CN1840059A - 肾宝丸剂及其制备方法质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种肾宝丸剂，同时涉及该丸剂的制备方法质量控制方法。该丸剂克服现有制剂的不足，具有稳定性好、不含糖、不含防腐剂、服用携带方便、适于工业化生产、生产成本低等优点，具有广大的市场潜力。同时提供了肾宝丸剂的制备方法质量控制方法，所提供的质量控制方法可以对肾宝丸剂中的当归与川芎、蛇床子、制何首乌、淫羊藿、补骨脂进行鉴别，对肾宝丸剂中制何首乌的活性物质2，3，5，4’－四羟基二苯乙烯－2－O－b－D－葡萄糖苷、淫羊藿的活性物质淫羊藿苷、蛇床子的活性物质蛇床子素、五味子的活性物质五味子醇甲进行含量测定。

Description

肾宝丸剂及其制备方法质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种中药制剂，特别是涉及肾宝丸剂，同时涉及该药的制备方法质量控制方法。

背景技术

由肾虚而导致的阳萎，遗精，腰酸痛，畏寒怕冷、夜尿频多，神疲乏力、脱发耳鸣、妇女白带、月经过多等症，是临床上常见的常见多发病症，肾宝组方严谨，配伍周全，具有调和阴阳，温阳补肾，安神固精，扶正固本之功，因方中佐以养阴理气之品，故补而不腻，温而不燥，为四季进补之良药。临床可广泛用于上述病症，疗效显著。

肾宝丸剂是由淫羊藿、制何首乌等二十二味中药经提取加工制成的中药制剂，市场上已有肾宝合剂、肾宝糖浆，其配方和质量控制方法分别为部标中药成方制剂第十五册、第十七册收载。

现有技术存在的主要问题是：(1)液体制剂不稳定，久置易产生沉淀；(2)生产成本高，且携带运输不便；(3)现有剂型均含有防腐剂；(4)现有剂型都存在含糖量高的不足，不适于糖尿病、肝病患者等服用；(5)现有制剂的质量控制标准低，在鉴别一项仅有三个理化鉴别，专属性差，且无含量测定，难已真正控制产品质量。

本发明提供了一种肾宝丸剂，克服了上述的制剂方面的不足之处，具有稳定性好、不含防腐剂、服用携带方便、适于工业化生产、生产成本低等优点。且由于不含糖，不仅适于一般患者服用，而且适于包括糖尿病患者在内的一切不适于服用含糖药物的患者服用。同时提供了一种肾宝丸剂的质量控制方法，即可以用薄层色谱法对肾宝丸剂中的当归与川芎、蛇床子、制何首乌、淫羊藿进行鉴别，用高效液相法对肾宝丸剂中的补骨脂进行鉴别，用高效液相法测定肾宝丸剂中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷、淫羊藿苷、蛇床子素、五味子醇甲的含量。肾宝丸剂若能完全或部分采用上述鉴别和含量测定项目来进行质控，必能更好的控制产品质量，保证用药的安全有效，提高产品的质量。

发明内容

1.一种肾宝丸剂，该中药是由以下配比的中药原料经制备而成，以下的配比可按比例改变，

蛇床子28重量份              川芎28.3重量份             菟丝子66重量份

补骨脂28.5重量份      茯苓30重量份        红参20重量份

小茴香14.4重量份      五味子36重量份      金樱子94.6重量份

白术14.2重量份        当归46.8重量份      覆盆子32.9重量份

制何首乌74.4重量份    车前子16.5重量份    熟地黄94重量份

枸杞子66重量份        山药46.3重量份      淫羊藿94.6重量份

胡芦巴94重量份        黄芪51.4重量份      肉苁蓉47.3重量份

炙甘草14.2重量份

2.肾宝丸剂其制备方法包含以下步骤：

(1)配方中蛇床子、淫羊藿、当归、川芎、小茴香用50-80％的乙醇渗漉或回流提取；

(2)配方中红参用10-50％的乙醇渗漉或回流提取，药渣备用；

(3)配方中覆盆子等其余十六味与上述红参药渣一起，加水煎提，水提液可进一步采用醇沉、超滤或其它适宜的方法进行精制；

(4)上述(1)、(2)、(3)所得的提取物按常规方法制成丸剂。

3.肾宝丸剂还可以采取下述制备方法，即配方中的药材部分打粉，部分提取，所得的药材提取物与药材细粉一起，采用常规方法制成丸剂。

4.肾宝丸剂还可以采取下述制备方法，包含以下步骤：

(1)配方中蛇床子、淫羊藿、小茴香用50-80％的乙醇渗漉或回流提取；

(2)配方中红参、山药、当归、川芎粉碎成细粉备用；

(3)配方中覆盆子等其余十五味，加水煎提，水提液可进一步采用醇沉、超滤或其它适宜的方法进行精制；

(4)上述(1)、(3)所得的提取物与上述(2)所得细粉按常规方法制成丸剂。

5.肾宝丸剂还可以采取下述制备方法，包含以下步骤：

(1)配方中蛇床子、淫羊藿、当归、川芎、小茴香用50-80％的乙醇渗漉或回流提取；

(2)配方中红参、山药粉碎成细粉备用；

(3)配方中覆盆子等其余十五味，加水煎提，水提液可进一步采用醇沉、超滤或其它适宜的方法进行精制；

(4)上述(1)、(3)所得的提取物与上述(2)所得细粉按常规方法制成丸剂。

6.所述的肾宝丸剂包含各种丸剂，如丸、浓缩丸、速释浓缩丸、滴丸、微丸，及在此基础上进一步加工而制得的各种制剂，如微丸胶囊、微丸片或其它制剂。

7.工艺中蛇床子等的回流条件为：用50-80％的乙醇，加5-10倍量溶剂，回流1-3次，每次1-3小时；最佳为用70％乙醇，加6-8倍量溶剂，回流2次，每次2小时。

8.工艺中蛇床子等的渗漉条件为：用50-80％的乙醇，浸渍12-72小时，收集4-10倍量漉液；最佳为用70％的乙醇，浸渍48小时，收集6-8倍量漉液。

9.工艺中覆盆子等的水提液可进一步采用醇沉、超滤或其它适宜的方法进行精制。醇沉的方法为水提液滤过，浓缩至适量，加乙醇使含醇量为40-75％进行醇沉；最佳为水提液滤过，浓缩至相对浓度为1.16(80℃热测)的清膏，加乙醇使含醇量为65％，静置48小时，或者是将水提液滤过，浓缩至相对浓度为1.16(80℃热测)的清膏，加三倍量乙醇，沉淀48小时。超滤的方法为先将水提液滤过，滤液高速离心，上清液进行超滤，压力100-200kPa，采用CA-3型膜、UF型膜或其它适宜的膜。

10.工艺中红参提取采用10-50％的乙醇渗漉或回流提取，回流工艺：加溶剂量为5-12倍，回流1-3次，每次1-3小时；渗漉工艺：浸渍12-48小时，收集5-10倍量漉液；最佳为采用回流工艺，浸渍8小时，加8-10倍量溶剂，回流2次，每次2小时。

11.工艺中药材粉碎成细粉，通常为粉碎成过80-200目的细粉，最佳为超微粉碎成200-300目的细粉。

12.工艺中所用的辅料为：微晶纤维素、交联聚维酮、羧甲淀粉钠、聚维酮K30、微粉硅胶、低取代羟丙纤维素、羟丙基甲基纤维素、淀粉、糊精、滑石粉、硬脂酸镁、聚乙二醇类、山梨醇酐类、聚氧乙烯山梨醇酐类、硬脂酸聚烃氧40酯、倍他环糊精、泊洛沙姆、羧甲基淀粉钠、十二烷基硫酸钠、硬脂酸、硬脂酸钠、甘油明胶、虫胶或其它药剂学上可接受的辅料，可采用其中的一种或多种。

13.所制得的丸剂可用适宜的材料进行包衣，也可不包衣。

14.肾宝丸剂的质量控制方法，含有如下含量测定和定性鉴别中的一种或几种：

(1)含量测定

a.用高效液相法测定肾宝丸剂中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量；

b.用高效液相法测定肾宝丸剂中淫羊藿苷的含量；

c.用高效液相法测定肾宝丸剂中蛇床子素的含量；

d.用高效液相法测定肾宝丸剂中五味子醇甲的含量。

(2)定性鉴别

a.用薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中当归与川芎；

b.用薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中蛇床子；

c.用薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中制何首乌；

d.用薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中淫羊藿；

e.用高效液相法鉴别肾宝丸剂中补骨脂。

15.肾宝丸剂的质量控制方法，含有如下含量测定和定性鉴别中的一种或几种：

(1)含量测定

a.高效液相法测定2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙睛-水(5-70∶95-30)为流动相；紫外检测器或二极管阵列检测器。理论板数按2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷对照品，加乙醇或稀乙醇或其它适宜的溶剂制成确定浓度的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备  精密称取供试品适量，用适宜浓度的甲醇/乙醇提取，作为供试品溶液。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液适量体积，注入液相色谱仪，测定，即得。

b.高效液相法测定肾宝丸剂中淫羊藿苷含量

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙睛-水(5-70∶95-30)为流动相；紫外检测器或二极管阵列检测器。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取淫羊藿苷对照品，加甲醇或其它适宜的溶剂制成确定浓度的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备  精密称取供试品适量，加适量水溶解，用乙酸乙酯或其它适宜的溶剂提取，提取液蒸干，残渣用适宜的溶剂溶解，作为供试品溶液。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液适量，注入液相色谱仪，测定即得。

c.高效液相法测定肾宝丸剂中蛇床子素含量

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(40-85∶60-15)为流动相；紫外检测器或二极管阵列检测器。理论板数按蛇床子素峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取蛇床子素对照品，加甲醇或其它适宜的溶剂制成确定浓度的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备  精密称取供试品适量，用适宜浓度的甲醇/乙醇提取，作为供试品溶液。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液适量，注入液相色谱仪，测定即得。

d.高效液相法测定肾宝丸剂中五味子醇甲含量

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(5-30∶2-15)为流动相；紫外检测器或二极管阵列检测器。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取五味子醇甲对照品，加甲醇或其它适宜的溶剂制成确定浓度的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备  精密称取供试品适量，用适宜浓度的甲醇/乙醇提取，作为供试品溶液。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液适量，注入液相色谱仪，测定即得。

(2)定性鉴别

a.薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中当归与川芎

取供试品适量，加乙醚或其它适宜的溶剂提取，提取液作为供试品溶液，或提取液蒸/挥干，残渣加适宜的溶剂使溶解，作为供试品溶液。另取当归和川芎对照药材适量，提取后制成对照药材溶液。吸取上述供试品溶液与对照药材溶液各适量，分别点于同一硅胶G或硅胶H薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(3-20∶0.3-2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

b.薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中蛇床子

取供试品适量，加乙醚或其它适宜的溶剂提取，提取液作为供试品溶液，或提取液蒸/挥干，残渣加适宜的溶剂使溶解，作为供试品溶液。另取蛇床子素对照品适量，加溶剂适量制成对照品溶液。吸取上述供试品溶液与对照品溶液各适量，分别点于同一硅胶G或硅胶H薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(3-20∶0.5-5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

c.薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中制何首乌

取供试品适量，加乙酸乙酯或其它适宜的溶剂提取，提取液用适宜浓度的碳酸钠溶液提取，碳酸钠提取液用盐酸调pH值至1～4，再用乙酸乙酯或其它适宜的溶剂萃取，萃取液作为供试品溶液，或萃取液蒸/挥干，残渣加适宜的溶剂使溶解，作为供试品溶液。另取何首乌对照药材适量，提取后制成对照药材溶液。再取大黄素对照品适量，加溶剂适量制成对照品溶液。吸取上述供试品溶液、对照药材和对照品溶液各适量，分别点于同一硅胶G或硅胶H薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(5-25∶2-8∶0.4-2)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。

d.薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中淫羊藿

取供试品适量，加正丁醇或其它适宜的溶剂提取，提取液用氨试液洗涤，弃去氨试液，提取液作为供试品溶液，或提取液蒸/挥干，残渣加适宜的溶剂使溶解，作为供试品溶液。另取淫羊藿苷对照品，加溶剂适量制成对照品溶液。吸取上述两种溶液各适量，分别点于同一硅胶G或硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(3-30∶0.4-4∶0.4-4∶0.4-4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至显色，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

e.高效液相法鉴别肾宝丸剂中补骨脂

取供试品适量，加甲醇或其它适宜的溶剂提取，提取液作为供试品溶液。另取补骨脂素和异补骨脂素对照品适量，加溶剂适量制成对照品溶液。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(20-80∶80-20)为流动相，紫外检测器或二极管阵列检测器。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各适量体积，注入液相色谱仪，测定。供试品色谱图中主峰的保留时间应与对照品一致。

所述的提取可采用超声处理、回流提取、微波提取、振荡提取等常规方法；

2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量测定的流动相还可以是甲醇-乙腈-水(2-10∶0.5-2∶4-20)、甲醇-水(5-70∶95-30)或其它适宜的流动相；

淫羊藿苷的含量测定的流动相还可以是甲醇-水-冰醋酸(40-80∶20-60∶0.2-1)、甲醇-水(5-70∶95-30)或其它适宜的流动相；

蛇床子素的含量测定的流动相还可以是甲醇-水-四氢呋喃(30-75∶20-60∶2-10)、乙腈-水(5-70∶95-30)或其它适宜的流动相；

五味子醇甲含量测定的流动相还可以是乙腈-水(5-70∶95-30)或其它适宜的流动相；

当归与川芎的薄层色谱鉴别的展开剂还可以是石油醚-乙酸乙酯(5-25∶0.5-5)、环己烷-乙酸乙酯(5-25∶0.5-5)或其它适宜的展开剂；

蛇床子的薄层色谱鉴别的展开剂还可以是苯-乙酸乙酯(10-50∶0.3-2)、正己烷-乙酸乙酯(4-20∶0.4-4)或其它适宜的展开剂；

制何首乌的薄层色谱鉴别的展开剂还可以是氯仿-甲醇(5-15∶0.5-5)、石油醚(30-60℃)-乙酸乙酯-冰醋酸(50-150∶5-50∶0.5-5)或其它适宜的展开剂；

定性鉴别a、b、c、d中既可以采用对照品，也可以采用对照药材作对照，或两者均采用；定性鉴别e中既可以采用两种对照品，也可以仅采用其中的一种对照品作为对照。

16.一种肾宝丸剂的质量控制方法，含有如下含量测定和定性鉴别中的一种或几种：

(1)含量测定

a.高效液相法测定2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙睛-水(25∶75)为流动相；检测波长为320nm。理论板数按2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷对照品，加稀乙醇制成每1ml含20ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取供试品适量，置锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ml，注入液相色谱仪，测定即得。

b.高效液相法测定肾宝丸剂中淫羊藿苷含量

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙睛-水(30∶70)为流动相；检测波长为270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取供试品适量，加水10ml，置具塞分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取4次，每次10ml，合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液20ml，注入液相色谱仪，测定即得。

c.高效液相法测定肾宝丸剂中蛇床子素含量

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(67∶33)为流动相；检测波长为249nm。理论板数按蛇床子素峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取蛇床子素对照品，加甲醇制成每1ml含50ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取供试品适量，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理1小时，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液20ml，注入液相色谱仪，测定，即得。

d.高效液相法测定肾宝丸剂中五味子醇甲含量

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(13∶7)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取五味子醇甲对照品，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取供试品适量，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理20分钟，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ml，注入液相色谱仪，测定即得。

(2)定性鉴别

a.薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中当归和川芎

取供试品适量，加乙醚30ml，加热回流1小时，滤过.滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归和川芎对照药材各0.5g，同法制成对照药材溶液。吸取上述供试品溶液与对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

b.薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中蛇床子

取供试品适量，加乙醚30ml，加热回流1小时，滤过.滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。取蛇床子素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(7∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

c.薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中制何首乌

取供试品适量，加乙醚30ml，加热回流1小时，滤过.滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。加乙酸乙酯30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液用5％碳酸钠溶液振摇提取3次，每次20ml，合并碳酸钠提取液，用盐酸调pH值至2～3，再用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取何首乌对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述供试品溶液10μl，对照药材和对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。

d.薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中淫羊藿

取供试品适量，加乙醚30ml，加热回流1小时，滤过.滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。加正丁醇30ml，超声提取30分钟，滤过，滤液加氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，置105℃烘数分钟，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

e.高效液相法鉴别肾宝丸剂中补骨脂

取供试品适量，加甲醇40ml，超声提取30分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。另取补骨脂素和异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每1ml各含4μg的混合溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录ID)测定。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(40∶60)为流动相，检测波长为246nm。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定。供试品色谱图中主峰的保留时间应与对照品一致。

所述的提取样品或溶解提取物所用溶剂的量、超声或回流提取的时间、定容或溶解后体积、点样量或进样量、对照品的浓度可以以所述具体值为基准改变，或按比例改变。

所述的定性鉴别a、b、c、d中既可以采用对照品，也可以采用对照药材作对照，或两者均采用，定性鉴别e中既可以采用两种对照品，也可以仅采用其中的一种对照品作为对照。

所述的超声处理也可以采用回流提取、微波提取、振荡提取等常规提取方法，所述的回流提取也可以采用超声处理、微波提取、振荡提取等常规提取方法。

17.上述鉴别及含测方法，不仅可用于控制肾宝丸剂的质量，也适用于控制肾宝其它制剂。

18.肾宝丸剂中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量限度为：一次最小服用量中含制何首乌以2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷(C₂₀H₂₂O₉)计，不得少于1.3mg；淫羊藿苷的含量限度为：一次最小服用量中含淫羊藿以淫羊藿苷(C₃₃H₄₀O₁₅)计，不得少于1.5mg；蛇床子素的含量限度为：一次最小服用量中含蛇床子以蛇床子素(C₁₅H₁₆O₃)计，不得少于0.8mg；五味子醇甲的含量限度为：一次最小服用量中含五味子以五味子醇甲(C₂₄H₃₂O₇)计，不得少于0.4mg；上述含量限度为最低含量限度，可以根据生产的具体情况提高含量限度。

19.肾宝丸剂制备工艺研究

(1)红参回流提取工艺

以干膏得率及人参皂苷Re+Rg₁提取量为评价指标，对红参回流工艺进行考察，取红参粗粉100g三份，加20％乙醇浸渍8小时后，分别加入6倍、9倍、12倍溶剂，回流提取二次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩，真空干燥。结果加入6倍量溶剂，人参皂苷Re+Rg1提取量、干膏得率分别为766.37mg、54.76％，加入9倍量溶剂分别为957.22mg、60.18％，加入12倍量溶剂分别为960.38mg、65.34％。故可以认为加入溶剂9倍量时已能提尽有效成分，再增加提取次数和溶媒量，只能增加淀粉等无效成分的提出。从节约能源、降低生产成本及减少服用量考虑，优选红参回流提取工艺为：红参粉碎成粗粉，加9倍量20％乙醇浸渍8小时后，回流提取二次，每次2小时。

(2)淫羊藿、当归、蛇床子、川芎、小茴香五味药渗漉工艺考察

以干膏得率、淫羊藿苷提取量为评价指标，对淫羊藿等五味药的渗漉工艺进行考察，按原肾宝糖浆处方的量称取淫羊藿等五味212.1g三份，，分别粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶剂，浸渍48小时后，以每分钟1～3ml的速度缓缓渗漉，按试验方案，分别收集渗漉液1000ml(4.7倍量)、1500ml(7倍量)、2000ml(9.4倍量)，回收乙醇，减压浓缩，真空干燥。结果收集渗漉液1000ml淫羊藿苷提取量、干膏得率分别为598mg、7.34％，渗漉液1500ml分别为650mg、9.29％，收集渗漉液2000ml分别为667mg、10.27％。故可以认为渗漉液1500ml已能提尽有效成分，再增加提取次数和溶媒量，只能增加淀粉等无效成分的提出。从节约能源、降低生产成本及减少服用量考虑，优选淫羊藿等5味渗漉提取工艺为淫羊藿等五味粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶剂，浸渍48小时后，以每分钟1～3ml的速度缓缓渗漉，收集渗漉液7倍量。

(3)制何首乌等十六味药水提工艺

以干膏得率、二苯乙烯苷提取量为评价指标，对制何首乌等十六味药水提工艺进行考察，按原肾宝糖浆处方的1/2量称取制何首乌等16味加红参经醇提取的药渣共413.15g三份，按试验方案，分别加入不同量的水，浸泡1小时，煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液滤液减压浓缩至相对密度为1.16(80℃热测)的清膏，加乙醇使含醇量为65％，静置48小时，取上清液减压回收乙醇，减压浓缩，真空干燥。结果加入8倍量水二苯乙烯苷提取量、干膏得率分别为652mg、12.46％，加入10倍量水二苯乙烯苷提取量、干膏得率分别为725mg、14.13％，加入12倍量水二苯乙烯苷提取量、干膏得率分别为729mg、15.62％，故可以认为加水量为10倍时，已能基本提尽有效成分，再增加溶媒量，只能增加淀粉、粘液质等无效成分的提出。从节约能源、降低成本及减少服用量考虑，优选制何首乌等16味提取工艺为：制何首乌等16味加红参经醇提取的药渣，加入10倍量水浸泡1小时，煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液滤液减压浓缩至相对密度为1.16(80℃热测)的清膏，加乙醇使含醇量为65％，静置48小时。

同时，对醇沉条件为加三倍量乙醇沉淀48小时的工艺进行考察，在二苯乙烯苷提取量上，与醇沉浓度为65％的工艺无明显差别。

(4)成型工艺

肾宝丸剂的提取工艺可分为二类，一类为处方中的药材全部提取，另一类为处方中药材部分提取，部分打细粉。对于处方中药材均提取的，可以采用将提取物浓缩成稠膏，或浓缩，干燥制成干膏粉，所提的稠膏或干膏粉采用常规方法制成丸剂。对于处方中药材部分提取，部分打细粉的，将提取物浓缩成稠膏，或浓缩，干燥制成干膏粉，所得的稠膏或干膏粉与药材细粉一起，采用常规方法制成丸剂。所制得的丸剂，包括丸、浓缩丸、速释浓缩丸、滴丸、微丸，及在此基础上进一步加工而制得的各种制剂，如微丸胶囊、微丸片或其它制剂。所制得的丸剂可以为包衣丸剂也可为不包衣丸剂。

a.浓缩丸

可采用泛制法、塑制法、压制法或其它适宜的方法。

泛制法：起模是泛丸成型的关键环节，模子的好坏直接影响成品的圆整度，模子的粒度差和数目，也影响加大过程中筛选的次数和丸粒的规格等。可采用粉未直接起模法或制粒起模法，可取3-10％的药粉起模。干燥温度50-80℃。

塑制法：对于处方中药材全提取的工艺，提取所得的稠膏或干膏粉，加入适量辅料，制软材，制丸。由于干膏粉的粘性较强，需加入适量的辅料，如淀粉、硬脂酸镁等，方能顺利制丸。所用的溶剂可采用水、一定浓度的醇及其它适宜的溶剂。对于处方中药材部分提取，部分打粉的工艺，提取所得的稠膏或干膏粉，加入药材细粉及适量辅料混匀，制软材，制丸。

压制法：处方中药材提取所得的稠膏或干膏粉，加入药材细粉或/及适量辅料混匀，制粒，压丸。亦可采用全粉压制的方法。制粒的方法可采用各种常规方法，如湿法制粒、干法制粒、一步制粒等。湿法制粒时，因浸膏本身具有一定的粘性，故采用60-95％的乙醇为润湿剂。压片时可加入0.5-3％的微粉硅胶以增加颗粒的流动性。

所用的辅料为淀粉、糊精、羧甲基淀粉钠、聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、滑石粉或其它药剂学上可接受的辅料，可采用其中的一种或多种。根据所加入辅料的不同，可分为普通的浓缩丸和速释浓缩丸。

b.滴丸

由以上述二十二种药材的提取物为原料，与作为基质的可药用载体一起制备而成。

基质可采用聚乙二醇类、山梨醇酐类、聚氧乙烯山梨醇酐类、硬脂酸聚烃氧40酯、倍他环糊精、泊洛沙姆、羧甲基淀粉钠、十二烷基硫酸钠、硬脂酸、硬脂酸钠、甘油明胶、虫胶或其它药剂学上可接受的辅料，可采用其中的一种或多种。

配比：以g或kg为单位，按重量份计，药物提取物∶基质＝1∶1～1∶10。

按照配方所给出的比例，称取药物提取物和基质，将其置于加热容器内，边搅拌边加热，得到含有药物提取物和基质的熔融液/混悬液备用；调整滴丸机的温度控制系统，使滴丸机的滴头温度加热并保持在50℃～90℃，冷凝剂的温度冷却并保持在40℃～-5℃；待滴丸机滴头和冷凝柱内冷凝剂的温度分别达到所要求的温度状态时，将含有药物提取物和基质的熔融液/混悬液，置于滴丸机的滴头罐内，滴入冷凝剂中收缩成型即得。

所用的冷凝剂可以是甲基硅油、液体石蜡、植物油或其它药剂学上可接受的辅料，可采用其中的一种或多种。。

c.微丸

由以上述二十二种药材的提取物为原料，与药用辅料一起制备而成的直径小于2.5mm的各类丸剂。

辅料可采用糊精、淀粉、微晶纤维素、蔗糖、乳糖、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羧丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或其它药剂学上可接受的辅料，可采用其中的一种或多种。

配比：以g或kg为单位，按重量份计，药物提取物∶辅料＝1∶1～4∶1。

可采用各种常规的方法制备微丸，如泛丸法，造粒包衣机法、挤压一滚圆成丸法，离心一流化造丸法等。

20.肾宝丸剂定性鉴别研究

(1)当归和川芎的薄层色谱鉴别，参考《中国药典》2000年版一部项下川芎的鉴别。因当归和川芎对照药材的斑点基本一致，故本实验以当归和川芎两种对照药材为对照，阴性样品亦采用同时缺当归、川芎两味。以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，结果Rf值合适，斑点清晰，缺当归、川芎样品无干扰。展开剂采用石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯(9∶2)、环己烷-乙酸乙酯(17∶3)亦可。

(2)蛇床子的薄层色谱鉴别，本实验以以蛇床子素为对照品，环己烷-乙酸乙酯(7∶2)为展开剂，结果Rf值合适，斑点清晰，缺蛇床子样品无干扰。展开剂采用正己烷-乙酸乙酯(85∶15)、苯-乙酸乙酯(30∶1)亦可。

(3)制何首乌的薄层色谱鉴别，供试品制备先用乙酸乙酯提取，再以5％碳酸钠溶液提取，使大黄素等成分溶解于碱液中，再酸化用乙酸乙酯提取，以何首乌作对照药材，大黄素作对照品，石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)为展开剂，结果色谱斑点清晰，Rf值合适，缺制何首乌样品无干扰。展开剂采用氯仿-甲醇(8∶2)、石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯-冰醋酸(9∶1∶0.1)亦可。

(4)为淫羊藿的薄层色谱鉴别，参考中华人民共和国国家药品监督管理局标准(试行)乌阳补心糖浆[WS-10585(ZD-0585)2002]鉴别项下的方法。因处方中淫羊藿量较多，经试验采用正丁醇提取后，再用碱液洗涤的供试品溶液制备方法，以淫羊藿苷为对照品，乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂，以10％硫酸乙醇溶液为显色剂，结果色谱斑点清晰，Rf值合适，缺淫羊藿样品无干扰。

(5)为补骨脂的液相色谱鉴别。参考中华人民共和国国家药品监督管理局标准(试行)补肾益脑丸[WS-10555(ZD-0555)2002]鉴别项下的方法。先取补骨脂素和异补骨脂素的混合对照品溶液于200-400nm处扫描紫外吸收光谱，结果显示在246nm波长处有最大吸收，故选择246nm为测定波长。三批样品经甲醇超声后进样，供试品色谱中，在与混合对照品相应的位置均有色谱峰，同法制备缺补骨脂阴性样品，阴性样品色谱中，在与对照品相应的位置无色谱峰，说明阴性样品对其无干扰。流动相采用甲醇-水(60∶40)亦可。

21.肾宝丸剂含量测定研究

(1)肾宝丸剂中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖甙含量测定

a.色谱条件  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙睛-水(25∶75)为流动相；检测波长为320nm。理论板数按2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷峰计算应不低于2000。

b.对照品、供试品、阴性对照品溶液的制备  对照品溶液的制备精密称取2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷对照品，加稀乙醇制成每1ml含20ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取供试品适量，精密称定，分别置锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

缺制何首乌阴性对照溶液的制备  取缺制何首乌阴性对照0.15g，照“供试品溶液的制备”同法操作，即得缺制何首乌阴性对照溶液。

c.测定  分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、缺制何首乌阴性对照溶液各20ml，注入液相色谱仪，测定，即得。

可见供试品中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的分离度＞1.5，2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷与其它组分达到较好分离，而阴性未有干扰，不干扰成分测定。理论塔板数以2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷峰计算不低于2000。流动相采用甲醇-乙腈-水(5∶1∶9)应可。

d.对该方法进行方法学考察，结果2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷在15μg/ml～120μg/ml范围内成良好线性关系，回收率为98.99％，精密度、重复性均良好。

(2)肾宝丸剂中淫羊藿苷含量的测定

a.色谱条件  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙睛-水(30∶70)为流动相；检测波长为270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于2000。

b.对照品、供试品、阴性对照品溶液的制备

对照品溶液的制备  精密称取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取供试品适量，精密称定，分别加水10ml，置具塞分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取4次，每次10ml，合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

缺淫羊藿阴性对照溶液的制备  取缺淫羊藿阴性对照0.18g，照“供试品溶液的制备”同法操作，即得缺淫羊藿阴性阴性对照溶液。

c.测定：取对照品溶液、供试品溶液、缺淫羊藿阴性对照溶液及空白溶液(流动相)各20μl，注入液相色谱仪，测定。

可见供试品中淫羊藿苷的分离度＞1.5，淫羊藿苷与其它组分达到较好分离，而阴性未有干扰，不干扰成分测定。理论塔板数以淫羊藿苷峰计算大于2000。流动相采用甲醇-水-冰醋酸(60∶40∶0.5)亦可。

d.对该方法进行方法学考察，结果淫羊藿苷在20μg/ml～80μg/ml范围内成良好线性关系，回收率为99.98％，精密度、重复性均良好。表明本法可以用于测定肾宝丸剂中的淫羊藿苷的含量。

(3)肾宝丸剂中蛇床子素含量的测定

a.色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(67∶33)为流动相；检测波长为249nm。理论板数按蛇床子素峰计算应不低于2000。

b.对照品、供试品、阴性对照品溶液的制备

对照品溶液的制备  精密称取蛇床子素对照品，加甲醇制成每1ml含50ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取供试品适量，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理1小时，称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。

缺蛇床子阴性对照溶液的制备  取缺蛇床子阴性对照0.25g，照“供试品溶液的制备”同法操作，即得缺蛇床子阴性阴性对照溶液。

c.测定  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液20ml，注入液相色谱仪，测定，即得。

可见供试品中蛇床子素的分离度＞1.5，蛇床子素与其它组分达到较好分离，而阴性未有干扰，不干扰成分测定。理论塔板数以蛇床子素峰计算大于2000。流动相采用甲醇-水(67∶33)、甲醇-水-四氢呋喃(53∶42∶5)亦可。

d.对该方法进行方法学考察，结果蛇床子素在10μg/ml～100μg/ml范围内成良好线性关系，回收率为99.35％，精密度、重复性均良好。表明本法可以用于测定肾宝丸剂中的蛇床子素的含量。

(4)肾宝丸剂中五味子醇甲含量的测定

a.色谱条件  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(13∶7)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。

b.对照品、供试品、阴性对照品溶液的制备

对照品溶液的制备  精密称取五味子醇甲对照品，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液。

供试品溶液的制备  取供试品适量，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理20分钟，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

缺五味子阴性对照溶液的制备  取缺五味子阴性对照0.25g，照“供试品溶液的制备”同法操作，即得缺五味子阴性阴性对照溶液。

c.测定  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液20ml，注入液相色谱仪，测定，即得。

可见供试品中五味子醇甲的分离度＞1.5，五味子醇甲与其它组分达到较好分离，而阴性未有干扰，不干扰成分测定。理论塔板数以五味子醇甲峰计算大于2000。流动相采用甲醇-水(13∶7)亦可。

d.对该方法进行方法学考察，结果五味子醇甲在10μg/ml～80μg/ml范围内成良好线性关系，回收率为99.52％，精密度、重复性均良好。表明本法可以用于测定肾宝丸剂中的蛇床子素的含量。

22.肾宝丸剂含量测定中含量限度的确定

(1)2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷含量限度确定

肾宝丸剂一次最小服用量中含有制何首乌药材约0.744g，中国药典2005年版一部规定制何首乌药材中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量不得低于0.7％。以制何首乌药材中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷含量为0.7％计，当转移率为35％时，一次最小服用量中含2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷为1.82mg。结合肾宝合剂中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷含量和所研制的肾宝片、肾宝咀嚼片、肾宝颗粒、肾宝胶囊中的2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷转移率，考虑到大生产环节中的损耗等因素，将本品2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷含量限度定为：一次最小服用量中含制何首乌以2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷(C₂₀H₂₂O₉)计，不得少于1.3mg。

(2)淫羊藿含量限度确定

肾宝丸剂一次最小服用量中含有淫羊藿药材约0.946g，中国药典2005年版一部规定淫羊藿药材中淫羊藿苷的含量不得低于0.5％。以淫羊藿药材中淫羊藿含量为0.5％计，当转移率为35％时，一次最小服用量中含淫羊藿苷为1.6mg。结合肾宝合剂中淫羊藿苷含量和所研制的肾宝片、肾宝咀嚼片、肾宝颗粒、肾宝胶囊中的淫羊藿苷转移率，考虑到大生产环节中的损耗等因素，将本品淫羊藿苷含量限度定为：一次最小服用量中含淫羊藿以淫羊藿苷(C₃₃H₄₀O₁₅)计，不得少于1.4mg。

(3)蛇床子素含量限度确定

肾宝丸剂一次最小服用量中含有蛇床子药材约0.28g，中国药典2005年版一部规定蛇床子药材中蛇床子素的含量不得低于1.0％。以蛇床子药材中蛇床子素含量为1.0％计，当转移率为35％时，一次最小服用量中含蛇床子素为0.98mg。结合肾宝合剂中蛇床子素含量和所研制的肾宝片、肾宝咀嚼片、肾宝颗粒、肾宝胶囊中的蛇床子素转移率，考虑到大生产环节中的损耗等因素，将本品蛇床子素含量限度定为：一次最小服用量中含蛇床子以蛇床子素(C₁₅H₁₆O₃)计，不得少于0.8mg。

(4)五味子醇甲含量限度确定

肾宝丸剂一次最小服用量中含有五味子药材约0.36g，中国药典2005版一部规定五味子药材中五味子醇甲的含量不得低于0.40％。以五味子药材中五味子醇甲含量为0.40％计，当转移率为35％时，一次最小服用量中含五味子醇甲为0.504mg。结合肾宝合剂中五味子醇甲含量和所研制的肾宝片、肾宝咀嚼片、肾宝颗粒、肾宝胶囊中的五味子醇甲转移率，考虑到大生产环节中的损耗等因素，将本品五味子醇甲含量限度定为：一次最小服用量中含五味子以五味子醇甲(C₂₄H₃₂O₇)计，不得少于0.4mg。

具体实施方式

以下通过实施例进一步说明本发明，但并不由此而限定本发明的范围。

实施例1：浓缩丸的制备

以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、当归、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶剂，浸渍48小时后，以每分钟1～3ml的速度缓缓渗漉，收集约七倍量渗漉液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.10(80℃热测)的清膏，滤过，滤液备用；红参粉碎成粗粉，加9倍量20％乙醇浸渍8小时后，回流提取二次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.10(80℃热测)的清膏，备用；其余覆盆子等十六味，与红参经醇提取的药渣，加10倍量水浸泡1小时，煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对浓度为1.16(80℃热测)的清膏，加乙醇使含醇量为65％，静置48小时，取上清液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.10(80℃热测)的清膏，加入上述蛇床子等提取液和红参提取液，混匀，浓缩至相对密度为1.40(80℃热测)的稠膏，加入适量淀粉，制成软材，制丸，干燥，包衣，即得。

实施例2：浓缩丸的制备

以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、当归、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶剂，浸渍48小时后，渗漉，收集约七倍量渗漉液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.10(80℃热测)的清膏，滤过，滤液备用；红参粉碎成粗粉，加9倍量20％乙醇浸渍8小时后，回流提取二次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.10(80℃热测)的清膏，备用；其余覆盆子等十六味，与红参经醇提取的药渣，加10倍量水浸泡1小时，煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对浓度为1.16(80℃热测)的清膏，加乙醇使含醇量为65％，静置48小时，取上清液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.10(80℃热测)的清膏，加入上述蛇床子等提取液和红参提取液，混匀，真空干燥，粉碎得干膏粉，加入0.5-3倍量淀粉，混匀，以50％乙醇为溶剂，采用泛制法或塑制法，制成丸剂。

实施例3：浓缩丸的制备

以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、当归、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶剂，浸渍48小时后，以每分钟1～3ml的速度缓缓渗漉，收集渗漉液约5000ml，回收乙醇，浓缩至稠膏，备用；红参、山药粉碎成细粉备用；其余覆盆子等十五味，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏，加三倍量乙醇沉淀48小时，取上清液回收乙醇，浓缩至稠膏，与上述蛇床子等的稠膏混匀，真空干燥，粉碎，所得干膏粉与上述红参、山药细粉混匀，以40％乙醇为溶剂，制软材，制丸，干燥，包衣，即得。

实施例4：浓缩丸的制备

以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、当归、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶剂，浸渍48小时后，以每分钟1～3ml的速度缓缓渗漉，收集渗漉液约5000ml，回收乙醇，浓缩至稠膏，备用；红参、山药粉碎成细粉备用；其余覆盆子等十五味，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏，加三倍量乙醇沉淀48小时，取上清液回收乙醇，浓缩至稠膏，与上述蛇床子等的稠膏混匀，真空干燥，粉碎，所得干膏粉与上述红参、山药细粉混匀，用90％的乙醇制粒，干燥，压制成丸，包衣，即得。

实施例5：浓缩丸的制备

以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、当归、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶剂，浸渍48小时后，渗漉，收集约七倍量渗漉液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.10(80℃热测)的清膏，滤过，滤液备用；红参粉碎成粗粉，加9倍量20％乙醇浸渍8小时后，回流提取二次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.10(80℃热测)的清膏，备用；其余覆盆子等十六味，与红参经醇提取的药渣，加10倍量水浸泡1小时，煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对浓度为1.16(80℃热测)的清膏，加乙醇使含醇量为65％，静置48小时，取上清液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.10(80℃热测)的清膏，加入上述蛇床子等提取液和红参提取液，混匀，真空干燥，粉碎，所得干膏粉加入适量淀粉混匀，用80％的乙醇，制粒，干燥，压制成丸，包衣，即得。

实施例6：浓缩丸的制备

以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶剂，浸渍48小时后，以每分钟1～3ml的速度缓缓渗漉，收集渗漉液约5000ml，回收乙醇，浓缩至稠膏，备用；红参、山药、当归、川芎粉碎成细粉备用；其余覆盆子等十五味，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏，加三倍量乙醇沉淀48小时，取上清液回收乙醇，浓缩至稠膏，与上述蛇床子等的稠膏混匀，真空干燥，粉碎，所得干膏粉与上述红参等细粉混匀，

以水为溶剂，制软材，制丸，干燥，包衣，即得。

实施例7：速释浓缩丸剂的制备

以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、当归、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶剂，浸渍48小时后，以每分钟1～3ml的速度缓缓渗漉，收集渗漉液约5000ml，回收乙醇，浓缩至稠膏，备用；红参粉碎成粗粉，用20％乙醇作溶剂，浸渍8小时后，回流提取二次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至稠膏，备用；其余覆盆子等十六味，与红参经醇提取的药渣，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏，加三倍量乙醇沉淀48小时，取上清液回收乙醇，浓缩至稠膏，与上述蛇床子等的稠膏和红参稠膏，混匀，真空干燥，粉碎，所得干膏粉加入5-20％羧甲基淀粉钠，用90％的乙醇制粒，干燥，压制成丸，包衣，即得。

实施例8：滴丸的制备

以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、当归、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶剂，浸渍48小时后，以每分钟1～3ml的速度缓缓渗漉，收集渗漉液约5000ml，回收乙醇，浓缩至稠膏，备用；红参粉碎成粗粉，用20％乙醇作溶剂，浸渍8小时后，回流提取二次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至稠膏，备用；其余覆盆子等十六味，与红参经醇提取的药渣，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏，加三倍量乙醇沉淀48小时，取上清液回收乙醇，浓缩至稠膏，与上述蛇床子等的稠膏和红参稠膏，混匀，真空干燥，粉碎成干膏粉备用；取聚乙二醇-6000加热熔化，与上述干膏粉按1∶1的比例混匀，以液体石蜡为冷却剂，药液温度50-90℃，冷却温度10～20℃，滴速50-60滴/分，滴制成丸。

实施例9：滴丸的制备

以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、当归、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶剂，浸渍48小时后，以每分钟1～3ml的速度缓缓渗漉，收集渗漉液约5000ml，回收乙醇，浓缩至适量，备用；红参粉碎成粗粉，用20％乙醇作溶剂，浸渍8小时后，回流提取二次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至适量，备用；其余覆盆子等十六味，与红参经醇提取的药渣，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏，加三倍量乙醇沉淀48小时，取上清液回收乙醇，浓缩至适量，与上述蛇床子等的提取液和红参提取液，混匀，喷雾干燥，收集干膏粉备用；取硬脂酸聚烃氧40酯-聚乙二醇按1∶5的比例加热熔化，与上述干膏粉按1∶5的比例混匀，以液体石蜡为冷却剂，药液温度70-90℃，冷却温度15～-5℃，滴速50-60滴/分，滴制成丸。

实施例10：滴丸的制备

以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、当归、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶剂，浸渍48小时后，以每分钟1～3ml的速度缓缓渗漉，收集渗漉液约5000ml，回收乙醇，浓缩至适量，备用；红参粉碎成粗粉，用20％乙醇作溶剂，浸渍8小时后，回流提取二次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至适量，备用；其余覆盆子等十六味，与红参经醇提取的药渣，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏，加三倍量乙醇沉淀48小时，取上清液回收乙醇，浓缩至适量，与上述蛇床子等的提取液和红参提取液，混匀，喷雾干燥，收集干膏粉备用；取泊洛沙姆-聚乙二醇按1∶5的比例加热熔化，与上述干膏粉按1∶10的比例混匀，以甲基硅油为冷却剂，药液温度70-90℃，冷却温度15～-5℃，滴速50-60滴/分，滴制成丸。

实施例11：微丸的制备

以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、当归、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶剂，浸渍48小时后，以每分钟1～3ml的速度缓缓渗漉，收集渗漉液约5000ml，回收乙醇，浓缩至稠膏，备用；红参粉碎成粗粉，用20％乙醇作溶剂，浸渍8小时后，回流提取二次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至稠膏，备用；其余覆盆子等十六味，与红参经醇提取的药渣，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏，加三倍量乙醇沉淀48小时，取上清液回收乙醇，浓缩至稠膏，与上述蛇床子等的稠膏和红参稠膏，混匀，真空干燥，粉碎成干膏粉备用；取干膏粉与微晶纤维素按70～40∶30～60的比例投入流化床造粒包衣机内，以3～10％PVP水溶液为粘合剂，采用顶喷或倾喷制粒，滚圆，包衣，制成微丸。

实施例12：微丸的制备

以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、当归、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶剂，浸渍48小时后，以每分钟1～3ml的速度缓缓渗漉，收集渗漉液约5000ml，回收乙醇，浓缩至适量，备用；红参、山药粉碎成细粉备用；其余覆盆子等十五味，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏，加三倍量乙醇沉淀48小时，取上清液回收乙醇，浓缩至适量，与上述蛇床子等的提取液混匀，喷雾干燥，收集干膏粉，与上述细粉混匀，以稀乙醇为润湿剂，泛制成微丸，置45℃干燥，即得。

实施例13：微丸胶囊的制备

取制得的微丸装入胶囊中，即得微丸胶囊。

实施例14：肾宝丸剂的鉴别与含量测定(可包含下述的全部或部分)

1.鉴别

(1)取供试品适量，研细，加乙醚20ml，加热回流1小时，滤过.滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归和川芎对照药材各0.5g，同法制成对照药材溶液。吸取上述供试品溶液与对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(2)取蛇床子素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述对照品溶液与[鉴别](1)项下供试品溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯(7∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(3)取供试品适量，研细，加乙酸乙酯30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液用5％碳酸钠溶液振摇提取3次，每次20ml，合并碳酸钠提取液，用盐酸调pH值至2～3，再用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取何首乌对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述供试品溶液10μl，对照药材和对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。

(4)取供试品适量，研细，加正丁醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液加氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，置105℃烘数分钟，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(5)取供试品适量，研细，加甲醇20ml，超声30分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。另取补骨脂素和异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每1ml各含4μg的混合溶液，作为对照品溶液。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(40∶60)为流动相，检测波长为246nm。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定。供试品色谱图中主峰的保留时间应与对照品一致。

2.含量测定

(1)2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷避光操作。

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙睛-水(25∶75)为流动相；检测波长为320nm。理论板数按2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷对照品，加稀乙醇制成每1ml含20ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取供试品适量，研细，混匀，取约0.25g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ml，注入液相色谱仪，测定即得。

本品每片含制何首乌以2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷(C₂₀H₂₂O₉)计，不得少于0.6mg。

(2)淫羊藿苷

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙睛-水(30∶70)为流动相；检测波长为270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取供试品适量，研细，混匀，取约0.25g，精密称定，加水10ml，置具塞分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取4次，每次10ml，合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ml，注入液相色谱仪，测定即得。

本品每片含淫羊藿以淫羊藿苷(C₃₃H₄₀O₁₅)计，不得少于0.5mg。

(3)蛇床子素

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(67∶33)为流动相；检测波长为249nm。理论板数按蛇床子素峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取蛇床子素对照品，加甲醇制成每1ml含50ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取供试品适量，研细，混匀，取约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理1小时，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液20ml，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每片含蛇床子以蛇床子素(C₁₅H₁₆O₃)计，不得少于0.25mg；

(4)五味子醇甲

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(13∶7)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取五味子醇甲对照品，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取供试品适量，研细，混匀，取约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理20分钟，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ml，注入液相色谱仪，测定即得。

本品每片含五味子以五味子醇甲(C₂₄H₃₂O₇)计，不得少于0.15mg。

Claims (10)

1.一种肾宝丸剂，其特征在于，它由以下配比的中药原料经制备而成，以下的配比可按比例改变，

蛇床子28重量份      川芎28.3重量份    菟丝子66重量份

补骨脂28.5重量份    茯苓30重量份      红参20重量份

小茴香14.4重量份    五味子36重量份    金樱子94.6重量份

白术14.2重量份      当归46.8重量份    覆盆子32.9重量份

制何首乌74.4重量份  车前子16.5重量份  熟地黄94重量份

枸杞子66重量份      山药46.3重量份    淫羊藿94.6重量份

胡芦巴94重量份      黄芪51.4重量份    肉苁蓉47.3重量份

炙甘草14.2重量份

2.权利要求1的肾宝丸剂，其特征在于，包含各种丸剂，如丸、浓缩丸、速释浓缩丸、滴丸、微丸，及在此基础上进一步加工而制得的各种制剂，如微丸胶囊、微丸片或其它制剂。

3.权利要求1的肾宝丸剂的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)配方中蛇床子、淫羊藿、当归、川芎、小茴香用50-80％的乙醇渗漉或回流提取；

(2)配方中红参用10-50％的乙醇渗漉或回流提取，药渣备用；

(3)配方中覆盆子等其余十六味与上述红参药渣一起，加水煎提，水提液可进一步采用醇沉、超滤或其它适宜的方法进行精制；

(4)上述(1)、(2)、(3)所得的提取物按常规方法制成丸剂。

4.权利要求1的肾宝丸剂的制备方法，其特征在于，其制备方法还可采用配方中的药材部分打粉，部分提取，所得的药材提取物与药材细粉一起，采用常规方法制成丸剂。

5.权利要求1的肾宝丸剂的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)配方中蛇床子、淫羊藿、小茴香用50-80％的乙醇渗漉或回流提取；

(2)配方中红参、山药、当归、川芎粉碎成细粉备用；

(3)配方中覆盆子等其余十五味，加水煎提，水提液可进一步采用醇沉、超滤或其它适宜的方法进行精制；

(4)上述(1)、(3)所得的提取物与上述(2)所得细粉按常规方法制成丸剂。

6.权利要求1的肾宝丸剂的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)配方中蛇床子、淫羊藿、当归、川芎、小茴香用50-80％的乙醇渗漉或回流提取；

(2)配方中红参、山药粉碎成细粉备用；

(3)配方中覆盆子等其余十五味，加水煎提，水提液可进一步采用醇沉、超滤或其它适宜的方法进行精制；

(4)上述(1)、(3)所得的提取物与上述(2)所得细粉按常规方法制成丸剂。

7.权利要求1的肾宝丸剂的质量控制方法，其特征在于，含有如下含量测定和定性鉴别中的一种或几种，不仅可用于控制肾宝丸剂的质量，也适用于控制肾宝其它制剂。

(1)含量测定

a.用高效液相法测定肾宝丸剂中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量；

b.用高效液相法测定肾宝丸剂中淫羊藿苷的含量；

c.用高效液相法测定肾宝丸剂中蛇床子素的含量；

d.用高效液相法测定肾宝丸剂中五味子醇甲的含量。

(2)定性鉴别

a.用薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中当归与川芎；

b.用薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中蛇床子；

c.用薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中制何首乌；

d.用薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中淫羊藿；

e.用高效液相法鉴别肾宝丸剂中补骨脂。

8.权利要求1的肾宝丸剂的质量控制方法，其特征在于，含有如下含量测定和定性鉴别中的一种或几种，不仅可用于控制肾宝丸剂的质量，也适用于控制肾宝其它制剂。

(1)含量测定

a.高效液相法测定2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙睛-水(5-70∶95-30)为流动相；紫外检测器或二极管阵列检测器。理论板数按2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷对照品，加乙醇或稀乙醇或其它适宜的溶剂制成确定浓度的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备  精密称取供试品适量，用适宜浓度的甲醇/乙醇提取，作为供试品溶液。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液适量体积，注入液相色谱仪，测定，即得。

b.高效液相法测定肾宝丸剂中淫羊藿苷含量

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙睛-水(5-70∶95-30)为流动相；紫外检测器或二极管阵列检测器。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取淫羊藿苷对照品，加甲醇或其它适宜的溶剂制成确定浓度的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备  精密称取供试品适量，加适量水溶解，用乙酸乙酯或其它适宜的溶剂提取，提取液蒸干，残渣用适宜的溶剂溶解，作为供试品溶液。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液适量，注入液相色谱仪，测定即得。

c.高效液相法测定肾宝丸剂中蛇床子素含量

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(40-85∶60-15)为流动相；紫外检测器或二极管阵列检测器。理论板数按蛇床子素峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取蛇床子素对照品，加甲醇或其它适宜的溶剂制成确定浓度的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备  精密称取供试品适量，用适宜浓度的甲醇/乙醇提取，作为供试品溶液。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液适量，注入液相色谱仪，测定即得。

d.高效液相法测定肾宝丸剂中五味子醇甲含量

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(5-30∶2-15)为流动相；紫外检测器或二极管阵列检测器。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取五味子醇甲对照品，加甲醇或其它适宜的溶剂制成确定浓度的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备  精密称取供试品适量，用适宜浓度的甲醇/乙醇提取，作为供试品溶液。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液适量，注入液相色谱仪，测定即得。

(2)定性鉴别

a.薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中当归与川芎

取供试品适量，加乙醚或其它适宜的溶剂提取，提取液作为供试品溶液，或提取液蒸/挥干，残渣加适宜的溶剂使溶解，作为供试品溶液。另取当归和川芎对照药材适量，提取后制成对照药材溶液。吸取上述供试品溶液与对照药材溶液各适量，分别点于同一硅胶G或硅胶H薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(3-20∶0.3-2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

b.薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中蛇床子

取供试品适量，加乙醚或其它适宜的溶剂提取，提取液作为供试品溶液，或提取液蒸/挥干，残渣加适宜的溶剂使溶解，作为供试品溶液。另取蛇床子素对照品适量，加溶剂适量制成对照品溶液。吸取上述供试品溶液与对照品溶液各适量，分别点于同一硅胶G或硅胶H薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(3-20∶0.5-5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

c.薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中制何首乌

取供试品适量，加乙酸乙酯或其它适宜的溶剂提取，提取液用适宜浓度的碳酸钠溶液提取，碳酸钠提取液用盐酸调pH值至1～4，再用乙酸乙酯或其它适宜的溶剂萃取，萃取液作为供试品溶液，或萃取液蒸/挥干，残渣加适宜的溶剂使溶解，作为供试品溶液。另取何首乌对照药材适量，提取后制成对照药材溶液。再取大黄素对照品适量，加溶剂适量制成对照品溶液。吸取上述供试品溶液、对照药材和对照品溶液各适量，分别点于同一硅胶G或硅胶H薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(5-25∶2-8∶0.4-2)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。

d.薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中淫羊藿

取供试品适量，加正丁醇或其它适宜的溶剂提取，提取液用氨试液洗涤，弃去氨试液，提取液作为供试品溶液，或提取液蒸/挥干，残渣加适宜的溶剂使溶解，作为供试品溶液。另取淫羊藿苷对照品，加溶剂适量制成对照品溶液。吸取上述两种溶液各适量，分别点于同一硅胶G或硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(3-30∶0.4-4∶0.4-4∶0.4-4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至显色，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

e.高效液相法鉴别肾宝丸剂中补骨脂

取供试品适量，加甲醇或其它适宜的溶剂提取，提取液作为供试品溶液。另取补骨脂素和异补骨脂素对照品适量，加溶剂适量制成对照品溶液。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(20-80∶80-20)为流动相，紫外检测器或二极管阵列检测器。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各适量体积，注入液相色谱仪，测定。供试品色谱图中主峰的保留时间应与对照品一致。

所述的提取可采用超声处理、回流提取、微波提取、振荡提取等常规方法；

2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量测定的流动相还可以是甲醇-乙腈-水(2-10∶0.5-2∶4-20)、甲醇-水(5-70∶95-30)或其它适宜的流动相；

淫羊藿苷的含量测定的流动相还可以是甲醇-水-冰醋酸(40-80∶20-60∶0.2-1)、甲醇-水(5-70∶95-30)或其它适宜的流动相；

蛇床子素的含量测定的流动相还可以是甲醇-水-四氢呋喃(30-75∶20-60∶2-10)、乙腈-水(5-70∶95-30)或其它适宜的流动相；

五味子醇甲含量测定的流动相还可以是乙腈-水(5-70∶95-30)或其它适宜的流动相；

当归与川芎的薄层色谱鉴别的展开剂还可以是石油醚-乙酸乙酯(5-25∶0.5-5)、环己烷-乙酸乙酯(5-25∶0.5-5)或其它适宜的展开剂；

蛇床子的薄层色谱鉴别的展开剂还可以是苯-乙酸乙酯(10-50∶0.3-2)、正己烷-乙酸乙酯(4-20∶0.4-4)或其它适宜的展开剂；

制何首乌的薄层色谱鉴别的展开剂还可以是氯仿-甲醇(5-15∶0.5-5)、石油醚(30-60℃)-乙酸乙酯-冰醋酸(50-150∶5-50∶0.5-5)或其它适宜的展开剂；

定性鉴别a、b、c、d中既可以采用对照品，也可以采用对照药材作对照，或两者均采用；定性鉴别e中既可以采用两种对照品，也可以仅采用其中的一种对照品作为对照。

9.权利要求1的肾宝丸剂的质量控制方法，其特征在于，含有如下含量测定和定性鉴别中的一种或几种，不仅可用于控制肾宝丸剂的质量，也适用于控制肾宝其它制剂。

(1)含量测定

a.高效液相法测定2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙睛-水(25∶75)为流动相；检测波长为320nm。理论板数按2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷对照品，加稀乙醇制成每1ml含20ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取供试品适量，置锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ml，注入液相色谱仪，测定即得。

b.高效液相法测定肾宝丸剂中淫羊藿苷含量

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙睛-水(30∶70)为流动相；检测波长为270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取供试品适量，加水10ml，置具塞分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取4次，每次10ml，合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液20ml，注入液相色谱仪，测定即得。

c.高效液相法测定肾宝丸剂中蛇床子素含量

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(67∶33)为流动相；检测波长为249nm。理论板数按蛇床子素峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取蛇床子素对照品，加甲醇制成每1ml含50ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取供试品适量，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理1小时，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液20ml，注入液相色谱仪，测定，即得。

d.高效液相法测定肾宝丸剂中五味子醇甲含量

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(13∶7)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取五味子醇甲对照品，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备取供试品适量，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理20分钟，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ml，注入液相色谱仪，测定即得。

(2)定性鉴别

a.薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中当归和川芎

取供试品适量，加乙醚30ml，加热回流1小时，滤过.滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归和川芎对照药材各0.5g，同法制成对照药材溶液。吸取上述供试品溶液与对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

b.薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中蛇床子

取供试品适量，加乙醚30ml，加热回流1小时，滤过.滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。取蛇床子素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(7∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

c.薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中制何首乌

取供试品适量，加乙醚30ml，加热回流1小时，滤过.滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。加乙酸乙酯30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液用5％碳酸钠溶液振摇提取3次，每次20ml，合并碳酸钠提取液，用盐酸调pH值至2～3，再用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取何首乌对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述供试品溶液10μl，对照药材和对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。

d.薄层色谱法鉴别肾宝丸剂中淫羊藿

取供试品适量，加乙醚30ml，加热回流1小时，滤过.滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。加正丁醇30ml，超声提取30分钟，滤过，滤液加氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，置105℃烘数分钟，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

e.高效液相法鉴别肾宝丸剂中补骨脂

取供试品适量，加甲醇40ml，超声提取30分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。另取补骨脂素和异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每1ml各含4μg的混合溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录ID)测定。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(40∶60)为流动相，检测波长为246nm。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定。供试品色谱图中主峰的保留时间应与对照品一致。

所述的提取样品或溶解提取物所用溶剂的量、超声或回流提取的时间、定容或溶解后体积、点样量或进样量、对照品的浓度可以以所述具体值为基准改变，或按比例改变。

所述的定性鉴别a、b、c、d中既可以采用对照品，也可以采用对照药材作对照，或两者均采用，定性鉴别e中既可以采用两种对照品，也可以仅采用其中的一种对照品作为对照。

所述的超声处理也可以采用回流提取、微波提取、振荡提取等常规提取方法，所述的回流提取也可以采用超声处理、微波提取、振荡提取等常规提取方法。

10.权利要求1的肾宝丸剂的质量控制方法，其特征在于，其含量测定的定量限为：一次最小服用量中，含制何首乌以2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷(C20H22O9)计，不得少于1.3mg；含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)计，不少于1.5mg；含蛇床子以蛇床子素(C15H16O3)计，不得少于0.8mg；含五味子以五味子醇甲(C24H32O7)计，不得少于0.4mg；上述含量限度为最低含量限度，可以根据生产的具体情况提高含量限度。