CN1922313B - 酸性α-糖苷酶及其片段 - Google Patents

Abstract

本发明提供了定位于溶酶体的导向酸性α-糖苷酶治疗药物。导向治疗药物包括一种治疗剂GAA和一种与细胞外表面上的受体结合的、在受体内化之后使得导向治疗药物实现正确的亚细胞定位的导向部分。本发明也提供了与实施本发明相关的核酸、细胞、和方法。

Description

酸性α-糖苷酶及其片段

相关申请的引用 

本申请要求在2004年2月10日提交的申请号为No.60/543,812的美国专利申请的优先权，通过引用将其内容并入本申请。 

背景技术

酸性α-糖苷酶(GAA)是一种溶酶体酶，它水解麦芽糖和其他线性寡糖中的α1-4连键，所述线性寡糖包括糖原的外侧支，因此GAA分解了溶酶体内过多的糖原(Hirschhorn et al.(2001)in The Metabolic andMolecular Basis of Inherited Disease，Scriver，etal.，eds.(2001)，McGraw-Hill：New York，p.3389-3420)。与其他的哺乳动物的溶酶体酶一样，GAA是在细胞浆内合成，并经过ER，其中它以高甘露糖型碳水化合物进行N连接的糖基化。在高尔基体中，通过添加使得这些蛋白导向溶酶体的甘露糖-6-磷酸(M6P)而修饰溶酶体蛋白上的高甘露糖型碳水化合物。通过与两种M6P受体中的一种受体的相互作用将M6P修饰蛋白转运到溶酶体。最好的修饰形式是两种M6P都被添加到高甘露糖型碳水化合物中。 

溶酶体内GAA活性的不足造成了Pompe病，一种也被称作酸性麦芽糖酶缺乏症(AMD)、II型糖原贮积病(GSDII)、II型糖原病、或GAA缺乏症的疾病。酶活性减低的发生是因为编码GAA的基因内的各种错义和无义突变。其结果是糖原蓄积在Pompe病患者的所有细胞的溶酶体内。具体地，糖原蓄积在心肌和骨骼肌、肝脏、和其他组织的溶酶体内是最为显著的。蓄积的糖原最终损害了肌肉功能。在Pompe病的最严重形式中，在2岁前即因为心肺衰竭而发生死亡。 

现在，还没有得到经批准的能治愈或减缓Pompe病进展的治疗方法。 当前处于临床试验的酶替代疗法要求施用被肌肉和肝脏组织的细胞摄取并经M6P依赖性方式被转运到这些细胞的溶酶体的重组GAA。但是，在遗传工程化的CHO细胞中以及在转基因兔的乳汁中所产生的重组GAA  (最近在Pompe酶替代治疗试验中所用的酶的两种来源)只含有极少量的M6P(Van Hove et al.(1996)Proc Natl Acad Sci USA，93(1)：65-70；和美国专利No.6,537,785)。因此，重组GAA向溶酶体的M6P依赖性转运是不充分的，需要高剂量及频繁输注。所以，仍需要用于将治疗性GAA酶导向患者溶酶体的新的、更简单的、更有效的、和更低成本的方法。 

发明内容

本发明通过利用基于肽标记(peptide tag)的导向策略能够将人GAA或GAA样酶M6P非依赖性地导向患者的溶酶体。因此，本发明提供了GAA或GAA样酶向靶细胞内的有效转运。 

本发明部分涉及利用多种编码代表GAA蛋白的不同部分的多肽的开放读框能重组表达GAA这一发现。当一起提供时，所形成的多肽可以协同提供所需的酶活性。 

因此，本发明的一个方面涉及一种编码包括与人GAA的第70-790位氨基酸残基或其片段具有至少50％相同性(例如，至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或100％相同性)的氨基酸序列的多肽的开放读框的核酸序列(例如DNA序列)。该开放读框不包括与人GAA的第880-952位氨基酸残基具有至少50％相同性(例如，至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或100％相同性)的氨基酸序列。 

在另一个方面，本发明涉及一种编码包括与人GAA的第880-952位氨基酸残基或其片段具有至少50％相同性(例如，至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或100％相同性)的氨基酸序列的多肽的开放读框的核酸序列(例如DNA序列)。该开放读框不包括与人GAA的第70-790位氨基酸残基具有至少50％相同性(例如，至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或100％相同性)的氨基酸序列。

本发明也涉及含有此类核酸序列之一或两者的细胞。 

在一个实施方式中，本发明的核酸也编码与GAA多肽融合的肽标记。优选的肽标记是一种细胞外受体的配体。在一些实施方式中，肽标记是一种导向结构域(targeting domain)，它与靶细胞表面上的受体的细胞外结构域结合，在受体内化之后，使得多肽定位于人溶酶体。在一个实施方式中，导向结构域包括能结合阳离子非依赖性甘露糖-6-磷酸受体的尿激酶型纤溶酶原受体部分。在另一个实施方式中，导向结构域整合了与阳离子非依赖性甘露糖-6-磷酸受体结合的IGF-II的一个或多个氨基酸序列(例如至少第48-55位氨基酸；至少第8-28和41-61位氨基酸；或至少第8-87位氨基酸)或其序列变体(例如R68A)或其截短形式(例如在C末端从第62位起被截短)。在一个实施方式中，肽标记直接与GAA多肽的N或C末端融合。在另一个实施方式中，肽标记经间隔物与GAA多肽的N或C末端融合。在一个具体的实施方式中，肽标记经10-25个氨基酸长度的间隔物与GAA多肽融合。在另一个具体的实施方式中，肽标记经包含多个甘氨酸残基的间隔物与GAA多肽融合。在另一个具体的实施方式中，肽标记经包含α螺旋结构的间隔物与GAA多肽融合。在另一个具体的实施方式中，肽标记经与序列GGGTVGDDDDK(SEQ IDNO：1)具有至少50％相同性的间隔物与GAA多肽融合。 

本发明也涉及本发明的核酸所编码的多肽以及整合了这些多肽的药物制剂。 

本发明也部分涉及对肽标记所能融合的GAA的特殊位点的鉴定。因此，在一个方面，本发明涉及一种导向治疗药物，包括一种与人GAA或其一部分的第68、69、70、71、72、779、787、789、790、791、792、793、或796位氨基酸融合的肽标记。导向治疗药物可以包括例如人GAA的第70-952位氨基酸残基，或更小的部分例如第70-790位氨基酸残基。 在一个实施方式中，肽标记与氨基酸70融合，或与氨基酸70一或两个位点范围内的氨基酸融合。在一些实施方式中，肽标记是一种细胞外受体的配体。例如，一些肽标记是导向结构域，它与靶细胞表面上的受体的细胞外结构域结合，在受体内化之后，使得治疗药物定位于人溶酶体。在一个实施方式中，导向结构域包括能结合阳离子非依赖性甘露糖-6-磷酸受体的尿激酶型纤溶酶原受体部分。在另一个实施方式中，导向结构域整合了与阳离子非依赖性甘露糖-6-磷酸受体结合的IGF-II的一个或多个氨基酸序列(例如至少第48-55位氨基酸；至少第8-28和41-61位氨基酸；或至少第8-87位氨基酸)或其序列变体(例如R68A)或其截短形式(例如在C末端从第62位起截短)。肽标记直接或经间隔物与GAA多肽融合。在一个具体的实施方式中，肽标记经10-25个氨基酸长度的间隔物与GAA多肽融合。在另一个具体的实施方式中，肽标记经包含多个甘氨酸残基的间隔物与GAA多肽融合。在另一个具体的实施方式中，肽标记经包含α螺旋结构的间隔物与GAA多肽融合。在另一个具体的实施方式中，肽标记经与序列GGGTVGDDDDK(SEQ ID NO：1)具有至少50％相同性的间隔物与GAA多肽融合。 

附图说明

图1-1到1-14描述了选定的糖苷水解酶家族31的成员的氨基酸序列对比。 

图2是GAA蛋白的图解说明。 

图3描述了用于生成肽标记的GAA的示例性策略。 

图4描述了利用野生型GAA和SS-GAAΔ1-69的示例性摄取试验。 

图5描述了利用SS-GAAΔ1-69和SS-GILTΔ2-7-GAAΔ1-69的示例性摄取试验。 

图6是对1-87-IGF-II标记的GAA蛋白的示例性Western印迹分析：左边是用抗GAA抗体检测；右边是用抗IGF-II抗体检测。道1： pCEP-GILT1-87-GAA56-952；道2：pCEP-GILT1-87-R68A-GAA56-952-1；道3：pCEP-GILT1-87-R68A-ΔGS-GAA56-952-1；道4：pCEP-GILTΔ2-7-spcrl-GAA70-952-1；道5：pCEP-GAA；道6：pCEP-GILT-GAA29-952。 

图7是比较野生型GAA和GAA-791Asc的蛋白裂解物的示例性Western印迹分析。 

图8是对野生型GAA和具有经下游X因子蛋白酶位点遗传工程化的GILT标记的GAA构建体GAA787GILTXa、GAA779GILTXa、以及GAA796GILTXa的示例性Western分析。也描述了GAA C末端的加工模型。 

具体实施方式

本发明提供了一种生产能更有效地导向哺乳动物细胞(例如人的心肌和骨骼肌细胞)的溶酶体的GAA的方法。GAA是糖苷水解酶家族31中的一个成员(图1-1到1-14)。人GAA被合成作为110kDa的前体(Wisselaar et al.(1993)J.Biol.Chem.268(3)：2223-31)。酶的成熟形式是70和76kDa单体的混和物(Wisselaar et al.(1993)J.Biol.Chem.268(3)：2223-31)。前体酶具有7个潜在的糖基化位点，并且成熟酶仍然保留了其中的4个位点(Wisselaar et al.(1993)J.Biol.Chem.268(3)：2223-31)。产生成熟酶的蛋白裂解的降解事件发生在晚期内含体或发生在溶酶体(Wisselaar et al.(1993)J.Biol.Chem.268(3)：2223-31)。 

成熟的70和76kDa类型都缺少C末端的160个氨基酸。但是，造成GAA活性完全丢失的某些Pompe等位基因就位于这个区域，例如Val949Asp(Becker et al.(1998)J.Hum.Genet.62：991)。这种突变体的表型说明尽管蛋白的C末端部分不是70或76kDa类型的一部分，但它仍在蛋白的功能中起到了重要的作用。最近已经报道尽管蛋白的C末端部分在加工过程中与蛋白的其他部分分离，但它仍与主要类型(major species) 相关(Moreland et al.(Nov.1，2004)J.Biol.Chem.，Manuscript 404008200)。因此，C末端的残基能在蛋白的催化活性中起到直接作用。或者，C末端的残基可能涉及促进蛋白的N末端部分的正确折叠。 

一种相关蛋白蔗糖酶-异麦芽糖酶的某些等位基因的行为支持了后一种可能性。该家族包括蔗糖酶-异麦芽糖酶(SI)蛋白，它在单个多肽上含有两个串联排列的不同的但同源的糖苷水解酶催化结构域。每个催化结构域在大小上都与整个GAA多肽相似，并且这两个区域与GAA具有36％和39％的相同性。SI在肠涮状缘细胞内表达，并位于这些极性细胞的顶膜上，其催化结构域通过氨基末端的跨膜结构域面向肠腔。一旦到达顶膜，通过胰蛋白酶将蔗糖酶结构域与氨基近端的异麦芽糖酶结构域分开，而异麦芽糖酶结构域仍与膜相连。最近研究表明蔗糖酶结构域是异麦芽糖酶结构域的正确折叠以及之后的转运所必需的；蔗糖酶被称为折叠异麦芽糖酶结构域所需的分子内伴侣(Jacob et al.(2002)J.Biol.Chem.277：32141)。 

对大量遗传工程化的GAA表达盒的表达的分析已经能够鉴定出两种尽管与成熟多肽分离的但仍是哺乳动物细胞分泌功能性蛋白所必需的区域。图2概括了现在我们所了解的GAA的结构组成。前体多肽具有一个信号序列和一个邻近的推定跨膜结构域、三叶形结构域(PFAMPF00088)(它是一种含有3个二硫键的约45个氨基酸的富含半胱氨酸的结构域，并认为其涉及蛋白-蛋白或蛋白-糖的相互作用(Thim(1989)FEBS Lett.250：85))、成熟70/76kDa多肽所确定的区域、和C末端结构域域。SI的三叶形结构域内的突变对SI的顶膜分选模式具有影响(Spodsberg(2001)J.Biol.Chem.276：23506)。实施例1和2中的数据表明三叶形结构域和C末端结构域都是生产功能性GAA所必需的结构。可能是因为在蛋白折叠期间，C末端结构域与三叶形结构域的相互作用有助于三叶形结构域内的正确的二硫键的形成。 

在本发明的一个实施方式中，编码肽标记的DNA序列的骨架与编码 除C末端结构域外的整个GAA多肽的GAA表达盒的3’末端融合。该表达盒在哺乳动物细胞内共表达，哺乳动物细胞也将GAA的C末端表达为一种单独的多肽。 

然后C末端结构域结合70/76kDa类型反式地发挥作用，以生成活性GAA。催化结构域和C末端结构域之间的边界出现在第791位氨基酸残基的附近，依据于它存在于绝大多数水解酶家族31的成员所不具有的小于18个氨基酸的短区域上，以及它含有GAA中的4个连续的脯氨酸残基。事实上，现在已经报道，与成熟类型相连的C末端结构域开始于氨基酸残基792(Moreland et al.(Nov.1，2004)J.Biol.Chem.，Manuscript404008200)。 

通过驱动被引入到哺乳动物细胞内的一个质粒构建体表达两种多肽以生成稳定的细胞系，可以实现共表达。通过这样一种质粒上的两个启动子或通过一个驱动其中由IRES元件分开两个表达盒的双顺反子构建体的表达的启动子可以驱动表达。或者，用采用不同选择标记物的单独的质粒可以次序地构建出表达两种蛋白的细胞系。 

在这些融合体中所用的导向CI-MPR的肽标记可以来自IGF-II。或者，可以采用优先与肌管表面上的受体结合的肽标记。已经描述了这些多肽(Samoylova et al.(1999)Muscle and Nerve 22：460；美国专利No.6,329,501)。其他细胞表面受体例如Fc受体、LDL受体、或转铁蛋白受体也都是合适的靶点并能促进GAA的靶向作用。 

在本发明的另一个实施方式中，在成熟70/76kDa多肽与C末端结构域的交界处(例如位点791)，将编码肽标记的表达盒插入到天然的GAA编码序列内。这就生成了单一的嵌合多肽。因为这种构型的肽标记可能不能与它的同源受体结合，因此可以正好在肽标记的下游位置中插入蛋白酶裂解位点。一旦产生了正确折叠形式的蛋白，通过蛋白酶处理就可以裂解C末端结构域。 

采用一种正常存在于人血清中的蛋白酶所作用的蛋白裂解位点可能 是有益的。这样，可以将药物前体形式的标记GAA引入到血流内，并通过血清固有的蛋白酶作用而成为可摄取的活化的GAA。这可能改善酶的分布。如前所述，肽标记可以是GILT标记或肌肉特异性标记。 

在本发明的另一个实施方式中，标记与GAA的N末端融合，以便保留酶的活性(实施例3)。对于与N末端的融合，通过用异源性信号肽取代天然的GAA信号肽而影响酶分泌的水平是有可能的。 

在ER内GAA信号肽不会裂解，因此这引起GAA在ER内是膜结合的(suji et al.(1987)Biochem.Int.15(5)：945-952)。在一些细胞类型中，可以发现酶与细胞膜结合，保留了ER的膜拓扑学，这可能是因为不能裂解信号肽的结果(Hirschhorn et al.，in The Metabolic and Molecular Basis ofInherited Disease，Valle，ed.，2001，McGraw-Hill：New York，pp.3389-3420)。序列分析说明了在信号肽的附近存在着跨膜结构域，这可能使得酶在某些条件下保持了与膜相连。 

有可能的是，GAA经其信号肽的膜关联对于酶的正确的溶酶体的靶向作用是一种重要的作用因素。它可以作用于两个方面：首先，膜关联可以直接地引导蛋白导向溶酶体。其次，膜关联可以增加GAA在高尔基体内的停留时间，因此增加了添加到蛋白上的甘露糖-6-磷酸的水平。这使得具有增加储存到溶酶体内的酶的比例的净效应。在任一情况中，如果消除了这种膜关联，那么更多的所产的酶可以被分泌，如果后一模型是正确的，那么所分泌的酶将具有更少的甘露糖-6-磷酸。 

通过用GAA的另一种信号肽取代GAA信号肽和邻近序列可以实现对GAA的膜关联的中断。在GAA的GILT标记的背景中，嵌合基因含有包括它的在天然信号肽的裂解位点或在合适的下游位点上与GAA的N末端融合的信号肽的IGF-II标记。这样一种嵌合融合体将指导重组GAA酶的生成，该酶被高水平地分泌并含有M6P/IGF-II受体的高亲和配体。 

亚细胞的导向结构域 

利用一种与蛋白的细胞受体特异性结合的蛋白或蛋白的类似物，本发明可将治疗药物导向溶酶体。细胞表面的外表面在拓扑学上等价于内含体的、溶酶体的、高尔基体的和内质网的隔室(compartment)。因此，分子经与合适受体的相互作用的细胞内吞作用可使得将分子不跨膜地转运到任一隔室内。如果遗传学缺陷造成了任一隔室内的特殊的酶活性的缺陷，通过用合适受体的配体标记治疗蛋白都可以实现治疗蛋白的转运。 

已经描述了多个指导与受体结合的蛋白从细胞膜到高尔基体和/或内质网的途径。因此，通过利用来自例如SV40、霍乱毒素、或植物毒素蓖麻毒素的导向部分(每一种都对应于(coopt)一种或多种亚细胞的运输途径)，可以将治疗药物导向细胞内的所需位置。在各种情况中，都通过物质与细胞外表面的结合触发摄取，例如，SV40与I型MHC受体结合、霍乱毒素与GM1神经节苷酯分子结合，以及蓖麻毒素与细胞表面上的具有末端半乳糖的糖脂和糖蛋白结合。在该初始步骤之后，分子通过各种途径到达ER。例如，SV40进行小泡样细胞内吞作用(caveolarendocytosis)，并经两步过程绕过高尔基体到达ER，而霍乱毒素进行小泡样细胞内吞作用，但在到达ER之前经过高尔基体。 

如果使用与霍乱毒素或蓖麻毒素相关的导向部分，那么避免霍乱毒素或蓖麻毒素的毒性是重要的。霍乱毒素和蓖麻毒素都是异聚体蛋白，并且细胞表面结合区和引起毒性的催化活性位于不同的多肽上。因此，可以构建包含受体结合多肽，但不包含引起毒性的多肽的导向部分。例如，对于蓖麻毒素，B亚基具有引起蛋白内摄作用的半乳糖结合活性，并且能与治疗蛋白融合。如果A亚基的存在进一步地提高了亚细胞定位，可以与B亚基-治疗药物融合蛋白一起提供正确折叠的但催化惰性的突变形式A链(突变蛋白)。 

经KDEL受体可以将转运到高尔基体的蛋白转运到内质网(ER)，这就回收了已经逃逸到高尔基体的ER导向蛋白。因此，在指导治疗蛋白进入高尔基体的导向结构域的末端包含KDEL(SEQ ID NO：2)基序，这使得蛋白随后定位于ER。例如，与阳离子非依赖性M6P受体结合的导向结构域(例如，经高通量筛选例如噬菌体展示、酵母双杂交、基于芯片的检测、以及基于溶液的检测所鉴定到的抗体、或肽)在pH 7.4或左右以及在pH 5.5或左右都使得治疗药物导向高尔基体，KDEL基序的进一步加入则使得导向ER。 

溶酶体导向部分 

本发明能够将一种治疗药物导向溶酶体。例如，通过与随后穿过溶酶体的细胞膜受体的结合可以发生导向作用。或者，通过与随后进入晚期内含体的胞浆受体的结合可以发生导向作用；然后治疗药物可以从晚期内含体转移到溶酶体。一个优选的溶酶体导向机制涉及与阳离子非依赖性M6P受体的结合。 

阳离子非依赖性M6P受体 

阳离子非依赖性M6P受体是一种在哺乳动物组织中到处表达的275kDa的单链跨膜糖蛋白。它是两种与M6P结合的哺乳动物受体之一：第二种被称作阳离子依赖性M6P受体。阳离子依赖性M6P受体与M6P的结合需要二价阳离子；阳离子非依赖性M6P受体则不需要。这些受体通过识别溶酶体酶上的高甘露糖型M6P部分在运输溶酶体酶中起到了重要作用。阳离子非依赖性M6P受体的细胞外结构域含有15个与受体的分开位置上的不同(diverse)组配体结合的同源结构域(“重复”)。 

阳离子非依赖性M6P受体含有两个M6P的结合位点：一个位于重复1-3，另一个位于重复7-9。受体以μM级的解离常数与单价M6P配体结合，同时以nM级的解离常数与二价M6P配体结合，可能是因为受体寡聚化。通过伴发的多价M6P配体例如溶酶体酶与受体的结合增强了受体对IGF-II的摄取。 

阳离子非依赖性M6P受体也含有至少三个可被用作为导向部分的不 同配体的结合位点。阳离子非依赖性M6P受体在pH 7.4或其左右以约14nM的解离常数与IGF-II结合，主要是通过与重复11的相互作用。与其将IGF-II导向溶酶体的功能一致的是，解离常数在pH 5.5或其左右增加了近100倍，有助于IGF-II在酸性的晚期内含体内的裂解。受体能够结合高分子量的O-糖基化的IGF-II形式。 

阳离子非依赖性M6P受体的另一种有用的配体是维甲酸。维甲酸以2.5nM的解离常数与受体结合。阳离子非依赖性M6P受体与维甲酸的光标记性(photolabeling)亲和不干扰IGF-11或M6P与受体的结合，说明维甲酸与受体上的不同位点结合。维甲酸与受体的结合改变了受体的细胞内分布(受体更多地蓄积在细胞质囊泡内)，也增强了对M6P修饰的β葡糖醛酸酶的摄取。维甲酸具有光敏部分，该部分可以被用于连接于治疗药物，而不干扰治疗药物与阳离子非依赖性M6P受体结合的能力。 

阳离子非依赖性M6P受体也以9μM的解离常数与尿激酶型纤溶酶原受体(uPAR)结合。uPAR是绝大多数细胞类型表面上的一种GPI锚定的受体，其中它作用为一种粘附分子，并在纤溶酶原和TGF-β的蛋白裂解激活中发挥作用。uPAR与CI-M6P受体的结合可以将其导向溶酶体，并调节其活性。因此，治疗药物与uPAR的细胞外结构域，或它的结合阳离子非依赖性M6P受体的组分的一部分的融合使得将药物导向溶酶体。 

IGF-II 

在一个优选的实施方式中，溶酶体的导向部分是一种以甘露糖-6-磷酸非依赖性方式与阳离子非依赖性M6P/IGF-II受体结合的蛋白、肽、或其他部分。该实施方式模拟了用于摄取LSD蛋白的正常的生物学机制，以独立于甘露糖-6-磷酸的方式进行摄取。 

例如，通过编码成熟IGF-II多肽的DNA与LSD基因表达盒的3，末端的融合，生成了可以被各种细胞类型所摄取并转移到溶酶体的融合蛋白。或者，编码前体IGF-II多肽的DNA可以与LSD基因表达盒的3，末 端融合；前体包括在哺乳动物细胞内被裂解以生成成熟IGF-II多肽的羧基末端的部分，但是优选地删除了IGF-II信号肽(或移到了LSD基因表达盒的5’末端)。这个方法相对于包含糖基化的方法有着很多优点，包括简单性和效价比，因为一旦分离到蛋白，就不需要进行进一步的修饰。 

IGF-II被优选地特异地导向M6P受体。特别有用的是IGF-II多肽内的造成蛋白以更高的亲和力与M6P受体结合、同时不再以可测的亲和力与其他两种受体结合的突变。IGF-II也被修饰以最小化地与血清IGF结合蛋白结合(Baxter(2000)Am.J.Physiol Endocrinol Metab.278(6)：967-76)，以避免IGF-II/GILT构建体的隔离。大量研究已经定位出了IGF-I和IGF-II结合IGF-结合蛋白所必需的残基。可以筛选具有这些残基的突变的构建体是否保留了与M6P/IGF-II受体的高亲和力的结合以及是否降低了与IGF-结合蛋白的亲和力。例如，报道了用Ser取代IGF-II的Phe26降低了IGF-II与IGFBP-1的亲和力，且对与M6P/IGF-II的结合没有作用(Bach et al.(1993)J.Biol.Chem.268(13)：9246-54)。其他的取代(例如Ser取代Phe19以及Lys取代Glu9)也是有用的。IGF-I中的一个与IGF-II高度保守的区域内的类似突变单独地或联合地造成了IGF-BP结合力的大幅度降低(Magee et al.(1999)Biochemistry 38(48)：15863-70)。 

另一种方法是鉴定出能以高亲和力与M6P/IGF-II受体结合的IGF-II的最小区。已经被涉及于IGF-II与M6P/IGF-II受体结合的残基绝大多数都簇集在IGF-II的一个面上(Terasawa et al.(1994)EMBO J.13(23)：5590-7)。尽管IGF-II四级结构是由三个分子内二硫键正常维持的，但是整合了IGF-II的M6P/IGF-II受体结合表面上的氨基酸序列的肽可以被设计成正常地折叠并具有结合活性。这样一种最小结合肽是高度优选的导向部分。可以测试根据第48-55位氨基酸周围的区域所设计出的肽与M6P/IGF-II受体的结合力。或者，可以通过酵母双杂交检测法或通过噬  菌体展示类型检测法筛选肽随机文库与M6P/IGF-II受体结合的能力。 

血脑屏障 

在溶酶体病贮积病的治疗中的一个挑战是这些疾病中的多种疾病都有显著的神经受累。施用到血流内的治疗酶一般都不能跨过血脑屏障，因此不能缓解疾病相关的神经症状。但是，已经报道了IGF-II可以经跨细胞作用促进转运而通过血脑屏障(Bickel et al.(2001)Adv.Drug Deliv.Rev.46(1-3)：247-79)。因此，合理设计的GILT构建体应当能跨过血脑屏障，这第一次提供了一种治疗溶酶体贮积病相关的神经症状的方法。如在实施例12中所述的，可以用GUS阴性小鼠测试构建体。在2001年10月16日提交的美国Serial No.60/329,650和在2002年8月30日提交的美国Serial No.10/136,639中阐述了关于可以从血液中达到神经元组织的导向治疗药物的设计、构建和测试的其他细节。 

IGF-II的结构 

两个小组已经解答了IGF-II的NMR结构(Terasawa et al.(1994)EMBO J.13(23)：5590-7；Torres et al.(1995)J.Mol.Biol.248(2)：385-401)(见例如蛋白数据库记录1IGL)。IGF-II结构的一般特征与IGF-I和胰岛素相似。IGF-II的A和B结构域对应于胰岛素的A和B链。二级结构的特征包括通过残基22-25的回折与残基26-28的短β链相连接的B结构域的残基11-21的α螺旋。残基25-27表现出形成了小的反向平行的β片；残基59-61和残基26-28可能也参与了分子间的β片的形成。在IGF-II的A结构域中，跨越残基42-49和53-59的α螺旋排列成一种与B结构域螺旋垂直的反向平行的构型。三个二硫键中的两个所形成的疏水残基以及保守的亲水残基稳定了这些二级结构特征。N和C末端仍被不肯定地确定为残基31-40之间的区域。 

IGF-II以相当高的亲和力与IGF-II/M6P和IGF-I受体结合，并且以较低的亲和力与胰岛素受体结合。IGF-II也与大量的血清IGFBP相互作用。 

与IGF-II/M6P受体的结合 

用来自胰岛素的相应残基(Thr Ser Ile)取代IGF-II的残基48-50(Phe Arg Ser)，或用来自IGF-I的相应残基(Arg Arg)取代残基54-55(Ala Leu)都造成了与IGF-II/M6P受体的结合力的减低，但保留了与IGF-I和胰岛素受体的结合力(Sakano et al.(1991)J.Biol.Chem.266(31)：20626-35)。 

IGF-I和IGF-II在残基48-50的区域上具有相同性的序列和结构，但是在对IGF-II受体的亲和力上却有着1000倍的差异。NMR结构发现了在IGF-II残基53-58(IGF-I残基54-59)区域上的IGF-I和IGF-II之间的结构差异：在IGF-II中比在IGF-I中更好地确定了α螺旋，以及和IGF-I不同的是，在残基53和54周围骨架没有发生转折(Torres et al.(1995)J.Mol.Biol.248(2)：385-401)。这种结构差异与IGF-1中的Arg55和Arg56对IGF-II中的Ala54和Leu55的取代有关。通过这个区域内所具有的带电残基直接阻断了与IGF-II受体的结合，或通过带电残基所引起的结构变化使得与IGF-II受体的结合力发生变化都是有可能的。在任一情况中，不带电残基对IGF-I中的两个Arg残基的取代造成了更高的与IGF-II受体的亲和力(Cacciari et al.(1987)Pediatrician 14(3)：146-53)。因此，带正电残基在这些位点上的存在和与IGF-II受体的结合的缺失相关。 

IGF-II与阳离子非依赖性M6P受体的重复11结合。事实上，其中仅有重复11与阳离子非依赖性M6P受体的跨膜结构域域及细胞质区域相融合的微受体能结合IGF-II(亲和力近似为全长受体的亲和力的十分之一)，并介导IGF-II的细胞内吞作用以及IGF向溶酶体的转运(Grimme etal.(2000)J.Biol.Chem.275(43)：33697-33703)。M6P受体的11区的结构是已知的(Protein Data Base entries 1GPO and 1GP3；Brown et al.(2002)EMBO J.21(5)：1054-1062)。推定的IGF-II结合位点是相信与IGF-II的疏水性氨基酸相互作用的疏水口袋；IGF-II的侯选氨基酸包括亮氨酸8、苯丙氨酸48、丙氨酸54、和亮氨酸55。尽管重复11足以结合IGF-II， 包括阳离子非依赖性M6P受体的更大部分(例如重复10-13、或1-15)的构建体一般以更高的亲和力以及以增加了的pH依赖性结合IGF-II(见，例如Linnell et al.(2001)J.Biol.Chem.276(26)：23986-23991)。与IGF-I受体的结合 

用Leu对IGF-II残基Tyr27的取代、Val对Leu43或Phe对Ser26的取代分别都降低了IGF-II与IGF-I受体的亲和力94、56、和4倍(Torreset al.(1995)J.Mol.Biol.248(2)：385-401)。人IGF-II的残基1-7的缺失造成了与人IGF-I受体的亲和力降低了30倍，同时造成了与大鼠IGF-II受体的亲和力增加了12倍(Hashimoto et al.(1995)J.Biol.Chem.270(30)：18013-8)。IGF-II的NMR结构显示Thr7位于残基48Phe和50Ser附近以及9Cys-47Cys二硫键附近。Thr7与这些残基的相互作用被认为能稳定与IGF-I受体结合所需的可变形的N末端的六肽(Terasawa et al.(1994)EMBO J.13(23)5590-7)。同时，这种相互作用可以调控与IGF-II受体的结合力。IGF-II的C末端(残基62-67)的截短也使得IGF-II与IGF-I受体的亲和力降低了5倍(Roth et al.(1991)Biochem.Biophys.Res.Commun.181(2)：907-14)。 

IGF-II的缺失型突变体 

与IGF-I和阳离子非依赖性M6P受体的结合表面位于IGF-II的不同的面上。根据结构和突变的数据，可以构建出基本上比IGF-II更小的功能性的阳离子非依赖性M6P结合区。例如，可以缺失或取代氨基末端的氨基酸1-7和/或羧基末端的残基62-67。另外，有可能可以去除或取代氨基酸29-40，而不改变多肽的剩余部分的折叠或与阳离子非依赖性M6P受体的结合。因此，可以构建出包括第8-28和41-61位氨基酸的导向部分。氨基酸的这些链可以被直接地连接在一起或通过接头分开连接。或者，可以在分开的多肽链上提供第8-28和41-61位氨基酸。与IGF-II同 源的以及具有与IGF-II的结构紧密相关的四级结构的胰岛素的可比结构域具有足够多的结构信息，以便使得其正确地再折叠成合适的四级结构，甚至当存在于分开的多肽链中(Wang et al.(1991)Trends Biochem.Sci.279-281)。因此，例如氨基酸8-28或它的保守的取代变体可以与治疗药物融合，所形成的融合蛋白可以与氨基酸41-61、或它的保守的取代变体混和，并施用给患者。 

为了促进IGF-II标记的正确的呈递和折叠，可以使用IGF-II蛋白的更长的部分。例如，可以使用包括氨基酸残基1-67、1-87、或整个前体形式的IGF-II。 

与IGF结合蛋白的结合 

IGF-II以及相关的构建体可以被修饰以降低它们与IGFBP的亲和力，据此增加导向蛋白的生物利用度。 

以丝氨酸取代IGF-II的残基苯丙氨酸26使得IGF-II与IGFBP的结合力降低了5-75倍(Bach et al.(1993)J.Biol.Chem.268(13)：9246-54)。苏氨酸-丝氨酸-异亮氨酸对IGF-II残基48-50的取代使得与大多数IGFBP的结合力降低了100倍以上(Bach et al.(1993)J.Biol.Chem.268(13)：9246-54)；但是，这些残基对于与阳离子非依赖性甘露糖-6-磷酸受体的结合也是重要的。阻断与IGF-I受体结合的Y27L取代干扰了与IGFBP3及酸敏感性亚基的三元复合物的形成(Hashimoto etal.(1997)J.Biol.Chem.272(44)：27936-42)；这个三元复合物代表了循环中的大多数IGF-II(Yu et al.(1999)J.Clin.Lab Anal.13(4)：166-72)。IGF-II的前6个残基的缺失也干扰了IGFBP结合(Luthi et al.(1992)Eur.J.Biochem.205(2)：483-90)。 

对IGF-I与IGFBP的相互作用的研究还发现了丝氨酸对苯丙氨酸16的取代不影响二级结构，但使得IGFBP结合降低了约40和300倍之间(Magee et al.(1999)Biochemistry 38(48)：15863-70)。谷氨酸9变为赖氨 酸也造成了IGFBP结合的显著降低。此外，双重突变(赖氨酸9/丝氨酸16)表现出与IGFBP的最小亲和力。尽管先前在IGF-II中没有测试这些突变，但IGF-I和IGF-II的这个区域之间的序列的保守性提示将观察到相似的作用，当在IGF-II中生成类似的突变时(谷氨酸12赖氨酸/苯丙氨酸19丝氨酸)。 

IGF-II同系物 

影响与阳离子非依赖性M6P受体结合的人IGF-II或其一部分的氨基酸序列可以被用作为确定侯选序列是否具有足够的氨基酸相似性使得能合理地期望在本发明的方法中的成功的参照序列。优选地，变体序列与人IGF-II具有至少70％相似性或60％相同性，更优选地具有至少75％相似性或65％相同性，以及最优选地具有80％相似性或70％相同性。 

为了确定侯选肽区域是否具有所必需的与人IGF-II的相似性或相同性百分比，首先用在Smith和Waterman(1981)J.Mol.Biol.147：195-197中所述的动态程序算法联合在Henikoff和Henikoff(1992)PNAS 89：10915-10919的图2中所述的BLOSUM62取代矩阵对比侯选氨基酸序列和人IGF-II。对于本发明，缺口插入补偿的适当值是-12，以及缺口延伸补偿的适当值是-4。利用Smith-Waterman的算法和BLOSUM62矩阵进行对比的计算机程序例如GCG程序套装(Oxford Molecular Group，Oxford，England)是商品化可获得的，并被本领域人员广泛使用。 

一旦进行了侯选序列和参照序列之间的对比，就可以计算出相似性百分比积分。根据它们彼此之间的相似性，次序地比较每个序列的单个氨基酸。如果对应于两个对比的氨基酸的BLOSUM62矩阵中的数值是0或负值，则配对相似性积分为0；否则，配对相似性积分为1.0。原始(raw)相似性积分是所对比的氨基酸的配对相似性积分的总和。然后通过用其除以侯选或参照序列中的较小序列的氨基酸数目可以将原始积分标准化。标准化的原始积分就是相似性百分比。或者，为了计算相同性百分 比，再次次序地比较每个序列的所对比的氨基酸。如果氨基酸是非相同性的，配对相同性积分是0；否则配对相同性积分是1.0。原始相同性积分是相同性的所对比的氨基酸的总和。然后通过用其除以侯选或参照序列中的较小序列的氨基酸数目将原始积分标准化。标准化的原始积分是相同性百分比。为了计算相似性和相同性百分比的目的，忽略插入和缺失。因此，在这种计算中没有使用缺口补偿，不过，它们被用于最初的对比。 

IGF-II结构类似物 

人IGF-II和阳离子非依赖性M6P受体的已知结构使得利用例如在美国专利Nos.6,226,603和6,273,598中所讨论的计算机辅助设计原理设计出IGF-II类似物和其他的阳离子非依赖性M6P受体结合蛋白。例如，可以给安装有传统的计算机模型设计程序(例如从Biosym，Technologies Inc.商品化获得的INSIGHTII、DISCOVER、或DELPHI，或从MolecularSimulations，Inc.商品化获得的QUANTA、或CHARMM)的计算机提供IGF-II的已知的原子坐标。这些以及其他的软件程序能够分析预测分子变化对结构和分子间相互作用的作用的分子结构和模拟。例如，可以用软件鉴定出具有形成附加的分子间氢键或离子键的能力的修饰类似物，提高类似物与靶受体的亲和力。 

软件也使得设计出具有结构和化学特征的肽和有机分子，所述特征模拟在IGF-II的阳离子非依赖性M6P受体结合面的至少一部分表面上所展示的相同特征。因为对受体结合表面的主要贡献是在氨基酸的侧链内所具有的化学相互作用部分的空间排列，所述氨基酸一起确定了受体结合表面，因此，本发明的一个优选的实施方式涉及设计并生成一种具有带有化学相互作用部分的骨架的合成的有机分子，所述化学相互作用部分的空间关系模拟了在构成IGF-II的阳离子非依赖性M6P受体结合面的氨基酸侧链上所排列的化学部分的空间关系。优选的化学部分包括但不 限定于由构成IGF-II的阳离子非依赖性M6P受体结合面的氨基酸的氨基酸侧链所确定的化学部分。因此，要明白IGF-II类似物的受体结合面不必包括在其上所排列的氨基酸残基，但要包括所排列的化学部分。 

例如，在鉴定出相关的化学基团之后，熟练人员利用常规计算机程序可以设计出具有排列在合适的载体骨架上的受体相互作用的化学部分的小分子。在例如Dixon(1992)Tibtech 10：357-363；Tschinke et al.(1993)J.Med.Chem 36：3863-3870；和Eisen el al.(1994)Proteins：Structure，Function，and Genetics 19：199-221中描述了有用的计算机程序，在此通过引用将其阐述并入本申请。 

用一个名为“CAVEAT”的特殊的计算机程序搜索数据库(例如剑桥结构数据库)中的具有所需化学部分的空间定位的结构(Bartlett et al.(1989)in″Molecular Recognition：Chemical and Biological Problems″(Roberts，S.M.，ed)pp 182-196)。已经用CAVEAT程序根据所选的氨基酸侧链在tendamistat的三维结构中的定位(Bartlett et al.(1989)见上)设计出tendamistat的类似物(tendamistat是一种74个残基的α淀粉酶的抑制物)。 

或者，在鉴定出一系列模拟IGF-II的阳离子非依赖性M6P受体结合活性的类似物之后，本领域熟练人员可以使用各种计算机程序，这些程序有助于本领域熟练人员开发定量结构活性关系(QSAR)以及还有助于原位设计另外的成形素(morphogen)类似物。例如在Connolly-Martin(1991)Methods in Enzymology 203：587-613；Dixon(1992)见上；和Waszkowycz et al.(1994)J.Med.Chenm.37：3994-4002中描述了其他有用的计算机程序。 

融合结点 

对于GAA被表达为一种具有肽标记或导向结构域的融合蛋白的情况，肽标记可以与GAA多肽直接融合，或者可以通过接头将肽标记与 GAA多肽分开。氨基酸接头整合了不同于在天然蛋白的位点上所出现的氨基酸序列的氨基酸序列，并且通常被设计成为柔性的或在两个蛋白部分之间插入一个结构例如α螺旋。接头可以是相当短的，例如序列Gly-Ala-Pro或Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Pro(SEQ ID NO：3)，或者可以是更长的例如10-25个氨基酸长度。例如，已经描述了3-4个拷贝的序列(GGGGS(SEQ ID NO：4))的柔性的重复接头以及2-5个拷贝的序列(EAAAK(SEQID NO：5))的α螺旋的重复接头(Arai et al.(2004)Proteins：Structure，Function and Bioinformatics 57：829-838)。也已经报道了另一种接头GGGGTVGDDDDK(SEQ ID NO：1)在IGF-II融合蛋白的背景中的应用(DiFalco et al.(1997)Biochem.J.326：407-413)。整合了人血清蛋白的α螺旋部分的接头可以被用于最小化接头区域的免疫原性。 

应当仔细地选择融合结点的位置，以促进两种融合配体的正确折叠和活性，并阻止肽标记与GAA多肽的过早分离。根据在图2中所图解说明的GAA蛋白的组成的模型，图3图解说明了四种用于生成GILT标记的GAA的示例策略。 

1.在氨基末端融合标记。 

2.在三叶形结构域和成熟区之间插入标记。 

3.在成熟区和C末端结构域之间插入标记。 

4.在截短GAA的C末端融合标记，并共表达C末端结构域。 

例如，可以将导向结构域直接地或经间隔物与GAA的氨基酸70融合，氨基酸70是一个使得蛋白表达、GAA部分的催化活性、以及在实施例4中所述的导向结构域的正确导向作用的位点。或者，可以在分离GAA的C末端结构域与成熟多肽的裂解位点上或附近融合导向结构域。这使得合成具有内在导向结构域的GAA蛋白，根据裂解位点的布置，任选地可以裂解所述蛋白以使得可以从导向结构域中释放出成熟多肽或C末端结构域。或者，成熟多肽可以被合成为在大约位点791上的融合蛋白，而没有将C末端序列整合入表达构建体的开放读框中。 

为了促进GILT标记的折叠，可以修饰与融合结点相邻近的GAA氨基酸残基。例如，因为GAA半胱氨酸残基干扰GILT标记的正确折叠是有可能的，所以可以删除或用丝氨酸取代GAA半胱氨酸952以调节C末端的GILT标记。也可以在终末的Cys952上即刻地融合GILT标记。倒数第二位的Cys938可以被改变为脯氨酸，结合终末的Cys952向丝氨酸的突变。 

或者，标记可以与GAA多肽化学结合。 

导向部分的亲和力 

优选的导向部分以亚微摩尔的解离常数与它们所导向的受体结合。一般而言，越是更低的解离常数(例如，小于10-7M，小于10-8M，或小于10-9M)越是优选的。用在Linnell et al.(2001)J.Biol.Chem.276(26)：23986-23991中所述的表面等离子共振优选地进行解离常数的测定。生成导向受体的细胞外结构域的可溶形式(例如阳离子非依赖性M6P受体的重复1-15)，并通过抗生物素蛋白-生物素的相互作用将其固定到芯片上。将导向部分流经过芯片，并通过测定与芯片表面相关的物质的变化检测并计算出动力学和平衡常数。 

序列相似性的计算 

为了生成也可以作为催化结构域、伴侣分子区或亚细胞导向结构域的所述序列的变体，在此所述的任一种或多种天然发生的α-糖苷酶或亚细胞导向结构域例如IGF-II都可以作为确定侯选序列是否具有足够的氨基酸相似性使得能合理地期望在本发明的方法中的成功的参照序列。例如，催化结构域的变异序列与酸性α-糖苷酶的其中一种所述的天然存在的催化结构域具有至少50％相似性或30％相同性，优选地具有至少55％相似性或35％相同性，更优选地具有至少60％相似性或40％相同性，更优选地具有至少65％相似性或45％相同性，更优选地具有至少70％相似性或50％相同性，更优选地具有至少75％相似性或55％相同性，更优选 地具有至少80％相似性或60％相同性，更优选地具有至少85％相似性或65％相同性，更优选地具有至少90％相似性或70％相同性，更优选地具有至少95％相似性或75％相同性，以及最优选地具有80％相同性、85％相同性、90％相同性、或95％相同性。伴侣分子区的变异序列与酸性α-糖苷酶的其中一种所述的天然存在的伴侣分子区具有至少40％相似性或20％相同性，优选地具有至少45％相似性或25％相同性，更优选地具有至少50％相似性或30％相同性，更优选地具有至少55％相似性或35％相同性，更优选地具有至少60％相似性或40％相同性，更优选地具有至少65％相似性或45％相同性，更优选地具有至少70％相似性或50％相同性，更优选地具有至少75％相似性或55％相同性，更优选地具有至少80％相似性或60％相同性，更优选地具有至少85％相似性或65％相同性，更优选地具有至少90％相似性或70％相同性，更优选地具有至少95％相似性或75％相同性，以及最优选地具有80％相同性、85％相同性、90％相同性、或95％相同性。导向结构域的变异序列与其中一种所述的天然存在的导向结构域具有至少70％相似性或60％相同性，更优选地具有至少75％相似性或65％相同性，更优选地具有至少80％相似性或70％相同性，更优选地具有至少85％相似性或75％相同性，更优选地具有至少90％相似性或80％相同性，更优选地具有至少95％相似性或85％相同性，以及最优选地具有90％相同性、或95％相同性。 

为了确定侯选肽区域是否具有所必需的与参照多肽或肽寡聚体的相似性或相同性百分比，首先用在Smith and Waterman(1981)J.Mol.Biol.147：195-197中所述的动态程序算法联合在Henikoff and Henikoff(1992)，″Amino acid substitution matrices from protein blocks″，PNAS(1992 Nov)，89：10915-10919的图2中所述的BLOSUM62取代矩阵对比侯选氨基酸序列和参照氨基酸序列。对于本发明，缺口插入补偿的适当值是-12，以及缺口延伸补偿的适当值是-4。利用Smith-Waterman的算法和BLOSUM62矩阵进行对比的计算机程序例如GCG程序套装(Oxford Molecular Group， Oxford，England)是商品化可获得的，并被本领域人员广泛使用。 

一旦进行了侯选序列和参照序列之间的对比，就可以计算出相似性百分比积分。根据它们彼此之间的相似性，次序地比较每个序列的单个氨基酸。如果对应于两个对比的氨基酸的BLOSUM62矩阵中的数值是0或负值，配对相似性积分为0，否则配对相似性积分为1.0。原始相似性积分是所对比的氨基酸的配对相似性积分的总和。然后通过用其除以侯选或参照序列中的较小序列的氨基酸数目可以将原始积分标准化。标准化的原始积分是相似性百分比。或者，为了计算相同性百分比，再次次序地比较每个序列的所对比的氨基酸。如果氨基酸是非相同性的，配对相同性积分是0；否则配对相同性积分是1.0。原始相同性积分是相同性的所对比的氨基酸的总和。然后通过用其除以侯选或参照序列中的较小序列的氨基酸数目将原始积分标准化。标准化的原始积分是相同性百分比。为了计算相似性和相同性百分比的目的，忽略了插入和缺失。因此，在这种计算中没有使用缺口补偿，尽管它们被用于最初的对比。 

施用 

通过任何途径都可以给哺乳动物宿主施用本发明所产的导向治疗药物。因此，合适的施用可以是口服或肠外包括静脉内和腹腔内途径的施用。另外，施用可以是周期性的弹丸式注射治疗药物或者可以是通过外在容器(例如静脉内用袋)的静脉内或腹腔内施用所进行的更为连续的施用。在某些实施方式中，本发明的治疗药物可以是药物级的。也就是说，某些实施方式符合了施用给人体所需的纯度和治疗控制的标准。兽  医学上的应用也在在此所用的预期含义之内。 

用于兽医及人体医学应用的本发明的治疗药物的剂型通常都包括这些与药用可接受载体和任选的其他组分相结合的治疗药物。载体可以是“可接受的”，意思是与剂型中的其他组分是兼容的并且对其受者无害。在这个方面，药用可接受载体预期包括任何的和所有的与药物施用相兼 容的溶剂、分散剂、涂层、抗细菌剂和抗真菌剂、等张和吸收延迟剂等等。这些媒介和试剂用于药物活性组分的用途在本领域是已知的。除了任何与活性化合物不相兼容的常用媒介或试剂的范围之外，预期了常用媒介或试剂在组合物中的应用。补充的活性化合物(根据本发明或本领域已知的方法所鉴定出的)也可以被整合到组合物中。剂型可以被便利地呈递为剂量单位形式并被药物/微生物领域的任一公知的方法所制备。一般而言，通过将治疗药物与液体载体或精细分离的固体载体或两者进行结合制备出一些剂型，按需将产物成型为所需的剂型。 

本发明的药物组合物可以被制剂成与其预期的施用途径相兼容。施用途径的实例包括口服或肠外例如静脉内、皮内、吸入、经皮(局部)、经粘膜、和直肠施用。用于肠外、皮内或皮下应用的溶液或悬浮液可以包括下面的组分：无菌稀释剂例如注射用水、盐水、非挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗菌剂例如本甲醇或尼泊金甲酯；抗氧化剂例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂例如依地酸钙钠；缓冲剂例如乙酸、柠檬酸或磷酸以及用于调整张力的试剂例如氯化钠或葡萄糖。可以用酸或碱例如盐酸或氢氧化钠调整pH值。 

用在药物领域公知的任一方法(例如在Remington′s PharmaceuticalSciences，(Gennaro，A.，ed.)，Mack Pub.，1990中所述的方法)可以制备用于口服或肠外施用的有用溶液。用于肠外施用的剂型也可以包括用于口腔施用的甘氨胆酸、用于直肠施用的甲氧水杨酸、或用于阴道施用的cutric acid。肠外制剂可以被封装在玻璃或塑料所制成的安瓿、一次性注射器或多剂量瓶内。通过混和药物和非刺激性赋形剂例如可可脂、其他甘油酯、或其他在室温下为固态以及在体温下为液态的组合物也可以制备出经直肠施用的栓剂。制剂也可以包括例如聚烯烃乙二醇例如聚乙二醇、植物来源的油、氢化的萘等等。用于直接施用的剂型可以包括甘油和高粘度的其他组合物。这些治疗药物的其他潜在有用的肠外载体包括乙烯-醋酸乙烯酯共聚物颗粒、渗透泵、可植入的输注系统、和脂质体。 用于吸入施用的剂型可以含有例如作为赋形剂的乳糖，或者可以含有例如聚氧乙烯-9-十二烷基醚、甘氨胆酸和脱氧胆酸的水溶液，或者可以是用于以鼻滴液的形式施用的油性溶液，或者是用于鼻内施用的凝胶。保留灌肠剂也可以被用于直肠转运。 

适用于口服施用的本发明的剂型可以是分离的单位形式例如胶囊、凝胶胶囊、囊剂、片剂、含片、或锭剂，每个单位都含有预定量的药物，剂型可以是粉末或颗粒形式；水性液体或非水性液体的溶液或悬浮液的形式；或水包油型乳剂或油包水型乳剂的形式。也可以以药丸、舔剂或糊剂的形式施用治疗药物。通过压缩或模制药物以及任选的一种或多种辅助成分都可以制备片剂。通过在合适机器中压缩不流动形式(例如粉末或颗粒)的药物可以制备压缩片剂，任选地与结合剂、润滑剂、惰性稀释剂、表面活性或分散剂混和。通过在合适的机器中模制粉末药物以及被惰性液体稀释剂所湿化的合适载体的混和物可以制备模制片剂。 

口服组合物一般包括一种惰性稀释剂或一种可食用载体。对于口服治疗性施用的目的，活性化合物可以与赋形剂整合。利用用作漱口剂的液体所制备的口服组合物包括液体载体中的化合物，其被口服施用并嗖嗖地漱口和吐出或吞咽。药用兼容的结合剂和/或辅助材料可以被包含作为组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等等都可以含有任一下面的组分，或相似性能的化合物：结合剂例如淀粉或乳糖、崩解剂例如藻朊酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂例如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂例如二氧化硅胶体；甜味剂例如蔗糖或糖精；或调味剂例如薄荷、水杨酸甲酯、或橙调味剂。 

适合于注射应用的药物组合物包括无菌水溶液(如果是水溶性的)或分散相以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散相的无菌粉末。对于静脉内施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF，Parsippany，NJ)或磷酸缓冲盐水(PBS)。在所有情况中，组合物都是无菌的并且可以被液体化到具有容易可注射器化的程度。在生产和储存的 条件下，它可以是稳定的，并可以被保存对抗微生物例如细菌和真菌的污染作用。载体可以是溶剂或含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、和液态聚乙二醇等等)的分散媒介，以及它们的合适的混和物。例如，通过使用涂层例如卵磷脂、通过维持分散相中的所需的颗粒大小以及通过施用表面活性剂都可以维持适当的流动性。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂例如尼泊金类、三氯叔丁醇、苯酚、抗坏血酸、柳硫汞等等都可以实现对微生物作用的预防。在多种情况中，组合物优选地包括等张剂例如糖、多元醇例如甘露糖醇、山梨糖醇和氯化钠。通过在组合物中包含延迟吸收的试剂例如单硬脂酸铝和凝胶可以引起可注射组合物的吸收延长。 

通过将所需量的活性化合物掺合在按需具有一种上面所列举的组分或其组合物的合适溶剂中，以及随后的过滤灭菌可以制备出无菌的可注射溶液。一般而言，通过将活性化合物掺合到含有基本的分散媒介以及所需的来自上面所列举的那些组分的其他组分的无菌载体中可以制备出分散相。对于用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末，制备的方法包括真空干燥和冷冻干燥，这使得可以从先前经无菌过滤的溶液中生成了活性组分加上任何附加的所需组分的粉末。 

合适于关节内施用的剂型可以是治疗药物的无菌的水性制剂的形式，所述药物可以是微晶体的形式，例如水性微晶体悬浮液的形式。脂质体剂型或生物可降解多聚体系统可以被用于呈递用于关节内和眼部施用的治疗药物。 

适合于局部施用(包括眼部治疗)的剂型包含液态或半液态制剂例如搽剂、洗剂、凝胶剂、敷剂(applicants)、水包油或油包水型乳剂例如乳膏、软膏或糊剂；或溶液或悬浮液例如滴剂。通过用可皮肤用载体例如洗剂、乳膏、软膏或皂剂分散治疗药物可以制备用于给皮肤表面局部施用的剂型。在一些实施方式中，有用的载体是能在皮肤上形成薄膜或薄层以便固定药物并抑制清除的载体。对于需要与组织表面粘附时，组 合物可以包含分散在纤溶酶原-凝血酶组合物或其他生物粘附剂中的治疗药物。然后可以将治疗药物涂到、喷到或以其他的方法施用到所需的组织表面上。对于内在组织表面的局部施用，试剂可以被分散在液体组织粘附剂或其他的已知的增强组织表面吸附的物质中。例如，优先地施用羟丙纤维素或纤溶酶原/凝血酶溶液。或者，可以使用组织涂层溶液例如含果胶的剂型。 

对于例如哮喘的吸入治疗，可以使用吸入经喷雾罐、喷雾器、或雾化器所调配的粉末(自我推进或喷雾的剂型)。这些剂型可以是来自粉末吸入设备的用于肺部施用的精细粉碎的粉末形式或自我推进的粉末调配的剂型。对于自我推进的溶液和喷雾剂型，通过选择具有所需喷雾特征的阀门(即能产生具有所需颗粒大小的喷雾)或通过将活性组分整合为可控颗粒大小的悬浮粉末都可以实现这种效果。对于经吸入施用，也可以以来自含合适推进剂(例如气体如二氧化碳)的加压容器或分散器或喷雾器的喷雾剂的形式转运治疗药物。也可以使用鼻滴剂。 

全身施用也可以是经粘膜或经皮的方法。对于经粘膜或经皮的施用，在剂型中使用了适合于所穿透屏障的穿透剂。这些穿透剂在本领域一般都是已知的，以及对于经粘膜施用，例如包括去污剂、胆盐、和filsidic酸衍生物。通过使用鼻喷雾剂或栓剂都可以实现经粘膜施用。对于经皮施用，如在本领域普遍所知的那样，治疗药物通常被制剂成软膏、药膏、凝胶或乳剂。 

在一个实施方式中，用将保护性对抗治疗药物从体内被快速清除的载体(例如控释剂型，包括植入物和微胶囊的转运系统)制备治疗药物。可以施用生物可降解的、生物兼容的多聚体例如乙撑乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、多正酯类、和聚乳酸。用于制备这些剂型的方法对于本领域熟练人员将是显而易见的。也可以从Alza Corporation和NovaPharmaceuticals，Inc.中商品化地得到材料。脂质体悬浮液也能被用作为药用可接受载体。根据本领域那些熟练人员所已知的方法可以制备这些载 体，例如在美国专利No.4,522,811中所述的方法。也可以施用微粒体和微颗粒。 

为了施用便利和剂量的统一性，口服或肠外组合物可以被制剂成剂量单位形式。剂量单位形式指的是适合作为治疗对象的单一剂量的物理上不同的单位；每个单位都含有能计算出生成所需治疗作用的预定量的活性化合物以及所需的药物载体。本发明的剂量单位形式的规范是由活性化合物的独特特征和所实现的特殊治疗作用、以及组合这样一种用于个体治疗的活性化合物的领域中所固有的局限性所决定的，并且直接依赖于这些因素。 

一般而言，本发明所鉴定出的治疗药物可以被制剂成用于给人或其他哺乳动物肠外或口服施用例如治疗有效剂量，即给靶组织提供适当浓度的药物一段足以诱导所需作用的时间。另外，可以单独或联合其他已知对特殊疾病或相关适应症具有有益作用的分子可以施用本发明的治疗药物。仅仅作为实例的方式，有用的辅助因子包括缓解症状的辅助因子，包括防腐剂、抗生素、抗病毒剂和抗真菌剂和镇痛剂和麻醉剂。 

在治疗组合物中被转运的本发明所鉴定的治疗药物的有效浓度有所不同，这依赖于多种因素，包括所施用药物的最终所需的剂量和施用途径。优选的所施用的剂量也可能依赖于这些变量如所治疗的疾病或适应症的类型和程度、特殊患者的总体健康状态、所转运的治疗药物的相对生物学疗效、治疗药物的剂型、赋形剂在剂型中的存在和类型、以及施用途径。在一些实施方式中，利用从较早描述的利用非人的灵长类和啮齿类哺乳动物研究中推导出的经典的剂量单位，可以给个体提供本发明的治疗药物。如上所述的，剂量单位指的是单一剂量，即能施用给患者的单一剂量，其能被便利地操作并包装，仍是包括治疗药物以及治疗药物和固体或液体药物稀释剂或载体的混和物的物理和生物稳定的单位剂量。 

在某些实施方式中，遗传工程化生物体以生成本发明所鉴定的治疗药物。这些生物体可以释放用于收集或能被直接引入到患者体内的治疗药物。在另一系列的实施方式中，细胞可以被用作本发明所鉴定的治疗药物的载体。

本发明的治疗药物也包括“前体药物”衍生物。术语前体药物指的是需要在生物体内的生物转化(或自发的或酶的生物转化)以释放或活化活性组分的亲代分子的无药物活性的(或部分物活性的)衍生物。前体药物是本发明的治疗药物的变体或衍生物，它们具有在代谢条件下可被裂解的基团。当前体药物在生理条件下进行溶剂裂解或进行酶降解时，前体药物变成在体内具有药用活性的本发明的治疗药物。本发明的前体药物可以被称作单个、双重、三重前体药物等等，依赖于在生物体内释放或活化活性药物所需的生物转化步骤的数目，并说明了在前体类型形式中所具有的功能性基团的数目。前体药物形式常常提供了溶解性、组织相容性、或在哺乳动物生物体内延迟释放的优点(见，Bundgard，Designof Prodrugs，pp.7-9，21-24，Elsevier，Amsterdam 1985 and Silverman，TheOrganic Chemistry of Drug Design and Drug Action，pp.352-401，AcademicPress，San Diego，Calif.，1992)。此外，本发明的前体药物衍生物可以组合有其他增强生物利用度的特点。 

实施例 

实施例1：GAA的反式表达 

用下面的引物生成含有与人GAA残基791-952(C末端结构域)融合的人IGF-II序列的基因表达盒。 

GAA41：GGAATTCAGGCGCGCCGGCAGCTCCCCGTGAGCCAGCC(SEQ ID NO：6) 

GAA 27：GCTCTAGACTAACACCAGCTGACGAGAAACTGC(SEQ ID NO：7) 

用GAA41和GAA27经PCR扩增GAA的C末端结构域。所扩增的片段在5’末端上含有AscI位点。然后将在3’末端具有AscI位点的编码IGF-II信号序列(残基1-25)的SS N-标记在AscI位点上与GAA的C末 端结构域融合，并将表达盒克隆到pCEP4中，以生成质粒pCEP-SS-GAA-791-952。如下显示了SS N-标记的核酸序列。 

SS N-标记的DNA序列(SEQ ID NO：8)： 

gaattcACACCAATGGGAATCCCAATGGQGAAGTCGATGCTGGTGCTT 

CTCACCTTCTTGGCCTTCGCCTCGTGCTGCATTGCTGCTggcgcgccg 

相似地生成了下面的附加质粒：缺乏C末端的GAA残基817-952的pCEP-GAAΔ817-952以及与pCEP-GAAΔ817-952相似但添加了C末端的GILTΔ1-7标记的pCEP-GAAΔ817-952-GILTΔ1-7。通过在氨基酸残基816之后引入终止密码子生成了GAAΔ817-952。为了有助于克隆过程，在终止密码子之后的是3’末端的XbaI限制性酶切位点，并且在5’端含有EcoRI限制性酶切位点。下面显示了GAAΔ817-952的氨基酸序列。GAAΔ817-952的DNA序列(SEQ ID NO：9)： 

gaattcCAAACCATGGGAGTGAGGCACCCGCCCTGCTCCCACCGGCTCCTGGCCGTCTG 

CGCCCTCGTGTCCTTGGCAACCGCTGCACTCCTGGGGCACATCCTACTCCATGATTT 

CCTGCTGGTTCCCCGAGAGCTGAGTGGCTCCTCCCCAGTCCTGGAGGAGACTCACCC 

AGCTCACCAGCAGGGAGCCAGCAGACCAGGGCCCCGGGATGCCCAGGCACACCCC 

GGCCGTCCCAGAGCAGTGCCCACACAGTGCGACGTCCCCCCCAACAGCCGCTTCGA 

TTGCGCCCCTGACAAGGCCATCACCCAGGAACAGTGCGAGGCCCGCGGCTGCTGCT 

ACATCCCTGCAAAGCAGGGGCTGCAGGGAGCCCAGATGGGGCAGCCCTGGTGCTTC 

TTCCCACCCAGCTACCCCAGCTACAAGCTGGAGAACCTGAGCTCCTCTGAAATGGG 

CTACACGGCCACCCTGACCCGTACCACCCCCACCTTCTTCCCCAAGGACATCCTGAC 

CCTGCGGCTGGACGTGATGATGGAGACTGAGAACCGCCTCCACTTCACGATCAAAG 

ATCCAGCTAACAGGCGCTACGAGGTGCCCFTGGAGACCCCGCGTGTCCACAGCCGG 

GCACCGTCCCCACTCTACAGCGTGGAGTTCTCtGAGGAGCCCTTCGGGGTGATCGTG 

CACCGGCAGCTGGACGGCCGCGTGCTGCTGAACACGACGGTGGCGCCCCTGTTCTT 

TGCGGACCAGTTCCTTCAGCTGTCCACCTCGCTGCCCTCGCAGTATATCACAGGCCT 

CGCCGAGCACCTCAGTCCCCTGATGCTCAGCACCAGCTGGACCAGGATCACCCTGT 

GGAACCGGGACCTTGCGCCCACGCCCGGTGCGAACCTCTACGGGTCTCACCCTTTCT 

ACCTGGCGCTGGAGGACGGCGGGTCGGCACACGGGGTGTTCCTGCTAAACAGCAAT 

GCCATGGATGTGGTCCTGCAGCCGAGCCCTGCCCTTAGCTGGAGGTCGACAGGTGG 

GATCCTGGATGTCTACATCTTCCTGGGCCCAGAGCCCAAGAGCGTGGTGCAGCAGT 

ACCTGGACGTTGTGGGATACCCGTTCATGCCGCCATACTGGGGCCTGGGCTTCCACC 

TGTGCCGCTGGGGCTACTCCTCCACCGCTATCACCCGCCAGGTGGTGGAGAACATG 

ACCAGGGCCCACTTCCCCCTGGACGTCCAATGGAACGACCTGGACTACATGGACTC 

CCGGAGGGACTTCACGTTCAACAAGGATGGCTTCCGGGACTTCCCGGCCATGGTGC 

AGGAGCTGCACCAGGGCGGCCGGCGCTACATGATGATCGTGGATCCTGCCATCAGC 

AGCTCGGGCCCTGCCGGGAGCTACAGGCCCTACGACGAGGGTCTGCGGAGGGGGG 

TTTTCATCACCAACGAGACCGGCCAGCCGCTGATTGGGAAGGTATGGCCCGGGTCC 

ACTGCCTTCCCCGACTTCACCAACCCCACAGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGT 

GGCTGAGTTCCATGACCAGGTGCCCTTCGACGGCATGTGGATTGACATGAACGAGC 

CTTCCAACTTCATCAGGGGCTCTGAGGACGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAAC 

CCACCCTACGTGCCTGGGGTGGTTGGGGGGACCCTCCAGGCGGCAACCATCTGTGC 

CTCCAGCCACCAGTTTCTCTCCACACACTACAACCTGCACAACCTCTACGGCCTGAC 

CGAAGCCATCGCCTCCCACAGGGCGCTGGTGAAGGCTCGGGGGACACGCCCATTTG 

TGATCTCCCGCTCGACCTTTGCTGGCCACGGCCGATACGCCGGCCACTGGACGGGG 

GACGTGTGGAGCTCCTGGGAGCAGCTCGCCTCCTCCGTGCCAGAAATCCTGCAGTTT 

AACCTGCTGGGGGTGCCTCTGGTCGGGGCCGACGTCTGCGGCTTCCTGGGCAACAC 

CTCAGAGGAGCTGTGTGTGCGCTGGACCCAGCTGGGGGCCTTCTACCCCTTCATGCG 

GAACCACAACAGCCTGCTCAGTCTGCCCCAGGAGCCGTACAGCTTCAGCGAGCCGG 

CCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTCACCCTGCGCTACGCACTCCTCCCCCACCTCT 

ACACGCTGTTCCACCAGGCCCACGTCGCGGGGGAGACCGTGGCCCGGCCCCTCTTC 

CTGGAGTTCCCCAAGGACTCTAGCACCTGGACTGTGGACCACCAGCTCCTGTGGGG 

GGAGGCCCTGCTCATCACCCCAGTGCTCCAGGCCGGGAAGGCCGAAGTGACTGGCT 

ACTTCCCCTTGGGCACATGGTACGACCTGCAGACGGTGCCAATAGAGGCCCTTGGC 

AGCCTCCCACCCCCACCTGCAGCTCCCCGTGAGCCAGCCATCCACAGCGAGGGGCA 

GTGGGTGACGCTGCCGGCCCCCCTGGACACCATCAACGTCTAGtctaga 

GAAΔ817-952的氨基酸序列(SEQ ID NO：10)： 

MGVRHPPCSHRLLAVCALVSLATAALLGHILLHDFLLVPRELSGSSPVLEETHPAHQQG 

ASRPGPRDAQAHPGRPRAVPTQCDVPPNSRFDCAPDKAITQEQCEARGCCYIPAKQGLQ 

GAQMGQPWCFFPPSYPSYKLENLSSSEMGYTATLTRTTPTFFPKDILTLRLDVMMETEN 

RLHFTIKDPANRRYEVPLETPRVHSRAPSPLYSVEFSEEPFGVTVHRQLDGRVLLNTTVA 

PLFFADQFLQLSTSLPSQYTTGLAEHLSPLMLSTSWTRITLWNRDLAPTPGANLYGSHPF 

YLALEDGGSAHGVFLLNSNAMDVVLQPSPALSWRSTGGILDVYIFLGPEPKSVVQQYL 

DVVGYPFMPPYWGLGFHLCRWGYSSTAITRQVVENMTRAHFPLDVQWNDLDYMDSR 

RDFTFNKDGFRDFPAMVQELHQGGRRYMMIVDPAISSSGPAGSYRPYDEGLRRGVFITN 

ETGQPLIGKVWPGSTAFPDFTNPTALAWWEDMVAEFHDQVPFDGMWIDMNEPSNFIR 

GSEDGCPNNELENPPYVPGVVGGTLQAATICASSHQFLSTHYNLHNLYGLTEAIASHRA 

LVKARGTRPFVISRSTFAGHGRYAGHWTGDVWSSWEQLASSVPEILQFNLLGVPLVGA 

DVCGFLGNTSEELCVRWTQLGAFYPFMRNHNSLLSLPQEPYSFSEPAQQAMRKALTLR 

YALLPHLYTLFHQAHVAGETVARPLFLEFPKDSSTWTVDHQLLWGEALLITPVLQAGK 

AEVTGYFPLGTWYDLQTVPIEALGSLPPPPAAPREPAIHSEGQWVTLPAPLDTINV. 

为了确定当反式表达时，GAA的C末端结构域是否发挥了功能，单独地或联合质粒pCEP-GAAΔ817-952或pCEP-GAAΔ817-952-GILTΔ1-7将pCEP-SS-GAA-791-952转染到HEK293细胞内。作为对照，pCEP-GAAΔ817-952和pCEP-GAAΔ817-952-GILTΔ1-7也被单独地转染到HEK293细胞内。在试验中使用了标准的转染方法。对于单个质粒的转染，使用1μg质粒DNA。对于共转染，使用了0.5μg每种质粒。如产家所指导的，将1μg总DNA与96μl无血清的HEK293生长培养基以及4μl FuGene6(Roche)混和。往生长在12孔板内的HEK293细胞的每个复孔内都加入50μl混和物，每孔都含有1ml加有1.5g/L碳酸钠、10％热灭活FBS、和4mM L-谷氨酰胺的Dulbecco修饰Eagles培养基。细胞在37℃、5％下孵育2-3天。 

收集生长培养基，并如所述的(Reuser，A.J.et al.(1978)Am.J.Hum.Genet.30：132-143)对生长培养基进行检测以确定出GAA活性。在从经单一质粒所转染的HEK293细胞中所收集到的培养基中没有检测到GAA活性。相反地，在经pCEP-SS-GAA-791-952和pCEP-GAAΔ817-952或pCEP-GAAΔ 817-952-GILTΔ1-7共转染的HEK293细胞中收集到的生长培养基中具有GAA活性(表1)。 

因此，仅仅当与C末端结构域质粒pCEP-SS-GAA-791-952共表达时，两种C末端缺失型构建体pCEP-GAAΔ817-952和pCEP-GAAΔ 

817-952-GILTΔ1-7才表达功能性蛋白。这个试验证实当反式共表达时，C末端的GAA区与成熟的、N末端结构域整合。 

表1：GAA C末端结构域和N末端结构域的瞬时共表达 

实施例2：有效的GAA反式表达所需的区域 

在实施例1中所述的瞬时共转染试验中，反式表达构建体的两半都具有包含氨基酸残基792-817的GAA区域。为了确定这个区域的重叠对于有效的反式表达是否是必需的，设计了一对构建体pCEP-GAAΔ791-952-GILTΔ1-7和pCEP-SS-GAA-791-952，它们之间没有重叠并且GILT标记融合在791位点上。如表2所示的，瞬时共转染试验证实了有效的GAA反式表达需要C末端结构域内的氨基酸残基792-817的存在。 

表2：有效的GAA反式表达需要氨基酸残基792-817 

实施例3：具有内在GLIT标记的GAA蛋白的构建 

首先用PCR生成在完整人GAA序列的2370位核苷酸后的核苷酸序列GGCGCGCCG(SEQ ID NO：11)的插入。这个插入生成了Ala791前的AscI限制性酶切位点。用下面的DNA寡聚体PCR扩增GILT标记：IGF7：gctctagaggcgcgccCTCGGACTTGGCGGGGGTAGC(SEQ ID NO：12)IGF8：ggaattcaggcgcgccgGCTTACCGCCCCAGTGAGAC(SEQ ID NO：13) 

所扩增的GILT标记在每个末端都含有一个AscI限制性酶切位点。用AscI消化该GILT标记，并如上所述将其插入到GAA的Ala791前的AscI位点内。DNA测序确定了GILT插入的骨架内的定位。在载体pCEP4中表达这个在Ala791前含有内在GLIT标记的GAA表达盒，称之为质粒pCEP-GAA-IRGILT-4。发现pCEP-GAA-IRGILT-4在GAA编码序列内含有PCR生成的突变T712C。这个构建体产生了功能性GAA蛋白。 

实施例4：具有N末端GILT标记的GAA缺失型构建体 

利用在表3中所示的引物用PCR扩增生成了一组适合于N末端的GAA表达的5种标记(N-标记)。GILT N-标记含有天然的IGF-II信号序列以及完整的GILT表位。SS-标记只含有IGF-II信号序列。 

例如，GILTΔ1-7N-标记含有IGF-II信号序列以及GILT表位残基8-67。用三个PCR反应生成该标记：(1)利用引物IGF1和IGF4PCR扩增人IGF-II DNA模板；(2)利用引物IGF2和IGF7PCR扩增人IGF-II DNA模板；和(3)利用引物IGF1和IGF7PCR扩增前两个PCR反应的产物。 

GILTΔ2-7N-标记含有IGF-II信号序列以及GILT表位残基1和随后的残基8-67。用三个PCR反应生成该标记：(1)利用引物IGF1和IGF5PCR扩增人IGF-II DNA模板；(2)利用引物IGF3和IGF7PCR扩增人IGF-II DNA模板；和(3)利用引物IGF1和IGF7PCR扩增前两个PCR反应的产物。 

SS GAA-GILT N-标记含有残基1-69内的信号序列和随后的完整的GILT表位。用三个PCR反应生成该标记：(1)利用引物GAA13和GI1PCR扩增人IGF-II模板；(2)利用引物GI2和IGF7PCR扩增人IGF-II模板；和(3)利用引物GAA13和IGF7PCR扩增前两个PCR反应的产物。 

每个N-标记都含有5’EcoRI限制性酶切位点以及3’AscI和XbaI位点。AscI位点被用于融合每个标记与下面所述的GAAN末端的缺失构建体。 

表3：N末端的标记构建体 

删除人GAA DNA序列的N末端部分，并利用PCR技术用AscI限制性酶切位点将其取代。下面罗列了用于确定删除位点的5’DNA寡聚体 (表4)。5’寡聚体与GAA编码序列内的不同的3’寡聚体配对，所形成的DNA片段随后与完整C末端的GAA编码序列融合。N末端的AscI位点与上面所列的5种N末端标记(N-标记)之一的标记融合，以完成表达盒(表4)。 

表4GAA N末端缺失构建体 

大写字母表示与GAA编码序列互补的序列。小写字母表示EcoRI和AscI限制性酶切位点。 

表4中所列的表达盒都含有在共同的AscI位点上与缺失N末端的GAA融合的N末端标记(N-标记)。将表达盒克隆到表达载体pCEP4的多个克隆位点内，并用FuGene6转染试剂(Roche)将其转染到HEK293细胞内。在转染后2-3天收集瞬时转染的培养基，并用标准的酶检测法检测所分泌的GAA活性(Reuser，A.J.，et al.(1978)Am.J.Hum.Genet.30：132-143)。 

表5N标记的GAA构建体的相对瞬时表达 

[0216] 

如这些数据所示的那样，包括1-80的GAA的N末端部分对于瞬时表达并非必需，但是中断或去除三叶形结构域的缺失则不能生成功能性蛋白。 

此外，如表6所示，对于IGF-11信号肽，通过合适地定位异源信号肽可以提高GAA的分泌。将IGF-II信号肽定位于GAA的残基56或70使得GAA的分泌比天然GAA的分泌增加了3倍，而将IGF-II信号肽定位于位点29却没有增加分泌。这可能是因为推定的邻近于GAA信号肽的跨膜结构域的保留。 

表6改变GAA信号肽位置影响了GAA分泌。 

	瞬时GAA活性(nmol/hr-mL)
			质粒	试验1	试验2
pCEP-GAA	121	111
			pCEP-SS-GAAΔ1-28	NA	89
pCEP-SS-GAAΔ1-55	402	NA
			pCEP-SS-GAAΔ1-69	325	NA

但是，用异源性信号肽对天然的GAA信号肽和跨膜结构域的取代降低了与蛋白相关的甘露糖-6-磷酸依赖性的细胞摄取的水平(图4)。在美国专利申请Nos.20040005309和20040006008中描述了摄取试验，在此通过引用将其内容并入本申请。如图4所示，Pompe成纤维细胞所摄取的pCEP-SS-GAAΔ1-69量是野生型pCEP-GAA量的1/3。 

相反地，如图5所示，通过比较对pCEP-SS-GAAΔ1-69和对具有GILT标记的构建体pCEP-SS-GILTΔ2-7-GAAΔ1-69的摄取的比较，显而易见的是GILT标记促进了IGF-II所竞争的特异性摄取。因此，肽标记在位点70上的取代不仅使得有效地表达融合蛋白和GAA活性，还提供了被正确折叠并可接近的肽标记，使得被受体介导地摄取到靶细胞内。

实施例5：具有GILT1-87标记及变体的构建体 

为了增加N末端的GLIT标记的正确折叠的可能性，生成了跨越IGF残基1-87的更长形式的GILT标记。附加的IGF-II序列仍应当能够结合受体，并且也为标记核心提供了更为天然的折叠环境。GILT1-87标记与GAA的位点56及70融合，分别形成了GILT1-87-GAA56-952和GILT1-87-GAA70-952。下面显示了GILT1-87-GAA56-952的DNA和氨基酸序列。 

GILT1-87-GAA56-952的DNA序列(SEQ ID NO：30)： 

ggtaccACACCAATGGGAATCCCAATGGGGAAGTCGATGCTGGTGCTTCTCACCTTCTT 

GGCCTTCGCCTCGTGCTGCATTGCTGCTTACCGCCCCAGTGAGACCCTGTGCGGCGG 

GGAGCTGGTGGACACCCTCCAGTTCGTCTGTGGGGACCGCGGCTTCTACTTCAGCA 

GGCCCGCAAGCCGTGTGAGCCGTCGCAGCCGTGGCATCGTTGAGGAGTGCTGTTTC 

CGCAGCTGTGACCTGGCCCTCCTGGAGACGTACTGTGCTACCCCCGCCAAGTCCGA 

GAGGGACGTGTCGACCCCTCCGACCGTGCTTCCGGACAACTTCCCCAGATACCCCG 

TGGGCggcgcgccgCACCAGCAGGGAGCCAGCAGACCAGGGCCCCGGGATGCCCAGGC 

ACACCCCGGCCGTCCCAGAGCAGTGCCCACACAGTGCGACGTCCCCCCCAACAGCC 

GCTTCGATTGCGCCCCTGACAAGGCCATCACCCAGGAACAGTGCGAGGCCCGCGGC 

TGCTGCTACATCCCTGCAAAGCAGGGGCTGCAGGGAGCCCAGATGGGGCAGCCCTG 

GTGCTTCTTCCCACCCAGCTACCCCAGCTACAAGCTGGAGAACCTGAGCTCCTCTGA 

AATGGGCTACACGGCCACCCTGACCCGTACCACCCCCACCTTCTTCCCCAAGGACAT 

CCTGACCCTGCGGCTGGACGTGATGATGGAGACTGAGAACCGCCTCCACTTCACGA 

TCAAAGATCCAGCTAACAGGCGCTACGAGGTGCCCTTGGAGACCCCGCGTGTCCAC 

AGCCGGGCACCGTCCCCACTCTACAGCGTGGAGTTCTCtGAGGAGCCCTTCGGGGTG 

ATCGTGCACCGGCAGCTGGACGGCCGCGTGCTGCTGAACACGACGGTGGCGCCCCT 

GTTCTTTGCGGACCAGTTCCTTCAGCTGTCCACCTCGCTGCCCTCGCAGTATATCAC 

AGGCCTCGCCGAGCACCTCAGTCCCCTGATGCTCAGCACCAGCTGGACCAGGATCA 

CCCTGTGGAACCGGGACCTTGCGCCCACGCCCGGTGCGAACCTCTACGGGTCTCAC 

CCTTTCTACCTGGCGCTGGAGGACGGCGGGTCGGCACACGGGGTGTTCCTGCTAAA 

CAGCAATGCCATGGATGTGGTCCTGCAGCCGAGCCCTGCCCTTAGCTGGAGGTCGA 

CAGGTGGGATCCTGGATGTCTACATCTTCCTGGGCCCAGAGCCCAAGAGCGTGGTG 

CAGCAGTACCTGGACGTTGTGGGATACCCGTTCATGCCGCCATACTGGGGCCTGGG 

CTTCCACCTGTGCCGCTGGGGCTACTCCTCCACCGCTATCACCCGCCAGGTGGTGGA 

GAACATGACCAGGGCCCACTTCCCCCTGGACGTCCAATGGAACGACCTGGACTACA 

TGGACTCCCGGAGGGACTTCACGTTCAACAAGGATGGCTTCCGGGACTTCCCGGCC 

ATGGTGCAGGAGCTGCACCAGGGCGGCCGGCGCTACATGATGATCGTGGATCCTGC 

CATCAGCAGCTCGGGCCCTGCCGGGAGCTACAGGCCCTACGACGAGGGTCTGCGGA 

GGGGGGTTTTCATCACCAACGAGACCGGCCAGCCGCTGATTGGGAAGGTATGGCCC 

GGGTCCACTGCCTTCCCCGACTTCACCAACCCCACAGCCCTGGCCTGGTGGGAGGA 

CATGGTGGCTGAGTTCCATGACCAGGTGCCCTTCGACGGCATGTGGATTGACATGA 

ACGAGCCTTCCAACTTCATCAGGGGCTCTGAGGACGGCTGCCCCAACAATGAGCTG 

GAGAACCCACCCTACGTGCCTTGGGGTGGTTGGGGGGACCCTCCAGGCGGCAACCAT 

CTGTGCCTCCAGCCACCAGTTTCTCTCCACACACTACAACCTGCACAACCTCTACGG 

CCTGACCGAAGCCATCGCCTCCCACAGGGCGCTGGTGAAGGCTCGGGGGACACGCC 

CATTTGTGATCTCCCGCTCGACCTTTGCTGGCCACGGCCGATACGCCGGCCACTGGA 

CGGGGGACGTGTGGAGCTCCTGGGAGCAGCTCGCCTCCTCCGTGCCAGAAATCCTG 

CAGTTTAACCTGCTGGGGGTGCCTCTGGTCGGGGCCGACGTCTGCGGCTTCCTGGGC 

AACACCTCAGAGGAGCTGTGTGTGCGCTGGACCCAGCTGGGGGCCTTCTACCCCTT 

CATGCGGAACCACAACAGCCTGCTCAGTCTGCCCCAGGAGCCGTACAGCTTCAGCG 

AGCCGGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTCACCCTGCGCTACGCACTCCTCCCC 

CACCTCTACACGCTGTTCCACCAGGCCCACGTCGCGGGGGAGACCGTGGCCCGGCC 

CCTCTTCCTGGAGTTCCCCAAGGACTCTAGCACCTGGACTGTGGACCACCAGCTCCT 

GTGGGGGGAGGCCCTGCTCATCACCCCAGTGCTCCAGGCCGGGAAGGCCGAAGTGA 

CTGGCTACTTCCCCTTGGGCACATGGTACGACCTGCAGACGGTGCCAATAGAGGCC 

CTTGGCAGCCTCCCACCCCCACCTGCAGCTCCCCGTGAGCCAGCCATCCACAGCGA 

GGGGCAGTGGGTGACGCTGCCGGCCCCCCTGGACACCATCAACGTCCACCTCCGGG 

CTGGGTACATCATCCCCCTGCAGGGCCCTGGCCTCACAACCACAGAGTCCCGCCAG 

CAGCCCATGGCCCTGGCTGTGGCCCTGACCAAGGGTGGAGAGGCCCGAGGGGAGCT 

GTTCTGGGACGATGGAGAGAGCCTGGAAGTGCTGGAGCGAGGGGCCTACACACAG 

GTCATCTTCCTGGCCAGGAATAACACGATCGTGAATGAGCTGGTACGTGTGACCAG 

TGAGGGAGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTCCTGGGCGTGGCCACGGCGC 

CCCAGCAGGTCCTCTCCAACGGTGTCCCTGTCTCCAACTTCACCTACAGCCCCGACA 

CCAAGGTCCTGGACATCTGTGTCTCGCTGTTGATGGGAGAGCAGTTTCTCGTCAGCT 

GGTGTTAGtctaga 

GILT1-87-GAA56-952的氨基酸序列(SEQ ID NO：31)： 

MGIPMGKSMLVLLTFLAFASCCLAAYRPSETLCGGELVDTLQFVCGDRGFYFSRPASRV 

SRRSRGIVEECCFRSCDLALLETYCATPAKSERDVSTPPTVLPDNFPRYPVGGAPHQQGA 

SRPGPRDAQAHPGRPRAVPTQCDVPPNSRFDCAPDKAITQEQCEARGCCYIPAKQGLQG 

AQMGQPWCFFPPSYPSYKLENLSSSEMGYTATLTRTTPTFFPKDILTLRLDVMMETENR 

LHFTIKDPANRRYEVPLETPRVHSRAPSPLYSVEFSEEPFGVIVHRQLDGRVLLNTTVAP 

LFFADQFLQLSTSLPSQYITGLAEHLSPLMLSTSWTRTTLWNRDLAPTPGANLYGSHPFY 

LALEDGGSAHGVFLLNSNAMDVVLQPSPALSWRSTGGILDVYIFLGPEPKSVVQQYLD 

VVGYPFMPPYWGLGFHLCRWGYSSTAITRQVVENMTRAHFPLDVQWNDLDYMDSRR 

DFTFNKDGFRDFPAMVQELHQGGRRYMMIVDPAISSSGPAGSYRPYDEGLRRGVFITNE 

TGQPLIGKVWPGSTAFPDFTNPTALAWWEDMVAEFHDQVPFDGMWIDMNEPSNFIRGS 

EDGCPNNELENPPYVPGVVGGTLQAATICASSHQFLSTHYNLHNLYGLTEAIASHRALV 

KARGTRPFVISRSTFAGHGRYAGHWTGDVWSSWEQLASSVPEILQFNLLGVPLVGADV 

CGFLGNTSEELCVRWTQLGAFYPFMRNHNSLLSLPQEPYSFSEPAQQAMRKALTLRYA 

LLPHLYTLFHQAHVAGETVARPLFLEFPKDSSTWTVDHQLLWGEALLITPVLQAGKAE 

VTGYFPLGTWYDLQTVPIEALGSLPPPPAAPREPAIHSEGQWVTLPAPLDTINVHLRAGY 

IIPLQGPGLTTTESRQQPMALAVALTKGGEARGELFWDDGESLEVLERGAYTQVIFLAR 

NNTIVNELVRVTSEGAGLQLQKVTVLGVATAPQQVLSNGVPVSNFTYSPDTKVLDICVS 

LLMGEQFLVSWC. 

GILT1-87-GAA70-952的DNA序列(SEQ ID NO：32)： 

ggtaccACACCAATGGGAATCCCAATGGGGAAGTCGATGCTGGTGCTTCTCACCTTCTT 

GGCCTTCGCCTCGTGCTGCATTGCTGCTTACCGCCCCAGTGAGACCCTGTGCGGCGG 

GGAGCTGGTGGACACCCTCCAGTTCGTCTGTGGGGACCGCGGCTTCTACTTCAGCA 

GGCCCGCAAGCCGTGTGAGCCGTCGCAGCCGTGGCATCGTTGAGGAGTGCTGTTTC 

CGCAGCTGTGACCTGGCCCTCCTGGAGACGTACTGTGCTACCCCCGCCAAGTCCGA 

GAGGGACGTGTCGACCCCTCCGACCGTGCTTCCGGACAACTTCCCCAGATACCCCG 

TGGGCggcgcgccgGCACACCCCGGCCGTCCCAGAGCAGTGCCCACACAGTGCGACGTC 

CCCCCCAACAGCCGCTTCGATTGCGCCCCTGACAAGGCCATCACCCAGGAACAGTG 

CGAGGCCCGCGGCTGCTGCTACATCCCTGCAAAGCAGGGGCTGCAGGGAGCCCAGA 

TGGGGCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCACCCAGCTACCCCAGCTACAAGCTGGAGAAC 

CTGAGCTCCTCTGAAATGGGCTACACGGCCACCCTGACCCGTACCACCCCCACCTTC 

TTCCCCAAGGACATCCTGACCCTGCGGCTGGACGTGATGATGGAGACTGAGAACCG 

CCTCCACTTCACGATCAAAGATCCAGCTAACAGGCGCTACGAGGTGCCCTTGGAGA 

CCCCGCGTGTCCACAGCCGGGCACCGTCCCCACTCTACAGCGTGGAGTTCTCtGAGG 

AGCCCTTCGGGGTGATCGTGCACCGGCAGCTGGACGGCCGCGTGCTGCTGAACACG 

ACGGTGGCGCCCCTGTTCTTTGCGGACCAGTTTCCTTCAGCTGTCCACCTCGCTGCCC 

TCGCAGTATATCACAGGCCTCGCCGAGCACCTCAGTCCCCTGATGCTCAGCACCAG 

CTGGACCAGGATCACCCTGTGGAACCGGGACCTTGCGCCCACGCCCGGTGCGAACC 

TCTACGGGTCTCACCCTTTCTACCTGGCGCTGGAGGACGGCGGGTCGGCACACGGG 

GTGTTCCTGCTAAACAGCAATGCCATGGATGTGGTCCTGCAGCCGAGCCCTGCCCTT 

AGCTGGAGGTCGACAGGTGGGATCCTGGATGTCTACATCTTCCTGGGCCCAGAGCC 

CAAGAGCGTGGTGCAGCAGTACCTGGACGTTGTGGGATACCCGTTCATGCCGCCAT 

ACTGGGGCCTGGGCTTCCACCTGTGCCGCTGGGGCTACTCCTCCACCGCTATCACCC 

GCCAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCCCACTTCCCCCTGGACGTCCAATGGAAC 

GACCTGGACTACATGGACTCCCGGAGGGACTTCACGTTCAACAAGGATGGCTTCCG 

GGACTTCCCGGCCATGGTGCAGGAGCTGCACCAGGGCGGCCGGCGCTACATGATGA 

TC GTGGATCCTGCCATCAGCAGCTCGGGCCCTGCCGGGAGCTACAGGCCCTACGAC 

GAGGGTCTGCGGAGGGGGGTTTTCATCACCAACGAGACCGGCCAGCCGCTGATTGG 

GAAGGTATGGCCCGGGTCCACTGCCTTCCCCGACTTCACCAACCCCACAGCCCTGG 

CCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTCCATGACCAGGTGCCCTTCGACGGCATG 

TGGATTGACATGAACGAGCCTTCCAACTTCATCAGGGGCTCTGAGGACGGCTGCCC     

CAACAATGAGCTGGAGAACCCACCCTACGTGCCTGGGGTGGTTGGGGGGACCCTCC 

AGGCGGCAACCATCTGTGCCTCCAGCCACCAGTTTCTCTCCACACACTACAACCTGC 

ACAACCTCTACGGCCTGACCGAAGCCATCGCCTCCCACAGGGCGCTGGTGAAGGCT 

CGGGGGACACGCCCATTTGTGATCTCCCGCTCGACCTTTGCTGGCCACGGCCGATAC 

GCCGG CCACTGGACGGGGGACGTGTGGAGCTCCTGGGAGCAGCTCGCCTCCTCCGT 

GCCAGAAATCCTGCAGTTTAACCTGCTGGGGGTGCCTCTGGTCGGGGCCGACGTCT 

GCGGCTTCCTGGGCAACACCTCAGAGGAGCTGTGTGTGCGCTGGACCCAGCTGGGG 

GCCTTCTACCCCTTCATGCGGAACCACAACAGCCTGCTCAGTCTGCCCCAGGAGCCG 

TACAGCTTCAGCGAGCCGGCCCAGCAGGCCATGAGGAAGGCCCTCACCCTGCGCTA 

CGCACTCCTCCCCCACCTCTACACGCTGTTCCACCAGGCCCACGTCGCGGGGGAGA 

CCGTGGCCCGGCCCCTCTTCCTGGAGTTCCCCAAGGACTCTAGCACCTGGACTGTGG 

ACCACCAGCTCCTGTGGGGGGAGGCCCTGCTCATCACCCCAGTGCTCCAGGCCGGG 

AAGGCCGAAGTGACTGGCTACTTCCCCTTGGGCACATGGTACGACCTGCAGACGGT 

GCCAATAGAGGCCCTTGGCAGCCTCCCACCCCCACCTGCAGCTCCCCGTGAGCCAG 

CCATCCACAGCGAGGGGCAGTGGGTGACGCTGCCGGCCCCCCTGGACACCATCAAC 

GTCCACCTCCGGGCTGGGTACATCATCCCCCTGCAGGGCCCTGGCCTCACAACCAC 

AGAGTCCCGCCAGCAGCCCATGGCCCTGGCTGTGGCCCTGACCAAGGGTGGAGAGG 

CCCGAGGGGAGCTGTTCTGGGACGATGGAGAGAGCCTGGAAGTGCTGGAGCGAGG 

GGCCTACACACAGGTCATCTTCCTGGCCAGGAATAACACGATCGTGAATGAGCTGG 

TACGTGTGACCAGTGAGGGAGCTGGCCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTCCTGGGC 

GTGGCCACGGCGCCCCAGCAGGTCCTCTCCAACGGTGTCCCTGTCTCCAACTTCACC 

TACAGCCCCGACACCAAGGTCCTGGACATCTGTGTCTCGCTGTTGATGGGAGAGCA 

GTTTCTCGTCAGCTGGTGTTAGtctaga 

GILT1-87-GAA70-952的氨基酸序列(SEQ ID NO：33)： 

MGIPMGKSMLVLLTFLAFASCCIAAYRPSETLCGGELVDTLQFVCGDRGFYFSRPASRV 

SRRSRGIVEECCFRSCDLALLETYCATPAKSERDVSTPPTVLPDNFPRYPVGGAPAHPGR     

PRAVPTQCDVPPNSRFDCAPDKAITQEQCEARGCCYIPAKQGLQGAQMGQPWCFFPPS 

YPSYKLENLSSSEMGYTATLTRTTPTFFPKDILTLRLDVMMETENRLHFTIKDPANRRYE 

VPLETPRVHSRAPSPLYSVEFSEEPFGVIVHRQLDGRVLLNTTVAPLFFADQFLQLSTSLP 

SQYITGLAEHLSPLMLSTSWTRITLWNRDLAPTPGANLYGSHPFYLALEDGGSAHGVFL 

LNSNAMDVVLQPSPALSWRSTGGILDVYIFLGPEPKSVVQQYLDVVGYPFMPPYWGLG 

FHLCRWGYSSTAITRQVVENMTRAHFPLDVQWNDLDYMDSRRDFTFNKDGFRDFPAM 

VQELHQGGRRYMMIVDPAISSSGPAGSYRPYDEGLRRGVFITNETGQPLIGKVWPGSTA 

FPDFTNPTALAWWEDMVAEFHDQVPFDGMWIDMNEPSNFIRGSEDGCPNELENPPYV 

PGVVGGTLQAATICASSHQFLSTHYNLHNLYGLTEAIASHRALVKARGTRPFVISRSTFA 

GHGRYAGHWTGDVWSSWEQLASSVPEILQFNLLGVPLVGADVCGFLGNTSEELCVRW 

TQLGAFYPFMRNHNSLLSLPQEPYSFSEPAQQAMRKALTLRYALLPHLYTLFHQAHVA 

GETVARPLFLEFPKDSSTWTVDHQLLWGEALLITPVLQAGKAEVTGYFPLGTWYDLQT 

VPIEALGSLPPPPAAPREPAIHSEGQWVTLFAPLDTINVHLRAGYIIPLQGPGLTTTESRQ 

QPMALAVALTKGGEARGELFWDDGESLEVLERGAYTQVIFLARNNTIVNELVRVTSEG 

AGLQLQKVTVLGVATAPQQVLSNGVPVSNFTYSPDTKVLDICVSLLMGEQFLVSWC. 

将5’Asp718位点克隆到pCEP4的Asp718位点内，用Kelnow blunt 

3’Xba位点并将其克隆到pCEP4的HindIII位点内，分别形成了pCEP-GILT1-87-GAA56-952和pCEP-GILT1-87-GAA70-952。构建体也含有Gly-Ala-Pro接头序列(AscI位点)。这些构建体表达具有GAA酶活性的蛋白。 

另外，往GLIT1-87中引入修饰R68A以去除GILT标记内潜在的蛋白裂解位点(GLIT1-87-R68A)。下面显示了GLIT1-87-R68A的DNA(SEQID NO：34)和氨基酸(SEQ ID NO：35)序列(给突变序列加上了下划线)。GLIT1-87-R68A的DNA序列(SEQ ID NO：34)： 

GGTACCACACCAATGGGAATCCCAATGGGGAAGTCGATGCTGGTGCTTCTCACCTT 

CTTGGCCTTCGCCTCGTGCTGCATTGCTGCTTACCGCCCCAGTGAGACCCTGTGCGG 

CGGGGAGCTGGTGGACACCCTCCAGTTCGTCTGTGGGGACCGCGGCTTCTACTTCA 

GCAGGCCCGCAAGCCGTGTGAGCCGTCGCAGCCGTGGCATCGTTGAGGAGTGCTGT 

TTCCGCAGCTGTGACCTGGCCCTCCTGGAGACGTACTGTGCTACCCCCGCCAAGTCC 

GAGGCGGACGTGTCGACCCCTCCGACCGTGCTTCCGGACAACTTCCCCAGATACCC 

CGTGGGCGGCGCGCCG 

GLIT1-87-R68A的氨基酸序列(SEQ ID NO：35)： 

MGIPMGKSMLVLLTFLAFASCCIAAYRPSETLCGGELVDTLQFVCGDRGFYFSRPASRV 

SRRSRGIVEECCFRSCDLALLETYCATPAKSEADVSTPPTVLPDNFPRYPVGGAP 

该标记与GAA位点56和70的融合生成了pCEP-GILT1-87-R68A-GAA56-952和pCEP-GILT1-87-R68A-GAA70-952。这些构建体表达具有GAA酶活性的蛋白。 

另外，也引入点突变取代GILT1-87标记内的三个Ser/Thr残基，以 去除糖基化位点(ΔGS)(GILT-1-87-ΔGS)。下面显示了GLIT1-87-ΔGS的DNA(SEQ ID NO：36)和氨基酸(SEQ ID NO：37)序列(给突变序列加上了下划线)。 

GLIT1-87-ΔGS的DNA序列(SEQ ID NO：36)： 

GGTACCACACCAATGGGAATCCCAATGGGGAAGTCGATGCTGGTGCTTCTCACCTT 

CTTGGCCTTCGCCTCGTGCTGCATTGCTGCTTACCGCCCCAGTGAGACCCTGTGCGG 

CGGGGAGCTGGTGGACACCCTCCAGTTCGTCTGTGGGGACCGCGGCTTCTACTTCA 

GCAGGCCCGCAAGCCGTGTGAGCCGTCGCAGCCGTGGCATCGTTGAGGAGTGCTGT 

TTCCGCAGCTGTGACCTGGCCCTCCTGGAGACGTACTGTGCTACCCCCGCCAAGTCC 

GAGAGGGACGTGGCGGCCCCTCCGGCCGTGCTTCCGGACAACTTCCCCAGATACCC 

CGTGGGCGGCGCGCCG  

GLIT1-87-ΔGS的氨基酸序列(SEQ ID NO：37)： 

MGIPMGKSMLVLLTELAFASCCIAAYRPSETLCGGELVDTLQFVCGDRGFYFSRPASRV 

SRRSRGIVEECCFRSCDLALLETYCATPAKSERDVAAPPAVLPDNFPRYPVGGAP 

该修饰的GLIT标记与GAA的位点70融合，生成了pCEP-GILT1-87-ΔGS-GAA70-952。该构建体表达具有GAA酶活性的蛋白。 

另外，生成了整合有R68A和ΔGS修饰的GLIT标记 

(GILT1-87-R68A-ΔGS)。下面显示了GILT1-87-R68A-ΔGS的DNA(SEQID NO：38)和氨基酸(SEQ ID NO：39)序列(给突变序列加上了下划线)。GILT1-87-R68A-ΔGS的DNA序列(SEQ ID NO：38)： 

GGTACCACACCAATGGGAATCCCAATGGGGAAGTCGATGCTGGTGCTTCTCACCTT 

CTTGGCCTTCGCCTCGTGCTGCATTGCTGCTTACCGCCCCAGTGAGACCCTGTGCGG 

CGGGGAGCTGGTGGACACCCTCCAGTTCGTCTGTGGGGACCGCGGCTTCTACTTCA 

GCAGGCCCGCAAGCCGTGTGAGCCGTCGCAGCCGTGGCATCGTTGAGGAGTGCTGT 

TTCCGCAGCTGTGACCTGGCCCTCCTGGAGACGTACTGTGCTACCCCCGCCAAGTCC 

GAGGCGGACGTGGCGGCCCCTCCGGCCGTGCTTCCGGACAACTTCCCCAGATACCC 

CGTGGGCGGCGGCCG 

GILT1-87-R68A-ΔGS的氨基酸序列(SEQ ID NO：39)： 

MGIPMGKSMLVLLTFLAFASCCIAAYRPSETLCGGELVDTLQFVCGDRGFYFSRPASRV 

SRRSRGIVEECCFRSCDLALLETYCATPAKSEADVAAPPAVLPDNFPRYPVGGAP 

用修饰的GILT1-87-R68A-ΔGS生成构建体pCEP-GILT1-87-R68AΔGS-GAA56-952和pCEP-GILT1-87-R68AΔGS-GAA70-952。两种构建体都表达具有GAA酶活性的蛋白。 

对上面的具有与GAA位点56融合的GLIT标记的蛋白进行western印迹。如图6所示，前体蛋白是全长的蛋白并含有IGF-II标记。ΔGS突变显示生成了具有稍快迁移率的蛋白，与缺少碳水化合物部分相一致。实施例6：其他的具有更长的及修饰GILT标记的构建体 

为了给IGF-II标记提供天然的折叠环境，用包含第8-156位氨基酸的IGF-II前体形式作为与GAA位点791融合的内在标记。另外，为了促进IGF-II标记内的位点87的下游部分的裂解，在IGF-II序列上形成突变E67A和D69S以便引入P2/P1蛋白裂解处理位点。所形成的构建体pCEP-GAA-791IGF2-P2/P1生成具有GAA酶活性的蛋白。下面显示了pCEP-GAA-791IGF2-P2/P1的DNA和氨基酸序列。 

pCEP-GAA-791IGF2-P2/P1的DNA序列(SEQ ID NO：40)： 

ATGGGAGTGAGGCACCCGCCCTGCTCCCACCGGCTCCTGGCCGTCTGCGCCCTCGTG 

TCCTTGGCAACCGCTGCACTCCTGGGGCACATCCTACTCCATGATTTCCTGCTGGTT 

CCCCGAGAGCTGAGTGGCTCCTCCCCAGTCCTGGAGGAGACTCACCCAGCTCACCA 

GCAGGGAGCCAGCAGACCAGGGCCCCGGGATGCCCAGGCACACCCCGGCCGTCCC 

AGAGCAGTGCCCACACAGTGCGACGTCCCCCCCAACAGCCGCTTCGATTGCGCCCC 

TGACAAGGCCATCACCCAGGAACAGTGCGAGGCCCGCGGCTGCTGCTACATCCCTG 

CAAAGCAGGGGCTGCAGGGAGCCCAGATGGGGCAGCCCTGGTGCTTCTTCCCACCC 

AGCTACCCCAGCTACAAGCTGGAGAACCTGAGCTCCTCTGAAATGGGCTACACGGC 

CACCCTGACCCGTACCACCCCCACCTTCTTCCCCAAGGACATCCTGACCCTGCGGCT 

GGACGTGATGATGGAGACTGAGAACCGCCTCCACTTCACGATCAAAGATCCAGCTA 

ACAGGCGCTACGAGGTGCCCTTGGAGACCCCGCGTGTCCACAGCCGGGCACCGTCC 

CCACTCTACAGCGTGGAGTTCTCtGAGGAGCCCTTCGGGGTGATCGTGCACCGGCAG 

CTGGACGGCCGCGTGCTGCTGAACACGACGGTGGCGCCCCTGTTCTTTGCGGACCA 

GTTCCTTCAGCTGTCCACCTCGCTGCCCTCGCAGTATATCACAGGCCTCGCCGAGCA 

CCTCAGTCCCCTGATGCTCAGCACCAGCTGGACCAGGATCACCCTGTGGAACCGGG 

ACCTTGCGCCCACGCCCGGTGCGAACCTCTACGGGTCTCACCCTTTCTACCTGGCGC 

TGGAGGACGGCGGGTCGGCACACGGGGTGTTCCTGCTAAACAGCAATGCCATGGAT     

GTGGTCCTGCAGCCGAGCCCTGCCCTTAGCTGGAGGTCGACAGGTGGGATCCTGGA 

TGTCTACATCTTCCTGGGCCCAGAGCCCAAGAGCGTGGTGCAGCAGTACCTGGACG 

TTGTGGGATACCCGTTCATGCCGCCATACTGGGGCCTGGGCTTCCACCTGTGCCGCT 

GGGGCTACTCCTCCACCGCTATCACCCGCCAGGTGGTGGAGAACATGACCAGGGCC 

CACTTCCCCCTGGACGTCCAATGGAACGACCTGGACTACATGGACTCCCGGAGGGA 

CTTCACGTTCAACAAGGATGGCTTCCGGGACTTCCCGGCCATGGTGCAGGAGCTGC 

ACCAGGGCGGCCGGCGCTACATGATGATCGTGGATCCTGCCATCAGCAGCTCGGGC     

CCTGCCGGGAGCTACAGGCCCTACGACGAGGGTCTGCGGAGGGGGGTTTTCATCAC 

CAACGAGACCGGCCAGCCGCTGATTGGGAAGGTATGGCCCGGGTCCACTGCCTTCC 

CCGACTTCACCAACCCCACAGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCTGAGTTC 

CATGACCAGGTGCCCTTCGACGGCATGTGGATTGACATGAACGAGCCTTCCAACTT 

CATCAGGGGCTCTGAGGACGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCACCCTACG 

TGCCTGGGGTGGTTGGGGGGACCCTCCAGGCGGCAACCATCTGTGCCTCCAGCCAC 

CAGTTTCTCTCCACACACTACAACCTGCACAACCTCTACGGCCTGACCGAAGCCATC 

GCCTCCCACAGGGCGCTGGTGAAGGCTCGGGGGACACGCCCATTTGTGATCTCCCG 

CTCGACCTTTGCTGGCCACGGCCGATACGCCGGCCACTGGACGGGGGACGTGTGGA 

GCTCCTGGGAGCAGCTCGCCTCCTCCGTGCCAGAAATCCTGCAGTTTAACCTGCTGG 

GGGTGCCTCTGGTCGGGGCCGACGTCTGCGGCTTCCTGGGCAACACCTCAGAGGAG 

CTGTGTGTGCGCTGGACCCAGCTGGGGGCCTTCTACCCCTTCATGCGGAACCACAAC 

AGCCTGCTCAGTCTGCCCCAGGAGCCGTACAGCTTCAGCGAGCCGGCCCAGCAGGC 

CATGAGGAAGGCCCTCACCCTGCGCTACGCACTCCTCCCCCACCTCTACACGCTGTT 

CCACCAGGCCCACGTCGCGGGGGAGACCGTGGCCCGGCCCCTCTTCCTGGAGTTCC 

CCAAGGACTCTAGCACCTGGACTGTGGACCACCAGCTCCTGTGGGGGGAGGCCCTG 

CTCATCACCCCAGTGCTCCAGGCCGGGAAGGCCGAAGTGACTGGCTACTTCCCCTT 

GGGCACATGGTACGACCTGCAGACGGTGCCAATAGAGGCCCTTGGCAGCCTCCCAC 

CCCCACCTggcgcgccgCTGTGCGGCGGGGAGCTGGTGGACACCCTCCAGTTCGTCTGT 

GGGGACCGCGGCTTCTACTTCAGCAGGCCCGCAAGCCGTGTGAGCCGTCGCAGCCG 

TGGCATCGTTGAGGAGTGCTGTTTCCGCAGCTGTGACCTGGCCCTCCTGGAGACGTA 

CTGTGCTACCCCCGCCAAGTCCGcGAGGtcCGTGTCGACCCCTCCGACCGTGCTTCCG 

GACAACTTCCCCAGATACCCCGTGGGCAAGTTCTTCCAATATGACACCTGGAAGCA 

GTCCACCCAGCGCCTGCGCAGGGGCCTGCCTGCCCTCCTGCGTGCCCGCCGGGGTC 

ACGTGCTCGCCAAGGAGCTCGAGGCGTTCAGGGAGGCCAAACGTCACCGTCCCCTG 

ATTGCTCTACCCACCCAAGACCCCGCCCACGGGGGCGCCCCCCCAGAGATGGCCAG 

CAATCGGAAGggcgcgccgGCAGCTCCCCGTGAGCCAGCCATCCACAGCGAGGGGCAG 

TGGGTGACGCTGCCGGCCCCCCTGGACACCATCAACGTCCACCTCCGGGCTGGGTA 

CATCATCCCCCTGCAGGGCCCTGGCCTCACAACCACAGAGTCCCGCCAGCAGCCCA 

TGGCCCTGGCTGTGGCCCTGACCAAGGGTGGAGAGGCCCGAGGGGAGCTGTTCTGG 

GACGATGGAGAGAGCCTGGAAGTGCTGGAGCGAGGGGCCTACACACAGGTCATCT 

TCCTGGCCAGGAATAACACGATCGTGAATGAGCTGGTACGTGTGACCAGTGAGGGA 

GCTGGCCTGCAGCTGCAGAAGGTGACTGTCCTGGGCGTGGCCACGGCGCCCCAGCA 

GGTCCTCTCCAACGGTGTCCCTGTCTCCAACTTCACCTACAGCCCCGACACCAAGGT 

CCTGGACATCTGTGTCTCGCTGTTGATGGGAGAGCAGTTTCTCGTCAGCTGGTGTTA 

G 

pCEP-GAA-791IGF2-P2/P1的氨基酸序列(SEQ ID NO：41)： 

MGVRHPPCSHRLLAVCALVSLATAALLGHILLHDFLLVPRELSGSSPVLEETHPAHQQG 

ASRPGPRDAQAHPGRPRAVPTQCDVPPNSRFDCAPDKAITQEQCEARGCCYIPAKQGLQ 

GAQMGQPWCFFPPSYPSYKLENLSSSEMGYTATLTRTTPTFFPKDILTLRLDVMMETEN 

RLHFTIKDPANRRYEVPLETPRVHSRAPSPLYSVEFSEEPFGVIVHRQLDGRVLLNTTVA 

PLFFADQFLQLSTSLPSQYITGLAEHLSPLMLSTSWTRITLWNRDLAPTPGANLYGSHPF 

YLALEDGGSAHGVFLLNSNAMDVVLQPSPALSWRSTGGILDVYIFLGPEPKSVVQQYL 

DVVGYPFMPPYWGLGFHLCRWGYSSTAITRQVVENMTRAHFPLDVQWNDLDYMDSR 

RDFTFNKDGFRDFPAMVQELHQGGRRYMMIVDPAISSSGPAGSYRPYDEGLRRGVFITN 

ETGQPLIGKVWPGSTAFPDFTNPTALAWWEDMVAEFHDQVPFDGMWIDMNEPSNFIR 

GSEDGCPNNELENPPYVPGVVGGTLQAATICASSHQFLSTHYNLHNLYGLTEALASHRA 

LVKARGTRPFVISRSTFAGHGRYAGHWTGDVWSSWEQLASSVPEILQFNLLGVPLVGA 

DVCGFLGNTSEELCVRWTQLGAFYPFMRNSLLSLPQEPYSFSEPAQQAMRKALTLR 

YALLPHLYTLFHQAHVAGETVARPLFLEFPKDSSTWTVDHQLLWGEALLTTPVLQAGK 

AEVTGYFPLGTWYDLQTVPIEALGSLPPPPGAPLCGGELVDTLQFVCGDRGFYFSRPAS 

RVSRRSRGIVEECCFRSCDLALLETYCATPAKSARSVSTPPTVLPDNFPRYPVGKFFQYD 

TWKQSTQRLRRGLPALLRARRGHVLAKELEAFREAKRHRPLIALPTQDPAHGGAPPEM 

ASNRKGAPAAPREPAIHSEGQWVTLPAPLDTINVHLRAGYIIPLQGPGLTTTESRQQPMA 

LAVALTKGGEARGELFWDDGESLEVLERGAYTQVIFLARNNTIVNELVRVTSEGAGLQ 

LQKVTVLGVATAPQQVLSNGVPVSNFTYSPDTKVLDICVSLLMGEQFLVSWC. 

为了进一步地提高与N末端(例如位点70)融合的GILT标记的呈递和/或折叠，在N末端的GILTΔ2-7标记和GAA融合点位点70之间插入具有序列Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Pro(SEQ ID NO：3)的间隔物，生成了GILTΔ2-7-spcrl-GAA70-952。这个构建体表达具有GAA酶活性的蛋白。实施例7：具有AscI限制性酶切位点插入的GAA构建体 

根据标准生物技术制备在GAA的氨基酸残基783-791区域内包含有Gly-Ala-Pro序列(一个AscI限制性酶切位点)插入的构建体。如表7所示，AscI限制性酶切位点的插入增加了瞬时GAA酶表达水平。这个插入可能可以引起酶向高亲和力形式的转换。在裂解了783-791边界区域之后，前体GAA正常地成熟为高亲和力的GAA形式(Moreland et al.，2004)。有报道显示，在裂解之后N末端结构域和C末端结构域仍是相连的(Moreland et al.，2004)。 

表7限制性酶切位点插入增加了瞬时表达。 

 [0499]为了确定三个残基的插入是否促进了前体GAA的裂解，利用抗GAA多克隆抗体进行Western印迹分析比较野生型GAA和GAA-791Asc蛋白。如图7所示，GAA-791Asc以与野生型GAA相似的迁移率移动，说明三个残基的插入没有促进蛋白裂解。 

酶活性增加的另一种解释是在边界区内的残基插入使得构象转换为高亲和力形式，而不需裂解两个区域。利用亲和色谱法以及如在Moreland等2004中所述的通过比较GAA-791Asc和野生型GAA在Superdex200柱上的结合亲和力可以测试这一点。 

另外，联合791AscI位点插入以及位点69上的N末端的GILT标记制备构建体pCEP-GILTΔ2-7-GAA70-952-791Asc。 

实施例8：具有遗传工程化的蛋白裂解位点的内在GILT标记 

为了生成活性的内在GILT标记，设计试验，将标记放置在经标记下游的X因子限制性蛋白酶位点所遗传工程化的GAA779-796区域内。Xa因子对所表达蛋白的处理将释放出GAA的C末端部分，并且可能显露出一个暴露的和活性的GILT标记。 

因此，将具有下游X因子蛋白酶位点的GILT标记放置在GAA的位点787、779、和796内。所有三种所形成的蛋白都具有GAA酶活性。在Western分析中，如图8所示，所有三种蛋白都含有被抗IGF-II抗体所探查到的GILT标记。所有的蛋白制剂都含有具有与存在全长前体相一致的相对迁移率(Mr 120,000-140,000)的条带。所有三种蛋白制剂也都含有保留有GILT标记的更快迁移的中间条带(Mr 85,000-100,000)。在用Xa因子处理蛋白之后，去除了大多数全长条带，中间条带的迁移率稍微减低。GLIT标记仍被保留在经Xa处理过的中间条带内。 

在GAA序列内所含的GILT Xa标记促进了因子X位点下游位点上的蛋白裂解是有可能的。位点816已经被报道为GAA成熟加工的一个位点。

图8举例说明了可能的GAA的C末端加工的模型。 

实施例9：人/鼠GAA杂合体 

为了改善GILT标记的折叠，用人GAA的氨基酸位点791、796、816、881、和920上的融合点构建出了由N末端的人GAA和C末端的鼠GAA构成的嵌合蛋白。在融合点上引入了一个包括序列Gly-Ala-Pro的AscI限制性酶切位点。 

具体地，用相应的鼠GAA的C末端序列取代人GAA的C末端部分制备出嵌合的人/鼠GAA蛋白。通过在通用接头序列ggcgcgccg(SEQ IDNO：11)上融合人和鼠部分构建出DNA表达盒，所述接头序列含有唯一的AscI位点并编码序列Gly-Ala-Pro(GAP)。用下面所列的引物经PCR生成GAA杂合体的小鼠部分，其含有用于与N末端的人GAA序列融合的5’AscI位点以及用于克隆到pCEP载体的NotI位点内的3’NotI位点。 

表8人/鼠GAA杂合体 

小鼠GAA核苷酸序列(SEQ ID NO：52)： 

ATGAATATACGGAAGCCCCTCTGTTCGAACTCCGTGGTTGGGGCCTGCACCCTTATC 

TCTCTGACTACAGCGGTCATCCTGGGTCATCTCATGCTTCGGGAGTTAATGCTGCTT 

CCCCAAGACCTTCATGAGTCCTCTTCAGGACTGTGGAAGACGTACCGACCTCACCA 

CCAGGAAGGTTACAAGCCAGGGCCTCTGCACATCCAGGAGCAGACTGAACAGCCC 

AAAGAAGCACCCACACAGTGTGATGTGCCCCCCAGCAGCCGCTTTGACTGTGCCCC 

CGACAAAGGCATCTCACAGGAGCAATGCGAGGCCCGCGGCTGCTGCTATGTCCCAG 

CAGGGCAGGTGCTGAAGGAGCCGCAGATAGGGCAGCCCTGGTGTTTCTTCCCTCCC 

AGCTACCCAAGCTACCGTCTAGAGAACCTGAGCTCTACAGAGTCGGGGTACACAGC 

CACCCTGACCCGTACCAGCCCGACCTTCTTCCCAAAGGATGTGCTGACCTTACAGCT 

GGAGGTGCTGATGGAGACAGACAGCCGCCTCCACTTCAAGATCAAAGATCCTGCTA 

GTAAGCGCTACGAAGTGCCCCTGGAGACCCCACGTGTGCTGAGCCAGGCACCATCC 

CCACTTTACAGCGTGGAATTCTCAGAGGAACCCTTTGGAGTGATCGTTCGTAGGAA 

GCTTGGTGGCCGAGTGTTGCTGAACACAACCGTGGCCCCCCTGTTCTTCGCTGACCA 

GTTCCTGCAGCTGTCCACTTCCCTGCCCTCCCAGCACATCACAGGCCTGGGGGAACA 

CCTCAGCCCACTCATGCTCAGCACCGACTGGGCTCGTATCACCCTCTGGAACCGGG 

ACACACCACCCTCGCAAGGTACCAACCTCTACGGGTCACATCCTTTCTACCTGGCAC 

TGGAGGACGGTGGCTTGGCTCACGGTGTCTTCTTGCTAAACAGCAATGCCATGGAT 

GTCATCCTGCAACCCAGCCCAGCCCTAACCTGGAGGTCAACGGGCGGGATCCTGGA 

TGTGTATGTGTTCCTAGGCCCAGAGCCCAAGAGCGTTGTGCAACAATACCTGGATG 

TTGTGGGATACCCCTTCATGCCTCCATACTGGGGCCTCGGCTTCCACCTCTGCCGCT 

GGGGCTACTCCTCGACCGCCATTGTCCGCCAGGTAGTGGAGAACATGACCAGGACA 

CACTTCCCGCTGGATGTGCAATGGAATGACCTGGACTACATGGACGCCCGAAGAGA 

CTTCACCTTCAACCAGGACAGCTTTGCCGACTTCCCAGACATGGTGCGGGAGCTGC 

ACCAGGGTGGCCGGCGCTACATGATGATCGTGGACCCTGCCATCAGCAGCGCAGGC 

CCTGCTGGGAGTTACAGGCCCTACGACGAGGGTCTGCGGAGGGGTGTGTTCATCAC 

CAACGAGACTGGGCAGCCGCTGATTGGGAAGGTTTGGCCCGGAACCACCGCCTTCC 

CTGATTTCACCAACCCTGAGACCCTTGACTGGTGGCAGGACATGGTGTCTGAGTTCC 

ACGCCCAGGTGCCCTTCGATGGCATGTGGCTCGACATGAACGAACCGTCCAACTTC 

GTTAGAGGCTCTCAGCAGGGCTGCCCCAACAATGAACTGGAGAACCCCCCCTATGT 

GCCCGGGGTGGTTGGCGGGATCTTGCAGGCAGCCACCATCTGTGCCTCCAGCCACC 

AATTCCTCTCCACACACTACAACCTCCACAACCTGTACGGCCTCACTGAAGCTATCG 

CCTCCAGCAGGGCCCTGGTCAAGACTCGGGGAACACGACCCTTTGTGATCTCCCGC 

TCAACCTTCTCGGGCCACGGCCGGTACGCTGGTCACTGGACAGGGGATGTGCGGAG 

CTCTTGGGAGCATCTTGCATACTCTGTGCCAGACATCCTGCAGTTCAACCTGCTGGG 

CGTGCCCCTGGTCGGGGCGGACATCTGCGGCTTCATAGGAGACACGTCAGAAGAGC 

TGTGTGTGCGCTGGACCCAGTTGGGGGCCTTCTACCCCTTCATGCGGAACCACAATG 

ACCTGAATAGCGTGCCTCAGGAGCCGTACAGGTTCAGCGAGACGGCGCAGCAGGCC 

ATGAGGAAGGCCTTCGCCTTACGCTATGCCCTTCTGCCCTACCTGTACACTCTCTTC 

CACCGCGCCCACGTCAGAGGAGACACGGTGGCCCGGCCCCTCTTCCTGGAGTTCCC 

TGAGGATCCCAGCACCTGGTCTGTGGACCGCCAGCTCTTGTGGGGGCCGGCCCTGC 

TCATCACACCTGTGCTTGAGCCTGGGAAAACTGAAGTGACGGGCTACTTCCCCAAG 

GGCACGTGGTACAACATGCAGGTGGTGTCAGTGGATTCCCTCGGTACTCTCCCTTCT 

CCATCATCGGCTTCATCCTTCAGATCTGCTGTCCAGAGCAAGGGGCAGTGGCTGAC 

ACTGGAAGCCCCACTGGATACCATCAACGTGCACCTGAGGGAGGGGTACATCATAC 

CGCTGCAGGGTCCCAGCCTCACAACCACGGAGTCCCGAAAGCAGCCCATGGCTCTG 

GCTGTGGCATTAACAGCAAGCGGCGAGGCCGATGGGGAGCTGTTCTGGGACGACG 

GGGAGAGCCTTGCAGTTCTGGAGCGTGGGGCCTACACACTGGTCACCTTCTCAGCC 

AAGAACAATACCATTGTGAACAAGTTAGTGCGTGTGACCAAGGAGGGAGCTGAGCT 

ACAACTGAGGGAGGTGACCGT 

CTTGGGAGTGGCCACAGCTCCTACCCAGGTCCTTTCCAACGGCATCCCTGTCTCCAA 

TTTCACCTACAGCCCTGACAACAAGAGCCTGGCCATCCCTGTCTCACTGCTGATGGG 

AGAGCTGTTTCAAATCAGCTGGTCCTAG 

小鼠GAA氨基酸序列(SEQ ID NO：53)： 

MNIRKPLCSNSVVGACTLISLTTAVILGHLMLRELMLLPQDLHESSSGLWKTYRPHHQE 

GYKPGPLHIQEQTEQPKEAPTQCDVPPSSRFDCAPDKGISQEQCEARGCCYVPAGQVLK 

EPQIGQPWCFFPPSYPSYRLENLSSTESGYTATLTRTSPTFFPKDVLTLQLEVLMETDSRL 

HFKIKDPASKRYEVPLETPRVLSQAPSPLYSVEFSEEPFGVIVRRKLGGRVLLNTTVAPLF 

FADQFLQLSTSLPSQHITGLGEHLSPLMLSTDWARITLWNRDTPPSQGTNLYGSHPFYLA 

LEDGGLAHGVFLLNSNAMDVILQPSPALTWRSTGGILDVYVFLGPEPKSVVQQYLDVV 

GYPFMPPYWGLGFHLCRWGYSSTAIVRQVVENMTRTHFPLDVQWNDLDYMDARRDF 

TFNQDSFADFPDMVRELHQGGRRYMMIDPAISSAGPAGSYRPYDEGLRRGVFITNETG 

QPLIGKVWPGTTAFPDFTNPETLDWWQDMVSEFHAQVPFDGMWIDMNEPSNFVRGSQ 

QGCPNNELENPPYVPGVVGGILQAATICASSHQFLSTHYNLHNLYGLTEAIASSRALVK 

TRGTRPFVISRSTFSGHGRYAGHWTGDVRSSWEHLAYSVPDILQFNLLGVPLVGADICG 

FIGDTSEELCVRWTQLGAFYPFMRNHNDLNSVPQEPYRFSETAQQAMRKAFALRYALL 

PYLYTLFHRAHVRGDTVARPLFLEFPEDPSTWSVDRQLLWGPALLITPVLEPGKTEVTG 

YFPKGTWYNMQVVSVDSLGTLPSPSSASSFRSAVQSKGQWLTLEAPLDTINVHLREGYI 

IPLQGPSLTTTESRKQPMALAVALTASGEADGELFWDDGESLAVLERGAYTLVTSAKN 

NTIVNKLVRVTKEGAELQLREVTVLGVATAPTQVLSNGIPVSNFTYSPDNKSLAIPVSLL 

MGELFQISWS. 

如在实施例1中所述的将嵌合的GAA表达盒转染到HEK293细胞内。从两种稳定的转染体中测定出GAA表达水平。如表8所示，位点881上的融合给出了最高的酶表达水平。对位点881融合的杂合体的western分析显示出所表达的前体蛋白与野生型GAA的大小相似。 

表9人/鼠GAA杂合体表达 

进行了其他试验以确定杂合体的C末端的小鼠GAA序列的存在是否能调节GLIT标记的存在。因此，将GLITΔ1-7标记与上面所列的5种全长人/鼠杂合体中的每种杂合体的C末端融合，并确定出每种情况中的表达水平。也制备了联合C末端位点881的小鼠GAA杂合体与位点29、56、70、或81上的N末端的GILT标记的构建体。如上所述的确定出表达水平。 

序列表

<110>齐斯特治疗公司

<120>酸性α-糖苷酶及其片段

<130>SYM-011

<140>11/057,058

<141>2005-02-10

<150>US 60/543,812

<151>2004-02-10

<160>68

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>11

<212>PRT

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>A spacer sequence

<400>1

Gly Gly Gly Thr Val Gly Asp Asp Asp Asp Lys

1                  5                     10

<210>2

<211>4

<212>PRT

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>A C-terminal sequence of a targeting domain

<400>2

Lys Asp Glu Leu

1

<210>3

<211>6

<212>PRT

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>A linker sequence

<400>3

Gly Gly Gly Gly Gly Pro

1                5

<210>4

<211>5

<212>PRT

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Alinker sequence

<400>4

Gly Gly Gly Gly Ser

1               5

<210>5

<211>5

<212>PRT

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>A linkersequence

<400>5

Glu Ala Ala Ala Lys

1               5

<210>6

<211>38

<212>DNA

<213>Artificial  Sequence

<220>

<223>Primer GAA 41

<400>6

ggaattcagg cgcgccggca gctccccgtg agccagcc    38

<210>7

<211>33

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Primer GAA 27

<400>7

gctctagact aacaccagct gacgagaaactgc          33

<210>8

<211>96

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Nucleotide sequence of the SS N-tag

<400>8

gaattcacac caatgggaat cccaatgggg aagtcgatgc tggtgcttct caccttcttg    60

gccttcgcct cgtgctgcat tgctgctggc gcgccg                              96

<210>9

<211>2469

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Nucleotide sequence of GAA D 817-952

<400>9

gaattccaaa ccatgggagt gaggcacccg ccctgctccc accggctcctggccgtctgc       60

gccctcgtgt ccttggcaac cgctgcactc ctggggcaca tcctactccatgatttcctg      120

ctggttcccc gagagctgag tggctcctcc ccagtcctgg aggagactca cccagctcac     180

cagcagggag ccagcagacc agggccccgg gatgcccagg cacaccccgg ccgtcccaga     240

gcagtgccca cacagtgcga cgtccccccc aacagccgct tcgattgcgc ccctgacaag     300

gccatcaccc aggaacagtg cgaggcccgc ggctgctgct acatccctgc aaagcagggg     360

ctgcagggag cccagatggg gcagccctgg tgcttcttcc cacccagcta ccccagctac     420

aagctggaga acctgagctc ctctgaaatg ggctacacgg ccaccctgac ccgtaccacc     480

cccaccttct tccccaagga catcctgacc ctgcggctgg acgtgatgatggagactgag      540

aaccgcctcc acttcacgat caaagatcca gctaacaggc gctacgaggt gcccttggag     600

accccgcgtg tccacagccg ggcaccgtcc ccactctaca gcgtggagtt ctctgaggag     660

cccttcgggg tgatcgtgca ccggcagctg gacggccgcg tgctgctgaa cacgacggtg     720

gcgcccctgt tctttgcgga ccagttcctt cagctgtcca cctcgctgcc ctcgcagtat     780

atcacaggcc tcgccgagca cctcagtccc ctgatgctca gcaccagctg gaccaggatc     840

accctgtgga accgggacct tgcgcccacg cccggtgcga acctctacgg gtctcaccct     900

ttctacctgg cgctggagga cggcgggtcg gcacacgggg tgttcctgct aaacagcaat     960

gccatggatg tggtcctgca gccgagccct gcccttagct ggaggtcgac aggtgggatc    1020

ctggatgtct acatcttcct gggcccagag cccaagagcg tggtgcagca gtacctggac    1080

gttgtgggat acccgttcat gccgccatac tggggcctgg gcttccacct gtgccgctgg    1140

ggctactcct ccaccgctat cacccgccag gtggtggaga acatgaccag ggcccacttc    1200

cccctggacg tccaatggaa cgacctggac tacatggact cccggaggga cttcacgttc    1260

aacaaggatg gcttccggga cttcccggcc atggtgcagg agctgcacca gggcggccgg    1320

cgctacatga tgatcgtgga tcctgccatc agcagctcgg gccctgccgg gagctacagg    1380

ccctacgacg agggtctgcg gaggggggtt ttcatcacca acgagaccgg ccagccgctg    1440

attgggaagg tatggcccgg gtccactgcc ttccccgact tcaccaaccc cacagccctg    1500

gcctggtggg aggacatggt ggctgagttc catgaccagg tgcccttcga cggcatgtgg    1560

attgacatga acgagccttc caacttcatc aggggctctg aggacggctg ccccaacaat    1620

gagctggaga acccacccta cgtgcctggg gtggttgggg ggaccctcca ggcggcaacc    1680

atctgtgcct ccagccacca gtttctctcc acacactaca acctgcacaa cctctacggc    1740

ctgaccgaag ccatcgcctc ccacagggcg ctggtgaagg ctcgggggac acgcccattt    1800

gtgatctccc gctcgacctt tgctggccac ggccgatacg ccggccactg gacgggggac    1860

gtgtggagct cctgggagca gctcgcctcc tccgtgccag aaatcctgca gtttaacctg    1920

ctgggggtgc ctctggtcgg ggccgacgtc tgcggcttcc tgggcaacac ctcagaggag    1980

ctgtgtgtgc gctggaccca gctgggggcc ttctacccct tcatgcggaa ccacaacagc    2040

ctgctcagtc tgccccagga gccgtacagc ttcagcgagc cggcccagca ggccatgagg    2100

aaggccctca ccctgcgcta cgcactcctc ccccacctct acacgctgtt ccaccaggcc    2160

cacgtcgcgg gggagaccgt ggcccggccc ctcttcctgg agttccccaa ggactctagc    2220

acctggactg tggaccacca gctcctgtgg ggggaggccc tgctcatcac cccagtgctc    2280

caggccggga aggccgaagt gactggctac ttccccttgg gcacatggta cgacctgcag    2340

acggtgccaa tagaggccct tggcagcctc ccacccccac ctgcagctcc ccgtgagcca    2400

gccatccaca gcgaggggca gtgggtgacg ctgccggccc ccctggacac catcaacgtc    2460

tagtctaga                                                            2469

<210>10

<211>816

<212>PRT

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Amino acid sequence of GAA D 817-952

<400>10

Met Gly Val Arg His Pro Pro Cys Ser His Arg Leu Leu Ala Val Cys

1               5                   10                  15

Ala Leu Val Ser Leu Ala Thr Ala Ala Leu Leu Gly His Ile Leu Leu

            20                  25                  30

His Asp Phe Leu Leu Val Pro Arg Glu Leu Ser Gly Ser Ser Pro Val

        35                  40                  45

Leu Glu Glu Thr His Pro Ala His Gln Gln Gly Ala Ser Arg Pro Gly

    50                  55                  60

Pro Arg Asp Ala Gln Ala His pro Gly Arg Pro Arg Ala Val Pro Thr

65                  70                  75                  80

Gln Cys Asp Val Pro Pro Asn Ser Arg Phe Asp Cys Ala Pro Asp Lys

                85                  90                  95

Ala Ile Thr Gln Glu Gln Cys Glu Ala Arg Gly Cys Cys Tyr Ile Pro

            100                 105                 110

Ala Lys Gln Gly Leu Gln Gly Ala Gln Met Gly Gln Pro Trp Cys Phe

        115                 120                 125

Phe Pro Pro Ser Tyr Pro Ser Tyr Lys Leu Glu Asn Leu Ser Ser Ser

    130                 135                 140

Glu Met Gly Tyr Thr Ala Thr Leu Thr Arg Thr Thr Pro Thr Phe Phe

145                 150                 155                 160

Pro Lys Asp Ile Leu Thr Leu Arg Leu Asp Val Met Met Glu Thr Glu

               165                 170                 175

Asn Arg Leu His Phe Thr Ile Lys Asp Pro Ala Asn Arg Arg Tyr Glu

                180                 185                 190

Val Pro Leu Glu Thr Pro Arg Val His Ser Arg Ala Pro Ser Pro Leu

        195                 200                 205

Tyr Ser Val Glu Phe Ser Glu Glu Pro Phe Gly Val Ile Val His Arg

    210                 215                 220

Gln Leu Asp Gly Arg Val Leu Leu Asn Thr Thr Val Ala Pro Leu Phe

225                 230                 235                 240

Phe Ala Asp Gln Phe Leu Gln Leu Ser Thr Ser Leu Pro Ser Gln Tyr

                245                 250                 255

Ile Thr Gly Leu Ala Glu His Leu Ser Pro Leu Met Leu Ser Thr Ser

            260                 265                 270

Trp Thr Arg Ile Thr Leu Trp Asn Arg Asp Leu Ala Pro Thr Pro Gly

        275                 280                 285

Ala Asn Leu Tyr Gly Ser His Pro Phe Tyr Leu Ala Leu Glu Asp Gly

    290                 295                 300

Gly Ser Ala His Gly Val Phe Leu Leu Asn Ser Asn Ala Met Asp Val

305                 310                 315                 320

Val  LeuGln Pro Ser Pro Ala Leu Ser Trp Arg Ser Thr Gly Gly Ile

                325                 330                 335

Leu Asp Val Tyr Ile Phe Leu Gly Pro Glu Pro Lys Ser Val Val Gln

            340                 345                 350

Gln Tyr Leu Asp Val Val Gly Tyr Pro Phe Met Pro Pro Tyr Trp Gly

        355                 360                 365

Leu Gly Phe His Leu Cys Arg Trp Gly Tyr Ser Ser Thr Ala Ile Thr

    370                 375                 380

Arg Gln Val Val Glu Asn Met Thr Arg Ala His Phe Pro Leu Asp Val

385                 390                 395                 400

Gln Trp Asn Asp Leu Asp Tyr Met Asp Ser Arg Arg Asp Phe Thr Phe

               405                 410                 415

Asn Lys Asp Gly Phe Arg Asp Phe Pro Ala Met Val Gln Glu Leu His

            420                 425                 430

Gln Gly Gly Arg Arg Tyr Met Met Ile Val Asp Pro Ala Ile Ser Ser

        435                 440                 445

Ser Gly Pro Ala Gly Ser Tyr Arg Pro Tyr Asp Glu Gly Leu Arg Arg

    450                 455                 460

Gly Val Phe Ile Thr Asn Glu Thr Gly Gln Pro Leu Ile Gly Lys Val

465                 470                 475                 480

Trp Pro Gly Ser Thr Ala Phe Pro Asp Phe Thr Asn Pro Thr Ala Leu

                485                 490                 495

Ala Trp Trp Glu Asp Met Val Ala Glu Phe His Asp Gln Val Pro Phe

            500                 505                 510

Asp Gly Met Trp Ile Asp Met Asn Glu Pro Ser Asn Phe Ile Arg Gly

        515                 520                 525

Ser Glu Asp Gly Cys Pro Asn Asn Glu Leu Glu Asn Pro Pro Tyr Val

    530                 535                 540

Pro Gly Val Val Gly Gly Thr Leu Gln Ala Ala Thr Ile Cys Ala Ser

545                 550                 555                 560

Ser His Gln Phe Leu Ser Thr His Tyr Asn Leu His Asn Leu Tyr Gly

                565                 570                 575

Leu Thr Glu Ala Ile Ala Ser His Arg Ala Leu Val Lys Ala Arg Gly

           580                 585                 590

Thr Arg Pro Phe Val Ile Ser Arg Ser Thr Phe Ala Gly His Gly Arg

        595                 600                 605

Tyr Ala Gly His Trp Thr Gly Asp Val Trp Ser Ser Trp Glu Gln Leu

    610                 615                 620

Ala Ser Ser Val Pro Glu Ile Leu Gln Phe Asn Leu Leu Gly Val Pro

625                 630                 635                 640

Leu Val Gly Ala Asp Val Cys Gly Phe Leu Gly Asn Thr Ser Glu Glu

                645                 650                 655

Leu Cys Val Arg Trp Thr Gln Leu Gly Ala Phe Tyr Pro Phe Met Arg

            660                 665                 670

Asn His Asn Ser Leu Leu Ser Leu Pro Gln Glu Pro Tyr Ser Phe Ser

        675                 680                 685

Glu Pro Ala Gln Gln Ala Met Arg Lys Ala Leu Thr Leu Arg Tyr Ala

     690                 695                 700

Leu Leu Pro His Leu Tyr Thr Leu Phe His Gln Ala His Val Ala Gly

705                 710                 715                 720

Glu Thr Val Ala Arg Pro Leu Phe Leu Glu Phe Pro Lys Asp Ser Ser

                725                 730                 735

Thr Trp Thr Val Asp His Gln Leu Leu Trp Gly Glu Ala Leu Leu Ile

           740                 745                 750

Thr Pro Val Leu Gln Ala Gly Lys Ala Glu Val Thr Gly Tyr Phe Pro

        755                 760                 765

Leu Gly Thr Trp Tyr Asp Leu Gln Thr Val Pro Ile Glu Ala Leu Gly

    770                 775                 780

Ser Leu Pro Pro Pro Pro Ala Ala Pro Arg Glu Pro Ala Ile His Ser

785                 790                 795                 800

Glu Gly Gln Trp Val Thr Leu Pro Ala Pro Leu Asp Thr Ile Asn Val

                805                 810                 815

<210>11

<211>9

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>A sequence inserted to form Asc I restriction site

<400>11

ggcgcgccg                                                       9

<210>12

<211>37

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Primer IGF7

<400>12

gctctagagg cgcgccctcg gacttggcgg gggtagc                       37

<210>13

<211>37

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Primer IGF8

<400>13

ggaattcagg cgcgccggcttaccgcccca gtgagac       37

<210>14

<211>29

<212>DNA

<213>Artificial sequence

<220>

<223>Primer IGF1

<400>14

ggaattcaca ccaatgggaa tcccaatgg               29

<210>15

<211>36

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Primer IGF6

<400>15

gctctagagg cgcgccagca gcaatgcagc acgagg       36

<210>16

<211>39

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Primer IGF4

<400>16

accagctccc cgccgcacag agcaatgcag cacgaggcg    39

<210>17

<211>39

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Primer IGF2

<400>17

tcgcctcgtg ctgcattgct ctgtgcggcg gggagctgg     39

<210>18

<211>40

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Primer IGF5

<400>18

accagctccc cgccgcacag agcagcaatg cagcacgagg    40

<210>19

<211>39

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Primer IGF3

<400>19

cctcgtgctg cattgctgct ctgtgcggcg gggagctgg     39

<210>20

<211>33

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Primer GAA13

<400>20

ggaattccaa ccatgggagt gaggcacccg ccc           33

<210>21

<211>39

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Primer GI1

<400>21

gggtctcact ggggcggtat gcctgggcat cccggggcc     39

<210>22

<211>39

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Primer GI2

<400>22

ggccccggga tgcccaggca taccgcccca gtgagaccc 39

<210>23

<211>36

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Primer GAA32

<400>23

ggaattcagg cgcgccggca ctcctggggc acatcc    36

<210>24

<211>38

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Primer GAA28

<400>24

ggaattcagg cgcgccgcac atcctactcc atgatttc   38

<210>25

<211>37

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Primer GAA29

<400>25

ggaattcagg cgcgccgcac cagcagggag ccagcag    37

<210>26

<211>37

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Primer GAA30

<400>26

ggaattcagg cgcgccggca caccccggcc gtcccag     37

<210>27

<211>38

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Primer GAA39

<400>27

ggaattcagg cgcgccgcagtgcgacgtcc cacccaac    38

<210>28

<211>38

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Primer GAA33

<400>28

ggaattcagg cgcgccgggg cagccctggt gcttcttc    38

<210>29

<211>37

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Primer GAA34

<400>29

ggaattcagg cgcgccggca ccgtccccac tctacag     37

<210>30

<211>3054

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Sequence of GILT 1-87-GAA56-952

<400>30

ggtaccacac caatgggaat cccaatgggg aagtcgatgc tggtgcttct caccttcttg    60

gccttcgcct cgtgctgcat tgctgcttac cgccccagtg agaccctgtg cggcggggag    120

ctggtggaca ccctccagtt cgtctgtggg gaccgcggct tctacttcag caggcccgca    180

agccgtgtga gccgtcgcag ccgtggcatc gttgaggagt gctgtttccg cagctgtgac    240

ctggccctcc tggagacgta ctgtgctacc cccgccaagt ccgagaggga cgtgtcgacc    300

cctccgaccg tgcttccgga caacttcccc agataccccg tgggcggcgc gccgcaccag    360

cagggagcca gcagaccagg gccccgggat gcccaggcac accccggccg tcccagagca    420

gtgcccacac agtgcgacgt cccccccaac agccgcttcg attgcgcccc tgacaaggcc    480

atcacccagg aacagtgcga ggcccgcggc tgctgctaca tccctgcaaa gcaggggctg    540

cagggagccc agatggggca gccctggtgc ttcttcccac ccagctaccc cagctacaag    600

ctggagaacc tgagctcctc tgaaatgggc tacacggcca ccctgacccg taccaccccc    660

accttcttcc ccaaggacat cctgaccctg cggctggacg tgatgatgga gactgagaac    720

cgcctccact tcacgatcaa agatccagct aacaggcgct acgaggtgcc cttggagacc    780

ccgcgtgtcc acagccgggc accgtcccca ctctacagcg tggagttctc tgaggagccc    840

ttcggggtga tcgtgcaccg gcagctggac ggccgcgtgc tgctgaacac gacggtggcg    900

cccctgttct ttgcggacca gttccttcag ctgtccacct cgctgccctc gcagtatatc    960

acaggcctcg ccgagcacct cagtcccctg atgctcagca ccagctggac caggatcacc    1020

ctgtggaacc gggaccttgc gcccacgccc ggtgcgaacc tctacgggtc tcaccctttc    1080

tacctggcgc tggaggacgg cgggtcggca cacggggtgt tcctgctaaa cagcaatgcc    1140

atggatgtgg tcctgcagcc gagccctgcc cttagctgga ggtcgacagg tgggatcctg    1200

gatgtctaca tcttcctggg cccagagccc aagagcgtgg tgcagcagta cctggacgtt    1260

gtgggatacc cgttcatgcc gccatactgg ggcctgggct tccacctgtg ccgctggggc    1320

tactcctcca ccgctatcac ccgccaggtg gtggagaaca tgaccagggc ccacttcccc    1380

ctggacgtcc aatggaacga cctggactac atggactccc ggagggactt cacgttcaac    1440

aaggatggct tccgggactt cccggccatg gtgcaggagc tgcaccaggg cggccggcgc    1500

tacatgatga tcgtggatcc tgccatcagc agctcgggcc ctgccgggag ctacaggccc    1560

tacgacgagg gtctgcggag gggggttttc atcaccaacg agaccggcca gccgctgatt    1620

gggaaggtat ggcccgggtc cactgccttc cccgacttca ccaaccccac agccctggcc    1680

tggtgggagg acatggtggc tgagttccat gaccaggtgc ccttcgacgg catgtggatt    1740

gacatgaacg agccttccaa cttcatcagg ggctctgagg acggctgccc caacaatgag    1800

ctggagaacc caccctacgt gcctggggtg gttgggggga ccctccaggc ggcaaccatc    1860

tgtgcctcca gccaccagtt tctctccaca cactacaacc tgcacaacct ctacggcctg    1920

accgaagcca tcgcctccca cagggcgctg gtgaaggctc gggggacacg cccatttgtg    1980

atctcccgct cgacctttgc tggccacggc cgatacgccg gccactggac gggggacgtg    2040

tggagctcct gggagcagct cgcctcctcc gtgccagaaa tcctgcagtt taacctgctg    2100

ggggtgcctc tggtcggggc cgacgtctgc ggcttcctgg gcaacacctc agaggagctg    2160

tgtgtgcgct ggacccagct gggggccttc taccccttca tgcggaacca caacagcctg    2220

ctcagtctgc cccaggagcc gtacagcttc agcgagccgg cccagcaggc catgaggaag    2280

gccctcaccc tgcgctacgc actcctcccc cacctctaca cgctgttcca ccaggcccac    2340

gtcgcggggg agaccgtggc ccggcccctc ttcctggagt tccccaagga ctctagcacc    2400

tggactgtgg accaccagct cctgtggggg gaggccctgc tcatcacccc agtgctccag    2460

gccgggaagg ccgaagtgac tggctacttc cccttgggca catggtacga cctgcagacg    2520

gtgccaatag aggcccttgg cagcctccca cccccacctg cagctccccg tgagccagcc    2580

atccacagcg aggggcagtg ggtgacgctg ccggcccccc tggacaccat caacgtccac    2640

ctccgggctg ggtacatcat ccccctgcag ggccctggcc tcacaaccac agagtcccgc    2700

cagcagccca tggccctggc tgtggccctg accaagggtg gagaggcccg aggggagctg    2760

ttctgggacg atggagagag cctggaagtg ctggagcgag gggcctacac acaggtcatc    2820

ttcctggcca ggaataacac gatcgtgaat gagctggtac gtgtgaccag tgagggagct    2880

ggcctgcagc tgcagaaggt gactgtcctg ggcgtggcca cggcgcccca gcaggtcctc    2940

tccaacggtg tccctgtctc caacttcacc tacagccccg acaccaaggt cctggacatc    3000

tgtgtctcgc tgttgatggg agagcagttt ctcgtcagct ggtgttagtc taga          3054

<210>31

<211>1011

<212>PRT

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Amino Acid Sequence of GILT1-87-GAA56-952

<400>31

Met Gly Ile Pro Met Gly Lys Ser Met Leu Val Leu Leu Thr Phe Leu

1               5                   10                  15

Ala Phe Ala Ser Cys Cys Ile Ala Ala Tyr Arg Pro Ser Glu Thr Leu

            20                  25                  30

Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg

        35                  40                  45

Gly Phe Tyr Phe Ser Arg Pro Ala Ser Arg Val Ser Arg Arg Ser Arg

    50                  55                  60

Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu

65                  70                  75                  80

Glu Thr Tyr Cys Ala Thr Pro Ala Lys Ser Glu Arg Asp Val Ser Thr

                85                  90                  95

Pro Pro Thr Val Leu Pro Asp Asn Phe Pro Arg Tyr Pro Val Gly Gly

             100                 105                 110

Ala Pro His Gln Gln Gly Ala Ser Arg Pro Gly Pro Arg Asp Ala Gln

        115                 120                 125

Ala His Pro Gly Arg Pro Arg Ala Val Pro Thr Gln Cys Asp Val Pro

    130                 135                 140

Pro Asn Ser Arg Phe Asp Cys Ala Pro Asp Lys Ala Ile Thr Gln Glu

145                 150                 155                 160

Gln Cys Glu Ala Arg Gly Cys Cys Tyr Ile Pro Ala Lys Gln Gly Leu

                165                 170                 175

Gln Gly Ala Gln Met Gly Gln Pro Trp Cys Phe Phe Pro Pro Ser Tyr

            180                 185                 190

Pro Ser Tyr Lys Leu Glu Asn Leu Ser Ser Ser Glu Met Gly Tyr Thr

        195                 200                 205

Ala Thr Leu Thr Arg Thr Thr Pro Thr Phe Phe Pro Lys Asp Ile Leu

    210                 215                 220

Thr Leu Arg Leu Asp Val Met Met Glu Thr Glu Asn Arg Leu His Phe

225                 230                 235                 240

Thr Ile Lys Asp Pro Ala Asn Arg Arg Tyr Glu Val Pro Leu Glu Thr

               245                 250                 255

Pro Arg Val His Ser Arg Ala Pro Ser Pro Leu Tyr Ser Val Glu Phe

            260                 265                 270

Ser Glu Glu Pro Phe Gly Val Ile Val His Arg Gln Leu Asp Gly Arg

        275                 280                 285

Val Leu Leu Asn Thr Thr Val Ala Pro Leu Phe Phe Ala Asp Gln Phe

    290                 295                 300

Leu Gln Leu Ser Thr Ser Leu Pro Ser Gln Tyr Ile Thr Gly Leu Ala

305                 310                 315                 320

Glu His Leu Ser Pro Leu Met Leu Ser Thr Ser Trp Thr Arg Ile Thr

                325                 330                 335

Leu Trp Asn Arg Asp Leu Ala Pro Thr Pro Gly Ala Asn Leu Tyr Gly

            340                 345                 350

Ser His Pro Phe Tyr Leu Ala Leu Glu Asp Gly Gly Ser Ala His Gly

        355                 360                 365

Val Phe Leu Leu Asn Ser Asn Ala Met Asp Val Val Leu Gln Pro Ser

    370                 375                 380

Pro Ala Leu Ser Trp Arg Ser Thr Gly Gly Ile Leu Asp Val Tyr Ile

385                 390                 395                 400

Phe Leu Gly Pro Glu Pro Lys Ser Val Val Gln Gln Tyr Leu Asp Val

                405                 410                 415

Val Gly Tyr Pro Phe Met Pro Pro Tyr Trp Gly Leu Gly Phe His Leu

           420                 425                 430

Cys Arg Trp Gly Tyr Ser Ser Thr Ala Ile Thr Arg Gln Val Val Glu

        435                 440                 445

Asn Met Thr Arg Ala His Phe Pro Leu Asp Val Gln Trp Asn Asp Leu

    450                 455                 460

Asp Tyr Met Asp Ser Arg Arg Asp Phe Thr Phe Asn Lys Asp Gly Phe

465                 470                 475                 480

Arg Asp Phe Pro Ala Met Val Gln Glu Leu His Gln Gly Gly Arg Arg

                485                 490                 495

Tyr Met Met Ile Val Asp Pro Ala Ile Ser Ser Ser Gly Pro Ala Gly

            500                 505                 510

Ser Tyr Arg Pro Tyr Asp Glu Gly Leu Arg Arg Gly Val Phe Ile Thr

        515                 520                 525

Asn Glu Thr Gly Gln Pro Leu Ile Gly Lys Val Trp Pro Gly Ser Thr

    530                 535                 540

Ala Phe Pro Asp Phe Thr Asn Pro Thr Ala Leu Ala Trp Trp Glu Asp

545                 550                 555                 560

Met Val Ala Glu Phe His Asp Gln Val Pro Phe Asp Gly Met Trp Ile

               565                 570                 575

Asp Met Asn Glu Pro Ser Asn Phe Ile Arg Gly Ser Glu Asp Gly Cys

            580                 585                 590

Pro Asn Asn Glu Leu Glu Asn Pro Pro Tyr Val Pro Gly Val Val Gly

        595                 600                 605

Gly Thr Leu Gln Ala Ala Thr Ile Cys Ala Ser Ser His Gln Phe Leu

    610                 615                 620

Ser Thr His Tyr Asn Leu Hie Asn Leu Tyr Gly Leu Thr Glu Ala Ile

625                 630                 635                 640

Ala Ser His Arg Ala Leu Val Lys Ala Arg Gly Thr Arg Pro Phe Val

                645                 650                 655

Ile Ser Arg Ser Thr Phe Ala Gly His Gly Arg Tyr Ala Gly His Trp

            660                 665                 670

Thr Gly Asp Val Trp Ser Ser Trp Glu Gln Leu Ala Ser Ser Val Pro

        675                 680                 685

Glu Ile Leu Gln Phe Asn Leu Leu Gly Val Pro Leu Val Gly Ala Asp

    690                 695                 700

Val Cys Gly Phe Leu Gly Asn Thr Ser Glu Glu Leu Cys Val Arg Trp

705                 710                 715                 720

Thr Gln Leu Gly Ala Phe Tyr Pro Phe Met Arg Asn His Asn Ser Leu

                725                 730                 735

Leu Ser Leu Pro Gln Glu Pro Tyr Ser Phe Ser Glu Pro Ala Gln Gln

            740                 745                 750

Ala Met Arg Lys Ala Leu Thr Leu Arg Tyr Ala Leu Leu Pro His Leu

        755                 760                 765

Tyr Thr Leu Phe His Gln Ala His Val Ala Gly Glu Thr Val Ala Arg

    770                 775                 780

Pro Leu Phe Leu Glu Phe Pro Lys Asp Ser Ser Thr Trp Thr Val Asp

785                 790                 795                 800

His Gln Leu Leu Trp Gly Glu Ala Leu Leu Ile Thr Pro Val Leu Gln

                805                 810                 815

Ala Gly Lys Ala Glu Val Thr Gly Tyr Phe Pro Leu Gly Thr Trp Tyr

            820                 825                 830

Asp Leu Gln Thr Val Pro Ile Glu Ala Leu Gly Ser Leu Pro Pro Pro

        835                 840                 845

Pro Ala Ala Pro Arg Glu Pro Ala Ile His Ser Glu Gly Gln Trp Val

    850                 855                 860

Thr Leu Pro Ala Pro Leu Asp Thr Ile Asn Val His Leu Arg Ala Gly

865                 870                 875                 880

Tyr Ile Ile Pro Leu Gln Gly Pro Gly Leu Thr Thr Thr Glu Ser Arg

               885                 890                 895

Gln Gln Pro Met Ala Leu Ala Val Ala Leu Thr Lye Gly Gly Glu Ala

            900                 905                 910

Arg Gly Glu Leu Phe Trp Asp Asp Gly Glu Ser Leu Glu Val Leu Glu

        915                 920                 925

Arg Gly Ala Tyr Thr Gln Val Ile Phe Leu Ala Arg Asn Asn Thr Ile

    930                 935                 940

Val Asn Glu Leu Val Arg Val Thr Ser Glu Gly Ala Gly Leu Gln Leu

945                 950                 955                 960

Gln Lys Val Thr Val Leu Gly Val Ala Thr Ala Pro Gln Gln Val Leu

                965                 970                 975

Ser Asn Gly Val Pro Val Ser Asn Phe Thr Tyr Ser Pro Asp Thr Lys

            980                 985                 990

Val Leu Asp Ile Cys Val Ser Leu Leu Met Gly Glu Gln Phe Leu Val

        995                 1000                1005

Ser Trp Cys

    1010

<210>32

<211>3012

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Sequence of GILT1-87-GAA70-952

<400>32

ggtaccacac caatgggaat cccaatgggg aagtcgatgc tggtgcttct caccttcttg    60

gccttcgcct cgtgctgcat tgctgcttac cgccccagtg agaccctgtg cggcggggag    120

ctggtggaca ccctccagtt cgtctgtggg gaccgcggct tctacttcag caggcccgca    180

agccgtgtga gccgtcgcag ccgtggcatc gttgaggagt gctgtttccg cagctgtgac    240

ctggccctcc tggagacgta ctgtgctacc cccgccaagt ccgagaggga cgtgtcgacc    300

cctccgaccg tgcttccgga caacttcccc agataccccg tgggcggcgc gccggcacac    360

cccggccgtc ccagagcagt gcccacacag tgcgacgtcc cccccaacag ccgcttcgat    420

tgcgcccctg acaaggccat cacccaggaa cagtgcgagg cccgcggctg ctgctacatc    480

cctgcaaagc aggggctgca gggagcccag atggggcagc cctggtgctt cttcccaccc    540

agctacccca gctacaagct ggagaacctg agctcctctg aaatgggcta cacggccacc    600

ctgacccgta ccacccccac cttcttcccc aaggacatcc tgaccctgcg gctggacgtg    660

atgatggaga ctgagaaccg cctccacttc acgatcaaag atccagctaa caggcgctac    720

gaggtgccct tggagacccc gcgtgtccac agccgggcac cgtccccact ctacagcgtg    780

gagttctctg aggagccctt cggggtgatc gtgcaccggc agctggacgg ccgcgtgctg    840

ctgaacacga cggtggcgcc cctgttcttt gcggaccagt tccttcagct gtccacctcg    900

ctgccctcgc agtatatcac aggcctcgcc gagcacctca gtcccctgat gctcagcacc    960

agctggacca ggatcaccct gtggaaccgg gaccttgcgc ccacgcccgg tgcgaacctc    1020

tacgggtctc accctttcta cctggcgctg gaggacggcg ggtcggcaca cggggtgttc    1080

ctgctaaaca gcaatgccat ggatgtggtc ctgcagccga gccctgccct tagctggagg    1140

tcgacaggtg ggatcctgga tgtctacatc ttcctgggcc cagagcccaa gagcgtggtg    1200

cagcagtacc tggacgttgt gggatacccg ttcatgccgc catactgggg cctgggcttc    1260

cacctgtgcc gctggggcta ctcctccacc gctatcaccc gccaggtggt ggagaacatg    1320

accagggccc acttccccct ggacgtccaa tggaacgacc tggactacat ggactcccgg    1380

agggacttca cgttcaacaa ggatggcttc cgggacttcc cggccatggt gcaggagctg    1440

caccagggcg gccggcgcta catgatgatc gtggatcctg ccatcagcag ctcgggccct    1500

gccgggagct acaggcccta cgacgagggt ctgcggaggg gggttttcat caccaacgag    1560

accggccagc cgctgattgg gaaggtatgg cccgggtcca ctgccttccc cgacttcacc    1620

aaccccacag ccctggcctg gtgggaggac atggtggctg agttccatga ccaggtgccc    1680

ttcgacggca tgtggattga catgaacgag ccttccaact tcatcagggg ctctgaggac    1740

ggctgcccca acaatgagct ggagaaccca ccctacgtgc ctggggtggt tggggggacc    1800

ctccaggcgg caaccatctg tgcctccagc caccagtttc tctccacaca ctacaacctg    1860

cacaacctct acggcctgac cgaagccatc gcctcccaca gggcgctggt gaaggctcgg    1920

gggacacgcc catttgtgat ctcccgctcg acctttgctg gccacggccg atacgccggc    1980

cactggacgg gggacgtgtg gagctcctgg gagcagctcg cctcctccgt gccagaaatc    2040

ctgcagttta acctgctggg ggtgcctctg gtcggggccg acgtctgcgg cttcctgggc    2100

aacacctcag aggagctgtg tgtgcgctgg acccagctgg gggccttcta ccccttcatg    2160

cggaaccaca acagcctgct cagtctgccc caggagccgt acagcttcag cgagccggcc    2220

cagcaggcca tgaggaaggc cctcaccctg cgctacgcac tcctccccca cctctacacg    2280

ctgttccacc aggcccacgt cgcgggggag accgtggccc ggcccctctt cctggagttc    2340

cccaaggact ctagcacctg gactgtggac caccagctcc tgtgggggga ggccctgctc    2400

atcaccccag tgctccaggc cgggaaggcc gaagtgactg gctacttccc cttgggcaca    2460

tggtacgacc tgcagacggt gccaatagag gcccttggca gcctcccacc cccacctgca    2520

gctccccgtg agccagccat ccacagcgag gggcagtggg tgacgctgcc ggcccccctg    2580

gacaccatca acgtccacct ccgggctggg tacatcatcc ccctgcaggg ccctggcctc    2640

acaaccacag agtcccgcca gcagcccatg gccctggctg tggccctgac caagggtgga    2700

gaggcccgag gggagctgtt ctgggacgat ggagagagcc tggaagtgct ggagcgaggg    2760

gcctacacac aggtcatctt cctggccagg aataacacga tcgtgaatga gctggtacgt    2820

gtgaccagtg agggagctgg cctgcagctg cagaaggtga ctgtcctggg cgtggccacg    2880

gcgccccagc aggtcctctc caacggtgtc cctgtctcca acttcaccta cagccccgac    2940

accaaggtcc tggacatctg tgtctcgctg ttgatgggag agcagtttct cgtcagctgg    3000

tgttagtcta ga                                                        3012

<210>33

<211>997

<212>PRT

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Amino Acid sequence of GILT1-87-GAA70-952

<400>33

Met Gly Ile Pro Met Gly Lys Ser Met Leu Val Leu Leu Thr Phe Leu

1               5                   10                  15

Ala Phe Ala Ser Cys Cys Ile Ala Ala Tyr Arg Pro Ser Glu Thr Leu

            20                  25                  30

Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg

        35                  40                  45

Gly Phe Tyr Phe Ser Arg Pro Ala Ser Arg Val Ser Arg Arg Ser Arg

    50                  55                  60

Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu

65                  70                  75                  80

Glu Thr Tyr Cys Ala Thr Pro Ala Lys Ser Glu Arg Asp Val Ser Thr

                85                  90                  95

Pro Pro Thr Val Leu Pro Asp Asn Phe Pro Arg Tyr Pro Val Gly Gly

             100                 105                 110

Ala Pro Ala His Pro Gly Arg Pro Arg Ala Val Pro Thr Gln Cys Asp

        115                 120                 125

Val Pro Pro Asn Ser Arg Phe Asp Cys Ala Pro Asp Lys Ala Ile Thr

    130                 135                 140

Gln Glu Gln Cys Glu Ala Arg Gly Cys Cys Tyr Ile Pro Ala Lys Gln

145                 150                 155                 160

Gly Leu Gln Gly Ala Gln Met Gly Gln Pro Trp Cys Phe Phe Pro Pro

               165                 170                 175

Ser Tyr Pro Ser Tyr Lys Leu Glu Asn Leu Ser Ser Ser Glu Met Gly

            180                 185                 190

Tyr Thr Ala Thr Leu Thr Arg Thr Thr Pro Thr Phe Phe Pro Lys Asp

        195                 200                 205

Ile Leu Thr Leu Arg Leu Asp Val Met Met Glu Thr Glu Asn Arg Leu

    210                 215                 220

His Phe Thr Ile Lys Asp Pro Ala Asn Arg Arg Tyr Glu Val Pro Leu

225                 230                 235                 240

Glu Thr Pro Arg Val His Ser Arg Ala Pro Ser Pro Leu Tyr Ser Val

                245                 250                 255

Glu Phe Ser Glu Glu Pro Phe Gly Val Ile Val His Arg Gln Leu Asp

            260                 265                 270

Gly Arg Val Leu Leu Asn Thr Thr Val Ala Pro Leu Phe Phe Ala Asp

        275                 280                 285

Gln Phe Leu Gln Leu Ser Thr Ser Leu Pro Ser Gln Tyr Ile Thr Gly

    290                 295                 300

Leu Ala Glu His Leu Ser Pro Leu Met Leu Ser Thr Ser Trp Thr Arg

305                 310                 315                 320

Ile Thr Leu Trp Asn Arg Asp Leu Ala Pro Thr Pro Gly Ala Asn Leu

                325                 330                 335

Tyr Gly Ser His Pro Phe Tyr Leu Ala Leu Glu Asp Gly Gly Ser Ala

            340                 345                 350

His Gly Val Phe Leu Leu Asn Ser Asn Ala Met Asp Val Val Leu Gln

        355                 360                 365

Pro Ser Pro Ala Leu Ser Trp Arg Ser Thr Gly Gly Ile Leu Asp Val

    370                 375                 380

Tyr Ile Phe Leu Gly Pro Glu Pro Lys Ser Val Val Gln Gln Tyr Leu

385                 390                 395                 400

Asp Val Val Gly Tyr Pro Phe Met Pro Pro Tyr Trp Gly Leu Gly Phe

                405                 410                 415

His Leu Cys Arg Trp Gly Tyr Ser Ser Thr Ala Ile Thr Arg Gln Val

            420                 425                 430

Val Glu Asn Met Thr Arg Ala His Phe Pro Leu Asp Val Gln Trp Asn

       435                 440                 445

Asp Leu Asp Tyr Met Asp Ser Arg Arg Asp Phe Thr Phe Asn Lys Asp

    450                 455                 460

Gly Phe Arg Asp Phe Pro Ala Met Val Glu Glu Leu His Gln Gly Gly

465                 470                 475                 480

Arg Arg Tyr Met Met Ile Val Asp Pro Ala Ile Ser Ser Ser Gly Pro

                485                 490                 495

Ala Gly Ser Tyr Arg Pro Tyr Asp Glu Gly Leu Arg Arg Gly Val Phe

            500                 505                 510

Ile Thr Asn Glu Thr Gly Gln Pro Leu Ile Gly Lys Val Trp Pro Gly

        515                 520                 525

Ser Thr Ala Phe Pro Asp Phe Thr Asn Pro Thr Ala Leu Ala Trp Trp

    530                 535                 540

Glu Asp Met Val Ala Glu Phe His Asp Gln Val Pro Phe Asp Gly Met

545                 550                 555                 560

Trp Ile Asp Met Asn Glu Pro Ser Asn Phe Ile Arg Gly Ser Glu Asp

                565                 570                 575

Gly Cys Pro Asn Asn Glu Leu Glu Asn Pro Pro Tyr Val Pro Gly Val

            580                 585                 590

Val Gly Gly Thr Leu Gln Ala Ala Thr Ile Cys Ala Ser Ser His Gln

        595                 600                 605

Phe Leu Ser Thr His Tyr Asn Leu His Asn Leu Tyr Gly Leu Thr Glu

    610                 615                 620

Ala Ile Ala Ser His Arg Ala Leu Val Lys Ala Arg Gly Thr Arg Pro

625                 630                 635                 640

Phe Val Ile Ser Arg Ser Thr Phe Ala Gly His Gly Arg Tyr Ala Gly

                645                 650                 655

His Trp Thr Gly Asp Val Trp Ser Ser Trp Glu Gln Leu Ala Ser Ser

            660                 665                 670

Val Pro Glu Ile Leu Gln Phe Asn Leu Leu Gly Val Pro Leu Val Gly

        675                 680                 685

Ala Asp Val Cys Gly Phe Leu Gly Asn Thr Ser Glu Glu Leu Cys Val

    690                 695                 700

Arg Trp Thr Gln Leu Gly Ala Phe Tyr Pro Phe Met Arg Asn His Asn

705                 710                 715                 720

Ser Leu Leu Ser Leu Pro Gln Glu Pro Tyr Ser Phe Ser Glu Pro Ala

                725                 730                 735

Gln Gln Ala Met Arg Lys Ala Leu Thr Leu Arg Tyr Ala Leu Leu Pro

            740                 745                 750

His Leu Tyr Thr Leu Phe His Gln Ala His Val Ala Gly Glu Thr Val

        755                 760                 765

Ala Arg Pro Leu Phe Leu Glu Phe Pro Lys Asp Ser Ser Thr Trp Thr

    770                 775                 780

Val Asp His Gln Leu Leu Trp Gly Glu Ala Leu Leu Ile Thr Pro Val

785                 790                 795                 800

Leu Gln Ala Gly Lys Ala Glu Val Thr Gly Tyr Phe Pro Leu Gly Thr

                805                 810                 815

Trp Tyr Asp Leu Gln Thr Val Pro Ile Glu Ala Leu Gly Ser Leu Pro

            820                 825                 830

Pro Pro Pro Ala Ala Pro Arg Glu Pro Ala Ile His Ser Glu Gly Gln

        835                 840                 845

Trp Val Thr Leu Pro Ala Pro Leu Asp Thr Ile Asn Val His Leu Arg

    850                 855                 860

Ala Gly Tyr Ile Ile Pro Leu Gln Gly Pro Gly Leu Thr Thr Thr Glu

865                 870                 875                 880

Ser Arg Gln Gln Pro Met Ala Leu Ala Val Ala Leu Thr Lys Gly Gly

                885                 890                 895

Glu Ala Arg Gly Glu Leu Phe Trp Asp Asp Gly Glu Ser Leu Glu Val

            900                 905                 910

Leu Glu Arg Gly Ala Tyr Thr Gln Val Ile Phe Leu Ala Arg Asn Asn

        915                 920                 925

Thr Ile Val Asn Glu Leu Val Arg Val Thr Ser Glu Gly Ala Gly Leu

    930                 935                 940

Gln Leu Gln Lys Val Thr Val Leu Gly Val Ala Thr Ala Pro Gln Gln

945                 950                 955                 960

Val Leu Ser Asn Gly Val Pro Val Ser Asn Phe Thr Tyr Ser Pro Asp

                965                 970                 975

Thr Lys Val Leu Asp Ile Cys Val Ser Leu Leu Met Gly Glu Gln Phe

            980                 985                 990

Leu Val Ser Trp Cys

        995

<210>34

<211>354

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Sequence of GILT1-87-R68A

<400>34

ggtaccacac caatgggaat cccaatgggg aagtcgatgc tggtgcttct caccttcttg    60

gccttcgcct cgtgctgcat tgctgcttac cgccccagtg agaccctgtg cggcggggag    120

ctggtggaca ccctccagtt cgtctgtggg gaccgcggct tctacttcag caggcccgca    180

agccgtgtga gccgtcgcag ccgtggcatc gttgaggagt gctgtttccg cagctgtgac    240

ctggccctcc tggagacgta ctgtgctacc cccgccaagt ccgaggcgga cgtgtcgacc    300

cctccgaccg tgcttccgga caacttcccc agataccccg tgggcggcgc gccg          354

<210>35

<211>114

<212>PRT

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Amino Acid sequence of GILT1-87-R68A

<400>35

Met Gly Ile Pro Met Gly Lys Ser Met Leu Val Leu Leu Thr Phe Leu

1               5                   10                  15

Ala Phe Ala Ser Cys Cys Ile Ala Ala Tyr Arg Pro Ser Glu Thr Leu

             20                  25                  30

Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg

            35                  40                  45

Gly Phe Tyr Phe Ser Arg Pro Ala Ser Arg Val Ser Arg Arg Ser Arg

    50                  55                  60

Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu

65                  70                  75                  80

Glu Thr Tyr Cys Ala Thr Pro Ala Lys Ser Glu Ala Asp Val Ser Thr

                85                  90                  95

Pro Pro Thr Val Leu Pro Asp Asn Phe Pro Arg Tyr Pro Val Gly Gly

             100                 105                 110

Ala Pro

<210>36

<211>354

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Sequence of GILTl-87-D GS

<400>36

ggtaccacac caatgggaat cccaatgggg aagtcgatgc tggtgcttct caccttcttg    60

gccttcgcct cgtgctgcat tgctgcttac cgccccagtg agaccctgtg cggcggggag    120

ctggtggaca ccctccagtt cgtctgtggg gaccgcggct tctacttcag caggcccgca    180

agccgtgtga gccgtcgcag ccgtggcatc gttgaggagt gctgtttccg cagctgtgac    240

ctggccctcc tggagacgta ctgtgctacc cccgccaagt ccgagaggga cgtggcggcc    300

cctccggccg tgcttccgga caacttcccc agataccccg tgggcggcgc gccg          354

<210>37

<211>114

<212>PRT

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Amino Acid sequence of GILT1-87-D GS

<400>37

Met Gly Ile Pro Met Gly Lys Ser Met Leu Val Leu Leu Thr Phe Leu

1               5                   10                  15

Ala Phe Ala Ser Cys Cys Ile Ala Ala Tyr Arg Pro Ser Glu Thr Leu

            20                  25                  30

Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg

        35                  40                  45

Gly Phe Tyr Phe Ser Arg Pro Ala Ser Arg Val Ser Arg Arg Ser Arg

    50                  55                  60

Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu

65                  70                  75                  80

Glu Thr Tyr Cys Ala Thr Pro Ala Lys Ser Glu Arg Asp Val Ala Ala

                85                  90                  95

Pro Pro Ala Val Leu Pro Asp Asn Phe Pro Arg Tyr Pro Val Gly Gly

            100                 105                 110

Ala Pro

<210>38

<211>354

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Sequence of GILT1-87-R68A-D GS

<400>38

ggtaccacac caatgggaat cccaatgggg aagtcgatgc tggtgcttct caccttcttg    60

gccttcgcct cgtgccgcat tgctgcttac cgccccagtg agaccctgtg cggcggggag    120

ctggtggaca ccctccagtt cgtctgtggg gaccgcggct tctacttcag caggcccgca    180

agccgtgtga gccgtcgcag ccgtggcatc gttgaggagt gctgtttccg cagctgtgac    240

ctggccctcc tggagacgta ctgtgctacc cccgccaagt ccgaggcgga cgtggcggcc    300

cctccggccg tgcttccgga caacttcccc agataccccg tgggcggcgc gccg          354

<210>39

<211>114

<212>PRT

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Amino Acid sequence of GILT1-87-R68A-D GS

<400>39

Met Gly Ile Pro Met Gly Lys Ser Met Leu Val Leu Leu Thr Phe Leu

1               5                   10                  15

Ala Phe Ala Ser Cys Cys Ile Ala Ala Tyr Arg Pro Ser Glu Thr Leu

            20                  25                  30

Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg

        35                  40                  45

Gly Phe Tyr Phe Ser Arg Pro Ala Ser Arg Val Ser Arg Arg Ser Arg

    50                  55                  60

Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu

65                  70                  75                  80

Glu Thr Tyr Cys Ala Thr Pro Ala Lys Ser Glu Ala Asp Val Ala Ala

                85                  90                  95

Pro Pro Ala Val Leu Pro Asp Asn Phe Pro Arg Tyr Pro Val Gly Gly

            100                 105                 110

Ala Pro

<210>40

<211>3324

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Sequence of pcEP-GAA-791IGF2-P2/P1

<400>40

atgggagtga ggcacccgcc ctgctcccac cggctcctgg ccgtctgcgc cctcgtgtcc    60

ttggcaaccg ctgcactcct ggggcacatc ctactccatg atttcctgct ggttccccga    120

gagctgagtg gctcctcccc agtcctggag gagactcacc cagctcacca gcagggagcc    180

agcagaccag ggccccggga tgcccaggca caccccggcc gtcccagagc agtgcccaca    240

cagtgcgacg tcccccccaa cagccgcttc gattgcgccc ctgacaaggc catcacccag    300

gaacagcgcg aggcccgcgg ctgctgctac atccctgcaa agcaggggct gcagggagcc    360

cagatggggc agccctggtg cttcttccca cccagctacc ccagctacaa gctggagaac    420

ctgagctcct ctgaaatggg ctacacggcc accctgaccc gtaccacccc caccttcttc    480

cccaaggaca tcctgaccct gcggctggac gtgatgatgg agactgagaa ccgcctccac    540

ttcacgatca aagatccagc taacaggcgc tacgaggtgc ccttggagac cccgcgtgtc    600

cacagccggg caccgtcccc actctacagc gtggagttct ctgaggagcc cttcggggtg    660

atcgtgcacc ggcagctgga cggccgcgtg ctgctgaaca cgacggtggc gcccctgttc    720

tttgcggacc agttccttca gctgtccacc tcgctgccct cgcagtatat cacaggcctc    780

gccgagcacc tcagtcccct gatgctcagc accagctgga ccaggatcac cctgtggaac    840

cgggaccttg cgcccacgcc cggtgcgaac ctctacgggt ctcacccttt ctacctggcg    900

ctggaggacg gcgggtcggc acacggggtg ttcctgctaa acagcaatgc catggatgtg    960

gtcctgcagc cgagccctgc ccttagctgg aggtcgacag gtgggatcct ggatgtctac    1020

atcttcctgg gcccagagcc caagagcgtg gtgcagcagt acctggacgt tgtgggatac    1080

ccgttcatgc cgccatactg gggcctgggc ttccacctgt gccgctgggg ctactcctcc    1140

accgctatca cccgccaggt ggtggagaac atgaccaggg cccacttccc cctggacgtc    1200

caatggaacg acctggacta catggactcc cggagggact tcacgttcaa caaggatggc    1260

ttccgggact tcccggccat ggtgcaggag ctgcaccagg gcggccggcg ctacatgatg    1320

atcgtggatc ctgccatcag cagctcgggc cctgccggga gctacaggcc ctacgacgag    1380

ggtctgcgga ggggggtttt catcaccaac gagaccggcc agccgctgat tgggaaggta    1440

tggcccgggt ccactgcctt ccccgacttc accaacccca cagccctggc ctggtgggag    1500

gacatggtgg ctgagttcca tgaccaggtg cccttcgacg gcatgtggat tgacatgaac    1560

gagccttcca acttcatcag gggctctgag gacggctgcc ccaacaatga gctggagaac    1620

ccaccctacg tgcctggggt ggttgggggg accctccagg cggcaaccat ctgtgcctcc    1680

agccaccagt ttctctccac acactacaac ctgcacaacc tctacggcct gaccgaagcc    1740

atcgcctccc acagggcgct ggtgaaggct cgggggacac gcccatttgt gatctcccgc    1800

tcgacctttg ctggccacgg ccgatacgcc ggccactgga cgggggacgt gtggagctcc    1860

tgggagcagc tcgcctcctc cgtgccagaa atcctgcagt ttaacctgct gggggtgcct    1920

ctggtcgggg ccgacgtctg cggcttcctg ggcaacacct cagaggagct gtgtgtgcgc    1980

tggacccagc tgggggcctt ctaccccttc atgcggaacc acaacagcct gctcagtctg    2040

ccccaggagc cgtacagctt cagcgagccg gcccagcagg ccatgaggaa ggccctcacc    2100

ctgcgctacg cactcctccc ccacctctac acgctgttcc accaggccca cgtcgcgggg    2160

gagaccgtgg cccggcccct cttcctggag ttccccaagg actctagcac ctggactgtg    2220

gaccaccagc tcctgtgggg ggaggccctg ctcatcaccc cagtgctcca ggccgggaag    2280

gccgaagtga ctggctactt ccccttgggc acatggtacg acctgcagac ggtgccaata    2340

gaggcccttg gcagcctccc acccccacct ggcgcgccgc tgtgcggcgg ggagctggtg    2400

gacaccctcc agttcgtctg tggggaccgc ggcttctact tcagcaggcc cgcaagccgt    2460

gtgagccgtc gcagccgtgg catcgttgag gagtgctgtt tccgcagctg tgacctggcc    2520

ctcctggaga cgtactgtgc tacccccgcc aagtccgcga ggtccgtgtc gacccctccg    2580

accgtgcttc cggacaactt ccccagatac cccgtgggca agttcttcca atatgacacc    2640

tggaagcagt ccacccagcg cctgcgcagg ggcctgcctg ccctcctgcg tgcccgccgg    2700

ggtcacgtgc tcgccaagga gctcgaggcg ttcagggagg ccaaacgtca ccgtcccctg    2760

attgctctac ccacccaaga ccccgcccac gggggcgccc ccccagagat ggccagcaat    2820

cggaagggcg cgccggcagc tccccgtgag ccagccatcc acagcgaggg gcagtgggtg    2880

acgctgccgg cccccctgga caccatcaac gtccacctcc gggctgggta catcatcccc    2940

ctgcagggcc ctggcctcac aaccacagag tcccgccagc agcccatggc cctggctgtg    3000

gccctgacca agggtggaga ggcccgaggg gagctgttct gggacgatgg agagagcctg    3060

gaagtgctgg agcgaggggc ctacacacag gtcatcttcc tggccaggaa taacacgatc    3120

gtgaatgagc tggtacgtgt gaccagtgag ggagctggcc tgcagctgca gaaggtgact    3180

gtcctgggcg tggccacggc gccccagcag gtcctctcca acggtgtccc tgtctccaac    3240

ttcacctaca gccccgacac caaggtcctg gacatctgtg tctcgctgtt gatgggagag    3300

cagtttctcg tcagctggtg ttag                                           3324

<210>41

<211>1107

<212>PRT

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>Amino Acid sequence of pCEP-GAA-791IGF2-P2/P1

<400>41

Met Gly Val Arg His Pro Pro Cys Ser His Arg Leu Leu Ala Val Cys

1               5                   10                  15

Ala Leu Val Ser Leu Ala Thr Ala Ala Leu Leu Gly His Ile Leu Leu

            20                  25                  30

His Asp Phe Leu Leu Val Pro Arg Glu Leu Ser Gly Ser Ser Pro Val

        35                  40                  45

Leu Glu Glu Thr His Pro Ala His Gln Gln Gly Ala Ser Arg Pro Gly

    50                  55                  60

Pro Arg Asp Ala Gln Ala His Pro Gly Arg Pro Arg Ala Val Pro Thr

65                  70                  75                  80

Gln Cys Asp Val Pro Pro Asn Ser Arg Phe Asp Cys Ala Pro Asp Lys

                85                  90                  95

Ala Ile Thr Gln Glu Gln Cys Glu Ala Arg Gly Cys Cys Tyr Ile Pro

            100                 105                 110

Ala Lys Gln Gly Leu Gln Gly Ala Gln Met Gly Gln Pro Trp Cys Phe

        115                 120                 125

Phe Pro Pro Ser Tyr Pro Ser Tyr Lys Leu Glu Asn Leu Ser Ser Ser

    130                 135                 140

Glu Met Gly Tyr Thr Ala Thr Leu Thr Arg Thr Thr Pro Thr Phe Phe

145                150                 155                 160

Pro Lys Asp Ile Leu Thr Leu Arg Leu Asp Val Met Met Glu Thr Glu

                165                 170                 175

Asn Arg Leu His Phe Thr Ile Lys Asp Pro Ala Asn Arg Arg Tyr Glu

            180                 185                 190

Val Pro Leu Glu Thr Pro Arg Val His Ser Arg Ala Pro Ser Pro Leu

        195                 200                 205

Tyr Ser Val Glu Phe Ser Glu Glu Pro Phe Gly Val Ile Val His Arg

    210                 215                 220

Gln Leu Asp Gly Arg Val Leu Leu Asn Thr Thr Val Ala Pro Leu Phe

225                 230                 235                 240

Phe Ala Asp Gln Phe Leu Gln Leu Ser Thr Ser Leu Pro Ser Gln Tyr

                245                 250                 255

Ile Thr Gly Leu Ala Glu His Leu Ser Pro Leu Met Leu Ser Thr Ser

            260                 265                 270

Trp Thr Arg Ile Thr Leu Trp Asn Arg Asp Leu Ala Pro Thr Pro Gly

        275                 280                 285

Ala Asn Leu Tyr Gly Ser His Pro Phe Tyr Leu Ala Leu Glu Asp Gly

    290                 295                 300

Gly Ser Ala His Gly Val Phe Leu Leu Asn Ser Asn Ala Met Asp Val

305                 310                 315                 320

Val Leu Gln Pro Ser Pro Ala Leu Ser Trp Arg Ser Thr Gly Gly Ile

                325                 330                 335

Leu Asp Val Tyr Ile Phe Leu Gly Pro Glu Pro Lys Ser Val Val Gln

            340                 345                 350

Gln Tyr Leu Asp Val Val Gly Tyr Pro Phe Met Pro Pro Tyr Trp Gly

        355                 360                 365

Leu Gly Phe His Leu Cys Arg Trp Gly Tyr Ser Ser Thr Ala Ile Thr

    370                 375                 380

Arg Gln Val Val Glu Asn Met Thr Arg Ala His Phe Pro Leu Asp Val

385                 390                 395                 400

Gln Trp Asn Asp Leu Asp Tyr Met Asp Ser Arg Arg Asp Phe Thr Phe

                405                 410                 415

Asn Lys Asp Gly Phe Arg Asp Phe Pro Ala Met Val Gln Glu Leu His

            420                 425                 430

Gln Gly Gly Arg Arg Tyr Met Met Ile Val Asp Pro Ala Ile Ser Ser

        435                 440                 445

Ser Gly Pro Ala Gly Ser Tyr Arg Pro Tyr Asp Glu Gly Leu Arg Arg

    450                 455                 460

Gly Val Phe Ile Thr Asn Glu Thr Gly Gln Pro Leu Ile Gly Lys Val

465                 470                 475                 480

Trp Pro Gly Ser Thr Ala Phe Pro Asp Phe Thr Asn Pro Thr Ala Leu

                485                 490                 495

Ala Trp Trp Glu Asp Met Val Ala Glu Phe His Asp Gln Val Pro Phe

            500                 505                 510

Asp Gly Met Trp Ile Asp Met Asn Glu Pro Ser Asn Phe Ile Arg Gly

        515                 520                 525

Ser Glu Asp Gly Cys Pro Asn Asn Glu Leu Glu Asn Pro Pro Tyr Val

    530                 535                 540

Pro Gly Val Val Gly Gly Thr Leu Gln Ala Ala Thr Ile Cys Ala Ser

545                 550                 555                 560

Ser His Gln Phe Leu Ser Thr His Tyr Asn Leu His Asn Leu Tyr Gly

                565                 570                 575

Leu Thr Glu Ala Ile Ala Ser His Arg Ala Leu Val Lys Ala Arg Gly

            580                 585                 590

Thr Arg Pro Phe Val Ile Ser Arg Ser Thr Phe Ala Gly His Gly Arg

        595                 600                 605

Tyr Ala Gly His Trp Thr Gly Asp Val Trp Ser Ser Trp Glu Gln Leu

    610                 615                 620

Ala Ser Ser Val Pro Glu Ile Leu Gln Phe Asn Leu Leu Gly Val Pro

625                 630                 635                 640

Leu Val Gly Ala Asp Val Cys Gly Phe Leu Gly Asn Thr Ser Glu Glu

                645                 650                 655

Leu Cys Val Arg Trp Thr Gln Leu Gly Ala Phe Tyr Pro Phe Met Arg

           660                 665                 670

Asn His Asn Ser Leu Leu Ser Leu Pro Gln Glu Pro Tyr Ser Phe Ser

        675                 680                 685

Glu Pro Ala Gln Gln Ala Met Arg Lys Ala Leu Thr Leu Arg Tyr Ala

    690                 695                 700

Leu Leu Pro His Leu Tyr Thr Leu Phe His Gln Ala His Val Ala Gly

705                 710                 715                 720

Glu Thr Val Ala Arg Pro Leu Phe Leu Glu Phe Pro Lys Asp Ser Ser

                 725                 730                 735

Thr Trp Thr Val Asp His Gln Leu Leu Trp Gly Glu Ala Leu Leu Ile

            740                 745                 750

Thr Pro Val Leu Gln Ala Gly Lys Ala Glu Val Thr Gly Tyr Phe Pro

        755                 760                 765

Leu Gly Thr Trp Tyr Asp Leu Gln Thr Val Pro Ile Glu Ala Leu Gly

    770                 775                 780

Ser Leu Pro Pro Pro Pro Gly Ala Pro Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val

785                 790                 795                 800

Asp Thr Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Arg

                805                 810                 815

Pro Ala Ser Arg Val Ser Arg Arg Ser Arg Gly Ile Val Glu Glu Cys

            820                 825                 830

Cys Phe Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu Glu Thr Tyr Cys Ala Thr

        835                 840                 845

Pro Ala Lys Ser Ala Arg Ser Val Ser Thr Pro Pro Thr Val Leu Pro

    850                 855                 860

Asp Asn Phe Pro Arg Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Gln Tyr Asp Thr

865                 870                 875                 880

Trp Lys Gln Ser Thr Gln Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Leu Leu

                885                 890                 895

Arg Ala Arg Arg Gly His Val Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Phe Arg

            900                 905                 910

Glu Ala Lys Arg His Arg Pro Leu Ile Ala Leu Pro Thr Gln Asp Pro

        915                 920                 925

Ala His Gly Gly Ala Pro Pro Glu Met Ala Ser Asn Arg Lys Gly Ala

    930                 935                 940

Pro Ala Ala Pro Arg Glu Pro Ala Ile His Ser Glu Gly Gln Trp Val

945                 950                 955                 960

Thr Leu Pro Ala Pro Leu Asp Thr Ile Asn Val His Leu Arg Ala Gly

                965                 970                 975

Tyr Ile Ile Pro Leu Gln Gly Pro Gly Leu Thr Thr Thr Glu Ser Arg

            980                 985                 990

Gln Gln Pro Met Ala Leu Ala Val Ala Leu Thr Lys Gly Gly Glu Ala

        995                 1000                 1005

Arg Gly Glu Leu Phe Trp Asp Asp Gly Glu Ser Leu Glu Val Leu

    1010                1015                1020

Glu Arg Gly Ala Tyr Thr Gln Val Ile Phe Leu Ala Arg Asn Asn

    1025                1030                1035

Thr Ile Val Asn Glu Leu Val Arg Val Thr Ser Glu Gly Ala Gly

    1040                1045                1050

Leu Gln Leu Gln Lys Val Thr Val Leu Gly Val Ala Thr Ala Pro

    1055                1060                1065

Gln Gln Val Leu Ser Asn Gly Val Pro Val Ser Asn Phe Thr Tyr

    1070                1075                1080

Ser Pro Asp Thr Lys Val Leu Asp Ile Cys Val Ser Leu Leu Met

    1085                1090                1095

Gly Glu Gln Phe Leu Val Ser Trp Cys

    1100                1105

<210>42

<211>31

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>A forward primer with 5′AscI site

<400>42

gcggcgcgcc ggcttcatcc ttcagatctg c    31

<210>43

<211>31

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>A reverse primer with 3′NotI site

<400>43

ggcggccgcc taggaccagc tgatttgaaa c    31

<210>44

<211>30

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>A forward primer with 5′AscI site

<400>44

gcggcgcgcc ggctgtccag agcaaggggc      30

<210>45

<211>31

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>A reverse primer with 3’NotI site

<400>45

ggcggccgcc taggaccagc tgatttgaaa c         31

<210>46

<211>32

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>A forward primer with 5′AscI site

<400>46

gcggcgcgcc gcacctgagg gaggggtaca tc        32

<210>47

<211>31

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>A reverse primer with 3′NotI site

<400>47

ggcggccgcc  taggaccagc tgatttgaaa c        31

<210>48

<211>32

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>A forward primer with 5′AscI site

<400>48

gcggcgcgcc gaacaatacc attgtgaaca ag        32

<210>49

<211>31

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>A reverse primer with 3′NotI site

<400>49

ggcggccgcc taggaccagctgatttgaaa c      31

<210>50

<211>32

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>A forward primer with 5′AscI site

<400>50

gcggcgcgcc gatccctgtc tccaatttca cc    32

<210>51

<211>31

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>A reverse primer with 3′NotI site

<400>51

ggcggccgcc taggaccagc tgatttgaaa c     31

<210>52

<211>2862

<212>DNA

<213>Mus sp.

<400>52

atgaatatac ggaagcccct ctgttcgaac tccgtggttg gggcctgcac ccttatctct    60

ctgactacag cggtcatcct gggtcatctc atgcttcggg agttaatgct gcttccccaa    120

gaccttcatg agtcctcttc aggactgtgg aagacgtacc gacctcacca ccaggaaggt    180

tacaagccag ggcctctgca catccaggag cagactgaac agcccaaaga agcacccaca    240

cagtgtgatg tgccccccag cagccgcttt gactgtgccc ccgacaaagg catctcacag    300

gagcaatgcg aggcccgcgg ctgctgctat gtcccagcag ggcaggtgct gaaggagccg    360

cagatagggc agccctggtg tttcttccct cccagctacc caagctaccg tctagagaac    420

ctgagctcta cagagtcggg gtacacagcc accctgaccc gtaccagccc gaccttcttc    480

ccaaaggatg tgctgacctt acagctggag gtgctgatgg agacagacag ccgcctccac    540

ttcaagatca aagatcctgc tagtaagcgc tacgaagtgc ccctggagac cccacgtgtg    600

ctgagccagg caccatcccc actttacagc gtggaattct cagaggaacc ctttggagtg    660

atcgttcgta ggaagcttgg tggccgagtg ttgctgaaca caaccgtggc ccccctgttc    720

ttcgctgacc agttcctgca gctgtccact tccctgccct cccagcacat cacaggcctg    780

ggggaacacc tcagcccact catgctcagc accgactggg ctcgtatcac cctctggaac    840

cgggacacac caccctcgca aggtaccaac ctctacgggt cacatccttt ctacctggca    900

ctggaggacg gtggcttggc tcacggtgtc ttcttgctaa acagcaatgc catggatgtc    960

atcctgcaac ccagcccagc cctaacctgg aggtcaacgg gcgggatcct ggatgtgtat    1020

gtgttcctag gcccagagcc caagagcgtt gtgcaacaat acctggatgt tgtgggatac    1080

cccttcatgc ctccatactg gggcctcggc ttccacctct gccgctgggg ctactcctcg    1140

accgccattg tccgccaggt agtggagaac atgaccagga cacacttccc gctggatgtg    1200

caatggaatg acctggacta catggacgcc cgaagagact tcaccttcaa ccaggacagc    1260

tttgccgact tcccagacat ggtgcgggag ctgcaccagg gtggccggcg ctacatgatg    1320

atcgtggacc ctgccatcag cagcgcaggc cctgctggga gttacaggcc ctacgacgag    1380

ggtctgcgga ggggtgtgtt catcaccaac gagactgggc agccgctgat tgggaaggtt    1440

tggcccggaa ccaccgcctt ccctgatttc accaaccctg agacccttga ctggtggcag    1500

gacatggtgt ctgagttcca cgcccaggtg cccttcgatg gcatgtggct cgacatgaac    1560

gaaccgtcca acttcgttag aggctctcag cagggctgcc ccaacaatga actggagaac    1620

cccccctatg tgcccggggt ggttggcggg atcttgcagg cagccaccat ctgtgcctcc    1680

agccaccaat tcctctccac acactacaac ctccacaacc tgtacggcct cactgaagct    1740

atcgcctcca gcagggccct ggtcaagact cggggaacac gaccctttgt gatctcccgc    1800

tcaaccttct cgggccacgg ccggtacgct ggtcactgga caggggatgt gcggagctct    1860

tgggagcatc ttgcatactc tgtgccagac atcctgcagt tcaacctgct gggcgtgccc    1920

ctggtcgggg cggacatctg cggcttcata ggagacacgt cagaagagct gtgtgtgcgc    1980

tggacccagt tgggggcctt ctaccccttc atgcggaacc acaatgacct gaatagcgtg    2040

cctcaggagc cgtacaggtt cagcgagacg gcgcagcagg ccatgaggaa ggccttcgcc    2100

ttacgctatg cccttctgcc ctacctgtac actctcttcc accgcgccca cgtcagagga    2160

gacacggtgg cccggcccct cttcctggag ttccctgagg atcccagcac ctggtctgtg    2220

gaccgccagc tcttgtgggg gccggccctg ctcatcacac ctgtgcttga gcctgggaaa    2280

actgaagtga cgggctactt ccccaagggc acgtggtaca acatgcaggt ggtgtcagtg    2340

gattccctcg gtactctccc ttctccatca tcggcttcat ccttcagatc tgctgtccag    2400

agcaaggggc agtggctgac actggaagcc ccactggata ccatcaacgt gcacctgagg    2460

gaggggtaca tcataccgct gcagggtccc agcctcacaa ccacggagtc ccgaaagcag    2520

cccatggctc tggctgtggc attaacagca agcggcgagg ccgatgggga gctgttctgg    2580

gacgacgggg agagccttgc agttctggag cgtggggcct acacactggt caccttctca    2640

gccaagaaca ataccattgt gaacaagtta gtgcgtgtga ccaaggaggg agctgagcta    2700

caactgaggg aggtgaccgt cttgggagtg gccacagctc ctacccaggt cctttccaac    2760

ggcatccctg tctccaattt cacctacagc cctgacaaca agagcctggc catccctgtc    2820

tcactgctga tgggagagct gtttcaaatc agctggtcct ag                       2862

<210>53

<211>953

<212>PRT

<213>Mus sp.

<400>53

Met Asn Ile Arg Lys Pro Leu Cys Ser Asn Ser Val Val Gly Ala Cys

1               5                   10                  15

Thr Leu Ile Ser Leu Thr Thr Ala Val Ile Leu Gly His Leu Met Leu

            20                  25                  30

Arg Glu Leu Met Leu Leu Pro Gln Asp Leu His Glu Ser Ser Ser Gly

        35                  40                  45

Leu Trp Lys Thr Tyr Arg Pro His His Gln Glu Gly Tyr Lys Pro Gly

    50                  55                  60

Pro Leu His Ile Gln Glu Gln Thr Glu Gln Pro Lys Glu Ala Pro Thr

65                  70                  75                  80

Gln Cys Asp Val Pro Pro Ser Ser Arg Phe Asp Cys Ala Pro Asp Lys

                85                  90                  95

Gly Ile Ser Gln Glu Gln Cys Glu Ala Arg Gly Cys Cys Tyr Val Pro

           100                 105                 110

Ala Gly Gln Val Leu Lys Glu Pro Gln Ile Gly Gln Pro Trp Cys Phe

        115                 120                 125

Phe Pro Pro Ser Tyr Pro Ser Tyr Arg Leu Glu Asn Leu Ser Ser Thr

    130                 135                 140

Glu Ser Gly Tyr Thr Ala Thr Leu Thr Arg Thr Ser Pro Thr Phe Phe

145                 150                 155                 160

Pro Lys Asp Val Leu Thr Leu Gln Leu Glu Val Leu Met Glu Thr Asp

                165                 170                 175

Ser Arg Leu His Phe Lys Ile Lys Asp Pro Ala Ser Lys Arg Tyr Glu

            180                 185                 190

Val Pro Leu Glu Thr Pro Arg Val Leu Ser Gln Ala Pro Ser Pro Leu

        195                 200                 205

Tyr Ser Val Glu Phe Ser Glu Glu Pro Phe Gly Val Ile Val Arg Arg

    210                 215                 220

Lys Leu Gly Gly Arg Val Leu Leu Asn Thr Thr Val Ala Pro Leu Phe

225                 230                 235                 240

Phe Ala Asp Gln Phe Leu Gln Leu Ser Thr Ser Leu Pro Ser Gln His

                245                 250                 255

Ile Thr Gly Leu Gly Glu His Leu Ser Pro Leu Met Leu Ser Thr Asp

            260                 265                 270

Trp Ala Arg Ile Thr Leu Trp Asn Arg Asp Thr Pro Pro Ser Gln Gly

        275                 280                 285

Thr Asn Leu Tyr Gly Ser His Pro Phe Tyr Leu Ala Leu Glu Asp Gly

    290                 295                 300

Gly Leu Ala His Gly Val Phe Leu Leu Asn Ser Asn Ala Met Asp Val

305                 310                 315                 320

Ile Leu Gln Pro Ser Pro Ala Leu Thr Trp Arg Ser Thr Gly Gly Ile

                325                 330                 335

Leu Asp Val Tyr Val Phe Leu Gly Pro Glu Pro Lys Ser Val Val Gln

            340                 345                 350

Gln Tyr Leu Asp Val Val Gly Tyr Pro Phe Met Pro Pro Tyr Trp Gly

        355                 360                 365

Leu Gly Phe His Leu Cys Arg Trp Gly Tyr Ser Ser Thr Ala Ile Val

    370                 375                 380

Arg Gln Val Va1 Glu Asn Met Thr Arg Thr His Phe Pro Leu Asp Val

385                 390                 395                 400

Gln Trp Asn Asp Leu Asp Tyr Met Asp Ala Arg Arg Asp Phe Thr Phe

                405                 410                 415

Asn Gln Asp Ser Phe Ala Asp Phe Pro Asp Met Val Arg Glu Leu His

            420                 425                 430

Gln Gly Gly Arg Arg Tyr Met Met Ile Val Asp Pro Ala Ile Ser Ser

        435                 440                 445

Ala Gly Pro Ala Gly Ser Tyr Arg Pro Tyr Asp Glu Gly Leu Arg Arg

    450                 455                 460

Gly Val Phe Ile Thr Asn Glu Thr Gly Gln Pro Leu Ile Gly Lys Val

465                 470                 475                 480

Trp Pro Gly Thr Thr Ala Phe Pro Asp Phe Thr Asn Pro Glu Thr Leu

                485                 490                 495

Asp Trp Trp Gln Asp Met Val Ser Glu Phe His Ala Gln Val Pro Phe

            500                 505                 510

Asp Gly Met Trp Leu Asp Met Asn Glu Pro Ser Asn Phe Val Arg Gly

        515                 520                 525

Ser Gln Gln Gly Cys Pro Asn Asn Glu Leu Glu Asn Pro Pro Tyr Val

    530                 535                 540

Pro Gly Val Val Gly Gly Ile Leu Gln Ala Ala Thr Ile Cys Ala Ser

545                 550                 555                 560

Ser His Gln Phe Leu Ser Thr His Tyr Asn Leu His Asn Leu Tyr Gly

                565                 570                 575

Leu Thr Glu Ala Ile Ala Ser Ser Arg Ala Leu Val Lys Thr Arg Gly

            580                 585                 590

Thr Arg Pro Phe Val Ile Ser Arg Ser Thr Phe Ser Gly His Gly Arg

            595                 600                 605

Tyr Ala Gly His Trp Thr Gly Asp Val Arg Ser Ser Trp Glu His Leu

    610                 615                 620

Ala Tyr Ser Val Pro Asp Ile Leu Gln Phe Asn Leu Leu Gly Val Pro

625                 630                 635                 640

Leu Val Gly Ala Asp Ile Cys Gly Phe Ile Gly Asp Thr Ser Glu Glu

                645                 650                 655

Leu Cys Val Arg Trp Thr Gln Leu Gly Ala Phe Tyr Pro Phe Met Arg

            660                 665                 670

Asn His Asn Asp Leu Asn Ser Val Pro Gln Glu Pro Tyr Arg Phe Ser

        675                 680                 685

Glu Thr Ala Gln Gln Ala Met Arg Lys Ala Phe Ala Leu Arg Tyr Ala

    690                 695                 700

Leu Leu Pro Tyr Leu Tyr Thr Leu Phe His Arg Ala His Val Arg Gly

705                 710                 715                 720

Asp Thr Val Ala Arg Pro Leu Phe Leu Glu Phe Pro Glu Asp Pro Ser

                725                 730                 735

Thr Trp Ser Val Asp Arg Gln Leu Leu Trp Gly Pro Ala Leu Leu Ile

            740                 745                 750

Thr Pro Val Leu Glu Pro Gly Lys Thr Glu Val Thr Gly Tyr Phe Pro

        755                 760                 765

Lys Gly Thr Trp Tyr Asn Met Gln Val Val Ser Val Asp Ser Leu Gly

    770                 775                 780

Thr Leu Pro Ser Pro Ser Ser Ala Ser Ser Phe Arg Ser Ala Val Gln

785                 790                 795                 800

Ser Lys Gly Gln Trp Leu Thr Leu Glu Ala Pro Leu Asp Thr Ile Asn

                805                 810                 815

Val His Leu Arg Glu Gly Tyr Ile Ile Pro Leu Gln Gly Pro Ser Leu

            820                 825                 830

Thr Thr Thr Glu Ser Arg Lys Gln Pro Met Ala Leu Ala Val Ala Leu

        835                 840                 845

Thr Ala Ser Gly Glu Ala Asp Gly Glu Leu Phe Trp Asp Asp Gly Glu

    850                 855                 860

Ser Leu Ala Val Leu Glu Arg Gly Ala Tyr Thr Leu Val Thr Phe Ser

865                 870                 875                 880

Ala Lys Asn Asn Thr Ile Val Asn Lys Leu Val Arg Val Thr Lys Glu

                885                 890                 895

Gly Ala Glu Leu Gln Leu Arg Glu Val Thr Val Leu Gly Val Ala Thr

            900                 905                 910

Ala Pro Thr Gln Val Leu Ser Asn Gly Ile Pro Val Ser Asn Phe Thr

        915                 920                 925

Tyr Ser Pro Asp Asn Lys Ser Leu Ala Ile Pro Val Ser Leu Leu Met

    930                 935                 940

Gly Glu Leu Phe Gln Ile Ser Trp Ser

945                 950

<210>54

<211>952

<212>PRT

<213>Homo sapiens

<400>54

Met Gly Val Arg His Pro Pro Cys Ser His Arg Leu Leu Ala Val Cys

1               5                   10                  15

Ala Leu Val Ser Leu Ala Thr Ala Ala Leu Leu Gly His Ile Leu Leu

            20                  25                  30

His Asp Phe Leu Leu Val Pro Arg Glu Leu Ser Gly Ser Ser Pro Val

        35                  40                  45

Leu Glu Glu Thr His Pro Ala His Gln Gln Gly Ala Ser Arg Pro Gly

    50                  55                  60

Pro Arg Asp Ala Gln Ala His Pro Gly Arg Pro Arg Ala Val Pro Thr

65                  70                  75                  80

Gln Cys Asp Val Pro Pro Asn Ser Arg Phe Asp Cys Ala Pro Asp Lys

                85                  90                  95

Ala Ile Thr Gln Glu Gln Cys Glu Ala Arg Gly Cys Cys Tyr Ile Pro

            100                 105                 110

Ala Lys Gln Gly Leu Gln Gly Ala Gln Met Gly Gln Pro Trp Cys Phe

        115                 120                 125

Phe Pro Pro Ser Tyr Pro Ser Tyr Lys Leu Glu Asn Leu Ser Ser Ser

    130                 135                 140

Glu Met Gly Tyr Thr Ala Thr Leu Thr Arg Thr Thr Pro Thr Phe Phe

145                 150                 155                 160

Pro Lys Asp Ile Leu Thr Leu Arg Leu Asp Val Met Met Glu Thr Glu

                165                 170                 175

Asn Arg Leu His Phe Thr Ile Lys Asp Pro Ala Asn Arg Arg Tyr Glu

            180                 185                 190

Val Pro Leu Glu Thr Pro Arg Val His Ser Arg Ala Pro Ser Pro Leu

        195                 200                 205

Tyr Ser Val Glu Phe Ser Glu Glu Pro Phe Gly Val Ile Val His Arg

    210                 215                 220

Gln Leu Asp Gly Arg Val Leu Leu Asn Thr Thr Val Ala Pro Leu Phe

225                 230                 235                 240

Phe Ala Asp Gln Phe Leu Gln Leu Ser Thr Ser Leu Pro Ser Gln Tyr

                245                 250                 255

Ile Thr Gly Leu Ala Glu His Leu Ser Pro Leu Met Leu Ser Thr Ser

            260                 265                 270

Trp Thr Arg Ile Thr Leu Trp Asn Arg Asp Leu Ala Pro Thr Pro Gly

        275                 280                 285

Ala Asn Leu Tyr Gly Ser His Pro Phe Tyr Leu Ala Leu Glu Asp Gly

    290                 295                 300

Gly Ser Ala His Gly Val Phe Leu Leu Asn Ser Asn Ala Met Asp Val

305                 310                 315                 320

Val Leu Gln Pro Ser Pro Ala Leu Ser Trp Arg Ser Thr Gly Gly Ile

                325                 330                 335

Leu Asp Val Tyr Ile Phe Leu Gly Pro Glu Pro Lys Ser Val Val Gln

            340                 345                 350

Gln Tyr Leu Asp Val Val Gly Tyr Pro Phe Met Pro Pro Tyr Trp Gly

        355                 360                 365

Leu Gly Phe His Leu Cys Arg Trp Gly Tyr Ser Ser Thr Ala Ile Thr

    370                 375                 380

Arg Gln Val Val Glu Asn Met Thr Arg Ala His Phe Pro Leu Asp Val

385                 390                 395                 400

Gln Trp Asn Asp Leu Asp Tyr Met Asp Ser Arg Arg Asp Phe Thr Phe

                405                 410                 415

Asn Lys Asp Gly Phe Arg Asp Phe Pro Ala Met Val Gln Glu Leu His

            420                 425                 430

Gln Gly Gly Arg Arg Tyr Met Met Ile Val Asp Pro Ala Ile Ser Ser

        435                 440                 445

Ser Gly Pro Ala Gly Ser Tyr Arg Pro Tyr Asp Glu Gly Leu Arg Arg

    450                 455                 460

Gly Val Phe Ile Thr Asn Glu Thr Gly Gln Pro Leu Ile Gly Lys Val

465                 470                 475                 480

Trp Pro Gly Ser Thr Ala Phe Pro Asp Phe Thr Asn Pro Thr Ala Leu

                 485                 490                 495

Ala Trp Trp Glu Asp Met Val Ala Glu Phe His Asp Gln Val Pro Phe

            500                 505                 510

Asp Gly Met Trp Ile Asp Met Asn Glu Pro Ser Asn Phe Ile Arg Gly

        515                 520                 525

Ser Glu Asp Gly Cys Pro Asn Asn Glu Leu Glu Asn Pro Pro Tyr Val

    530                 535                 540

Pro Gly Val Val Gly Gly Thr Leu Gln Ala Ala Thr Ile Cys Ala Ser

545                 550                 555                 560

Ser His Gln Phe Leu Ser Thr His Tyr Asn Leu His Asn Leu Tyr Gly

                565                 570                 575

Leu Thr Glu Ala Ile Ala Ser His Arg Ala Leu Val Lys Ala Arg Gly

            580                 585                 590

Thr Arg Pro Phe Val Ile Ser Arg Ser Thr Phe Ala Gly His Gly Arg

        595                 600                 605

Tyr Ala Gly His Trp Thr Gly Asp Val Trp Ser Ser Trp Glu Gln Leu

    610                 615                 620

Ala Ser Ser Val Pro Glu Ile Leu Gln Phe Asn Leu Leu Gly Val Pro

625                 630                 635                 640

Leu Val Gly Ala Asp Val Cys Gly Phe Leu Gly Asn Thr Ser Glu Glu

                645                 650                 655

Leu Cys Val Arg Trp Thr Gln Leu Gly Ala Phe Tyr Pro Phe Met Arg

            660                 665                 670

Asn His Asn Ser Leu Leu Ser Leu Pro Gln Glu Pro Tyr Ser Phe Ser

        675                 680                 685

Glu Pro Ala Gln Gln Ala Met Arg Lys Ala Leu Thr Leu Arg Tyr Ala

    690                 695                 700

Leu Leu Pro His Leu Tyr Thr Leu Phe His Gln Ala His Val Ala Gly

705                 710                 715                 720

Glu Thr Val Ala Arg Pro Leu Phe Leu Glu Phe Pro Lys Asp Ser Ser

                725                 730                 735

Thr Trp Thr Val Asp His Gln Leu Leu Trp Gly Glu Ala Leu Leu Ile

            740                 745                 750

Thr Pro Val Leu Gln Ala Gly Lys Ala Glu Val Thr Gly Tyr Phe Pro

        755                 760                 765

Leu Gly Thr Trp Tyr Asp Leu Gln Thr Val Pro Ile Glu Ala Leu Gly

    770                 775                 780

Ser Leu Pro Pro Pro Pro Ala Ala Pro Arg Glu Pro Ala Ile His Ser

785                 790                 795                 800

Glu Gly Gln Trp Val Thr Leu Pro Ala Pro Leu Asp Thr Ile Asn Val

                805                 810                 815

His Leu Arg Ala Gly Tyr Ile Ile Pro Leu Gln Gly Pro Gly Leu Thr

            820                 825                 830

Thr Thr Glu Ser Arg Gln Gln Pro Met Ala Leu Ala Val Ala Leu Thr

        835                 840                 845

Lys Gly Gly Glu Ala Arg Gly Glu Leu Phe Trp Asp Asp Gly Glu Ser

    850                 855                 860

Leu Glu Val Leu Glu Arg Gly Ala Tyr Thr Gln Val Ile Phe Leu Ala

865                 870                 875                 880

Arg Asn Asn Thr Ile Val Asn Glu Leu Val Arg Val Thr Ser Glu Gly

                885                 890                 895

Ala Gly Leu Gln Leu Gln Lys Val Thr Val Leu Gly Val Ala Thr Ala

            900                 905                 910

Pro Gln Gln Val Leu Ser Asn Gly Val Pro Val Ser Asn Phe Thr Tyr

        915                 920                 925

Ser Pro Asp Thr Lys Val Leu Asp Ile Cys Val Ser Leu Leu Met Gly

    930                 935                 940

Glu Gln Phe Leu Val Ser Trp Cys

945                 950

<210>55

<211>937

<212>PRT

<213>Bos taurus

<400>55

Met Met Arg Trp Pro Pro Cys Ser Arg Pro Leu Leu Gly Val Cys Thr

1               5                   10                  15

Leu Leu Ser Leu Ala Leu Leu Gly His Ile Leu Leu His Asp Leu Glu

            20                  25                  30

Val Val Pro Arg Glu Leu Arg Gly Phe Ser Gln Asp Glu Ile His Gln

        35                  40                  45

Ala Cys Gln Pro Gly Ala Ser Ser Pro Glu Cys Arg Gly Ser Pro Arg

    50                  55                  60

Ala Ala Pro Thr Gln Cys Asp Leu Pro Pro Asn Ser Arg Phe Asp Cys

65                  70                  75                  80

Ala Pro Asp Lys Gly Ile Thr Pro Gln Gln Cys Glu Ala Arg Gly Cys

            85                  90                  95

Cys Tyr Met Pro Ala Glu Trp Pro Pro Asp Ala Gln Met Gly Gln Pro

            100                 105                 110

Trp Cys Phe Phe Pro Pro Ser Tyr Pro Ser Tyr Arg Leu Glu Asn Leu

        115                 120                 125

Thr Thr Thr Glu Thr Gly Tyr Thr Ala Thr Leu Thr Arg Ala Val Pro

    130                 135                 140

Thr Phe Phe Pro Lys Asp Ile Met Thr Leu Arg Leu Asp Met Leu Met

145                 150                 155                 160

Glu Thr Glu Ser Arg Leu His Phe Thr Ile Lys Asp Pro Ala Asn Arg

                165                 170                 175

Arg Tyr Glu Val Pro Leu Glu Thr Pro Arg Val Tyr Ser Gln Ala Pro

            180                 185                 190

Phe Thr Leu Tyr Ser Val Glu Phe Ser Glu Glu Pro Phe Gly Val Val

        195                 200                 205

Val Arg Arg Lys Leu Asp Gly Arg Val Leu Leu Asn Thr Thr Val Ala

    210                 215                 220

Pro Leu Phe Phe Ala Asp Gln Phe Leu Gln Leu Ser Thr Ser Leu Pro

225                 230                 235                 240

Ser Gln His Ile Thr Gly Leu Ala Glu His Leu Gly Ser Leu Met Leu

                245                 250                 255

Ser Thr Asn Trp Thr Lys Ile Thr Leu Trp Asn Arg Asp Ile Ala Pro

            260                 265                 270

Glu Pro Asn Val Asn Leu Tyr Gly Ser His Pro Phe Tyr Leu Val Leu

         275                 280                 285

Glu Asp Gly Gly Leu Ala His Gly Val Phe Leu Leu Asn Ser Asn Ala

    290                 295                 300

Met Asp Val Val Leu Gln Pro Ser Pro Ala Leu Ser Trp Arg Ser Thr

305                 310                 315                 320

Gly Gly Ile Leu Asp Val Tyr Ile Phe Leu Gly Pro Glu Pro Lys Ser

                325                 330                 335

Val Val Gln Gln Tyr Leu Asp Val Val Gly Tyr Pro Phe Met Pro Pro

            340                 345                 350

Tyr Trp Gly Leu Gly Phe His Leu Cys Arg Trp Gly Tyr Ser Thr Ser

        355                 360                 365

Ala Ile Thr Arg Gln Val Val Glu Asn Met Thr Arg Ala Tyr Phe Pro

    370                 375                 380

Leu Asp Val Gln Trp Asn Asp Leu Asp Tyr Met Asp Ala Arg Arg Asp

385                 390                 395                 400

Phe Thr Phe Asn Lys Asp His Phe Gly Asp Phe Pro Ala Met Val Gln

                405                 410                 415

Glu Leu His Gln Gly Gly Arg Arg Tyr Ile Met Ile Val Asp Pro Ala

            420                 425                 430

Ile Ser Ser Ser Gly Pro Ala Gly Thr Tyr Arg Pro Tyr Asp Glu Gly

        435                 440                 445

Leu Arg Arg Gly Val Phe Ile Thr Asn Glu Thr Gly Gln Pro Leu Ile

    450                 455                 460

Gly Gln Val Trp Pro Gly Leu Thr Ala Phe Pro Asp Phe Thr Asn Pro

465                 470                 475                 480

Glu Thr Leu Asp Trp Trp Gln Asp Met Val Thr Glu Phe His Ala Gln

                485                 490                 495

Val Pro Phe Asp Gly Met Trp Ile Asp Met Asn Glu Pro Ser Asn Phe

            500                 505                 510

Val Arg Gly Ser Val Asp Gly Cys Pro Asp Asn Ser Leu Glu Asn Pro

        515                 520                 525

Pro Tyr Leu Pro Gly Val Val Gly Gly Thr Leu Arg Ala Ala Thr Ile

    530                 535                 540

Cys Ala Ser Ser His Gln Phe Leu Ser Thr His Tyr Asp Leu His Asn

545                 550                 555                 560

Leu Tyr Gly Leu Thr Glu Ala Leu Ala Ser His Arg Ala Leu Val Lys

                565                 570                 575

Ala Arg Gly Met Arg Pro Phe Val Ile Ser Arg Ser Thr Phe Ala Gly

            580                 585                 590

His Gly Arg Tyr Ser Gly His Trp Thr Gly Asp Val Trp Ser Asn Trp

        595                 600                 605

Glu Gln Leu Ser Tyr Ser Val Pro Glu Ile Leu Leu Phe Asn Leu Leu

    610                 615                 620

Gly Val Pro Leu Val Gly Ala Asp Ile Cys Gly Phe Leu Gly Asn Thr

625                 630                 635                 640

Ser Glu Glu Leu Cys Val Arg Trp Thr Gln Leu Gly Ala Phe Tyr Pro

                645                 650                 655

Phe Met Arg Asn His Asn Ala Leu Asn Ser Gln Pro Gln Glu Pro Tyr

            660                 665                 670

Arg Phe Ser Glu Thr Ala Gln Gln Ala Met Arg Lys Ala Phe Thr Leu

        675                 680                 685

Arg Tyr Val Leu Leu Pro Tyr Leu Tyr Thr Leu Phe His Arg Ala His

    690                 695                 700

Val Arg Gly Glu Thr Val Ala Arg Pro Leu Phe Leu Glu Phe Pro Glu

705                 710                 715                 720

Asp Pro Ser Thr Trp Thr Val Asp Arg Gln Leu Leu Trp Gly Glu Ala

                725                 730                 735

Leu Leu Ile Thr Pro Val Leu Glu Ala Glu Lys Val Glu Val Thr Gly

            740                 745                 750

Tyr Phe Pro Gln Gly Thr Trp Tyr Asp Leu Gln Thr Val Pro Met Glu

        755                 760                 765

Ala Phe Gly Ser Leu Pro Pro Pro Ala Pro Leu Thr Ser Val Ile His

    770                 775                 780

Ser Lys Gly Gln Trp Val Thr Leu Ser Ala Pro Leu Asp Thr Ile Asn

785                 790                 795                 800

Val His Leu Arg Ala Gly His Ile Ile Pro Met Gln Gly Pro Ala Leu

                805                 810                 815

Thr Thr Thr Glu Ser Arg Lys Gln His Met Ala Leu Ala Val Ala Leu

            820                 825                 830

Thr Ala Ser Gly Glu Ala Gln Gly Glu Leu Phe Trp Asp Asp Gly Glu

        835                 840                 845

Ser Leu Gly Val Leu Asp Gly Gly Asp Tyr Thr Gln Leu Ile Phe Leu

    850                 855                 860

Ala Lys Asn Asn Thr Phe Val Asn Lys Leu Val His Val Ser Ser Glu

865                 870                 875                 880

Gly Ala Ser Leu Gln Leu Arg Asn Val Thr Val Leu Gly Val Ala Thr

                885                 890                 895

Ala Pro Gln Gln Val Leu Cys Asn Ser Val Pro Val Ser Asn Phe Thr

            900                 905                 910

Phe Ser Pro Asp Thr Glu Thr Leu Ala Ile Pro Val Ser Leu Thr Met

        915                 920                 925

Gly Glu Gln Phe Val Ile Ser Trp Ser

    930                 935

<210>56

<211>953

<212>PRT

<213>Rattus norvegicus

<400>56

Met Asn Ile Arg Lys Pro Leu Cys Ser Asn Ser Val Val Gly Ala Cys

1               5                   10                  15

Thr Leu Val Ser Leu Thr Thr Ala Val Ile Leu Gly His Leu Met Leu

            20                  25                  30

Arg Glu Leu Met Leu Leu Pro Gln Asp Leu His Glu Ser Ser Ser Gly

        35                  40                  45

Leu Trp Lys Thr Tyr Arg Pro His His Gln Glu Ser Tyr Glu Pro Ala

    50                  55                  60

Pro Leu His Ile Gln Glu His Ala Glu Gln Leu Arg Ala Val Pro Thr

65                  70                  75                  80

Gln Cys Asp Val Thr Pro Asn Ser Arg Phe Asp Cys Ala Pro Asp Lys

                85                  90                  95

Gly Ile Thr Gln Glu Gln Cys Glu Ala Arg Gly Cys Cys Trp Val Pro

            100                 105                 110

Ala Gly Gln Val Leu Asn Gly Pro Val Met Gly Gln Pro Trp Cys Phe

        115                 120                 125

Phe Pro Pro Ser Tyr Pro Ser Tyr Arg Leu Glu Asn Leu Ser Ser Thr

    130                 135                 140

Glu Ser Gly Tyr Thr Ala Thr Leu Thr Arg Thr Ser Pro Thr Phe Phe

145                 150                 155                 160

Pro Lys Asp Val Leu Thr Leu Gln Leu Glu Val Leu Met Glu Thr Asp

              165                 170                 175

Ser Arg Leu His Phe Met Ile Lys Asp Pro Thr Ser Lys Arg Tyr Glu

            180                 185                 190

Val Pro Leu Glu Thr Pro Arg Val Leu Ser Gln Ala Pro Ser Pro Leu

        195                 200                 205

Tyr Ser Val Glu Phe Ser Glu Glu Pro Phe Gly Val Ile Val Arg Arg

    210                 215                 220

Lys Leu Gly Gly Arg Val Leu Leu Asn Thr Thr Val Ala Pro Leu Phe

225                 230                 235                 240

Phe Ala Asp Gln Phe Leu Gln Leu Ser Thr Ser Leu Pro Ser Gln His

                245                 250                 255

Ile Ala Gly Leu Gly Glu His Leu Ser Pro Leu Met Leu Ser Thr Glu

            260                 265                 270

Trp Thr Arg Ile Thr Leu Trp Asn Arg Asp Val Ala Pro Ser Gln Gly

        275                 280                 285

Val Asn Leu Tyr Gly Ser His Pro Phe Tyr Leu Ala Leu Glu Asp Gly

    290                 295                 300

Gly Leu Ala His Gly Val Phe Leu Leu Asn Ser Asn Ala Met Asp Val

305                 310                 315                 320

Val Leu Gln Pro Ser Pro Ala Leu Thr Trp Arg Ser Thr Gly Gly Ile

                325                 330                 335

Leu Asp Val Tyr Val Phe Leu Gly Pro Glu Pro Lys Ser Val Val Gln

            340                 345                 350

Gln Tyr Leu Asp Val Val Gly Tyr Pro Phe Met Pro Pro Tyr Trp Gly

        355                 360                 365

Leu Gly Phe His Leu Cys Arg Trp Gly Tyr Ser Ser Thr Ala Ile Val

    370                 375                 380

Arg Gln Val Val Glu Asn Met Thr Arg Thr His Phe Pro Leu Asp Val

385                 390                 395                 400

Gln Trp Asn Asp Leu Asp Tyr Met Asp Ala Arg Arg Asp Phe Thr Phe

                405                 410                 415

Asn Gln Asp Gly Phe Ala Asp Phe Pro Asp Met Val His Glu Leu His

            420                 425                 430

Gln Gly Gly Arg Arg Tyr Met Met Ile Val Asp Pro Ala Ile Ser Ser

        435                 440                 445

Ser Gly Pro Ala Gly Ser Tyr Arg Pro Tyr Asp Glu Gly Leu Arg Arg

    450                 455                 460

Gly Val Phe Ile Thr Asn Glu Thr Gly Gln Pro Leu Ile Gly Lys Val

465                 470                 475                 480

Trp Pro Gly Ser Thr Ala Phe Pro Asp Phe Thr Asn Pro Glu Thr Leu

                485                 490                 495

Asp Trp Trp Gln Asp Met Val Ser Glu Phe His Ala Gln Val Pro Phe

            500                 505                 510

Asp Gly Met Trp Ile Asp Met Asn Glu Pro Ser Asn Phe Ile Arg Gly

        515                 520                 525

Ser Gln Gln Gly Cys Pro Asp Asn Glu Leu Glu Asn Pro Pro Tyr Val

    530                 535                 540

Pro Gly Val Val Gly Gly Ala Leu Gln Ala Ala Thr Ile Cys Ala Ser

545                 550                 555                 560

Ser His Gln Phe Leu Ser Thr His Tyr Asn Leu His Asn Leu Tyr Gly

                565                 570                 575

Leu Thr Glu Ala Ile Ala Ser Ser Arg Ala Leu Val Lys Thr Arg Gly

            580                 585                 590

Thr Arg Pro Phe Val Ile Ser Arg Ser Thr Phe Ala Gly His Gly Arg

        595                 600                 605

Tyr Ala Gly His Trp Thr Gly Asp Val Trp Ser Ser Trp Glu His Leu

    610                 615                 620

Ala Tyr Ser Val Pro Glu Ile Leu Gln Phe Asn Leu Leu Gly Val Pro

625                 630                 635                 640

Leu Val Gly Ala Asp Ile Cys Gly Phe Gln Gly Asn Thr Thr Glu Glu

                645                 650                 655

Leu Cys Val Arg Trp Thr Gln Leu Gly Ala Phe Tyr Pro Phe Met Arg

            660                 665                 670

Asn His Asn Asp Leu Asn Ser Leu Pro Gln Glu Pro Tyr Arg phe Ser

        675                 680                 685

Glu Thr Ala Gln Gln Ala Met Arg Lys Ala Phe Thr Leu Arg Tyr Ala

    690                 695                 700

Leu Leu Pro Tyr Leu Tyr Thr Leu Phe His Gly Ala His Val Lys Gly

705                 710                 715                 720

Asp Thr Val Ala Arg Pro Leu Phe Leu Glu Phe Pro Glu Asp Pro Ser

                725                 730                 735

Thr Trp Ser Val Asp Arg Gln Leu Leu Trp Gly Pro Ala Leu Leu Ile

            740                 745                 750

Thr Pro Val Leu Glu Pro Gly Lys Thr Asp Val Thr Gly Tyr Phe Pro

        755                 760                 765

Lys Gly Met Trp Tyr Asn Leu Gln Met Val Pro Val Glu Thr Leu Gly

    770                 775                 780

Ser Leu Pro Ser Ser Ser Pro Ala Ser Ser Phe Arg Ser Ile Val His

785                 790                 795                 800

Ser Lys Gly Gln Trp Leu Thr Leu Glu Ala Pro Leu Asp Thr Ile Asn

                805                 810                 815

Val His Leu Arg Ala Gly Tyr Ile Ile Pro Leu Gln Gly Pro Ser Leu

            820                 825                 830

Thr Thr Thr Glu Ser Arg Lys Gln Pro Met Ala Leu Ala Val Ala Leu

        835                 840                 845

Thr Glu Ser Gly Glu Ala Ser Gly Glu Leu Phe Trp Asp Asp Gly Glu

    850                 855                 860

Ser Leu Gly Val Leu Glu Arg Gly Ala Tyr Thr Leu Val Thr Phe Ser

865                 870                 875                 880

Ala Lys Asn Asn Thr Ile Val Asn Lys Leu Val His Val Thr Lys Glu

                885                 890                 895

Gly Gly Glu Leu Gln Leu Arg Glu Val Thr Ile Leu Gly Val Thr Thr

            900                 905                 910

Ala Pro Thr Gln Val Leu Ser Asn Gly Ile Ser Val Ser Asn Phe Thr

        915                 920                 925

Tyr Ser Pro Asp Asp Lys Ser Leu Ser Ile Pro Val Ser Leu Leu Met

    930                 935                 940

Gly Glu Arg Phe Gln Ile Asp Trp Ser

945                 950

<210>57

<211>953

<212>PRT

<213>Mus musculus

<400>57

Met Asn Ile Arg Lys Pro Leu Cys Ser Asn Ser Val Val Gly Ala Cys

1               5                   10                  15

Thr Leu Ile Ser Leu Thr Thr Ala Val Ile Leu Gly His Leu Met Leu

            20                  25                  30

Arg Glu Leu Met Leu Leu Pro Gln Asp Leu His Glu Ser Ser Ser Gly

        35                  40                  45

Leu Trp Lys Thr Tyr Arg Pro His His Gln Glu Gly Tyr Lys Pro Gly

    50                  55                  60

Pro Leu His Ile Gln Glu Gln Thr Glu Gln Pro Lys Glu Ala Pro Thr

65                  70                  75                  80

Gln Cys Asp Val Pro Pro Ser Ser Arg Phe Asp Cys Ala Pro Asp Lys

                85                  90                  95

Gly Ile Ser Gln Glu Gln Cys Glu Ala Arg Gly Cys Cys Tyr Val Pro

            100                 105                 110

Ala Gly Gln Val Leu Lys Glu Pro Gln Ile Gly Gln Pro Trp Cys Phe

        115                 120                 125

Phe Pro Pro Ser Tyr Pro Ser Tyr Arg Leu Glu Asn Leu Ser Ser Thr

    130                 135                 140

Glu Ser Gly Tyr Thr Ala Thr Leu Thr Arg Thr Ser Pro Thr Phe Phe

145                 150                 155                 160

Pro Lys Asp Val Leu Thr Leu Gln Leu Glu Val Leu Met Glu Thr Asp

               165                 170                 175

Ser Arg Leu His Phe Lys Ile Lys Asp Pro Ala Ser Lys Arg Tyr Glu

            180                 185                 190

Val Pro Leu Glu Thr Pro Arg Val Leu Ser Gln Ala Pro Ser Pro Leu

        195                 200                 205

Tyr Ser Val Glu Phe Ser Glu Glu Pro Phe Gly Val Ile Val Arg Arg

    210                 215                 220

Lys Leu Gly Gly Arg Val Leu Leu Asn Thr Thr Val Ala Pro Leu Phe

225                 230                 235                 240

Phe Ala Asp Gln Phe Leu Gln Leu Ser Thr Ser Leu Pro Ser Gln His

                245                 250                 255

Ile Thr Gly Leu Gly Glu His Leu Ser Pro Leu Met Leu Ser Thr Asp

            260                 265                 270

Trp Ala Arg Ile Thr Leu Trp Asn Arg Asp Thr Pro Pro Ser Gln Gly

        275                 280                 285

Thr Asn Leu Tyr Gly Ser His Pro Phe Tyr Leu Ala Leu Glu Asp Gly

    290                 295                 300

Gly Leu Ala His Gly Val Phe Leu Leu Asn Ser Asn Ala Met Asp Val

305                 310                 315                 320

Ile Leu Gln Pro Ser Pro Ala Leu Thr Trp Arg Ser Thr Gly Gly Ile

                325                 330                 335

Leu Asp Val Tyr Val Phe Leu Gly Pro Glu Pro Lys Ser Val Val Gln

            340                 345                 350

Gln Tyr Leu Asp Val Val Gly Tyr Pro Phe Met Pro Pro Tyr Trp Gly

        355                 360                 365

Leu Gly Phe His Leu Cys Arg Trp Gly Tyr Ser Ser Thr Ala Ile Val

     370                 375                 380

Arg Gln Val Val Glu Asn Met Thr Arg Thr His Phe Pro Leu Asp Val

385                 390                 395                 400

Gln Trp Asn Asp Leu Asp Tyr Met Asp Ala Arg Arg Asp Phe Thr Phe

                405                 410                 415

Asn Gln Asp Ser Phe Ala Asp Phe Pro Asp Met Val Arg Glu Leu His

            420                 425                 430

Gln Gly Gly Arg Arg Tyr Met Met Ile Val Asp Pro Ala Ile Ser Ser

        435                 440                 445

Ala Gly Pro Ala Gly Ser Tyr Arg Pro Tyr Asp Glu Gly Leu Arg Arg

    450                 455                 460

Gly Val Phe Ile Thr Asn Glu Thr Gly Gln Pro Leu Ile Gly Lys Val

465                 470                 475                 480

Trp Pro Gly Thr Thr Ala Phe Pro Asp Phe Thr Asn Pro Glu Thr Leu

                485                 490                 495

Asp Trp Trp Gln Asp Met Val Ser Glu Phe His Ala Gln Val Pro Phe

            500                 505                 510

Asp Gly Met Trp Leu Asp Met Asn Glu Pro Ser Asn Phe Val Arg Gly

        515                 520                 525

Ser Gln Gln Gly Cys Pro Asn Asn Glu Leu Glu Asn Pro Pro Tyr Val

    530                 535                 540

Pro Gly Val Val Gly Gly Ile Lau Gln Ala Ala Thr Ile Cys Ala Ser

545                 550                 555                 560

Ser His Gln Phe Leu Ser Thr His Tyr Asn Leu His Asn Leu Tyr Gly

                565                 570                 575

Leu Thr Glu Ala Ile Ala Ser Ser Arg Ala Leu Val Lys Thr Arg Gly

            580                 585                 590

Thr Arg Pro Phe Val Ile Ser Arg Ser Thr Phe Ser Gly His Gly Arg

        595                 600                 605

Tyr Ala Gly His Trp Thr Gly Asp Val Arg Ser Ser Trp Glu His Leu

    610                 615                 620

Ala Tyr Ser Val Pro Asp Ile Leu Gln Phe Asn Leu Leu Gly Val Pro

625                 630                 635                 640

Leu Val Gly Ala Asp Ile Cys Gly Phe Ile Gly Asp Thr Ser Glu Glu

                645                 650                 655

Leu Cys Val Arg Trp Thr Gln Leu Gly Ala Phe Tyr Pro Phe Met Arg

            660                 665                 670

Asn His Asn Asp Leu Asn Ser Val Pro Gln Glu Pro Tyr Arg Phe Ser

        675                 680                 685

Glu Thr Ala Gln Gln Ala Met Arg Lys Ala Phe Ala Leu Arg Tyr Ala

    690                 695                 700

Leu Leu Pro Tyr Leu Tyr Thr Leu Phe His Arg Ala His Val Arg Gly

705                 710                 715                 720

Asp Thr Val Ala Arg Pro Leu Phe Leu Glu Phe Pro Glu Asp Pro Ser

                725                 730                 735

Thr Trp Ser Val Asp Arg Gln Leu Leu Trp Gly Pro Ala Leu Leu Ile

            740                 745                 750

Thr Pro Val Leu Glu Pro Gly Lys Thr Glu Val Thr Gly Tyr Phe Pro

        755                 760                 765

Lys Gly Thr Trp Tyr Asn Met Gln Val Val Ser Val Asp Ser Leu Gly

    770                 775                 780

Thr Leu Pro Ser Pro Ser Ser Ala Ser Ser Phe Arg Ser Ala Val Gln

785                 790                 795                 800

Ser Lys Gly Gln Trp Leu Thr Leu Glu Ala Pro Leu Asp Thr Ile Asn

                805                 810                 815

Val His Leu Arg Glu Gly Tyr Ile Ile Pro Leu Gln Gly Pro Ser Leu

            820                 825                 830

Thr Thr Thr Glu Ser Arg Lys Gln Pro Met Ala Leu Ala Val Ala Leu

        835                 840                 845

Thr Ala Ser Gly Glu Ala Asp Gly Glu Leu Phe Trp Asp Asp Gly Glu

    850                 855                 860

Ser Leu Ala Val Leu Glu Arg Gly Ala Tyr Thr Leu Val Thr Phe Ser

865                 870                 875                 880

Ala Lys Asn Asn Thr Ile Val Asn Lys Leu Val Arg Val Thr Lys Glu

                885                 890                 895

Gly Ala Glu Leu Gln Leu Arg Glu Val Thr Val Leu Gly Val Ala Thr

            900                 905                 910

Ala Pro Thr Gln Val Leu Ser Asn Gly Ile Pro Val Ser Asn Phe Thr

        915                 920                 925

Tyr Ser Pro Asp Asn Lys Ser Leu Ala Ile Pro Val Ser Leu Leu Met

    930                 935                 940

Gly Glu Leu Phe Gln Ile Ser Trp Ser

945                 950

<210>58

<211>873

<212>PRT

<213>Coturnix japonica

<400>58

Met Ala Leu Leu Leu Ala Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro Ser Ala Ser

1               5                   10                  15

Ser Ser Ala Asp Ser Ala Cys Ser Leu Pro Pro Asp Glu Arg Phe Asp

            20                  25                  30

Cys Gly Pro Glu Arg Leu Leu Ala Arg Ala Asp Cys Glu Ala Arg Gly

        35                  40                  45

Cys Cys Tyr Ala Pro Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Pro Pro Trp

    50                  55                  60

Cys Phe Phe Pro Leu Gly Tyr Arg Ser Tyr Arg Ala Asp Asn Val Thr

65                  70                  75                  80

Ala Thr Ala Gly Gly Tyr Ser Ala Arg Leu Arg Arg Val Val Pro Ser

                85                  90                  95

Phe Leu Pro Ala Asp Val Gly Thr Leu Arg Leu Asp Val Ala Met Glu

            100                 105                 110

Thr Glu Ser Arg Leu Arg Phe Thr Pro Arg Asp Pro Ala Arg Gln Arg

        115                 120                 125

Tyr Glu Val Pro Met Ala Thr Pro Arg Val Ser Thr Arg Ala Ala Asp

    130                 135                 140

Thr Leu Tyr Gly Val Gln Leu Leu Gln Asp Pro Phe Gly Ile Val Val

145                 150                 155                 160

Phe Arg Gln Pro Asp Gly Gln Val Leu Leu Asn Thr Ser Val Ala Pro

                165                 170                 175

Leu Phe Phe Ala Asp Gln Phe Leu Gln Ile Ser Thr Ser Leu Pro Ser

            180                 185                 190

Arg Phe Ile Ser Gly Leu Gly Glu Arg Leu Ala Pro Leu Ile Leu Asp

        195                 200                 205

Thr Ala Trp Thr Lys Val Thr Leu Trp Asn Arg Asp Met Ala Pro Ala

    210                 215                 220

Pro Gln Val Asn Leu Tyr Gly Ser His Pro Phe Tyr Leu Val Leu Glu

225                 230                 235                 240

Asp Gly Gly Ser Ala His Gly Val Phe Leu Leu Asn Ser Asn Ala Met

                245                 250                 255

Asp Val Leu Leu Gln Pro Cys Pro Ala Leu Thr Trp Arg Thr Thr Gly

            260                 265                 270

Gly Ile Leu Asp Phe Tyr Ile Phe Leu Gly Pro Asp Pro Gln Ser Val

        275                 280                 285

Val Gln Gln Tyr Leu Asp Val Val Gly Phe Pro Phe Met Pro Pro Tyr

    290                 295                 300

Trp Ala Leu Gly Phe His Leu Cys Arg Trp Gly Tyr Ser Ser Thr Ser

305                 310                 315                 320

Thr Thr Arg Gln Ala Ala Ala Asn Met Ser Ala Gly Leu Phe Pro Leu

                325                 330                 335

Asp Val Gln Trp Asn Asp Leu Asp Tyr Met Asp Ala Lys Arg Asp Phe

            340                 345                 350

Thr Tyr Asn Lys Glu Thr Phe Arg Asp Tyr Pro Asp Met Val His Asp

        355                 360                 365

Phe His Gln Arg Gly Leu His Tyr Val Met Ile Val Asp Pro Gly Ile

    370                 375                 380

Ser Ser Ser Gly Pro Pro Gly Thr Tyr Arg Pro Tyr Asp Asp Gly Leu

385                 390                 395                 400

Lys Arg Gly Val Phe Ile Arg Asn Ala Thr Gly Gln Pro Leu Ile Gly

                405                 410                 415

Lys Val Trp Pro Gly Pro Thr Ala Phe Pro Asp Phe Thr Asn Pro Glu

            420                 425                 430

Thr His Glu Trp Trp His Asp Met Val Lys Asp Phe His Glu Gln Val

        435                 440                 445

Pro Phe Asp Gly Met Trp Ile Asp Met Asn Glu Pro Ser Asn Phe Val

    450                 455                 460

Glu Gly Ser Gln Asp Gly Cys Pro Asp Ser Ser Leu Glu Lys Pro Pro

465                 470                 475                 480

Tyr Val Pro Gly Val Phe Gly Gly Arg Leu Gln Ala Gly Thr Ile Cys

                485                 490                 495

Ala Ser Ser Gln Gln Tyr Leu Ser Ser His Tyr Asn Leu His Ser Leu

            500                 505                 510

Tyr Gly Leu Thr Glu Ala Ile Ala Ser His Asn Ala Leu Leu Arg Val

        515                 520                 525

Arg Gly Thr Arg Pro Phe Val Ile Ser Arg Ser Thr Phe Ala Gly His

    530                 535                 540

Gly His Tyr Ala Gly His Trp Thr Gly Asp Val Glu Ser Ser Trp Glu

545                 550                 555                 560

Gln Leu Ala His Ser Val Pro Glu Val Leu Leu Phe Asn Leu Leu Gly

                565                 570                 575

Val Pro Leu Val Gly Ala Asp Ile Cys Gly Phe Ala Gly Asp Thr Ser

            580                 585                 590

Glu Glu Leu Cys Val Arg Trp Thr Gln Leu Gly Thr Phe Tyr Pro Phe

        595                 600                 605

Met Arg Asn His Asn Asp His Gly Asn Arg Pro Gln Glu Pro Tyr Ala

    610                 615                 620

Phe Ser Leu Pro Ala Gln Asp Ala Met Arg Ser Ala Leu Arg Leu Arg

625                 630                 635                 640

Tyr Ser Leu Leu Pro Tyr Leu Tyr Thr Leu Phe His Arg Ala His Met

                645                 650                 655

Ala Gly Asp Thr Val Ala Arg Pro Leu Phe Leu Glu Phe Pro Lys Asp

            660                 665                 670

Pro Asn Thr Trp Ile Val Asp Arg Gln Leu Leu Trp Gly Ala Gly Leu

       675                 680                 685

Leu Ile Thr Pro Val Leu Glu Gln Gly Gln Thr Lys Val Ser Gly Tyr

    690                 695                 700

Phe Pro Ala Gly Thr Trp Tyr Ser Phe Thr Gly Asp Ser Thr Ile His

705                 710                 715                 720

Ser Lys Gly Gln Trp Ile Leu Leu Ala Ala Pro Leu Asp Thr Ile Asn

                725                 730                 735

Val His Ile Arg Ala Gly His Ile Leu Pro Leu Gln Glu Pro Gly Leu

            740                 745                 750

Asn rhr Ala Glu Ser Arg Lys Lys Gly Met Met Val Val Val Ala Leu

        755                 760                 765

Thr Pro Asp Gly Phe Ala Arg Gly Glu Leu Phe Trp Asp Asp Gly Glu

    770                 775                 780

Ser Trp Gln Ser Phe Glu Lys Gly Asp Cys Thr Glu Ile Leu Phe Leu

785                 790                 795                 800

Ala Ala Arg Gly Ala Val Leu Ser Gln Ile Leu Arg Ala Gly Gly His

                805                 810                 815

Leu Asp Gly Ile Leu Val Glu Ala Val Thr Val Leu Gly Val Pro Ser

            820                 825                 830

Ala Pro Gln Arg Val Leu Ala Asn Gly Ile Pro Val Glu Asp Phe ser

        835                 840                 845

Tyr Arg Ser Asp Thr Gln Val Leu Arg Val Ser Val Ser Leu Pro Met

    850                 855                 860

Trp Glu Gln Phe Val Val Pro Trp Ser

865                 870

<210>59

<211>932

<212>PRT

<213>Coturnix japonica

<400>59

Met Arg Ser Tyr Gln Lys Leu Arg Thr Ala Val Pro Gln Leu Val Leu

1               5                   10                  15

Ser Gln Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Ala Thr Thr Pro Thr Pro

            20                  25                  30

Ala Gly Arg Ser Lys Leu Ala Pro Trp Trp Val Gly Ser Gly Leu Leu

        35                  40                  45

Ile Thr Ala Val Leu Leu Ser Thr Ile Thr Val Trp Val Leu Arg Gln

    50                  55                  60

Val Ser Arg Gly Trp His Gly Pro Ala Pro Pro Ala Gln Cys His Leu

65                  70                  75                  80

Val Pro Glu Ser His Arg Tyr Asp Cys Tyr Pro Glu Arg Asn Val Val

                85                  90                  95

Val Thr Gln Glu Leu Cys Glu Ser Arg Gly Cys Cys Phe Ile Gln Thr

            100                 105                 110

Leu Pro Ala Val Gly Gly Lys Arg Gly Val Pro Trp Cys Phe Tyr Pro

        115                 120                 125

Pro Asp Phe Pro Ser Tyr Val Val Gln Ser Leu Asn Gln Thr Val Leu

    130                 135                 140

Gly Met Thr Gly Leu Leu Val Arg Arg Glu Lys Ala Tyr Tyr Pro Lys

145                 150                 155                 160

Asp Ile Gln Met Leu Arg Met Asp Val Glu Phe Gln Thr Asn Thr Arg

               165                 170                 175

Leu His Ile Lys Ile Thr Asp Ala Ala Asn Pro Arg Tyr Glu Val Pro

            180                 185                 190

Leu Glu Val Pro Arg Val Thr Lys Arg Ala Glu Asn Pro Ile Tyr Ser

        195                 200                 205

Leu Glu Ile Ser Gln Asp Pro Phe Gly Val Leu Leu Arg Arg Gln Gly

    210                 215                 220

Thr Gly Thr Val Leu Leu Asn Thr Thr Val Ala Pro Leu Ile Phe Ala

225                 230                 235                 240

Asp Gln Phe Leu Gln Ile Ser Thr Thr Leu Pro Ser Arg Phe Leu Tyr

                245                 250                 255

Gly Leu Gly Glu His Arg Ser Thr Leu Leu His Ser Leu Asp Trp Asn

            260                 265                 270

Thr Leu Thr Leu Trp Ala Arg Asp Val Ala Pro Thr Glu Ser Phe Asn

        275                 280                 285

Leu Tyr Gly Ala His Pro Phe Tyr Leu Leu Met Glu Glu Gly Gly Asp

    290                 295                 300

Ala His Gly Val Phe Leu Leu Asn Ser Asn Ala Met Glu Val Ala Leu

305                 310                 315                 320

Gln Pro Ala Pro Gly Leu Thr Trp Arg Thr Ile Gly Gly Val Leu Asp

                325                 330                 335

Phe Tyr Ile Phe Leu Gly Pro Asp Pro Asn Met Val Ile Gln Gln Tyr

            340                 345                 350

Gln Glu Val Ile Gly Phe Pro Ala Met Pro Pro Leu Trp Ala Leu Gly

        355                 360                 365

Phe His Leu Cys Arg Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Asn Glu Thr Trp Gln

    370                 375                 380

Thr Ala Lys Ala Met Arg Asn Phe Gln Ile Pro Gln Asp Ala Gln Trp

385                 390                 395                 400

Asn Asp Ile Asp Tyr Met Asp Gly Tyr Arg Asp Phe Thr Phe Asp Pro

               405                 410                 415

Gln Lys Phe Ala Ser Leu Pro Ser Leu Val Glu Asp Leu His Lys His

            420                 425                 430

Gly Gln His Tyr Val Ile Ile Leu Asp Pro Gly Ile Ser Ser Thr Ser

        435                 440                 445

Pro Arg Gly Ser Tyr Trp Pro Phe Asp Glu Gly Leu Arg Arg Gly Leu

    450                 455                 460

Phe Leu Asn Thr Thr Gln Gly Gln Thr Leu Ile Gly Gln Val Trp Pro

465                 470                 475                 480

Gly Tyr Thr Ala Tyr Pro Asp Phe Ser Asn Thr Asp Thr His Gln Trp

                485                 490                 495

Trp Leu Glu Asn Leu Gln Arg Phe His Thr His Val Pro Phe Asp Gly

            500                 505                 510

Leu Trp Ile Asp Met Asn Glu Pro Ser Asn Phe Met Asp Gly Ser Glu

        515                 520                 525

Glu Gly Cys Pro Pro Gly Glu Leu Asp Ser Pro Pro Tyr Thr Pro Ala

    530                 535                 540

Val Leu Gly Asn Ser Leu Thr Ala Lys Thr Val Cys Ala Ser Ala Glu

545                 550                 555                 560

Gln Asn Ala Ser Val His Tyr Asn Leu His Asn Leu Tyr Gly Leu Lys

                565                 570                 575

Glu Ala Glu Ala Thr Ala Ser Ala Leu Ile Arg Ile Arg Gly Lys Arg

            580                 585                 590

Pro Phe Val Ile Ser Arg Ser Thr Phe Pro Ser Gln Gly Arg Tyr Ser

        595                 600                 605

Gly His Trp Leu Gly Asp Asn Arg Ser Gln Trp Lys Asp Met Tyr Tyr

    610                 615                 620

Ser Ile Pro Gly Met Leu Ser Phe Ser Leu Phe Gly Ile Pro Leu Val

625                 630                 635                 640

Gly Ala Asp Ile Cys Gly Phe Ser Gly Ser Thr Ser Glu Glu Leu Cys

               645                 650                 655

Thr Arg Trp Met Gln Leu Gly Ala Phe Tyr Pro Phe Ser Arg Asn His

            660                 665                 670

Asn Asn Gln Asn Glu Lys Ala Gln Asp Pro Thr Ala Phe Ser Pro Ser

        675                 680                 685

Ala Arg Thr Ala Met Lys Asp Ala Leu Leu Thr Arg Tyr Ser Leu Leu

    690                 695                 700

Pro Phe Leu Tyr Thr Leu Phe His Arg Ala His Leu Gln Gly Glu Thr

705                 710                 715                 720

Val Ala Arg Pro Leu Phe Phe Glu Phe Pro Trp Asp Val Ala Thr Tyr

                725                 730                 735

Gly Leu Asp Arg Gln Phe Leu Trp Gly Gln Ser Leu Leu Val Thr Pro

            740                 745                 750

Val Leu Glu Pro Gly Ala Asp Ser Val Leu Gly Tyr Phe Pro Gln Gly

        755                 760                 765

Val Trp Tyr Asp Phe Tyr Thr Gly Ser Ser Val Asn Ser Ser Gly Glu

    770                 775                 780

Met Leu Lys Leu Ser Ala Pro Leu Asp His Leu Asn Leu His Leu Arg

785                 790                 795                 800

Glu Gly Ser Ile Leu Pro Thr Gln Lys Pro Gly Ile Thr Ser Lys Ala

                805                 810                 815

Thr Arg Gly Asn Pro Leu His Leu Ile Val Ala Leu Ser Thr Arg Ala

            820                 825                 830

Thr Ala Trp Gly Asp Leu Phe Trp Asp Asp Gly Glu Ser Leu Asp Thr

        835                 840                 845

Phe Glu Gln Gly Asn Tyr Ser Tyr Leu Val Phe Asn Ala Thr Glu Asn

    850                 855                 860

Ile Phe Thr Ser Asn Val Leu His Ala Ser Thr Glu Ala Thr Asp Val

865                 870                 875                 880

Thr Ile Asp Ala Val Ser Phe Tyr Gly Val Gln Glu Pro Pro Ser Lys

                885                 890                 895

Val Leu Leu Asp Gly Gln Glu Lys Pro Phe Ser Tyr Leu Asp Asn Gln

            900                 905                 910

Val Leu Thr Val Ser Gly Leu Gly Leu Val Leu Ser Gln Gly Phe Ser

        915                 920                 925

Leu Gln Trp Leu

    930

<210>60

<211>1857

<212>PRT

<213>Homo sapiens

<400>60

Met Ala Arg Lys Lys Leu Lys Lys Phe Thr Thr Leu Glu Ile Val Leu

1               5                   10                  15

Ser Val Leu Leu Leu Val Leu Phe Ile Ile Ser Ile Val Leu Ile Val

            20                  25                  30

Leu Leu Ala Lys Glu Ser Leu Lys Ser Thr Ala Pro Asp Pro Gly Thr

        35                  40                  45

Thr Gly Thr Pro Asp Pro Gly Thr Thr Gly Thr Pro Asp Pro Gly Thr

    50                  55                  60

Thr Gly Thr Thr His Ala Arg Thr Thr Gly Pro Pro Asp Pro Gly Thr

65                  70                  75                  80

Thr Gly Thr Thr Pro Val Ser Ala Glu Cys Pro Val Val Asn Glu Leu

                85                  90                  95

Glu Arg Ile Asn Cys Ile Pro Asp Gln Pro Pro Thr Lys Ala Thr Cys

           100                 105                 110

Asp Gln Arg Gly Cys Cys Trp Asn Pro Gln Gly Ala Val Ser Val Pro

        115                 120                 125

Trp Cys Tyr Tyr Ser Lys Asn His Ser Tyr His Val Glu Gly Asn Leu

    130                 135                 140

Val Asn Thr Asn Ala Gly Phe Thr Ala Arg Leu Lys Asn Leu Pro Ser

145                 150                 155                 160

Ser Pro Val Phe Gly Ser Asn Val Asp Asn Val Leu Leu Thr Ala Glu

                165                 170                 175

Tyr Gln Thr Ser Asn Arg Phe His Phe Lys Leu Thr Asp Gln Thr Asn

            180                 185                 190

Asn Arg Phe Glu Val Pro His Glu His Val Gln Ser Phe Ser Gly Asn

        195                 200                 205

Ala Ala Ala Ser Leu Thr Tyr Gln Val Glu Ile Ser Arg Gln Pro Phe

    210                 215                 220

Ser Ile Lys Val Thr Arg Arg Ser Asn Asn Arg Val Leu Phe Asp Ser

225                 230                 235                 240

Ser Ile Gly Pro Leu Leu Phe Ala Asp Gln Phe Leu Gln Leu Ser Thr

                245                 250                 255

Arg Leu Pro Ser Thr Asn Val Tyr Gly Leu Gly Glu His Val His Gln

            260                 265                 270

Gln Tyr Arg His Asp Met Asn Trp Lys Thr Trp Pro Ile Phe Asn Arg

        275                 280                 285

Asp Thr Thr Pro Asn Gly Asn Gly Thr Asn Leu Tyr Gly Ala Gln Thr

    290                 295                 300

Phe Phe Leu Cys Leu Glu Asp Ala Ser Gly Leu Ser Phe Gly Val Phe

305                 310                 315                 320

Leu Met Asn Ser Asn Ala Met Glu Val Val Leu Gln Pro Ala Pro Ala

                325                 330                 335

Ile Thr Tyr Arg Thr Ile Gly Gly Ile Leu Asp Phe Tyr Val Phe Leu

            340                 345                 350

Gly Asn Thr Pro Glu Gln Val Val Gln Glu Tyr Leu Glu Leu Ile Gly

        355                 360                 365

Arg Pro Ala Leu Pro Ser Tyr Trp Ala Leu Gly Phe His Leu Ser Arg

    370                 375                 380

Tyr Glu Tyr Gly Thr Leu Asp Asn Met Arg Glu Val Val Glu Arg Asn

385                 390                 395                 400

Arg Ala Ala Gln Leu Pro Tyr Asp Val Gln His Ala Asp Ile Asp Tyr

                405                 410                 415

Met Asp Glu Arg Arg Asp Phe Thr Tyr Asp Ser Val Asp Phe Lys Gly

            420                 425                 430

Phe Pro Glu Phe Val Asn Glu Leu His Asn Asn Gly Gln Lys Leu Val

        435                 440                 445

Ile Ile Val Asp Pro Ala Ile Ser Asn Asn Ser Ser Ser Ser Lys Pro

    450                 455                 460

Tyr Gly Pro Tyr Asp Arg Gly Ser Asp Met Lys Ile Trp Val Asn Ser

465                 470                 475                 480

Ser Asp Gly Val Thr Pro Leu Ile Gly Glu Val Trp Pro Gly Gln Thr

                485                 490                 495

Val Phe Pro Asp Tyr Thr Asn Pro Asn Cys Ala Val Trp Trp Thr Lys

            500                 505                 510

Glu Phe Glu Leu Phe His Asn Gln Val Glu Phe Asp Gly Ile Trp Ile

        515                 520                 525

Asp Met Asn Glu Val Ser Asn Phe Val Asp Gly Ser Val Ser Gly Cys

    530                 535                 540

Ser Thr Asn Asn Leu Asn Asn Pro Pro Phe Thr Pro Arg Ile Leu Asp

545                 550                 555                 560

Gly Tyr Leu Phe Cys Lys Thr Leu Cys Met Asp Ala Val Gln His Trp

                565                 570                 575

Gly Lys Gln Tyr Asp Ile His Asn Leu Tyr Gly Tyr Ser Met Ala Val

            580                 585                 590

Ala Thr Ala Glu Ala Ala Lys Thr Val Phe Pro Asn Lys Arg Ser Phe

        595                 600                 605

Ile Leu Thr Arg Ser Thr Phe Ala Gly Ser Gly Lys phe Ala Ala His

    610                 615                 620

Trp Leu Gly Asp Asn Thr Ala Thr Trp Asp Asp Leu Arg Trp Ser Ile

625                 630                 635                 640

Pro Gly Val Leu Glu Phe Asn Leu Phe Gly Ile Pro Met Val Gly Pro

                645                 650                 655

Asp Ile Cys Gly Phe Ala Leu Asp Thr Pro Glu Glu Leu Cys Arg Arg

            660                 665                 670

rrp Met Gln Leu Gly Ala Phe Tyr Pro Phe Ser Arg Asn His Asn Gly

        675                 680                 685

Gln Gly Tyr Lys Asp Gln Asp Pro Ala Ser Phe Gly Ala Asp Ser Leu

    690                 695                 700

Leu Leu Asn Ser Ser Arg His Tyr Leu Asn Ile Arg Tyr Thr Leu Leu

705                 710                 715                 720

Pro Tyr Leu Tyr Thr Leu Phe Phe Arg Ala His Ser Arg Gly Asp Thr

                725                 730                 735

Val Ala Arg Pro Leu Leu His Glu Phe Tyr Glu Asp Asn Ser Thr Trp

            740                 745                 750

Asp Val His Gln Gln Phe Leu Trp Gly Pro Gly Leu Leu Ile Thr Pro

        755                 760                 765

Val Leu Asp Glu Gly Ala Glu Lys Val Met Ala Tyr Val Pro Asp Ala

    770                 775                 780

Val Trp Tyr Asp Tyr Glu Thr Gly Ser Gln Val Arg Trp Arg Lys Gln

785                 790                 795                 800

Lys Val Glu Met Glu Leu Pro Gly Asp Lys Ile Gly Leu His Leu Arg

                805                 810                 815

Gly Gly Tyr Ile Phe Pro Thr Gln Gln Pro Asn Thr Thr Thr Leu Ala

            820                 825                 830

Ser Arg Lys Asn Pro Leu Gly Leu Ile Ile Ala Leu Asp Glu Asn Lys

        835                 840                 845

Glu Ala Lys Gly Glu Leu Phe Trp Asp Asp Gly Glu Thr Lys Asp Thr

    850                 855                 860

Val Ala Asn Lys Val Tyr Leu Leu Cys Glu Phe Ser Val Thr Gln Asn

865                 870                 875                 880

Arg Leu Glu Val Asn Ile Ser Gln Ser Thr Tyr Lys Asp Pro Asn Asn

                885                 890                 895

Leu Ala Phe Asn Glu Ile Lys Ile Leu Gly Thr Glu Glu Pro Ser Asn

            900                 905                 910

Val Thr Val Lys His Asn Gly Val Pro Ser Gln Thr Ser Pro Thr Val

        915                 920                 925

Thr Tyr Asp Ser Asn Leu Lys Val Ala Ile Ile Thr Asp Ile Asp Leu

    930                 935                 940

Leu Leu Gly Glu Ala Tyr Thr Val Glu Trp Ser Ile Lys Ile Arg Asp

945                 950                 955                 960

Glu Glu Lys Ile Asp Cys Tyr Pro Asp Glu Asn Gly Ala Ser Ala Glu

                965                 970                 975

Asn Cys Thr Ala Arg Gly Cys Ile Trp Glu Ala Ser Asn Ser Ser Gly

            980                 985                 990

Val Pro Phe Cys Tyr Phe Val Asn Asp Leu Tyr Ser Val Ser Asp Val

        995                 1000                1005

Gln Tyr Asn Ser His Gly Ala Thr Ala Asp Ile Ser Leu Lys Ser

    1010                1015                1020

Ser Val Tyr Ala Asn Ala Phe Pro Ser Thr Pro Val Asn Pro Leu

    1025                1030                1035

Arg Leu Asp Val Thr Tyr His Lys Asn Glu Met Leu Gln Phe Lys

    1040                1045                1050

Ile Tyr Asp Pro Asn Lys Asn Arg Tyr Glu Val Pro Val Pro Leu

    1055                1060                1065

Asn Ile Pro Ser Met Pro Ser Ser Thr Pro Glu Gly Gln Leu Tyr

    1070                1075                1080

Asp Val Leu Ile Lys Lys Asn Pro Phe Gly Ile Glu Ile Arg Arg

    1085                1090                1095

Lys Ser Thr Gly Thr Ile Ile Trp Asp Ser Gln Leu Leu Gly Phe

    1100                1105                1110

Thr Phe Ser Asp Met Phe Ile Arg Ile Ser Thr Arg Leu Pro Ser

    1115                1120                1125

Lys Tyr Leu Tyr Gly Phe Gly Glu Thr Glu His Arg Ser Tyr Arg

    1130                1135                1140

Arg Asp Leu Glu Trp His Thr Trp Gly Met Phe Ser Arg Asp Gln

    1145                1150                1155

Pro Pro Gly Tyr Lys Lys Asn Ser Tyr Gly Val His Pro Tyr Tyr

    1160                1165                1170

Met Gly Leu Glu Glu Asp Gly Ser Ala His Gly Val Leu Leu Leu

    1175                1180                1185

Asn Ser Asn Ala Met Asp Val Thr Phe Gln Pro Leu Pro Ala Leu

    1190                1195                1200

Thr Tyr Arg Thr Thr Gly Gly Val Leu Asp Phe Tyr Val Phe Leu

    1205                1210                1215

Gly Pro Thr Pro Glu Leu Val Thr Gln Gln Tyr Thr Glu Leu Ile

    1220                1225                1230

Gly Arg Pro Val Met Val Pro Tyr Trp Ser Leu Gly Phe Gln Leu

    1235                1240                1245

Cys Arg Tyr Gly Tyr Gln Asn Asp Ser Glu Ile Ala Ser Leu Tyr

    1250                1255                1260

Asp Glu Met Val Ala Ala Gln Ile Pro Tyr Asp Val Gln Tyr Ser

    1265                1270                1275

Asp Ile Asp Tyr Met Glu Arg Gln Leu Asp Phe Thr Leu Ser Pro

    1280                1285                1290

Lys Phe Ala Gly Phe Pro Ala Leu Ile Asn Arg Met Lys Ala Asp

    1295                1300                1305

Gly Met Arg Val Ile Leu Ile Leu Asp Pro Ala Ile Ser Gly Asn

    1310                1315                1320

Glu Thr Gln Pro Tyr Pro Ala Phe Thr Arg Gly Val Glu Asp Asp

    1325                1330                1335

Val Phe Ile Lys Tyr Pro Asn Asp Gly Asp Ile Val Trp Gly Lys

    1340                1345                1350

Val Trp Pro Asp Phe Pro Asp Val Val Val Asn Gly Ser Leu Asp

    1355                1360                1365

Trp Asp Ser Gln Val Glu Leu Tyr Arg Ala Tyr Val Ala Phe Pro

    1370                1375                1380

Asp Phe Phe Arg Asn Ser Thr Ala Lys Trp Trp Lys Arg Glu Ile

    1385                1390                1395

Glu Glu Leu Tyr Asn Asn Pro Gln Asn Pro Glu Arg Ser Leu Lys

    1400                1405                1410

Phe Asp Gly Met Trp Ile Asp Met Asn Glu Pro Ser Ser Phe Val

    1415                1420                1425

Asn Gly Ala Val Ser Pro Gly Cys Arg Asp Ala Ser Leu Asn His

    1430                1435                1440

Pro Pro Tyr Met Pro His Leu Glu Ser Arg Asp Arg Gly Leu Ser

    1445                1450                1455

Ser Lys Thr Leu Cys Met Glu Ser Gln Gln Ile Leu Pro Asp Gly

    1460                1465                1470

Ser Leu Val Gln His Tyr Asn Val His Asn Leu Tyr Gly Trp Ser

    1475                1480                1485

Gln Thr Arg Pro Thr Tyr Glu Ala Val Gln Glu Val Thr Gly Gln

    1490                1495                1500

Arg Gly Val Val Ile Thr Arg Ser Thr Phe Pro Ser Ser Gly Arg

    1505                1510                1515

Trp Ala Gly His Trp Leu Gly Asp Asn Thr Ala Ala Trp Asp Gln

    1520                1525                1530

Leu Lys Lys Ser Ile Ile Gly Met Met Glu Phe Ser Leu Phe Gly

    1535                1540                1545

IIe Ser Tyr Thr Gly Ala Asp Ile Cys Gly Phe Phe Gln Asp Ala

    1550                1555                1560

Glu Tyr Glu Met Cys Val Arg Trp Met Gln Leu Gly Ala Phe Tyr

    1565                1570                1575

Pro Phe Ser Arg Asn His Asn Thr Ile Gly Thr Arg Arg Gln Asp

    1580                1585                1590

Pro Val Ser Trp Asp Val Ala Phe Val Asn Ile Ser Arg Thr Val

    1595                1600                1605

Leu Gln Thr Arg Tyr Thr Leu Leu Pro Tyr Leu Tyr Thr Leu Met

    1610                1615                1620

His Lys Ala His Thr Glu Gly Val Thr Val Val Arg Pro Leu Leu

    1625                1630                1635

His Glu Phe Val Ser Asp Gln Val Thr Trp Asp Ile Asp Ser Gln

    1640                1645                1650

Phe Leu Leu Gly Pro Ala Phe Leu Val Ser Pro Val Leu Glu Arg

    1655                1660                1665

Asn Ala Arg Asn Val Thr Ala Tyr Phe Pro Arg Ala Arg Trp Tyr

    1670                1675                1680

Asp Tyr Tyr Thr Gly Val Asp Ile Asn Ala Arg Gly Glu Trp Lys

    1685                1690                1695

Thr Leu Pro Ala Pro Leu Asp His Ile Asn Leu His Val Arg Gly

    1700                1705                1710

Gly Tyr Ile Leu Pro Trp Gln Glu Pro Ala Leu Asn Thr His Leu

    1715                1720                1725

Ser Arg Gln Lys Phe Met Gly Phe Lys Ile Ala Leu Asp Asp Glu

    1730                1735                1740

Gly Thr Ala Gly Gly Trp Leu Phe Trp Asp Asp Gly Gln Ser Ile

    1745                1750                1755

Asp Thr Tyr Gly Lys Gly Leu Tyr Tyr Leu Ala Ser Phe Ser Ala

    1760                1765                1770

Ser Gln Asn Thr Met Gln Ser His Ile Ile Phe Asn Asn Tyr Ile

    1775                1780                1785

Thr Gly Thr Asn Pro Leu Lys Leu Gly Tyr Ile Glu Ile Trp Gly

    1790                1795                1800

Val Gly Ser Val Pro Val Thr Ser Val Ser Ile Ser Val Ser Gly

    1805                1810                1815

Met Val Ile Thr Pro Ser Phe Asn Asn Asp Pro Thr Thr Gln Val

    1820                1825                1830

Leu Ser Ile Asp Val Thr Asp Arg Asn Ile Ser Leu His Asn Phe

    1835                1840                1845

Thr Ser Leu Thr Trp Ile Ser Thr Leu

    1850                1855

<210>61

<211>1857

<212>PRT

<213>Homo sapiens

<400>61

Met Ala Arg Lys Lys Leu Lys Lys Phe Thr Thr Leu Glu Ile Val Leu

1               5                   10                  15

Ser Val Leu Leu Leu Val Leu Phe Ile Ile Ser Ile Val Leu Ile Val

            20                  25                  30

Leu Leu Ala Lys Glu Ser Leu Lys Ser Thr Ala Pro Asp Pro Gly Thr

        35                  40                  45

Thr Gly Thr Pro Asp Pro Gly Thr Thr Gly Thr Pro Asp Pro Gly Thr

    50                  55                  60

Thr Gly Thr Thr His Ala Arg Thr Thr Gly Pro Pro Asp Pro Gly Thr

65                  70                  75                  80

Thr Gly Thr Thr Pro Val Ser Ala Glu Cys Pro Val Val Asn Glu Leu

                85                  90                  95

Glu Arg Ile Asn Cys Ile Pro Asp Gln Pro Pro Thr Lys Ala Thr Cys

            100                 105                 110

Asp Gln Arg Gly Cys Cys Trp Asn Pro Gln Gly Ala Val Ser Val Pro

        115                 120                 125

Trp Cys Tyr Tyr Ser Lys Asn His Ser Tyr His Val Glu Gly Asn Leu

    130                 135                 140

Val Asn Thr Asn Ala Gly Phe Thr Ala Arg Leu Lys Asn Leu Pro Ser

145                 150                 155                 160

Ser Pro Val Phe Gly Ser Asn Val Asp Asn Val Leu Leu Thr Ala Glu

                165                 170                 175

Tyr Gln Thr Ser Asn Arg Phe His Phe Lys Leu Thr Asp Gln Thr Asn

            180                 185                 190

Asn Arg Phe Glu Val Pro His Glu His Val Gln Ser Phe Ser Gly Asn

        195                 200                 205

Ala Ala Ala Ser Leu Thr Tyr Gln Val Glu Ile Ser Arg Gln Pro Phe

    210                 215                 220

Ser Ile Lys Val Thr Arg Arg Ser Asn Asn Arg Val Leu Phe Asp Ser

225                 230                 235                 240

Ser Ile Gly Pro Leu Leu Phe Ala Asp Gln Phe Leu Gln Leu Ser Thr

                245                 250                 255

Arg Leu Pro Ser Thr Asn Val Tyr Gly Leu Gly Glu His Val His Gln

            260                 265                 270

Gln Tyr Arg His Asp Met Asn Trp Lys Thr Trp Pro Ile Phe Asn Arg

        275                 280                 285

Asp Thr Thr Pro Asn Gly Asn Gly Thr Asn Leu Tyr Gly Ala Gln Thr

    290                 295                 300

Phe Phe Leu Cys Leu Glu Asp Ala Ser Gly Leu Ser Phe Gly Val Phe

305                 310                 315                 320

Leu Met Asn Ser Asn Ala Met Glu Val Val Leu Gln Pro Ala Pro Ala

                325                 330                 335

Ile Thr Tyr Arg Thr Ile Gly Gly Ile Leu Asp Phe Tyr Val Phe Leu

            340                 345                 350

Gly Asn Thr Pro Glu Gln Val Val Gln Glu Tyr Leu Glu Leu Ile Gly

        355                 360                 365

Arg Pro Ala Leu Pro Ser Tyr Trp Ala Leu Gly Phe His Leu Ser Arg

    370                 375                 380

Tyr Glu Tyr Gly Thr Leu Asp Asn Met Arg Glu Val Val Glu Arg Asn

385                 390                 395                 400

Arg Ala Ala Gln Leu Pro Tyr Asp Val Gln His Ala Asp Ile Asp Tyr

                405                 410                 415

Met Asp Glu Arg Arg Asp Phe Thr Tyr Asp Ser Val Asp Phe Lys Gly

            420                 425                 430

Phe Pro Glu Phe Val Asn Glu Leu His Asn Asn Gly Gln Lys Leu Val

        435                 440                 445

Ile Ile Val Asp Pro Ala Ile Ser Asn Asn Ser Ser Ser Ser Lys Pro

    450                 455                 460

Tyr Gly Pro Tyr Asp Arg Gly Ser Asp Met Lys Ile Trp Val Asn Ser

465                 470                 475                 480

Ser Asp Gly Val Thr Pro Leu Ile Gly Glu Val Trp Pro Gly Gln Thr

                485                 490                 495

Val Phe Pro Asp Tyr Thr Asn Pro Asn Cys Ala Val Trp Trp Thr Lys

            500                 505                 510

Glu Phe Glu Leu Phe His Asn Gln Val Glu Phe Asp Gly Ile Trp Ile

        515                 520                 525

Asp Met Asn Glu Val Ser Asn Phe Val Asp Gly Ser Val Ser Gly Cys

    530                 535                 540

Ser Thr Asn Asn Leu Asn Asn Pro Pro Phe Thr Pro Arg Ile Leu Asp

545                 550                 555                 560

Gly Tyr Leu Phe Cys Lys Thr Leu Cys Met Asp Ala Val Gln His Trp

                565                 570                 575

Gly Lys Gln Tyr Asp Ile His Asn Leu Tyr Gly Tyr Ser Met Ala Val

            580                 585                 590

Ala Thr Ala Glu Ala Ala Lys Thr Val Phe Pro Asn Lys Arg Ser Phe

        595                 600                 605

Ile Leu Thr Arg Ser Thr Phe Ala Gly Ser Gly Lys Phe Ala Ala His

    610                 615                 620

Trp Leu Gly Asp Asn Thr Ala Thr Trp Asp Asp Leu Arg Trp Ser Ile

625                 630                 635                 640

Pro Gly Val Leu Glu Phe Asn Leu Phe Gly Ile Pro Met Val Gly Pro

                645                 650                 655

Asp Ile Cys Gly Phe Ala Leu Asp Thr Pro Glu Glu Leu Cys Arg Arg

            660                 665                 670

Trp Met Gln Leu Gly Ala Phe Tyr Pro Phe Ser Arg Asn His Asn Gly

        675                 680                 685

Gln Gly Tyr Lys Asp Gln Asp Pro Ala Ser Phe Gly Ala Asp Ser Leu

    690                 695                 700

Leu Leu Asn Ser Ser Arg His Tyr Leu Asn Ile Arg Tyr Thr Leu Leu

705                 710                 715                 720

Pro Tyr Leu Tyr Thr Leu Phe Phe Arg Ala His Ser Arg Gly Asp Thr

                725                 730                 735

Val Ala Arg Pro Leu Leu His Glu Phe Tyr Glu Asp Asn Ser Thr Trp

            740                 745                 750

Asp Val His Gln Gln Phe Leu Trp Gly Pro Gly Leu Leu Ile Thr Pro

        755                 760                 765

Val Leu Asp Glu Gly Ala Glu Lys Val Met Ala Tyr Val Pro Asp Ala

    770                 775                 780

Val Trp Tyr Asp Tyr Glu Thr Gly Ser Gln Val Arg Trp Arg Lys Gln

785                 790                 795                 800

Lys Val Glu Met Glu Leu Pro Gly Asp Lys Ile Gly Leu His Leu Arg

                805                 810                 815

Gly Gly Tyr Ile Phe Pro Thr Gln Gln Pro Asn Thr Thr Thr Leu Ala

            820                 825                 830

Ser Arg Lys Asn Pro Leu Gly Leu Ile Ile Ala Leu Asp Glu Asn Lys

        835                 840                 845

Glu Ala Lys Gly Glu Leu Phe Trp Asp Asp Gly Glu Thr Lys Asp Thr

    850                 855                 860

Val Ala Asn Lys Val Tyr Leu Leu Cys Glu Phe Ser Val Thr Gln Asn

865                 870                 875                 880

Arg Leu Glu Val Asn Ile Ser Gln Ser Thr Tyr Lys Asp Pro Asn Asn

                885                 890                 895

Leu Ala Phe Asn Glu Ile Lys Ile Leu Gly Thr Glu Glu Pro Ser Asn

            900                 905                 910

Val Thr Val Lys His Asn Gly Val Pro Ser Gln Thr Ser Pro Thr Val

        915                 920                 925

Thr Tyr Asp Ser Asn Leu Lys Val Ala Ile Ile Thr Asp Ile Asp Leu

    930                 935                 940

Leu Leu Gly Glu Ala Tyr Thr Val Glu Trp Ser Ile Lys Ile Arg Asp

945                 950                 955                 960

Glu Glu Lys Ile Asp Cys Tyr Pro Asp Glu Asn Gly Ala Ser Ala Glu

                965                 970                 975

Asn Cys Thr Ala Arg Gly CysIle Trp Glu Ala Ser Asn Ser Ser Gly

            980                 985                 990

Val Pro Phe Cys Tyr Phe Val Asn Asp Leu Tyr Ser Val Ser Asp Val

        995                 1000                 1005

Gln Tyr Asn Ser His Gly Ala Thr Ala Asp Ile Ser Leu Lys Ser

    1010                1015                1020

Ser Val Tyr Ala Asn Ala Phe Pro Ser Thr Pro Val Asn Pro Leu

    1025                1030                1035

Arg Leu Asp Val Thr Tyr His Lys Asn Glu Met Leu Gln Phe Lys

    1040                1045                1050

Ile Tyr Asp Pro Asn Lys Asn Arg Tyr Glu Val Pro Val Pro Leu

    1055                1060                1065

Asn Ile Pro Ser Met Pro Ser Ser Thr Pro Glu Gly Gln Leu Tyr

    1070                1075                1080

Asp Val Leu Ile Lys Lys Asn Pro Phe Gly Ile Glu Ile Arg Arg

    1085                1090                1095

Lys Ser Thr Gly Thr Ile Ile Trp Asp Ser Gln Leu Leu Gly Phe

    1100                1105                1110

Thr Phe Ser Asp Met Phe Ile Arg Ile Ser Thr Arg Leu Pro Ser

    1115                1120                1125

Lys Tyr Leu Tyr Gly Phe Gly Glu Thr Glu His Arg Ser Tyr Arg

    1130                1135                1140

Arg Asp Leu Glu Trp His Thr Trp Gly Met Phe Ser Arg Asp Gln

    1145                1150                1155

Pro Pro Gly Tyr Lys Lys Asn Ser Tyr Gly Val His Pro Tyr Tyr

    1160                1165                1170

Met Gly Leu Glu Glu Asp Gly Ser Ala His Gly Val Leu Leu Leu

    1175                1180                1185

Asn Ser Asn Ala Met Asp Val Thr Phe Gln Pro Leu Pro Ala Leu

    11901                195                1200

Thr Tyr Arg Thr Thr Gly Gly Val Leu Asp Phe Tyr Val Phe Leu

    1205                1210                1215

Gly Pro Thr Pro Glu Leu Val Thr Gln Gln Tyr Thr Glu Leu Ile

    1220                1225                1230

Gly Arg Pro Val Met Val Pro Tyr Trp Ser Leu Gly Phe Gln Leu

    1235                1240                1245

Cys Arg Tyr Gly Tyr Gln Asn Asp Ser Glu Ile Ala Ser Leu Tyr

    1250                1255                1260

Asp Glu Met Val Ala Ala Gln Ile Pro Tyr Asp Val Gln Tyr Ser

    1265                1270                1275

Asp Ile Asp Tyr Met Glu Arg Gln Leu Asp Phe Thr Leu Ser Pro

    1280                1285                1290

Lys Phe Ala Gly Phe Pro Ala Leu Ile Asn Arg Met Lys Ala Asp

    1295                1300                1305

Gly Met Arg Val Ile Leu Ile Leu Asp Pro Ala Ile Ser Gly Asn

    1310                1315                1320

Glu Thr Gln Pro Tyr Pro Ala Phe Thr Arg Gly Val Glu Asp Asp

    1325                1330                1335

Val Phe Ile Lys Tyr Pro Asn Asp Gly Asp Ile Val Trp Gly Lys

    1340                1345                1350

Val Trp Pro Asp Phe Pro Asp Val Val Val Asn Gly Ser Leu Asp

    1355                1360                1365

Trp Asp Ser Gln Val Glu Leu Tyr Arg Ala Tyr Val Ala Phe Pro

    1370                1375                1380

Asp Phe Phe Arg Asn Ser Thr Ala Lys Trp Trp Lys Arg Glu Ile

    1385                1390                1395

Glu Glu Leu Tyr Asn Asn Pro Gln Asn Pro Glu Arg Ser Leu Lys

    1400                1405                1410

Phe Asp Gly Met Trp Ile Asp Met Asn Glu Pro Ser Ser Phe Val

    1415                1420                1425

Asn Gly Ala Val Ser Pro Gly Cys Arg Asp Ala Ser Leu Asn His

    1430                1435                1440

Pro Pro Tyr Met Pro His Leu Glu Ser Arg Asp Arg Gly Leu Ser

    1445                1450                1455

Ser Lys Thr Leu Cys Met Glu Ser Gln Gln Ile Leu Pro Asp Gly

    1460                1465                1470

Ser Leu Val Gln His Tyr Asn Val His Asn Leu Tyr Gly Trp Ser

    1475                1480                1485

Gln Thr Arg Pro Thr Tyr Glu Ala Val Gln Glu Val Thr Gly Gln

    1490                1495                1500

Arg Gly Val Val Ile Thr Arg Ser Thr Phe Pro Ser Ser Gly Arg

    1505                1510                1515

Trp Ala Gly His Trp Leu Gly Asp Asn Thr Ala Ala Trp Asp Gln

    1520                1525                1530

Leu Lys Lys Ser Ile Ile Gly Met Met Glu Phe Ser Leu Phe Gly

    1535                1540                1545

Ile Ser Tyr Thr Gly Ala Asp Ile Cys Gly Phe Phe Gln Asp Ala

    1550                1555                1560

Glu Tyr Glu Met Cys Val Arg Trp Met Gln Leu Gly Ala Phe Tyr

    1565                1570                1575

Pro Phe Ser Arg Asn His Asn Thr Ile Gly Thr Arg Arg Gln Asp

    1580                1585                1590

Pro Val Ser Trp Asp Val Ala Phe Val Asn Ile Ser Arg Thr Val

    1595                1600                1605

Leu Gln Thr Arg Tyr Thr Leu Leu Pro Tyr Leu Tyr Thr Leu Met

    1610                1615                1620

His Lys Ala His Thr Glu Gly Val Thr Val Val Arg Pro Leu Leu

    1625                1630                1635

His Glu Phe Val Ser Asp Gln Val Thr Trp Asp Ile Asp Ser Gln

    1640                1645                1650

Phe Leu Leu Gly Pro Ala Phe Leu Val Ser Pro Val Leu Glu Arg

    1655                1660                1665

Asn Ala Arg Asn Val Thr Ala Tyr Phe Pro Arg Ala Arg Trp Tyr

    1670                1675                1680

Asp Tyr Tyr Thr Gly Val Asp Ile Asn Ala Arg Gly Glu Trp Lys

    1685                1690                1695

Thr Leu Pro Ala Pro Leu Asp His Ile Asn Leu His Val Arg Gly

    1700                1705                1710

Gly Tyr Ile Leu Pro Trp Gln Glu Pro Ala Leu Asn Thr His Leu

    1715                1720                1725

Ser Arg Gln Lys Phe Met Gly Phe Lys Ile Ala Leu Asp Asp Glu

    1730                1735                1740

Gly Thr Ala Gly Gly Trp Leu Phe Trp Asp Asp Gly Gln Ser Ile

    1745                1750                1755

Asp Thr Tyr Gly Lys Gly Leu Tyr Tyr Leu Ala Ser Phe Ser Ala

    1760                1765                1770

Ser Gln Asn Thr Met Gln Ser His Ile Ile Phe Asn Asn Tyr Ile

    1775                1780                1785

Thr Gly Thr Asn Pro Leu Lys Leu Gly Tyr Ile Glu Ile Trp Gly

    1790                1795                1800

Val Gly Ser Val Pro Val Thr Ser Val Ser Ile Ser Val Ser Gly

    1805                1810                1815

Met Val Ile Thr Pro Ser Phe Asn Asn Asp Pro Thr Thr Gln Val

    1820                1825                1830

Leu Ser Ile Asp Val Thr Asp Arg Asn Ile Ser Leu His Asn Phe

    1835                1840                1845

Thr Ser Leu Thr Trp Ile Ser Thr Leu

    1850                1855

<210>62

<211>1827

<212>PRT

<213>Rabbit sp.

<400>62

Met Ala Lys Arg Lys Phe Ser Gly Leu Glu Ile Thr Leu Ile Val Leu

1               5                   10                  15

Phe Val Ile Val Phe Ile Ile Ala Ile Ala Leu Ile Ala Val Leu Ala

            20                  25                 30

Thr Lys Thr Pro Ala Val Glu Glu Val Asn Pro Ser Ser Ser Thr Pro

        35                  40                  45

Thr Thr Thr Ser Thr Thr Thr Ser Thr Ser Gly Ser Val Ser Cys Pro

    50                  55                  60

Ser Glu Leu Asn Glu Val Val Asn Glu Arg Ile Asn Cys Ile Pro Glu

65                  70                  75                  80

Gln Ser Pro Thr Gln Ala Ile Cys Ala Gln Arg Asn Cys Cys Trp Arg

                85                  90                  95

Pro Trp Asn Asn Ser Asp Ile Pro Trp Cys Phe Phe Val Asp Asn His

            100                 105                 110

Gly Tyr Asn Val Glu Gly Met Thr Thr Thr Ser Thr Gly Leu Glu Ala

        115                 120                 125

Arg Leu Asn Arg Lys Ser Thr Pro Thr Leu Phe Gly Asn Asp Ile Asn

    130                 135                 140

Asn Val Leu Leu Thr Thr Glu Ser Gln Thr Ala Asn Arg Leu Arg Phe

145                 150                 155                 160

Lys Leu Thr Asp Pro Asn Asn Lys Arg Tyr Glu Val Pro His Gln Phe

                165                 170                 175

Val Thr Glu Phe Ala Gly Pro Ala Ala Thr Glu Thr Leu Tyr Asp Val

            180                 185                 190

Gln Val Thr Glu Asn Pro Phe Ser Ile Lys Val Ile Arg Lys Ser Asn

        195                 200                 205

Asn Arg Ile Leu Phe Asp Ser Ser Ile Gly Pro Leu Val Tyr Ser Asp

    210                 215                 220

Gln Tyr Leu Gln Ile Ser Thr Arg Leu Pro Ser Glu Tyr Met Tyr Gly

225                 230                 235                 240

Phe Gly Glu His Val His Lys Arg Phe Arg His Asp Leu Tyr Trp Lys

                245                 250                 255

Thr Trp Pro Ile Phe Thr Arg Asp Gln His Thr Asp Asp Asn Asn Asn

            260                 265                 270

Asn Leu Tyr Gly His Gln Thr Phe Phe Met Cys Ile Glu Asp Thr Thr

        275                 280                 285

Gly Lys Ser Phe Gly Val Phe Leu Met Asn Ser Asn Ala Met Glu Ile

    290                 295                 300

Phe Ile Gln Pro Thr Pro Ile Val Thr Tyr Arg Val Ile Gly Gly Ile

305                 310                 315                 320

Leu Asp Phe Tyr Ile Phe Leu Gly Asp Thr Pro Glu Gln Val Val Gln

                325                 330                 335

Gln Tyr Gln Glu Leu Ile Gly Arg Pro Ala Met Pro Ala Tyr Trp Ser

            340                 345                 350

Leu Gly Phe Gln Leu Ser Arg Trp Asn Tyr Asn Ser Leu Asp Val Val

        355                 360                 365

Lys Glu Val Val Arg Arg Asn Arg Glu Ala Leu Ile Pro Phe Asp Thr

    370                 375                 380

Gln Val Ser Asp Ile Asp Tyr Met Glu Asp Lys Lys Asp Phe Thr Tyr

385                 390                 395                 400

Asp Arg Val Ala Tyr Asn Gly Leu Pro Asp Phe Val Gln Asp Leu His

                405                 410                 415

Asp His Gly Gln Lys Tyr Val Ile Ile Leu Asp Pro Ala Ile Ser Ile

            420                 425                 430

Asn Arg Arg Ala Ser Gly Glu Ala Tyr Glu Ser Tyr Asp Arg Gly Asn

        435                 440                 445

Ala Gln Asn Val Trp Val Asn Glu Ser Asp Gly Thr Thr Pro Ile Val

    450                 455                 460

Gly Glu Val Trp Pro Gly Asp Thr Val Tyr Pro Asp Phe Thr Ser Pro

465                 470                 475                 480

Asn Cys Ile Glu Trp Trp Ala Asn Glu Cys Asn Ile Phe His Gln Glu

                485                 490                 495

Val Asn Tyr Asp Gly Leu Trp Ile Asp Met Asn Glu Val Ser Ser Phe

            500                 505                 510

Val Gln Gly Ser Asn Lys Gly Cys Asn Asp Asn Thr Leu Asn Tyr Pro

        515                 520                 525

Pro Tyr Ile Pro Asp Ile Val Asp Lys Leu Met Tyr Ser Lys Thr Leu

    530                 535                 540

Cys Met Asp Ser Val Gln Tyr Trp Gly Lys Gln Tyr Asp Val His Ser

545                 550                 555                 560

Leu Tyr Gly Tyr Ser Met Ala Ile Ala Thr Glu Arg Ala Val Glu Arg

                565                 570                 575

Val Phe Pro Asn Lys Arg Ser Phe Ile Leu Thr Arg Ser Thr Phe Ala

            580                 585                 590

Gly Ser Gly Arg His Ala Ala His Trp Leu Gly Asp Asn Thr Ala Thr

        595                 600                 605

Trp Glu Gln Met Glu Trp Ser Ile Thr Gly Met Leu Glu Phe Gly Leu

    610                 615                 620

Phe Gly Met Pro Leu Val Gly Ala Asp Ile Cys Gly Phe Leu Ala Glu

625                 630                 635                 640

Thr Thr Glu Glu Leu Cys Arg Arg Trp Met Gln Leu Gly Ala Phe Tyr

                645                 650                 655

Pro Phe Ser Arg Asn His Asn Ala Asp Gly Phe Glu His Gln Asp Pro

            660                 665                 670

Ala Phe Phe Gly Gln Asp Ser Leu Leu Val Lys Ser Ser Arg His Tyr

        675                 680                 685

Leu Asn Ile Arg Tyr Thr Leu Leu Pro Phe Leu Tyr Thr Leu Phe Tyr

    690                 695                 700

Lys Ala His Ala Phe Gly Glu Thr Val Ala Arg Pro Val Leu His Glu

705                 710                 715                 720

Phe Tyr Glu Asp Thr Asn Ser Trp Val Glu Asp Arg Glu Phe Leu Trp

                725                 730                 735

Gly Pro Ala Leu Leu Ile Thr Pro Val Leu Thr Gln Gly Ala Glu Thr

            740                 745                 750

Val Ser Ala Tyr Ile Pro Asp Ala Val Trp Tyr Asp Tyr Glu Thr Gly

        755                 760                 765

Ala Lys Arg Pro Trp Arg Lys Gln Arg Val Glu Met Ser Leu Pro Ala

    770                 775                 780

Asp Lys Ile Gly Leu His Leu Arg Gly Gly Tyr Ile Ile Pro Ile Gln

785                 790                 795                 800

Gln Pro Ala Val Thr Thr Thr Ala Ser Arg Met Asn Pro Leu Gly Leu

                805                 810                 815

Ile Ile Ala Leu Asn Asp Asp Asn Thr Ala Val Gly Asp Phe Phe Trp

            820                 825                 830

Asp Asp Gly Glu Thr Lys Asp Thr Val Gln Asn Asp Asn Tyr Ile Leu

        835                 840                 845

Tyr Thr Phe Ala Val Ser Asn Asn Asn Leu Asn Ile Thr Cys Thr His

    850                 855                 860

Glu Leu Tyr Ser Glu Gly Thr Thr Leu Ala Phe Gln Thr Ile Lys Ile

865                 870                 875                 880

Leu Gly Val Thr Glu Thr Val Thr Gln Val Thr Val Ala Glu Asn Asn

                885                 890                 895

Gln Ser Met Ser Thr His Ser Asn Phe Thr Tyr Asp Pro Ser Asn Gln

            900                 905                 910

Val Leu Leu Ile Glu Asn Leu Asn Phe Asn Leu Gly Arg Asn Phe Arg

        915                 920                 925

Val Gln Trp Asp Gln Thr Phe Leu Glu Ser Glu Lys Ile Thr Cys Tyr

    930                 935                 940

Pro Asp Ala Asp Ile Ala Thr Gln Glu Lys Cys Thr Gln Arg GLy Cys

945                 950                 955                 960

Ile Trp Asp Thr Asn Thr Val Asn Pro Arg Ala Pro Glu Cys Tyr Phe

                965                 970                 975

Pro Lys Thr Asp Asn Pro Tyr Ser Val Ser Ser Thr Gln Tyr Ser Pro

            980                 985                 990

Thr Gly Ile Thr Ala Asp Leu Gln Leu Asn Pro Thr Arg Thr Arg Ile

        995                 1000                1005

Thr Leu Pro Ser Glu Pro Ile Thr Asn Leu Arg Val Glu Val Lys

    1010                1015                1020

Tyr His Lys Asn Asp Met Val Gln Phe Lys Ile Phe Asp Pro Gln

    1025                1030                1035

Asn Lys Arg Tyr Glu Val Pro Val Pro Leu Asp Ile Pro Ala Thr

    1040                1045                1050

Pro Thr Ser Thr Gln Glu Asn Arg Leu Tyr Asp Val Glu Ile Lys

    1055                1060                1065

Glu Asn Pro Phe Gly Ile Gln Ile Arg Arg Arg Ser Thr Gly Lys

    1070                1075                1080

Val Ile Trp Asp Ser Cys Leu Pro Gly Phe Ala Phe Asn Asp Gln

    1085                1090                1095

Phe Ile Gln Ile Ser Thr Arg Leu Pro Ser Glu Tyr Ile Tyr Gly

    1100                1105                1110

Phe Gly Glu Ala Glu His Thr Ala Phe Lys Arg Asp Leu Asn Trp

    1115                1120                1125

His Thr Trp Gly Met Phe Thr Arg Asp Gln Pro Pro Gly Tyr Lys

    1130                1135                1140

Leu Asn Ser Tyr Gly Phe His Pro Tyr Tyr Met Ala Leu Glu Asp

    1145                1150                1155

Glu Gly Asn Ala His Gly Val Leu Leu Leu Asn Ser Asn Ala Met

    1160                1165                1170

Asp Val Thr Phe Met Pro Thr Pro Ala Leu Thr Tyr Arg Val Ile

    1175                1180                1185

Gly Gly Ile Leu Asp Phe Tyr Met Phe Leu Gly Pro Thr Pro Glu

    1190                1195                1200

Val Ala Thr Gln Gln Tyr His Glu Val Ile Gly His Pro Val Met

    1205                1210                1215

Pro Pro Tyr Trp Ser Leu Gly Phe Gln Leu Cys Arg Tyr Gly Tyr

    1220                1225                1230

Arg Asn Thr Ser Glu Ile Ile Glu Leu Tyr Glu Gly Met Val Ala

    1235                1240                1245

Ala Asp Ile Pro Tyr Asp Val Gln Tyr Thr Asp Ile Asp Tyr Met

    1250                1255                1260

Glu Arg Gln Leu Asp Phe Thr Ile Asp Glu Asn Phe Arg Glu Leu

    1265                1270                1275

Pro Gln Phe Val Asp Arg Ile Arg Gly Glu Gly Met Arg Tyr Ile

    1280                1285                1290

Ile Ile Leu Asp Pro Ala Ile Ser Gly Asn Glu Thr Arg Pro Tyr

    1295                1300                1305

Pro Ala Phe Asp Arg Gly Glu Ala Lys Asp Val Phe Val Lys Trp

    1310                1315                1320

Pro Asn Thr Ser Asp Ile Cys Trp Ala Lys Val Trp Pro Asp Leu

    1325                1330                1335

Pro Asn Ile Thr Ile Asp Glu Ser Leu Thr Glu Asp Glu Ala Val

    1340                1345                1350

Asn Ala Ser Arg Ala His Ala Ala Phe Pro Asp Phe Phe Arg Asn

    1355                1360                1365

Ser Thr Ala Glu Trp Trp Thr Arg Glu Ile Leu Asp Phe Tyr Asn

    1370                1375                1380

Asn Tyr Met Lys Phe Asp Gly Leu Trp Ile Asp Met Asn Glu Pro

    1385                1390                1395

Ser Ser Phe Val Asn Gly Thr Thr Thr Asn Val Cys Arg Asn Thr

    1400                1405                1410

Glu Leu Asn Tyr Pro Pro Tyr Phe Pro Glu Leu Thr Lys Arg Thr

    1415                1420                1425

Asp Gly Leu His Phe Arg Thr Met Cys Met Glu Thr Glu His Ile

    1430                1435                1440

Leu Ser Asp Gly Ser Ser Val Leu His Tyr Asp Val His Asn Leu

    1445                1450                1455

Tyr Gly Trp Ser Gln Ala Lys Pro Thr Tyr Asp Ala Leu Gln Lys

    1460                1465                1470

Thr Thr Gly Lys Arg Gly Ile Val Ile Ser Arg Ser Thr Tyr Pro

    1475                1480                1485

Thr Ala Gly Arg Trp Ala Gly His Trp Leu Gly Asp Asn Tyr Ala

    1490                1495                1500

Arg Trp Asp Asn Met Asp Lys Ser Ile Ile Gly Met Met Glu Phe

    1505                1510                1515

Ser Leu Phe Gly Ile Ser Tyr Thr Gly Ala Asp Ile Cys Gly Phe

    1520                1525                1530

Phe Asn Asp Ser Glu Tyr His Leu Cys Thr Arg Trp Thr Gln Leu

    1535                1540                1545

Gly Ala Phe Tyr Pro Phe Ala Arg Asn His Asn Ile Gln Phe Thr

    1550                1555                1560

Arg Arg Gln Asp Pro Val Ser Trp Asn Gln Thr Phe Val Glu Met

    1565                1570                1575

Thr Arg Asn Val Leu Asn Ile Arg Tyr Thr Leu Leu Pro Tyr Phe

    1580                1585                1590

Tyr Thr Gln Leu His Glu Ile His Ala His Gly Gly Thr Val Ile

    1595                1600                1605

Arg Pro Leu Met His Glu Phe Phe Asp Asp Arg Thr Thr Trp Asp

    1610                1615                1620

Ile Phe Leu Gln Phe Leu Trp Gly Pro Ala Phe Met Val Thr Pro

    1625                1630                1635

Val Leu Glu Pro Tyr Thr Thr Val Val Arg Gly Tyr Val Pro Asn

    1640                1645                1650

Ala Arg Trp Phe Asp Tyr His Thr Gly Glu Asp Ile Gly Ile Arg

    1655                1660                1665

Gly Gln Val Gln Asp Leu Thr Leu Leu Met Asn Ala Ile Asn Leu

    1670                1675                1680

His Val Arg Gly Gly His Ile Leu Pro Cys Gln Glu Pro Ala Arg

    1685                1690                1695

Thr Thr Phe Leu Ser Arg Gln Lys Tyr Met Lys Leu Ile Val Ala

    1700                1705                1710

Ala Asp Asp Asn His Met Ala Gln Gly Ser Leu Phe Trp Asp Asp

    1715                1720                1725

Gly Asp Thr Ile Asp Thr Tyr Glu Arg Asp Leu Tyr Leu Ser Val

    1730                1735                1740

Gln Phe Asn Leu Asn Lys Thr Thr Leu Thr Ser Thr Leu Leu Lys

    1745                1750                1755

Thr Gly Tyr Ile Asn Lys Thr Glu Ile Arg Leu Gly Tyr Val His

    1760                1765                1770

Val Trp Gly Ile Gly Asn Thr Leu Ile Asn Glu Val Asn Leu Met

    1775                1780                1785

Tyr Asn Glu Ile Asn Tyr Pro Leu Ile Phe Asn Gln Thr Gln Ala

    1790                1795                1800

Gln Glu Ile Leu Asn Ile Asp Leu Thr Ala His Glu Val Thr Leu

    1805                1810                1815

Asp Asp Pro Ile Glu Ile Ser Trp Ser

    1820                1825

<210>63

<211>1841

<212>PRT

<213>Rattus norvegicus

<400>63

Met Ala Lys Lys Lys Phe Ser Ala Leu Glu Ile Ser Leu Ile Val Leu

1               5                   10                  15

Phe Ile Ile Val Thr Ala Ile Ala Ile Ala Leu Val Thr Val Leu Ala

            20                  25                  30

Thr Lys Val Pro Ala Val Glu Glu Ile Lys Ser Pro Thr Pro Thr Ser

        35                  40                  45

Asn Ser Thr Pro Thr Ser Thr Pro Thr Ser Thr Ser Thr Pro Thr Ser

    50                  55                  60

Thr Ser Thr Pro Ser Pro Gly Lys Cys Pro Pro Glu Gln Gly Glu Pro

65                  70                  75                  80

Ile Asn Glu Arg Ile Asn Trp Ile Pro Glu Gln His Pro Thr Lys Ala

                85                  90                  95

Ile Cys Glu Glu Arg Gly Cys Cys Trp Arg Pro Trp Asn Asn Thr Val

            100                 105                 110

Ile Pro Trp Cys Phe Phe Ala Asp Asn His Gly Tyr Asn Ala Glu Ser

         115                 120                 125

Ile Thr Asn Glu Asn Ala Gly Leu Lys Ala Thr Leu Asn Arg Ile Pro

    130                 135                 140

Ser Pro Thr Leu Phe Gly Glu Asp Ile Lys Ser Val Ile Leu Thr Thr

145                 150                 155                 160

Gln Thr Gln Thr Gly Asn Arg Phe Arg Phe Lys Ile Thr Asp Pro Asn

                165                 170                 175

Asn Lys Arg Tyr Glu Val Pro His Gln Phe Val Lys Glu Glu Thr Gly

            180                 185                 190

Ile Pro Ala Ala Asp Thr Leu Tyr Asp Val Gln Val Ser Glu Asn Pro

        195                 200                 205

Phe Ser Ile Lys Val Ile Arg Lys Ser Asn Asn Lys Val Leu Cys Asp

    210                 215                 220

Thr Ser Val Gly Pro Leu Leu Tyr Ser Asn Gln Tyr Leu Gln Ile Ser

225                 230                 235                 240

Thr Arg Leu Pro Ser Glu Tyr Ile Tyr Gly Phe Gly Gly His Ile His

                245                 250                 255

Lys Arg Phe Arg His Asp Leu Tyr Trp Lys Thr Trp Pro Ile Phe Thr

            260                 265                 270

Arg Asp Glu Ile Pro Gly Asp Asn Asn His Asn Leu Tyr Gly His Gln

        275                 280                 285

Thr Phe Phe Met Gly Ile Gly Asp Thr Ser Gly Lys Ser Tyr Gly Val

    290                 295                 300

Phe Leu Met Asn Ser Asn Ala Met Glu Val Phe Ile Gln Pro Thr Pro

305                 310                 315                 320

Ile Ile Thr Tyr Arg Val Thr Gly Gly Ile Leu Asp Phe Tyr Ile Phe

                325                 330                 335

Leu Gly Asp Thr Pro Glu Gln Val Val Gln Gln Tyr Gln Glu Val His

            340                 345                 350

Trp Arg Pro Ala Met Pro Ala Tyr Trp Asn Leu Gly Phe Gln Leu Ser

        355                 360                 365

Arg Trp Asn Tyr Gly Ser Leu Asp Thr Val Ser Glu Val Val Arg Arg

    370                 375                 380

Asn Arg Glu Ala Gly Ile Pro Tyr Asp Ala Gln Val Thr Asp Ile Asp

385                 390                 395                 400

Tyr Met Glu Asp His Lys Glu Phe Thr Tyr Asp Arg Val Lys Phe Asn

                405                 410                 415

Gly Leu Pro Glu Phe Ala Gln Asp Leu His Asn His Gly Lys Tyr Ile

            420                 425                 430

Ile Ile Leu Asp Pro Ala Ile Ser Ile Asn Lys Arg Ala Asn Gly Ala

        435                 440                 445

Glu Tyr Gln Thr Tyr Val Arg Gly Asn Glu Lys Asn Val Trp Val Asn

    450                 455                 460

Glu Ser Asp Gly Thr Thr Pro Leu Ile Gly Glu Val Trp Pro Gly Leu

465                 470                 475                 480

Thr Val Tyr Pro Asp Phe Thr Asn Pro Gln Thr Ile Glu Trp Trp Ala

                485                 490                 495

Asn Glu Cys Asn Leu Phe His Gln Gln Val Glu Tyr Asp Gly Leu Trp

            500                 505                 510

Ile Asp Met Asn Glu Val Ser Ser Phe Ile Gln Gly Ser Leu Asn Leu

        515                 520                 525

Lys Gly Val Leu Leu Ile Val Leu Asn Tyr Pro Pro Phe Thr Pro Gly

    530                 535                 540

Ile Leu Asp Lys Val Met Tyr Ser Lys Thr Leu Cys Met Asp Ala Val

545                 550                 555                 560

Gln His Trp Gly Lys Gln Tyr Asp Val His Ser Leu Tyr Gly Tyr Ser

                565                 570                 575

Met Ala Ile Ala Thr Glu Gln Ala Val Glu Arg Val Phe Pro Asn Lys

            580                 585                 590

Arg Ser Phe Ile Leu Thr Arg Ser Thr Phe Gly Gly Ser Gly Arg His

        595                 600                 605

Ala Asn His Trp Leu Gly Asp Asn Thr Ala Ser Trp Glu Gln Met Glu

    610                 615                 620

Trp Ser Ile Thr Gly Met Leu Glu Phe Gly Ile Phe Gly Met Pro Leu

625                 630                 635                 640

Val Gly Ala Thr Ser Cys Gly Phe Leu Ala Asp Thr Thr Glu Glu Leu

                645                 650                 655

Cys Arg Arg Trp Met Gln Leu Gly Ala Phe Tyr Pro Phe Ser Arg Asn

            660                 665                 670

His Asn Ala Glu Gly Tyr Met Glu Gln Asp Pro Ala Tyr Phe Gly Gln

        675                 680                 685

Asp Ser Ser Arg His Tyr Leu Thr Ile Arg Tyr Thr Leu Leu Pro Phe

    690                 695                 700

Leu Tyr Thr Leu Phe Tyr Arg Ala His Met Phe Gly Glu Thr Val Ala

705                 710                 715                 720

Arg Pro Phe Leu Tyr Glu Phe Tyr Asp Asp Thr Asn Ser Trp Ile Glu

                725                 730                 735

Asp Thr Gln Phe Leu Trp Gly Pro Ala Leu Leu Ile Thr Pro Val Leu

            740                 745                 750

Arg Pro Gly Val Glu Asn Val Ser Ala Tyr Ile Pro Asn Ala Thr Trp

        755                 760                 765

Tyr Asp Tyr Glu Thr Gly Ile Lys Arg Pro Trp Arg Lys Glu Arg Ile

    770                 775                 780

Asn Met Tyr Leu Pro Gly Asp Lys Ile Gly Leu His Leu Arg Gly Gly

785                 790                 795                 800

Tyr Ile Ile Pro Thr Gln Glu Pro Asp Val Thr Thr Thr Ala Ser Arg

                805                 810                 815

Lys Asn Pro Leu Gly Leu Ile Val Ala Leu Asp Asp Asn Gln Ala Ala

            820                 825                 830

Lys Gly Glu Leu Phe Trp Asp Asp Gly Glu Ser Lys Asp Ser Ile Glu

        835                 840                 845

Lys Lys Met Tyr Ile Leu Tyr Thr Phe Ser Val Ser Asn Asn Glu Leu

    850                 855                 860

Val Leu Asn Cys Thr His Ser Ser Tyr Ala Glu Gly Thr Ser Leu Ala

865                 870                 875                 880

Phe Lys Thr Ile Lys Val Leu Gly Leu Arg Glu Asp Val Arg Ser Ile

                885                 890                 895

Thr Val Gly Glu Asn Asp Gln Gln Met Ala Thr His Thr Asn Phe Thr

            900                 905                 910

Phe Asp Ser Ala Asn Lys Ile Leu Ser Ile Thr Ala Leu Asn Phe Asn

        915                 920                 925

Leu Ala Gly Ser Phe Ile Val Arg Trp Cys Arg Thr Phe Ser Asp Asn

    930                 935                 940

Glu Lys Phe Thr Cys Tyr Pro Asp Val Gly Thr Ala Thr Glu Gly Thr

945                 950                 955                 960

Cys Thr Gln Arg Gly Cys Leu Trp Gln Pro Val Ser Gly Leu Ser Asn

                 965                 970                 975

Val  Pro Pro Tyr Tyr Phe Pro Pro Glu Asn Asn Pro Tyr Thr Leu Thr

             980                 985                 990

Ser Ile Gln Pro Leu Pro Thr Gly Ile Thr Ala Glu Leu Gln Leu Asn

        995                 1000                1005

Pro Pro Asn Ala Arg Ile Lys Leu Pro Ser Asn Pro Ile Ser Thr

    1010                1015                1020

Leu Arg Val Gly Val Lys Tyr His Pro Asn Asp Met Leu Gln Phe

    1025                1030                1035

Lys Ile Tyr Asp Ala Gln His Lys Arg Tyr Glu Val Pro Val Pro

    1040                1045                1050

Leu Asn Ile Pro Asp Thr Pro Thr Ser Ser Asn Glu Arg Leu Tyr

    1055                1060                1065

Asp Val Glu Ile Lys Glu Asn Pro Phe Gly Ile Gln Val Arg Arg

    1070                1075                1080

Arg Ser Ser Gly Lys Leu Ile Trp Asp Ser Arg Leu Pro Gly Phe

    1085                1090                1095

Gly Phe Asn Asp Gln Phe Ile Gln Ile Ser Thr Arg Leu Pro Ser

    1100                1105                1110

Asn Tyr Leu Tyr Gly Phe Gly Glu Val Glu His Thr Ala Phe Lys

    1115                1120                1125

Arg Asp Leu Asn Trp His Thr Trp Gly Met Phe Thr Arg Asp Gln

    1130                1135                1140

Pro Pro Gly Tyr Lys Leu Asn Ser Tyr Gly Phe His Pro Tyr Tyr

    1145                1150                1155

Met Ala Leu Glu Asn Glu Gly Asn Ala His Gly Val Leu Leu Leu

    1160                1165                1170

Asn Ser Asn Gly Met Asp Val Thr Phe Gln Pro Thr Pro Ala Leu

    1175                1180                1185

Thr Tyr Arg Thr Ile Gly Gly Ile Leu Asp Phe Tyr Met Phe Leu

    1190                1195                1200

Gly Pro Thr Pro Glu Ile Ala Thr Arg Gln Tyr His Glu Val Ile

    1205                1210                1215

Gly Phe Pro Val Met Pro Pro Tyr Trp Ala Leu Gly Phe Gln Leu

    1220                1225                1230

Cys Arg Tyr Gly Tyr Arg Asn Thr Ser Glu Ile Glu Gln Leu Tyr

    1235                1240                1245

Asn Asp Met Val Ala Ala Asn Ile Pro Tyr Asp Val Gln Tyr Thr

    1250                1255                1260

Asp Ile Asn Tyr Met Glu Arg Gln Leu Asp Phe Thr Ile Gly Glu

    1265                1270                1275

Arg Phe Lys Thr Leu Pro Glu Phe Val Asp Arg Ile Arg Lys Asp

    1280                1285                1290

Gly Met Lys Tyr Ile Val Ile Leu Ala Pro Ala Ile Ser Gly Asn

    1295                1300                1305

Glu Thr Gln Pro Tyr Pro Ala Phe Glu Arg Gly Ile Gln Lys Asp

    1310                1315                1320

Val Phe Val Lys Trp Pro Asn Thr Asn Asp Ile Cys Trp Pro Lys

    1325                1330                1335

Val Trp Pro Asp Leu Pro Asn Val ThrIle Asp Glu Thr Ile Thr

    1340                1345                1350

Glu Asp Glu Ala Val Asn Ala Ser Arg Ala His Val Ala Phe Pro

    1355                1360                1365

Asp Phe Phe Arg Asn Ser Thr Leu Glu Trp Trp Ala Arg Glu Ile

    1370                1375                1380

Tyr Asp Phe Tyr Asn Glu Lys Met Lys Phe Asp Gly Leu Trp Ile

    1385                1390                1395

Asp Met Asn Glu Pro Ser Ser Phe Gly Ile Gln Met Gly Gly Lys

    1400                1405                1410

Val Leu Asn Glu Cys Arg Arg Met Met Thr Leu Asn Tyr Pro Pro

    1415                1420                1425

Val Phe Ser Pro Glu Leu Arg Val Lys Glu Gly Glu Gly Ala Ser

    1430                1435                1440

Ile Ser Glu Ala Met Cys Met Glu Thr Glu His Ile Leu Ile Asp

    1445                1450                1455

Gly Ser Ser Val Leu Gln Tyr Asp Val His Asn Leu Tyr Gly Trp

    1460                1465                1470

Ser Gln Val Lys Pro Thr Leu Asp Ala Leu Gln Asn Thr Thr Gly

    1475                1480                1485

Leu Arg Gly Ile Val Ile Ser Arg Ser Thr Tyr Pro Thr Thr Gly

    1490                1495                1500

Arg Trp Gly Gly His Trp Leu Gly Asp Asn Tyr Thr Thr Trp Asp

    1505                1510                1515

Asn Leu Glu Lys Ser Leu Ile Gly Met Leu Glu Leu Asn Leu Phe

    1520                1525                1530

Gly Ile Pro Tyr Ile Gly Ala Asp Ile Cys Gly Val Phe His Asp

    1535                1540                1545

Ser Gly Tyr Pro Ser Leu Tyr Phe Val Gly Ile Gln Val Gly Ala

    1550                1555                1560

Phe Tyr Pro Tyr Pro Arg Glu Ser Pro Thr Ile Asn Phe Thr Arg

    1565                1570                1575

Ser Gln Asp Pro Val Ser Trp Met Lys Leu Leu Leu Gln Met Ser

    1580                1585                1590

Lys Lys Val Leu Glu Ile Arg Tyr Thr Leu Leu Pro Tyr Phe Tyr

    1595                1600                1605

Thr Gln Met His Glu Ala His Ala His Gly Gly Thr Val Ile Arg

    1610                1615                1620

Pro Leu Met His Glu Phe Phe Asp Asp Lys Glu Thr Trp Glu Ile

    1625                1630                1635

Tyr Lys Gln Phe Leu Trp Gly Pro Ala Phe Met Val Thr Pro Val

    1640                1645                1650

Val Glu Pro Phe Arg Thr Ser Val Thr Gly Tyr Val Pro Lys Ala

    1655                1660                1665

Arg Trp Phe Asp Tyr His Thr Gly Ala Asp Ile Lys Leu Lys Gly

    1670                1675                1680

Ile Leu His Thr Phe Ser Ala Pro Phe Asp Thr Ile Asn Leu His

    1685                1690                1695

Val Arg Gly Gly Tyr Ile Leu Pro Cys Gln Glu Pro Ala Arg Asn

    1700                1705                1710

Thr His Leu Ser Arg Gln Asn Tyr Met Lys Leu Ile Val Ala Ala

    1715                1720                1725

Asp Asp Asn Gln Met Ala Gln Gly Thr Leu Phe Gly Asp Asp Gly

    1730                1735                1740

Glu Ser Ile Asp Thr Tyr Glu Arg Gly Gln Tyr Thr Ser Ile Gln

    1745                1750                1755

Phe Asn Leu Asn Gln Thr Thr Leu Thr Ser Thr Val Leu Ala Asn

    1760                1765                1770

Gly Tyr Lys Asn Lys Gln Glu Met Arg Leu Gly Ser Ile His Ile

    1775                1780                1785

Trp Gly Lys Gly Thr Leu Arg Ile Ser Asn Ala Asn Leu Val Tyr

    1790                1795                1800

Gly Gly Arg Lys His Gln Pro Pro Phe Thr Gln Glu Glu Ala Lys

    1805                1810                1815

Glu Thr Leu Ile Phe Asp Leu Lys Asn Met Asn Val Thr Leu Asp

    1820                1825                1830

Glu Pro Ile Gln Ile Thr Trp Ser

    1835                1840

<210>64

<211>902

<212>PRT

<213>Arabidopsis thaliana

<400>64

Met Ser Ser Leu His Trp Phe Pro Asn Ile Phe Ile Val Val Val Val

1               5                   10                  15

Phe Phe Ser Leu Arg Ser Ser Gln Val Val Leu Glu Glu Glu Glu Ser

            20                  25                  30

Thr Val Val Gly Tyr Gly Tyr Val Val Arg Ser Val Gly Val Asp Ser

        35                  40                  45

Asn Arg Gln Val Leu Thr Ala Lys Leu Asp Leu Ile Lys Pro Ser Ser

    50                  55                  60

Val Tyr Ala Pro Asp Ile Lys Ser Leu Asn Leu His Val Ser Leu Glu

65                  70                  75                  80

Thr Ser Glu Arg Leu Arg Ile Arg Ile Thr Asp Ser Ser Gln Gln Arg

                85                  90                  95

Trp Glu Ile Pro Glu Thr Val Ile Pro Arg Ala Gly Asn His Ser Pro

            100                 105                 110

Arg Arg Phe Ser Thr Glu Glu Asp Gly Gly Asn Ser Pro Glu Asn Asn

        115                 120                 125

Phe Leu Ala Asp Pro Ser Ser Asp Leu Val Phe Thr Leu His Asn Thr

    130                 135                 140

Thr Pro Phe Gly Phe Ser Val Ser Arg Arg Ser Ser Gly Asp Ile Leu

145                 150                 155                 160

Phe Asp Thr Ser Pro Asp Ser Ser Asp Ser Asn Thr Tyr Phe Ile Phe

                165                 170                 175

Lys Asp Gln Phe Leu Gln Leu Ser Ser Ala Leu Pro Glu Asn Arg Ser

            180                 185                 190

Asn Leu Tyr Gly Ile Gly Glu His Thr Lys Arg Ser Phe Arg Leu Ile

        195                 200                 205

Pro Gly Glu Thr Met Thr Leu Trp Asn Ala Asp Ile Gly Ser Glu Asn

    210                 215                 220

Pro Asp Val Asn Leu Tyr Gly Ser His Pro Phe Tyr Met Asp Val Arg

225                 230                 235                 240

Gly Ser Lys Gly Asn Glu Glu Ala Gly Thr Thr His Gly Val Leu Leu

                245                 250                 255

Leu Asn Ser Asn Gly Met Asp Val Lys Tyr Glu Gly His Arg Ile Thr

            260                 265                 270

Tyr Asn Val Ile Gly Gly Val Ile Asp Leu Tyr Val Phe Ala Gly Pro

        275                 280                 285

Ser Pro Glu Met Val Met Asn Gln Tyr Thr Glu Leu Ile Gly Arg Pro

    290                 295                 300

Ala Pro Met Pro Tyr Trp Ser Phe Gly Phe His Gln Cys Arg Tyr Gly

305                 310                 315                 320

Tyr Lys Asn Val Ser Asp Leu Glu Tyr Val Val Asp Gly Tyr Ala Lys

                325                 330                 335

Ala Gly Ile Pro Leu Glu Val Met Trp Thr Asp Ile Asp Tyr Met Asp

            340                 345                 350

Gly Tyr Lys Asp Phe Thr Leu Asp Pro Val Asn Phe Pro Glu Asp Lys

        355                 360                 365

Met Gln Ser Phe Val Asp Thr Leu His Lys Asn Gly Gln Lys Tyr Val

    370                 375                 380

Leu Ile Leu Asp Pro Gly Ile Gly Val Asp Ser Ser Tyr Gly Thr Tyr

385                 390                 395                 400

Asn Arg Gly Met Glu Ala Asp Val Phe Ile Lys Arg Asn Gly Glu Pro

                405                 410                 415

Tyr Leu Gly Glu Val Trp Pro Gly Lys Val Tyr Phe Pro Asp Phe Leu

            420                 425                 430

Asn Pro Ala Ala Ala Thr Phe Trp Ser Asn Glu Ile Lys Met Phe Gln

        435                 440                 445

Glu Ile Leu Pro Leu Asp Gly Leu Trp Ile Asp Met Asn Glu Leu ser

    450                 455                 460

Asn Phe Ile Thr Ser Pro Leu Ser Ser Gly Ser Ser Leu Asp Asp Pro

465                 470                 475                 480

Pro Tyr Lys Ile Asn Asn Ser Gly Asp Lys Arg Pro Ile Asn Asn Lys

                485                 490                 495

Thr Val Pro Ala Thr Ser Ile His Phe Gly Asn Ile Ser Glu Tyr Asp

            500                 505                 510

Ala His Asn Leu Tyr Gly Leu Leu Glu Ala Lys Ala Thr His Gln Ala

        515                 520                 525

Val Val Asp Ile Thr Gly Lys Arg Pro Phe Ile Leu Ser Arg Ser Thr

    530                 535                 540

Phe Val Ser Ser Gly Lys Tyr Thr Ala His Trp Thr Gly Asp Asn Ala

545                 550                 555                 560

Ala Lys Trp Glu Asp Leu Ala Tyr Ser Ile Pro Gly Ile Leu Asn Phe

                565                 570                 575

Gly Leu Phe Gly Ile Pro Met Val Gly Ala Asp Ile Cys Gly Phe Ser

            580                 585                 590

His Asp Thr Thr Glu Glu Leu Cys Arg Arg Trp Ile Gln Leu Gly Ala

        595                 600                 605

Phe Tyr Pro Phe Ala Arg Asp His Ser Ser Leu Gly Thr Ala Arg Gln

    610                 615                 620

Glu Leu Tyr Leu Trp Asp Ser Val Ala Ser Ser Ala Arg Lys Val Leu

625                 630                 635                 640

Gly Leu Arg Met Arg Leu Leu Pro His Leu Tyr Thr Leu Met Tyr Glu

                645                 650                 655

Ala His Val Ser Gly Asn Pro Ile Ala Arg Pro Leu Phe Phe Ser Phe

            660                 665                 670

Pro Gln Asp Thr Lys Thr Tyr Glu Ile Asp Ser Gln Phe Leu Ile Gly

        675                 680                 685

Lys Ser Ile Met Val Ser Pro Ala Leu Lys Gln Gly Ala Val Ala Val

    690                 695                 700

Asp Ala Tyr Phe Pro Ala Gly Asn Trp Phe Asp Leu Phe Asn Tyr Ser

705                 710                 715                 720

Phe Ala Val Gly Gly Asp Ser Gly Lys His Val Arg Leu Asp Thr Pro

                725                 730                 735

Ala Asp His Val Asn Val His Val Arg Glu Gly Ser Ile Val Ala Met

            740                 745                 750

Gln Gly Glu Ala Leu Thr Thr Arg Asp Ala Arg Lys Thr Pro Tyr Gln

        755                 760                 765

Leu Leu Val Val Ala Ser Arg Leu Glu Asn Ile Ser Gly Glu Leu Phe

    770                 775                 780

Leu Asp Asp Gly Glu Asn Leu Arg Met Gly Ala Gly Gly Gly Asn Arg

785                 790                 795                 800

Asp Trp Thr Leu Val Lys Phe Arg Cys Tyr Val Thr Gly Lys Ser Val

                805                 810                 815

Val Leu Arg Ser Glu Val Val Asn Pro Glu Tyr Ala Ser Lys Met Lys

             820                 825                 830

Trp Ser Ile Gly Lys Val Thr Phe Val Gly Phe Glu Asn Val Glu Asn

        835                 840                 845

Val Lys Thr Tyr Glu Val Arg Thr Ser Glu Arg Leu Arg Ser Pro Arg

    850                 855                 860

Ile Ser LeuIle Lys Thr Val Ser Asp Asn Asp Asp Pro Arg Phe Leu

865                 870                 875                 880

Ser Val Glu Val Ser Lys Leu Ser Leu Leu Val Gly Lys Lys Phe Glu

                885                 890                 895

Met Arg Leu Arg Leu Thr

            900

<210>65

<211>903

<212>PRT

<213>Spinacia oleracea

<400>65

Met Lys Lys Lys Ile Pro Ser Leu Ala Leu Gly Ile Leu Leu Val Phe

1               5                   10                  15

Leu Leu Gln Tyr Leu Val Ala Gly Ile Ser Thr Ser Glu Asn Asp Pro

            20                  25                  30

Glu Gly Val Ile Gly Tyr Gly Tyr Lys Val Lys Ser Val Lys Val Asp

        35                  40                  45

Ser Gly Thr Arg Arg Ser Leu Thr Ala Leu Pro Gln Leu Val Lys Asn

    50                  55                  60

Ser Ser Val Tyr Gly Pro Asp Ile Gln Leu Leu Ser Ile Thr Ala Ser

65                  70                  75                  80

Leu Glu Ser Asn Asp Arg Leu Arg Val Arg Ile Thr Asp Ala Lys His

                85                  90                  95

Arg Arg Trp Glu Ile Pro Asp Asn Ile Leu His Arg His Gln Pro Pro

            100                 105                 110

Pro Pro Pro Pro His Ser Leu Ser Ser Leu Tyr Arg Thr Leu Leu Ser

        115                 120                 125

Ser Pro Thr Thr Asn Arg Arg Lys Ile Leu Leu Ser His Pro Asn Ser

    130                 135                 140

Asp Leu Thr Phe Ser Leu Ile Asn Thr Thr Pro Phe Gly Phe Thr Ile

145                 150                 155                 160

Ser Arg Lys Ser Thr His Asp Val Leu Phe Asp Ala Thr Pro Asp Pro

                165                 170                 175

Thr Asn Pro Asn Thr Phe Leu Ile Phe Ile Asp Gln Tyr Leu His Leu

            180                 185                 190

Thr Ser Ser Leu Pro Gly Thr Arg Ala His Ile Tyr Gly Leu Gly Glu

        195                 200                 205

His Ser Lys Pro Thr Phe Gln Leu Ala His Asn Gln Thr Leu Thr Met

    210                 215                 220

Arg Ala Ala Asp Ile Pro Ser Ser Asn Pro Asp Val Asn Leu Tyr Gly

225                 230                 235                 240

Ser His Pro Phe Tyr Met Asp Val Arg Ser Ser Pro Val Ala Gly Ser

                245                 250                 255

Thr His Gly Val Leu Leu Leu Asn Ser Asn Gly Met Asp Val Glu Tyr

            260                 265                 270

Thr Gly Asn Arg Ile Thr Tyr Lys Val Ile Gly Gly Ile Ile Asp Leu

        275                 280                 285

Tyr Phe Phe Ala Gly Pro Ser Pro Gly Gln Val Val Glu Gln Phe Thr

    290                 295                 300

Arg Val Ile Gly Arg Pro Ala Pro Met Pro Tyr Trp Ala Phe Gly Phe

305                 310                 315                 320

Gln Gln Cys Arg Tyr Gly Tyr His Asp Val Tyr Glu Leu Gln Ser Val

                325                 330                 335

Val Ala Gly Tyr Ala Lys Ala Lys Ile Pro Leu Glu Val Met Trp Thr

            340                 345                 350

Asp Ile Asp Tyr Met Asp Ala Tyr Lys Asp Phe Thr Leu Asp Pro Val

        355                 360                 365

Asn Phe Pro Leu Asp Lys Met Lys Lys Phe Val Asn Asn Leu His Lys

370                 375                 380

Asn Gly Gln Lys Tyr Val Val Ile Leu Asp Pro Gly Ile Ser Thr Asn

385                 390                 395                 400

Lys Thr Tyr Glu Thr Tyr Ile Arg Gly Met Lys His Asp Val Phe Leu

                405                 410                 415

Lys Arg Asn Gly Lys Pro Tyr Leu Gly Ser Val Trp Pro Gly Pro Val

            420                 425                 430

Tyr Phe Pro Asp Phe Leu Lys Pro Ser Ala Leu Thr Phe Trp Thr Asp

        435                 440                 445

Glu Ile Lys Arg Phe Leu Asn Leu Leu Pro Val Asp Gly Leu Trp Ile

    450                 455                 460

Asp Met Asn Glu Ile Ser Asn Phe Ile Ser Ser Pro Pro Ile Pro Gly

465                 470                 475                 480

Ser Thr Leu Asp Asn Pro Pro Tyr Lys Ile Asn Asn Ser Gly Val Met

            485                 490                 495

Leu Pro Ile Ile Asn Lys Thr Ile Pro Pro Thr Ala Met His Tyr Gly

            500                 505                 510

Asp Ile Pro Glu Tyr Asn Val His Asn Leu Phe Gly Tyr Leu Glu Ala

        515                 520                 525

Arg Val Thr Arg Ala Ala Leu Ile Lys Leu Thr Glu Lys Arg Pro Phe

    530                 535                 540

Val Leu Ser Arg Ser Thr Phe Ser Gly Ser Gly Lys Tyr Thr Ala His

545                 550                 555                 560

Trp Thr Gly Asp Asn Ala Ala Thr Trp Asn Asp Leu Val Tyr Ser Ile

            565                 570                 575

Pro Ser Met Leu Asp Phe Gly Leu Phe Gly Ile Pro Met Val Gly Ala

            580                 585                 590

Asp Ile Cys Gly Phe Leu Gly Asn Thr Thr Glu Glu Leu Cys Arg Arg

        595                 600                 605

Trp Ile Gln Leu Gly Ala Phe Tyr Pro Phe Ser Arg Asp His Ser Ser

    610                 615                 620

Leu Gly Thr Thr Tyr Gln Glu Leu Tyr Arg Trp Glu Ser Val Ala Ala

625                 630                 635                 640

Ser Ala Arg Lys Val Leu Gly Leu Arg Tyr Thr Leu Leu Pro Tyr Phe

                645                 650                 655

Tyr Thr Leu Met Tyr Glu Ala Gln Leu Asn Gly Ile Pro Ile Ala Arg

            660                 665                 670

Pro Leu Phe Phe Ser Phe Pro Asp Asp Ile Lys Thr Tyr Gly Ile Ser

        675                 680                 685

Ser Gln Phe Leu Leu Gly Lys Gly Val Met Val Ser Pro Val Leu Lys

    690                 695                 700

Pro Gly Val Val Ser Val Thr Ala Tyr Phe Pro Arg Gly Asn Trp Phe

705                 710                 715                 720

Asp Leu Phe Asp Tyr Thr Arg Ser Val Thr Ala Ser Thr Gly Arg Tyr

                725                 730                 735

Val Thr Leu Ser Ala Pro Pro Asp His Ile Asn Val His Ile Gln Glu

            740                 745                 750

Gly Asn Ile Leu Ala Met Gln Gly Lys Ala Met Thr Thr Gln Ala Ala

        755                 760                 765

Arg Lys Thr Pro Phe His Leu Leu Val Val Met Ser Asp Cys Gly Ala

    770                 775                 780

Ser Phe Gly Glu Leu Phe Leu Asp Asp Gly Val Glu Val Thr Met Gly

785                 790                 795                 800

Val Asn Arg Gly Lys Trp Thr Phe Val Lys Phe Ile Ala Ala Ser Ala

                805                 810                 815

Lys Gln Thr Cys Ile Ile Thr Ser Asp Val Val Ser Gly Glu Phe Ala

            820                 825                 830

Val Ser Gln Lys Trp Val Ile Asp Lys Val Thr Ile Leu Gly Leu Arg

        835                 840                 845

Lys Gly Thr Lys Ile Asn Gly Tyr Thr Val Arg Thr Gly Ala Val Thr

    850                 855                 860

Arg Lys Gly Asp Lys Ser Lys Leu Lys Ser Thr Pro Asp Arg Lys Gly

865                 870                 875                 880

Glu Phe Ile Val Ala Glu Ile Ser Gly Leu Asn Leu Leu Leu Gly Arg

                885                 890                 895

Glu Phe Lys Leu Val Leu His

            900

<210>66

<211>923

<212>PRT

<213>Tetrahymena pyriformis

<400>66

Met Lys His Gln Val Leu Leu Pro Leu Leu Val Thr Thr Ala Ile Ile

1               5                   10                  15

Ala Gly Ser Val Gly Val Tyr Thr His Ser Lys Pro Leu Leu Gly Gln

            20                  25                  30

Ser Gln Asp Gln Val Leu Pro Pro Phe Thr Pro Pro Leu Gln Asn Gly

        35                  40                  45

His Ile Asp Leu Gln Gly Lys Tyr Ile Val Ser Thr Leu Asp Gln Val

    50                  55                  60

Asn Ala Thr His Ile Asn Ile Tyr Ala Asn Tyr Asn Gly Pro Glu Ala

65                  70                  75                  80

Ser Tyr Ala Met Pro Lys Asn Lys Leu Ile Thr His Ile Leu Val Ser

                85                  90                  95

Ile Val Ile Asn Asp Val Asn Gln Leu Gly Ile Lys Ile Thr Asp Arg

            100                 105                 110

Thr Tyr Arg His Phe Glu Val Pro Tyr Ser Asn Leu Phe Pro His Asp

        115                 120                 125

Lys Val Phe Asn Phe Pro Ala Asn Asn Gln Phe Asp Ile Thr Leu Pro

    130                 135                 140

Lys Arg Gly Glu Ala Phe Tyr Leu Thr Ile Lys Arg Lys Asp Thr Gly

145                 150                 155                 160

Glu Val Val Phe Asp Thr Asn Asn Gln Phe Phe Val Tyr Ser Asp Leu

                165                 170                 175

Tyr His Glu Phe Thr Val Ala Met Gln Asn Glu Phe Ile Tyr Gly Leu

            180                 185                 190

Gly Glu Arg Arg Asn Lys Gln Phe Leu Tyr Asp Ser Gly Glu Tyr Thr

        195                 200                 205

Phe Leu Asn Lys Asp Gln Tyr Glu Ser Val Ala Asp Gly His Pro Asp

    210                 215                 220

Gln Gln Thr Tyr Gly Thr His Pro Met Tyr Leu Arg Arg Glu Asn Ser

225                 230                 235                 240

Gly Asn Phe His Val Val Phe Leu Arg Asn Tyr Asn Ser Ile Gln Ala

                245                 250                 255

Val Tyr Ser Lys Gly Lys Ser Leu Thr Tyr Lys Val Val Gly Gly Leu

            260                 265                 270

Leu Glu Phe Lys Ile Phe Leu Gly Asp Lys Ser Pro Glu Thr Ser Leu

        275                 280                 285

Lys Leu Tyr His Ser Tyr Val Asn Gly Phe Asn Leu His Pro Phe Trp

    290                 295                 300

Ala His Gly Phe His Gln Cys Arg Trp Gly Tyr Lys Thr Ser Glu Met

305                 310                 315                 320

Met Thr Thr Val Trp Asp Thr Phe Asn Thr Asn Gly Leu Pro Phe Asp

                325                 330                 335

Thr Ile Trp Ser Asp Ile Asp Tyr Met Lys Asp Leu Thr Asp Phe Thr

            340                 345                 350

Ile Asp Thr Ser Arg Tyr Asp Lys Ala Gln MetAsn Thr Met Leu Asp

        355                 360                 365

Arg Ser Val Ala Ala Gly Val His Trp Val Pro Ile Ile Asp Ala Gly

    370                 375                 380

Ile Ala Leu Gly Asp Val Ser Asn Glu Arg Gly Lys Glu Leu Gly Val

385                 390                 395                 400

Tyr Gln Lys Ser Asn Lys Thr Gly Glu Asp Leu Ile Gly Cys Val Trp

                405                 410                 415

Pro Gly Lys Val Asn Tyr Pro Asp Phe Asn His Pro Leu Ser Gln Glu

            420                 425                 430

Phe Trp Ala Glu Gly Leu Met Asn Leu Thr Lys Asn Tyr Gly Ile Thr

        435                 440                 445

Pro Ser Gly Phe Trp Ile Asp Met Asn Glu Phe Ser Asn Phe Ile Asn

    450                 455                 460

Gly Glu Ile Ser Glu Asp Gln Asn Cys Ile Met Pro Gly Asp Thr Thr

465                 470                 475                 480

Thr Asn Pro Asn Tyr Leu Gly Asn Ser Val Glu Asp Phe Tyr Thr Arg

                485                 490                 495

Ile Pro Phe Glu Val Gly Gly Ala Asp His Pro Gln Gln Glu Lys Thr

            500                 505                 510

Met Ser Tyr Asp Ala Pro Lys Tyr Asn Tyr Ala Asp Ala Lys Thr Val

        515                 520                 525

Tyr Ile Pro Asn Tyr Glu Leu Arg Glu Phe Asp Phe His Asn Leu Asn

    530                 535                 540

Gly Phe Ser Glu Gly Ile Ala Thr Asn Tyr Ala Leu Lys Lys Met Gly

545                 550                 555                 560

Asn Lys Leu Pro Phe Ile Ile Ser Arg Ser Gln Ile Ala Gly Ser Gly

565                 570                 575

Gln Phe Val Gln His Trp Thr Gly Asp Asn Gly Ser Gln Trp Asp Phe

            580                 585                 590

Leu Gln Tyr Ser Leu Gly Glu Ile Phe Asn Phe Asn Met Tyr Gly Ile

        595                 600                 605

Pro Met Thr Gly Ala Asp Ile Cys Gly Phe Ala Gln Asn Thr Thr Ala

    610                 615                 620

Glu Leu Cys Ala Arg Trp Met Gln Val Gly Ala Phe Tyr Pro Phe Ser

625                 630                 635                 640

Arg Asn His Asn Ser Asn Asp Thr Ile Pro Gln Glu Pro Tyr Ala Phe

                645                 650                 655

Pro Asp Ser Thr Tyr Val Leu Asp Ser Ser Lys Lys Ser Leu Arg Leu

            660                 665                 670

Arg Tyr Ala Leu Leu Lys Gln Tyr Tyr Ser His Phe Val Ser Ser Asn

        675                 680                 685

Gly Val Gly Thr Val Phe Arg Pro Thr Phe Phe Asn Phe Pro Asp Asp

    690                 695                 700

Ala Ser Leu Leu Thr Asn Asp Gln Gln Phe Met Ile Gly Asp Ser Leu

705                 710                 715                 720

Leu Gly Gln Pro Val Leu Val Gln Ser Ala Thr Pro Ala Arg Phe Ser

                725                 730                 735

His Ser Ser Tyr Leu Thr Phe Pro Ser Ser Gly Ala Phe Tyr Asp Phe

            740                 745                 750

Val Thr Asp Val Ala Thr Leu Asn Ala Gln Arg Tyr Thr Asn Ala Asn

        755                 760                 765

Asn Gly Gln Ile Lys Asn Val Lys Phe Asp Asp Ile Met Pro Leu Tyr

    770                 775                 780

Ile Arg Glu Gly Tyr Thr Val Phe Thr Gln Leu Ala Ser Thr Ala Leu

785                 790                 795                 800

Arg Ser Arg Leu Leu Asp Ser Asn Phe Glu Leu His Val Ala Leu Ala

                805                 810                 815

Lys Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Ala Lys Gly Lys Phe Ile Thr Ile Gln

            820                 825                 830

Asp Tyr Ser Asp Asp Asn Leu Ile Gln Lys Cys Ile Gly Ala Asn Asn

        835                 840                 845

Cys Ser Phe Asp Ile Gln Val Thr Gly Val Val Asn Gly Ala Asn Leu

    850                 855                 860

Asp Leu Thr Ile Gln Ile Ala Gly Glu Ser Ala Gln Thr Asn Phe Glu

865                 870                 875                 880

Thr Ile Asn Val Asn Lys Ile Ile Pro Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Phe

                885                 890                 895

Ala Ala Ser Thr Ala Thr Phe Thr Ile Ser Lys Asn Gly Thr Ile Asn

            900                 905                 910

Ala Ser Ile Pro Leu Gln Ala Ala Gln Gln Glu

        915                 920

<210>67

<211>966

<212>PRT

<213>Mus musculus

<400>67

Met Ala Ala Ile Ala Ala Val Ala Ala Arg Arg Arg Arg Ser Trp Leu

1               5                   10                  15

Ser Leu Val Leu Ala Tyr Leu Gly Val Cys Leu Gly Ile Thr Leu Ala

            20                  25                  30

Val Asp Arg Ser Asn Phe Lys Thr CyG Asp Glu Ser Ser phe Cys Lys

        35                  40                  45

Arg Gln Arg Ser Ile Arg Pro Gly Leu Ser Pro Tyr Arg Ala Leu Leu

    50                  55                  60

Asp Thr Leu Gln Leu Gly Pro Asp Ala Leu Thr Val His Leu Ile His

65                  70                  75                  80

Glu Val Thr Lys Val Leu Leu Val Leu Glu Leu Gln Gly Leu Gln Lys

                85                  90                  95

Asn Met Thr Arg Ile Arg Ile Asp Glu Leu Glu Pro Arg Arg Pro Arg

            100                 105                 110

Tyr Arg Val Pro Asp Val Leu Val Ala Asp Pro Pro Thr Ala Arg Leu

        115                 120                 125

Ser Val Ser Gly Arg Asp Asp Asn Ser Val Glu Leu Thr Val Ala Glu

    130                 135                 140

Gly Pro Tyr Lys Ile Ile Leu Thr Ala Gln Pro Phe Arg Leu Asp Leu

145                 150                 155                 160

Leu Glu Asp Arg Ser Leu Leu Leu Ser Val Asn Ala Arg Gly Leu Met

                165                 170                 175

Ala Phe Glu His Gln Arg Ala Pro Arg Val Pro Phe Ser Asp Lys Val

            180                 185                 190

Ser Leu Ala Leu Gly Ser Val Trp Asp Lys Ile Lys Asn Leu Phe Ser

        195                 200                 205

Arg Gln Glu Ser Lys Asp Pro Ala Glu Gly Asn Gly Ala Gln Pro Glu

    210                 215                 220

Ala Thr Pro Gly Asp Gly Asp Lys Pro Glu Glu Thr Gln Glu Lys Ala

225                 230                 235                 240

Glu Lys Asp Glu Pro Gly Ala Trp Glu Glu Thr Phe Lys Thr His Ser

                245                 250                 255

Asp Ser Lys Pro Tyr Gly Pro Thr Ser Val Gly Leu Asp Phe Ser Leu

            260                 265                 270

Pro Gly Met Glu His Val Tyr Gly Ile Pro Glu His Ala Asp Ser Leu

        275                 280                 285

Arg Leu Lys Val Thr Glu Gly Gly Glu Pro Tyr Arg Leu Tyr Asn Leu

    290                 295                 300

Asp Val Phe Gln Tyr Glu Leu Asn Asn Pro Met Ala Leu Tyr Gly Ser

305                 310                 315                 320

Val Pro Val Leu Leu Ala His Ser Phe His Arg Asp Leu Gly Ile Phe

                325                 330                 335

Trp Leu Asn Ala Ala Glu Thr Trp Val Asp Ile Ser Ser Asn Thr Ala

            340                 345                 350

Gly Lys Thr Leu Phe Gly Lys Met Leu Asp Tyr Leu Gln Gly Ser Gly

        355                 360                 365

Glu Thr Pro Gln Thr Asp Ile Arg Trp Met Ser Glu Ser Gly Ile Ile

    370                 375                 380

Asp Val Phe Leu Met Leu Gly Pro Ser Val Phe Asp Val Phe Arg Gln

385                 390                 395                 400

Tyr Ala Ser Leu Thr Gly Thr Gln Ala Leu Pro Pro Leu Phe Ser Leu

                405                 410                 415

Gly Tyr His Gln Ser Arg Trp Asn Tyr Arg Asp Glu Ala Asp Val Leu

            420                 425                 430

Glu Val Asp Gln Gly Phe Asp Asp His Asn Met Pro Cys Asp Val Ile

        435                 440                 445

Trp Leu Asp Ile Glu His Ala Asp Gly Lys Arg Tyr Phe Thr Trp Asp

    450                 455                 460

Pro Thr Arg Phe Pro Gln Pro Leu Asn Met Leu Glu His Leu Ala Ser

465                 470                 475                 480

Lys Arg Arg Lys Leu Val Ala Ile Val Asp Pro His Ile Lys Val Asp

                485                 490                 495

Ser Gly Tyr Arg Val His Glu GLu Leu Arg Asn His Gly Leu Tyr Val

            500                 505                 510

Lys Thr Arg Asp Gly Ser Asp Tyr Glu Gly Trp Cys Trp Pro Gly Ser

        515                 520                 525

Ala Ser Tyr Pro Asp Phe Thr Asn Pro Arg Met Arg Ala Trp Trp Ser

    530                 535                 540

Asn Met Phe Ser Phe Asp Asn Tyr Glu Gly Ser Ala Pro Asn Leu Tyr

545                 550                 555                 560

Val Trp Asn Asp Met Asn Glu Pro Ser Val Phe Asn Gly Pro Glu Val

                565                 570                 575

Thr Met Leu Lys Asp Ala Val His Tyr Gly Gly Trp Glu His Arg Asp

            580                 585                 590

Ile His Asn Ile Tyr Gly Leu Tyr Val His Met Ala Thr Ala Asp Gly

        595                 600                 605

Leu Ile Gln Arg Ser Gly Gly Ile Glu Arg Pro Phe Val Leu Ser Arg

    610                 615                 620

Ala Phe Phe Ser Gly Ser Gln Arg Phe Gly Ala Val Trp Thr Gly Asp

625                 630                 635                 640

Asn Thr Ala Glu Trp Asp His Leu Lys Ile Ser Ile Pro Met Cys Leu

                645                 650                 655

Ser Leu Ala Leu Val Gly Leu Ser Phe Cys Gly Ala Asp Val Gly Gly

            660                 665                 670

Phe Phe Lys Asn Pro Glu pro Glu Leu Leu Val Arg Trp Tyr Gln Met

        675                 680                 685

Gly Ala Tyr Gln Pro Phe Phe Arg Ala His Ala His Leu Asp Thr Gly

    690                 695                 700

Arg Arg Glu Pro Trp Leu Leu Ala Ser Gln Tyr Gln Asp Ala Ile Arg

705                 710                 715                 720

Asp Ala Leu Phe Gln Arg Tyr Ser Leu Leu Pro Phe Trp Tyr Thr Leu

                725                 730                 735

Phe Tyr Gln Ala His Lys Glu Gly Phe Pro Val Met Arg Pro Leu Trp

            740                 745                 750

Val Gln Tyr Pro Glu Asp Met Ser Thr Phe Ser Ile Glu Asp Gln Phe

        755                 760                 765

Met Leu Gly Asp Ala Leu Leu Ile His Pro Val Ser Asp Ala Gly Ala

    770                 775                 780

His Gly Val Gln Val Tyr Leu Pro Gly Gln Glu Glu Val Trp Tyr Asp

785                 790                 795                 800

Ile Gln Ser Tyr Gln Lys His His Gly Pro Gln Thr Leu Tyr Leu Pro

                805                 810                 815

Val Thr Leu Ser Ser Ile Pro Val Phe Gln Arg Gly Gly Thr Ile Val

            820                 825                 830

Pro Arg Trp Met Arg Val Arg Arg Ser Ser Asp Cys Met Lys Asp Asp

        835                 840                 845

Pro Ile Thr Leu Phe Val Ala Leu Ser Pro Gln Gly Thr Ala Gln Gly

    850                 855                 860

Glu Leu Phe Leu Asp Asp Gly His Thr Phe Asr Tyr Gln Thr Arg His

865                 870                 875                 880

Glu Phe Leu Leu Arg Arg Phe Ser Phe Ser Gly Ser Thr Leu Val Ser

                 885                 890                 895

Ser Ser Ala Asp Pro Lys Gly His Leu Glu Thr Pro Ile Trp Ile Glu

            900                 905                 910

Arg Val Val Ile Met Gly Ala Gly Lys Pro Ala Ala Val Val Leu Gln

        915                 920                 925

Thr Lys Gly Ser Pro Glu Ser Arg Leu Ser Phe Gln His Asp Pro Glu

    930                 935                 940

Thr Ser Val Leu Ile Leu Arg Lys Pro Gly Val Ser Val Ala Ser Asp

945                 950                 955                 960

Trp Ser Ile His Leu Arg

                965

<210>68

<211>944

<212>PRT

<213>Homo sapiens

<400>68

Met Ala Ala Val Ala Ala Val Ala Ala Arg Arg Arg Arg Ser Trp Ala

1               5                   10                  15

Ser Leu Val Leu Ala Phe Leu Gly Val Cys Leu Gly Ile Thr Leu Ala

            20                  25                  30

Val Asp Arg Ser Asn Phe Lys Thr Cys Glu Glu Ser Ser Phe Cys Lys

        35                  40                  45

Arg Gln Arg Ser Ile Arg Pro Gly Leu Ser Pro Tyr Arg Ala Leu Leu

    50                  55                  60

Asp Ser Leu Gln Leu Gly Pro Asp Ser Leu Thr Val His Leu Ile His

65                  70                  75                  80

Glu Val Thr Lys Val Leu Leu Val Leu Glu Leu Gln Gly Leu Gln Lys

                85                  90                  95

Asn Met Thr Arg Phe Arg Ile Asp Glu Leu Glu Pro Arg Arg Pro Arg

            100                 105                 110

Tyr Arg Val Pro Asp Val Leu Val Ala Asp Pro Pro Ile Ala Arg Leu

        115                 120                 125

Ser Val Ser Gly Arg Asp Glu Asn Ser Val Glu Leu Thr Met Ala Glu

    130                 135                 140

Gly Pro Tyr Lys Ile Ile Leu Thr Ala Arg Pro Phe Arg Leu Asp Leu

145                 150                 155                 160

Leu Glu Asp Arg Ser Leu Leu Leu Ser Val Asn Ala Arg Gly Leu Leu

                165                 170                 175

Glu Phe Glu His Gln Arg Ala Pro Arg Val Ser Gln Gly Ser Lys Asp

            180                 185                 190

Pro Ala Glu Gly Asp Gly Ala Gln Pro Glu Glu Thr Pro Arg Asp Gly

        195                 200                 205

Asp Lys Pro Glu Glu Thr Gln Gly Lys Ala Glu Lys Asp Glu Pro Gly

    210                 215                 220

Ala Trp Glu Glu Thr Phe Lys Thr His Ser Asp Ser Lys Pro Tyr Gly

225                 230                 235                 240

Pro Met Ser Val Gly Leu Asp Phe Ser Leu Pro Gly Met Glu His Val

                245                 250                 255

Tyr Gly Ile Pro Glu His Ala Asp Asn Leu Arg Leu Lys Val Thr Glu

            260                 265                 270

Gly Gly Glu Pro Tyr Arg Leu Tyr Asn Leu Asp Val Phe Gln Tyr Glu

        275                 280                 285

Leu Tyr Asn Pro Met Ala Leu Tyr Gly Ser Val Pro Val Leu Leu Ala

    290                 295                 300

His Asn Pro His Arg Asp Leu Gly Ile Phe Trp Leu Asn Ala Ala Glu

305                 310                 315                 320

Thr Trp Val Asp Ile Ser Ser Asn Thr Ala Gly Lys Thr Leu Phe Gly

                325                 330                 335

Lys Met Met Asp Tyr Leu Gln Gly Ser Gly Glu Thr Pro Gln Thr Asp

            340                 345                 350

Val Arg Trp Met Ser Glu Thr Gly Ile Ile Asp Val Phe Leu Leu Leu

        355                 360                 365

Gly Pro Ser Ile Ser Asp Val Phe Arg Gln Tyr Ala Ser Leu Thr Gly

    370                 375                 380

Thr Gln Ala Leu Pro Pro Leu Phe Ser Leu Gly Tyr His Gln Ser Arg

385                 390                 395                 400

Trp Asn Tyr Arg Asp Glu Ala Asp Val Leu Glu Val Asp Gln Gly Phe

                405                 410                 415

Asp Asp His Asn Leu Pro Cys Asp Val Ile Trp Leu Asp Ile Glu His

            420                 425                 430

Ala Asp Gly Lys Arg Tyr Phe Thr Trp Asp Pro Ser Arg Phe Pro Gln

        435                 440                 445

Pro Arg Thr Met Leu Glu Arg Leu Ala Ser Lys Arg Arg Lys Leu Val

    450                 455                 460

Ala Ile Val Asp Pro His Ile Lys Val Asp Ser Gly Tyr Arg Val His

465                 470                 475                 480

Glu Glu Leu Arg Asn Leu Gly Leu Tyr Val Lys Thr Arg Asp Gly Ser

                485                 490                 495

Asp Tyr Glu Gly Trp Cys Trp Pro Gly Ser Ala Gly Tyr Pro Asp Phe

            500                 505                 510

Thr Asn Pro Thr Met Arg Ala Trp Trp Ala Asn Met Phe Ser Tyr Asp

        515                 520                 525

Asn Tyr Glu Gly Ser Ala Pro Asn Leu Phe Val Trp Asn Asp Met Asn

    530                 535                 540

Glu Pro Ser Val Phe Asn Gly Pro Glu Val Thr Met Leu Lys Asp Ala

545                 550                 555                 560

Gln His Tyr Gly Gly Trp Glu His Arg Asp Val His Asn Ile Tyr Gly

                565                 570                 575

Leu Tyr Val His Met Ala Thr Ala Asp Gly Leu Arg Gln Arg Ser Gly

            580                 585                 590

Gly Met Glu Arg Pro Phe Val Leu Ala Arg Ala Phe Phe Ala Gly Ser

        595                 600                 605

Gln Arg Phe Gly Ala Val Trp Thr Gly Asp Asn Thr Ala Glu Trp Asp

    610                 615                 620

His Leu Lys Ile Ser Ile Pro Met Cys Leu Ser Leu Gly Leu Val Gly

625                 630                 635                 640

Leu Ser Phe Cys Gly Ala Asp Val Gly Gly Phe Phe Lys Asn Pro Glu

                645                 650                 655

Pro Glu Leu Leu Val Arg Trp Tyr Gln Met Gly Ala Tyr Gln Pro Phe

        660                 665                 670

Phe Arg Ala His Ala His Leu Asp Thr Gly Arg Arg Glu Pro Trp Leu

        675                 680                 685

Leu Pro Ser Gln His Asn Asp Ile Ile Arg Asp Ala Leu Gly Gln Arg

    690                 695                 700

Tyr Ser Leu Leu Pro Phe Trp Tyr Thr Leu Leu Tyr Gln Ala His Arg

705                 710                 715                 720

Glu Gly Ile Pro Val Met Arg Pro Leu Trp Val Gln Tyr Pro Gln Asp

                725                 730                 735

Val Thr Thr Phe Asn Ile Asp Asp Gln Tyr Leu Leu Gly Asp Ala Leu

            740                 745                 750

Leu Val His Pro Val Ser Asp Ser Gly Ala His Gly Val Gln Val Tyr

        755                 760                 765

Leu Pro Gly Gln Gly Glu Val Trp Tyr Asp Ile Gln Ser Tyr Gln Lys

    770                 775                 780

His His Gly Pro Gln Thr Leu Tyr Leu Pro Val Thr Leu Ser Ser Ile

785                 790                 795                 800

Pro Val Phe Gln Arg Gly Gly Thr Ile Val Pro Arg Trp Met Arg Val

                805                 810                 815

Arg Arg Ser Ser Glu Cys Met Lys Asp Asp Pro Ile Thr Leu Phe Val

            820                 825                 830

Ala Leu Ser Pro Gln Gly Thr Ala Gln Gly Glu Leu Phe Leu Asp Asp

        835                 840                 845

Gly His Thr Phe Asn Tyr Gln Thr Arg Gln Glu Phe Leu Leu Arg Arg

    850                 855                 860

Phe Ser Phe Ser Gly Asn Thr Leu Val Ser Ser Ser Ala Asp Pro Glu

865                 870                 875                 880

Gly His Phe Glu Thr Pro Ile Trp Ile Glu Arg Val Val Ile Ile Gly

                885                 890                 895

Ala Gly Lys Pro Ala Ala Val Val Leu Gln Thr Lys Gly Ser Pro Glu

            900                 905                 910

Ser Arg Leu Ser Phe Gln His Asp Pro Glu Thr Ser Val Leu Val Leu

        915                 920                 925

Arg Lys Pro Gly Ile Asn Val Ala Ser Asp Trp Ser Ile His Leu Arg

    930                 935                 940

Claims (4)

1.一种导向治疗融合蛋白，其包括治疗剂和肽标记，所述治疗剂由缺失第1-69位残基的人酸性α-糖苷酶的第70-952位氨基酸残基组成；其中肽标记直接或间接连接于人酸性α-糖苷酶的第70位氨基酸残基；且所述标记由缺失第2-7位残基的IGF-II的第1位残基、随后是第8-67位残基组成。

2.权利要求1的导向治疗融合蛋白，其还包括治疗剂与肽标记之间的间隔物。

3.权利要求2的导向治疗融合蛋白，其中间隔物是Gly-Ala-Pro接头。

4.前述权利要求中任一项的导向治疗融合蛋白在制备用于治疗Pompe病的药物中的应用。

Images