CN101536980B - 冬凌草甲素制剂及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明总的涉及二萜类药物制剂及其制备方法和用途。更具体地，本发明公开了一种药物制剂，其中包含二萜类药物如冬凌草甲素和两亲性表面活性物质，以及任选地其它药学可接受的载体和/或赋型剂。本发明另外涉及所述药物制剂的制备方法及其在疾病治疗中的用途。

Description

冬凌草甲素制剂及其制备方法和用途

技术领域

本发明总的涉及二萜类药物制剂及其制备方法和用途。更具体地，本发明公开了一种药物制剂，其中包含二萜类药物和两亲性表面活性物质，以及任选地其它药学可接受的载体和/或赋型剂。本发明另外涉及所述药物制剂的制备方法及其在疾病治疗中的用途。

背景技术

冬凌草甲素是从唇形科香茶菜属植物中分离出的一种贝壳杉烯二萜类天然有机化合物，具有较强的抗肿瘤活性，对多种转移性肿瘤有效，临床上主要用于肝癌、食管癌、胰腺癌等的治疗(冬凌草甲素的药学研究进展，张典瑞，任天池，中国药学杂志，2003，38(11)：817-820)。新的研究发现，冬凌草甲素对治疗急性白血病也有较好的效果(一种治疗M2型急性髓性白血病的药物及其注射液的制备，中国专利申请200410016890.1)。

冬凌草甲素为二萜类成分，在水溶液中溶解度以及溶出效率均较低，难以达到抗癌作用需要的浓度。因此，在本领域中一般采用加入助溶剂的方法提高冬凌草甲素在水中的溶解度，如加入乙醇、丙二醇(一种治疗M2型急性髓性白血病的药物及其注射液的制备，中国专利申请200410016890.1)、二甲亚砜(冬凌草甲素注射液及其制备工艺，中国专利申请200410061309.8)。尽管如此制备的制剂疗效有所提高，但是，注射有机溶剂引发的炎症和疼痛等血管刺激性反应，使患者难以耐受，同时也限制了使用剂量。为了解决这个问题，有研究采用乳剂(冬凌草甲素乳剂及其制备方法，中国专利CN1222285C)，或者脂质载体(冬凌草甲素微粒给药制剂及其制备方法，中国专利申请，200510046253.3)制备冬凌草甲素制剂。这些载体避免了用刺激性溶剂进行增溶，但是，这些载体普遍存在载药效率偏低的问题，需要大量的具有表面活性作用的辅料对冬凌草甲素进行分散、乳化或稳定.同时，其中使用大量的油脂和脂质成分在制备、灭菌和储存过程中容易因氧化、水解等产生有害物质，特别是溶血磷脂，显著影响到注射制剂的安全性。因此，制备一种载药量高并具有良好稳定性和安全性的药物制剂非常必要。

发明内容

本发明提供了一种二萜类药物制剂，其中包含二萜类药物和两亲性表面活性物质，以及任选地其它药学上可接受的载体和/或赋型剂。在一个实施方式中，所述药物制剂是二萜类药物与表面活性物质自组装形成的胶束样自组装结构纳米粒子制剂。在又一个实施方式中，所述药物制剂为冻干粉形式，其可以在临用前通过加入水或其它水性溶剂而制备成胶束样自组装粒子悬浮制剂的形式以供使用。

本发明进一步涉及一种二萜类药物制剂，其可以是注射剂的形式，其中包含二萜类药物和两亲性表面活性物质，其中所述二萜类药物以分子或微晶状态存在于胶束样自组装结构纳米粒子。

本发明另一方面涉及一种制备二萜类药物制剂的方法，其中包括将二萜类药物与表面活性物质自组装形成胶束样自组装结构的步骤。在一些实施方案中，其特别的包括将二萜类药物、表面活性物质分散于允许其分散的分散介质中的步骤。在一些实施方案中，其还包括除去分散介质的步骤。

本发明另外涉及一种预防或治疗疾病、尤其是癌症的方法，其包括对有此需要的患者施用本发明的二萜类药物制剂。

本发明还涉及本发明所述药物制剂在制备用于预防或治疗患者中疾病、尤其是癌症的药物中的用途。

附图说明

图1图示说明了HPLC法测定冬凌草甲素浓度的典型图谱。

具体实施方式

在本发明中，“二萜类药物”指的是在水性溶剂、例如水中的溶解度较低或不溶的药物活性剂，其中具有二萜基本结构，其实例有例如冬凌草总二萜、香茶菜总二萜、冬凌草甲素、毛萼乙素等，及其任何组合。

本发明所用术语“胶束样自组装结构”、“胶束样粒子”、“胶束样结构”、“胶束样药物”或“自组装结构”是指，由表面活性物质，并任选地结合药物分子，在介质中的界面上自发定向排列形成的分散体系。表面活性物质的表面活性源于其分子的两亲结构，亲水基团使分子有进入水相的趋向，而憎水基团则竭力阻止其在水中溶解而从水的内部向外迁移，有逃逸水相的倾向，而这两种倾向平衡的结果是使表面活性剂在界面富集。当表面吸附达到饱和后，在憎水基团的作用下，表面活性物质分子在溶液内部自聚，即疏水基在一起形成内核，亲水基朝外与水接触，形成最简单的胶束样自组装结构。

关于胶束形成和胶束表面活性物质的类型，在本领域中有众多的教导。简单的说，当两亲性分子(包括表面活性物质)遇到选择性溶剂(即仅能溶解亲水段或疏水段中的一种，而不能溶解另一种)时，便可能形成胶束。通常可使用的选择性溶剂有很多种，包括例如水。在本发明中，术语“装载于胶束样自组装结构中”和“与表面活性物质自组装形成胶束样自组装结构”可互换使用，是指二萜类药物例如冬凌草甲素与表面活性物质相互作用，胶束颗粒，其中药物分子被包裹在二者所形成的颗粒内，形成稳定的载药胶束样结构。虽然不希望本发明局限于一种特定的理论，但推测本发明中的二萜类药物胶束样自组装结构不是常规意义上的胶束，即并非二萜类药物包封在表面活性物质形成的颗粒结构内部，而是该二萜类药物分子与表面活性物质分子相互作用，再共同自组装形成较大的颗粒。因此，与单纯表面活性物质形成的胶束颗粒较小的内径相比，本发明的二萜类药物与表面活性物质组合后自组装形成的胶束样自组装结构的粒径一般较大，一般在100nm以上，例如100-500nm，优选150-400nm，更优选200-350nm。

作为药物活性成分的二萜类药物如冬凌草甲素可以从多种合适的来源获得，包括例如从唇形科香茶菜属植物中采用常规方法分离，或者可以通过商业途径购得。

本发明所用术语“有机溶剂”是指，能溶解本发明水难溶性或水不溶性药物活性剂的有机物质，包括例如乙醇、丙二醇、氯仿、丙酮、戊烷等，或者其任意混合物。本发明所用术语“有机溶液”是指含有所述有机溶剂的溶液。

本发明所用术语“注射剂”是指用于注射给人体或其它哺乳动物的药剂或其使用前用于储存的形式，其包含但不限于：溶液、混悬液、乳剂、粉末形式、冻干粉针形式、溶媒结晶形式、和浓有机溶液形式等。

本发明的胶束样自组装结构药物制剂可以由合适的、能稳定胶束样结构的两亲性表面活性物质制成，主要分为天然高分子和合成高分子两大类。前者主要是脂类和蛋白，包括例如卵磷脂、胆盐、白蛋白、脂蛋白等；后者主要有聚酯类，例如聚山梨醇酯、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯硬脂酸酯、脱水山梨糖醇三油酸酯、胆酸盐等。在该两亲性表面活性物质中，亲水部分可以采用例如PEG、PEO或PVP，疏水部分可以是聚内酯类如PLA、PDLLA、PLLA、PLG、PLGA、PCL、聚氨基酸(例如P(His)，P(Glu)，P(Asp)，P(Lys)，P(PBLA)等)。或者，该两亲性表面活性物质中，亲水部分可以是羟丙纤维素、支链淀粉、壳聚糖、海藻酸盐、凝胶多糖、葡聚糖、肝素等，而疏水部分可以是二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、磷脂酰乙醇胺、胆固醇、胆酸、脱氧胆酸、石胆酸、酪蛋白、清蛋白等。

应当指出，在本发明中，两亲性表面活性物质既可单独使用，也可以混合物形式使用。本领域普通技术人员可以容易地确定合适的组合和用量比例。

可以根据其亲水亲油性来选择适用于本发明的胶束样自组装结构药物制剂中的表面活性物质。优选地，其亲水亲油平衡值(hydrophileand lipophile balance，HLB)在6-40之间，优选10-35，尤其优选15-30，例如15-25。

在一些实施方案中，所述表面活性物质选自离子型、非离子型表面活性物质及其混合物。优选的，所述表面活性物质选自以下一种或多种：白蛋白、酪蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、山梨醇脂肪酸酯(吐温)、脱水山梨醇脂肪酸酯(司盘)、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物(普朗尼克)、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯氢化蓖麻油和磷脂分子，及其任意混合物。

在本发明的胶束样药物制剂中，冬凌草甲素和表面活性物质可以是任何合适的用量和配比，条件是允许两者在水溶液中组装形成胶束样自组装结构的形式，或者是可以在溶于适当的水性溶剂后自组装形成胶束样自组装结构的形式。

在一个实施方案中，本发明的胶束样药物制剂是注射剂的形式。注射剂是指使用前用于储存的形式，其在加入注射用溶剂后，药物以分子或微晶状态装载于表面活性物质形成的胶束样自组装结构中。所述注射剂包含但不限于：粉末形式、冻干粉针形式、溶媒结晶形式和浓有机溶液形式等。

在本发明的一个实施方案中，该注射剂不含有机溶剂。在本发明的另一个实施方案中，该注射剂中仅含有较低浓度的有机溶剂。

在本发明的二萜类药物注射剂中，二萜类药物的浓度为0.01-10mg/ml，优选0.1-5mg/ml，更优选0.5-2mg/ml，表面活性物质浓度为0.05-500mg/ml，优选0.1-100mg/ml，更优选1-10mg/ml。

在本发明的二萜类药物制剂中，胶束样自组装结构的粒径可以是任何合适大小。优选地，其平均粒径为100-500nm，更优选100-300nm，尤其优选150-250nm。

在本发明中，可以通过本领域已知的胶束载药工艺将药物活性剂如冬凌草甲素装载到胶束中。适用的工艺包括例如物理包埋法、油/水乳化法、溶剂挥发法、共溶剂挥发法、冻干法、化学缀合法、静电作用法等。因此，本发明的冬凌草药物制剂可以制成溶液形式，或者是冻干形式。

在本发明的胶束样药物制剂中，除了二萜类药物以及表面活性物质之外，还可以可选地包含一种或多种其它的药物活性剂和/或一种或多种其它的药学可接受载体和/或赋型剂，包括例如一种或多种缓冲剂、稳定剂和/或张度剂。如果制剂为溶液形式，则可还存在溶剂。溶剂通常选自能对哺乳动物安全地胃肠外给药的溶剂类型，包括例如水、甘油、丙二醇、乙醇等及其各种可能的组合。一般地，安全溶剂是无毒的含水溶剂。

在本发明中，所述其它的药物活性剂可以是例如肿瘤治疗剂、细胞因子、免疫增强剂等，只要其不干扰二萜类药物的活性以及制剂的稳定性即可。普通技术人员十分清楚如何选择这样的药物活性剂，这在其能力范围内。

本发明的二萜类药物制剂中还可以可选地包含稳定剂。术语“稳定剂”是指能增强药物制剂中活性成分(如药物活性成分与表面活性物质形成的胶束样粒子)的化学和物理稳定性的药学上可接受的赋型剂。合适的稳定剂包括例如多元醇(例如甘露糖醇、聚乙二醇、聚丙二醇以及糖类如蔗糖、果糖、乳糖等)、氨基酸等或者其各种组合。优选地，所述稳定剂在本发明的胶束样药物制剂中的含量为0.5-50wt/wt％，更优选为2-40wt/wt％，例如5-35wt/wt％、8-30wt/wt％、10-25wt/wt％、10-20wt/wt％等。

本发明的胶束样药物制剂中还可选地包含缓冲剂。在本发明中，术语“缓冲剂”是指任何能将溶液的pH值保持在所需pH范围内的药学上可接受的赋型剂，包括例如乙酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、磷酸盐、氨基酸等或者其任意组合。普通技术人员可以常规地确定本发明的二萜类药物制剂中缓冲剂的合适含量，例如可以是制剂的约0.01-5.0wt/vol，优选约0.05-3.0wt/vol％，更优选约0.1-2.0wt/vol％。

本发明的二萜类药物制剂优选地被配制成易于施用和均匀给药的单位剂型。“单位剂型”指适于待治疗患者的治疗剂的物理离散单位。然而，应当理解，根据本发明的二萜类药物制剂的每日总剂量将由主治医生在合理的医学判断范围内进行确定。

本发明的二萜类药物制剂还可以任选地与其它药物活性剂联用。所述其他药物活性剂包括例如抗肿瘤剂、免疫增强剂等。

可以将本发明的二萜类药物制剂以任何合适的有效量施用给患者。治疗任何特定患者所需的实际量将取决于多种因素，包括待治疗的病症及其严重程度；所施用的特定药物剂型；患者的年龄、体重、总体健康、性别和饮食；施用方式；施用时间；施用途径；和冬凌草甲素的代谢速度；治疗持续时间；与所施用的特定化合物相组合或同时使用的任何药物；以及医学领域中熟知的其它这样的因素。

本发明的二萜类药物制剂可以任何合适的途径施用，包括例如胃肠外注射如静脉注射、肌内注射、腹膜内注射，以及口服、喷雾等方式。医务人员可以根据已知的多个参数确定适合于患者的合适给药频率、给药途径和给药量等。

本发明的二萜类药物制剂可以通过多种方法制备，包括例如物理包裹法如自组装溶剂蒸发法、透析法、乳化法，以及化学结合法。因此，本发明还提供了一种制备二萜类药物制剂的方法，其中包括将二萜类药物与两亲性表面活性物质复合自组装形成胶束样自组装结构的步骤。在一个实施方案中，所述两亲性表面活性物质是两亲性聚合物。

本发明提供了另一种制备本发明的二萜类药物制剂的方法，其包括将二萜类药物、表面活性物质分散于允许其分散的分散介质中的步骤。所述分散介质是例如水、有机溶剂等。在一些实施方案中，其还包括除去分散介质的步骤。

在一个优选的实施方案中，根据本发明的二萜类药物制剂的制备方法包括以下步骤：

使用含二萜类药物的有机溶液、含表面活性物质的水溶液制备水包油乳剂；

除去有机溶剂，将二萜类药物与表面活性物质自组装形成胶束样自组装结构，制成二萜类药物注射剂。

任选地，在上述方法中，在二萜类药物的有机溶液中还可以加入部分表面活性物质，以便增强该二萜类药物的溶解。

在一些实施方案中，所述有机溶剂可以选自与水不混溶或低混溶的有机溶剂或者其混合物，优选选自以下的一种或多种：氯仿、乙醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和其混合物。

在上述方法中，可以通过任何常规的方法除去有机溶剂。例如，在一些实施方案中，可以采用通氮气或减压蒸发的方法除去有机溶剂。在现有技术中，这方面有众多的文献可供参考。

本发明的胶束样二萜类药物制剂优选地为注射剂的形式。优选地，其中二萜类药物的浓度为0.01-50mg/ml，优选0.1-5mg/ml，更优选0.5-2mg/ml；表面活性物质浓度为0.05-500mg/ml，优选0.1-100mg/ml，更优选1-10mg/ml。

特别的，在上述制备二萜类药物注射剂的方法中，所述表面活性物质选自离子型、非离子型表面活性物质及其混合物。优选的，所述表面活性物质选自以下一种或多种：磺酸盐、季铵化合物、卵磷脂、脂肪酸酯、多元醇、醚类、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物等。更优选的，所述表面活性物质选自以下一种或多种：白蛋白、酪蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、山梨醇脂肪酸酯(吐温)、脱水山梨醇脂肪酸酯(司盘)、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物(普朗尼克)、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯氢化蓖麻油和磷脂分子，及其任意混合物。。

特别的，本发明提供了一种制备所述二萜类药物注射剂的方法，其包括以下步骤：

将二萜类药物溶解于与水不混溶或低混溶的有机溶剂中，例如氯仿、乙醚，二氯甲烷，乙酸乙酯等，制备冬凌草甲素的高浓度有机溶液，作为油相。另外，也可任选地同时在油相中加入部分表面活性物质，如脱水聚山梨醇酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油等，以提高二萜类药物在油相中的浓度。将起主要乳化作用的表面活性物质例如普朗尼克，聚氧乙烯氢化蓖麻油等溶解在水中，作为水相。将油、水两相混合，制备为水包油乳剂。在加热条件下，采用通氮气或减压蒸发的方式，调节气流速度和加热温度，快速除去有机溶剂，使二萜类药物快速结晶析出，并被表面活性物质分子包裹和稳定，形成载药胶束样结构，制成均匀、稳定的二萜类药物静脉注射剂。其中，载药胶束样结构的平均粒径为100-200nm，可以经0.22um滤膜无菌过滤。以生理盐水为介质，37℃进行的体外释放度实验研究表明，在1∶100稀释下，所制备的二萜类胶束注射剂在2小时内快速释放约70％，而后缓慢释放，至60小时释放完全。将缓慢释放曲线进行Higuchi拟合，相关度为0.9899，说明缓释部分符合被动扩散。

在本发明的另一个方面中，提供了另一种制备根据本发明的二萜类药物注射剂的方法，其包括以下步骤：

将二萜类药物、表面活性物质溶解于允许其溶解的溶剂中，得到溶液；

加入注射用溶剂，将二萜类药物与表面活性物质自组装形成胶束样结构，制成二萜类药物注射剂。

特别的，在上述制备根据本发明的二萜类药物注射剂的方法中，其中二萜类药物与表面活性物质比例为1∶1-1∶100w/w，优选1∶5-1∶80w/w，更优选1∶20-1∶50w/w；其中所加入的二萜类药物在允许其溶解的溶剂中浓度为0.5-500mg/ml，优选5-200mg/ml，更优选10-100mg/ml；所加入的表面活性物质在允许其溶解的溶剂中浓度为0.01-20g/ml，优选0.1-10g/ml，更优选0.5-2g/ml。

特别的，在上述制备根据本发明的二萜类药物注射剂的方法中，所述表面活性物质选自离子型、非离子型表面活性物质及其混合物。优选的，所述表面活性物质选自以下一种或多种：磺酸盐、季铵化合物、卵磷脂、脂肪酸酯、多元醇、醚类、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物等。更优选的，所述表面活性物质选自以下一种或多种：白蛋白、酪蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、山梨醇脂肪酸酯(吐温)、脱水山梨醇脂肪酸酯(司盘)、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物(普朗尼克)、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯氢化蓖麻油和磷脂分子，及其任意混合物。

特别的，在上述制备根据本发明的二萜类药物注射剂的方法中，所述允许其溶解的溶剂选自以下一种或多种：乙醇、丙二醇、叔丁醇、丙酮、二甲亚砜、水和其混合物；优选的，选自乙醇、丙二醇和其混合物。

特别的，本发明提供了一种制备根据本发明的二萜类药物注射剂的方法：将表面活性物质溶解在乙醇等允许注射的有机溶剂中，按照适宜比例(1∶5-1∶100，w/w)加入二萜类药物，超声溶解，得到药物-表面活性物质浓溶液，其中二萜类药物的浓度为5-50mg/ml。临用前，用水或生理盐水等注射用溶剂稀释到所需浓度，得到二萜类药物注射剂。其中，载药胶束样结构的平均粒径为100-200nm，可以经0.22um滤膜无菌过滤。二萜类药物的浓有机溶液中不含水，因此可以避免药物在储存过程中析出，具有更好的稳定性。临用前加入水或生理盐水稀释后，可将有机溶剂的浓度降低到注射许可的范围内，提高使用的安全性。

在本发明的另一个方面中，提供了另一种制备根据本发明的二萜类药物注射剂的方法，其包括以下步骤：

将二萜类药物、表面活性物质溶解于允许其溶解的溶剂中，得到溶液；

将溶液干燥，得到二萜类药物注射剂粉末；

加入注射用溶剂，使二萜类药物与表面活性物质自组装形成胶束样自组装结构，制成二萜类药物注射剂。

特别的，在上述制备根据本发明的二萜类药物注射剂的方法中，二萜类药物与表面活性物质的比例为1∶0.01-1∶100w/w，优选1∶0.1-1∶10w/w，更优选1∶0.5-1∶5w/w；其中所加入的二萜类药物在允许其溶解的溶剂中浓度为0.5-500mg/ml，优选5-200mg/ml，更优选10-100mg/ml；所加入的表面活性物质在允许其溶解的溶剂中浓度为0.01-20g/ml，优选0.1-10g/ml，更优选0.5-2g/ml。

特别的，在上述制备根据本发明的二萜类药物注射剂的方法中，所述表面活性物质选自离子型、非离子型表面活性物质及其混合物。优选的，所述表面活性物质选自以下一种或多种：磺酸盐、季铵化合物、卵磷脂、脂肪酸酯、多元醇、醚类、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物等。更优选的，所述表面活性物质选自以下一种或多种：白蛋白、酪蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、山梨醇脂肪酸酯(吐温)、脱水山梨醇脂肪酸酯(司盘)、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物(普朗尼克)、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯氢化蓖麻油和磷脂分子，及其任意混合物。

特别的，在上述制备根据本发明的二萜类药物注射剂的方法中，所述允许其溶解的溶剂选自以下一种或多种：乙醇、丙二醇、叔丁醇、丙酮、二甲亚砜、水和其混合物；优选的，选自叔丁醇、水和其混合物。

在干燥溶液制备注射剂粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，最优选冷冻干燥，当然也可采用本领域普通技术人员熟知的任何其它合适方法。

优选的，在上述制备根据本发明的二萜类药物注射剂的方法中，另外在溶液中加入多羟基化合物，所述多羟基化合物选自以下一种或多种：甘露醇、蔗糖、聚乙二醇和海藻糖。

特别的，本发明提供了一种根据本发明的二萜类药物注射剂的制备方法：在无菌条件下，将二萜类药物和表面活性物质按照适宜比例(1∶5-1∶100，w/w)溶解在叔丁醇或者叔丁醇和水的混合溶剂中，得到澄明溶液。为了得到良好的冻干粉针形态，也可在溶液中加入多羟基化合物，如甘露醇，蔗糖，海藻糖。将溶液冷冻干燥，得到二萜类药物无菌冻干粉针。临用前，加入水或生理盐水等注射用溶剂充分水合，将二萜类药物装载到胶束样结构中，成为澄明或半透明略带浅蓝色的二萜类药物注射剂。其中，载药胶束样粒子的平均粒径为300-500nm。

本发明适用于任何合适的二萜类药物，包括例如冬凌草甲素、冬凌草总二萜、香茶菜总二萜、毛萼乙素等，或者其任意混合物。在一个优选的实施方案中，所述二萜类药物是冬凌草总二萜。在另一个优选实施方案中，所述二萜类药物是冬凌草甲素。

本发明方法的优点在于简便，适合工业化大生产。在使用叔丁醇或叔丁醇-水体系作为溶剂时，由于叔丁醇在冷冻过程中形成针状结晶，产生很多孔道，有利于溶剂的升华，因此，和单纯用水作溶剂相比，可大大缩短冻干时间。同时，得到的冻干粉针疏松，水合过程中具有更大的表面积，有利于得到均匀的载药胶束样溶液。另外，所制得的固体冻干粉针是固体制剂形式，临用前才稀释，稳定性好，便于长期保存。也便于通过改变加入的水合溶剂的体积，调整注射剂最终的药物含量，灵活给药。

根据本发明的注射剂的施用途径的实例包含胃肠外，例如，静脉内、皮层内、皮下、穿过皮肤的(局部)、穿过粘膜的、和直肠施用。静脉内施用是优选的。用于胃肠外、皮层内或皮下施用的溶液或混悬液可包含以下成分：无菌稀释剂(例如注射用水、盐溶液、不挥发油、聚乙烯乙二醇、甘油、丙烯乙二醇或其它合成溶剂)；抗菌剂(例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯)；抗氧化剂(例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠)；螯合剂(例如乙二胺四乙酸)；缓冲剂(例如醋酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐)以及用于改变渗透压的物质(例如氯化钠或葡萄糖)。使用酸或碱调节pH，例如盐酸或氢氧化钠。胃肠外制备物可封装在玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。

根据本发明的注射剂包含无菌水溶液(水溶的)或分散体系、用于使用时制备无菌注射溶液或分散体系的无菌粉末、以及用于使用时制备无菌注射溶液或分散体系的浓缩无菌水溶液或分散体系。用于静脉内施用时，合适的载体包含生理盐水、抑菌水、Cremophor EL^TM(BASF；Parsippany，NJ)或磷酸盐缓冲溶液(PBS)。

根据本发明的上述胶束样结构注射剂的优点在于：通过制备水包油型乳剂，使含有二萜类药物的有机溶剂相与表面活性物质在乳滴表面充分接触，大大提高了二者的接触面积；表面活性物质定向排列在乳滴表面，也有利于在有机溶剂的挥干过程中，尽可能地与二萜类药物分子相互作用，将药物增溶到胶束样粒子中。由于二萜类药物的装载过程始终在具有纳米尺度的乳滴和胶束样结构中进行，因此，只需要少量的表面活性物质就可大大增加胶束样结构中二萜类药物的装载量，避免分散过程中冬凌草二萜类药物因胶束样结构包裹不完全造成析出、沉淀。同时，采用这一制备方法进行二萜类药物装载时，由于作为油相的有机溶剂被迅速除去，而分散在水中的胶束样结构对颗粒生长也具有限制作用，使得溶解在有机溶剂中的二萜类药物尚来不及聚集形成大颗粒即以分子或微晶的状态有效地装载到胶束样结构内部。微晶状态的药物不仅有利于大大提高载药量，也进一步提高了注射剂的储存稳定性，并具有一定的缓释作用。这主要是由于以微晶状态分散的药物在释放的过程中，必须先溶解，而后再逐步扩散。

根据本发明的胶束样药物制剂避免了使用大量的油脂和脂质成分，具有良好的稳定性和安全性，同时克服了现有技术中载药效率偏低、溶剂引发炎症和疼痛等血管刺激性反应等不足。本发明的药物制剂不含有机溶剂(或其含量较低，达到注射许可的范围)、载药量高，可用于二萜类药物的静脉注射。

通过下述实施例对本发明作进一步的举例说明。这些实施例仅是示例性的，它们不以任何方式限定本发明的范围。

实施例1冬凌草甲素注射剂

冬凌草甲素浓度为1mg/ml，选用脱水聚山梨醇酯和普朗尼克F68做表面活性物质，总浓度为4mg/ml，生理盐水作溶剂。具体制备方法为：将100mg冬凌草甲素和100mg脱水聚山梨醇酯溶解于30ml氯仿中，作为油相；将300mg普朗尼克F68溶解于去离子水中，定容到100ml，作为水相。将油、水两相在40℃等温混合，采用转速为10000rpm的组织匀浆器混合3分钟，在40℃水浴中，旋转蒸发快速除去氯仿，即可得到浓度为1mg/ml澄明的冬凌草甲素注射剂，载药胶束样粒子的平均粒径为150nm。

取制备的1mg/ml冬凌草甲素注射剂2ml，放入截止分子量为10000的透析袋中，以200ml生理盐水为介质，37℃磁力搅拌进行体外释放度研究。在不同时间点取生理盐水各1ml，并及时补充新鲜生理盐水。测定生理盐水中冬凌草甲素的浓度，计算各个取样点的释放度。结果表明，从0到3小时，累计释放约70％，至60小时，累计完全释放。将时间单位换算为秒，对4-60小时的释放曲线进行Higuchi拟合，结果表明累计释放度与时间的平方根具有良好的线性，相关度为0.9899。说明，4-60小时的缓慢释放符合被动扩散原理。

取制备的1mg/ml冬凌草甲素注射剂20ml，冷冻干燥，进行DSC研究。发现存在结晶峰。

实施例2冬凌草甲素注射剂

冬凌草甲素浓度为0.5mg/ml，选用普朗尼克F68和聚氧乙烯氢化蓖麻油做表面活性物质，总浓度8mg/ml，去离子水作溶剂。具体制备方法为：将50mg冬凌草甲素和2mg聚氧乙烯氢化蓖麻油溶解于40ml氯仿中，作为油相；将6mg普朗尼克F68溶解于去离子水中，并定容到100ml，作为水相。将油、水两相在40℃等温混合，采用转速为10000rpm的组织匀浆器混合3分钟。在50℃水浴中，通氮气快速除去氯仿。即可得到浓度为0.5mg/ml，平均直径为120nm的澄明的冬凌草甲素注射剂。

实施例3冬凌草甲素注射用冻干粉针

具体制备方法为：将20mg冬凌草甲素和1g普朗尼克F68溶解于10ml叔丁醇中，加热到35℃左右，避免叔丁醇凝固，趁热灌装到西林瓶中，每瓶分装2ml，在-70℃预冻2小时后，-20℃干燥10小时，10℃干燥2小时，压胶塞，从冻干机中取出，压铝盖。得到白色疏松糕状冻干粉，其中每瓶中冬凌草甲素的质量为4mg，临用前加入2ml无菌生理盐水，充分水合，得到半透明略带浅蓝色的冬凌草注射剂，平均粒径为450nm，终浓度为2mg/ml。

实施例4冬凌草甲素注射剂

冬凌草甲素浓度为50mg/ml，选用聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物(换成具体商品名)、聚氧乙烯氢化蓖麻油做表面活性物质，总浓度为1000mg/ml，药用无水乙醇作为溶剂，制备为冬凌草甲素浓溶液。具体制备方法为：将4g聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物和1g聚氧乙烯氢化蓖麻油溶解于药用无水乙醇中，加热充分溶解，冷却后定容到5ml。加入250mg冬凌草甲素，水浴超声溶解，得到无色透明的药物浓溶液。临用前，按照1∶10的比例，将水加入到浓溶液中，边加边混合均匀，最终得到浓度为5mg/ml，平均粒径为200nm的冬凌草甲素注射液。

实施例5冬凌草甲素注射剂

具体制备方法为：将10mg冬凌草甲素和300mg聚氧乙烯氢化蓖麻油(Cremophor RH40)溶解于2ml丙酮中，与10ml水混合均匀。35℃水浴，通氮气，除去丙酮，即可得到澄明的，浓度为1mg/ml的冬凌草甲素注射剂。

实施例6冬凌草甲素注射剂

具体制备方法为：将10mg溶解于2ml丙酮中，将400mg普朗尼克F68溶解在10ml水中；将含药的丙酮溶液与F68水溶液混合均匀。35℃水浴，通氮气，除去丙酮，即可得到澄明的，浓度为1mg/ml的冬凌草甲素注射剂。

实施例7毛萼乙素注射剂

具体制备方法为：将10g普朗尼克F68溶解于5g药用无水乙醇中，加入500mg毛萼乙素，超声，使毛萼乙素充分溶解，制备为注射剂浓缩液。逐滴加入到生理盐水中，混合均匀，并加生理盐水定容到100ml，即可得到浓度为5mg/ml澄明的毛萼乙素注射液。

实施例8冬凌草总二萜注射用冻干粉针

总二萜是混合物，直接制备为注射剂时，不同组分的稳定性不同，有的成分会先沉淀析出，所以均制备为冻干粉针或者喷雾干燥颗粒剂。

具体制备方法为：将按照常规方法从冬凌草中提取的冬凌草总二萜20mg和600mg普朗尼克F68溶解于10ml叔丁醇-水(8∶2，v/v)中，加热到35℃左右，避免叔丁醇凝固，趁热灌装到西林瓶中，每瓶分装2ml，在-70℃预冻2小时后，-20℃干燥10小时，10℃干燥2小时，压胶塞，从冻干机中取出，压铝盖。得到浅棕色疏松糕状冻干粉，其中每瓶中冬凌草总二萜的质量为4mg，临用前加入2ml无菌生理盐水，充分水合，得到半透明略带浅蓝色的冬凌草总二萜注射剂，平均粒径为150nm，终浓度为2mg/ml。

实施例9冬凌草总二萜注射用冻干粉针

具体制备方法为：将20mg冬凌草总二萜，300mg聚氧乙烯氢化蓖麻油(Cremophor RH40)和1.5g海藻糖溶解于10ml叔丁醇-水(6∶4，v/v)中，加热到35℃左右，避免叔丁醇凝固，趁热灌装到西林瓶中，每瓶分装2ml，在-70℃预冻2小时后，-20℃干燥10小时，10℃干燥2小时，压胶塞，从冻干机中取出，压铝盖。得到浅棕色疏松糕状冻干粉，其中每瓶中冬凌草总二萜的质量为4mg，临用前加入2ml无菌生理盐水，充分水合，得到半透明略带浅蓝色的冬凌草总二萜注射剂，平均粒径为200nm，终浓度为2mg/ml。

实施例10香茶菜总二萜注射用冻干粉针

具体制备方法为：将按照常规方法从香茶菜中提取的香茶菜总二萜20mg，200mg聚氧乙烯氢化蓖麻油(Cremophor RH40)和2g甘露醇溶解于10ml叔丁醇-水(6∶4，v/v)中，加热到35℃左右，避免叔丁醇凝固，趁热灌装到西林瓶中，每瓶分装2ml，在-70℃预冻2小时后，-20℃干燥10小时，10℃干燥2小时，压胶塞，从冻干机中取出，压铝盖。得到浅黄色疏松糕状冻干粉，其中每瓶中香茶菜总二萜的质量为4mg，临用前加入2ml无菌生理盐水，充分水合，得到透明浅黄色的香茶菜总二萜注射剂，平均粒径为180nm，终浓度为2mg/ml。

实施例11香茶菜总二萜注射用冻干粉针

具体制备方法为：将20mg香茶菜总二萜，400mg普朗尼克F68溶解于10ml叔丁醇-水(9∶1，v/v)中，加热到35℃左右，避免叔丁醇凝固，趁热灌装到西林瓶中，每瓶分装2ml，在-70℃预冻2小时后，-20℃干燥10小时，10℃干燥2小时，压胶塞，从冻干机中取出，压铝盖。得到浅黄色疏松糕状冻干粉，其中每瓶中香茶菜总二萜的质量为4mg，临用前加入2ml无菌生理盐水，充分水合，得到透明浅黄色的香茶菜总二萜注射剂，平均粒径为160nm，终浓度为2mg/ml。

实施例12香茶菜总二萜口服颗粒

具体制备方法为：将20mg香茶菜总二萜，200mg普朗尼克F68和100mg聚氧乙烯氢化蓖麻油溶解于10ml乙醇中；将4g乳糖溶解在100ml水中。将香茶菜总二萜乙醇溶液与乳糖水溶液混合均匀后喷雾干燥，得到香茶菜总二萜口服颗粒。

实施例13冬凌草甲素注射用冻干粉针

具体制备方法为：将20mg冬凌草甲素溶解于10ml叔丁醇中，将500mg白蛋白和2g海藻糖溶解于10ml水中，将药物叔丁醇溶液与水溶液混合，并加热到35℃左右，趁热灌装到西林瓶中，每瓶分装4ml，在-70℃预冻2小时后，-30℃干燥15小时，5℃干燥2小时，压胶塞，从冻干机中取出，压铝盖。得到白色疏松糕状冻干粉，其中每瓶中冬凌草的质量为4mg，临用前加入2ml无菌生理盐水，充分水合，得到半透明略带浅蓝色的冬凌草甲素注射剂，平均粒径为250nm，终浓度为2mg/ml。

实施例14冬凌草甲素注射剂

具体制备方法为：将10mg冬凌草甲素和200mg磷脂溶解于10ml丙酮中，将200mg普朗尼克F68溶解在10ml水中；将含药的丙酮溶液与F68水溶液混合均匀。40℃水浴，通氮气，除去丙酮，即可得到澄明的，浓度为1mg/ml的冬凌草甲素注射剂。

实施例15冬凌草甲素注射剂

具体制备方法为：将5mg冬凌草甲素和100mg磷脂和100mg普朗尼克F68溶解于10ml无水乙醇中，得到澄明溶液。将该溶液放入透析袋中，对生理盐水透析24小时，除去乙醇。得到浓度为0.5mg/ml的冬凌草甲素注射剂。

实施例16冬凌草甲素载药粒子载药量的测定

通过高效液相色谱法(HPLC)进行，色谱条件如下：

高效液相色谱仪：Agilent 1100 Series；

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6×150mm，5um)；

流动相：甲醇∶水(55∶45)；流速：1ml/min；

检测波长：238nm；

温度：30℃；

进样量：20ul。

此条件下冬凌草甲素的保留时间为4.2min左右，辅料对药物的测定无干扰，方法的专属性强，典型图谱如图1所示。

首先绘制标准曲线，具体操作如下：配制0.5mg/ml冬凌草甲素甲醇储备液，分别吸取200、400、600、800、1000、1200、1400μl至10.0ml容量瓶中，加无水乙醇定容，得10、20、30、40、50、60、70μg/ml浓度。取革样品进行HPLC法测定，以峰面积(Y)对浓度(X)作图。进行线性回归，得到oridonin的HPLC回归方程y＝28.279x-25.171(n＝7)，相关系数R²＝0.9989，结果表明oridonin在10-70μg/ml范围内有良好的线性关系，

载药量测定如下：对制备得到的冬凌草甲素载药粒子溶液，取溶液250ul于10ml容量瓶中，加无水乙醇定容。进样量20ul，取三次进样后积分面积的平均值计算浓度。

将溶液冻干后，得到载药粒子干粉质量。

载药粒子中的药物质量＝载药粒子溶液中药物浓度×溶液体积

载药量＝载药粒子中的药物质量/干粉质量×100％

取按照实施例1制备的冬凌草甲素注射剂样品批号060808，测得其浓度为2.47mg/ml，体积为20ml，载药粒子干粉质量为1000mg，载药量为4.94％；按照实施例1制备的冬凌草甲素注射剂样品批号060906浓度为2.48mg/ml，体积为20ml，干粉质量为1002mg，载药量为4.95％。按照下式计算包封率：

包封率＝载药粒子中冬凌草的量/制备载药粒子时加入的重量×100％

计算得到060808样品的包封率为：

2.47mg/ml×20ml/50mg×100％＝98.8％

实施例17 冬凌草甲素胶束样制剂溶液的储存稳定性研究

取实施例1中制备的冬凌草甲素注射剂样品40ml，于4℃冰箱内保存。在不同时间点取样，0.22um滤膜过滤后-22℃保存，也可取样后立即测定。用前述HPLC方法测定其中的冬凌草甲素含量。

Pluronic F68组：

储存时间(天)	浓度mg/ml)
		0	1.827
1	1.863
		2	1.894
7	1.855
		14	1.850
21	1.880
		36	1.938
41	1.918
		60	1.927

采用与实施例1类似的方法，以SDS为表面活性物质制备冬凌草甲素注射剂。对制得的注射剂进行稳定性测定后发现，得到的载药粒子不够稳定，制备完成后静置约2min药物即沉淀析出。

以上通过举例说明的方式描述了本发明。但是，应当理解，本发明绝不仅仅限于这些具体实施方式。普通技术人员可以对本发明进行各种修改和改动，而不背离本发明的精神和范围。

Claims (36)

1.一种二萜类药物制剂，其中含有二萜类药物和表面活性物质，以及任选地药学上可接受的其它载体和赋型剂，该二萜类药物装载于表面活性物质形成的胶束样自组装结构中，其中胶束样自组装结构的平均粒径为10-500nm，所述二萜类药物选自冬凌草总二萜、香茶菜总二萜、冬凌草甲素、毛萼乙素或者其任意组合。

2.根据权利要求1的药物制剂，其中胶束样自组装结构的平均粒径为50-300nm。

3.根据权利要求1的药物制剂，其中胶束样自组装结构的平均粒径为100-250nm。

4.根据权利要求1-3中任一项的药物制剂，其中二萜类药物浓度为0.01-50mg/ml。

5.根据权利要求1-3中任一项的药物制剂，其中二萜类药物浓度为0.1-5mg/ml。

6.根据权利要求1-3中任一项的药物制剂，其中二萜类药物浓度为0.5-5mg/ml。

7.根据权利要求1-3中任一项的药物制剂，其中所述表面活性物质浓度为0.05-500mg/ml。

8.根据权利要求1-3中任一项的药物制剂，其中所述表面活性物质浓度为0.1-100mg/ml。

9.根据权利要求1-3中任一项的药物制剂，其中所述表面活性物质浓度为0.1-10mg/ml。

10.根据权利要求1-3中任一项的药物制剂，其中所述表面活性物质的表面活性亲水亲油平衡值为6-40。

11.根据权利要求1-3中任一项的药物制剂，其中所述表面活性物质的表面活性亲水亲油平衡值为10-35。

12.根据权利要求1-3中任一项的药物制剂，其中所述表面活性物质的表面活性亲水亲油平衡值为15-30。

13.根据权利要求1-3中任一项的药物制剂，其中所述表面活性物质的表面活性亲水亲油平衡值为15-25。

14.根据权利要求1-3中任一项的药物制剂，其中所述表面活性物质选自离子型、非离子型表面活性物质、蛋白质和其混合物。

15.根据权利要求1-3中任一项的药物制剂，其中所述表面活性物质选自以下一种或多种：白蛋白、酪蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、山梨醇脂肪酸酯、脱水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯氢化蓖麻油和磷脂分子，及其任意混合物。

16.一种制备权利要求1-15中任一项所述二萜类药物制剂的方法，其包括将二萜类药物与表面活性物质相混合而组装成胶束样自组装结构的步骤。

17.根据权利要求16的方法，其包括将二萜类药物、表面活性物质分散于允许其分散的分散介质中的步骤。

18.根据权利要求17的方法，其还包括除去分散介质的步骤。

19.根据权利要求18的方法，其包括以下步骤：

使用含二萜类药物的有机溶液、含表面活性物质的水溶液制备水包油乳剂；

除去有机溶剂，二萜类药物与表面活性物质自组装形成胶束样自组装结构纳米粒子，制成二萜类药物注射剂。

20.根据权利要求17或18的方法，其包括以下步骤：

将二萜类药物、表面活性物质溶解于允许其溶解的溶剂中，得到溶液；

加入注射用溶剂，二萜类药物与表面活性物质形成胶束样自组装结构粒子，制成二萜类药物注射剂。

21.根据权利要求20的方法，其包括以下步骤：

将二萜类药物、表面活性剂溶解于允许其溶解的溶剂中，得到溶液；

将溶液干燥，得到二萜类药物与表面活性物质的混和粉末；

加入注射用溶剂，二萜类药物与表面活性物质自组装形成的胶团结构粒子，制成二萜类药物注射剂。

22.根据权利要求19的方法，其中二萜类药物与表面活性物质的比例为1：1-1：100w/w。

23.根据权利要求19的方法，其中二萜类药物与表面活性物质的比例为1：5-1：80w/w。

24.根据权利要求19的方法，其中二萜类药物与表面活性物质的比例为1：20-1：50w/w。

25.根据权利要求19的方法，其中二萜类药物与表面活性物质的比例为1：25w/w。

26.根据权利要求19的方法，其中所述有机溶剂选自与水不混溶、低混溶的有机溶剂和其混合物。

27.根据权利要求19的方法，其中所述有机溶剂选自以下一种或多种：氯仿、乙醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和其任意混合物。

28.根据权利要求19的方法，其中采用通氮气或减压蒸发的方法除去有机溶剂。

29.根据权利要求19的方法，其中所述有机溶液含有表面活性剂。

30.根据权利要求20所述的方法，其中所述允许其溶解的溶剂选自以下一种或多种：乙醇、丙二醇、叔丁醇、丙酮、二甲亚砜、水和其混合物。

31.根据权利要求21所述的方法，其中所述允许其溶解的溶剂选自以下一种或多种：乙醇、丙二醇、叔丁醇、丙酮、二甲亚砜、水和其混合物。

32.根据权利要求20的方法，其中所加入的二萜类药物在允许其溶解的溶剂中浓度为0.5-500mg/ml。

33.根据权利要求20的方法，其中所加入的二萜类药物在允许其溶解的溶剂中浓度为5-200mg/ml。

34.根据权利要求20的方法，其中所加入的二萜类药物在允许其溶解的溶剂中浓度为10-100mg/ml。

35.根据权利要求21的方法，其中在所述溶液中加入多羟基化合物。

36.根据权利要求21的方法，其中所述多羟基化合物选自以下的一种或多种：甘露醇、蔗糖、聚乙二醇、海藻糖和其混合物。