CN116635516A - 包含丙酸菌属菌或其处理物的组合物 - Google Patents
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Abstract
提供促进栖粪杆菌属菌增殖的新手段,所述新手段为包含丙酸菌(Acidipropionibacterium)属菌或其处理物且满足选自以下的(A)~(D)中的至少一个条件的组合物:(A)前述组合物为栖粪杆菌(Faecalibacterium)属菌增殖促进用组合物;(B)前述组合物为与栖粪杆菌属菌相关的症状或状态的改善用组合物;(C)前述组合物为促进栖粪杆菌属菌增殖的糖类替代物;(D)前述组合物中的促进栖粪杆菌属菌增殖的糖类的合计含量为15质量%以下。
Description
相关申请的参照
本专利申请基于2020年12月9日提出申请的日本专利申请2020-204427号要求优先权,所述在先专利申请中的全部公开内容通过引用而成为本说明书的一部分。
技术领域
本发明涉及包含丙酸菌属菌或其处理物的组合物。更详细地,本发明涉及包含丙酸菌属菌或其处理物且可用于促进栖粪杆菌属菌的增殖的组合物。
背景技术
普氏栖粪杆菌(Faecalibacterium prausnitzii,以下也记作“普氏栖粪杆菌”)已知为栖粪杆菌(Faecalibacterium)属菌的代表性菌株,是在成年健康人的全部肠道细菌中占约5%的优势菌种,作为具有产生丁酸、抗炎症活性等对人体健康有益的生理功能的菌种,近年来备受关注。
肠易激综合征(IBS)患者、炎症性肠病(IBD)患者的肠道与健康人相比,普氏栖粪杆菌明显减少。因此认为,通过增加肠道的普氏栖粪杆菌能够预防或改善各种疾病。
作为可增加肠道的普氏栖粪杆菌的材料,报道了例如1-酮糖、菊糖等在小肠内难以消化或吸收的糖类(例如,参照专利文献1、2)。但是,据报道1-酮糖、菊糖等糖类有加重腹部胀满感等肠易激综合征(IBS)症状之虞(例如,参照非专利文献1)。
这样的1-酮糖、菊糖等在小肠内难以消化或吸收的糖类也被称为FODMAP或FOLFAP。FODMAP是发酵性(Fermentable)、低聚糖(Oligosaccharides)、二糖类(Disaccharides)、单糖类(Monosaccharides)及多元醇(Polyols)的首字母。与其实质含义相同的(但是更一般性的)另一术语是FOLFAP,其为果糖(Fructose)、低聚糖(Oligosaccaride)、乳糖(Lactose)、果聚糖(Fructans)及多元醇(Polyols)的首字母。
FODMAP及FOLFAP是指:由食品中可见的分子得到的、并且部分人群无法充分吸收的一组碳水化合物。当这些分子在消化道中的小肠处未被充分吸收时,这些分子会经由消化道进入大肠,在这里,它们成为通常生息于此的细菌的食物源。并且,该细菌将这些FODMAP及FOLFAP消化/发酵。该细菌的活动有时会导致肠易激综合征(IBS)的症状。
因此,依然期望开发出代替FODMAP或FOLFAP的、对生物体安全且可促进栖粪杆菌属菌增殖的新手段。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:国际公开第2017-159647号
专利文献2:日本特表2015-535280号
非专利文献
非专利文献1:Hayes PA et al.,“Irritable bowel syndrome:the role offood in pathogenesis and management”,2014
发明内容
本发明人们此次进行了深入研究,结果发现使用丙酸菌属菌或其处理物可促进栖粪杆菌属菌的增殖。本发明基于该发现。
本发明的一个目的在于,提供促进栖粪杆菌属菌增殖的新手段。
根据本发明的一实施方式,提供一种组合物,其包含丙酸菌属菌或其处理物,所述组合物满足选自以下的(A)~(D)中的至少一个条件。
(A)上述组合物为栖粪杆菌属菌增殖促进用组合物。
(B)上述组合物为与栖粪杆菌属菌相关的症状或状态的改善用组合物。
(C)上述组合物为促进栖粪杆菌属菌增殖的糖类替代物。
(D)上述组合物中的促进栖粪杆菌属菌增殖的糖类的含量为15质量%以下。
根据本发明,可以使用丙酸菌属菌或其处理物来促进栖粪杆菌属菌的增殖。丙酸菌属菌的菌株几乎全部可以从采自日本各地的鲜奶中通过分离方式而采集。产酸丙酸杆菌(P.acidipropionici,旧菌种名)也被记载于EFSA(European Food safety Authority,欧洲食品安全局)的QPS列表(Qualified Presumption of Safety)之类的安全性有保障的菌列表,因此本发明在确保对生物体的安全性且促进栖粪杆菌属菌增殖方面有利。另外,本发明中,可以使用丙酸菌属菌代替FODMAP、FOLFAP,在于FODMAP、FOLFAP存在量低的环境下促进栖粪杆菌属菌的增殖方面有利。另外,本发明可以有利于改善与栖粪杆菌属菌相关的疾病、状态。
附图说明
图1示出向含有被检菌株(普氏栖粪杆菌ATCC27768T)的琼脂培养基滴加试验样品并进行静置培养、从而确认对被检菌株有无增殖促进效果的试验(例1)流程。
图2为向含有被检菌株(普氏栖粪杆菌ATCC27768T)的琼脂培养基滴加产丙酸丙酸菌P2002702并进行静置培养后的照片(例1)。
图3为示出向被检菌株(普氏栖粪杆菌ATCC27768T)的培养液(液体培养基)中添加试验样品(产丙酸丙酸菌P2002701、P2002702、DSM4900T或P2002703)或对照(生理盐水)并进行共培养后的被检菌株的菌数的图。
图4为示出向被检菌株(普氏栖粪杆菌ATCC27768T)的培养液(液体培养基)中添加试验样品(产丙酸丙酸菌P2002701、P2002702、IFO12425的培养上清)或对照(生理盐水)并进行共培养后的被检菌株的菌数的图。
具体实施方式
根据本发明的一实施方式,提供包含丙酸菌属菌或其处理物的、满足选自以下的(A)~(D)中的至少一个条件的组合物。
(A)上述组合物为栖粪杆菌属菌增殖促进用组合物。
(B)上述组合物为与栖粪杆菌属菌相关的症状或状态的改善用组合物。
(C)上述组合物为促进栖粪杆菌属菌增殖的糖类替代物。
(D)上述组合物中的促进栖粪杆菌属菌增殖的糖类的含量为15质量%以下。
丙酸菌属菌或其处理物可有效地促进栖粪杆菌属菌的增殖这一点,对于本领域技术人员而言是一个意外的事实。
已知丙酸菌属菌为革兰氏阳性、厌氧性的杆菌。
作为丙酸菌(Acidipropionibacterium)的具体菌种,可列举产丙酸丙酸菌(Acidipropionibacterium acidipropionici)(IFO12425株、P2002701株、P2002702株、DSM4900T株、P2002703株等)、丹诺氏丙酸菌(Acidipropionibacterium damnosum)、詹氏丙酸菌(Acidipropionibacterium jensenii)、微嗜气丙酸菌(Acidipropionibacteriummicroaerophilum)、橄榄体丙酸菌(Acidipropionibacterium olivae)及特氏丙酸菌(Acidipropionibacterium thoenii)等,优选为产丙酸丙酸菌。
长双歧杆菌(Bifidobacteirum longum)JCM1217T株是可从日本独立行政法人理化学研究所生物资源中心微生物材料开发室(日本国茨城县筑波市高野台3丁目1番地之1)基于JCM号而获取的菌株。
产丙酸丙酸菌P2002701株、P2002702株、或P2002703株由株式会社明治(邮编192-0919日本东京都八王子市七国1-29-1明治技术革新中心)保管。
产丙酸丙酸菌DSM4900T株是可由德国微生物菌种保藏中心(German Collectionof Microorganisms and Cell Cultures GmbH)基于DSM号而获取的菌株。
产丙酸丙酸菌IFO12425株是可由日本独立行政法人制品评价技术基盘机构基于IFO号获取的菌株。
丙酸菌属菌可以为活菌或死菌中的任一种,优选为活菌。
另外,丙酸菌属菌可以以实施了物理化学处理的处理物形式用于本发明的实施。作为丙酸菌属菌的处理物,可列举丙酸菌属菌的悬浮物、培养物、培养上清、发酵物、加热处理物(溶解处理物等)、破碎物、浓缩物、灭菌处理物、液状化物(提取物等)、糊化物、干燥物(例如喷雾干燥物、真空干燥物、转鼓干燥物、冷冻干燥物、或冷冻干燥粉末等冷冻干燥破碎物)及稀释物等,优选为培养物或培养上清。另外,可以使用对上述处理物施加例如基于各种色谱的分离等处理而得的物质。
丙酸菌属菌的培养没有特别限定,可以使用微生物培养中通常使用的培养基来进行培养。即,可使用含有碳源(乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、废糖蜜等)、氮源(酪蛋白的水解物、乳清蛋白水解物、大豆蛋白水解物等有机含氮物等)、无机物及其它营养素的任意培养基。
培养基例如可以通过配合作为营养源的可溶性淀粉、乳清、酪蛋白、脱脂奶粉、乳清蛋白浓缩物(WPC)、乳清蛋白分离物(WPI)、酵母提取物、肉提取物、肝脏提取物、大豆提取物、胰蛋白酶解酪蛋白等蛋白胨、朊蛋白胨(Proteose peptone)、消化血清末、葡萄糖、乳糖等糖类、L-半胱氨酸盐酸盐、巯基乙酸钠等还原剂、磷酸二氢钾、氯化钠、乳清矿物质等矿物质类等、或者含有较多这些成分的食品或其酶处理物而制备。虽然没有限定,但是优选向培养基中添加乳清或其酶水解物。
培养可以通过厌氧培养法或需氧培养法进行,优选利用液体培养基的厌氧培养法或需氧培养法。培养时间没有特别限定,可列举通常为0.5~200小时、优选为5~100小时、更优选为6~80小时、进一步优选为8~40小时、进一步更优选为10~24小时。培养温度没有特别限定,可在通常20~50℃、优选25~45℃、更优选30~40℃下进行。培养可以在通入二氧化碳或氮气情况下以厌氧方式进行,也可以在通入空气情况下进行搅拌或振荡而以需氧方式进行。作为培养的优选例,可以在灭菌后的培养基中接种丙酸菌(Acidipropionibacterium)属菌,在氮气气氛下在通常30~40℃(更优选为30℃)下进行24~144小时的厌氧培养。
丙酸菌属菌的菌体可以通过对培养物进行过滤或离心分离等而从培养液中分离、使用。经分离的菌体可以直接使用。关于经分离的菌体,可以实施浓缩、破碎、糊化、灭菌处理、加热处理(溶解处理等)、稀释或干燥等处理。也可以使用这样的分离菌体的浓缩物、破碎物、糊化物、灭菌处理物、稀释物或干燥物等处理物。
另外,作为丙酸菌属菌的处理物,可以不经分离而直接使用培养液。关于培养液,可以实施浓缩、糊化、灭菌处理、加热处理(溶解处理等)、稀释或干燥等处理。也可以使用这样的培养液的浓缩物、糊化物、灭菌处理物、稀释物或干燥物等处理物。
制备培养上清的方法也没有特别限定,例如,可以对培养液进行离心并回收上清,然后进行过滤而除去菌体,从而制备。关于培养上清,可以实施浓缩、糊化、灭菌处理、加热处理(溶解处理等)、稀释或干燥等处理。也可以使用这样的培养上清的浓缩物、糊化物、灭菌处理物、稀释物或干燥物等处理物。
根据一实施方式,本发明的组合物中的丙酸菌属菌或其处理物的含量的下限为例如0.01质量%以上,优选为0.1质量%以上,更优选为1质量%以上,进一步优选为5质量%以上,进一步更优选为10质量%以上。上限为例如小于100质量%,优选为95质量%以下,更优选为90质量%以下,进一步优选为80质量%以下,进一步更优选为50质量%以下或40质量%以下。因此,本发明的组合物中的丙酸菌属菌或其处理物的含量可以设为例如0.01质量%以上且小于100质量%,从有效地促进栖粪杆菌属菌的增殖的观点出发,优选为0.1~95质量%,更优选为1~95质量%,进一步优选为5~90质量%,进一步更优选为10~80质量%、10~50质量%、或10~40质量%。
另外,作为本发明的增殖促进对象的栖粪杆菌属菌为肠道细菌的一种。栖粪杆菌属菌已知为一种在大肠内大量产生短链脂肪酸、特别是丁酸的产丁酸菌(有益菌)。
作为栖粪杆菌菌种,可列举例如普氏栖粪杆菌(Faecalibacterium prausnitzii)等,优选普氏栖粪杆菌。
根据优选实施方式,本发明的组合物可以包含除丙酸菌属菌或其处理物以外的添加成分。作为所述具体添加成分,可列举例如培养基成分、经口摄取时可接受的成分(糖质(糖类及食物纤维)、蛋白、脂质、维生素类、矿物质类、生物体必需微量金属、食品卫生上或药学上可接受的载体等)。
作为培养基成分,可列举细胞培养添加剂及微生物培养添加剂等培养添加剂。作为培养添加剂,更具体而言,可列举酵母提取物、肉提取物、葡萄糖、脑心浸液、蛋白胨、朊蛋白胨、蛋白水解物(大豆水解物、明胶水解物等)、氯化血红素、氨基酸、消化血清末、肝脏提取物、可溶性淀粉、L-半胱氨酸盐酸盐、巯基乙酸钠等,优选为蛋白水解物、酵母提取物、肉提取物或葡萄糖。
作为糖质,可列举例如单糖类、二糖类、发酵性的低聚糖等糖类;糊精、可溶性淀粉、英国淀粉、氧化淀粉、淀粉酯、淀粉醚等改性淀粉;木糖醇、山梨醇等多元醇;食物纤维。
作为蛋白质,可列举例如全脂奶粉、脱脂奶粉、部分脱脂奶粉、酪蛋白、乳清粉、乳清蛋白、乳清蛋白浓缩物、乳清蛋白分离物、α-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳清蛋白、乳铁蛋白、大豆蛋白、鸡蛋蛋白、肉蛋白等动植物性蛋白、这些的水解物、黄油、乳性矿物质、奶油、乳清、非蛋白氮、唾液酸、磷脂、乳糖等各种乳来源成分等。
作为脂质,可列举例如猪油、鱼油等、这些的分提油、氢化油、酯交换油等动物性油脂;棕榈油、红花油、玉米油、菜籽油、椰子油、这些的分提油、氢化油、酯交换油等植物性油脂等。
作为维生素类,可列举例如维生素A、胡萝卜素类、维生素B族、维生素C、维生素D族、维生素E、维生素K族、维生素P、维生素Q、烟酸(niacin)、尼克酸(nicotinic acid)、泛酸、生物素、肌醇、胆碱、叶酸等。
作为矿物质类,可列举例如钙、钾、镁、钠、铜、铁、锰、锌、硒等,更具体而言,可列举磷酸二氢钾、氯化钠。
作为生物体必需微量金属,可列举例如硫酸锰、硫酸锌、氯化镁、碳酸钾等。
作为食品卫生上或药学上可接受的载体,可列举溶剂、赋形剂、稳定剂、防腐剂、润湿剂、乳化剂、润滑剂、甜味料、着色料、香料、缓冲剂、抗氧化剂、表面活性剂、pH调节剂等。作为更具体的载体的例子,可列举水、有机溶剂、胶原、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、羧基乙烯基聚合物、海藻酸钠、水溶性葡聚糖、水溶性糊精、羧甲基淀粉钠、果胶、黄原胶、阿拉伯胶、酪蛋白、明胶、琼脂、丙二醇、聚乙二醇、凡士林、石蜡、硬脂醇、硬脂酸、人血清白蛋白剂、脂质体等人工细胞构造物等。
本发明的组合物可以按照将丙酸菌属菌或其处理物与上述添加剂混合等本领域技术人员公知的制造方法来制造。
丙酸菌属菌或其处理物可以发挥栖粪杆菌属菌的增殖促进作用,因此可以作为FODMAP、FOLFAP等促进栖粪杆菌属菌增殖的糖类的替代物来使用。
另外,丙酸菌属菌或其处理物优选用于减少FODMAP、FOLFAP等促进栖粪杆菌属菌增殖的糖类的用量。本发明的组合物中的、促进栖粪杆菌属菌增殖的糖类的合计含量的下限为例如0.01质量%以上,优选为0.1质量%以上,更优选为0.5质量%以上。上限为例如15质量%以下,优选为10质量%以下,更优选为5质量%以下,进一步优选为0.8质量%以下。因此,本发明的组合物中的、促进栖粪杆菌属菌增殖的糖类的合计含量为例如15质量%以下,优选为0.01~10质量%,更优选为0.1~5质量%,进一步优选为0.5~0.8质量%。
另外,促进栖粪杆菌属菌增殖的糖类例如为选自由发酵性糖质、发酵性低聚糖、单糖类、二糖类及多元醇组成的组中的至少一种,优选为1-酮糖及菊糖中的至少任意种。
促进栖粪杆菌属菌增殖的FODMAP、FOLFAP的含量的测定方法可以按照J.R.Biesiekierski et al.“Quantification of Fructans,galacto-oligosacharidesand other short-chain carbohydrates in processed grains and cereals”,Journalof Human Nutrition and Dietetics,Vol.24,(2):pp154-176,(April,2011)中记载的方法来实施。
本发明的组合物可以安全地经口摄取,因为其能够将从日本各地所采集的鲜奶中通过分离方式采集的丙酸菌属菌或其处理物作为有效成分而制备。因此,根据一实施方式,本发明的组合物为经口组合物。另外,根据优选方式,本发明的组合物为食品组合物或药物组合物。
本发明的组合物为食品组合物时,形态没有特别限定,可列举例如溶液、悬浮液、乳浊液、粉末、糊、半固体成型物、固体成型物等形态。作为具体的饮食品,可列举例如乳饮料、清凉饮料、发酵饮料、发酵乳、乳酸菌饮料、乳性饮料、酸奶、乳酪、黄油、奶油、冰淇淋、冰点心、巧克力、压片(压片糖)、软糖、面包、棒状食品、补充剂、流食、病人用食品、营养食品、冷冻食品、加工食品、调味料及其它市售食品等。
另外,如上所述,本发明的组合物通过使用丙酸菌属菌或其处理物,从而可以降低FODMAP、FOLFAP的使用量地进行摄取。因此,根据一实施方式,本发明的组合物可以以低FODMAP饮食或低FOLFAP饮食形式提供。
低FODMAP饮食在Gearry R.B et al.,JCC,2008,09,004,p8~14中有记载和定义。更具体而言,低FODMAP饮食含有:以葡萄糖/100g的过剩量计低于0.15g的果糖、与葡萄糖无关的每次低于3g的果糖及每次低于0.2g的果聚糖(除了每次低于0.3g的谷物、坚果及种子以外)。
因此,以低FODMAP饮食或低FOLFAP饮食形式提供本发明的组合物时,优选以含有每次0.5g以下、0.4g以下或0.3g以下的FODMAPs的方式制剂化。
本发明的组合物为药物组合物时,形态没有特别限定。药物组合物为经口制剂时,可以采取例如片剂、散剂、细粒剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、缓释剂等固体制剂、溶液、悬浮液、乳浊液等液体制剂的形态。药物组合物如上所述优选以经口制剂形态使用,也可以采取注射剂、栓剂等非经口制剂的形态。
本发明的组合物优选以1天或1次的摄取量的单位形式提供。所述摄取量的单位优选为包装形态。
本发明的组合物的每一天的摄取次数只要不妨碍本发明的效果即可,可以根据对象的种类、年龄、性别、症状由本领域技术人员来适当设定。可以使对象摄取1次本发明的组合物,也可以使对象摄取多次。本发明的组合物的摄取次数可列举例如1~5次/天,优选为1~3次/天,更优选为1次/天。
本发明的组合物可促进存在于肠道的栖粪杆菌属菌的增加,因此优选以益生菌、益生元或合生元形式提供。在此,本说明书中,“益生菌”是指改善肠道菌群的平衡、对宿主健康带来有益影响的有用的活的微生物。另外,“益生元”是指通过作用于原本在肠道中生息的微生物而对宿主带来有益作用的物质。另外,“合生元”是指益生菌与益生元的组合。
另外,本发明的组合物以丙酸菌属菌或其处理物为有效成分,可以用于改善与栖粪杆菌属菌相关的症状或状态。在此,本说明书中,疾病或状态的“改善”包括疾病或状态的治疗及预防。另外,疾病或状态的“治疗”不仅包括通过医疗行为使疾病或状态的进展或恶化停止、缓解或延迟,还包括通过非医疗行为使疾病或状态的进展或恶化停止、缓解或延迟。另外,疾病或状态的“预防”包括:对于疾病的可预期的恶化事先做好准备,通过医疗行为或非医疗行为提前防止疾病的发生或复发。
需要说明的是,本说明书中,症状和疾病不作区分,以相同的含义来使用。
作为与栖粪杆菌属菌相关的疾病或状态,可列举例如肠易激综合征(IBS)、炎症性肠病(IBD)、糖代谢、脂质代谢、肠内环境、免疫状态、氧化应激、炎症、大肠癌、或抑郁,优选肠易激综合征(IBS)、炎症性肠病(IBD)。在此,肠易激综合征(IBS)包括起因于IBS的腹部的胀满及膨隆、胀气(肠道鼓起)、腹痛、嗳气、排便习惯改变(腹泻、便秘或两者的组合)及其它胃肠症状。
本发明的组合物可以以标示了上述那样的用途的食品或药品的形态提供。作为用途的标示,优选为得到行政等许可的标示(例如,基于行政规定的各种制度而得到许可、并以基于这种许可的形态进行的标示)。可例示出作为例如健康食品、营养辅助食品、功能性食品、保健功能食品(例如特定保健用食品、营养功能食品、功能性显示食品)、特别用途食品(例如幼儿用食品、妊产妇用食品、高龄者用食品、患者用食品)等的标示,此外可以例示出经厚生劳动省许可的标示,例如特定保健用食品、与这些类似的制度许可的标示。作为后者的例子,可以例示出作为特定保健用食品的标示、作为附加条件的特定保健用食品的标示、对身体的结构或功能带来影响的标示、疾病风险降低标示等。进一步详细而言,可以例示出作为健康增进法实施细则(平成15年4月30日日本厚生劳动省令第86号)中规定的特定保健用食品的标示(特别是保健用途的标示)及与其类似的标示等。
作为具体的标示内容,包括例如“益生菌”、“益生元”、“合生元”、“给想要增加栖粪杆菌者”、“整肠作用”、“用于改善肠道菌群”、“用于改善肠易激综合征(IBS)”、“用于改善炎症性肠病(IBD)”、“用于改善腹部症状”、“低FODMAP”、“低FOLFAP”等由本发明的效果而联想到的全部标示。这些标示可以添加于包装、容器、产品目录、小册子、网页等。
另外,根据本发明的另一方式,提供促进栖粪杆菌属菌增殖的方法,其包括使有需求的对象摄取有效量的丙酸菌属菌或其处理物的工序。作为对象,优选需要低FODMAP饮食或低FOLMAP饮食的对象。另外,根据另一优选方式,上述方法作为改善与栖粪杆菌属菌相关的症状或状态的方法来提供。
根据一个方式,本发明的方法不包括对人的医疗行为。在此,对人的医疗行为是指:需要医师等的处方的、使人摄取(对人给予)药品的行为等。
另外,本发明的方法中的“有效量”优选为对于促进栖粪杆菌属菌增殖而言有效的量。根据一个方式,本发明的方法中的有效量可以设为丙酸菌属菌或其处理物的1天的摄取量。根据本发明的优选方式,丙酸菌属菌或其处理物的上述有效量的下限优选为0.01mg/体重kg/天以上,更优选为0.1mg/体重kg/天以上,进一步优选为1mg/体重kg/天以上,进一步更优选为5mg/体重kg/天以上、10mg/体重kg/天以上、30mg/体重kg/天以上、或80mg/体重kg/天以上。上限优选为10000mg/体重kg/天以下,更优选为9000mg/体重kg/天以下,进一步优选为6000mg/体重kg/天以下,进一步更优选为5000mg/体重kg/天以下、或4000mg/体重kg/天以下。因此,根据本发明的优选方式,丙酸菌属菌或其处理物的上述有效量优选为0.01~10000mg/体重kg/天、更优选为0.1~9000mg/体重kg/天、进一步优选为1~6000mg/体重kg/天、进一步更优选为5~6000mg/体重kg/天、10~5000mg/体重kg/天、30~5000mg/体重kg/天、或80~4000mg/体重kg/天。根据更优选的方式,上述有效量可以与本发明的组合物中的丙酸菌属菌或其处理物的含量同样,通常为干燥物的量。
本发明的摄取的方法没有特别限定,优选为经管摄取(经鼻摄取、胃瘘等)或经口摄取,更优选为经口摄取。
应用本发明的对象只要能够实现本发明的效果就没有特别限定,例如,为人、猴、黑猩猩、牛、马、绵羊及山羊等哺乳类,优选为人。另外,上述方式中,对象优选为健康的对象。另外,如上所述,丙酸菌属菌或其处理物可以用于减少FODMAP或FOLFAP的使用量且促进栖粪杆菌属菌增殖。因此,根据一个方式,应用本发明的对象为需要低FODMAP饮食或低FOLFAP饮食的对象。
另外,根据优选的方式,本发明的方法中,丙酸菌属菌或其处理物优选与低FODMAP饮食或低FOLFAP饮食同时摄取或依次摄取。
另外,根据本发明的另一优选方式,提供丙酸菌属菌或其处理物在制造满足选自以下的(A)~(D)中的至少一个条件的组合物中的应用:
(A)前述组合物为栖粪杆菌(Faecalibacterium)属菌增殖促进用组合物;
(B)前述组合物为与栖粪杆菌属菌相关的症状或状态的改善用组合物;
(C)前述组合物为促进栖粪杆菌属菌增殖的糖类替代物;
(D)前述组合物中的促进栖粪杆菌属菌增殖的糖类的合计含量为15质量%以下。
另外,根据本发明的另一优选方式,提供丙酸菌属菌或其处理物作为选自以下的(A’)~(C’)中的至少一种的应用:
(A’)栖粪杆菌(Faecalibacterium)属菌增殖促进剂;
(B’)与栖粪杆菌属菌相关的症状或状态的改善剂;
(C’)促进栖粪杆菌属菌增殖的糖类替代物。
另外,根据本发明的另一优选方式,提供用于作为选自以下的(A’)~(C’)中的至少一种来使用的丙酸菌属菌或其处理物:
(A’)栖粪杆菌(Faecalibacterium)属菌增殖促进剂;
(B’)与栖粪杆菌属菌相关的症状或状态的改善剂;
(C’)促进栖粪杆菌属菌增殖的糖类替代物。
本发明的方法、应用及丙酸菌属菌或其处理物可以由本领域技术人员基于本说明书中的关于本发明的组合物而记载的内容来实施。
另外,根据本发明的一个方式,提供以下的[1]~[15]。
[1]一种组合物,其包含丙酸菌(Acidipropionibacterium)属菌或其处理物,所述组合物满足选自以下的(A)~(D)中的至少一个条件:
(A)前述组合物为栖粪杆菌(Faecalibacterium)属菌增殖促进用组合物;
(B)前述组合物为与栖粪杆菌属菌相关的症状或状态的改善用组合物;
(C)前述组合物为促进栖粪杆菌属菌增殖的糖类替代物;
(D)前述组合物中的促进栖粪杆菌属菌增殖的糖类的合计含量为15质量%以下。
[2]根据[1]所述的组合物,其中,上述丙酸菌属菌为产丙酸丙酸菌(Acidipropionibacterium acidipropionici)。
[3]根据[1]或[2]所述的组合物,其中,上述处理物为选自由丙酸菌属菌的悬浮物、培养物、培养上清、发酵物、加热处理物、破碎物、浓缩物、灭菌处理物、液状化物、糊化物、干燥物及稀释物组成的组中的至少一种。
[4]根据[1]~[3]中任一项所述的组合物,其中,丙酸菌属菌或其处理物的含量以干燥质量基准计为0.01质量%以上。
[5]根据[1]~[4]中任一项所述的组合物,其中,(C)的上述糖类为选自发酵性糖质、单糖类、二糖类及多元醇中的至少一种。
[6]根据[1]~[5]中任一项所述的组合物,其中,(C)的上述糖类为选自1-酮糖、菊糖中的至少一种。
[7]根据[1]~[6]中任一项所述的组合物,其中,(C)的上述糖类的合计含量为0.01~15质量%。
[8]根据[1]~[7]中任一项所述的组合物,其中,栖粪杆菌属菌为普氏栖粪杆菌(Faecalibacterium prausnitzii)。
[9]根据[1]~[8]中任一项所述的组合物,其为经口组合物。
[10]根据[1]~[9]中任一项所述的组合物,其为食品组合物或药物组合物。
[11]根据[1]~[10]中任一项所述的组合物,其用于作为益生菌、益生元或合生元使用。
[12]根据[1]~[11]中任一项所述的组合物,其为低FODMAP饮食或低FOLFAP饮食。
[13]根据[1]~[12]中任一项所述的组合物,其中,(B)的组合物为选自由肠易激综合征(IBS)、炎症性肠病(IBD)、糖代谢、脂质代谢、肠内环境、免疫状态、氧化应激、炎症、大肠癌及抑郁组成的组中的至少一种症状或状态的改善用组合物。
[14]根据[1]~[13]中任一项所述的组合物,其用于需要低FODMAP饮食或低FOLFAP饮食的对象。
[15]一种组合物,其包含:丙酸菌(Acidipropionibacterium)属菌或其处理物;以及选自由蛋白质水解物、酵母提取物、肉提取物及葡萄糖组成的组中的至少1种添加剂。
实施例
以下通过实施例更具体、详细地说明本发明,但是本发明不受这些实施例限定。需要说明的是,只要没有特别记载,则本发明中使用的所有比率均基于质量。另外,只要没有特别记载,则本说明书中记载的单位及测定方法基于日本工业标准(JIS)。
菌种
准备以下的菌株。
(1)普氏栖粪杆菌ATCC27768T
(2)长双歧杆菌(Bifidobacteirum longum)JCM1217T
(3)产丙酸丙酸菌(A.acidipropionici)IFO12425
(4)产丙酸丙酸菌(A.acidipropionici)P2002701
(5)产丙酸丙酸菌(A.acidipropionici)P2002702
(6)产丙酸丙酸菌(A.acidipropionici)DSM4900T
(7)产丙酸丙酸菌(A.acidipropionici)P2002703
培养基组成
将以下的试验中使用的琼脂培养基1、培养基2、培养基3的组成分别示于下述的表1~表3。
[表1]
[表2]
[表3]
试验例1:平板培养基中的产丙酸丙酸菌的普氏栖粪杆菌增殖促进效果的研究
1-1:被检菌株的琼脂培养基的制备(普氏栖粪杆菌ATCC27768T的制备)
如下所述地制备作为被检菌株的普氏栖粪杆菌ATCC27768T。
将普氏栖粪杆菌ATCC27768T的冷冻菌株悬浮于培养基2后,在37℃、厌氧条件下进行一整夜的活化培养,得到培养液。在新的培养基2中将上述培养液以终浓度达到1%的方式悬浮,在37℃、厌氧条件下培养一整夜。将如此得到的培养液100μL涂抹于琼脂培养基1,由此制备被检菌株(普氏栖粪杆菌ATCC27768T)的琼脂培养基。
1-2:对照的制备
作为供试菌株,使用长双歧杆菌JCM1217T如下述那样制备对照。
将长双歧杆菌JCM1217T的冷冻菌株悬浮于培养基3后,在37℃、厌氧条件下进行一整夜的活化培养,得到培养液。在新的培养基3中将上述培养液以终浓度达到1%的方式悬浮,在37℃、厌氧条件下培养一整夜,由此制备对照。
1-3:试验样品的制备
作为供试菌株,使用产丙酸丙酸菌P2002701、产丙酸丙酸菌P2002702、产丙酸丙酸菌DSM4900T及产丙酸丙酸菌P2002703这4个菌株如下述那样制备试验样品。
将各产丙酸丙酸菌的冷冻菌株悬浮于培养基3后,在30℃、厌氧条件下进行3天活化培养,得到培养液。在新的培养基3中将上述培养液以终浓度达到1%的方式悬浮,在30℃、厌氧条件下培养3天,由此制备试验样品。
1-4:普氏栖粪杆菌增殖促进效果的研究
按照图1所示的流程,向被检菌株(普氏栖粪杆菌ATCC27768T)的琼脂培养基中滴加对照或试验样品后进行静置培养,由此进行确认有无普氏栖粪杆菌ATCC27768T增殖促进效果的试验。具体而言,向被检菌株的琼脂培养基滴加对照培养液1μL或试验样品的培养液1μL。在厌氧条件下在37℃下对平板培养基进行4天的静置培养。
将结果示于下述表4。表4中,如图1所示,将在供试菌株的周围能够确认到普氏栖粪杆菌的增殖者评价为“+”,将在供试菌株的周围未能确认到普氏栖粪杆菌的增殖者评价为“-”。另外,将滴加产丙酸丙酸菌P2002702并静置培养后的照片示于图2。图2中,培养皿的上部有黑色的点,对应于产丙酸丙酸菌P2002702的菌落。图2中,在黑色的点的外周,能够以2倍程度的大小观测到普氏栖粪杆菌的增殖。
[表4]
试验例2:液体培养基中的产丙酸丙酸菌的普氏栖粪杆菌增殖促进效果的研究
2-1:被检菌株的培养液(液体培养基)的制备(普氏栖粪杆菌ATCC27768T的制备)
如下述那样制备作为被检菌株的普氏栖粪杆菌ATCC27768T的培养液(液体培养基)。
将普氏栖粪杆菌ATCC27768T的冷冻菌株悬浮于培养基2后,在37℃、厌氧条件下进行一整夜的活化培养,得到培养液。在新的培养基2中将上述培养液以终浓度达到1%的方式悬浮,在37℃、厌氧条件下进行一整夜的培养。进而,将得到的培养液再次在新的培养基2中以终浓度达到1%的方式悬浮,由此制备被检菌株(普氏栖粪杆菌ATCC27768T)的培养液。
2-2:试验组合物的制备
作为供试菌株,使用产丙酸丙酸菌P2002701、产丙酸丙酸菌P2002702、产丙酸丙酸菌DSM4900T及产丙酸丙酸菌P2002703这4种菌株如下述那样制备试验样品。
将各产丙酸丙酸菌的冷冻菌株悬浮于培养基3后,在30℃、厌氧条件下进行3天的活化培养,得到培养液。将得到的各培养液在新的培养基3中以终浓度达到1%的方式悬浮,在30℃、厌氧条件下培养3天。将得到的各培养液以8000×g在4℃下离心10分钟后,用生理盐水将菌体颗粒洗涤2次。之后,以OD600=1.0的方式将菌体颗粒悬浮于生理盐水,由此制备试验样品。
2-3:普氏栖粪杆菌增殖促进效果的研究
向被检菌株的培养液(液体培养基)滴加试验样品,共培养24小时后,从得到的培养液中提取DNA,进行qPCR,由此进行确认产丙酸丙酸菌是否能够使普氏栖粪杆菌的菌数增加的试验。各菌种的确认试验的进行次数设为3次。
具体而言,向被检菌株的培养液(液体培养基)中以终浓度达到1%的方式添加试验样品或对照(生理盐水)。共培养24小时后,从培养液中提取DNA,进行qPCR。
图3示出共培养后的普氏栖粪杆菌的菌数。
如图3所示,与对照(生理盐水)相比,在进行了产丙酸丙酸菌的共培养的所有培养体系中,普氏栖粪杆菌的菌数均显著增加。由以上的结果可确认,产丙酸丙酸菌促进了普氏栖粪杆菌的增殖。
试验例3:添加产丙酸丙酸菌的培养上清所带来的普氏栖粪杆菌增殖促进效果的
研究
3-1:被检菌株的培养液的制备(普氏栖粪杆菌ATCC27768T的制备)
如下述那样制备作为被检菌株的普氏栖粪杆菌ATCC27768T的培养液。
将普氏栖粪杆菌ATCC27768T的冷冻菌株悬浮于培养基2后,在37℃、厌氧条件下进行一整夜的活化培养,得到培养液。在新的培养基2中将上述培养液以终浓度达到1%的方式悬浮,在37℃、厌氧条件下进行一整夜的培养。将得到的培养液再次以终浓度达到1%的方式悬浮在新的培养基2培养基,由此制备被检菌株(普氏栖粪杆菌ATCC27768T)的培养液。
3-2:试验样品的制备
作为供试菌株,使用产丙酸丙酸菌IFO12425、产丙酸丙酸菌P2002701、产丙酸丙酸菌P2002702这3个菌株如下述那样制备作为培养上清的试验样品。
将各产丙酸丙酸菌的冷冻菌株悬浮于培养基3后,在30℃、厌氧条件下进行3天的活化培养。将得到的各培养液在新的培养基3中以终浓度达到1%的方式悬浮,在30℃、厌氧条件下培养5天。将得到的各培养液以8000×g在4℃下离心10分钟,回收上清。然后将得到的上清用0.22μm的过滤器进行过滤灭菌而完全除去菌体,由此制备试验样品。
需要说明的是,将培养基3用0.22μm的过滤器进行过滤灭菌,作为对照使用。
3-3:普氏栖粪杆菌增殖促进效果的研究
向被检菌株的培养液中添加对照或试验样品的培养上清,培养20小时后,从得到的培养液中提取DNA,进行qPCR,由此进行确认产丙酸丙酸菌的培养上清是否使普氏栖粪杆菌的菌数增加的试验。各菌种的确认试验的进行次数设为3次。
具体而言,向被检菌株的培养液中以达到10%(v/v)的方式添加试验样品或对照并培养20小时后,从培养液中提取DNA,进行qPCR。
图4示出对应于添加了培养上清的普氏栖粪杆菌的菌数。如图4所示,与使用对照时相比,添加了产丙酸丙酸菌的培养上清(试验样品)的培养体系中,普氏栖粪杆菌的菌数显著增加。
由此可确认,产丙酸丙酸菌的培养上清(试验样品)促进了普氏栖粪杆菌的增殖。
Claims (15)
1.一种组合物,其包含丙酸菌(Acidipropionibacterium)属菌或其处理物,所述组合物满足选自以下的(A)~(D)中的至少一个条件:
(A)所述组合物为栖粪杆菌(Faecalibacterium)属菌增殖促进用组合物;
(B)所述组合物为与栖粪杆菌属菌相关的症状或状态的改善用组合物;
(C)所述组合物为促进栖粪杆菌属菌增殖的糖类替代物;
(D)所述组合物中的促进栖粪杆菌属菌增殖的糖类的合计含量为15质量%以下。
2.根据权利要求1所述的组合物,其中,所述丙酸菌属菌为产丙酸丙酸菌(Acidipropionibacterium acidipropionici)。
3.根据权利要求1或2所述的组合物,其中,所述处理物为选自由丙酸菌属菌的悬浮物、培养物、培养上清、发酵物、加热处理物、破碎物、浓缩物、灭菌处理物、液状化物、糊化物、干燥物及稀释物组成的组中的至少一种。
4.根据权利要求1~3中任一项所述的组合物,其中,丙酸菌属菌或其处理物的含量以干燥质量基准计为0.01质量%以上。
5.根据权利要求1~4中任一项所述的组合物,其中,(C)的所述糖类为选自由发酵性糖质、单糖类、二糖类及多元醇组成的组中的至少一种。
6.根据权利要求1~5中任一项所述的组合物,其中,(C)的所述糖类为1-酮糖及菊糖中的至少任意种。
7.根据权利要求1~6中任一项所述的组合物,其中,(C)的所述糖类的合计含量为0.01~15质量%。
8.根据权利要求1~7中任一项所述的组合物,其中,所述栖粪杆菌属菌为普氏栖粪杆菌(Faecalibacterium prausnitzii)。
9.根据权利要求1~8中任一项所述的组合物,其为经口组合物。
10.根据权利要求1~9中任一项所述的组合物,其为食品组合物或药物组合物。
11.根据权利要求1~10中任一项所述的组合物,其用于作为益生菌、益生元或合生元使用。
12.根据权利要求1~11中任一项所述的组合物,其为低FODMAP饮食或低FOLFAP饮食。
13.根据权利要求1~12中任一项所述的组合物,其中,(B)的组合物为选自由肠易激综合征(IBS)、炎症性肠病(IBD)、糖代谢、脂质代谢、肠内环境、免疫状态、氧化应激、炎症、大肠癌及抑郁组成的组中的至少一种症状或状态的改善用组合物。
14.根据权利要求1~13中任一项所述的组合物,其用于需要低FODMAP饮食或低FOLFAP饮食的对象。
15.一种组合物,其包含:
丙酸菌(Acidipropionibacterium)属菌或其处理物;以及
选自由蛋白质水解物、酵母提取物、肉提取物及葡萄糖组成的组中的至少1种添加剂。
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