CN1946412B - 炎性肠病的预防和/或治疗剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及含有丙酸菌发酵物作为有效成分的炎性肠病的预防和/或治疗剂。

Description

炎性肠病的预防和/或治疗剂
技术领域
本发明涉及溃疡性结肠炎、克罗恩病等炎性肠病的预防和/或治疗剂。
背景技术
炎性肠病(IBD：Inflammatory Bowel Disease)是以溃疡性结肠炎和克罗恩病为代表的，在大肠和小肠的粘膜引发慢性的炎症和/或溃疡的原因不明的疾病的总称。大多数患者在10多岁～20多岁的较低的年龄发病，表现出腹泻、发热、腹痛等临床症状或全身性炎症症状，不仅无法有效地吸收口服摄取的食物的营养，而且由于饮食限制和较多的排便次数，社会生活受到影响，产生问题。作为炎性肠病的原因，提出有自体免疫异常说和肠道细菌说等，但目前尚未确定，依然没有找到可以根治的治疗法(非专利文献1)。
作为炎性肠病、例如溃疡性结肠炎的治疗药，通常使用柳氮磺吡啶、5-氨基水杨酸、类固醇、免疫抑制剂等。然而，这些治疗药不仅无法获得足够的治疗效果，而且类固醇和免疫抑制剂存在长期服用产生的副作用大的问题(非专利文献1)。
近年来发现，丙酸菌之一的费氏丙酸杆菌(Propionibacteriumfreudenreichii)产生BGS(双歧杆菌生长促进因子，Bifidogenic GrowthStimulator)，其主要成分为1，4-二羟基-2-萘甲酸(DHNA)。已知DHNA具有双歧杆菌增殖促进作用，不仅改善炎性肠病中粘膜的炎症状态，而且抑制活化免疫细胞的浸润(例如，参考专利文献1)。此外，还报告了DHNA可以减轻牛奶不耐受者摄入牛奶时的腹部不适症状，可用于代谢性骨疾病的预防和/或治疗(参考同一文献)。丙酸菌在菌体内外大量产生该DHNA，因此利用丙酸菌的发酵法作为安全性高的DHNA制造方法受到注目。通过发酵法得到的丙酸菌发酵物含有高浓度的DHNA，作为具有调理肠道作用的特定保健用食品得到了认可。
专利文献1：国际公开第WO03/016544号小册子
非专利文献1：马场忠雄编，“消化器官疾病研究77炎性肠病—新的视点”，へゐす出版，1999年
发明的揭示
因此，本发明的目的在于提供安全性高的炎性肠病的预防和/或治疗剂。
本发明者经认真研究后，发现丙酸菌发酵物对炎性肠病的预防和/或治疗是有效的，从而完成了本发明。
即，本发明提供含有丙酸菌发酵物作为有效成分的炎性肠病的预防和/或治疗剂，以及炎性肠病的预防和/或治疗用食品。
此外，本发明还提供丙酸菌发酵物在炎性肠病的预防和/或治疗剂以及炎性肠病的预防和/或治疗用食品的制造中的应用。
此外，本发明还提供炎性肠病的预防和/或治疗方法，其特征在于，投与有效量的丙酸菌发酵物。
本发明的炎性肠病的预防和/或治疗剂可以安全地预防和/或治疗溃疡性结肠炎等炎性肠病。
附图的简单说明
图1为表示对DSS肠炎小鼠投与丙酸菌乳清发酵物而产生的大肠长度的变化的图，表示各组的大肠长度(mm)的平均值±标准差。
图2为表示对DSS肠炎大鼠投与丙酸菌乳清发酵物而产生的大肠长度的变化的图，表示各组的大肠长度(mm)的平均值±标准差。
图3为表示对TNBS肠炎大鼠投与丙酸菌乳清发酵物而产生的大肠溃疡的变化的图，表示各组的溃疡系数(mm2)的平均值±标准差。
实施发明的最佳方式
本发明的作为有效成分的丙酸菌发酵物可以按照国际公开第WO03/016544号小册子等中所记载的公知的制造方法进行制造。本说明书中，“丙酸菌发酵物”包括通过丙酸菌的发酵得到的培养物本身及其处理物，例如培养物或将其除菌或灭菌得到的物质的过滤液、上清液或沉淀物，或将它们用蒸发器等浓缩得到的浓缩物，糊状物，稀释物或者干燥物(采用真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等)等。
作为丙酸菌发酵物的制造所使用的丙酸菌，只要是产生DHNA的菌，没有特别限定，较好是属于丙酸杆菌属的菌。作为丙酸杆菌属的菌，可以例举费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)、特氏丙酸杆菌(P.thoenii)、产丙酸丙酸杆菌(P.acidipropionici)、詹氏丙酸杆菌(P.jensenii)等干酪用的菌以及贪婪丙酸杆菌(P.avidum)、疮疱丙酸杆菌(P.acnes)、嗜淋巴丙酸杆菌(P.lymphophilum)、颗粒丙酸杆菌(P.granulosum)等，其中，较好是P.freudenreichii，更好是P.freudenreichii IFO12424或P.freudenreichiiATCC6207，特别好是P.freudenreichii ET-3(FERM BP-8115)。
本发明者将P.freudenreichii ET-3菌株保藏于独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心。保藏的特定内容如下。
(1)保藏机构名：独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心
(2)联络地址：邮编305-8566茨城县筑波市东1丁目1番1中央第6
(3)保藏编号：FERM BP-8115
(4)用于识别的标识：ET-3
(5)保藏日：2001年8月9日
其它菌株中，菌株名中记有ATCC的菌株为从美国种质保藏中心获得的标准菌株，菌株名中记有IFO的菌株为从财团法人发酵研究所获得的标准菌株。
接着，将丙酸菌以通常的微生物可以增殖的含有营养源的培养基在好氧或厌氧条件下进行培养。作为营养源，可以使用以往微生物的培养中所用的公知的营养源。作为丙酸菌发酵所用的培养基，可以例举除了乳清粉、酪蛋白、脱脂奶粉、乳清蛋白浓缩物、乳清蛋白分离物之外，还添加了酵母提取物、胰胨等蛋白胨以及葡萄糖、乳糖、乳糖的乳糖酶处理物、乳清矿物质等适量的糖类和矿物质成分的培养基等。以下，也特别将在培养基中使用乳清粉的丙酸菌发酵物称为丙酸菌乳清发酵物。
作为培养方法，可以使用公知的各种好氧或厌氧的培养方法，从大量生产的角度来看，较好是采用液体培养基的好氧或厌氧培养方法。培养温度较好是约20～40℃，培养基的pH较好是中性～弱酸性(较好是pH5.5～7.5)。培养结束后可以立即使用其培养液，较好是将培养液冷却(3～20℃，较好是约10℃)，保存2～4周左右后使用。
采用上述方法获得的丙酸菌发酵物较好是在固体成分中含有0.001～50w/w％的DHNA，特别好是含有0.008～10w/w％的DHNA。
如后述实施例所示，发现该丙酸菌发酵物对作为炎性肠病的模型公知的葡聚糖硫酸钠(DSS)肠炎或2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)肠炎具有良好的预防和/或治疗作用。具体来说，减少作为DSS肠炎的典型症状的大肠长度的缩短，并使作为TNBS肠炎的典型症状的溃疡的大小显著地减小。另外，丙酸菌发酵物表现出与比丙酸菌发酵物所含的DHNA高出20倍用量的DHNA大致同等的DSS肠炎治疗效果。
作为本发明的处置对象的炎性肠病可以例举溃疡性结肠炎、克罗恩病等。此外，还可以例举理解为广义的炎性肠病的由病原微生物、药物、血行障碍、放射线、物理化学因素引起的肠病。
丙酸菌发酵物可以药品或食品的形式使用。例如，通过作为药品直接投与，或者通过作为特定保健用食品等特殊用途食品或功能性营养品直接摄取，可以治疗各种炎性肠病。此外，可以将其添加在各种食品(牛奶、清凉饮料、酵乳、酸乳、干酪、面包、饼干、脆点心、匹萨饼等)中进行摄取。
含有丙酸菌发酵物的食品中，作为主要成分可以使用水、蛋白质、糖类、脂质、维生素、矿物质类、有机酸、有机碱、果汁、调味品类等。作为蛋白质，可以例举全脂奶粉、脱脂奶粉、部分脱脂奶粉、酪蛋白、乳清粉、乳清蛋白、乳清蛋白浓缩物、乳清蛋白分离物、α-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳白蛋白、乳铁蛋白、大豆蛋白、鸡蛋蛋白、肉蛋白等动植物性蛋白质和它们的水解产物，黄油、乳清矿物质、奶油、乳清、乳清矿物质、非蛋白质状态的氮、唾液酸、磷脂、乳糖等各种来自乳的成分。作为糖类，可以例举蔗糖、葡萄糖、果糖、糖醇类、麦芽糖、寡糖类、加工淀粉(除糊精之外，可溶性淀粉、英国淀粉、氧化淀粉、淀粉酯、淀粉醚等)、食物纤维等碳水化合物。作为脂质，可以例举猪油、鱼油等动物性油脂，棕榈油、红花油、玉米油、菜油、椰子油等植物性油脂以及它们的分选油、氢化油、酯交换油等植物性油脂。作为维生素类，可以例举维生素A、维生素B族、维生素C、异抗坏血酸、维生素D族、维生素E、维生素K族、维生素P、维生素Q、维生素PP、烟酸、泛酸、生物素、肌醇、胆碱、叶酸等；作为矿物质，可以例举钙、钾、镁、钠、氯、铜、铁、锰、锌、硒、氟、硅、碘等。作为有机酸，可以例举例如苹果酸、柠檬酸、乳酸、酒石酸等。这些成分使用所选的一种，或两种以上组合使用。这些成分可以使用合成品，或根据需要使用大量含有它们的食品。
将丙酸菌发酵物作为药品使用的情况下，可以以各种形态投与。其形态可以是通过例如片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、糖浆剂等口服投与。上述各种制剂可以按照常规方法在主剂中使用赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂、除臭剂、溶解助剂、悬浮剂、包衣剂等医药制剂技术领域中通常可使用的已知的助剂来进行制剂化。
将丙酸菌发酵物用于人的情况下，丙酸菌发酵物的预防和/或治疗的有效量根据进行预防和/或治疗的患者的年龄和条件而不同，但成人一般以固体成分计可以每天摄取10～5000mg、较好是100～1000mg、更好是200～800mg。
实施例
以下，例举实施例，对本发明进行详细说明，但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1
(1)材料和方法
(丙酸菌乳清发酵物的制造)
将含有乳清粉(10w/w％)和蛋白酶アマノA(0.07w/w％，アマノエンザイム公司制)的水溶液在47℃(pH6.6)下进行2小时酶解。然后，通过在85℃加热10分钟，使蛋白酶失活。接着，添加啤酒酵母提取物(最终浓度0.10w/w％，朝日啤酒公司制)和硫酸铵(最终浓度0.27w/w％)，将pH调整至6.7后，在121℃下灭菌7分钟。在该培养基中接种2v/w％的P.freudenreichii ET-3(FERM BP-8115)的活化培养液(菌浓度：2～5×109cfu/mL)，在氮气气氛下于37℃进行厌氧培养72小时。接着，获得该培养液作为丙酸菌乳清发酵物(固体成分含量：10w/v％，固体成分中的DHNA含量：0.01w/w％)。作为活化培养液，使用与上述同样的培养基。
未发酵物使用不接种丙酸菌而进行上述培养时的培养液。
(供试动物)
实验使用BALB/c系小鼠，雌性，7周龄。
(小鼠结肠炎模型的制作和丙酸菌乳清发酵物的投与)
配制3％葡聚糖硫酸钠(DSS，MW40000)水溶液，作为小鼠的饮用水供其自由摄取8天，制成小鼠结肠炎模型(以下也称结肠炎小鼠)。结肠炎小鼠中，对丙酸菌乳清发酵物投与组(图1的发酵物投与组)，从DSS摄取开始日起，经口投与上述丙酸菌乳清发酵物8天，每天2次，每次0.3mL/只(以DHNA计，3μg/只)。结肠炎小鼠中，对未发酵物投与组，从DSS摄取开始日起，经口投与上述未发酵物8天，每天2次，每次0.3mL/只。结肠炎小鼠中，对于对照组，从DSS摄取开始日起，经口投与蒸馏水8天，每天2次，每次0.3mL/只。此外，以与上述相同的投与安排，以蒸馏水代替DSS供其自由饮水，而且代替上述丙酸菌乳清发酵物、上述未发酵物，经口投与同样量的蒸馏水，作为正常组。
(2)评价
(大肠长度)
投与结束后，将大肠取出，测定从盲肠到肛门的长度(mm)。结果示于图1。
(3)结果和考察
由图1可知，对照组中，大肠长度与正常组相比显著地缩短。另一方面，在丙酸菌乳清发酵物投与组中，大肠长度的缩短与对照组和未发酵物投与组相比得到显著的抑制。因此，判定丙酸菌乳清发酵物对DSS肠炎具有治疗效果。
实施例2
(1)材料和方法
(供试动物)
实验使用SD系大鼠，雄性，7周龄。
(大鼠结肠炎模型的制作和丙酸菌乳清发酵物的投与)
配制3％葡聚糖硫酸钠(DSS，MW5000)水溶液，作为大鼠的饮用水供其自由摄取10天，制成大鼠结肠炎模型(以下也称结肠炎大鼠)。接着，饮用水改为1％葡聚糖硫酸钠(DSS，MW5000)水溶液，再供自由摄取3天。结肠炎大鼠中，对丙酸菌乳清发酵物投与组(图2的发酵物投与组)，从1％DSS摄取开始日起，经口投与实施例1所述的丙酸菌乳清发酵物3天，每天2次，每次3mL/只(以DHNA计，30μg/只)。结肠炎大鼠中，对DHNA投与组，从1％DSS摄取开始日起，经口投与DHNA(和光纯药制)3天，每天2次，每次600μg/只。为了稳定化，将DHNA溶解于0.25％抗坏血酸水溶液，按投与容量3mL/只配制使用。结肠炎大鼠中，对于对照组，从1％DSS摄取开始日起，经口投与0.25％抗坏血酸水溶液3天，每天2次，每次3mL/只。此外，以与上述相同的投与安排，以蒸馏水代替DSS供其自由饮水，而且代替上述丙酸菌乳清发酵物、DHNA，经口投与同样量的蒸馏水，作为正常组。
(2)评价
(大肠长度)
投与结束后，将大肠取出，测定从盲肠到肛门的长度(mm)。结果示于图2。
(3)结果和考察
由图2可知，对照组中，大肠长度与正常组相比显著地缩短。另一方面，在丙酸菌乳清发酵物投与组中，与DHNA组相比，虽然以DHNA量计只投与约1/20，但大肠长度的缩短得到显著的抑制。因此，表明丙酸菌乳清发酵物中除DHNA外的成分可能对DSS肠炎的治疗更有效果。
实施例3
(1)材料和方法
(供试动物)
实验使用SD系大鼠，雄性，6周龄。
(大鼠结肠炎模型的制作和丙酸菌乳清发酵物的投与)
大鼠结肠炎模型的制作方法按照Uchida等的方法(Masayuki Uchida，OrieMogami，J Pharmacol Sci，97，pp285-288(2005))。
配制0.1M的2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)溶液(溶解于35％乙醇)，将其以0.2mL/只灌肠投与到大鼠的大肠，制成大鼠结肠炎模型(以下也称结肠炎大鼠)。结肠炎大鼠中，对丙酸菌乳清发酵物投与组(图3的发酵物投与组)，从结肠炎制作的第2日起，经口投与发酵物9天，每天2次，每次3mL/只(以DHNA计，30μg/只)，该发酵物通过将实施例1所述的丙酸菌乳清发酵物冷冻干燥后，用1w/w％阿拉伯胶水溶液悬浮至与原来的丙酸菌乳清发酵物相同的容量而得到。结肠炎大鼠中，对对照组，从结肠炎制作的第2日起，经口投与1w/w％阿拉伯胶水溶液9天，每天2次，每次3mL/只。
(2)评价
(溃疡的大小)
投与结束后，将大肠取出，测定炎症部位产生的溃疡的大小(mm)，将长径与短径的积作为溃疡系数(mm2)。结果示于图3。
(3)结果和考察
由图3可知，在丙酸菌乳清发酵物投与组中，与对照组相比，溃疡系数显著减小。

Claims (8)

1.炎性肠病的预防和/或治疗剂，其特征在于，它是含有丙酸菌发酵物作为有效成分的炎性肠病的预防和/或治疗剂；上述的丙酸菌是保藏编号为FERMBP-8115的费氏丙酸杆菌ET-3(Propionibacterium freudenreichii ET-3)。
2.如权利要求1所述的炎性肠病的预防和/或治疗剂，其特征在于，上述的炎性肠病是溃疡性结肠炎、克罗恩病。
3.炎性肠病的预防和/或治疗用食品，其特征在于，它是含有丙酸菌发酵物的炎性肠病的预防和/或治疗用食品，上述的丙酸菌是保藏编号为FERMBP-8115的费氏丙酸杆菌ET-3(Propionibacterium freudenreichii ET-3)。
4.如权利要求3所述的炎性肠病的预防和/或治疗用食品，其特征在于，上述的炎性肠病是溃疡性结肠炎、克罗恩病。
5.丙酸菌发酵物在炎性肠病的预防和/或治疗剂的制造中的应用，上述的丙酸菌是保藏编号为FERM BP-8115的费氏丙酸杆菌ET-3(Propionibacteriumfreudenreichii ET-3)。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，上述的炎性肠病是溃疡性结肠炎、克罗恩病。
7.丙酸菌发酵物在炎性肠病的预防和/或治疗用食品的制造中的应用，上述的丙酸菌是保藏编号为FERM BP-8115的费氏丙酸杆菌ET-3(Propionibacterium freudenreichii ET-3)。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，上述的炎性肠病是溃疡性结肠炎、克罗恩病。
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