CN1919258B

CN1919258B - 五味子在制备预防、降低抗肿瘤药毒副作用的药物中的应用

Info

Publication number: CN1919258B
Application number: CN2006101111191A
Authority: CN
Inventors: 胡汛
Original assignee: Hangzhou Lvzhong Pharmaceutical Technology Co Ltd
Current assignee: Hangzhou Lvzhong Pharmaceutical Technology Co Ltd
Priority date: 2005-08-08
Filing date: 2006-08-04
Publication date: 2010-06-23
Anticipated expiration: 2026-08-04
Also published as: CN1919258A

Abstract

本发明提供了五味子在制备预防、降低抗肿瘤药毒副作用的药物中的应用。所述抗肿瘤药毒副作用为抗肿瘤药引起的心血管毒性、或肝毒性、或肾毒性、或骨髓抑制、或免疫抑制、或脱发。本发明所述的五味子在制备降低、预防物抗癌药毒副作用具有很好的临床应用前景，五味子及其提取物尤其是乙醇提取物能有效降低由抗癌药引起的毒副作用。

Description

五味子在制备预防、降低抗肿瘤药毒副作用的药物中的应用

(一)技术领域

本发明涉及五味子在制备预防、降低抗肿瘤药毒副作用的药物中的应用。

(二)背景技术

肿瘤是引起人类死亡的主要原因之一，肿瘤化疗是治疗肿瘤的一种主要手段。然而抗肿瘤药物可引起诸多的毒副作用。这些毒副作用包括心血管毒性、肝毒性、肾毒性、骨髓抑制、免疫抑制、脱发等等。

五味子，木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.或木兰科植物华中五味子Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.的干燥成熟果实，五味子在《神农本草经》中被列为上品，具有收敛、固涩、益气生津、补肾宁心的作用，是中医常用的滋补强壮药，具有多种药理作用，但未见其有预防、降低抗癌药毒副作用的报道。

(三)发明内容

本发明即是为了提供五味子在制备预防、降低抗癌药毒副作用的药物中的应用。

为达到发明目的本发明采用的技术方案是：

五味子在制备预防、降低抗肿瘤药毒副作用的药物中的应用。

所述抗肿瘤药毒副作用为抗肿瘤药引起的心血管毒性、或肝毒性、或肾毒性、或骨髓抑制、或免疫抑制、或脱发。

五味子的提取物在制备预防、降低抗肿瘤药毒副作用的药物中的应用，所述的五味子的提取物为五味子的有机溶剂的提取物或用超临界方法获得的提取物。

优选的，所述的五味子的提取物为五味子的乙醇提取物。

所述的抗肿瘤药为下列之一：抗肿瘤抗生素类药，包括柔红霉素，去甲氧柔红霉素，阿霉素，表阿霉素，平阳霉素，博来霉素，吡喃阿霉素，放线菌素D，阿克拉霉素，丝裂霉素；抗肿瘤植物类药，包括足叶乙甙，替尼泊甙，高三尖酯碱，羟基喜树碱，拓泊替康，紫衫醇，多烯紫衫醇，长春新碱，长春花碱，长春地辛，长春瑞宾，香菇多糖；抗肿瘤激素类药，包括三苯氧胺，福美司坦，依西美坦，阿那曲唑，来曲唑，托瑞米芬，氟他胺，比卡鲁胺；抗代谢类药，包括5-氟尿嘧啶，阿糖胞苷，替加氟，氟铁龙，氟尿苷，巯嘌呤，甲氨喋呤，吉西他滨，卡培他滨；烷化剂，包括环磷酰胺，异环磷酰胺，白消安，美法仑，苯丁酸氮芥，司莫司汀，雌莫司汀，美司钠；铂类，包括顺铂，卡铂，奥沙利铂；其他种类抗肿瘤药，包括氮烯咪胺，门冬酰胺酶，氯甲双膦酸二钠，帕米膦酸二钠，依替膦酸二钠，伊班膦酸盐，贺赛汀，易瑞莎，米托蒽醌，羟基脲，甲基斑蝥胺，去甲斑蝥素，华蟾素，乌苯美司，三氧化二砷，艾迪，氨磷汀，苦参碱，伊马替尼，甘氨双唑钠，卫康醇，丙卡巴肼。

优选的，所述的抗肿瘤药为蒽环类药物、或抗肿瘤植物类药、或抗代谢类药、或铂类药。优选为蒽环类药物，如柔红霉素，去甲氧柔红霉素，阿霉素，表阿霉素等，更优选阿霉素。

所述降低、预防物抗癌药毒副作用的药物可添加药物赋型剂或载体，制成下列之一的剂型：①注射液；②片剂；③胶囊剂；④颗粒剂；⑤汤剂。

五味子也可用于制备改善心功能的药物。

本发明所述的五味子在制备降低、预防物抗癌药毒副作用的药物中的应用具有很好的临床应用前景，五味子及其提取物尤其是乙醇提取物能有效降低由抗癌药引起的毒副作用，本发明还表明五味子及其提取物在改善心功能方面也具有良好的作用。

(四)附图说明

图1为五味子乙醇提取物抑制阿霉素引起的小鼠血清心肌酶-肌酸激酶(CK)的上升。

图2为五味子乙醇提取物抑制阿霉素引起的小鼠血清心肌酶-肌酸激酶同功酶(CK-M)B的上升。

图3为五味子乙醇提取物抑制阿霉素引起的小鼠血清心肌酶-谷草转氨酶(GOT)的上升。

图4为五味子乙醇提取物抑制阿霉素引起的小鼠血清心肌酶-乳酸脱氢酶(LDH)的上升。

图5为五味子乙醇提取物抑制阿霉素引起的小鼠左室心肌金属蛋白酶MMP-9活性的上升。

图6为五味子乙醇提取物抑制阿霉素引起的小鼠死亡。

图7为五味子乙醇提取物对表阿霉素引起的小鼠心脏毒性的预防作用。

图8为五味子乙醇提取物对柔红霉素引起的小鼠心脏毒性的预防作用。

图9为五味子乙醇提取物对伊达比星引起的小鼠心脏毒性的预防作用。

(五)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1：五味子乙醇提取物的制备渗漉法：取5000g五味子粉末用6倍量95％乙醇渗漉，渗漉速度15ml/min。回收乙醇沥出液，减压回收乙醇至无乙醇味，浓缩得比重为1.15g/ml的浸膏，备用。以上的乙醇也可用甲醇、丙醇等各种醇代替；也可用其他有机溶剂如乙酸乙酯、醚类溶剂等代替制备五味子提取物。

实施例2：五味子乙醇提取物预防降低阿霉素的毒副作用

1材料和方法

1.1药物与试剂注射用盐酸阿霉素，意大利pharmacia公司，批号：5E2002-D，实施例1制备的五味子乙醇提取物，用0.5％泊洛沙姆溶解。CK(肌酸激酶)、CK-MB(肌酸激酶同功酶-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(GOT)采用全自动生化分析仪检测。组织蛋白提取液，美国Pierce公司。ICR雄性小鼠，体重25～30g，由上海实验动物中心提供。

1.2试验分组及给药

采用随机分组法将150只动物分为5组。

空白对照组：24只，于实验第1-3天，灌胃给予生理盐水20ml/kg/次，1次/日，第3天灌胃后2小时内再腹腔注射1次，生理盐水25mg/kg；

五味子乙醇提取物组(X组)：24只，于实验第1-3天，灌胃给予五味子乙醇提取物400mg/kg/次，1次/日；

阿霉素组(Dox组)：42只于实验第1-3天，灌胃给予生理盐水20ml/kg/次，1次/日，于实验第3天，腹腔注射给予阿霉素25mg/kg；

阿霉素+五味子提取物1组(Dox+X1组)：24只，于实验第1-3天，灌胃给予五味子提取物400mg/kg/次，1次/日；第3天间隔半小时再腹腔注射给予阿霉素25mg/kg；

阿霉素+五味子提取物2组(Dox+X2组)：24只，于实验第1-3天，灌胃给予五味子提取物200mg/kg/次，1日/次；第3d间隔半小时再腹腔注射给予阿霉素25mg/kg。

1.3血清心肌酶学的测定

于实验第5天(腹腔注射阿霉素后48h)每组取6只，摘小鼠眼球取血，常规分离血清，-80℃冻存，在全自动生化分析仪上测定CK、CK-MB、LDH和GOT。

1.4心肌MMP的测定

标本准备实验小鼠采血后，颈椎脱臼法处死，快速解剖取心脏，分离出左心室，冰生理盐水冲洗干净，称重。取左室心肌组织，液氮研磨，加入500μL预冷的提取缓冲液(10mmol/L Tris-HCL，pH7.5，1mmol/LMgCl2，1mmol/L EGTA，0.1mmol/L PMSF，5mmol/L β-巯基乙醇，5g/LCHAPS，0.01％Triton X-100)，冰上10分钟，15000g离心30分钟，取上清，用Bradford检测法测定蛋白浓度。取20μl加入5×样品缓冲液(不含有巯基乙醇)5μl，37℃恒温下置15min.

制备10％SDS-PAGE胶为分离胶(含0.1％明胶)，上覆4％浓缩胶，取20μl处理后的标本上样，40mA恒流电泳，温度小于4℃。电泳后凝胶置于洗脱液(2.5％ Triton X-100，50mmol.L^-1Tri HCL，5mmol.L^-1CaCl₂，1μmol.L^-1ZnCl₂，PH为7.6)中振荡洗脱2次，每次45min，置漂洗液(不含Triton X-100的洗脱液)漂洗2次，每次20min，置于孵育液(50mmol.L^-1Tri HCL，5mmol.L^-1CaCl₂，1μmol.L^-1ZnCl₂，0.02％Brij 35；PH为7.6)中37℃孵育18h。经染色液(0.05％考马斯亮蓝，30％甲醇，10％乙酸)染色3h，用脱色液A，B，C(浓度分别为甲醇30％，20％，10％和乙酸10％，10％，5％)分别脱色0.5，1，2小时后，金属蛋白酶(MMP)显示为位于蓝色背景上的透亮带。凝胶经UVP凝胶扫描仪扫描后存档，用GelWorks ID Advanced v4.01软件进行图像分析测定明胶酶消化条带密度值。

1.6生存率观察

余下的小鼠，从给阿霉素那天算起，共观察7天，记录生存率的变化。

2结果

2.1五味子提取物对阿霉素诱导心肌损伤小鼠血清心肌酶谱的影响

对照组和五味子提取物组的CK、CK-MB、LDH、GOT等4项血清心肌酶谱指标均无显著性差异(P＞0.05)，阿霉素组的此4项血清酶指标均显著高于对照组和五味子乙醇提取物组(P＜0.05)。联用五味子提取物的2个剂量组血清酶学指标均较阿霉素组有不同程度降低，其中五味子提取物为400mg/kg×3次联用阿霉素组的此4项血清酶学指标显著低于单用阿霉素组(P＜0.05)(见图1-4)。说明五味子乙醇提取物可有效预防阿霉素引起的心脏毒性。

2.2左室心肌金属蛋白酶活性测定结果

正常对照组和五味子提取物组均未检测到左室心肌金属蛋白酶-9(MMP-9)活性，阿霉素组左室心肌MMP-9活性明显升高，五味子提取物联用阿霉素2个剂量组均显著抑制左室心肌MMP-9明胶酶活性，其中400mg/kg五味子乙醇提取物联用阿霉素组抑制效果最好，见图5。该结果说明五味子乙醇提取物可有效预防阿霉素引起的心脏毒性。

2.3五味子提取物对阿霉素急性毒性的小鼠的生存率影响

阿霉素组、五味子提取物和阿霉素联用2个组均从第5天开始出现死亡，到第7天，阿霉素组生存率为3.7％，400mg/kg×3次五味子提取物和阿霉素联用组生存率为50％，(P＜0.01)，200mg/kg×3次五味子乙醇提取物和阿霉素联用组生存率为16.7％(P＜0.05)，见图6。说明五味子提取物可显著减轻阿霉素的毒副作用。

2.4、五味子乙醇提取物和阿霉素对小鼠表观状态的影响

单独用阿霉素组，小鼠瘦弱无力，精神萎靡，毛发亦稀疏，状态差，而阿霉素联用五味子乙醇提取物组的小鼠活动状态较好，毛发也较健康。说明五味子乙醇提取物可降低阿霉素的毒副作用。

实施例3：五味子乙醇提取物降低表阿霉素引起的心脏毒性

实验方法：实施例1所得五味子乙醇提取物用0.5％泊洛沙姆(poloxamer)配制成8g/ml的母液。ICR小鼠购自上海实验动物中心。动物分2组，每组15只，组1各小鼠灌胃100μl溶剂(0.5％的泊洛沙姆)，组2各小鼠灌胃100μl五味子乙醇提取物；3小时后小鼠尾静脉注射表阿霉素(4mg/kg)；每隔7天给一次药，共给药10次。最后一次给药后一个星期，处死小鼠，取出心脏，用4％的多聚甲醛固定。48小时后，用乙醇脱水，石蜡固定。石蜡块切片(厚度为2μm)，切片用toluidine blue染色，显微镜下观察。心脏损伤用报道的方法评价(Imondi AR，et al.Cancer Research.1996，56：4200-4204.)心脏毒性用严重度(Severity)和程度(Extent)进行评价。严重度分2级：1级为肌质的微囊化(Sarcoplasmicmicrovacuolation)和、或细胞水肿、间质水肿；2级为在一级的基础上加上萎缩、坏死、纤维化、心内膜损伤，血凝块.程度分为4档：0.5档为在每一个显微镜视野下有少于10个的异常的心肌细胞；1档为在每一个显微镜视野下有多于10个的异常的心肌细胞；2档出现分散但成群的异常心肌细胞；3档为有一些成群的异常心肌细胞。心肌损伤用下式计算：平均总分(mean total score，MTS)＝∑(SxE)/小鼠数式中S为严重度，E为程度。平均总分越高，表示心脏损伤越严重。结果：如图7所示：五味子乙醇提取物对表阿霉素造成的心脏毒性有显著的预防作用，即五味子乙醇提取物可显著降低表阿霉素造成的心脏毒性。

实施例4：五味子乙醇提取物降低柔红霉素引起的心脏毒性

实验方法：实施例1所得五味子乙醇提取物用0.5％泊洛沙姆(poloxamer)配制成8g/ml的母液。ICR小鼠购自上海实验动物中心。动物分2组，每组15只，组1各小鼠灌胃100μl溶剂(0.5％的泊洛沙姆)，组2各小鼠灌胃100μl五味子乙醇提取物；3小时后小鼠尾静脉注射柔红霉素(4mg/kg)；每隔7天给一次药，共给药10次。最后一次给药后一个星期，处死小鼠，取出心脏，用4％的多聚甲醛固定。48小时后，用乙醇脱水，石蜡固定。石蜡块切片(厚度为2μm)，切片用toluidine blue染色，显微镜下观察。心脏损伤用的评价方法与实施例3同。

实验结果：如图8所示，五味子乙醇提取物可显著降低柔红霉素造成的心脏毒性。

实施例5：五味子乙醇提取物降低伊达比星引起的心脏毒性

实验方法：实施例1所得五味子乙醇提取物用0.5％泊洛沙姆(poloxamer)配制成8g/ml的母液。ICR小鼠购自上海实验动物中心。动物分2组，每组15只，组1各小鼠灌胃100μl溶剂(0.5％的泊洛沙姆)，组2各小鼠灌胃100μl五味子乙醇提取物；3小时后小鼠尾静脉注射伊达比星(4mg/kg)；每隔7天给一次药，共给药10次。最后一次给药后一个星期，处死小鼠，取出心脏，用4％的多聚甲醛固定。48小时后，用乙醇脱水，石蜡固定。石蜡块切片(厚度为2μm)，切片用toluidine blue染色，显微镜下观察。心脏损伤用的评价方法与实施例3同。

实验结果：如图9所示，五味子乙醇提取物可显著降低伊达比星造成的心脏毒性。

实施例6：五味子乙醇提取物对抗癌药的其他毒副作用的预防作用

1材料和方法

1.1实验材料：长春新碱、甲氨喋呤、顺铂、环磷酰氨、5-氟尿嘧啶，阿霉素，上海药业公司。实施例1所得五味子乙醇提取物，0.5％泊洛沙姆溶解。ICR雌性小鼠，体重20～25g，由上海实验动物中心提供，随机分组如下，每组6只。

1.2动物分组和给药方法和途径

对照组，腹腔注射生理盐水，隔日一次，连给7次；

甲氨喋呤组，2mg/kg，腹腔注射给药，隔日一次，连给7次；

甲氨喋呤组+五味子乙醇提取物组，灌胃给五味子乙醇提取物，400mg/kg，间隔小于2小时，给甲氨喋呤2mg/kg，腹腔注射给药，隔日一次，连给7次；

顺铂组，2mg/kg，腹腔注射给药，隔日一次，连给7次；

顺铂组+五味子乙醇提取物组，灌胃给五味子乙醇提取物，400mg/kg，间隔小于2小时，给顺铂2mg/kg，腹腔注射给药，隔日一次，连给7次；

5-氟尿嘧啶组，30mg/kg，腹腔注射给药，隔日一次，连给7次；

5-氟尿嘧啶组+五味子乙醇提取物组，灌胃给五味子乙醇提取物，400mg/kg，间隔小于2小时，给5-氟尿嘧啶30mg/kg，腹腔注射给药，隔日一次，连给7次；

环磷酰氨组，30mg/kg，腹腔注射给药，隔日一次，连给7次；

环磷酰氨组+五味子乙醇提取物组，灌胃给五味子乙醇提取物，400mg/kg，间隔小于2小时，给环磷酰氨30mg/kg，腹腔注射给药，隔日一次，连给7次；

长春新碱组，0.3mg/kg，腹腔注射给药，隔日一次，连给7次；

长春新碱组+五味子乙醇提取物组，灌胃给五味子乙醇提取物，400mg/kg，间隔小于2小时，给长春新碱0.3mg/kg，腹腔注射给药，隔日一次，连给7次；

阿霉素组，4mg/kg，腹腔注射给药，隔日一次，连给7次；

阿霉素组+五味子乙醇提取物组，灌胃给五味子乙醇提取物，400mg/kg，间隔小于2小时，给长春新碱0.3mg/kg，腹腔注射给药，隔日一次，连给7次；

2.结果

2.1五味子联合阿霉素对小鼠各器官的影响(见表1)

小鼠处死，取心，肝，脾，肾，胸腺进行称重，发现抗癌药组免疫器官比对照组明显减轻，意味着抗癌药对各器官有明显毒副作用，而联用五味子乙醇提取物组各脏器重量较之有不同程度增加，说明五味子乙醇提取物有减轻抗癌药的毒副作用和提高免疫功能的潜力。

表1：五味子乙醇提取物抑制抗癌药引起的小鼠各器官重量的降低

	肝(g)	心(mg)	肾(mg)	胸腺(mg)	脾(mg)
	肝(g)	心(mg)	肾(mg)	胸腺(mg)	脾(mg)	对照组(n＝6)	1.93±0.365	162.2±27.2	389.3±58.9	98.2±19.1	158.7±44.2
甲氨喋呤组(n＝6)	1.57±0.192	161.8±19.5	365.6±27.5	53.9±16.2	101.6±36.7	对照组(n＝6)	1.93±0.365	162.2±27.2	389.3±58.9	98.2±19.1	158.7±44.2
甲氨喋呤组(n＝6)	1.57±0.192	161.8±19.5	365.6±27.5	53.9±16.2	101.6±36.7	甲氨喋呤+五味子乙醇提取物组(100mg/kg-1；n＝6)	1.96±0.49	161.7±22.3	375.8±41.6	96.1±15.4<sup>*</sup>	147.1±22.8<sup>*</sup>
顺铂组(n＝6)						甲氨喋呤+五味子乙醇提取物组(100mg/kg-1；n＝6)	1.96±0.49	161.7±22.3	375.8±41.6	96.1±15.4<sup>*</sup>	147.1±22.8<sup>*</sup>

	1.78±0.270	157.4±24.9	313.5±74.88	56.3±12.6	98.4±22.8
	1.78±0.270	157.4±24.9	313.5±74.88	56.3±12.6	98.4±22.8	顺铂组+五味子乙醇提取物组(400mg/kg；n＝6)	1.87±0.19	168.3±25.6	386.3±58.9	89.9±11.7<sup>*</sup>	151.2±33.5<sup>*</sup>
5-氟尿嘧啶组	1.88±0.28	159.6±22.6	378.6±59.3	61.9±10.4	102.4±22.8	顺铂组+五味子乙醇提取物组(400mg/kg；n＝6)	1.87±0.19	168.3±25.6	386.3±58.9	89.9±11.7<sup>*</sup>	151.2±33.5<sup>*</sup>
5-氟尿嘧啶组	1.88±0.28	159.6±22.6	378.6±59.3	61.9±10.4	102.4±22.8	5-氟尿拟定+五味子乙醇提取物组(400mg/kg；n＝6)	1.88±0.34	162.5±31.7	371.4±35.7	97.3±15.2<sup>*</sup>	157.1±25.7<sup>*</sup>
环磷酰氨(n＝6)	1.88±0.36	162.6±31.4	396.3±54.7	49.8±12.4	113.5±24.7	5-氟尿拟定+五味子乙醇提取物组(400mg/kg；n＝6)	1.88±0.34	162.5±31.7	371.4±35.7	97.3±15.2<sup>*</sup>	157.1±25.7<sup>*</sup>
环磷酰氨(n＝6)	1.88±0.36	162.6±31.4	396.3±54.7	49.8±12.4	113.5±24.7	环磷酰氨+五味子乙醇提取物组(400mg/kg；n＝6)	1.82±0.35	157.2±34.5	381.4±32.5	89.7±20.3<sup>*</sup>	149.6±31.7<sup>*</sup>
长春新碱组(n＝6)	1.87±0.33	159.5±21.7	385.3±85.7	58.9±13.3	109.5±18.9	环磷酰氨+五味子乙醇提取物组(400mg/kg；n＝6)	1.82±0.35	157.2±34.5	381.4±32.5	89.7±20.3<sup>*</sup>	149.6±31.7<sup>*</sup>
长春新碱组(n＝6)	1.87±0.33	159.5±21.7	385.3±85.7	58.9±13.3	109.5±18.9	长春新碱+五味子乙醇提取物组(400mg/kg；n＝6)	1.83±0.46	161.6±33.7	381.2±62.4	89.3±21.1<sup>*</sup>	152.5±18.9<sup>*</sup>
阿霉素组(n＝10)	1.51±0.215	134.8±19.5	335.6±27.5	55.8±14.2	91.6±35.9	长春新碱+五味子乙醇提取物组(400mg/kg；n＝6)	1.83±0.46	161.6±33.7	381.2±62.4	89.3±21.1<sup>*</sup>	152.5±18.9<sup>*</sup>

	1.78±0.270	157.4±24.9	313.5±74.88	56.3±12.6	98.4±22.8
	1.78±0.270	157.4±24.9	313.5±74.88	56.3±12.6	98.4±22.8	阿霉素+五味子乙醇提取物组(400mg/kg；n＝6)	1.89±0.26<sup>*</sup>	156.4±22.1	398.3±66.9<sup>*</sup>	89.1±19.6<sup>*</sup>	158.7±23.8<sup>*</sup>

*表示联用五味子乙醇提取物与单用抗癌药有显著性的意义。

2.2、抗癌药和五味子乙醇提取物对小鼠表观状态的影响

单独用抗癌药组，7-8天后，小鼠瘦弱无力，精神萎靡，毛发亦稀疏，状态差，而联用五味子乙醇提取物的小鼠活动状态较好，毛发也较健康。说明五味子乙醇提取物可降低抗癌药的的毒副作用。

实施例2～5说明了五味子乙醇提取物具有降低和预防抗生素类抗肿瘤药的毒性作用。实施例6说明五味子乙醇提取物也可以预防或降低抗肿瘤植物类药、抗代谢类药、烷化剂、铂类药的毒性作用。

Claims

1.五味子的提取物在制备预防、降低抗肿瘤药毒副作用的药物中的应用，所述的五味子的提取物为五味子的乙醇提取物；所述抗肿瘤药毒副作用为抗肿瘤药引起的心脏毒性，所述抗肿瘤药为阿霉素、表阿霉素、柔红霉素或伊达比星。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的抗肿瘤药为伊达比星。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的抗肿瘤药为阿霉素。

4.如权利要求1～3之一所述的应用，其特征在于所述的预防、降低抗肿瘤药毒副作用的药物还含有药物赋型剂。