.131.21±0.160.48±0.11	1.29±0.111.06±0.261.26±0.510.94±0.20	1.32±0.080.64±0.101.43±0.010.13±0.10	0.17252.5～100
6-氮尿嘧啶核苷2-硫代-6-尿嘧啶核苷吡唑呋喃菌素	乳清苷-MP脱羧酶(E.C.4.1.1.23)						0.25±0.090.16±0.041.88±0.05	0.61±0.18-0.02±0.120.42±0.03	-0.36±0.160.19±0.091.46±0.08	0.12±0.050.12±0.101.16±0.21	＞100＞1003.80
6-氮尿嘧啶核苷2-硫代-6-尿嘧啶核苷吡唑呋喃菌素	天冬氨酸酰基转移酶(E.C.2.1.3.2)						0.25±0.090.16±0.041.88±0.05	0.61±0.18-0.02±0.120.42±0.03	-0.36±0.160.19±0.091.46±0.08	0.12±0.050.12±0.101.16±0.21	＞100＞1003.80
PALA	天冬氨酸酰基转移酶(E.C.2.1.3.2)						1.77±0.02	0.48±0.02	1.30±0.05	1.1 8±0.11	7.60
PALA	胸腺嘧啶核苷酸合成酶抑制剂(E.C.2.1.1.45)						1.77±0.02	0.48±0.02	1.30±0.05	1.1 8±0.11	7.60
2′-脱氧-5FU甲氨蝶呤	胸腺嘧啶核苷酸合成酶抑制剂(E.C.2.1.1.45)						0.76±0.060.18±0.01	0.73±0.350.07±0.10	0.04±0.250.11±0.09	0.23±0.050.1 5±0.01	＞100＞100
2′-脱氧-5FU甲氨蝶呤	对照						0.76±0.060.18±0.01	0.73±0.350.07±0.10	0.04±0.250.11±0.09	0.23±0.050.1 5±0.01	＞100＞100
干扰素2′C-CH3-A2′C-CH3-C	对照						1.57±0.262.32±0.112.20±0.52	0.21±0.212.96±0.08-0.02±0.05	1.36±0.37-0.64±0.1 82.21±0.47	NA2.051.0	4.5IU/ml＜110.4

¹IFN在100IU/ml下检测；dFdC在50μM下检测

表2

化合物	浓度，μM	log₁₀下降¹		阻止剂	log₁₀	下降²
		log₁₀下降¹			log₁₀	下降²	HCV	rRNA	HCV	rRNA
		IFN利巴韦林2′-C-CH3-C2′-C-CH3-AdFdCCP-CCPE-C3DU吡唑呋喃菌素PALA	3125IU/ml100251001201002100100100		1.62±0.051.96±0.281.62±0.052.32±0.111.89±0.071.80±0.072.32±0.081.76±0.041.4 1±0.091.88±0.051.77±0.02	0.26±0.180.91±0.12-0.01±0.022.96±0.080.52±0.030.87±0.081.2 1±0.020.99±0.040.48±0.110.42±0.030.48±0.02	HCV	rRNA	HCV	rRNA	-GdGC-dCCCCUCUUU	NA0.43±0.060.40±00.010.48±0.02NA0.06±0.000.1 1±0.010.32±0.110.30±0.060.58±0.040.35±0.030.37±0.030.35±0.030.14±0.03	NA0.22±0.100.07±0.160.14±0.04NA0.07±0.020.02±0.000.17±0.01-0.04±0.010.32±0.030.13±0.030.22±0.07-0.01±0.04-0.13±0.10

NA：未检测到

给定浓度下¹log₁₀ RNA下降；

给定浓度下²log₁₀RNA下降，包括50μM下天然核苷酸以阻止抗病毒和毒性作用

实施例6

复原研究

进行了一系列实验，研究防止观察到的抗病毒和细胞抑制效应的可能性。细胞与试验化合物一起培养，同时含有天然核苷-或2’-脱氧核苷(腺苷、鸟嘌呤核苷(G)、胞嘧啶核苷(C)、尿嘧啶核苷(U)、2’-脱氧胞嘧啶核苷(dC)、2’-脱氧尿嘧啶核苷、胸腺嘧啶核苷、2’-脱氧鸟嘌呤核苷(dG)和2’-脱氧腺苷)(表2)。

已知抗病毒化合物IFN-α-2a和2’-C-CH3-A的抗病毒作用不能被任何天然核苷阻止。正如对IMPDH抑制剂所预期的，利巴韦林对细胞生长和HCV复制子RNA复制的作用可被dG和G防止。对于dFdC，观察到的毒性和抗病毒作用可被dC防止。与对CTPS抑制剂的期望一致，胞嘧啶核苷加入到培养基中可补偿抑制作用。意外的是，低浓度(1μM)测定CPE-C时，抗代谢作用可部分地被培养基中50μM的尿嘧啶核苷所防止(表2)。ATC、DHODH和OMPDC酶抑制剂的作用可通过加入尿嘧啶核苷到培养基中来防止。

参考各种具体和优选实施例和技术描述本发明。然而，需要理解的是，从上述本发明的具体说明，许多变化和改进对本领域技术人员是显而易见的，并且，在本发明精神和范围内，可进行许多变化和改进。

Claims

1.一种在有需要的宿主中治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖相关的疾病的方法，所述方法包括给予所述宿主任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-a^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药：

式中：

每个D²独立地是OH、SH、NH₂、NHR⁴或OD，其中，D是氢、烷基、酰基、一磷酸基、二磷酸基、三磷酸基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磷脂或氨基酸；

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个W¹和W²独立地是N或CR^1’；

每个R^1’独立地是氢、卤素(F、Cl、Br或I)、CH₃、CH₂CH₃、Pr、i-Pr、n-Bu、i-Bu、t-Bu、CH₂CN、CH₂CO₂CH₃、CH₂C(＝O)NH₂、CH₂C(＝S)NH₂、C(＝O)NH₂、C(＝S)NH₂、C(＝NH)NH₂、C(＝O)NHOH、C(＝O)NHNH₂、CH₂NH₃、NH₂、NHCH₃、N(CH₃)₂、NHCH₂CH₃、OH、OCH₃、OCH₂CH₃、SH、SCH₃、SCH₂CH₃、CO₂H、CN或CHR^*NH₂；

每个R^*是氢、F、Cl、Br或I；

每个R^2’独立地是氢、F、Cl、Br、I、CH₃、CH₂OH、CH₂F、CH₂SH、CH₂SCH₃、CH₂N₃、CH₂NH₂、OH、OCH₃或NH₂；

每个R^3’独立地是氢、F、Cl、Br、I、CH₃、CH₂OH、CH₂F、CH₂SH、CH₂SCH₃、CH₂N₃、CH₂NH₂、OH、OCH₃或NH₂；

每个R⁴独立地是氢、任选取代或未取代的低级烷基、低级卤烷基、任选取代或未取代的低级烯基、低级卤烯基、任选取代或未取代的芳基、芳烷基如未取代或取代的苯基或苄基、或任选取代或未取代的酰基；

每个R⁵独立地是氢、CH₃、CH₂CH₃、Pr、i-Pr、n-Bu、i-Bu、t-Bu、CH₂CN、CH₂CO₂CH₃、CH₂C(＝O)NH₂、CH₂C(＝S)NH₂、C(＝O)NH₂或C(＝S)NH₂；和

使得存在不多于三个环杂原子。

2.如权利要求1所述的方法，其中，Z¹是O。

3.如权利要求1所述的方法，其中，Z¹是S。

4.如权利要求1所述的方法，其中，Z¹是CH₂。

5.如权利要求1所述的方法，其中，Z¹是CF₂。

6.一种在有需要的宿主中治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖相关的疾病的方法，所述方法包括给予所述宿主任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-b^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个Y¹独立地是O、S、Se或NH；

每个W¹和W²独立地是N或CR^1’；

每个R^1’独立地是氢、卤素(F、Cl、Br或I)、CH₃(Me)、CH₂CH₃(Et)、Pr、i-Pr、n-Bu、i-Bu、t-Bu、CH₂CN、CH₂CO₂CH₃、CH₂C(＝O)NH₂、CH₂C(＝S)NH₂、C(＝O)NH₂、C(＝S)NH₂、NH₂、NHCH₃、N(CH₃)₂、NHCH₂CH₃、OH、OCH₃、OCH₂CH₃、SH、SCH₃、SCH₂CH₃、CO₂H或CN；

每个R^2’独立地是氢、卤素(F、Cl、Br或I)、CH₃、CH₂OH、CH₂F、CH₂SH、CH₂SCH₃、CH₂N₃、CH₂NH₂、OH、OCH₃或NH₂；

每个R^3’独立地是氢、卤素(F、Cl、Br或I)、CH₃、CH₂OH、CH₂F、CH₂SH、CH₂SCH₃、CH₂N₃、CH₂NH₂、OH、OCH₃或NH₂；和

7.如权利要求6所述的方法，其中，Z¹是O。

8.如权利要求6所述的方法，其中，Z¹是S。

9.如权利要求6所述的方法，其中，Z¹是CH₂。

10.如权利要求6所述的方法，其中，Z¹是CF₂。

11.一种在有需要的宿主中治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖相关的疾病的方法，所述方法包括给予所述宿主任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-c^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个Y¹独立地是O、S、Se或NH；

每个W¹、W²和W³独立地是N或CR^1’；

12.如权利要求11所述的方法，其中，Z¹是O。

13.如权利要求11所述的方法，其中，Z¹是S。

14.如权利要求11所述的方法，其中，Z¹是CH₂。

15.如权利要求11所述的方法，其中，Z¹是CF₂。

16.一种在有需要的宿主中治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖相关的疾病的方法，所述方法包括给予所述宿主任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-d^*)的β-D-核苷酸或其药学上可接受的盐和/或前药：

式中：

每个D²独立地是OH，SH，NH₂，NHR⁴或OD，其中，D是氢、烷基、酰基、一磷酸基、二磷酸基、三磷酸基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磷脂或氨基酸；

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个R^1’独立地是CN、CO₂CH₃、C(＝O)NH₂、C(＝S)NH₂或C(＝NH)NH₂；

每个R^1”独立地是OH、SH、NH₂或NHR⁵；

每个R^2’独立地是氢或卤素(F、Cl、Br或I)、CH₃、CH₂OH、CH₂F、CH₂SH、CH₂SCH₃、CH₂N₃、CH₂NH₂、OH、OCH₃或NH₂；

每个R^3’独立地是氢或卤素(F、Cl、Br或I)、CH₃、CH₂OH、CH₂F、CH₂SH、CH₂SCH₃、CH₂N₃、CH₂NH₂、OH、OCH₃或NH₂；

17.如权利要求16所述的方法，其中，Z¹是O。

18.如权利要求16所述的方法，其中，Z¹是S。

19.如权利要求16所述的方法，其中，Z¹是CH₂。

20.如权利要求16所述的方法，其中，Z¹是CF₂。

21.一种在有需要的宿主中治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖相关的疾病的方法，所述方法包括给予所述宿主任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的以下通式的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药。

22.一种在有需要的宿主中治疗和预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖相关的疾病的方法，所述方法包括给予所述宿主任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的以下通式的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药。

23.一种在有需要的宿主中治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖相关的疾病的方法，所述方法包括给予所述宿主任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的以下通式的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药。

24.一种在有需要的宿主中治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖相关的疾病的方法，所述方法包括给予所述宿主任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的以下通式的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药。

25.一种在有需要的宿主中治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖相关的疾病的方法，所述方法包括给予所述宿主任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的N-(膦酰乙酰基)-L-天冬氨酸(PALA)，或其药学上可接受的盐和/或前药。

26.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述药学上可接受的载体适用于口服递送。

27.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述药学上可接受的载体适用于静脉内递送。

28.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述药学上可接受的载体适用于胃肠道外递送。

29.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述药学上可接受的载体适用于经皮递送。

30..如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述药学上可接受的载体适用于皮下递送。

31.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述药学上可接受的载体适用于局部递送。

32.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有效化合物是以剂量单位的形式，以使所述剂量单位含有10-1500毫克化合物。

33.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有效化合物是片剂或胶囊的剂量单位形式。

34.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述宿主是人。

35.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述黄病毒科感染是HCV感染。

36.如权利要求35所述的方法，其特征在于，所述宿主是人。

37.一种在有需要的宿主中治疗和/或预防HCV感染的方法，所述方法包括给予所述宿主任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-a^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个W¹和W²独立地是N或CR^1’；

每个R^1’独立地是氢、卤素(F、Cl、Br或I)、CH₃(Me)、CH₂CH₃(Et)、Pr、i-Pr、n-Bu、i-Bu、t-Bu、CH₂CN、CH₂CO₂CH₃、CH₂C(＝O)NH₂、CH₂C(＝S)NH₂、C(＝O)NH₂、C(＝S)NH₂、C(＝NH)NH₂、C(＝O)NHOH、C(＝O)NHNH₂、CH₂NH₃、NH₂、NHCH₃、N(CH₃)₂、NHCH₂CH₃、OH、OCH₃、OCH₂CH₃、SH、SCH₃、SCH₂CH₃、CO₂H、CN或CHR^*NH₂；

每个R^*是氢、F、Cl、Br或I；

使得存在不多于三个环杂原子。

38.如权利要求37所述的方法，其中，Z¹是O。

39.如权利要求37所述的方法，其中，Z¹是S。

40.如权利要求37所述的方法，其中，Z¹是CH₂。

41.如权利要求37所述的方法，其中，Z¹是CF₂。

42.一种在有需要的宿主中治疗和/或预防HCV感染的方法，所述方法包括给予所述宿主任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-b^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个Y¹独立地是O、S、Se或NH；

每个W¹和W²独立地是N或CR^1’；

43.如权利要求42所述的方法，其中，Z¹是O。

44.如权利要求42所述的方法，其中，Z¹是S。

45.如权利要求42所述的方法，其中，Z¹是CH₂。

46.如权利要求42所述的方法，其中，Z¹是CF₂。

47.一种在有需要的宿主中治疗和/或预防HCV感染的方法，所述方法包括给予所述宿主任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-c^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个Y¹独立地是O、S、Se或NH；

每个W¹、W²和W³独立地是N或CR^1’；

48.如权利要求47所述的方法，其中，Z¹是O。

49.如权利要求47所述的方法，其中，Z¹是S。

50.如权利要求47所述的方法，其中，Z¹是CH₂。

51.如权利要求47所述的方法，其中，Z¹是CF₂。

52.一种在有需要的宿主中治疗和/或预防HCV感染的方法，所述方法包括给予所述宿主任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-d^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个R^1”独立地是OH、SH、NH₂或NHR⁵；

53.如权利要求52所述的方法，其中，Z¹是O。

54.如权利要求52所述的方法，其中，Z¹是S。

55.如权利要求52所述的方法，其中，Z¹是CH₂。

56.如权利要求52所述的方法，其中，Z¹是CF₂。

57.一种在有需要的宿主中治疗和/或预防HCV感染的方法，所述方法包括给予所述宿主任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的以下通式的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药。

58.一种在有需要的宿主中治疗和预防HCV感染的方法，所述方法包括给予所述宿主任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的以下通式的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药。

59.一种在有需要的宿主中治疗和/或预防HCV感染的方法，所述方法包括给予所述宿主任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的以下通式的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药。

60.一种在有需要的宿主中治疗和/或预防HCV感染的方法，所述方法包括给予所述宿主任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的以下通式的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药。

61.一种在有需要的宿主中治疗和/或预防HCV感染的方法，所述方法包括给予所述宿主任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的N-(膦酰乙酰基)-L-天冬氨酸(PALA)，或其药学上可接受的盐和/或前药。

62.如权利要求37所述的方法，其特征在于，所述药学上可接受的载体适用于口服递送。

63.如权利要求37所述的方法，其特征在于，所述药学上可接受的载体适用于静脉内递送。

64.如权利要求37所述的方法，其特征在于，所述药学上可接受的载体适用于非胃肠道递送。

65.如权利要求37所述的方法，其特征在于，所述药学上可接受的载体适用于经皮递送。

66..如权利要求37所述的方法，其特征在于，所述药学上可接受的载体适用于皮下递送。

67.如权利要求37所述的方法，其特征在于，所述药学上可接受的载体适用于局部递送。

68.如权利要求37所述的方法，其特征在于，所述有效化合物是以剂量单位的形式，以使所述剂量单位含有10-1500毫克化合物。

69.如权利要求37所述的方法，其特征在于，所述有效化合物是片剂或胶囊的剂量单位形式。

70.如权利要求37述的方法，其特征在于，所述宿主是人。

71.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-a^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药在治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖有关的疾病中的应用：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个W¹和W²独立地是N或CR^1’；

每个R^*是氢、F、Cl、Br或I；

使得存在不多于三个环杂原子。

72.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-b^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药在治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖有关的疾病中的应用：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个Y¹独立地是O、S、Se或NH；

每个W¹和W²独立地是N或CR^1’；

73.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-c^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药在治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖有关的疾病中的应用：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个Y¹独立地是O、S、Se或NH；

每个W¹、W²和W³独立地是N或CR^1’；

74.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-d^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药在治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖有关的疾病中的应用：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个R^1”独立地是OH、SH、NH₂或NHR⁵；

75.如权利要求71-74中任一项所述的用途，其中，Z¹是O。

76.如权利要求71-74中任一项所述的用途，其中，Z¹是S。

77.如权利要求71-74中任一项所述的用途，其中，Z¹是CH₂。

78.如权利要求71-74中任一项所述的用途，其中，Z¹是CF₂。

79.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的以下通式的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药在治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖有关的疾病中的应用。

80.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的治疗有效量的以下通式的β-D-核苷：

81.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的治疗有效量的以下通式的β-D-核苷：

82.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的治疗有效量的以下通式的β-D-核苷：

83.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的治疗有效量的N-(膦酰乙酰基)-L-天冬氨酸(PALA)或其药学上可接受的盐和/或前药的用途，任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中在治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖有关的疾病中的应用。

84.如权利要求71-83中任一项所述的应用，其特征在于，所述黄病毒科感染是HCV感染。

85.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-a^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药在治疗和/或预防HCV感染中的应用：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个W¹和W²独立地是N或CR^1’；

每个R^*是氢、F、Cl、Br或I；

使得存在不多于三个环杂原子。

86.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-b^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药在治疗和/或预防HCV感染中的应用：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个Y¹独立地是O、S、Se或NH；

每个W¹和W²独立地是N或CR^1’；

87.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-c^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药在治疗和/或预防HCV感染中的应用：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个Y¹独立地是O、S、Se或NH；

每个W¹、W²和W³独立地是N或CR^1’；

88.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-d^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药在治疗和/或预防HCV感染中的应用：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个R^1”独立地是OH、SH、NH₂或NHR⁵；

89.如权利要求85-88中任一项所述的用途，其中，Z¹是O。

90.如权利要求85-88中任一项所述的用途，其中，Z¹是S。

91.如权利要求85-88中任一项所述的用途，其中，Z¹是CH₂。

92.如权利要求85-88中任一项所述的用途，其中，Z¹是CF₂。

93.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的治疗有效量的以下通式的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药在治疗和/或预防HCV感染中的应用。

94.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的治疗有效量的以下通式的β-D-核苷：

95.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的治疗有效量的以下通式的β-D-核苷：

96.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的治疗有效量的以下通式的β-D-核苷：

97.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的治疗有效剂量的N-(膦酰乙酰基)-L-天冬氨酸(PALA)或其药学上可接受的盐和/或前药的用途在治疗和/或预防HCV感染中的应用。

98.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-a^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药在制造用于治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖有关的疾病的药物中的应用：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个W¹和W²独立地是N或CR^1’；

每个R^*是氢、F、Cl、Br或I；

使得存在不多于三个环杂原子。

99.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-b^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药在制造用于治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖有关的疾病的药物中的应用：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个Y¹独立地是O、S、Se或NH；

每个W¹和W²独立地是N或CR^1’；

100.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-c^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药在制造用于治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖有关的疾病的药物中的应用：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个Y¹独立地是O、S、Se或NH；

每个W¹、W²和W³独立地是N或CR^1’；

101.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-d^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药在制造用于治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖有关的疾病的药物中的应用：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个R^1”独立地是OH、SH、NH₂或NHR⁵；

102.如权利要求98-101中任一项所述的用途，其中，Z¹是O。

103.如权利要求98-101中任一项所述的用途，其中，Z¹是S。

104.如权利要求98-101中任一项所述的用途，其中，Z¹是CH₂。

105.如权利要求98-101中任一项所述的用途，其中，Z¹是CF₂。

106.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的治疗有效量的以下通式的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药在制造用于治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖有关的疾病的药物中的应用。

107.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的治疗有效量的以下通式的β-D-核苷：

108.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的治疗有效量的以下通式的β-D-核苷：

109.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的治疗有效量的以下通式的β-D-核苷：

110.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的治疗有效量的N-(膦酰乙酰基)-L-天冬氨酸(PALA)或其药学上可接受的盐和/或前药在制造用于治疗和/或预防黄病毒科感染或与异常的细胞增殖有关的疾病的药物中的应用。

111.如权利要求98-110中任一项所述的应用，其特征在于，所述黄病毒科感染是HCV感染。

112.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-a^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药在制造用于治疗和/或预防HCV感染的药物中的应用：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个W¹和W²独立地是N或CR^1’；

每个R^*是氢、F、Cl、Br或I；

使得存在不多于三个环杂原子。

113.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-b^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药在制造用于治疗和/或预防HCV感染的药物中的应用：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个Y¹独立地是O、S、Se或NH；

每个W¹和W²独立地是N或CR^1’；

114.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-c^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药在制造用于治疗和/或预防HCV感染的药物中的应用：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个Y¹独立地是O、S、Se或NH；

每个W¹、W²和W³独立地是N或CR^1’；

115.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效治疗量的通式(IV-d^*)的β-D-核苷或其药学上可接受的盐和/或前药在制造用于治疗和/或预防HCV感染的药物中的应用：

式中：

每个Z¹独立地是O、S、CH₂、CF₂、C(＝O)或C(＝CH₂)；

每个R^1”独立地是OH、SH、NH₂或NHR⁵；

116.如权利要求112-115中任一项所述的用途，其中，Z¹是O。

117.如权利要求112-115中任一项所述的用途，其中，Z¹是S。

118.如权利要求112-115中任一项所述的用途，其中，Z¹是CH₂。

119.如权利要求112-115中任一项所述的用途，其中，Z¹是CF₂。

120.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的治疗有效量的以下通式的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药在制造用于治疗和/或预防HCV感染的药物中的应用。

121.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的治疗有效量的以下通式的β-D-核苷：

或其药学上可接受的盐和/或前药在制造用于治疗和/或预防HCV感染的药物中的应用。。

122.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的治疗有效量的以下通式的β-D-核苷：

123.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的治疗有效量的以下通式的β-D-核苷：

124.任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的治疗有效量的N-(膦酰乙酰基)-L-天冬氨酸(PALA)，或其药学上可接受的盐和/或前药在制造用于治疗和/或预防HCV感染的药物中的应用。。

125.如权利要求71-124中任一项所述的应用，其特征在于，所述药学上可接受的载体适用于口服递送。

126.如权利要求71-124中任一项所述的应用，其特征在于，所述药学上可接受的载体适用于静脉内递送。

127.如权利要求71-124中任一项所述的应用，其特征在于，所述药学上可接受的载体适用于非胃肠道递送。

128.如权利要求71-124中任一项所述的应用，其特征在于，所述药学上可接受的载体适用于经皮递送。

129.如权利要求71-124中任一项所述的应用，其特征在于，所述药学上可接受的载体适用于皮下递送。

130.如权利要求71-124中任一项所述的应用，其特征在于，所述药学上可接受的载体适用于局部递送。

131.如权利要求71-130中任一项所述的应用，其特征在于，所述有效化合物是以剂量单位的形式，以使所述剂量单位含有10-1500毫克化合物。

132.如权利要求71-131中任一项所述的应用，其特征在于，所述有效化合物是片剂或胶囊的剂量单位形式。

133.如权利要求71-132中任一项所述的应用，其特征在于，所述宿主是人。