CN1857252A - 一种冬凌草素结构化制剂组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含冬凌草素的稳定的水包油结构化制剂的组合物，该组合物含：冬凌草素、冬凌草素共溶剂、油性载体、水和表面活性剂；所述的冬凌草素是被溶解在冬凌草素共溶剂中而被掺入油性载体中，冬凌草素和油性载体在水中形成稳定的分散相，分散相的平均粒径≤0.5um。

Description

一种冬凌草素结构化制剂组合物

技术领域

一种含冬凌草素结构化的稳定的水包油组合物，其特征在于该组合物含：冬凌草素、冬凌草素共溶剂、油性载体、水和表面活性剂；所述的冬凌草素是被溶解在冬凌草素共溶剂中而被惨入油性载体中，冬凌草素和油性载体在水中形成稳定的分散相，分散相的平均粒径≤0.5um。

背景技术

冬凌草素(Rubescensin A，Oridonin)是从唇形科(Labtea)香茶菜属(Rabdosia)植物冬凌草(Rabdosia rubescens)中提取分离的一类贝壳杉烯二萜类天然有机化合物。冬凌草又名冰凌草，具有清热解毒、消炎止痛之功效，产于我国河南、河北、山西、四川等地。1972年，河南省医科所在济源县发现了民间用于治疗肝癌、食管癌、胃癌和胰腺癌的草药-冬凌草。1991年卫生部批准将冬凌草干燥叶及地上部分作为中药材，收入部颁中药材标准。目前研究人员从冬凌草中分离获得具有显著生理活性的冬凌草甲素、冬凌草乙素、冬凌草丙素、冬凌草丁素和冬凌草戊素等，其中冬凌草甲素和乙素均具有良好的抗肿瘤疗效

本发明主要是采用先进的分离、纯化技术提取冬凌草药材的有效成分冬凌草素，采用亚微乳技术，将冬凌草甲素溶于脂肪油中经磷脂乳化分散于水相而制成抗肿瘤的新型亚微乳制剂，该新型亚微乳制剂的乳粒粒径在50-500nm之间，可选择性在病变部位聚积，提高药物的靶向性。注射用冬凌草甲素亚微乳制剂具有药物包封率高、安全性及稳定性好、给药方便等特点，更具有用量小、缓释和靶向的作用，具有重要的理论意义与实际应用价值。在研究该产品的同时，解决亚微乳制剂的关键技术，积累中药新型乳剂给药系统新产品的开发经验，丰富中药剂型新品种，为新型乳剂的工业化生产奠定基础。

检索到相关专利冬凌草甲素乳剂及其制备方法(授权公告号CN1222285C)，按照专利中提供的实施例，冬凌草甲素即便是加热到100℃，也无法和该专利中提供的实施例中如大豆油、大豆磷脂、甘油等形成共溶白色乳剂，放置一段时间或离心就有冬凌草甲素沉淀析出；而且该发明中的乳剂粒径有5％左右的粒子直径在1-2微米，静脉给药有可能赌塞细小血管，不符合静脉用乳剂的要求(静脉用乳剂要求所有粒径小于1微米)。该制剂由于粒径太大，不能除菌过滤，增加了生产的困难，高压灭菌时间太长会破坏制剂的稳定性，严重的还可能破乳。

由此可见，以上的专利都没有根本解决冬凌草甲素乳剂的制备和制剂的稳定性问题，本发明经检索文献和研究发现，冬凌草素(指冬凌草有效部位，其中除甲素外还可以含有乙素、丙素和丁素)，乙素、丙素和丁素也是治疗肿瘤的活性成分，尤其是乙素，与甲素配伍使用具有增效减毒的作用，该类提取物与甲素相比还具有生产成本低的优点。冬凌草素要想制成稳定的水包油体系，必须有一定量的油相共溶剂，才能保证其在油相中形成稳定的分散体，制成的O/W乳剂才会稳定。经过筛选，特发明了冬凌草素结构化乳剂的处方及其制备方法。

用本发明的方法制得的结构化乳剂，平均粒径小于0.2微米，所有粒径均小于0.5微米，符合亚微乳制剂的要求。试验证明该制剂不但非常稳定(常温储存1年也不分层)、载药量高，而且生产成本低。

发明内容

本发明的冬凌草素结构化乳剂，包含纳米微乳剂型和亚微乳剂型。本发明乳剂由药物冬凌草素、冬凌草素共溶剂、油性载体、水和表面活性剂组成。

其中冬凌草素共溶剂是指将冬凌草素溶解于乙醇、苯甲酸卞酯、苯甲酸甲酯、苯甲酸乙酯中的一种或几种混合物中。油性载体是指甘油三酯、脂肪酸甘油酯、脂肪酸/醇、脂肪酸乙酯、甾醇及其衍生物、聚氧乙烯脂肪酸酯中的一种或几种；表面活性剂是指磷脂、吐温、司盘、泊洛沙姆(poloxamer)、聚乙二醇及其衍生物中的一种或几种；其中甘油三酯，具体指大豆油、茶油、玉米油、红花油、月见草油、沙棘油、橄榄油、C5-C14的甘油三酯中的一种或几种的混合物；磷脂，包含动物磷脂如蛋黄卵磷脂、植物磷脂比如大豆磷脂、合成磷脂如聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE)以及改性磷脂如羟化磷脂中的一种或几种；脂肪酸/醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸乙酯，其特征在于脂肪酸的碳链为C5-C24，比如油酸、亚油酸、硬脂酸单甘油酯、油酸乙酯、亚油酸乙酯中的一种或几种；聚乙二醇及其衍生物系列，其特征在于包含如聚乙二醇200、400、600、1000、1500、2000、4000、6000、solutolHS15以及聚乙二醇琥珀酸酯中的一种或几种；甾醇及其衍生物中，其特征在于包含胆固醇、胆固醇油酸酯、胆固醇壬酸酯、胆圆醇苯甲酸酯中的一种或几种。

其中所述冬凌草素以药用剂量被加溶到所述的油性载体中，冬凌草素和油性载体在水中形成稳定的分散相；其中分散相的粒径≤500nm；在药剂学上称为微乳和亚微乳。

本发明的冬凌草素注射用亚微乳制剂，其制备方法如下：

a)将冬凌草素溶于乙醇、苯甲酸卞酯、苯甲酸甲酯、苯甲酸乙酯中的一种或几种共溶剂中，加入脂肪酸、生育酚和甘油三酯，于50～90℃高速搅拌制成油相，除去挥发性溶剂，其余组分溶于适量水中，于50～90℃高速搅拌制成水相，油水两相混合于50～90℃高速搅拌制成初乳剂，调节PH值至中性。

b)取上述(a)中初乳剂，注射用水定容至处方量，转移至高压乳匀机中，反复乳化。至乳滴平均粒径≤0.5微米。

C)取上述(b)的乳剂过滤后，充氮气灌装，灭菌既得。

本发明的冬凌草素注射用微乳制剂，其制备方法如下：

a)将冬凌草素用适量乙醇溶解，加入适量吐温80、丙二醇、solutolHS15、聚氧乙烯蓖麻油、甘油三酯的一种或几种的组合物中，于20～60℃充分搅拌，再加入处方量的水，充分搅拌，调节PH值至中性。

b)取上述(a)的微乳制剂用活性炭处理除去热原，再除菌过滤后，充氮气灌装，灭菌既得。

冬凌草素的制备工艺如下：

a)取处方量的冬凌草药材粉碎成粗粉(过20目筛)，分别用6倍量和4倍量95％的乙醇提取6.0小时，滤过；

b)滤液减压回收乙醇，浓缩液至无醇味呈膏状，加水至药材量的2-4倍溶解，滤过，固体用氯仿-丙酮复合溶剂萃取；

c)有机相浓缩至干，硅胶柱色谱分离，以氯仿-丙酮(9∶1，v/v)洗脱并实时检测；收集洗脱液，减压回收洗脱剂，获得白色粉末；结晶即得冬凌草素原料。

本发明冬凌草素中主要含有冬凌草甲素(含量大于50％)，还可以含有冬凌草乙素、丙素、丁素。

具体实施例

实施例一(亚微乳剂型)

组方1：冬凌草素0.01％～1.0％、冬凌草素共溶剂0.01％～5.0％、生育酚0.01％～1.0％、磷脂1.0％～6.0％、甘油三酯5％～30％、甘油1.0％～6.0％、油酸1.0％～6.0％，注射用水添至100ml。

称取冬凌草素100-500mg溶于冬凌草素共溶剂(0-5ml无水乙醇和0-5ml苯甲酸卞酯)0.1-5.0ml中，溶入10-20g甘油三酯和0.1-5g油酸中，于50℃～80℃高速搅拌使混合均匀，制成油相；蒸发除去乙醇；称取蛋黄卵磷脂2.0g、甘油3g，加入处方量的水于50℃～80℃高速搅拌使充分分散，制成水相。油水两相混合，于50℃～80℃高速搅拌制成初乳剂。取初乳剂，注射用水定容至处方量，调节PH值至中性，转移至高压乳匀机中，反复乳化至乳滴平均粒径≤0.5微米，除菌过滤，充氮气灌装，灭菌既得。

组方2：冬凌草素0.01％～1.0％、冬凌草素共溶剂0.01％～5.0％、生育酚0.01％～1.0％、磷脂0.5％～4.0％、泊洛沙姆188 0.5％～3.0％、甘油1.0％～6.0％、甘油三酯5％～20％、油酸1.0％～6.0％，注射用水添至100ml。

称取冬凌草素100-500mg溶于冬凌草素共溶剂(0-5ml无水乙醇和0-5ml苯甲酸卞酯)0.1-5.0ml中，溶入生育酚300mg、10g-20g甘油三酯、0.5g油酸，于50℃～80℃高速搅拌使混合均匀制成油相；称取蛋黄磷脂1.8g、泊洛沙姆188 0.5g、甘油3g、加入处方量的水于50℃～80℃高速搅拌使充分分散，制成水相。油水两相混合，于50℃～80℃高速搅拌制成初乳剂。取初乳剂，注射用水定容至处方量，调节PH值至中性，转移至高压乳匀机中，反复乳化至乳滴平均粒径≤0.5微米，除菌过滤充氮气灌装，灭菌既得。

组方3：冬凌草素0.01％～1.0％、冬凌草素共溶剂0.01％～5.0％、生育酚0.01％～1.0％、磷脂0.5％～3.0％、泊洛沙姆188 0.5％～3.0％、甘油1.0％～6.0％、甘油三酯5％～20％、油酸1.0％～6.0％、，注射用水添至100ml。

称取冬凌草素100mg溶于冬凌草素共溶剂适量无水乙醇中，加入生育酚100mg、大豆油10g、油酸0.5g，于50℃～80℃高速搅拌使混合均匀制成油相；称取蛋黄磷脂0.8g、、泊洛沙姆188 2.0g、甘油3g、加入处方量的水于50℃～80℃高速搅拌使充分分散，制成水相。油水两相混合，于50℃～80℃高速搅拌制成初乳剂。取初乳剂，注射用水定容至处方量，调节PH值至中性，转移至高压乳匀机中，反复乳化至乳滴平均粒径≤0.5微米，除菌过滤充氮气灌装，灭菌既得。

组方4：冬凌草素0.01％～1.0％、冬凌草素共溶剂0.01％～5.0％、生育酚0.01％～1.0％、磷脂0.5％～3.0％、泊洛沙姆188 0.5％～3.0％、甘油1.0％～6.0％、甘油三酯5％～20％、油酸1.0％～6.0％、，注射用水添至100ml。

称取冬凌草素200mg溶于冬凌草素共溶剂适量无水乙醇中，加入生育酚200mg、10g甘油三酯(大豆油5g，红花油5g)、油酸0.5g，于50℃～80℃高速搅拌使混合均匀制成油相；称取蛋黄磷脂0.8g、、泊洛沙姆188 2.0g、甘油3g、加入处方量的水于50℃～80℃高速搅拌使充分分散，制成水相。油水两相混合，于50℃～80℃高速搅拌制成初乳剂。取初乳剂，注射用水定容至处方量，调节PH值至中性，转移至高压乳匀机中，反复乳化至乳滴平均粒径≤0.5微米，除菌过滤充氮气灌装，灭菌既得。

组方5：冬凌草素0.01％～1.0％、冬凌草素共溶剂0.01％～5.0％、生育酚0.01％～1.0％、磷脂0.5％～4.0％、泊洛沙姆1880.5％～3.0％、甘油1.0％～6.0％、甘油三酯5％～20％、油酸1.0％～6.0％、，注射用水添至100ml。

称取冬凌草素300mg溶于冬凌草素共溶剂适量无水乙醇中，加入生育酚300mg、10g甘油三酯(中链油5g，沙棘油5g)、油酸0.5g，于50℃～80℃高速搅拌使混合均匀制成油相；称取蛋黄磷脂1.2g、、泊洛沙姆188 2.0g、甘油3g、加入处方量的水于50℃～80℃高速搅拌使充分分散，制成水相。油水两相混合，于50℃～80℃高速搅拌制成初乳剂。取初乳剂，注射用水定容至处方量，调节PH值至中性，转移至高压乳匀机中，反复乳化至乳滴平均粒径≤0.5微米，除菌过滤充氮气灌装，灭菌既得。

组方6：冬凌草素0.01％～1.0％、冬凌草素共溶剂0.01％～5.0％、生育酚0.01％～1.0％、磷脂0.5％～4.0％、泊洛沙姆188 0.5％～3.0％、甘油1.0％～6.0％、甘油三酯5％～20％、油酸1.0％～6.0％、，注射用水添至100ml。

称取冬凌草素500mg溶于冬凌草素共溶剂适量无水乙醇中，加入生育酚500mg、10g甘油三酯(中链油5g，月见草油5g)、油酸0.5g，于50℃～80℃高速搅拌使混合均匀制成油相；称取蛋黄磷脂1.2g、、泊洛沙姆188 2.0g、甘油3g、加入处方量的水于50℃～80℃高速搅拌使充分分散，制成水相。油水两相混合，于50℃～80℃高速搅拌制成初乳剂。取初乳剂，注射用水定容至处方量，调节PH值至中性，转移至高压乳匀机中，反复乳化至乳滴平均粒径≤0.5微米，除菌过滤充氮气灌装，灭菌既得。

组方7：冬凌草素0.01％～1.0％、冬凌草素共溶剂0.01％～5.0％、生育酚0.01％～1.0％、磷脂0.5％～4.0％、泊洛沙姆188 0.5％～3.0％、甘油1.0％～6.0％、甘油三酯5％～20％、油酸1.0％～6.0％、，注射用水添至100ml。

称取冬凌草素500mg溶于冬凌草素共溶剂适量无水乙醇中，加入生育酚500mg、10g甘油三酯(中链油5g，茶油5g)、油酸0.5g，于50℃～80℃高速搅拌使混合均匀制成油相；称取蛋黄磷脂1.2g、泊洛沙姆188 2.0g、甘油3g、加入处方量的水于50℃～80℃高速搅拌使充分分散，制成水相。油水两相混合，于50℃～80℃高速搅拌制成初乳剂。取初乳剂，注射用水定容至处方量，调节PH值至中性，转移至高压乳匀机中，反复乳化至乳滴平均粒径≤0.5微米，除菌过滤充氮气灌装，灭菌既得。

实施例二(纳米微乳剂型)

组方1：冬凌草素0.01％～2.0％、冬凌草素共溶剂0.01％～5.0％、油酸乙酯0.01％～2.0％、solutolHS15 0.2％～5.0％、注射用水添至100ml。

称取冬凌草素100-500mg溶于冬凌草素共溶剂(0-5ml无水乙醇和0-5ml苯甲酸卞酯)0.1-5.0ml中，加入油酸乙酯0.1-1.0g、solutolHS15 1.5g及适量水于20℃-80℃搅拌使混合均匀，加注射用水定容至100ml，于20℃-80℃搅拌制成微乳。转移至高压乳匀机中，反复乳化至乳滴平均粒径≤0.5微米，调节PH值为5.0～7.0，除菌过滤充氮气灌装，灭菌既得。

组方2：冬凌草素0.01％～2.0％、冬凌草素共溶剂0.01％～5.0％、泊洛沙姆188 0.2％～5.0％、亚油酸乙酯0.01％～8％、吐温80 0.01％～2.0％，注射用水添至100ml。

称取冬凌草素100-500mg溶于冬凌草素共溶剂(0-5ml无水乙醇和0-5ml苯甲酸卞酯)0.1-5.0ml中，加入吐温80 0.01-0.5g、油酸乙酯0.5g、泊洛沙姆188 0.5g及适量水中，于20℃-80℃搅拌使混合均匀，加入适量注射用水容至100ml，调节PH值为5.0～7.0，于20℃-80℃搅拌制成微乳。转移至高压乳匀机中，反复乳化至乳滴平均粒径≤0.5微米，除菌过滤充氮气灌装，灭菌既得。

组方3：冬凌草素0.01％～2.0％、冬凌草素共溶剂0.01％～5.0％、聚氧乙烯脂肪酸酯0.01％～5.0％、泊洛沙姆188 0.2％～10.0％、羟丙基β～环糊精0.1％～10.0％、注射用水添至100ml。

称取冬凌草素100-500mg溶于冬凌草素共溶剂(0-5ml无水乙醇和0-5ml苯甲酸卞酯)0.1-5.0ml中，加入聚氧乙烯蓖麻油、泊洛沙姆188 0.5-1.2g及适量水中，于20℃-80℃搅拌使混合均匀；羟丙基β～环糊精0.1-0.5g溶于适量水中，两者混合定容至100ml，调节PH值为5.0～7.0，于20℃-80℃高速搅拌制成微乳。除菌过滤充氮气灌装，灭菌既得。

实施例三(血管刺激性试验)

试验药物：冬凌草素亚微乳剂，北京金方华医药科技有限公司提供。冬凌草素粉针，自制，制成羟丙基β-环糊精包和物，试验时用0.9％氯化钠注射液配制成5％溶液。

试验动物：健康家兔，体重2.3～2.4kg。

试验方法：取健康家兔10只，雌雄各半。按体重及性别分为0.9％氯化钠注射液对照组、冬凌草素粉针组和冬凌草素亚微乳剂乳剂组每组2只，于家兔左耳耳缘按临床给药浓度静脉滴注10ml/kg，滴注速度1ml/分，每日1次，连续7日。对照组同法静脉滴注0.9％氯化钠注射液。除每次给药时及给药后观察给药局部表现外，于末次静脉滴注后剪下药侧耳廓，常规固定后，在距静脉滴注入针近心端1cm处，每隔1cm切取0.5cm宽标本，共取3块标本。切片染色，进行镜下病理观察，结果见下表：

                      冬凌草素血管刺激性试验

项目	兔耳廓血管扩张	红肿	有无炎细胞浸润
				0.9％氯化钠注射液对照组	-	-	-
冬凌草素粉针	++	++	+
				冬凌草素亚微乳剂(组方3)	-	-	-
冬凌草素亚微乳剂(组方4)	-	-	-
				冬凌草素亚微乳剂(组方5)	-	-	-

备注：“++”严重、“+”少许、“-”无

实施例四(乳粒激光粒度测试结果)

结论：

其中平均粒经为：0.1385微米

95％粒经累积值为：0.2015微米

所有粒经均小于0.22微米，可以实现除菌过滤，大生产中避免了因为高压灭菌影响制剂的稳定性。

说明书附图：为乳粒激光粒度测试结果。

Claims (10)

1、一种含冬凌草素的稳定的水包油结构化乳剂组合物，其特征在于该组合物含：冬凌草素、冬凌草素共溶剂、油性载体、水和表面活性剂；所述的冬凌草素是被溶解在冬凌草素共溶剂中而被惨入油性载体中，所述冬凌草素和油性载体在水中形成稳定的分散相，分散相的平均粒径≤0.5um。

2、根据权利要求1中的油性载体是指甘油三酯、脂肪酸甘油酯、脂肪酸/醇、脂肪酸乙酯、甾醇及其衍生物、聚氧乙烯脂肪酸酯中的一种或几种；其中甘油三酯是指大豆油、茶油、玉米油、红花油、月见草油、沙棘油、橄榄油、C5-C14的甘油三酯中的一种或几种的混合物；脂肪酸碳链为C5-C24。

3、根据权利要求1中的表面活性剂，其特征在于取自磷脂、吐温、司盘、泊洛沙姆(poloxamer)、solutolHS15、聚乙二醇及其衍生物中的一种或几种；其中磷脂，取自蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、合成磷脂以及改性磷脂中的一种。

4、根据权利要求1中的表面活性剂，其特征在于进一步包含抗氧化剂，如α-生育酚、抗坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)中的一种或几种。

5、根据权利要求1中的表面活性剂，其特征在于进一步包含甘油、丙二醇、乙醇、羟丙基β～环糊精中的一种或几种。

6、根据权利要求1中的组合物，其中冬凌草素的用量以重量计为0.01％-1％。

7、根据权利要求1中的组合物，其中油性载体的用量以重量计为0.1％-30％。

8、根据权利要求1中的组合物，其中表面活性剂的用量以重量计为0.1％-10％。

9、根据权利要求1中的共溶剂，其特征在于选自乙醇、乙酸乙酯、苯甲酸卞酯、苯甲酸甲酯、苯甲酸乙酯中的一种或两种以上的组合物。

10、根据权利要求1中的冬凌草素，其中冬凌草甲素含量大于50％，还可以含有冬凌草乙素、冬凌草丙素、冬凌草丁素。

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