CN103751107A - 含有多烯紫杉醇和维生素e tpgs的纳米颗粒及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒及其制备方法，其中该含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒包含：2-10重量份的多烯紫杉醇；1-15重量份的维生素E TPGS；20-65重量份的白蛋白；5-50重量份的冻干保护剂；以及2-20重量份的酸性缓冲盐。该含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒，相对于现有的多烯紫杉醇商品制剂，包载药物的能力好，毒副作用小，稳定性好，抗肿瘤疗效好，给药方便，且制备方法简单、生产成本低。

Description

含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒及其制备方法

技术领域

本发明涉及药物制剂技术领域，具体地，涉及含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒及其制备方法。 

背景技术

多烯紫杉醇(docetaxel,DTX)，又名多西他赛，是在合成紫杉醇的中间产物中偶然发现，并于1998年获美国FDA批准上市的一种紫杉烷类抗癌药物。多烯紫杉醇是第二代紫杉烷类抗癌药的代表。它不仅仅对卵巢癌、乳腺癌和非小细胞肺癌具有良好的治疗效果，而且对前列腺癌、胰癌、和多种软组织肿瘤也都具有良好的疗效。近几年来因为多烯紫杉醇抗癌的广谱性，人们开始关注这一新型药物产品。 

但是，由于多烯紫杉醇在水中的溶解度非常小（约10mg/L），因此现有注射剂（泰素帝，Taxotere）是采用吐温-80作助溶剂，并且需用13%乙醇稀释后方能给药。吐温-80虽然能增加多烯紫杉醇的溶解度，但是在溶液状态下的多烯紫杉醇稳定性差，有效期短。而在包装的小盒内附带1支13%的乙醇，这样既增加了生产成本，又给医务人员和患者带来不便。并且，由于吐温80具有溶血性且黏性大，临床实验中大多数患者产生严重的过敏反应，包括休克、呼吸困难、低血压和风疹等过敏样反应症状，并有肾毒性和神经毒性，严重会导致死亡。因此，近年来人们一直在为开发不含吐温-80等溶媒的多烯紫杉醇新型制剂而不懈努力，并取得了一定进展。然而，现阶段的不含吐温-80等溶媒的多烯紫杉醇新型制剂，其包载药物的能力有限，毒副作用较大，稳定性差，抗肿瘤疗效不突出，且制备方法复杂、成本高。 

因而，目前的多烯紫杉醇新型制剂及其制备方法仍有待改进。 

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种包载药物的能力好，毒副作用小，稳定性好，抗肿瘤疗效好，且制备方法简单、成本低的多烯紫杉醇新型制剂。 

首先，需要说明的是，本发明是基于发明人的下列发现而完成的： 

发明人发现，国内外学者已公开了对多烯紫杉醇的衍生物及其制剂的研究的多种成果。例如，CN1448128公开了一种制备紫杉醇和多烯紫杉醇白蛋白纳米颗粒的方法，该方法将含药物的有机相（二氯甲烷或者氯仿等）和白蛋白水溶液经高压匀质处理，形成以紫杉醇或者多烯紫杉醇为核心的微乳，经过滤灭菌，真空蒸发除去有机溶剂后冻干得到最终的白蛋白纳米粒。这种方法制备比较复杂，需要高压以及相应的高温来去除有机溶剂，从而获得纳米粒， 且高压匀质过程进一步提高了制剂的制备成本；并且，由于二氯甲烷、氯仿等有机溶剂具有毒性，需要严格控制其残余量；这种方法包载药物的能力也是有限的，同时制备过程中的高压和剪切力会使蛋白失活。 

此外，维生素E TPGS是聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯（D-α-tocopherol polyethylene glycol1000succinate）的简称，是维生素E的水溶性衍生物，由维生素E琥珀酸酯（TOS）的羧基与聚乙二醇1000（PEG1000）酯化而成。维生素E TPGS是淡黄色的蜡状固体，近乎无味，它是一种两亲分子，有一个亲水的极性头部和一个疏水的脂肪族碳链尾部分子，能溶于水，也能溶于大多数极性有机溶剂。维生素E TPGS乳化效率高，是PVA的67倍。发明人发现，维生素E TPGS（在本文中有时简称为“TPGS”）能显著提高药物的包封率（接近100%），而且具有自乳化的功能，能够促进难溶性药物在胃肠道的吸收，并且，维生素E TPGS能够提高纳米药物制剂的生物利用度，促进纳米粒子的吸收。此外，维生素E TPGS本身也具有抗肿瘤的活性，维生素E TPGS能在体外和体内抑制人肺癌细胞的增殖，而将维生素E TPGS与多烯紫杉醇联合用药，能够发挥协同抗肿瘤作用。 

由此，根据本发明的一个方面，本发明提供了一种含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒。根据本发明的实施例，该含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒包含：2-10重量份的多烯紫杉醇；1-15重量份的维生素E TPGS；20-65重量份的白蛋白；5-50重量份的冻干保护剂；以及2-20重量份的酸性缓冲盐。发明人惊奇地发现，本发明的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒，相对于现有的多烯紫杉醇商品制剂（例如泰素帝），包载药物的能力好，毒副作用小，稳定性好，抗肿瘤疗效好，给药方便，且制备方法简单、生产成本低。 

另外，根据本发明实施例的上述含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒还可以具有如下附加的技术特征： 

根据本发明的实施例，所述含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒包含 

3-6重量份的多烯紫杉醇； 

8-12重量份的维生素E TPGS； 

30-50重量份的白蛋白； 

10-30重量份的冻干保护剂；以及 

5-10重量份的酸性缓冲盐。 

根据本发明的实施例，所述白蛋白为人血清白蛋白或牛血清白蛋白。由此，本发明的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒能够高效地靶向肿瘤部位。 

根据本发明的实施例，所述冻干保护剂为选自甘露醇、葡萄糖、谷氨酸、天冬氨酸、苹果氨酸、肌醇、乳糖、蔗糖、棉籽糖、海藻糖、山梨醇D、L-苏氨酸、肌醇、木糖醇、精氨酸和组氨酸的至少一种。由此，本发明的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒具有良好的化学稳定性和物理稳定性，给药前易于分散。 

根据本发明的实施例，所述酸性缓冲盐为选自盐酸盐、磷酸盐、醋酸盐、乳酸盐和柠檬酸盐的至少一种。由此，本发明的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒具有良好的 化学稳定性和物理稳定性。 

根据本发明的实施例，所述含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒用于抗肿瘤和/或抗心血管病。其中，根据本发明的一些实施例，所述肿瘤为选自乳腺癌、宫颈癌、非小细胞肺癌和肝癌的至少一种。 

根据本发明的实施例，所述含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒的粒径为50-200纳米。由此，本发明的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒够高效地靶向肿瘤部位，且毒性小，疗效好。 

根据本发明的另一方面，本发明还提供了一种制备前面所述的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒的方法。根据本发明的实施例，该方法包括以下步骤： 

（1）将2-10重量份的多烯紫杉醇溶解于2-20重量份的有机溶剂中，作为有机相； 

（2）将20-65重量份的白蛋白、1-15重量份的维生素E TPGS、5-50重量份的冻干保护剂和2-20重量份的酸性缓冲盐溶解于10-100重量份的注射用水中，作为水相； 

（3）将所述有机相与所述水相依次进行混合和过滤除菌处理，以便获得经过过滤除菌的混合液；以及 

（4）于-20～-80摄氏度下，将所述经过过滤除菌的混合液冻结，并冷冻干燥去除所述有机溶剂和所述注射用水，以便获得冻干粉末，所述冻干粉末即为所述含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒。 

发明人发现，利用本发明的方法，能够高效地制备含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒，并且该方法操作简单、易于工厂化，生产成本低，制备获得的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒相对于现有的多烯紫杉醇商品制剂（例如泰素帝），包载药物的能力好，毒副作用小，稳定性好，抗肿瘤疗效好，给药方便。 

另外，根据本发明实施例的上述制备含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒的方法还可以具有如下附加的技术特征： 

根据本发明的实施例，采用： 

3-6重量份的多烯紫杉醇，5-10重量份的有机溶剂，8-12重量份的维生素E TPGS；30-50重量份的白蛋白；10-30重量份的冻干保护剂；5-10重量份的酸性缓冲盐，以及30-70重量份的注射用水。 

根据本发明的实施例，所述白蛋白为人血清白蛋白或牛血清白蛋白。由此，制备获得的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒能够高效地靶向肿瘤部位。 

根据本发明的实施例，所述冻干保护剂为选自甘露醇、葡萄糖、谷氨酸、天冬氨酸、苹果氨酸、肌醇、乳糖、蔗糖、棉籽糖、海藻糖、山梨醇D、L-苏氨酸、肌醇、木糖醇、精氨酸和组氨酸的至少一种。由此，制备获得的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒具有良好的化学稳定性和物理稳定性，给药前易于分散。 

根据本发明的实施例，所述酸性缓冲盐为选自盐酸盐、磷酸盐、醋酸盐、乳酸盐和柠檬酸盐的至少一种。由此，制备获得的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒具有良好的化学稳定性和物理稳定性。 

根据本发明的实施例，所述有机溶剂为选自乙醇、丙醇、丁醇、异丙醇、异丁醇和叔丁醇的至少一种。有机溶剂毒性极小，且后续去除容易，从而使得制备获得的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒的细胞毒性小。 

根据本发明的实施例，于高于1000rpm的搅拌状态下进行所述混合处理。由此，能够使有机相和水相均匀混合，从而有利于获得稳定性好的纳米颗粒。 

根据本发明的实施例，利用0.22微米的微孔滤膜器进行所述过滤除菌处理。由此，能够有效获得无菌含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒。 

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。 

附图说明

本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中： 

图1显示了根据本发明一个实施例，维生素E TPGS协同抗肿瘤白蛋白纳米颗粒的场发射扫描电子显微镜图谱。 

图2-图4显示了根据本发明一个实施例，维生素E TPGS协同抗肿瘤白蛋白纳米颗粒对MCF-7细胞的细胞活性影响实验结果。 

图5显示了根据本发明一个实施例，维生素E TPGS协同抗肿瘤白蛋白纳米颗粒对乳腺癌动物的抑瘤效果实验结果。 

图6显示了根据本发明一个实施例，维生素E TPGS协同抗肿瘤白蛋白纳米颗粒给药后小鼠的体重变化曲线图。 

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。 

含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒 

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒。根据本发明的实施例，该含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒包含：2-10重量份的多烯紫杉醇；1-15重量份的维生素E TPGS；20-65重量份的白蛋白；5-50重量份的冻干保护剂；以及2-20重量份的酸性缓冲盐。发明人惊奇地发现，相对于现有的多烯紫杉醇商品制剂（例如泰素帝），本发明的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒包载药物的能力好，毒副作用小，稳定性好，抗肿瘤疗效好，给药方便，且制备方法简单、生产成本低。 

优选地，根据本发明的一些实施例，所述含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒包含： 

3-6重量份的多烯紫杉醇； 

8-12重量份的维生素E TPGS； 

30-50重量份的白蛋白； 

10-30重量份的冻干保护剂；以及 

5-10重量份的酸性缓冲盐。 

其中，根据本发明的实施例，所述白蛋白为人血清白蛋白或牛血清白蛋白。由此，本发明的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒能够高效地靶向肿瘤部位。 

根据本发明的实施例，冻干保护剂的种类不受特别限制，只要能够在制备时的冻干的过程中对其他各成分起保护作用，而在干燥后使获得的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒易于被生理盐水等分散即可。根据本发明的一些具体示例，所述冻干保护剂为选自甘露醇、葡萄糖、谷氨酸、天冬氨酸、苹果氨酸、肌醇、乳糖、蔗糖、棉籽糖、海藻糖、山梨醇D、L-苏氨酸、肌醇、木糖醇、精氨酸和组氨酸的至少一种。由此，本发明的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒具有良好的化学稳定性和物理稳定性，给药前易于分散。 

根据本发明的实施例，酸性缓冲盐（其主要作用是维持含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒的稳定性，尤其是在生理盐水或者注射用水重悬后的稳定性，pH=7.2-8.0）的种类也不受特别限制。根据本发明的实施例，所述酸性缓冲盐为选自盐酸盐、磷酸盐、醋酸盐、乳酸盐和柠檬酸盐的至少一种。由此，本发明的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒具有良好的化学稳定性和物理稳定性。 

根据本发明的实施例，所述含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒用于抗肿瘤和/或抗心血管病。其中，根据本发明的一些实施例，所述肿瘤为选自乳腺癌、宫颈癌、非小细胞肺癌和肝癌的至少一种。 

根据本发明的实施例，所述含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒的粒径为50-200纳米。由此，本发明的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒够高效地靶向肿瘤部位，且毒性小，疗效好。 

制备方法 

根据本发明的另一方面，本发明还提供了一种制备前面所述的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒的方法。发明人发现，本发明的方法操作简单、易于工厂化，成本低，效率高，制备获得的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒相对于现有的多烯紫杉醇商品制剂（例如泰素帝），包载药物的能力好，毒副作用小，稳定性好，抗肿瘤疗效好，给药方便。 

根据本发明的实施例，本发明的制备含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒的方法包括以下步骤： 

（1）将2-10重量份的多烯紫杉醇溶解于2-20重量份的有机溶剂中，作为有机相。 

根据本发明的实施例，所述有机溶剂为选自乙醇、丙醇、丁醇、异丙醇、异丁醇和叔丁醇的至少一种。有机溶剂毒性极小，且后续去除容易，从而使得制备获得的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒的细胞毒性小。 

（2）将20-65重量份的白蛋白、1-15重量份的维生素E TPGS、5-50重量份的冻干保护剂和2-20重量份的酸性缓冲盐溶解于10-100重量份的注射用水中，作为水相。 

白蛋白纳米粒子在人体内具有公知的EPR效应(Enhanced permeability and retention effect，高通透性和滞留效应)，从而能够实现药物在特定的肿瘤部位富集，具有肿瘤的被动靶向功能，且能够减少毒副作用，提高疗效。根据本发明的实施例，所述白蛋白的种类和来源不受特别限制，只要可生物降解且对人体无明显的抗原性，能够实现上述功能即可。根据本发明的一些实施例，所述白蛋白为人血清白蛋白或牛血清白蛋白。由此，制备获得的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒能够高效地靶向肿瘤部位。 

需要说明的是，在本发明的方法中，所述维生素E TPGS（即聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯）中聚乙二醇的数均分子量M_n不受特别限制，优选可以为1000、2000、3000、4000、5000等。 

而冻干保护剂的作用主要表现为：在冻干过程中对其他各成分起保护作用，而在干燥后起支撑作用，以便使获得的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒易于被生理盐水等分散。据本发明的实施例，冻干保护一些具体示例，所述冻干保护剂为选自甘露醇、葡萄糖、谷氨酸、天冬氨酸、苹果氨酸、肌醇、乳糖、蔗糖、棉籽糖、海藻糖、山梨醇D、L-苏氨酸、肌醇、木糖醇、精氨酸和组氨酸的至少一种。由此，制备获得的含有多烯紫杉醇和维生素ETPGS的纳米颗粒具有良好的化学稳定性和物理稳定性，给药前易于分散。 

根据本发明的实施例，所述酸性缓冲盐（用于维持纳米颗粒的稳定性，尤其是在生理盐水或者注射用水重悬后的稳定性，pH=7.2-8.0）为选自盐酸盐、磷酸盐、醋酸盐、乳酸盐和柠檬酸盐的至少一种。由此，制备获得的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒具有良好的化学稳定性和物理稳定性。 

（3）将所述有机相与所述水相依次进行混合和过滤除菌处理，以便获得经过过滤除菌的混合液。 

根据本发明的实施例，于高于1000rpm的搅拌状态下进行所述混合处理。且可以采用机械搅拌、磁力搅拌、手工高速搅拌或者匀浆基搅拌实现所述搅拌状态。由此，能够使有机相和水相均匀混合，从而有利于获得稳定性好的纳米颗粒。 

根据本发明的实施例，利用0.22微米的微孔滤膜器进行所述过滤除菌处理。由此，能够有效获得无菌含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒。 

（4）于-20～-80摄氏度下，将所述经过过滤除菌的混合液冻结，并在-50摄氏度条件下冷冻干燥去除所述有机溶剂和所述注射用水，以便获得冻干粉末，所述冻干粉末即为所述含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒。 

根据本发明的实施例，采用： 

3-6重量份的多烯紫杉醇，5-10重量份的有机溶剂，8-12重量份的维生素E TPGS；30-50重量份的白蛋白；10-30重量份的冻干保护剂；5-10重量份的酸性缓冲盐，以及30-70重量份的注射用水。 

根据本发明的实施例，本发明的制备含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒的方 法进一步包括将所述含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒进行充氮密闭保存。 

根据本发明的实施例，在制备过程中通过调整试剂比例和操作参数，可以有效获得50～200nm内的物组合物纳米颗粒。并且，本发明制备获得的含有多烯紫杉醇和维生素ETPGS的纳米颗粒外形良好，高效地靶向肿瘤部位，且毒性小，易于被人体吸收，疗效好。 

需要说明的是，本发明制备获得的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒可以有效用于抗肿瘤和/或抗心血管病，尤其是乳腺癌、宫颈癌、非小细胞肺癌和肝癌的治疗。 

此外，还需要说明的是，本发明的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒及其制备方法具有如下优点： 

1、本发明的制备含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒的方法，所采用的维生素E TPGS既可以作为乳化剂，又可以和多烯紫杉醇发挥协同抗肿瘤的疗效。 

2、本发明的制备含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒的方法，采用了能够与水互溶且基本没有毒性的乙醇、丙醇、丁醇、异丙醇和叔丁醇作有机溶剂。这些物质在冷冻干燥的过程中可以容易地去除，增加了本发明的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒的稳定性和安全性；且冷冻干燥前无需经过复杂的高压匀质，简化了制备工艺，也无需通过旋转蒸发等工艺除去有机相，大大降低了成本，利于产业化生产。 

3、制备获得的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒，外形良好，纳米颗粒平均在50-200nm，易于被人体吸收，肿瘤靶向性好；化学物理性质稳定，易于长期存放。 

4、本发明的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒给药方便，使用时以适宜的水性介质(例如生理盐水、PBS缓冲盐、葡萄糖注射液或者注射用水等)再分散冻干物，即可得到给药形式的混悬液，然后进行静脉注射即可。其中，所述混悬液中的纳米颗粒仍为50-200nm，且每毫升混悬液中药物剂量多烯紫杉醇为5mg，维生素E TPGS为3mg时最佳。 

5、本发明的方法没有采用对人体产生危害的药用辅料。从而避免了吐温-80和有毒溶媒聚氧乙烯蓖麻油（Cremophor-EL）等引起的休克、呼吸困难、低血压和风疹过敏反应，也不需在使用前用到抗组胺剂，大大提高了多烯紫杉醇固体纳米颗粒制剂的安全性和患者用药的顺应性。 

6、本发明的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒，是注射用的多烯紫杉醇纳米制剂，在人体内具有良好的生物相容性和生物可降解性。 

下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。 

实施例1、异丙醇为有机相的多烯紫杉醇和TPGS协同抗肿瘤白蛋白纳米颗粒制备 

称取多系紫杉醇80mg溶于30ml异丙醇中作为有机相，称取600mg人血清白蛋白、80mg TPGS（聚乙二醇数均分子量M_n为1000）、200mg甘露醇、60mg醋酸钠溶于80ml双蒸水中，搅拌溶解后作为水相。在高速机械搅拌（2000rpm）的情况下将有机相缓慢加入 到水相，搅拌一段时间后经0.22μm微孔滤膜器过滤除菌。在-80℃条件下冻结，在-50℃下冷冻干燥除去异丙醇和水后可得到外形良好的冻干粉末（粒径80纳米左右）。所得粉末经生理盐水很容易再构成冻干前的分散液，其颗粒大小与冷冻干燥前相同。对冻干粉末进行充氮密闭保存。冻干后的粉末纳米粒子进行场发射扫描电镜（FESEM）分析，结果如图1所示。从图1可以看出所制备的多烯紫杉醇和TPGS协同抗肿瘤白蛋白纳米颗粒呈近似球状颗粒，粒径为80纳米左右。 

实施例2、异丙醇为有机相的多烯紫杉醇和TPGS协同抗肿瘤白蛋白纳米颗粒制备 

称取多系紫杉醇80mg溶于30ml异丙醇中作为有机相，称取1000mg人血清白蛋白、100mg TPGS（聚乙二醇数均分子量M_n为1000）、280mg甘露醇、65mg醋酸钾溶于100ml双蒸水中，搅拌溶解后作为水相。在高速机械搅拌（2000rpm）的情况下将有机相缓慢加入到水相，搅拌一段时间后经0.22μm微孔滤膜器过滤除菌。在-80℃条件下冻结，在-50℃下冷冻干燥除去异丙醇和水后可得到外形良好的冻干粉末（粒径80纳米左右）。所得粉末经生理盐水很容易再构成冻干前的分散液，其颗粒大小与冷冻干燥前相同。对冻干粉末进行充氮密闭保存。 

实施例3、异丙醇为有机相的多烯紫杉醇和TPGS协同抗肿瘤白蛋白纳米颗粒制备 

称取多系紫杉醇80mg溶于30ml异丙醇中作为有机相，称取600mg人血清白蛋白、80mg TPGS（聚乙二醇数均分子量M_n为2000）、200mg海藻糖、60mg醋酸钠溶于80ml双蒸水中，搅拌溶解后作为水相。在高速机械搅拌（3000rpm）的情况下将有机相缓慢加入到水相，搅拌一段时间后经0.22μm微孔滤膜器过滤除菌。在-80℃条件下冻结，在-50℃下冷冻干燥除去异丙醇和水后可得到外形良好的冻干粉末（粒径70纳米左右）。所得粉末经生理盐水很容易再构成冻干前的分散液，其颗粒大小与冷冻干燥前相同。对冻干粉末进行充氮密闭保存。 

实施例4、异丙醇为有机相的多烯紫杉醇和TPGS协同抗肿瘤白蛋白纳米颗粒制备 

称取多系紫杉醇80mg溶于30ml异丙醇中作为有机相，称取600mg人血清白蛋白、80mg TPGS（聚乙二醇数均分子量M_n为1000）、200mg葡萄糖、60mg柠檬酸钠溶于80ml双蒸水中，搅拌溶解后作为水相。在高速机械搅拌（3000rpm）的情况下将有机相缓慢加入到水相，搅拌一段时间后经0.22μm微孔滤膜器过滤除菌。在-80℃条件下冻结，在-50℃下冷冻干燥除去异丙醇和水后可得到外形良好的冻干粉末（粒径70纳米左右）。所得粉末经生理盐水很容易再构成冻干前的分散液，其颗粒大小与冷冻干燥前相同。对冻干粉末进行充氮密闭保存。 

实施例5、异丙醇为有机相的多烯紫杉醇和TPGS协同抗肿瘤白蛋白纳米颗粒制备 

称取多系紫杉醇100mg溶于35ml异丙醇中作为有机相，称取600mg人血清白蛋白、 80mg TPGS（聚乙二醇数均分子量M_n为2000）、200mg海藻糖、60mg醋酸钠溶于80ml双蒸水中，搅拌溶解后作为水相。在高速机械搅拌（5000rpm）的情况下将有机相缓慢加入到水相，搅拌一段时间后经0.22μm微孔滤膜器过滤除菌。在-80℃条件下冻结，在-50℃下冷冻干燥除去异丙醇和水后可得到外形良好的冻干粉末（粒径50纳米左右）。所得粉末经生理盐水很容易再构成冻干前的分散液，其颗粒大小与冷冻干燥前相同。对冻干粉末进行充氮密闭保存。 

实施例6、乙醇为有机相的多烯紫杉醇和TPGS协同抗肿瘤白蛋白纳米颗粒制备 

称取多系紫杉醇80mg溶于30ml乙醇中作为有机相，称取600mg人血清白蛋白、80mg TPGS（聚乙二醇数均分子量M_n为1000）、200mg蔗糖、60mg柠檬酸钠溶于80ml双蒸水中，搅拌溶解后作为水相。在搅拌（人工搅拌）的情况下将有机相缓慢加入到水相，搅拌一段时间后经0.22μm微孔滤膜器过滤除菌。在-80℃条件下冻结，在-50℃下冷冻干燥除去乙醇和水后可得到外形良好的冻干粉末（粒径200纳米左右）。所得粉末经生理盐水很容易再构成冻干前的分散液，其颗粒大小与冷冻干燥前相同。对冻干粉末进行充氮密闭保存。 

实施例7、乙醇为有机相的多烯紫杉醇和TPGS协同抗肿瘤白蛋白纳米颗粒制备 

称取多系紫杉醇50mg溶于25ml乙醇中作为有机相，称取600mg人血清白蛋白、80mg TPGS（聚乙二醇数均分子量M_n为2000）、200mg海藻糖、60mg醋酸钾溶于80ml双蒸水中，搅拌溶解后作为水相。在高速机械搅拌（5000rpm）的情况下将有机相缓慢加入到水相，搅拌一段时间后经0.22μm微孔滤膜器过滤除菌。在-80℃条件下冻结，在-50℃下冷冻干燥除去乙醇和水后可得到外形良好的冻干粉末（粒径70纳米左右）。所得粉末经生理盐水很容易再构成冻干前的分散液，其颗粒大小与冷冻干燥前相同。对冻干粉末进行充氮密闭保存。 

实施例8、乙醇为有机相的多烯紫杉醇和TPGS协同抗肿瘤白蛋白纳米颗粒制备 

称取多系紫杉醇80mg溶于30ml乙醇中作为有机相，称取600mg人血清白蛋白、50mg TPGS（聚乙二醇数均分子量M_n为3000）、200mg天冬氨酸、60mg乳酸钠溶于80ml双蒸水中，搅拌溶解后作为水相。在高速机械搅拌（3000rpm）的情况下将有机相缓慢加入到水相，搅拌一段时间后经0.22μm微孔滤膜器过滤除菌。在-80℃条件下冻结，在-50℃下冷冻干燥除去乙醇和水后可得到外形良好的冻干粉末（粒径80纳米左右）。所得粉末经生理盐水很容易再构成冻干前的分散液，其颗粒大小与冷冻干燥前相同。对冻干粉末进行充氮密闭保存。 

实施例9、丁醇为有机相的多烯紫杉醇和TPGS协同抗肿瘤白蛋白纳米颗粒制备 

称取多系紫杉醇80mg溶于30ml丁醇中作为有机相，称取600mg人血清白蛋白、80mg TPGS（聚乙二醇数均分子量M_n为1000）、200mg海藻糖、60mg柠檬酸钠溶于100ml双蒸 水中，搅拌溶解后作为水相。在高速机械搅拌（3000rpm）的情况下将有机相缓慢加入到水相，搅拌一段时间后经0.22μm微孔滤膜器过滤除菌。在-80℃条件下冻结，在-50℃下冷冻干燥除去丁醇和水后可得到外形良好的冻干粉末（粒径100纳米左右）。所得粉末经生理盐水很容易再构成冻干前的分散液，其颗粒大小与冷冻干燥前相同。对冻干粉末进行充氮密闭保存。 

实施例10、丁醇为有机相的多烯紫杉醇和TPGS协同抗肿瘤白蛋白纳米颗粒制备 

称取多系紫杉醇80mg溶于30ml丁醇中作为有机相，称取600mg人血清白蛋白、80mgTPGS（聚乙二醇数均分子量M_n为2000）、200mg蔗糖、60mg乳酸钾溶于100ml双蒸水中，搅拌溶解后作为水相。在高速机械搅拌（2000rpm）的情况下将有机相缓慢加入到水相，搅拌一段时间后经0.22μm微孔滤膜器过滤除菌。在-80℃条件下冻结，在-50℃下冷冻干燥除去丁醇和水后可得到外形良好的冻干粉末（粒径100纳米左右）。所得粉末经生理盐水很容易再构成冻干前的分散液，其颗粒大小与冷冻干燥前相同。 

实施例11、多烯紫杉醇和TPGS协同抗肿瘤白蛋白纳米颗粒对乳腺癌细胞MCF-7的细胞毒性研究 

采用MMT发测定该纳米粒子的细胞毒性：将MCF-7细胞（ATCC,Rockville,MD）接种于96孔细胞培养板中，细胞培养24h贴壁后，弃去陈旧培养基，用PBS冲洗一次，加入待测样品、阳性对照（泰素帝（Taxotere），安万特医药（Aventis Pharma））、阴性对照（生理盐水）分别培养24h、48h、72h。在规定的时间间隔后，弃去陈旧培养基，用PBS冲洗一次，每孔加入100μl含MTT1mg/ml的细胞培养基，37℃孵育4h后，弃去MTT，每孔加入100μl的二甲基亚砜（DMSO），黑暗37℃培养2h，振荡10min，用酶标仪测定570nm波长的吸光度。 

实施例1所制备的多烯紫杉醇和TPGS协同抗肿瘤白蛋白纳米颗粒对乳腺癌细胞MCF-7的细胞毒性研究结果如图2-图4所示，结果表明，TPGS白蛋白纳米粒具有明显的细胞毒性，并且细胞毒性大于商品化的多烯紫杉醇制剂泰素帝Taxotere。 

此外，MTT实验结果说明载多烯紫杉醇TPGS白蛋白纳米粒对MCF-7细胞的毒性具有时间和浓度依赖性。 

实施例2-实施例10所制备的产品对乳腺癌细胞MCF-7的细胞毒性研究结果和实施例1制备的产品类似，结果表明TPGS白蛋白纳米粒具有明显的细胞毒性，并且细胞毒性大于商品化的多烯紫杉醇制剂泰素帝Taxotere，并且对细胞的毒性具有时间和浓度依赖性。 

实施例12、多烯紫杉醇和TPGS协同抗肿瘤白蛋白纳米颗粒对乳腺癌裸鼠模型的抑瘤效果研究 

雌性SCID裸鼠，8-12周龄、体重15-20g，购自中国医学科学院实验动物研究所。MCF-7乳腺癌细胞左侧腋下荷瘤，成瘤周期约7天。随机分成3组，每组8只小鼠，分别记录给药 前的体重、瘤径，然后用生理盐水对实施例1中的多烯紫杉醇和TPGS协同抗肿瘤白蛋白纳米颗粒复溶，尾静脉注射给药。单次给药剂量为10mg药物/1kg体重，每隔4天给药一次，连续给药16天，并设泰素帝Taxotere（安万特医药（Aventis Pharma））阳性对照组和生理盐水阴性对照组。每隔1天记录瘤径和体重。 

图5为不同给药组给药后荷瘤小鼠瘤体积的变化趋势图。从图中可以看到，在给药前，各个小组的瘤体积相当，均在100mm³左右，在给药后可见TPGS白蛋白纳米粒对乳腺癌具有良好的抑制效果，其效果优于商品化的泰素帝Taxotere和生理盐水。图6为给药后不同药物组小鼠体重的变化趋势图，从图中可以看出，注射生理盐水和TPGS白蛋白纳米粒组的平均体重出现不同程度的增加，而注射泰素帝Taxotere在实验后期体重略有下降。说明TPGS白蛋白纳米粒可以降低乳腺癌治疗的毒副作用，大大优于商品化的泰素帝。 

实施例2-实施例10所制备的产品对乳腺癌的抑瘤效果和实施例1制备的产品类似，结果为给药后TPGS白蛋白纳米粒对乳腺癌具有良好的抑制效果，其效果优于商品化的泰素帝Taxotere和生理盐水。并且实施例2-实施例10所制备的产品同样可以降低乳腺癌治疗的毒副作用。 

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。 

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。 

Claims (10)

1.一种含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒，其特征在于，包含：

2-10重量份的多烯紫杉醇；

1-15重量份的维生素E TPGS；

20-65重量份的白蛋白；

5-50重量份的冻干保护剂；以及

2-20重量份的酸性缓冲盐，

优选地，所述含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒包含：

3-6重量份的多烯紫杉醇；

8-12重量份的维生素E TPGS；

30-50重量份的白蛋白；

10-30重量份的冻干保护剂；以及

5-10重量份的酸性缓冲盐。

2.根据权利要求1所述的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒，其特征在于，所述白蛋白为人血清白蛋白或牛血清白蛋白。

3.根据权利要求1所述的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒，其特征在于，所述冻干保护剂为选自甘露醇、葡萄糖、谷氨酸、天冬氨酸、苹果氨酸、肌醇、乳糖、蔗糖、棉籽糖、海藻糖、山梨醇D、L-苏氨酸、肌醇、木糖醇、精氨酸和组氨酸的至少一种。

4.根据权利要求1所述的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒，其特征在于，所述酸性缓冲盐为选自盐酸盐、磷酸盐、醋酸盐、乳酸盐和柠檬酸盐的至少一种。

5.根据权利要求1所述的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒，其特征在于，所述含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒用于抗肿瘤和/或抗心血管病，

任选地，所述肿瘤为选自乳腺癌、宫颈癌、非小细胞肺癌和肝癌的至少一种，

任选地，所述含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒的粒径为50-200纳米。

6.一种制备权利要求1-5任一项所述的含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将2-10重量份的多烯紫杉醇溶解于2-20重量份的有机溶剂中，作为有机相；

（2）将20-65重量份的白蛋白、1-15重量份的维生素E TPGS、5-50重量份的冻干保护剂和2-20重量份的酸性缓冲盐溶解于10-100重量份的注射用水中，作为水相；

（3）将所述有机相与所述水相依次进行混合和过滤除菌处理，以便获得经过过滤除菌的混合液；以及

（4）于-20～-80摄氏度下，将所述经过过滤除菌的混合液冻结，并在-50摄氏度条件下冷冻干燥去除所述有机溶剂和所述注射用水，以便获得冻干粉末，所述冻干粉末即为所述含有多烯紫杉醇和维生素E TPGS的纳米颗粒。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，采用：

3-6重量份的多烯紫杉醇，5-10重量份的有机溶剂，8-12重量份的维生素E TPGS；30-50重量份的白蛋白；10-30重量份的冻干保护剂；5-10重量份的酸性缓冲盐，以及30-70重量份的注射用水。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述白蛋白为人血清白蛋白或牛血清白蛋白。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述冻干保护剂为选自甘露醇、葡萄糖、谷氨酸、天冬氨酸、苹果氨酸、肌醇、乳糖、蔗糖、棉籽糖、海藻糖、山梨醇D、L-苏氨酸、肌醇、木糖醇、精氨酸和组氨酸的至少一种，

任选地，所述酸性缓冲盐为选自盐酸盐、磷酸盐、醋酸盐、乳酸盐和柠檬酸盐的至少一种，

任选地，所述有机溶剂为选自乙醇、丙醇、丁醇、异丙醇、异丁醇和叔丁醇的至少一种。

10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，于高于1000rpm的搅拌状态下进行所述混合处理，

任选地，利用0.22微米的微孔滤膜器进行所述过滤除菌处理。

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