CN1799576A

CN1799576A - 一种中药提取物及其制备方法和质量控制方法

Info

Publication number: CN1799576A
Application number: CN 200510200014
Authority: CN
Inventors: 代龙
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2005-01-07
Filing date: 2005-01-07
Publication date: 2006-07-12

Abstract

本发明公开了一种中药独一味的提取物，是按照特定工艺制备而得，且其中总含黄酮含量达50％以上，具有一定的技术创新性。同时，还公开了该提取物的制备方法及质量控制方法，通过这两种方法的结合，就可以得到合格的独一味提取物。

Description

一种中药提取物及其制备方法和质量控制方法

技术领域

本发明涉及来源于植物材料的药用提取物和制备方法，具体的说是独一味药材的提取物和它的制备方法，属中药领域。

背景技术

独一味，拉丁名为Lamiophlomisrotata(Benth.)Kudo，属唇形科，独一味属，仅1种，又名独步通，藏语亦称“大巴”、“打布巴”。其根及根茎或全草入药，药材表面枯黄色或黄褐色，质坚硬、干枯、气腥臭，是我国藏、蒙、纳西等民族民间常用草药之一。最早载于藏医名著《四部医典》、《月王药诊》。现有制剂独一味片的药理研究，通过止血、镇痛、抑菌，急性、亚急性毒性试验，免疫功能试验和抗肿瘤试验，证实独一味有较好的止血、镇痛和抗菌作用，且毒性小，副作用少，还能提高特异性和非特异性免疫功能。研究也证实，对独一味作用贡献最大的，是其中的独一味总黄酮，如果能从独一味药材中取得纯度较高的总黄酮，对于制剂创新是极为有利的。但事实上，能将独一味提取物中的总黄酮含量提升到50％以上(即达到新药研究中“有效部分”的水平)的方法，目前还没有。本发明正是针对这一点，进行了深入的研究。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，得到独一味的提取物，其中总黄酮的含量达50％以上。为此，发明人在研究总黄酮特性的基础上，提出独一味提取物的制备方法，主要包含如下步骤：

a、取独一味药材，煎煮2-4次，每次加6-10倍量水，每次煎煮1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成85℃时相对密度为1.10-1.30的清膏；

b、将清膏加乙醇，使溶液含醇量为50％-80％，静置12-24小时，取上清液，回收乙醇至无醇味。

c、将回收乙醇后的水液过树脂柱或聚酰胺柱，先用水和浓度为20％乙醇洗涤柱，再用浓度为35-90％乙醇洗脱，收集洗脱液，干燥，得独一味提取物。

经检验，以上提取物中的总黄酮含量可达50％～70％。基本达到了发明目的，所得到的产物也正是发明人想保护的产品。

得到初步结果后，为了细化参数，发明人进一步研究，得到详细方法：

a、取独一味药材，粉碎，煎煮3次，每次加入生药量的8倍量水，每次煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成相对密度在85℃时为1.10-1.30的清膏。

b、将清膏加乙醇，使溶液含醇量为70％，静置24小时，取上清液，回收乙醇至无醇味。

c、将上述回收乙醇后的水液过树脂柱或聚酰胺柱，先用水和浓度为20％乙醇洗涤柱，再用浓度为40-60％乙醇洗脱，收集洗脱液，干燥，得到独一味提取物。

此时检验，提取物中总黄酮含量为可达60％以上。

有一点比较关键，过柱时的水液与大孔吸附树脂或聚酰胺的体积应为1∶5-10，树脂或聚酰胺太少，就会吸附不完全，不可能得到合格产品；树脂或聚酰胺太多，必然浪费，经实验证明1∶5-10的区间是比较合适的。

另外，这里所用大孔吸附树脂的型号没有限定，可以是AB-8、D101、D201中的任一种。

在进行以上研究的同时，发明人还建立了该独一味提取物的质量控制方法，目的之一是控制产品质量；目的之二，是用这种方法来检验工艺流程每一环节是否达到精制目标的必要手段。因而，质量控制方法，无论与产品还是与制备方法，均应属同一发明构思的。

以下从二个方法来详细阐述该质量控制方案。

第一是紫外法测定总黄酮：

1.对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品20mg，置100ml量瓶中，加70％乙醇80ml，超声溶解，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得；

标准曲线的制备精密量取对照品溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置25ml量瓶中，加水至5ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟；以相应的溶液为空白。照分光光度法，在500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法取本品适量，精密称定，置100ml磨口三角瓶中，加热水25ml，搅拌并超声处理20分钟，放冷，用石油醚15ml提取一次，将水层定量转移至100ml量瓶中，再精密加入无水乙醇70ml，再超声处理10分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，以3000转/分钟离心5分钟，精密量取上清液1ml，置25ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至5ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量，计算，即得。

第二是高效液相色谱法对槲皮素的含量测定

色谱条件流动相：55∶45的甲醇-0.4％磷酸；流速1.0ml/min；检测波长370nm；柱温30℃；理论板数按槲皮素峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取总黄酮含量测定项下的本品150mg，精密称定，置25ml量瓶中，加2.5mol/L盐酸甲醇溶液20ml，超声处理30分钟，放冷，用2.5mol/L盐酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml圆底烧瓶中，于90℃水浴中加热水解30分钟，放冷，转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

由于本发明的技术方案，将独一味总黄酮含量提升到50％以上，必将给该药的药效、制剂带来重大飞跃，市场价值也会提升，因而在药学开发中具有较为重大的意义，使用本发明的提取物，配以辅料，可以较为容易地制得片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊剂和栓剂等剂型，因而，这些剂型也应在本发明的保护范围之内。

以下通过具体实施方式进一步说明本发明的技术方案。

具体实施方式

实施例

【制法】取独一味1000g，粉碎，加水煎煮三次，加水量分别为10、8、8倍，每次1小时，合并煎液，滤过(160目筛)，滤液浓缩成相对密度约为1.30(85℃)的清膏，将清膏加乙醇，使含醇量为50％，静置24小时，取上清液，回收乙醇至无醇味，水液过大孔树脂柱，分别用水、20％乙醇、60％乙醇洗脱，收集60％乙醇的洗脱液，浓缩、干燥(60℃，-0.08Mpa)，干膏粉成细粉。加交联聚乙烯吡咯烷酮60g，低取代羟丙纤维素40g，微晶纤维素100g，混匀，用75％的乙醇制粒；湿颗粒加交联聚乙烯吡咯烷酮40g，拌匀，干燥(50℃)，整粒，加微粉硅胶1g，并加交联聚乙烯吡咯烷酮适量，至500g，混匀，压成1000片，制成分散片。

【含量测定】对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品20mg，置100ml量瓶中，加70％乙醇80ml，水浴加热溶解，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0.2mg)。

标准曲线的制备精密量取对照品溶液1.0ml、2.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml，分别置25ml量瓶中，加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟；以相应的溶液为空白。照分光光度法(中国药典2000年版一部附录V B)，在500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法取本品10片，研细，取1.0g，精密称定，置100ml量瓶中，加70％乙醇70ml，置水浴上微热并时时振摇30分钟，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，放置2小时，精密量取上清液1ml，置25ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至6ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量，计算，即得。

本品每片含总黄酮以芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计，不得少于20.0mg。

实施方案二

【制法】取独一味1000g，各加10倍量水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，滤过(200目筛)，滤液减压(65℃-70℃，-0.08Mpa)浓缩成相对密度为1.12(65℃)的清膏，将清膏加乙醇，使溶液含醇量为80％，静置12小时，取上清液，回收乙醇至无醇味，将回收乙醇后的水液过聚酰胺柱，分别用水、20％乙醇和90％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，喷雾干燥，喷干粉加植物油调节总量至600g，胶体磨研磨20分钟，制成1000粒软胶囊，即得。

【含量测定】照分光光度法(中国药典2000年版一部附录V B)测定。

对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品20mg，置100ml量瓶中，加70％乙醇80ml，超声溶解，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0.2mg)。

标准曲线的制备精密量取对照品溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置25ml量瓶中，加水至5ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟；以相应的溶液为空白。照分光光度法(中国药典2000年版一部附录V B)，在500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法取本品20粒的内容物，混匀，取1.2g，精密称定，置100ml磨口三角瓶中，加热水25ml，搅拌并超声处理(功率250W，频率40KHz)20分钟，放冷，用石油醚(60？0℃)提取一次(15ml)，将水层定量转移至100ml量瓶中，再精密加入无水乙醇70ml，再超声处理(功率250W，频率40KHz)10分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，离心(3000转/分钟)5分钟，精密量取上清液1ml，置25ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至5ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量，计算，即得。

本品每粒含总黄酮以芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计，不得少于20.0mg。

实施方案三

【制法】取独一味药材，粉碎，煎煮3次，每次加入生药量的8倍量水，每次煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成相对密度在85℃时为1.10-1.30的清膏。

将清膏加乙醇适量，使溶液含醇量为70％，回收乙醇至无醇味；将上述提取液上树脂柱，先用水和浓度为20％乙醇洗涤柱，再用浓度为50％乙醇洗脱，收集洗脱液，干燥，

制成微丸，即得。

a、UV法对总黄酮的含量测定

测定法取本品适量，精密称定，置100ml磨口三角瓶中，加热水25ml，搅拌并超声处理(功率250W，频率40KHz)20分钟，放冷，用石油醚(60？0℃)提取一次(15ml)，将水层定量转移至100ml量瓶中，再精密加入无水乙醇70ml，再超声处理(功率250W，频率40KHz)10分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，离心(3000转/分钟)5分钟，精密量取上清液1ml，置25ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至5ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量，计算，即得。

b、HPLC色谱法对槲皮素的含量测定

色谱条件流动相：甲醇-0.4％磷酸(55∶45)；流速1.0ml/min；检测波长370nm；柱温30℃；理论板数按槲皮素峰计算应不低于3000。

供试品溶液的制备取总黄酮含量测定项下的本品150mg，精密称定，置25ml量瓶中，加2.5mol/L盐酸甲醇溶液20ml，超声处理(250W，40Hz)30分钟，放冷，用2.5mol/L盐酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml圆底烧瓶中，于90℃水浴中加热水解30分钟，放冷，转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

Claims

1.一种中药独一味提取物，其特征在于：该提取物是由独一味药材加水提取，提取液加乙醇进行醇沉，醇沉后的溶液浓缩，再经树脂柱或聚酰胺柱精制而得，且其总黄酮含量为50％以上。

2.权利要求1所述独一味提取物的制备方法，其特征在于采用以下步骤：

3.如权利要求2所述独一味提取物的制备方法，其特征在于采用以下步骤：

a、取独一味药材，粉碎，煎煮3次，每次加8倍量水，每次煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成85℃时相对密度为1.10-1.30的清膏。

c、将回收乙醇后的水液过树脂柱或聚酰胺柱，先用水和浓度为20％乙醇洗涤柱，再用浓度为40-60％乙醇洗脱，收集洗脱液，干燥，得独一味提取物。

4.如权利要求2或3所述独一味提取物的制备方法，其特征在于步骤c中过柱的水液与所用大孔吸附树脂或聚酰胺的体积为1∶5-10。

5.如权利要求4所述独一味提取物的制备方法，其特征在于大孔吸附树脂的型号可以是AB-8、D101或D201中的任一种。

6.权利要求1所述独一味提取物的质量控制方法，其特征在于该方法可以是如下方法中一种或二种：

a、紫外法对总黄酮的含量测定：

对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品20mg，置100ml量瓶中，加70％乙醇80ml，超声溶解，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得；

b、高效液相色谱法对槲皮素的含量测定

7.权利要求1所述的独一味提取物在制备用于活血止痛、化瘀止血的药物中的应用。

8.权利要求1所述的独一味提取物在制备片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊剂、栓剂中的应用。