CN1795888A - 猴耳环提取物用于制备抗过敏药物、食品及化妆品的应用 - Google Patents
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Abstract
提供了一种以猴耳环(Pithecellobium clypeariaBenth./Archidendron clypearia Jack.Nielsen)以及提取物为原料，以医药品、食品添加剂、健康食品及化妆品为使用范围的抗过敏活性物质。确切说本发明是提供一种以猴耳环以及提取物为原料可用于改善和治疗过敏性皮肤炎、过敏性鼻炎、花粉症、过敏性咽炎、过敏性消化道反应、遗传性过敏体质、地毯、空調、螨虫等引起的I～IV型过敏反应及过敏反应引起的各种临床症状，可以长期服用，安全、无毒副作用的医药品、食品添加剂、健康食品及化妆品及其组成物。此外，本发明也提示猴耳环提取物可以作为皮肤外用剂的组成原料，用于减轻和治疗过敏性皮肤炎，也可作为化妆品原料用于日常的皮肤保护。
Description
技术领域：
本发明涉及天然植物提取及应用领域。
背景技术：
近年，流行病学调查过敏性疾病具有逐年增加的趋势，特别是由环境原因引起的过敏性皮肤炎、过敏性鼻炎、花粉症、过敏性咽炎等过敏反应的增加趋势尤为显著，已成为不可忽视的社会现象。其问题的出现不仅由于过敏源的逐年增加、大气污染、食品添加物的滥用，而且也由于近年来人们饮食习惯的变化。过敏性疾病的治疗方法通常以消除过敏源为本，进而根据临床症状的程度、起因及发病机制进行选择性药物治疗。过敏反应根据临床引发疾病的免疫球蛋白、相关细胞等不同，一般分为4种类型。I～III型过敏症主要以体液性抗体免疫反应为主，其特征是过敏反应出现的比较快，又被称为即时型过敏反应症(immediate type allergy)；IV型过敏反应是以淋巴细胞为主的免疫反应，临床上又被称为迟发型过敏症(delayed type allergy)。
过敏性鼻炎、支气管哮喘及荨麻疹等疾病，临床上属于I型过敏反应。I型过敏反应以免疫球蛋白[Immunoglobulin E(IgE)]抗体作用为介质，由肥大细胞(mast cell)及嗜碱性白细胞(basophilic leucocyte)、游离组织胺(histamine)、白三烯[leukotrienes(LT)]等为化学递质(chemical mediator)，进而刺激血管扩张，增大血管通透性，促进支气管平滑肌收缩，提高末端神经感应等过度生物体应激反应。因此，对I型过敏性疾病的治疗，临床上主要使用抗组织胺剂及对肥大细胞释放化学递质具有抑制活性的抗过敏药物。但是，抗组织胺剂等抗过敏药物在临床使用中多数出现瞌睡、口渴、胃肠消化系统受损等副作用，长期服用也存在一定的临床安全性问题。
IV型过敏反应是与T细胞相关的迟发性过敏反应。是由胰岛细胞、巨噬细胞等免疫提呈细胞向T细胞提供抗原信息并促进感应(sensitization)，随后T细胞释放各种细胞介素，启动嗜酸性白细胞(eosinophilic leukocyte)、巨噬细胞(macrophage)，结果引起迟发型炎症反应。过敏性接触皮肤炎实际上是IV型过敏反应的一种临床代表症状。临床上对IV型过敏性疾病的治疗一般使用甾醇类外用制剂和加强生活指导的疗法。甾醇类制剂的药理作用是抑制T细胞及巨噬细胞(macrophage)分泌细胞介素，对湿疹的治疗确有一定的临床效果。但大量或长时间使用将会引起副肾皮质机能低下，出现局部皮肤萎缩、潮红、毛细血管扩张等副作用。此外，尽管甾醇类制剂在临床上常常用作抗组胺制剂使用，但其抗过敏效果也仅仅是在一定程度上减轻皮肤搔痒(itching)。近年来过敏性皮肤疾病，特别是过敏性皮肤炎在临床上逐年增加。有关过敏性皮肤炎的成因长期以来也有各种学说。近年来，基于病理和临床症状的特征，人们注意到过敏性皮肤炎并非起因于I型过敏反应，而与IV型过敏反应在病理起因上有很大的相关性。
迄今为止，人们在对过敏性疾病的病理生理进行分析的同时，也注重对其治疗药物的研制和开发。但临床应用的抗过敏制剂多数具有副作用，在效果上也仅仅局限于暂时性的缓解，而不能从根本上改善过敏性体质。现代社会带来的生活方式及环境上的变化，使得过敏性疾病逐年显示出增加的趋势。从身体健康及生活习惯角度出发，一种可以长期服用而且安全性高的用于改善或治疗过敏性疾病的健康食品或医药品的研制为人们所期待。当然，从预防观点出发，可作为日常饮料的抗过敏剂或可作为日常化妆品添加物的抗过敏剂更为理想。
中药猴耳环(Folium Pithecellobii)是豆科猴耳环属植物猴耳环(Pithecellobium clypearia Benth./Archidendronclypearia Jack.Nielsen)的干燥小枝和叶。猴耳环为乔木，分布于热带亚洲。猴耳环(Pithecellobium clypearia Benth./Archidendron clypearia Jack.Nielsen)又名围涎树、鸡三树等，其叶、种子和果实均可入药，民间用于烧伤、烫伤的治疗。市售猴耳环消炎片及消炎胶囊是以猴耳环水提取物为原料制成的。在临床上用于治疗上呼吸道感染、急性咽喉炎、急性扁桃体炎、急性肠炎等疾病，也用于治疗细菌性痢疾。国内外有关植物猴耳环的药理活性和化学成分的研究并不多，一般认为没食子酸是猴耳环抗菌消炎的活性成分(万安凤，周浪：HPLC法测定猴耳环消炎片中没食子酸的含量.中药材.23：708-708，2000.)。
近年来，人们非常关心天然物质生理活性的研究，对传统中草药及天然植物类所具有生物功能更是特别关注。传统中草药已有数千年的历史，这些传统中草药对健康的种种调节功能自古以来早以为人们所知：例如猴耳环的抗炎症作用、抗菌作用等已有报道。但对于猴耳环的抗过敏制尚无任何应用方面的探讨。
发明内容：
本发明的发明目的在于提供以猴耳环及猴耳环提取物为原料，制备一种安全性高、无毒副作用的用于预防和治疗过敏、过敏性皮肤炎，过敏性鼻炎、花粉症、过敏性咽炎、过敏性消化道反应、遗传性过敏体质、地毯、空調、螨虫等引起的I～IV型过敏反应及过敏反应引起的各种临床症状的药物。所述的药物包括有效治疗剂量的猴耳环及猴耳环提取物，以及药学上可接受的药物载体。该药物特别是对I～IV型过敏反应引起的临床症状的预防、治疗有效，例如对过敏性鼻炎、过敏性咽炎及过敏性皮肤炎及由这些过敏反应所引起的临床症状有抑制或减轻作用。
本发明的另一发明目的在于提供以猴耳环及猴耳环提取物为原料，制备用于预防、改善过敏，可以长期服用、安全性高、无毒副作用的健康食品、食品及食品添加剂的用途。日常服用含有猴耳环及猴耳环提取物的食品可以减轻和预防过敏反应引起的咽炎、花粉症症状及咳嗽等症状。
本发明的另一发明目的在于提供以猴耳环及猴耳环提取物为原料，制备用于减轻和治疗一些过敏性皮肤炎等过敏反应的安全性高、无毒副作用的皮肤外用剂或者化妆品的用途。该皮肤外用剂或者化妆品可用于日常的皮肤保护。
本发明所述的猴耳环及猴耳环提取物是采用热水或水与甲醇、乙醇等低级醇类、丙酮等极性溶剂的一种或二种以上的任意混合溶剂进行提取的。
因为市售猴耳环抗炎剂多以水提取物为原料，所以一般用水提取即可，也可用不同浓度的低级醇类、丙酮等极性溶剂或任意混合溶剂来提取。在提取时，随着醇的添加，猴耳环中活性成分的提取率会有所增加。尽管用水提取效果不如用添加了一定醇的溶剂提取，但随着水温增加以及提取时间的延长，也可以达到与醇提取法相当的结果。因此，对猴耳环中活性成分的提取而言，上述提取方法及其任意组合都可得到本发明所述的提取物。
鉴于猴耳环提取物是以药剂、健康食品或化妆品作为最终产品开发，故从安全性角度考虑提取溶剂尽量选择水或含水乙醇为宜。提取时猴儿环与溶剂的比率没有特定限制，但一般猴耳环与溶剂的比例以1∶1～50范围为宜。本发明对提取温度没有特定限制，从室温到溶剂沸点范围都可适用。当然室温、常压及在溶剂沸点范围内提取最为理想。提取时间从10秒到24小时范围都可以。在提取猴耳环提取物时，根据需要也可以在溶剂中添加碳酸氢钠、抗坏血酸钠盐(sodium ascorbate)等物质。这些提取方法不会影响猴耳环本来具有的生物活性。
本发明提供的猴耳环及猴耳环提取物的使用量一般在0.01％至50％(W/W)，因为通常饮料添加浓度一般在0.01％至50％(W/W)范围较为适宜。在这个浓度范围内，猴耳环提取物适于直接服用，容易被消费者接受。当然，作为添加物的猴耳环提取物随着加入量的增大，可能会出现苦涩感觉。其解决办法可以根据市场需要及消费者的心理要求改换剂型，例如使用片剂、颗粒剂、胶囊剂等剂型。低浓度猴耳环提取物溶液可以作为日常饮料提供给消费者。
本发明提供的猴耳环及猴耳环提取物，可以多种口服剂型投放市场，用于预防、改善和治疗过敏反应及过敏反应引起的各种临床症状。当然，猴耳环及猴耳环提取物也可以与常用的赋形剂等医药用载体结合而后制剂化。必要时也可以添加一些防腐剂、抗氧化剂(antioxidant)、着色剂、甜味剂等制剂添加物。
比较适宜的猴耳环及猴耳环提取物赋形剂，一般考虑有乳糖、白糖、D-甘露醇、淀粉、结晶纤维素等。润滑剂一般应采用硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石粉等。溶剂通常使用精制水、乙醇、丙二醇等。防腐剂一般采用氯丁醇、苄醇、二羟基乙酸等。抗氧化剂通常以亚硫酸盐、抗坏血酸等比较适宜。
本发明提供的猴耳环及猴耳环提取物，可以其原型、提取物或粉末添加到制品中用于口服。猴耳环提取物也可与其它饮料原料结合制成一定的饮料制品，如猴耳环饮料、炭酸饮料、果汁饮料、乳酸菌饮料、运动饮料、豆乳等。猴耳环提取物食品还可以考虑制成饼干、巧克力类、糖果类、口香糖类、快餐点心类、果冻点心类、面包、豆腐、酸奶酪等日常食品。
本发明中提供的猴耳环及猴耳环提取物，也可以原型、水溶液稀释后作为皮肤外用剂使用。当然也可以通过与医药用载体结合制成一定的制剂，如气雾剂、液体制剂、提取物、混悬剂、乳剂、软膏剂、半流体制剂、擦剂、洗剂等剂型提供化妆品、医药品市场的消费。
本发明提供猴耳环及猴耳环提取物作为炎症、过敏的预防、改善及治疗剂为下述实验所证明。在使用IV型过敏动物模型的药理实验中，猴耳环提取物在投药剂量达到50mg/kg以上时，即显示出有效的抑制浮肿的效果。本发明中猴耳环及猴耳环提取物的投药量，根据应用者的健康状况、年龄、性别及体重等条件可以调节。成人平均体重如以60Kg计，猴耳环及猴耳环提取物日口服量一般可以考虑在3g至10g范围内，分次服用。当然10g以上也不存在副作用等问题。
本发明以2，4-dinitrofluorobenzene(DNFB)诱发小鼠耳接触性皮肤炎作为IV型过敏反应动物的试验模型，评价猴耳环及猴耳环提取物及其所含活性成分对IV型过敏反应的抑制效果。结果显示，猴耳环提取物对DNFB诱发的小鼠耳接触性皮肤炎表现出统计学上有意义的治疗活性。此外，本发明也发现猴耳环提取物对sheep redblood cells(SRBC)诱发的小鼠迟发型足过敏性浮肿具有一定的改善效果。基于上述结果确认本发明成立。
具体实施方式：
本发明可以通过以下实施例进行详细说明，但并不仅仅局限于以下实施例。
实施例一：猴耳环提取物的制备
取猴耳环干燥叶100g，加入90℃热水2000ml浸提5分钟。提取液经纱布滤过后，将滤液在1000rpm、5分钟离心分离，回收上清液冷冻干燥即成。猴耳环叶的上述冷冻干燥提取物用于本发明的下列实施例。
实施例二：猴耳环提取物对DNFB引起小鼠耳接触性皮肤炎的改善效果
实验方法参照文献(Claman HN.and Jaffee BD.：Desensitization of contact allergy to DNFB in mice.I.Description of a model system.J.Immunol.，131：2682-2686，1983.)、使用雄性7周龄昆明种小鼠，饲养一周后进行实验。小鼠10只/组，经由背部皮下注射1.5％的2，4-DNFB(1-fluor-2，4-dinitro-benzene：DNFB，Merck)乙醇溶液100μl作为抗原使之增敏(sensitization)。注射2，4-DNFB 5天后增敏(sensitization)成立，第6天在小鼠右耳上涂1％2，4-DNFB-橄榄油溶液作为抗原攻击，使小鼠产生耳缘接触性皮肤炎。24小时后，用直径8mm打孔器取下耳缘，测定耳缘/8mm重量差及比较浮肿程度。猴耳环提取物于增敏(sensitization)前一天到2，4-DNFB攻击当天连续7天经口给药。对照组喂以同体积蒸馏水。结果以student t-test作显著差异性检定，如表1所示。与蒸馏水对照组2，4-DNFB诱发耳缘浮肿重量相比，猴耳环提取物连续7天经口给药，对小鼠耳缘浮肿显示出一定的抑制效果，并呈剂量依存关系。
表一：猴耳环提取物对DNFB诱发小鼠耳缘接触性皮肤炎的影响
| 组别 | 动物数 | 重量(mg/8mm耳缘) |
| 正常小鼠(-DNFB) | 10 | 17.9±0.4 |
| H2O对照组(+DNFB) | 10 | 31.8±2.1 |
| 猴耳环提取物50mg/kg(+DNFB) | 10 | 27.2±1.6 |
| 猴耳环提取物100mg/kg(+DNFB) | 10 | 23.6±0.9(p＜0.05) |
| 猴耳环提取物200mg/kg(+DNFB) | 10 | 21.8±1.3(p＜0.05) |
实施例三：猴耳环提取物对DNFB誘発小鼠耳接触性皮肤炎血管渗漏性亢進的改善効果
同实施例二所述、1％ 2，4-DNFB-橄榄油溶液作为抗原攻击23小时、按0.1ml/10g体重剂量向小鼠尾静脉内注射1％埃文斯兰(Evans blue)生理盐水溶液。注射埃文斯兰生理盐水一小时候后，用直径8mm打孔器取下耳缘，参照katayama方法(A new method forextract ion of extravasated dye in the skin and the influenceof fasting stress on passive cutaneous anaphylaxis in guineapigs and rats.Microbiol.Immunol.，22：89-101，1978.)，将耳缘放入1ml的1N KOH水溶液中，37℃下浸泡24小时后，添加9ml0.6N磷酸-丙酮(5∶13)溶液，充分搅拌后离心分离(3000rpm/15分钟)。取出上清液于620nm波长处测定吸光度，计算埃文斯兰量作为血管通透性指标，分析判断浮肿情况。猴耳环提取物于增敏前一天到2，4-DNFB攻击当天连续7天经口给药。对照组喂以同体积蒸馏水。结果以student t-test作显著差异性检定。实验结果如表2所示，与蒸馏水对照组2，4-DNFB诱发耳缘血管渗漏性相比，猴耳环提取物连续7天经口给药，对小鼠耳缘血管渗漏性显示出一定的抑制效果，并呈剂量依存关系。
表二：猴耳环提取物对DNFB诱发小鼠耳缘血管渗漏性亢进的抑制效果
| 组别 | 动物数 | 埃文斯兰渗漏(leakage)(μg/8mm耳缘) |
| 正常小鼠(-DNFB) | 10 | -- |
| H2O对照组(+DNFB) | 10 | 5.79±0.72 |
| 猴耳环提取物50mg/kg(+DNFB) | 10 | 4.48±1.02 |
| 猴耳环提取物100mg/kg(+DNFB) | 10 | 4.06±0.69(p＜0.05) |
| 猴耳环提取物200mg/kg(+DNFB) | 10 | 2.68±1.40(p＜0.01) |
实施例四：猴耳环提取物对sheep red blood cells(SRBC)誘発小鼠迟发型足过敏性浮腫的改善効果
参照文献方法(Lagrange，P.H.，Mackaness，G.B.andMiller，T.E.：Influence of dose and route of antigen injectionon the immunological induction of cells.J.Exp.Med.139：528-542，1974.)、使用雄性7周龄昆明種小鼠，饲养一周后进行实验。小鼠10只/组，右后肢足掌皮下注射棉羊红血球(SRBC)107 cells/25μl作为抗原增敏(sensitization)。4天后，左后肢足掌皮下以108 cells/25μl SRBC作为抗原注射再次攻击。抗原攻击24小时后使用专门的标准尺(gauge)测定足掌厚度，计算浮肿率。猴耳环提取物于增敏(sensitization)前一天到用SRBC攻击当天连续5天经口给药。对照组给以同容量蒸馏水。实验结果以studentt-test作显著性差异检定。如表2所示，与蒸馏水对照组SRBC诱发小鼠迟发型足掌浮肿相比，猴耳环提取物连续5天经口给药，显示出一定的剂量依存性抑制效果。
表三：猴耳环提取物对SRBC诱发小鼠迟发型足掌浮肿的抑制效果
| 组别 | 动物数 | 足掌浮肿(mm) |
| 正常小鼠(-SRBC) | 10 | 3.26±0.24 |
| H2O对照组(+SRBC) | 10 | 3.62±0.21 |
| 猴耳环提取物50mg/kg(+SRBC) | 10 | 3.420.15(p＜0.05) |
| 猴耳环提取物100mg/kg(+SRBC) | 10 | 3.32±0.23(p＜0.01) |
| 猴耳环提取物200mg/kg(+SRBC) | 10 | 3.33±0.09(p＜0.005) |
实施例五：猴耳环提取物对passive cutaneous anaphylaxis(PCA)反应的改善效果
参照文献方法(Tada T.and Okumura K.：Regulation ofhomocytotropic antibody formation in the rat.J.Immunol.，106：1002-1011，1971.)使用猪回虫提取物结合dinitrophenyl基、制成抗原物質dinitrophenylated Ascaris suum extract(DNP-As)。抗血清是以Tada & Okumura的上述文献方法制成免疫大鼠血清。小鼠耳缘PCA反応参照文献方法(Inagaki N.，Goto S.，Nagai H.and Koda A.：Mouse ear PCA as a model for evaluatingantianaphylactic agents.Int.Arch.Allergy Immunol.，74：91-92，1984.)使用雄性7周龄昆明種小鼠，饲养一周后进行实验。小鼠10匹/组，小鼠耳缘皮下注射10μ1的用生理塩水1000倍希釈抗DNP-As血清、增敏48小時後、向小鼠尾静脉内注射0.25ml/head的含有0.25mg DNP-As的0.5％Evans blue生理塩水溶液、誘発PCR反応。注射一小时候后，用直径8mm打孔器取下耳缘，测定耳缘/8mm重量差及比较浮肿程度。並参照katayama方法(A new method for extraction of extravasated dye in the skinand the influence of fasting stress on passive cutaneousanaphylaxis in guinea pigs and rats.Microbiol.Immunol.，22：89-101，1978.)，将耳缘放入1ml的1N KOH水溶液中，37℃下浸泡24小时后，添加9ml 0.6N磷酸-丙酮(5∶13)溶液，充分搅拌后离心分离(3000rpm/15分钟)。取出上清液于620nm波长处测定吸光度，计算埃文斯兰量作为血管通透性指标，分析判断浮肿情况。猴耳环提取物于抗血清增敏前一天到DNP-As抗原攻击当天连续4天经口给药。对照组喂以同体积蒸馏水。实验结果如表4，5所示，与蒸馏水对照组PCR诱发耳缘浮肿重量及血管渗漏性相比，猴耳环提取物连续4天经口给药，显示出一定的抑制效果，并呈剂量依存关系。
表四：猴耳环提取物对PCA反応诱发小鼠耳缘浮腫的影响
| 组别 | 动物数 | 重量(mg/8mm耳缘) |
| 正常小鼠(-DNFB) | 10 | 16.5±1.4 |
| H2O对照组(+DNFB) | 10 | 27.4±2.9 |
| 猴耳环提取物50mg/kg(+DNFB) | 10 | 24.6±1.3(p＜0.05) |
| 猴耳环提取物100mg/kg(+DNFB) | 10 | 21.2±3.9(p＜0.001) |
| 猴耳环提取物200mg/kg(+DNFB) | 10 | 19.5±2.1(p＜0.001) |
表五：猴耳环提取物对PCA反応诱发小鼠耳缘血管渗漏性亢進的抑制效果
| 组别 | 动物数 | 埃文斯兰渗漏(leakage)(μg/8mm耳缘) |
| 正常小鼠(-DNFB) | 10 | -- |
| H2O对照组(+DNFB) | 10 | 4.17±1.64 |
| 猴耳环提取物50mg/kg(+DNFB) | 10 | 3.83±1.52 |
| 猴耳环提取物100mg/kg(+DNFB) | 10 | 3.42±0.50 |
| 猴耳环提取物200mg/kg(+DNFB) | 10 | 2.94±0.32(p＜0.05) |
Claims (6)
1、猴耳环及猴耳环提取物用于制备治疗或改善过敏及过敏引起的临床症状的药物的用途。
2、猴耳环及猴耳环提取物用于制备治疗或改善过敏及过敏引起的临床症状的食品的用途。
3、猴耳环及猴耳环提取物用于制备治疗或改善过敏及过敏引起的临床症状的化妆品的用途。
4、根据权利要求1或2或3所述的用途，其特征在于：所述的猴耳环及猴耳环提取物为原料可用于改善和治疗过敏性皮肤炎、过敏性鼻炎、花粉症、过敏性咽炎、过敏性消化道反应、遗传性过敏体质、地毯、空调、螨虫等引起的I～IV型过敏反应及过敏反应引起的各种临床症状，也可作化妆品原料用于日常的皮肤保护，可以长期服用，安全、无毒副作用的医药品、食品添加剂、健康食品及化妆品或它们的组成物。
5、根据权利要求1或2或3所述的用途，其特征在于：所述的猴耳环提取物是采用热水或水与低级醇类、极性溶剂的一种或二种以上的任意混合溶剂进行提取的。
6、根据权利要求1或2或3所述的用途，其特征在于：所述的猴耳环及猴耳环提取物的使用量为0.01％至50％重量比。
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