CN1895263A - 牛磺酸在制备含有葛根素的注射剂中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及牛磺酸在制备含有葛根素的注射剂中的应用，该注射剂将牛磺酸与葛根素相使配伍制成含葛根素的注射剂，有效克服了含有葛根素的注射剂的偶发性溶血不良反应，提高了葛根素注射给药的安全性。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物化合物的医药用途，具体涉及牛磺酸的医药新用途。
背景技术
牛磺酸，又名牛胆碱、牛胆素，按结构命名为2-氨基乙磺酸，是人体内一种P-氨基酸，属于非蛋白质氨基酸，其化学结构式如下：
该化合物的分子式为C2H7NO3S，该化合物是一种游离氨基酸，广泛分布于动物组织中，可从动物组织中提取或化学合成获得。本发明所用牛磺酸购自天津天成制药有限公司。
牛磺酸为白色针状结晶、无臭、味微酸，溶于水，不溶于乙醇、乙醚和丙酮，无任何毒副作用。它最初是从雄牛的胆汁中发现的，是一种非蛋白质氨基酸，其广泛存在于生物体中，也是人体内一种具有特殊生理功能的机体内源性氨基酸。牛磺酸可以由乙醇胺法合成得到或向黄冈市富驰制药有限责任公司和天津天成制药有限公司购买。在医疗制药方面，牛磺酸具有解热、镇痛、保肝、降血糖、维持正常视觉功能、调节神经传导、调节脂类代谢、胆磷汁分解—利胆护肝，参与内分泌活动，增加心脏收缩能力，提高人体免疫能力的作用。临床上主要用于治疗感冒、发热、神经痛、扁桃体炎、支气管炎、风湿性关节炎、各类眼疾及药物中毒。在食品工业上，可添加于乳制品、饮料、复合味精及豆制品中；加快对神经细胞的分化、发育、增强机体免疫能力，对不同年龄的人群均有较佳的保健作用；作为食品营养强化剂，在牛奶和奶粉中加入适量牛磺酸，其营养价值接近母乳，尤其对胎儿、婴幼儿有益智效果。
发明内容
葛根素(Puerarin)是从葛根(Radix Puerariae)中提炼得到的有效成分，化学名为：4′，7-二羟基-8-β-D葡萄糖基异黄酮，为血管扩张药。由于葛根素口服生物利用度过低，因此目前应用于临床的含有葛根素的药物制剂主要是注射剂。但葛根素注射剂可导致严重不良反应的情况早已引起了管理部门及研究人员的关注。2003年1月1日，国家药品不良反应监测中心在第三期《药品不良反应信息通报》中就对葛根素注射剂可引起急性血管内溶血等相关安全性问题进行了信息通报。同年，一项有关“葛根素注射剂不良反应与相关因素”的前瞻性队列研究，进一步证实了葛根素注射剂与急性血管内溶血的相关性；2004年11月，国家食品药品监督管理局发布了“关于修订葛根素注射剂说明书的通知”，2005年12月29日发布《关于加强葛根素注射剂管理的通知》，暂停葛根素注射剂的注册申请。葛根素注射剂可导致急性血管内溶血，并且发病急、进展快，病情危重，如不及时发现、治疗，会危及生命。据统计，2003年1月1日至2005年6月30日间，有关葛根素注射剂的不良反应病例报告共1006例，其中，严重不良反应30例，死亡11例。严重不良反应以急性血管内溶血为主，共18例，死亡8例，占死亡病例的73％。本发明者还对含其它药物组分的复方葛根素注射剂进行了大量的溶血试验，发现凡含葛根素的注射剂均有不同程度的溶血不良反应。
因此，本发明的目的是提供牛磺酸药物的新用途，即牛磺酸在制备含葛根素的注射剂中的应用，该注射剂可有效防治葛根素诱发的血管内溶血不良反应。
实际上，本发明涉及牛磺酸在制备含有葛根素的注射剂中的应用。
本发明所述的注射剂，含有以下重量份药物：牛磺酸1～50份，葛根素1～50份。
本发明所述的注射剂还可以是含有其它药物组分的含葛根素的注射剂，所述是其它药物组分是黄芩苷、黄芪水提取物、丹参、降香、弥可保(Mecobalamin)、木糖醇(Xylitol)、吡拉西坦(Piracetam)、肌氨肽苷(由多肽polypeptide、次黄嘌呤hypoxanthine7∶1组成)、尼莫地平、依那普利、胰岛素、甲钴胺、前列腺素E1中的一种或二种以上，用量为1～65重量份。
本发明所述的其它药物组分优选黄芩苷，优选用量为25～50重量份。
上述本发明所述的注射剂，还含有辅料1～50重量份，注射用水1～10000重量份。所述的辅料为氢氧化钠溶液、氯化钠注射液或生理盐水注射液。
本发明所述的注射剂可以是临床上可接受的注射液、粉针或输液。
本发明所述的注射剂的制备方法如下所述：
所述的粉针，由牛磺酸和葛根素混合、灭菌制得；或者由牛磺酸、葛根素和氯化钠混合，加注射用水溶解，再用氢氧化钠溶液调整pH值至3.0-9.0，过滤，滤液灭菌后灌封在粉状安瓿中再次灭菌制得；或者由牛磺酸、葛根素以及黄芩苷、黄芪水提取物、丹参、降香、弥可保(Mecobalamin)、木糖醇(Xylitol)、吡拉西坦(Piracetam)、肌氨肽苷(由多肽polypeptide、次黄嘌呤hypoxanthine7∶1组成)、尼莫地平、依那普利、胰岛素、甲钴胺、前列腺素E1中的一种或二种以上的其它药物组分和氯化钠混合，加注射用水溶解，再用氢氧化钠溶液调整pH值至3.0-9.0，过滤，滤液灭菌后灌封在粉状安瓿中再次灭菌制得。
所述的注射液，由牛磺酸、葛根素和氯化钠混合，加注射用水溶解，再用氢氧化钠溶液调整pH值至3.0-9.0，溶解，过滤，滤液灌封在安瓿中灭菌制得；或者由牛磺酸、葛根素、以及黄芩苷、黄芪水(是什么提取物要定义，如：水提物，乙酸乙脂提取物)提取物、丹参、降香、弥可保(Mecobalamin)、木糖醇(Xylitol)、吡拉西坦(Piracetam)、肌氨肽苷(由多肽polypeptide、次黄嘌呤hypoxanthine7∶1组成)、尼莫地平、依那普利、胰岛素、甲钴胺、前列腺素E1中的一种或二种以上的其它药物组分和氯化钠混合，加注射用水溶解，再用氢氧化钠溶液调整pH值至3.0-9.0，溶解，过滤，滤液灌封在安瓿中灭菌制得。
所述的输液，由牛磺酸、葛根素和氯化钠混合，加注射用水溶解，再用氢氧化钠溶液调整pH值至6.5-7.5，过滤，滤液灌封在盐水玻璃瓶中灭菌制得；或者由牛磺酸、葛根素、以及黄芩苷、黄芪水(是什么提取物要定义，如：水提物，乙酸乙脂提取物)提取物、丹参、降香、弥可保(Mecobalamin)、木糖醇(Xylitol)、吡拉西坦(Piracetam)、肌氨肽苷(由多肽polypeptide、次黄嘌呤hypoxanthine7∶1组成)、尼莫地平、依那普利、胰岛素、甲钴胺、前列腺素E1中的一种或二种以上的其它药物组分和氯化钠混合，加注射用水溶解，再用氢氧化钠溶液调整pH值至6.5-7.5，过滤，滤液灌封在盐水玻璃瓶中灭菌制得。
本发明所述的黄芪水提取物的制备方法如下所述：
取黄芪2000g，加水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至每1ml相当于原药材1～2g，用乙醇沉淀处理二次，第一次溶液中含乙醇量为75％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，用注射用水稀释至每1ml相当于原药材0.75～1g，冷藏放置12小时，滤过，滤液浓缩至每1ml相当于原药材5～6g，放冷，用20％氢氧化钠溶液调节pH值至7.5，即得。
葛根素具有有扩张冠状动脉和脑血管、降低心肌耗氧量，改善微循环和抗血小板聚集的作用。临床上用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、视网膜动静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病等。葛根素还可以与上述其它药物配伍制成复方葛根素注射剂用于防治多种疾病，如用于防治糖尿病周围神经病变、高血压合并糖尿病、糖尿病肾病、急性脑梗死、稳定型心绞痛、下肢深部静脉血栓形成以及椎基底动脉供血不足性眩晕等。但是，含葛根素注射剂中的葛根素与红细胞表面的抗体结合极易引起血管内溶血。本发明者经过大量研究证实牛磺酸不仅具有维持组织渗透压、稳定细胞膜、调节细胞内钙甲衡、抗脂质过氧化和改善胰岛素抵抗等广泛生物学效应，还可具有拮抗由葛根素诱发的血管内溶血不良反应，提高葛根素注射给药的安全性。
下面结合一些试验进一步来说明本发明的目的和所能达到的效果。
一、含葛根素的注射剂的溶血不良反应的评价方法
研究葛根素注射剂药物对Beagle犬红细胞的影响。取24条Beagle犬的红细胞，分别加入不同剂量的葛根素注射剂、丙二醇液，观察24小时内红细胞的状态和发生率，用X2检验统计分析实验结果，探寻引起葛根素注射剂偶发性溶血的原因，建立溶血不良反应的评价方法。现将结果报告如下：
1.实验材料
1.1受试药物
丙二醇液，由广州中医药大学新药开发研究中心提供，批号：20060316，由丙二醇与生理盐水按体积比(1∶1)配置而成，内含丙二醇0.5mL/mL。
葛根素注射剂，购自广州大日生物科技有限公司，批号01050801，内含葛根素50mg/mL，丙二醇0.5mL/mL。
1.2实验动物
Beagle犬24只(体重6～8Kg雌雄各半)，由广东省医药工业研究所Beagle犬养殖场提供，合格证号：医动字0014298。在室温17～20℃，相对湿度60％～68％条件下饲养。
1.3试剂、仪器
氯化钠注射剂，批号：05112102，安徽华源生物药业有限公司生产；注射用水，批号：200508011，广州铁路中心医院生产；22XLJ-II型离心沉淀机，上海医用仪器厂；SPX-150B生化培养箱，上海康华生化仪器制造厂。
2.方法
Beagle犬24只，分别进行溶血实验。采犬前肢静脉血10ml，用牙签迅速在50mL烧杯中除去纤维蛋白，置于刻度离心管内，加入适量的氯化钠注射剂，以2000转/分钟离心10分钟，弃去上液，再加氯化钠注射剂混匀、离心，如此反复洗涤，至离心后上液呈无色透明为止，将所得红细胞用氯化钠注射剂制备成50％红细胞悬液。取16支试管按表1、表2加入药液量，按表3制备阴性及阳性对照，再加氯化钠注射剂至总量5ml，与50％红细胞悬液0.1ml混合，各管摇匀，放置在37℃恒温生化培养箱中，分别于15、30、60分钟，2、3、4、6小时以及次日观察各管有无溶血及红细胞凝集现象。统计24只Beagle犬溶血发生率。
受试药物加入方法见表1、2、3、4，溶血判断方法见表6。
表1 丙二醇液组加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |||||
| B1 | B2 | B3 | B4 | B5 | B6 | |
| 丙二醇液(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)丙二醇浓度(цL/mL) | 0.14.80.1010 | 0.24.70.1020 | 0.34.60.1030 | 0.44.50.1040 | 0.54.40.1050 | 1.03.90.10100 |
表2 葛根素注射剂加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |||||
| C1 | C2 | C3 | C4 | C5 | C6 | |
| 大日牌葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)丙二醇浓度(цL/mL) | 0.14.80.1110 | 0.24.70.1220 | 0.34.60.1330 | 0.44.50.1440 | 0.54.40.1550 | 1.03.90.110100 |
表3 阴性及阳性对照加入方法
| 试剂名称 | 试管编号 | |||
| +1 | +2 | -1 | -2 | |
| 受试药物(ml)氯化钠注射剂(ml)注射用水(ml)50％红细胞悬液(ml) | --4.90.1 | --4.90.1 | -4.9-0.1 | -4.9-0.1 |
表4 溶血判断方法
| 记录号 | 判断结论 | 判断指标 |
| 1234 | 全溶血，记录为HL。部分溶血，记录为PHL。无溶血，记录为N。凝集，记录为AG。 | 溶液呈透明红色，管底无细胞残留。溶液呈透明红色，管底有少量红细胞残留。红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。虽不溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不能分散。 |
表5 24只Begal犬溶血试验结果记录
| 狗编号 | 丙二醇液 | 葛根素注射剂 | 生理盐水 | 注射用水 | ||||||||||||
| B1 | B2 | B3 | B4 | B5 | B6 | C1 | C2 | C3 | C4 | C5 | C6 | +1 | +2 | -1 | -2 | |
| 1 | N | N | N | N | N | PHL | N | N | PH | PH | PH | PH | N | N | HL | HL |
| 2 | N | N | N | N | N | PHL | N | N | N | N | N | PH | N | N | HL | HL |
| 3 | N | N | N | N | N | PHL | N | N | N | N | N | PH | N | N | HL | HL |
| 4 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | HL | HL |
| 5 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | PH | N | N | HL | HL |
| 6 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | PH | PH | N | N | HL | HL |
| 7 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | PH | N | N | HL | HL |
| 8 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | HL | HL |
| 9 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | PH | N | N | HL | HL |
| 10 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | PH | PH | N | N | HL | HL |
| 11 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | HL | HL |
| 12 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | PH | N | N | HL | HL |
| 13 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | PH | N | N | HL | HL |
| 14 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | PH | N | N | HL | HL |
| 15 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | PH | N | N | HL | HL |
| 16 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | HL | HL |
| 17 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | PH | N | N | HL | HL |
| 18 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | HL | HL |
| 19 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | HL | HL |
| 20 | N | N | PH | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | HL | HL |
| 21 | N | N | N | N | N | PHL | N | N | N | N | N | PH | N | N | HL | HL |
| 22 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | HL | HL |
| 23 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | HL | HL |
| 24 | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | N | PH | N | N | HL | HL |
表6 24只Begal犬溶血试验结果统计表
| 丙二醇液 | 葛根素注射剂 | 生理盐水 | 注射用水 | |||||||||||||
| B1 | B2 | B3 | B4 | B5 | B6 | C1 | C2 | C3 | C4 | C5 | C6 | +1 | +2 | -1 | -2 | |
| 溶血数无溶血数总试验数溶血发生率％ | 024240 | 024240 | 123244.2 | 024240 | 024240 | 4202416.6* | 024240 | 024240 | 123244.2 | 123244.2 | 3212412.5 | 1692467.7$& | 024240 | 024240 | 24024100 | 24024100 |
注：与生理盐水阴性组比较*p＜0.05，$p＜0.01；与丙二醇液比较：#p＜0.05，&p＜0.01
3.结果与讨论
本试验共考察不同浓度葛根素注射剂、丙二醇液对24条Begal犬红细胞的影响，考察结果均有详细记录，溶血试验均照片记录，记录溶血试验24小时结果，见表5。将全溶血和部分溶血实验结果按溶血计数，计算葛根素注射剂和丙二醇液在各种浓度下的溶血发生率，用X2检验统计分析，结果见表6。
结果显示：生理盐水组未出现溶血，注射用水组全部溶血，说明本溶血实验方法稳定可靠。与生理盐水组比较，丙二醇液B1、B2、B4、B5剂量组均未出现溶血，B3剂量出现一例部分溶血，丙二醇液B1～B5剂量溶血发生率与生理盐水组均无显著性差异(P＜0.05)，丙二醇液B6剂量组出现4例部分溶血，溶血发生率与生理盐水组存在显著性差异(P＞0.05)；结果提示低浓度的丙二醇溶血现象较少发生，当浓度增高到10％时溶血现象发生率增高。与生理盐水组比较，葛根素注射剂C1、C2剂量组均未出现溶血，C3、C4剂量均出现一例溶血，C5剂量出现3例溶血，葛根素注射剂C1～C5剂量溶血发生率与生理盐水组均无显著性差异(P＜0.05)，当葛根素注射剂浓度升高至C6剂量(葛根素注射剂1mL用生理盐水稀释至5mL，含葛根素10mg/mL)时，出现15例溶血，溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)。根据溶血发生率分析，葛根素注射剂在较低浓度(葛根素注射剂0.1～0.4mL用生理盐水稀释至5mL，含葛根素1～4mg/mL)时发生率低于5.0％，在中等浓度(葛根素注射剂0.5mL用生理盐水稀释至5mL，含葛根素5mg/mL)时发生率为12.5％，在高浓度(葛根素注射剂1mL用生理盐水稀释至5mL，含葛根素10mg/mL)时发生率达到62.5％，葛根素注射剂溶血发生率与供试液加入剂量密切相关。与相同浓度的丙二醇液组比较，葛根素注射剂C1、C2、C3剂量组溶血发生率与丙二醇液组相同；随着葛根素剂量的增高，C4、C5剂量组溶血发生率高于丙二醇液B4、B5剂量组，虽无显著性差异(P＞0.05)，但出现溶血现象增加的趋势；当葛根素浓度升到10mg/mL时，C6剂量组溶血发生率显著高于丙二醇液B6剂量组，两者丙二醇浓度虽相同，但溶血发生率却有极显著差异(P＜0.01)，显然是由于高浓度的葛根素所致。
丙二醇作为辅料，在等渗条件下引起人血溶血的浓度是30％左右。但葛根素注射剂溶血现象的发生是由于葛根素与红细胞表面的抗体结合而引致，且大剂量给药，葛根素注射剂不良反应增高；不含丙二醇的葛根素粉针、葛根素氯化钠注射剂、葛根素葡萄糖注射剂均有不良反应发生。实验发现，葛根素注射剂偶发性溶血的发生概率显著高于丙二醇液(P＜0.01)，且与葛根素的浓度密切相关。由此可见，葛根素注射剂、葛根素粉针、葛根素氯化钠注射剂、葛根素葡萄糖注射剂等含葛根素的静脉给药制剂，均有可能发生溶血不良反应，尤其是大剂量给药将提高葛根素溶血不良反应的发生率。
本实验采用24条Beagle犬进行群体动物的体外溶血试验，克服了药典溶血试验单一动物偶然性；加大供试药液的浓度，提高偶发性溶血的发生率。由于不良反应发生概率一般较低，实验室动物只数应不少于24只；不良反应一般发生在用药剂量过大，溶血试验的药物浓度也应是药典常规溶血试验的最大药物浓度的2倍。对于不良反应来说，Beagle犬24条仅是很小的实验样本数；本实验结果显示葛根素在较低浓度(1～4mg/mL)时溶血发生率低于5.0％，在药典法最高浓度(5mg/mL)时发生率为12.5％，虽可发现有偶发性溶血，但无统计学意义。提示应用药典原有实验方法进行偶发性溶血评价，进行24条Beagle犬体外偶发性溶血实验，在实验结果无统计学意义的情况下，应重新做24条Beagle犬的实验，并进行48条Beagle犬的实验结果统计分析；或者提高药物浓度，重新观察24条Beagle犬的溶血实验结果并进行统计分析。
本实验参考《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》对溶血试验进行预试验，发现葛根素注射剂在3小时内只有两例溶血，溶血发生率较低；在观察6小时后，溶血的发生率达到75％，大部分的溶血都发生在4～6小时之间，故本评价方法对溶血试验的的试管观察24小时。
我们用该方法重复进行了葛根素注射剂高剂量(葛根素注射剂1mL用生理盐水稀释至5mL，含葛根素10mg/mL)的体外溶血试验，发生概率为79％，与第一次试验葛根素注射剂高剂量的溶血发生概率无显著性差异，且其中大部分的Beagle犬溶血试验结果均得到重现，说明方法可重复。该方法可用于发现注射剂的潜在的偶发溶血现象，是进行注射剂新药开发判断是否存在偶发性溶血的可行试验方法，有利于减少不良反应的发生，提高注射剂的安全性。
二、牛磺酸拮抗含有葛根素的注射剂的溶血不良反应的作用及效果
(一)葛根素注射剂溶血试验
研究牛磺酸与葛根素合用对Beagle犬红细胞的影响。取24条Beagle犬的红细胞，分别加入不同剂量的牛磺酸与葛根素，观察24小时内红细胞的状态和发生率，用X2检验统计分析实验结果，探寻牛磺酸对葛根素注射剂偶发性溶血的对抗作用。现将结果报告如下：
1实验材料
1.1受试药物
复方葛根素注射剂⑥，每mL注射剂含葛根素10mg、牛磺酸5mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
复方葛根素注射剂⑦，每mL注射剂含葛根素10mg、牛磺酸10mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
复方葛根素注射剂⑧，每mL注射剂含葛根素10mg、牛磺酸20mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
葛根素注射剂，购自广州大日生物科技有限公司，批号01050801，每mL注射剂含葛根素50mg。溶血试验时用生理盐水配成每mL注射剂含葛根素10mg作为葛根素注射剂高剂量对照组。
1.2实验动物
Beagle犬24只(体重6～8Kg雌雄各半)，由广东省医药工业研究所Beagle犬养殖场提供，合格证号：医动字0014298。在室温17～20℃，相对湿度60％～68％条件下饲养。
1.3试剂、仪器
氯化钠注射剂，批号：05112102，安徽华源生物药业有限公司生产；注射用水，批号：200508011，广州铁路中心医院生产；22XLJ-II型离心沉淀机，上海医用仪器厂；SPX-150B生化培养箱，上海康华生化仪器制造厂。
2.方法
Beagle犬24只，分别进行溶血实验。采Beagle犬前肢静脉血10ml，用牙签迅速在50mL烧杯中除去纤维蛋白，置于刻度离心管内，加入适量的氯化钠注射剂，以2000转/分钟离心10分钟，弃去上液，再加氯化钠注射剂混匀、离心，如此反复洗涤，至离心后上液呈无色透明为止，将所得红细胞用氯化钠注射剂制备成50％红细胞悬液。取15支试管按表1、表2、表3加入药液量，按表4制备阴性及阳性对照和葛根素注射剂高剂量对照(葛根素注射剂1mL用生理盐水稀释至5mL，含葛根素10mg/mL)，再加氯化钠注射剂至总量5ml，与50％红细胞悬液0.1ml混合，各管摇匀，放置在37℃恒温生化培养箱中，分别于15、30、60分钟，2、3、4、6、24小时观察各管有无溶血及红细胞凝集现象。
受试药物加入方法见表7、8、9、10，溶血判断方法见表11。
3.结果
本试验考察在葛根素10mg/mL浓度时，不同浓度牛磺酸对24条Beagle犬红细胞的影响，同时进行复方葛根素注射剂⑥、⑦、⑧的偶发性溶血实验研究，实验结果均有详细记录，溶血试验均照片记录，记录溶血试验24小时结果，见表12。将全溶血和部分溶血实验结果按溶血计数，计算各组供试液的溶血发生率，用X2检验统计分析，结果见表13。
结果显示：生理盐水组未出现溶血，注射用水组全部溶血；与生理盐水组比较，葛根素注射剂高剂量组出现19例溶血，溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)；与第一次试验葛根素注射剂高剂量的溶血发生概率比较，两次试验葛根素注射剂高剂量组溶血率之间无显著性差异(P＞0.05)，且其中大部分的Beagle犬溶血试验结果均得到重现，说明本溶血实验方法稳定可靠，试验结果可重复。与葛根素注射剂高剂量组比较，复方葛根素注射剂⑥、⑦、⑧各组均未出现溶血，复方葛根素注射剂⑥、⑦、⑧各组溶血发生率均与葛根素注射剂高剂量组存在极显著差异(P＜0.01)；与生理盐水组比较，复方葛根素注射剂⑥、⑦、⑧各组溶血发生率均与生理盐水组无差异(P＝1.00)；复方葛根素注射剂⑥、⑦、⑧各组与葛根素注射剂高剂量组葛根素浓度相同，均为10mg/mL，但复方葛根素注射剂⑥、⑦、⑧各组分别含5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL牛磺酸，而葛根素注射剂高剂量组不含牛磺酸。以上结果提示：不同浓度的牛磺酸与葛根素配伍应用，均可拮抗由葛根素诱发的溶血不良反应，并可使发生率降低至生理盐水水平。
表7 复方葛根素注射剂⑥加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| ⑥1 | ⑥2 | |
| 复方葛根素注射剂⑥(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.1105 | 4.9-0.1105 |
表8 复方葛根素注射剂⑦加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| ⑦1 | ⑦2 | |
| 复方葛根素注射剂⑦(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.11010 | 4.9-0.11010 |
表9 复方葛根素注射剂⑧加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| ⑧1 | ⑧2 | |
| 复方葛根素注射剂⑧(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.11020 | 4.9-0.11020 |
表10 阴性、阳性及和葛根素注射剂高剂量对照加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | ||
| + | - | C6 | |
| 葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)注射用水(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | --4.90.100 | -4.9-0.100 | 1.03.9-0.1100 |
表11 溶血判断方法
| 记录号 | 判断结论 | 判断指标 |
| 1234 | 全溶血，记录为HL。部分溶血，记录为PHL。无溶血，记录为N。凝集，记录为AG。 | 溶液呈透明红色，管底无细胞残留。溶液呈透明红色，管底有少量红细胞残留。红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。虽不溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不能分散。 |
表12 24只Begal犬溶血试验结果记录
| 狗编号 | ⑥ | ⑦ | ⑧ | 葛根素注射剂 | 注射用 | 生理盐 | |||
| ⑥1 | ⑥2 | ⑦1 | ⑦2 | ⑧1 | ⑧2 | + | - | ||
| 1 | N | N | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 2 | N | N | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 3 | N | N | N | N | N | N | N | N | HL |
| 4 | N | N | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 5 | N | N | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 6 | N | N | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 7 | N | N | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 8 | N | N | N | N | N | N | N | N | HL |
| 9 | N | N | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 10 | N | N | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 11 | N | N | N | N | N | N | N | N | HL |
| 12 | N | N | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 13 | N | N | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 14 | N | N | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 15 | N | N | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 16 | N | N | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 17 | N | N | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 18 | N | N | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 19 | N | N | N | N | N | N | N | N | HL |
| 20 | N | N | N | N | N | N | N | N | HL |
| 21 | N | N | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 22 | N | N | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 23 | N | N | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 24 | N | N | N | N | N | N | PHL | N | HL |
表13 24只Begal犬溶血试验结果统计表
| ⑥ | ⑦ | ⑧ | 葛根素注射液高剂量组 | 注射用水 | 生理盐水 | ||||
| ⑥1 | ⑥2 | ⑦1 | ⑦2 | ⑧1 | ⑧2 | + | - | ||
| 溶血数无溶血总数溶血发生率％ | 024240& | 024240& | 024240& | 024240& | 024240& | 024240& | 1952479.2$ | 024240 | 24024100 |
注：与生理盐水阴性组比较*p＜0.05，$p＜0.01；与葛根素注射剂高剂量组比较：#p＜0.05，&p＜0.01
(二)含有黄芩苷的复方葛根素注射剂
研究牛磺酸对葛根素与黄芩苷配伍的注射剂溶血不良反应的影响。取24条Beagle犬红细胞，分别加入含牛磺酸的黄芩苷葛根素注射剂与不含牛磺酸的葛根素黄芩苷注射剂，观察24小时内红细胞的状态和溶血发生率，用X2检验统计分析实验结果，探寻牛磺酸对葛根素偶发性溶血的对抗作用。结果报告如下：
1实验材料
1.1受试药物
含有黄芩苷的复方葛根素注射剂，每mL注射剂含葛根素10mg、黄芩苷10mg、牛磺酸10mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
葛根素黄芩苷注射剂，每mL注射剂含葛根素10mg、黄芩苷10mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
葛根素注射剂，购自广州大日生物科技有限公司，批号01050801，每mL注射剂含葛根素50mg。溶血试验时用生理盐水配成每mL注射剂含葛根素10mg作为葛根素注射剂高剂量对照组。
1.2实验动物
Beagle犬24只(体重6～8Kg雌雄各半)，由广东省医药工业研究所Beagle犬养殖场提供，合格证号：医动字0014298。在室温17～20℃，相对湿度60％～68％条件下饲养。
1.3试剂、仪器
氯化钠注射剂，批号：05112102，安徽华源生物药业有限公司生产；注射用水，批号：200508011，广州铁路中心医院生产；22XLJ-II型离心沉淀机，上海医用仪器厂；SPX-150B生化培养箱，上海康华生化仪器制造厂。
2.方法
Beagle犬24只，分别进行溶血实验。采Beagle犬前肢静脉血10ml，用牙签迅速在50mL烧杯中除去纤维蛋白，置于刻度离心管内，加入适量的氯化钠注射剂，以2000转/分钟离心10分钟，弃去上液，再加氯化钠注射剂混匀、离心，如此反复洗涤，至离心后上液呈无色透明为止，将所得红细胞用氯化钠注射剂制备成50％红细胞悬液。取15支试管按表19、表20加入药液量，按表21制备阴性及阳性对照和葛根素注射剂高剂量对照(葛根素注射剂1mL用生理盐水稀释至5mL，含葛根素10mg/mL)，再加氯化钠注射剂至总量5ml，与50％红细胞悬液0.1ml混合，各管摇匀，放置在37℃恒温生化培养箱中，分别于15、30、60分钟，2、3、4、6、24小时观察各管有无溶血及红细胞凝集现象。
受试药物加入方法见表19、20、21，溶血判断方法见表22。
3.结果
本试验考察在葛根素10mg/mL浓度时，牛磺酸对24条Beagle犬红细胞的影响，实验结果均有详细记录，溶血试验均照片记录，记录溶血试验24小时结果，见表23。将全溶血和部分溶血实验结果按溶血计数，计算各组供试液的溶血发生率，用X2检验统计分析，结果见表24。
结果显示：生理盐水组未出现溶血，注射用水组全部溶血；与生理盐水组比较，葛根素注射剂高剂量组出现19例溶血，溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)；与第一次试验葛根素注射剂高剂量的溶血发生概率比较，两次试验葛根素注射剂高剂量组溶血率之间无显著性差异(P＞0.05)，且其中大部分的Beagle犬溶血试验结果均得到重现，说明本溶血实验方法稳定可靠，试验结果可重复。与葛根素注射剂高剂量组比较，含有黄芩苷的复方葛根素注射剂各组均未出现溶血，含有黄芩苷的复方葛根素注射剂溶血发生率与葛根素注射剂高剂量组存在极显著差异(P＜0.01)；葛根素黄芩苷注射剂出现18例溶血，葛根素黄芩苷注射剂溶血发生率与葛根素注射剂高剂量组无显著差异(P＞0.05)。与生理盐水组比较，含有黄芩苷的复方葛根素注射剂溶血发生率均与生理盐水组无差异(P＝1.00)；葛根素黄芩苷注射剂出现18例溶血，葛根素黄芩苷注射剂溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)。与葛根素黄芩苷注射剂比较，含有黄芩苷的复方葛根素注射剂各组均未出现溶血，葛根素黄芩苷注射剂出现18例溶血，含有黄芩苷的复方葛根素注射剂溶血发生率与葛根素黄芩苷注射剂组存在极显著差异(P＜0.01)。含有黄芩苷的复方葛根素注射剂组、葛根素黄芩苷注射剂组与葛根素注射剂高剂量组葛根素浓度相同，均为10mg/mL，但含有黄芩苷的复方葛根素注射剂含牛磺酸，而葛根素黄芩苷注射剂组、葛根素注射剂高剂量组均不含牛磺酸。以上结果提示：葛根素黄芩苷注射剂可引起偶发性溶血，但牛磺酸与葛根素黄芩苷配伍应用所制成的含有黄芩苷的复方葛根素注射剂未见溶血，说明牛磺酸可拮抗由葛根素诱发的溶血不良反应，并可使发生率降低至生理盐水水平。
表19 含有黄芩苷的复方葛根素注射剂加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| 1 | 2 | |
| 含有黄芩苷的复方葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)黄芩苷浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.1101010 | 4.9-0.1101010 |
表20 葛根素黄芩苷注射剂加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| 1 | 2 | |
| 含有黄芩苷的复方葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)黄芩苷浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.110100 | 4.9-0.110100 |
表21 阴性、阳性及和葛根素注射剂高剂量对照加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | ||
| + | - | 葛根素注射剂高剂量 | |
| 葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)注射用水(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)黄芩苷浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | --4.90.1000 | -4.9-0.1000 | 1.03.9-0.11000 |
表22 溶血判断方法
| 记录号 | 判断结论 | 判断指标 |
| 1234 | 全溶血，记录为HL。部分溶血，记录为PHL。无溶血，记录为N。凝集，记录为AG。 | 溶液呈透明红色，管底无细胞残留。溶液呈透明红色，管底有少量红细胞残留。红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。虽不溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不能分散。 |
表23 24只Begal犬溶血试验结果记录
| 狗编号 | 含有黄芩苷的复方葛根素注射剂 | 葛根素黄芩苷注射剂 | 葛根素注射剂高剂量 | 注射用水 | 生理盐水 | ||
| 1 | 2 | 1 | 2 | + | - | ||
| 1 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 2 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 3 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 4 | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 5 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 6 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 7 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 8 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 9 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 10 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 11 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 12 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 13 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 14 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 15 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 16 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 17 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 18 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 19 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 20 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 21 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 22 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 23 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 24 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
表24 24只Begal犬溶血试验结果统计表
| 含有黄芩苷的复方葛根素注射剂 | 葛根素黄芩苷注射剂 | 葛根素注射液高剂量组 | 注射用水 | 生理盐水 | |||
| 1 | 2 | 1 | 2 | + | - | ||
| 溶血数无溶血总数溶血发生率％ | 024240& | 024240& | 061875$ | 061875$ | 1952479.2$ | 024240 | 24024100 |
注：与生理盐水阴性组比较*p＜0.05，$p＜0.01；与葛根素注射剂高剂量组比较：#p＜0.05，&p＜0.01
(三)含有黄芪提取物的复方葛根素注射剂剂
研究牛磺酸对葛根素与黄芪提取物配伍的注射剂溶血不良反应的影响。取24条Beagle犬红细胞，分别加入含牛磺酸的黄芪提取物葛根素注射剂与不含牛磺酸的葛根素黄芪提取物注射剂，观察24小时内红细胞的状态和溶血发生率，用X2检验统计分析实验结果，探寻牛磺酸对葛根素偶发性溶血的对抗作用。
结果报告如下：
1实验材料
1.1受试药物
含有黄芪提取物的复方葛根素注射剂，每mL注射剂含葛根素10mg、黄芪提取物10mg、牛磺酸10mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
葛根素黄芪提取物注射剂，每mL注射剂含葛根素10mg、黄芪提取物10mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
葛根素注射剂，购自广州大日生物科技有限公司，批号01050801，每mL注射剂含葛根素50mg。溶血试验时用生理盐水配成每mL注射剂含葛根素10mg作为葛根素注射剂高剂量对照组。
1.2实验动物
Beagle犬24只(体重6～8Kg雌雄各半)，由广东省医药工业研究所Beagle犬养殖场提供，合格证号：医动字0014298。在室温17～20℃，相对湿度60％～68％条件下饲养。
1.3试剂、仪器
氯化钠注射剂，批号：05112102，安徽华源生物药业有限公司生产；注射用水，批号：200508011，广州铁路中心医院生产；22XLJ-II型离心沉淀机，上海医用仪器厂；SPX-150B生化培养箱，上海康华生化仪器制造厂。
2.方法
Beagle犬24只，分别进行溶血实验。采Beagle犬前肢静脉血10ml，用牙签迅速在50mL烧杯中除去纤维蛋白，置于刻度离心管内，加入适量的氯化钠注射剂，以2000转/分钟离心10分钟，弃去上液，再加氯化钠注射剂混匀、离心，如此反复洗涤，至离心后上液呈无色透明为止，将所得红细胞用氯化钠注射剂制备成50％红细胞悬液。取15支试管按表30、表31加入药液量，按表32制备阴性及阳性对照和葛根素注射剂高剂量对照(葛根素注射剂1mL用生理盐水稀释至5mL，含葛根素10mg/mL)，再加氯化钠注射剂至总量5ml，与50％红细胞悬液0.1ml混合，各管摇匀，放置在37℃恒温生化培养箱中，分别于15、30、60分钟，2、3、4、6、24小时观察各管有无溶血及红细胞凝集现象。
受试药物加入方法见表30、31、32，溶血判断方法见表33。
3.结果
本试验考察在葛根素10mg/mL浓度时，牛磺酸对24条Beagle犬红细胞的影响，实验结果均有详细记录，溶血试验均照片记录，记录溶血试验24小时结果，见表34。将全溶血和部分溶血实验结果按溶血计数，计算各组供试液的溶血发生率，用X2检验统计分析，结果见表35。
结果显示：生理盐水组未出现溶血，注射用水组全部溶血；与生理盐水组比较，葛根素注射剂高剂量组出现19例溶血，溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)；与第一次试验葛根素注射剂高剂量的溶血发生概率比较，两次试验葛根素注射剂高剂量组溶血率之间无显著性差异(P＞0.05)，且其中大部分的Beagle犬溶血试验结果均得到重现，说明本溶血实验方法稳定可靠，试验结果可重复。与葛根素注射剂高剂量组比较，含有黄芪提取物的复方葛根素注射剂各组均未出现溶血，含有黄芪提取物的复方葛根素注射剂溶血发生率与葛根素注射剂高剂量组存在极显著差异(P＜0.01)；葛根素黄芪提取物注射剂出现20例溶血，葛根素黄芪提取物注射剂溶血发生率与葛根素注射剂高剂量组无显著差异(P＞0.05)。与生理盐水组比较，含有黄芪提取物的复方葛根素注射剂溶血发生率均与生理盐水组无差异(P＝1.00)；葛根素黄芪提取物注射剂出现20例溶血，葛根素黄芪提取物注射剂溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)。与葛根素黄芪提取物注射剂比较，含有黄芪提取物的复方葛根素注射剂各组均未出现溶血，葛根素黄芪提取物注射剂出现20例溶血，含有黄芪提取物的复方葛根素注射剂溶血发生率与葛根素黄芪提取物注射剂组存在极显著差异(P＜0.01)。含有黄芪提取物的复方葛根素注射剂组、葛根素黄芪提取物注射剂组与葛根素注射剂高剂量组葛根素浓度相同，均为10mg/mL，但含有黄芪提取物的复方葛根素注射剂含牛磺酸，而葛根素黄芪提取物注射剂组、葛根素注射剂高剂量组均不含牛磺酸。以上结果提示：葛根素黄芪提取物注射剂可引起偶发性溶血，但牛磺酸与葛根素黄芪提取物配伍应用所制成的含有黄芪提取物的复方葛根素注射剂未见溶血，说明牛磺酸可拮抗由葛根素诱发的溶血不良反应，并可使发生率降低至生理盐水水平。
表30 含有黄芪提取物的复方葛根素注射剂加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| 1 | 2 | |
| 含有黄芪提取物的复方葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)黄芪提取物浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.1101010 | 4.9-0.1101010 |
表31 葛根素黄芪提取物注射剂加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| 1 | 2 | |
| 葛根素黄芪提取物注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)黄芪提取物浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.110100 | 4.9-0.110100 |
表32 阴性、阳性及和葛根素注射剂高剂量对照加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | ||
| + | - | 葛根素注射剂高剂量 | |
| 葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)注射用水(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)黄芪提取物浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | --4.90.1000 | -4.9-0.1000 | 1.03.9-0.11000 |
表33 溶血判断方法
| 记录号 | 判断结论 | 判断指标 |
| 1234 | 全溶血，记录为HL。部分溶血，记录为PHL。无溶血，记录为N。凝集，记录为AG。 | 溶液呈透明红色，管底无细胞残留。溶液呈透明红色，管底有少量红细胞残留。红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。虽不溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不能分散。 |
表34 24只Begal犬溶血试验结果记录
| 狗编号 | 含有黄芪提取物的复方葛根素注射剂 | 葛根素黄芪提取物注射剂 | 葛根素注射剂高剂量 | 注射用水 | 生理盐水 | ||
| 1 | 2 | 1 | 2 | + | - | ||
| 1 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 2 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 3 | N | N | PHL | PHL | N | N | HL |
| 4 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 5 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 6 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 7 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 8 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 9 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 10 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 11 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 12 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 13 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 14 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 15 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 16 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 17 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 18 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 19 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 20 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 21 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 22 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 23 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 24 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
表35 24只Begal犬溶血试验结果统计表
| 含有黄芪提取物的复方葛根素注射剂 | 葛根素黄芪提取物注射剂 | 葛根素注射液高剂量组 | 注射用水 | 生理盐水 | |||
| 1 | 2 | 1 | 2 | + | - | ||
| 溶血数无溶血总数溶血发生率％ | 024240& | 024240& | 042083.3$ | 042083.3$ | 1952479.2$ | 024240 | 24024100 |
注：与生理盐水阴性组比较*p＜0.05，$p＜0.01；与葛根素注射剂高剂量组比较：#p＜0.05，&p＜0.01
(四)含有丹参降香的复方葛根素注射剂
研究牛磺酸对葛根素与丹参降香配伍的注射剂溶血不良反应的影响。取24条Beagle犬红细胞，分别加入含牛磺酸的丹参降香葛根素注射剂与不含牛磺酸的葛根素丹参降香注射剂，观察24小时内红细胞的状态和溶血发生率，用X2检验统计分析实验结果，探寻牛磺酸对葛根素偶发性溶血的对抗作用。结果报告如下：
1实验材料
1.1受试药物
含有丹参降香的复方葛根素注射剂，每mL注射剂含葛根素10mg、丹参降香提取物10mg、牛磺酸10mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
葛根素丹参降香注射剂，每mL注射剂含葛根素10mg、丹参降香提取物10mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
葛根素注射剂，购自广州大日生物科技有限公司，批号01050801，每mL注射剂含葛根素50mg。溶血试验时用生理盐水配成每mL注射剂含葛根素10mg作为葛根素注射剂高剂量对照组。
1.2实验动物
Beagle犬24只(体重6～8Kg雌雄各半)，由广东省医药工业研究所Beagle犬养殖场提供，合格证号；医动字0014298。在室温17～20℃，相对湿度60％～68％条件下饲养。
1.3试剂、仪器
氯化钠注射剂，批号：05112102，安徽华源生物药业有限公司生产；注射用水，批号：200508011，广州铁路中心医院生产；22XLJ-II型离心沉淀机，上海医用仪器厂；SPX-150B生化培养箱，上海康华生化仪器制造厂。
2.方法
Beagle犬24只，分别进行溶血实验。采Beagle犬前肢静脉血10ml，用牙签迅速在50mL烧杯中除去纤维蛋白，置于刻度离心管内，加入适量的氯化钠注射剂，以2000转/分钟离心10分钟，弃去上液，再加氯化钠注射剂混匀、离心，如此反复洗涤，至离心后上液呈无色透明为止，将所得红细胞用氯化钠注射剂制备成50％红细胞悬液。取15支试管按表41、表42加入药液量，按表43制备阴性及阳性对照和葛根素注射剂高剂量对照(葛根素注射剂1mL用生理盐水稀释至5mL，含葛根素10mg/mL)，再加氯化钠注射剂至总量5ml，与50％红细胞悬液0.1ml混合，各管摇匀，放置在37℃恒温生化培养箱中，分别于15、30、60分钟，2、3、4、6、24小时观察各管有无溶血及红细胞凝集现象。
受试药物加入方法见表41、42、43，溶血判断方法见表44。
3.结果
本试验考察在葛根素10mg/mL浓度时，牛磺酸对24条Beagle犬红细胞的影响，实验结果均有详细记录，溶血试验均照片记录，记录溶血试验24小时结果，见表45。将全溶血和部分溶血实验结果按溶血计数，计算各组供试液的溶血发生率，用X2检验统计分析，结果见表46。
结果显示：生理盐水组未出现溶血，注射用水组全部溶血；与生理盐水组比较，葛根素注射剂高剂量组出现19例溶血，溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)；与第一次试验葛根素注射剂高剂量的溶血发生概率比较，两次试验葛根素注射剂高剂量组溶血率之间无显著性差异(P＞0.05)，且其中大部分的Beagle犬溶血试验结果均得到重现，说明本溶血实验方法稳定可靠，试验结果可重复。与葛根素注射剂高剂量组比较，含有丹参降香的复方葛根素注射剂各组均未出现溶血，含有丹参降香的复方葛根素注射剂溶血发生率与葛根素注射剂高剂量组存在极显著差异(P＜0.01)；葛根素丹参降香注射剂出现18例溶血，葛根素丹参降香注射剂溶血发生率与葛根素注射剂高剂量组无显著差异(P＞0.05)。与生理盐水组比较，含有丹参降香的复方葛根素注射剂溶血发生率均与生理盐水组无差异(P＝1.00)；葛根素丹参降香注射剂出现18例溶血，葛根素丹参降香注射剂溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)。与葛根素丹参降香注射剂比较，含有丹参降香的复方葛根素注射剂各组均未出现溶血，葛根素丹参降香注射剂出现18例溶血，含有丹参降香的复方葛根素注射剂溶血发生率与葛根素丹参降香注射剂组存在极显著差异(P＜0.01)。含有丹参降香的复方葛根素注射剂组、葛根素丹参降香注射剂组与葛根素注射剂高剂量组葛根素浓度相同，均为10mg/mL，但含有丹参降香的复方葛根素注射剂含牛磺酸，而葛根素丹参降香注射剂组、葛根素注射剂高剂量组均不含牛磺酸。以上结果提示：葛根素丹参降香注射剂可引起偶发性溶血，但牛磺酸与葛根素丹参降香配伍应用所制成的含有丹参降香的复方葛根素注射剂未见溶血，说明牛磺酸可拮抗由葛根素诱发的溶血不良反应，并可使发生率降低至生理盐水水平。
表41 含有丹参降香的复方葛根素注射剂加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| 1 | 2 | |
| 含有丹参降香的复方葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)丹参降香提取物浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.1101010 | 4.9-0.1101010 |
表42 葛根素丹参降香注射剂加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| 1 | 2 | |
| 葛根素丹参降香注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)丹参降香提取物浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.110100 | 4.9-0.110100 |
表43 阴性、阳性及和葛根素注射剂高剂量对照加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | ||
| + | - | 葛根素注射剂高剂量 | |
| 葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)注射用水(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)丹参降香提取物浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | --4.90.1000 | -4.9-0.1000 | 1.03.9-0.11000 |
表44 溶血判断方法
| 记录号 | 判断结论 | 判断指标 |
| 1234 | 全溶血，记录为HL。部分溶血，记录为PHL。无溶血，记录为N。凝集，记录为AG。 | 溶液呈透明红色，管底无细胞残留。溶液呈透明红色，管底有少量红细胞残留。红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。虽不溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不能分散。 |
表45 24只Begal犬溶血试验结果记录
| 狗编号 | 含有丹参降香的复方葛根素注射剂 | 葛根素丹参降香注射剂 | 葛根素注射剂高剂量 | 注射用水 | 生理盐水 | ||
| 1 | 2 | 1 | 2 | + | - | ||
| 1 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 2 | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 3 | N | N | PHL | PHL | N | N | HL |
| 4 | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 5 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 6 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 7 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 8 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 9 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 10 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 11 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 12 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 13 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 14 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 15 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 16 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 17 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 18 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 19 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 20 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 21 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 22 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 23 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 24 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
表46 24只Begal犬溶血试验结果统计表
| 含有丹参降香的复方葛根素注射剂 | 葛根素丹参降香注射剂 | 葛根素注射液高剂量组 | 注射用水 | 生理盐水 | |||
| 1 | 2 | 1 | 2 | + | - | ||
| 溶血数无溶血总数溶血发生率％ | 024240& | 024240& | 061875$ | 061875$ | 1952479.2$ | 024240 | 24024100 |
注：与生理盐水阴性组比较*p＜0.05，$p＜0.01；与葛根素注射剂高剂量组比较；#p＜0.05，&p＜0.01
(五)含有弥可保的复方葛根素注射剂
研究牛磺酸对葛根素与弥可保(Mecobalamin)配伍的注射剂溶血不良反应的影响。取24条Beagle犬红细胞，分别加入含牛磺酸的弥可保葛根素注射剂与不含牛磺酸的葛根素弥可保注射剂，观察24小时内红细胞的状态和溶血发生率，用X2检验统计分析实验结果，探寻牛磺酸对葛根素偶发性溶血的对抗作用。结果报告如下：
1实验材料
1.1受试药物
含有弥可保的复方葛根素注射剂，每mL注射剂含葛根素10mg、弥可保10mg、牛磺酸10mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
葛根素弥可保注射剂，每mL注射剂含葛根素10mg、弥可保10mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
葛根素注射剂，购自广州大日生物科技有限公司，批号01050801，每mL注射剂含葛根素50mg。溶血试验时用生理盐水配成每mL注射剂含葛根素10mg作为葛根素注射剂高剂量对照组。
1.2实验动物
Beagle犬24只(体重6～8Kg雌雄各半)，由广东省医药工业研究所Beagle犬养殖场提供，合格证号：医动字0014298。在室温17～20℃，相对湿度60％～68％条件下饲养。
1.3试剂、仪器
氯化钠注射剂，批号：05112102，安徽华源生物药业有限公司生产；注射用水，批号：200508011，广州铁路中心医院生产；22XLJ-II型离心沉淀机，上海医用仪器厂；SPX-150B生化培养箱，上海康华生化仪器制造厂。
2.方法
Beagle犬24只，分别进行溶血实验。采Beagle犬前肢静脉血10ml，用牙签迅速在50mL烧杯中除去纤维蛋白，置于刻度离心管内，加入适量的氯化钠注射剂，以2000转/分钟离心10分钟，弃去上液，再加氯化钠注射剂混匀、离心，如此反复洗涤，至离心后上液呈无色透明为止，将所得红细胞用氯化钠注射剂制备成50％红细胞悬液。取15支试管按表52、表53加入药液量，按表54制备阴性及阳性对照和葛根素注射剂高剂量对照(葛根素注射剂1mL用生理盐水稀释至5mL，含葛根素10mg/mL)，再加氯化钠注射剂至总量5ml，与50％红细胞悬液0.1ml混合，各管摇匀，放置在37℃恒温生化培养箱中，分别于15、30、60分钟，2、3、4、6、24小时观察各管有无溶血及红细胞凝集现象。
受试药物加入方法见表52、53、54，溶血判断方法见表55。
3.结果
本试验考察在葛根素10mg/mL浓度时，牛磺酸对24条Beagle犬红细胞的影响，实验结果均有详细记录，溶血试验均照片记录，记录溶血试验24小时结果，见表56。将全溶血和部分溶血实验结果按溶血计数，计算各组供试液的溶血发生率，用X2检验统计分析，结果见表57。
结果显示：生理盐水组未出现溶血，注射用水组全部溶血；与生理盐水组比较，葛根素注射剂高剂量组出现19例溶血，溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)；与第一次试验葛根素注射剂高剂量的溶血发生概率比较，两次试验葛根素注射剂高剂量组溶血率之间无显著性差异(P＞0.05)，且其中大部分的Beagle犬溶血试验结果均得到重现，说明本溶血实验方法稳定可靠，试验结果可重复。与葛根素注射剂高剂量组比较，含有弥可保的复方葛根素注射剂各组均未出现溶血，含有弥可保的复方葛根素注射剂溶血发生率与葛根素注射剂高剂量组存在极显著差异(P＜0.01)；葛根素弥可保注射剂出现18例溶血，葛根素弥可保注射剂溶血发生率与葛根素注射剂高剂量组无显著差异(P＞0.05)。与生理盐水组比较，含有弥可保的复方葛根素注射剂溶血发生率均与生理盐水组无差异(P＝1.00)；葛根素弥可保注射剂出现18例溶血，葛根素弥可保注射剂溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)。与葛根素弥可保注射剂比较，含有弥可保的复方葛根素注射剂各组均未出现溶血，葛根素弥可保注射剂出现18例溶血，含有弥可保的复方葛根素注射剂溶血发生率与葛根素弥可保注射剂组存在极显著差异(P＜0.01)。含有弥可保的复方葛根素注射剂组、葛根素弥可保注射剂组与葛根素注射剂高剂量组葛根素浓度相同，均为10mg/mL，但含有弥可保的复方葛根素注射剂含牛磺酸，而葛根素弥可保注射剂组、葛根素注射剂高剂量组均不含牛磺酸。以上结果提示：葛根素弥可保注射剂可引起偶发性溶血，但牛磺酸与葛根素弥可保配伍应用所制成的含有弥可保的复方葛根素注射剂未见溶血，说明牛磺酸可拮抗由葛根素诱发的溶血不良反应，并可使发生率降低至生理盐水水平。
表52 含有弥可保的复方葛根素注射剂加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| 1 | 2 | |
| 含有弥可保的复方葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)弥可保浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.1101010 | 4.9-0.1101010 |
表53 葛根素弥可保注射剂加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| 1 | 2 | |
| 葛根素弥可保注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)弥可保浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.110100 | 4.9-0.110100 |
表54 阴性、阳性及和葛根素注射剂高剂量对照加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | ||
| + | - | 葛根素注射剂高剂量 | |
| 葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)注射用水(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)弥可保浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | --4.90.1000 | -4.9-0.1000 | 1.03.9-0.11000 |
表55 溶血判断方法
| 记录号 | 判断结论 | 判断指标 |
| 1234 | 全溶血，记录为HL。部分溶血，记录为PHL。无溶血，记录为N。凝集，记录为AG。 | 溶液呈透明红色，管底无细胞残留。溶液呈透明红色，管底有少量红细胞残留。红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。虽不溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不能分散。 |
表56 24只Begal犬溶血试验结果记录
| 狗编号 | 含有弥可保的复方葛根素注射剂 | 葛根素弥可保注射剂 | 葛根素注射剂高剂量 | 注射用水 | 生理盐水 | ||
| 1 | 2 | 1 | 2 | + | - | ||
| 1 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 2 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 3 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 4 | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 5 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 6 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 7 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 8 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 9 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 10 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 11 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 12 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 13 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 14 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 15 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 16 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 17 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 18 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 19 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 20 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 21 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 22 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 23 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 24 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
表57 24只Begal犬溶血试验结果统计表
| 含有弥可保的复方葛根素注射剂 | 葛根素弥可保注射剂 | 葛根素注射液高剂量组 | 注射用水 | 生理盐水 | |||
| 1 | 2 | 1 | 2 | + | - | ||
| 溶血数无溶血总数溶血发生率％ | 024240& | 024240& | 061875$ | 061875$ | 1952479.2$ | 024240 | 24024100 |
注：与生理盐水阴性组比较*p＜0.05，$p＜0.01；与葛根素注射剂高剂量组比较：#p＜0.05，&p＜0.01
(六)含有木糖醇的复方葛根素注射剂
研究牛磺酸对葛根素与木糖醇(Xylitol)配伍的注射剂溶血不良反应的影响。取24条Beagle犬红细胞，分别加入含牛磺酸的木糖醇葛根素注射剂与不含牛磺酸的葛根素木糖醇注射剂，观察24小时内红细胞的状态和溶血发生率，用X2检验统计分析实验结果，探寻牛磺酸对葛根素偶发性溶血的对抗作用。
结果报告如下：
1实验材料
1.1受试药物
含有木糖醇的复方葛根素注射剂，每mL注射剂含葛根素10mg、木糖醇10mg、牛磺酸10mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
葛根素木糖醇注射剂，每mL注射剂含葛根素10mg、木糖醇10mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
葛根素注射剂，购自广州大日生物科技有限公司，批号01050801，每mL注射剂含葛根素50mg。溶血试验时用生理盐水配成每mL注射剂含葛根素10mg作为葛根素注射剂高剂量对照组。
1.2实验动物
Beagle犬24只(体重6～8Kg雌雄各半)，由广东省医药工业研究所Beagle犬养殖场提供，合格证号：医动字0014298。在室温17～20℃，相对湿度60％～68％条件下饲养。
1.3试剂、仪器
氯化钠注射剂，批号：05112102，安徽华源生物药业有限公司生产；注射用水，批号：200508011，广州铁路中心医院生产；22XLJ-II型离心沉淀机，上海医用仪器厂；SPX-150B生化培养箱，上海康华生化仪器制造厂。
2.方法
Beagle犬24只，分别进行溶血实验。采Beagle犬前肢静脉血10ml，用牙签迅速在50mL烧杯中除去纤维蛋白，置于刻度离心管内，加入适量的氯化钠注射剂，以2000转/分钟离心10分钟，弃去上液，再加氯化钠注射剂混匀、离心，如此反复洗涤，至离心后上液呈无色透明为止，将所得红细胞用氯化钠注射剂制备成50％红细胞悬液。取15支试管按表63、表64加入药液量，按表65制备阴性及阳性对照和葛根素注射剂高剂量对照(葛根素注射剂1mL用生理盐水稀释至5mL，含葛根素10mg/mL)，再加氯化钠注射剂至总量5ml，与50％红细胞悬液0.1ml混合，各管摇匀，放置在37℃恒温生化培养箱中，分别于15、30、60分钟，2、3、4、6、24小时观察各管有无溶血及红细胞凝集现象。
受试药物加入方法见表63、64、65，溶血判断方法见表66。
3.结果
本试验考察在葛根素10mg/mL浓度时，牛磺酸对24条Beagle犬红细胞的影响，实验结果均有详细记录，溶血试验均照片记录，记录溶血试验24小时结果，见表67。将全溶血和部分溶血实验结果按溶血计数，计算各组供试液的溶血发生率，用X2检验统计分析，结果见表68。
结果显示：生理盐水组未出现溶血，注射用水组全部溶血；与生理盐水组比较，葛根素注射剂高剂量组出现19例溶血，溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)；与第一次试验葛根素注射剂高剂量的溶血发生概率比较，两次试验葛根素注射剂高剂量组溶血率之间无显著性差异(P＞0.05)，且其中大部分的Beagle犬溶血试验结果均得到重现，说明本溶血实验方法稳定可靠，试验结果可重复。与葛根素注射剂高剂量组比较，含有木糖醇的复方葛根素注射剂各组均未出现溶血，含有木糖醇的复方葛根素注射剂溶血发生率与葛根素注射剂高剂量组存在极显著差异(P＜0.01)；葛根素木糖醇注射剂出现18例溶血，葛根素木糖醇注射剂溶血发生率与葛根素注射剂高剂量组无显著差异(P＞0.05)。与生理盐水组比较，含有木糖醇的复方葛根素注射剂溶血发生率均与生理盐水组无差异(P＝1.00)；葛根素木糖醇注射剂出现18例溶血，葛根素木糖醇注射剂溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)。与葛根素木糖醇注射剂比较，含有木糖醇的复方葛根素注射剂各组均未出现溶血，葛根素木糖醇注射剂出现18例溶血，含有木糖醇的复方葛根素注射剂溶血发生率与葛根素木糖醇注射剂组存在极显著差异(P＜0.01)。含有木糖醇的复方葛根素注射剂组、葛根素木糖醇注射剂组与葛根素注射剂高剂量组葛根素浓度相同，均为10mg/mL，但含有木糖醇的复方葛根素注射剂含牛磺酸，而葛根素木糖醇注射剂组、葛根素注射剂高剂量组均不含牛磺酸。以上结果提示：葛根素木糖醇注射剂可引起偶发性溶血，但牛磺酸与葛根素木糖醇配伍应用所制成的含有木糖醇的复方葛根素注射剂未见溶血，说明牛磺酸可拮抗由葛根素诱发的溶血不良反应，并可使发生率降低至生理盐水水平。
表63 含有木糖醇的复方葛根素注射剂加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| 1 | 2 | |
| 含有木糖醇的复方葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)木糖醇浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.1101010 | 4.9-0.1101010 |
表64 葛根素木糖醇注射剂加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| 1 | 2 | |
| 葛根素木糖醇注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)木糖醇浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.110100 | 4.9-0.110100 |
表65 阴性、阳性及和葛根素注射剂高剂量对照加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | ||
| + | - | 葛根素注射剂高剂量 | |
| 葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)注射用水(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)木糖醇浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | --4.90.1000 | -4.9-0.1000 | 1.03.9-0.11000 |
表66 溶血判断方法
| 记录号 | 判断结论 | 判断指标 |
| 1234 | 全溶血，记录为HL。部分溶血，记录为PHL。无溶血，记录为N。凝集，记录为AG。 | 溶液呈透明红色，管底无细胞残留。溶液呈透明红色，管底有少量红细胞残留。红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。虽不溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不能分散。 |
表67 24只Begal犬溶血试验结果记录
| 狗编号 | 含有木糖醇的复方葛根素注射剂 | 葛根素木糖醇注射剂 | 葛根素注射剂高剂量 | 注射用水 | 生理盐水 | ||
| 1 | 2 | 1 | 2 | + | - | ||
| 1 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 2 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 3 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 4 | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 5 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 6 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 7 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 8 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 9 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 10 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 11 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 12 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 13 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 14 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 15 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 16 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 17 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 18 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 19 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 20 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 21 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 22 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 23 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 24 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
表68 24只Begal犬溶血试验结果统计表
| 含有木糖醇的复方葛根素注射剂 | 葛根素木糖醇注射剂 | 葛根素注射液高剂量组 | 注射用水 | 生理盐水 | |||
| 1 | 2 | 1 | 2 | + | - | ||
| 溶血数无溶血总数溶血发生率％ | 024240& | 024240& | 061875$ | 061875$ | 1952479.2$ | 024240 | 24024100 |
注：与生理盐水阴性组比较*p＜0.05，$p＜0.01；与葛根素注射剂高剂量组比较：#p＜0.05，&p＜0.01
(七)含有吡拉西坦(Piracetam)的葛根素注射剂剂
研究牛磺酸对葛根素与吡拉西坦(Piracetam)配伍的注射剂溶血不良反应的影响。取24条Beagle犬红细胞，分别加入含牛磺酸的吡拉西坦葛根素注射剂与不含牛磺酸的葛根素吡拉西坦注射剂，观察24小时内红细胞的状态和溶血发生率，用X2检验统计分析实验结果，探寻牛磺酸对葛根素偶发性溶血的对抗作用。结果报告如下：
1实验材料
1.1受试药物
含有吡拉西坦的复方葛根素注射剂，每mL注射剂含葛根素10mg、吡拉西坦50mg、牛磺酸10mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
葛根素吡拉西坦注射剂，每mL注射剂含葛根素10mg、吡拉西坦50mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
葛根素注射剂，购自广州大日生物科技有限公司，批号01050801，每mL注射剂含葛根素50mg。溶血试验时用生理盐水配成每mL注射剂含葛根素10mg作为葛根素注射剂高剂量对照组。
1.2实验动物
Beagle犬24只(体重6～8Kg雌雄各半)，由广东省医药工业研究所Beagle犬养殖场提供，合格证号：医动字0014298。在室温17～20℃，相对湿度60％～68％条件下饲养。
1.3试剂、仪器
氯化钠注射剂，批号：05112102，安徽华源生物药业有限公司生产；注射用水，批号：200508011，广州铁路中心医院生产；22XLJ-II型离心沉淀机，上海医用仪器厂；SPX-150B生化培养箱，上海康华生化仪器制造厂。
2.方法
Beagle犬24只，分别进行溶血实验。采Beagle犬前肢静脉血10ml，用牙签迅速在50mL烧杯中除去纤维蛋白，置于刻度离心管内，加入适量的氯化钠注射剂，以2000转/分钟离心10分钟，弃去上液，再加氯化钠注射剂混匀、离心，如此反复洗涤，至离心后上液呈无色透明为止，将所得红细胞用氯化钠注射剂制备成50％红细胞悬液。取15支试管按表74、表75加入药液量，按表76制备阴性及阳性对照和葛根素注射剂高剂量对照(葛根素注射剂1mL用生理盐水稀释至5mL，含葛根素10mg/mL)，再加氯化钠注射剂至总量5ml，与50％红细胞悬液0.1ml混合，各管摇匀，放置在37℃恒温生化培养箱中，分别于15、30、60分钟，2、3、4、6、24小时观察各管有无溶血及红细胞凝集现象。
受试药物加入方法见表74、75、76，溶血判断方法见表77。
3.结果
本试验考察在葛根素10mg/mL浓度时，牛磺酸对24条Beagle犬红细胞的影响，实验结果均有详细记录，溶血试验均照片记录，记录溶血试验24小时结果，见表78。将全溶血和部分溶血实验结果按溶血计数，计算各组供试液的溶血发生率，用X2检验统计分析，结果见表79。
结果显示：生理盐水组未出现溶血，注射用水组全部溶血；与生理盐水组比较，葛根素注射剂高剂量组出现19例溶血，溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)；与第一次试验葛根素注射剂高剂量的溶血发生概率比较，两次试验葛根素注射剂高剂量组溶血率之间无显著性差异(P＞0.05)，且其中大部分的Beagle犬溶血试验结果均得到重现，说明本溶血实验方法稳定可靠，试验结果可重复。与葛根素注射剂高剂量组比较，含有吡拉西坦的复方葛根素注射剂剂各组均未出现溶血，含有吡拉西坦的复方葛根素注射剂剂溶血发生率与葛根素注射剂高剂量组存在极显著差异(P＜0.01)；葛根素吡拉西坦注射剂出现18例溶血，葛根素吡拉西坦注射剂溶血发生率与葛根素注射剂高剂量组无显著差异(P＞0.05)。与生理盐水组比较，含有吡拉西坦的复方葛根素注射剂剂溶血发生率均与生理盐水组无差异(P＝1.00)；葛根素吡拉西坦注射剂出现18例溶血，葛根素吡拉西坦注射剂溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)。与葛根素吡拉西坦注射剂比较，含有吡拉西坦的复方葛根素注射剂剂各组均未出现溶血，葛根素吡拉西坦注射剂出现18例溶血，含有吡拉西坦的复方葛根素注射剂剂溶血发生率与葛根素吡拉西坦注射剂组存在极显著差异(P＜0.01)。含有吡拉西坦的复方葛根素注射剂剂组、葛根素吡拉西坦注射剂组与葛根素注射剂高剂量组葛根素浓度相同，均为10mg/mL，但含有吡拉西坦的复方葛根素注射剂剂含牛磺酸，而葛根素吡拉西坦注射剂组、葛根素注射剂高剂量组均不含牛磺酸。以上结果提示：葛根素吡拉西坦注射剂可引起偶发性溶血，但牛磺酸与葛根素吡拉西坦配伍应用所制成的含有吡拉西坦的复方葛根素注射剂剂未见溶血，说明牛磺酸可拮抗由葛根素诱发的溶血不良反应，并可使发生率降低至生理盐水水平。
表74 含有吡拉西坦的复方葛根素注射剂加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| 1 | 2 | |
| 本发明含有吡拉西坦的复方葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)吡拉西坦浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.1105010 | 4.9-0.1105010 |
表75 葛根素吡拉西坦注射剂加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| 1 | 2 | |
| 葛根素吡拉西坦注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)吡拉西坦浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.110500 | 4.9-0.110500 |
表76 阴性、阳性及和葛根素注射剂高剂量对照加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | ||
| + | - | 葛根素注射剂高剂量 | |
| 葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)注射用水(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)吡拉西坦浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | --4.90.1000 | -4.9-0.1000 | 1.03.9-0.11000 |
表77 溶血判断方法
| 记录号 | 判断结论 | 判断指标 |
| 1234 | 全溶血，记录为HL。部分溶血，记录为PHL。无溶血，记录为N。凝集，记录为AG。 | 溶液呈透明红色，管底无细胞残留。溶液呈透明红色，管底有少量红细胞残留。红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。虽不溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不能分散。 |
表78 24只Begal犬溶血试验结果记录
| 狗编号 | 含有吡拉西坦的复方 | 葛根素吡拉西坦注射 | 葛根素注射剂 | 注射用 | 生理盐 | ||
| 1 | 2 | 1 | 2 | + | - | ||
| 1 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 2 | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 3 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 4 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 5 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 6 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 7 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 8 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 9 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 10 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 11 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 12 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 13 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 14 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 15 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 16 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 17 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 18 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 19 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 20 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 21 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 22 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 23 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 24 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
表79 24只Begal犬溶血试验结果统计表
| 含有吡拉西坦的复方葛根素注射剂剂 | 葛根素吡拉西坦注射剂 | 葛根素注射液高剂量组 | 注射用水 | 生理盐水 | |||
| 1 | 2 | 1 | 2 | + | - | ||
| 溶血数无溶血总数溶血发生率％ | 024240& | 024240& | 061875$ | 061875$ | 1952479.2$ | 024240 | 24024100 |
注：与生理盐水阴性组比较*p＜0.05，$p＜0.01；与葛根素注射剂高剂量组比较：#p＜0.05，&p＜0.01
(八)含有肌氨肽苷的复方葛根素注射剂
研究牛磺酸对葛根素与肌氨肽苷(由多肽polypeptide、次黄嘌呤hypoxanthine7∶1组成)配伍的注射剂溶血不良反应的影响。取24条Beagle犬红细胞，分别加入含牛磺酸的肌氨肽苷葛根素注射剂与不含牛磺酸的葛根素肌氨肽苷注射剂，观察24小时内红细胞的状态和溶血发生率，用X2检验统计分析实验结果，探寻牛磺酸对葛根素偶发性溶血的对抗作用。结果报告如下：
1实验材料
1.1受试药物
含有肌氨肽苷的复方葛根素注射剂，每mL注射剂含葛根素10mg、肌氨肽苷固形物10mg、牛磺酸10mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
葛根素肌氨肽苷注射剂，每mL注射剂含葛根素10mg、肌氨肽苷固形物10mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
葛根素注射剂，购自广州大日生物科技有限公司，批号01050801，每mL注射剂含葛根素50mg。溶血试验时用生理盐水配成每mL注射剂含葛根素10mg作为葛根素注射剂高剂量对照组。
1.2实验动物
Beagle犬24只(体重6～8Kg雌雄各半)，由广东省医药工业研究所Beagle犬养殖场提供，合格证号：医动字0014298。在室温17～20℃，相对湿度60％～68％条件下饲养。
1.3试剂、仪器
氯化钠注射剂，批号：05112102，安徽华源生物药业有限公司生产；注射用水，批号：200508011，广州铁路中心医院生产；22XLJ-II型离心沉淀机，上海医用仪器厂；SPX-150B生化培养箱，上海康华生化仪器制造厂。
2.方法
Beagle犬24只，分别进行溶血实验。采Beagle犬前肢静脉血10ml，用牙签迅速在50mL烧杯中除去纤维蛋白，置于刻度离心管内，加入适量的氯化钠注射剂，以2000转/分钟离心10分钟，弃去上液，再加氯化钠注射剂混匀、离心，如此反复洗涤，至离心后上液呈无色透明为止，将所得红细胞用氯化钠注射剂制备成50％红细胞悬液。取15支试管按表85、表86加入药液量，按表87制备阴性及阳性对照和葛根素注射剂高剂量对照(葛根素注射剂1mL用生理盐水稀释至5mL，含葛根素10mg/mL)，再加氯化钠注射剂至总量5ml，与50％红细胞悬液0.1ml混合，各管摇匀，放置在37℃恒温生化培养箱中，分别于15、30、60分钟，2、3、4、6、24小时观察各管有无溶血及红细胞凝集现象。
受试药物加入方法见表85、86、87，溶血判断方法见表88。
3.结果
本试验考察在葛根素10mg/mL浓度时，牛磺酸对24条Beagle犬红细胞的影响，实验结果均有详细记录，溶血试验均照片记录，记录溶血试验24小时结果，见表89。将全溶血和部分溶血实验结果按溶血计数，计算各组供试液的溶血发生率，用X2检验统计分析，结果见表90。
结果显示：生理盐水组未出现溶血，注射用水组全部溶血；与生理盐水组比较，葛根素注射剂高剂量组出现19例溶血，溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)；与第一次试验葛根素注射剂高剂量的溶血发生概率比较，两次试验葛根素注射剂高剂量组溶血率之间无显著性差异(P＞0.05)，且其中大部分的Beagle犬溶血试验结果均得到重现，说明本溶血实验方法稳定可靠，试验结果可重复。与葛根素注射剂高剂量组比较，含有肌氨肽苷的复方葛根素注射剂各组均未出现溶血，含有肌氨肽苷的复方葛根素注射剂溶血发生率与葛根素注射剂高剂量组存在极显著差异(P＜0.01)；葛根素肌氨肽苷注射剂出现18例溶血，葛根素肌氨肽苷注射剂溶血发生率与葛根素注射剂高剂量组无显著差异(P＞0.05)。与生理盐水组比较，含有肌氨肽苷的复方葛根素注射剂溶血发生率均与生理盐水组无差异(P＝1.00)；葛根素肌氨肽苷注射剂出现18例溶血，葛根素肌氨肽苷注射剂溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)。与葛根素肌氨肽苷注射剂比较，含有肌氨肽苷的复方葛根素注射剂各组均未出现溶血，葛根素肌氨肽苷注射剂出现18例溶血，含有肌氨肽苷的复方葛根素注射剂溶血发生率与葛根素肌氨肽苷注射剂组存在极显著差异(P＜0.01)。含有肌氨肽苷的复方葛根素注射剂组、葛根素肌氨肽苷注射剂组与葛根素注射剂高剂量组葛根素浓度相同，均为10mg/mL，但含有肌氨肽苷的复方葛根素注射剂含牛磺酸，而葛根素肌氨肽苷注射剂组、葛根素注射剂高剂量组均不含牛磺酸。以上结果提示：葛根素肌氨肽苷注射剂可引起偶发性溶血，但牛磺酸与葛根素肌氨肽苷配伍应用所制成的含有肌氨肽苷的复方葛根素注射剂未见溶血，说明牛磺酸可拮抗由葛根素诱发的溶血不良反应，并可使发生率降低至生理盐水水平。
表85 含有肌氨肽苷的复方葛根素注射剂加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| 1 | 2 | |
| 本发明含有肌氨肽苷的复方葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)肌氨肽苷固形物浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.1101010 | 4.9-0.1101010 |
表86 葛根素肌氨肽苷注射剂加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| 1 | 2 | |
| 葛根素肌氨肽苷注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)肌氨肽苷固形物浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.110100 | 4.9-0.110100 |
表87 阴性、阳性及和葛根素注射剂高剂量对照加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | ||
| + | - | 葛根素注射剂高剂量 | |
| 葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)注射用水(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)肌氨肽苷固形物浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | --4.90.1000 | -4.9-0.1000 | 1.03.9-0.11000 |
表88 溶血判断方法
| 记录号 | 判断结论 | 判断指标 |
| 1234 | 全溶血，记录为HL。部分溶血，记录为PHL。无溶血，记录为N。凝集，记录为AG。 | 溶液呈透明红色，管底无细胞残留。溶液呈透明红色，管底有少量红细胞残留。红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。虽不溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不能分散。 |
表89 24只Begal犬溶血试验结果记录
| 狗编号 | 含有肌氨肽苷的复方葛根素注射剂 | 葛根素肌氨肽苷注射剂 | 葛根素注射剂高剂量 | 注射用水 | 生理盐水 | ||
| 1 | 2 | 1 | 2 | + | - | ||
| 1 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 2 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 3 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 4 | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 5 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 6 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 7 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 8 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 9 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 10 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 11 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 12 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 13 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 14 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 15 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 16 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 17 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 18 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 19 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 20 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 21 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 22 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 23 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 24 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
表90 24只Begal犬溶血试验结果统计表
| 含有肌氨肽苷的复方葛根素注射剂 | 葛根素肌氨肽苷注射剂 | 葛根素注射液高剂量组 | 注射用水 | 生理盐水 | |||
| 1 | 2 | 1 | 2 | + | - | ||
| 溶血数无溶血总数溶血发生率％ | 024240& | 024240& | 061875$ | 061875$ | 1952479.2$ | 024240 | 24024100 |
注：与生理盐水阴性组比较*p＜0.05，$p＜0.01；与葛根素注射剂高剂量组比较：#p＜0.05，&p＜0.01
(九)含有尼莫地平的复方葛根素注射剂
研究牛磺酸对葛根素与尼莫地平(Nimodipine)配伍的注射剂溶血不良反应的影响。取24条Beagle犬红细胞，分别加入含牛磺酸的尼莫地平葛根素注射剂与不含牛磺酸的葛根素尼莫地平注射剂，观察24小时内红细胞的状态和溶血发生率，用X2检验统计分析实验结果，探寻牛磺酸对葛根素偶发性溶血的对抗作用。结果报告如下：
1实验材料
1.1受试药物
含有尼莫地平的复方葛根素注射剂，每mL注射剂含葛根素10mg、尼莫地平10mg、牛磺酸10mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
葛根素尼莫地平注射剂，每mL注射剂含葛根素10mg、尼莫地平10mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
葛根素注射剂，购自广州大日生物科技有限公司，批号01050801，每mL注射剂含葛根素50mg。溶血试验时用生理盐水配成每mL注射剂含葛根素10mg作为葛根素注射剂高剂量对照组。
1.2实验动物
Beagle犬24只(体重6～8Kg雌雄各半)，由广东省医药工业研究所Beagle犬养殖场提供，合格证号：医动字0014298。在室温17～20℃，相对湿度60％～68％条件下饲养。
1.3试剂、仪器
氯化钠注射剂，批号：05112102，安徽华源生物药业有限公司生产；注射用水，批号：200508011，广州铁路中心医院生产；22XLJ-II型离心沉淀机，上海医用仪器厂；SPX-150B生化培养箱，上海康华生化仪器制造厂。
2.方法
Beagle犬24只，分别进行溶血实验。采Beagle犬前肢静脉血10ml，用牙签迅速在50mL烧杯中除去纤维蛋白，置于刻度离心管内，加入适量的氯化钠注射剂，以2000转/分钟离心10分钟，弃去上液，再加氯化钠注射剂混匀、离心，如此反复洗涤，至离心后上液呈无色透明为止，将所得红细胞用氯化钠注射剂制备成50％红细胞悬液。取15支试管按表96、表97加入药液量，按表98制备阴性及阳性对照和葛根素注射剂高剂量对照(葛根素注射剂1mL用生理盐水稀释至5mL，含葛根素10mg/mL)，再加氯化钠注射剂至总量5ml，与50％红细胞悬液0.1ml混合，各管摇匀，放置在37℃恒温生化培养箱中，分别于15、30、60分钟，2、3、4、6、24小时观察各管有无溶血及红细胞凝集现象。
受试药物加入方法见表％、97、98，溶血判断方法见表99。
3.结果
本试验考察在葛根素10mg/mL浓度时，牛磺酸对24条Beagle犬红细胞的影响，实验结果均有详细记录，溶血试验均照片记录，记录溶血试验24小时结果，见表100。将全溶血和部分溶血实验结果按溶血计数，计算各组供试液的溶血发生率，用X2检验统计分析，结果见表101。
结果显示：生理盐水组未出现溶血，注射用水组全部溶血；与生理盐水组比较，葛根素注射剂高剂量组出现19例溶血，溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)；与第一次试验葛根素注射剂高剂量的溶血发生概率比较，两次试验葛根素注射剂高剂量组溶血率之间无显著性差异(P＞0.05)，且其中大部分的Beagle犬溶血试验结果均得到重现，说明本溶血实验方法稳定可靠，试验结果可重复。与葛根素注射剂高剂量组比较，含有尼莫地平的复方葛根素注射剂各组均未出现溶血，含有尼莫地平的复方葛根素注射剂溶血发生率与葛根素注射剂高剂量组存在极显著差异(P＜0.01)；葛根素尼莫地平注射剂出现18例溶血，葛根素尼莫地平注射剂溶血发生率与葛根素注射剂高剂量组无显著差异(P＞0.05)。与生理盐水组比较，含有尼莫地平的复方葛根素注射剂溶血发生率均与生理盐水组无差异(P＝1.00)；葛根素尼莫地平注射剂出现18例溶血，葛根素尼莫地平注射剂溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)。与葛根素尼莫地平注射剂比较，含有尼莫地平的复方葛根素注射剂各组均未出现溶血，葛根素尼莫地平注射剂出现18例溶血，含有尼莫地平的复方葛根素注射剂溶血发生率与葛根素尼莫地平注射剂组存在极显著差异(P＜0.01)。含有尼莫地平的复方葛根素注射剂组、葛根素尼莫地平注射剂组与葛根素注射剂高剂量组葛根素浓度相同，均为10mg/mL，但含有尼莫地平的复方葛根素注射剂含牛磺酸，而葛根素尼莫地平注射剂组、葛根素注射剂高剂量组均不含牛磺酸。以上结果提示：葛根素尼莫地平注射剂可引起偶发性溶血，但牛磺酸与葛根素尼莫地平配伍应用所制成的含有尼莫地平的复方葛根素注射剂未见溶血，说明牛磺酸可拮抗由葛根素诱发的溶血不良反应，并可使发生率降低至生理盐水水平。
表96 含有尼莫地平的含有尼莫地平的复方葛根素注射剂加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| 1 | 2 | |
| 本发明含有尼莫地平的复方葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)尼莫地平浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.1101010 | 4.9-0.1101010 |
表97 葛根素尼莫地平注射剂加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| 1 | 2 | |
| 葛根素尼莫地平注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)尼莫地平浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.110100 | 4.9-0.110100 |
表98 阴性、阳性及和葛根素注射剂高剂量对照加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | ||
| + | - | 葛根素注射剂高剂量 | |
| 葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)注射用水(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)尼莫地平浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | --4.90.1000 | -4.9-0.1000 | 1.03.9-0.11000 |
表99 溶血判断方法
| 记录号 | 判断结论 | 判断指标 |
| 1234 | 全溶血，记录为HL。部分溶血，记录为PHL。无溶血，记录为N。凝集，记录为AG。 | 溶液呈透明红色，管底无细胞残留。溶液呈透明红色，管底有少量红细胞残留。红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。虽不溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不能分散。 |
表100 24只Begal犬溶血试验结果记录
| 狗编号 | 含有尼莫地平的复方葛根素注射剂 | 葛根素尼莫地平注射剂 | 葛根素注射剂高剂量 | 注射用水 | 生理盐水 | ||
| 1 | 2 | 1 | 2 | + | - | ||
| 1 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 2 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 3 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 4 | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 5 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 6 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 7 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 8 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 9 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 10 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 11 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 12 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 13 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 14 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 15 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 16 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 17 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 18 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 19 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 20 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 21 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 22 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 23 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 24 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
表101 24只Begal犬溶血试验结果统计表
| 含有尼莫地平的复方 | 葛根素尼莫地平注 | 葛根素注射液高剂量组 | 注射用水 | 生理盐水 | |||
| 1 | 2 | 1 | 2 | + | - | ||
| 溶血数无溶血总数溶血发生率％ | 024240& | 024240& | 061875$ | 061875$ | 1952479.2$ | 024240 | 24024100 |
注：与生理盐水阴性组比较*p＜0.05，$p＜0.01；与葛根素注射剂高剂量组比较：#p＜0.05，&p＜0.01
(十)含有多种药物成分的复方葛根素注射剂
研究牛磺酸对葛根素与多种药物成分的配伍的注射剂溶血不良反应的影响。取24条Beagle犬红细胞，分别加入含牛磺酸的多种药物成分和葛根素注射剂与不含牛磺酸的葛根素和多种药物成分的注射剂，观察24小时内红细胞的状态和溶血发生率，用X2检验统计分析实验结果，探寻牛磺酸对葛根素偶发性溶血的对抗作用。结果报告如下：
1实验材料
1.1受试药物
含有多种药物成分的复方葛根素注射剂，每mL注射剂含葛根素10mg、黄芩苷1mg、黄芪水提取物1mg、丹参1mg、弥可保1mg、木糖醇1mg、吡拉西坦1mg、肌氨肽苷1mg、尼莫地平1mg、依那普利1mg、胰岛素1mg、甲钴胺1mg、前列腺素E11mg、牛磺酸10mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
葛根素和多种药物成分的注射剂，每mL注射剂含葛根素10mg、黄芩苷1mg、黄芪水提取物1mg、丹参1mg、弥可保1mg、木糖醇1mg、吡拉西坦1mg、肌氨肽苷1mg、尼莫地平1mg、依那普利1mg、胰岛素1mg、甲钴胺1mg、前列腺素E11mg、氯化钠9mg，批号：20060329，由广州中医药大学新药开发研究中心提供。
葛根素注射剂，购自广州大日生物科技有限公司，批号01050801，每mL注射剂含葛根素50mg。溶血试验时用生理盐水配成每mL注射剂含葛根素10mg作为葛根素注射剂高剂量对照组。
1.2实验动物
Beagle犬24只(体重6～8Kg雌雄各半)，由广东省医药工业研究所Beagle犬养殖场提供，合格证号：医动字0014298。在室温17～20℃，相对湿度60％～68％条件下饲养。
1.3试剂、仪器
氯化钠注射剂，批号：05112102，安徽华源生物药业有限公司生产；注射用水，批号：200508011，广州铁路中心医院生产；22XLJ-II型离心沉淀机，上海医用仪器厂；SPX-150B生化培养箱，上海康华生化仪器制造厂。
2.方法
Beagle犬24只，分别进行溶血实验。采Beagle犬前肢静脉血10ml，用牙签迅速在50mL烧杯中除去纤维蛋白，置于刻度离心管内，加入适量的氯化钠注射剂，以2000转/分钟离心10分钟，弃去上液，再加氯化钠注射剂混匀、离心，如此反复洗涤，至离心后上液呈无色透明为止，将所得红细胞用氯化钠注射剂制备成50％红细胞悬液。取15支试管按表96、表97加入药液量，按表98制备阴性及阳性对照和葛根素注射剂高剂量对照(葛根素注射剂1mL用生理盐水稀释至5mL，含葛根素10mg/mL)，再加氯化钠注射剂至总量5ml，与50％红细胞悬液0.1ml混合，各管摇匀，放置在37℃恒温生化培养箱中，分别于15、30、60分钟，2、3、4、6、24小时观察各管有无溶血及红细胞凝集现象。
受试药物加入方法见表96、97、98，溶血判断方法见表99。
3.结果
本试验考察在葛根素10mg/mL浓度时，牛磺酸对24条Beagle犬红细胞的影响，实验结果均有详细记录，溶血试验均照片记录，记录溶血试验24小时结果，见表100。将全溶血和部分溶血实验结果按溶血计数，计算各组供试液的溶血发生率，用X2检验统计分析，结果见表101。
结果显示；生理盐水组未出现溶血，注射用水组全部溶血；与生理盐水组比较，葛根素注射剂高剂量组出现19例溶血，溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)；与第一次试验葛根素注射剂高剂量的溶血发生概率比较，两次试验葛根素注射剂高剂量组溶血率之间无显著性差异(P＞0.05)，且其中大部分的Beagle犬溶血试验结果均得到重现，说明本溶血实验方法稳定可靠，试验结果可重复。与葛根素注射剂高剂量组比较，含有多种药物成分的复方葛根素注射剂各组均未出现溶血，含有多种药物成分的复方葛根素注射剂溶血发生率与葛根素注射剂高剂量组存在极显著差异(P＜0.01)；葛根素和多种药物成分的注射剂出现18例溶血，葛根素和多种药物成分的注射剂溶血发生率与葛根素注射剂高剂量组无显著差异(P＞0.05)。与生理盐水组比较，含有多种药物成分的复方葛根素注射剂溶血发生率均与生理盐水组无差异(P＝1.00)；葛根素和多种药物成分的注射剂出现18例溶血，葛根素和多种药物成分的注射剂溶血发生率与生理盐水组存在极显著差异(P＜0.01)。与葛根素和多种药物成分的注射剂比较，含有多种药物成分的复方葛根素注射剂各组均未出现溶血，葛根素和多种药物成分的注射剂出现18例溶血，含有多种药物成分的复方葛根素注射剂溶血发生率与葛根素和多种药物成分的注射剂组存在极显著差异(P＜0.01)。含有多种药物成分的复方葛根素注射剂组、葛根素和多种药物成分的注射剂组与葛根素注射剂高剂量组葛根素浓度相同，均为10mg/mL，但含有多种药物成分的复方葛根素注射剂含牛磺酸，而葛根素和多种药物成分的注射剂组、葛根素注射剂高剂量组均不含牛磺酸。以上结果提示：葛根素和多种药物成分的注射剂可引起偶发性溶血，但牛磺酸与葛根素尼莫地平配伍应用所制成的含有多种药物成分的复方葛根素注射剂未见溶血，说明牛磺酸可拮抗由葛根素诱发的溶血不良反应，并可使发生率降低至生理盐水水平。
表96 含有尼莫地平的含有多种药物成分的复方葛根素注射剂加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| 1 | 2 | |
| 含有多种药物成分的复方葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.11010 | 4.9-0.11010 |
表97 葛根素和多种药物成分的注射剂加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | |
| 1 | 2 | |
| 葛根素和多种药物成分的注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | 4.9-0.1100 | 4.9-0.1100 |
表98 阴性、阳性及和葛根素注射剂高剂量对照加入方法及试液配比
| 试剂名称 | 试管编号 | ||
| + | - | 葛根素注射剂高剂量 | |
| 葛根素注射剂(ml)氯化钠注射剂(ml)注射用水(ml)50％红细胞悬液(ml)葛根素浓度(mg/mL)牛磺酸浓度(mg/mL) | --4.90.100 | -4.9-0.100 | 1.03.9-0.1100 |
表99 溶血判断方法
| 记录号 | 判断结论 | 判断指标 |
| 1234 | 全溶血，记录为HL。部分溶血，记录为PHL。无溶血，记录为N。凝集，记录为AG。 | 溶液呈透明红色，管底无细胞残留。溶液呈透明红色，管底有少量红细胞残留。红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。虽不溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不能分散。 |
表100 24只Begal犬溶血试验结果记录
| 狗编号 | 含有多种药物成分的复方葛根素注射剂 | 葛根素和多种药物成分的注射剂 | 葛根素注射剂高剂量 | 注射用水 | 生理盐水 | ||
| 1 | 2 | 1 | 2 | + | - | ||
| 1 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 2 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 3 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 4 | N | N | N | N | PHL | N | HL |
| 5 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 6 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 7 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 8 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 9 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 10 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 11 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 12 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 13 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 14 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 15 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 16 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 17 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 18 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 19 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 20 | N | N | N | N | N | N | HL |
| 21 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 22 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 23 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
| 24 | N | N | PHL | PHL | PHL | N | HL |
表101 24只Begal犬溶血试验结果统计表
| 含有多种药物成分的 | 葛根素和多种药物 | 葛根素注射液高剂量组 | 注射用水 | 生理盐水 | |||
| 1 | 2 | 1 | 2 | + | - | ||
| 溶血数无溶血总数溶血发生率％ | 024240& | 024240& | 061875$ | 061875$ | 1952479.2$ | 024240 | 24024100 |
注：与生理盐水阴性组比较*p＜0.05，$p＜0.01；与葛根素注射剂高剂量组比较：#p＜0.05，&p＜0.01
以上实验结果显示：含有葛根素的注射剂均有可能引发溶血，在加入牛磺酸后，均可消除含葛根素的注射剂的溶血不良反应。
上述试验结果提示：葛根素注射液以及葛根素与其他药物配伍制成的注射剂均有可能引发溶血不良反应，而葛根素注射液以及葛根素与其他药物配伍制成的注射剂在加入牛磺酸后未见溶血反应的发生。因此，在制备含葛根素的注射液时，加入牛磺酸，可消除葛根素引起的溶血不良反应，提高了葛根素注射给药的安全性。
具体实施方式
以下通过具体的实施例进一步详细描述本发明的用途，但本发明不受所述实施例限制。
实施例1：(复方葛根素注射液的制备)
取牛磺酸20g，葛根素10g，加入氯化钠9g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-5.5，过滤，滤液灌封在2、5或10ml的安瓿中，100℃灭菌30min，得到注射液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病等。本品可静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例2：(复方葛根素粉针的制备)
取牛磺酸50g，葛根素1g，灌封在10ml的粉针安瓿中，100℃灭菌30min，得到粉针。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病等。应用时将制得粉针1～5000mg与氯化钠注射液或生理盐水注射液混匀，即可进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例3：(复方葛根素输液的制备)
取牛磺酸4g，葛根素2g，氯化钠9g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整PH至3.0-9.0，过滤，滤液灌封在250ml的盐水玻璃瓶中，100℃灭菌30min，得到输液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病等。应用时可直接进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例4：(含黄芩苷的复方葛根素注射液的制备)
取黄芩苷10g，牛磺酸25g，葛根素5g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-5.5，过滤，滤液灌封在2、5或10ml的安瓿中，100℃灭菌30min，得到注射液。本品可用于辅助治疗外感高热、各种原因引起的肝损伤、冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病等。本品可静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例5：(含黄芩苷的复方葛根素粉针的制备)
取黄芩苷50g，牛磺酸50g，葛根素1g，灌封在10ml的粉针安瓿中，100℃灭菌30min，得到粉针。本品可用于辅助治疗外感高热、各种原因引起的肝损伤、冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病等。应用时将制得粉针1～5000mg与氯化钠注射液或生理盐水注射液混匀，即可进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例6：(含黄芩苷提取物的复方葛根素输液的制备)
取黄芩苷1g，牛磺酸1g，葛根素50g，氯化钠9g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-9.0，过滤，滤液灌封在250ml的盐水玻璃瓶中，100℃灭菌30min，得到输液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病等。应用时可直接进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例7：(含黄芪提取物的复方葛根素注射液的制备)
取黄芪提取物10g，牛磺酸25g，葛根素5g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-5.5，过滤，滤液灌封在2、5或10ml的安瓿中，100℃灭菌30min，得到注射液。可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病等。本品可静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例8：(含黄芪提取物的复方葛根素粉针的制备)
取黄芪提取物50g，牛磺酸50g，葛根素1g，灌封在10ml的粉针安瓿中，100℃灭菌30min，得到粉针。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病等。应用时将制得粉针1～5000mg与氯化钠注射液或生理盐水注射液混匀，即可进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例9：(含黄芪提取物的复方葛根素输液的制备)
取黄芪提取物1g，牛磺酸1g，葛根素50g，氯化钠9g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-9.0，过滤，滤液灌封在250ml的盐水玻璃瓶中，100℃灭菌30min，得到输液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病等。应用时可直接进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例10：(含丹参降香提取物的复方葛根素注射液的制备)
取丹参降香提取物10g，牛磺酸25g，葛根素5g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-5.5，过滤，滤液灌封在2、5或10ml的安瓿中，100℃灭菌30min，得到注射液。本品可用于辅助治疗各种原因引起的肝损伤、冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病等。本品可静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例11：(含丹参降香提取物的复方葛根素粉针的制备)
取丹参降香提取物50g，牛磺酸50g，葛根素1g，灌封在10ml的粉针安瓿中，100℃灭菌30min，得到粉针。本品可用于辅助治疗各种原因引起的肝损伤、冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病等。应用时将制得粉针1～5000mg与氯化钠注射液或生理盐水注射液混匀，即可进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例12：(含丹参降香提取物的复方葛根素输液的制备)
取丹参降香提取物1g，牛磺酸1g，葛根素50g，氯化钠9g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-9.0，过滤，滤液灌封在250ml的盐水玻璃瓶中，100℃灭菌30min，得到输液。本品可用于辅助治疗各种原因引起的肝损伤、冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病等。应用时可直接进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例13：(含弥可保的复方葛根素注射液的制备)
取弥可保(Mecobalamin)10g，牛磺酸25g，葛根素5g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-5.5，过滤，滤液灌封在2、5或10ml的安瓿中，100℃灭菌30min，得到注射液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病等。本品可静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例14：(含弥可保的复方葛根素粉针的制备)
取弥可保(Mecobalamin)50g，牛磺酸50g，葛根素1g，灌封在10ml的粉针安瓿中，100℃灭菌30min，得到粉针。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病等。应用时将制得粉针1～5000mg与氯化钠注射液或生理盐水注射液混匀，即可进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例15：(含弥可保的复方葛根素输液的制备)
取弥可保(Mecobalamin)1g，牛磺酸1g，葛根素50g，氯化钠9g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-9.0，过滤，滤液灌封在250ml的盐水玻璃瓶中，100℃灭菌30min，得到输液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病等。应用时可直接进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例16：(含木糖醇的复方葛根素注射液的制备)
取木糖醇(Xylitol)10g，牛磺酸25g，葛根素5g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-5.5，过滤，滤液灌封在2、5或10ml的安瓿中，100℃灭菌30min，得到注射液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、高血压合并糖尿病等。本品可静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例17：(含木糖醇的复方葛根素粉针的制备)
取木糖醇(Xylitol)50g，牛磺酸50g，葛根素1g，灌封在10ml的粉针安瓿中，100℃灭菌30min，得到粉针。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、高血压合并糖尿病等。应用时将制得粉针1～5000mg与氯化钠注射液或生理盐水注射液混匀，即可进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例18：(含木糖醇的复方葛根素输液的制备)
取木糖醇(Xylitol)1g，牛磺酸1g，葛根素50g，氯化钠9g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-9.0，过滤，滤液灌封在250ml的盐水玻璃瓶中，100℃灭菌30min，得到输液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、高血压合并糖尿病等。应用时可直接进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例19：(含吡拉西坦的复方葛根素注射液的制备)
取吡拉西坦(Piracetam)10g，牛磺酸25g，葛根素5g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-5.5，过滤，滤液灌封在2、5或10ml的安瓿中，100℃灭菌30min，得到注射液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、急性脑梗死等。本品可静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例20：(含吡拉西坦的复方葛根素粉针的制备)
取吡拉西坦(Piracetam)50g，牛磺酸50g，葛根素1g，灌封在10ml的粉针安瓿中，100℃灭菌30min，得到粉针。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、急性脑梗死等。应用时将制得粉针1～5000mg与氯化钠注射液或生理盐水注射液混匀，即可进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例21：(含吡拉西坦的复方葛根素输液的制备)
取吡拉西坦(Piracetam)1g，牛磺酸1g，葛根素50g，氯化钠9g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-9.0，过滤，滤液灌封在250ml的盐水玻璃瓶中，100℃灭菌30min，得到输液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、急性脑梗死等。应用时可直接进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例22：(含肌氨肽苷的复方葛根素注射液的制备)
取肌氨肽苷固形物(由多肽polypeptide、次黄嘌呤hypoxanthine7∶1组成)10g，牛磺酸25g，葛根素5g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-5.5，过滤，滤液灌封在2、5或10ml的安瓿中，100℃灭菌30min，得到注射液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、下肢深部静脉血栓等。本品可静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例23：(含肌氨肽苷的复方葛根素粉针的制备)
取肌氨肽苷固形物(由多肽polypeptide、次黄嘌呤hypoxanthine7∶1组成)50g，牛磺酸50g，葛根素1g，灌封在10ml的粉针安瓿中，100℃灭菌30min，得到粉针。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、下肢深部静脉血栓等。应用时将制得粉针1～5000mg与氯化钠注射液或生理盐水注射液混匀，即可进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例24：(含肌氨肽苷的复方葛根素输液的制备)
取肌氨肽苷固形物(由多肽polypeptide、次黄嘌呤hypoxanthine7∶1组成)1g，牛磺酸1g，葛根素50g，氯化钠9g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-9.0，过滤，滤液灌封在250ml的盐水玻璃瓶中，100℃灭菌30min，得到输液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、下肢深部静脉血栓等。应用时可直接进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例25：(含尼莫地平的复方葛根素注射液的制备)
取尼莫地平(Nimodipine)10g，牛磺酸25g，葛根素5g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-5.5，过滤，滤液灌封在2、5或10ml的安瓿中，100℃灭菌30min，得到注射液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、椎基底动脉供血不足性眩晕等。本品可静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例26：(含尼莫地平的复方葛根素粉针的制备)
取尼莫地平(Nimodipine)50g，牛磺酸50g，葛根素1g，灌封在10ml的粉针安瓿中，100℃灭菌30min，得到粉针。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、椎基底动脉供血不足性眩晕等。应用时将制得粉针1～5000mg与氯化钠注射液或生理盐水注射液混匀，即可进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例27：(含尼莫地平的复方葛根素输液的制备)
取尼莫地平(Nimodipine)1g，牛磺酸1g，葛根素50g，氯化钠9g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-9.0，过滤，滤液灌封在250ml的盐水玻璃瓶中，100℃灭菌30min，得到输液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、椎基底动脉供血不足性眩晕等。应用时可直接进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例28：(含尼莫地平、丹参降香提取物的复方葛根素注射液的制备)
取尼莫地平(Nimodipine)10g，丹参降香提取物10g，牛磺酸25g，葛根素5g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-5.5，过滤，滤液灌封在2、5或10ml的安瓿中，100℃灭菌30min，得到注射液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、椎基底动脉供血不足性眩晕等。本品可静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例29：(含尼莫地平、丹参降香提取物的复方葛根素粉针的制备)
取尼莫地平(Nimodipine)50g，丹参降香提取物1g，牛磺酸50g，葛根素1g，灌封在10ml的粉针安瓿中，100℃灭菌30min，得到粉针。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、椎基底动脉供血不足性眩晕等。应用时将制得粉针1～5000mg与氯化钠注射液或生理盐水注射液混匀，即可进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例30：(含尼莫地平、丹参降香提取物的复方葛根素输液的制备)
取尼莫地平(Nimodipine)1g，丹参降香提取物50g，牛磺酸1g，葛根素50g，氯化钠9g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-9.0，过滤，滤液灌封在250ml的盐水玻璃瓶中，100℃灭菌30min，得到输液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、椎基底动脉供血不足性眩晕等。应用时可直接进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例31：(含木糖醇、弥可保的复方葛根素注射液的制备)
取木糖醇(Xylitol)10g，弥可保(Mecobalamin)10g，牛磺酸25g，葛根素5g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-5.5，过滤，滤液灌封在2、5或10ml的安瓿中，100℃灭菌30min，得到注射液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、椎基底动脉供血不足性眩晕等。本品可静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例32：(含木糖醇、弥可保的复方葛根素粉针的制备)
取木糖醇(Xylitol)50g，弥可保(Mecobalamin)50g，牛磺酸50g，葛根素1g，灌封在10ml的粉针安瓿中，100℃灭菌30min，得到粉针。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、椎基底动脉供血不足性眩晕等。应用时将制得粉针1～5000mg与氯化钠注射液或生理盐水注射液混匀，即可进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例33：(含木糖醇、弥可保的复方葛根素输液的制备)
取木糖醇(Xylitol)1g，弥可保(Mecobalamin)1g，牛磺酸1g，葛根素50g，氯化钠9g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-9.0，过滤，滤液灌封在250ml的盐水玻璃瓶中，100℃灭菌30min，得到输液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、椎基底动脉供血不足性眩晕等。应用时可直接进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例34：(含黄芪提取物、丹参提取物、吡拉西坦的复方葛根素注射液的制备)
取黄芪提取物10g，吡拉西坦(Piracetam)10g，丹参提取物10g，牛磺酸25g，葛根素5g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-5.5，过滤，滤液灌封在2、5或10ml的安瓿中，100℃灭菌30min，得到注射液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、椎基底动脉供血不足性眩晕等。本品可静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例35：(含黄芪提取物、丹参提取物、吡拉西坦的复方葛根素粉针的制备)
取黄芪提取物50g，吡拉西坦(Piracetam)1g，丹参提取物1g，牛磺酸50g，葛根素1g，灌封在10ml的粉针安瓿中，100℃灭菌30min，得到粉针。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、椎基底动脉供血不足性眩晕等。应用时将制得粉针1～5000mg与氯化钠注射液或生理盐水注射液混匀，即可进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例36：(含黄芪提取物、丹参提取物、吡拉西坦的复方葛根素输液的制备)
取黄芪提取物1g，吡拉西坦(Piracetam)50g，丹参提取物50g，牛磺酸1g，葛根素50g，氯化钠9g，加水至1000ml，用1mol/l氢氧化钠溶液调整pH至3.0-9.0，过滤，滤液灌封在250ml的盐水玻璃瓶中，100℃灭菌30min，得到输液。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、椎基底动脉供血不足性眩晕等。应用时可直接进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
实施例37：(含黄芪提取物、丹参提取物、吡拉西坦等多种成分的复方葛根素粉针的制备)
取黄芪提取物50g，黄芩苷1mg、黄芪水提取物1g，丹参1g，弥可保1g，木糖醇1g，吡拉西坦1g，肌氨肽苷1g，尼莫地平1g，依那普利1g，胰岛素1g，甲钴胺1g，前列腺素E11g，牛磺酸50g，葛根素1g，灌封在10ml的粉针安瓿中，100℃灭菌30min，得到粉针。本品可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病、椎基底动脉供血不足性眩晕等。应用时将制得粉针1～5000mg与氯化钠注射液或生理盐水注射液混匀，即可进行静脉注射或肌肉注射，每次1～500mL，一日1～3次，10～20天为一疗程，可连续使用2～3个疗程。
Claims (6)
1、牛磺酸在制备含有葛根素的注射剂中的应用。
2、依据权利要求1所述的注射剂，含有以下重量份药物：牛磺酸1～50份，葛根素1～50份。
3、依据权利要求2所述的注射剂，还含有其它药物组分，该其它药物组分是黄芩苷、黄芪水提取物、丹参、降香、弥可保、木糖醇、吡拉西坦、肌氨肽苷、尼莫地平、依那普利、胰岛素、甲钴胺、前列腺素E1中的一种或二种以上，用量为1～65重量份。
4、依据权利要求3所述的注射剂，所述的其它药物组分是黄芩苷，用量为25～50重量份。
5、依据权利要求2、3或4所述的注射剂，还含有辅料1～50重量份、注射用水1～10000重量份。
6、依据权利要求5所述的注射剂，所述的辅料为氢氧化钠溶液、氯化钠注射液或生理盐水注射液。
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