CN1769420A - 复合微生物菌剂hxm及制备方法 - Google Patents

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CN1769420A CN 200510047277 CN200510047277A CN1769420A CN 1769420 A CN1769420 A CN 1769420A CN 200510047277 CN200510047277 CN 200510047277 CN 200510047277 A CN200510047277 A CN 200510047277A CN 1769420 A CN1769420 A CN 1769420A
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Abstract

复合微生物菌剂及制备方法，其主要应用于生物有机肥、发酵有机肥的生产；每克淀粉－红糖或麸皮－米糠或草炭－膨润土载体上吸附有酿酒酵母菌株A和菌株B、粉状毕赤酵母菌株C和菌株D、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、植物乳杆菌的混合菌剂；各菌株间无拮抗现象，在解磷、解钾、固氮的基础上，注重有机物质的发酵分解和微生物代谢产物的作用，由该菌剂制得的肥料有机物质发酵充分，可产生天然植物源杀虫剂，抗病效果好，肥效好，可生产无公害、绿色食品和有机食品，对环境也有保护的作用。

Description

复合微生物菌剂HXM及制备方法
技术领域：本发明涉及复合微生物菌剂及制备方法，其主要应用于生物有机肥、发酵有机肥生产。
背景技术：随着微生物技术的发展，更多的功能菌的被人们发现利用，各种菌之间的互生、协同作用得到了深入研究，单一的功能菌逐步向多功能菌方向发展，现在的微生物菌剂多为几种功能菌株简单的拼凑在一起，很少对菌与菌之间可能存在的相互的影响加以研究，这往往会出现菌种多但效果不佳的情况，现有技术中对微生物的研究多用在无机矿物质的解磷、解钾、固氮上，没有对有机物质的发酵分解和微生物新陈代谢进行研究和应用。
另外、在现有农业生产中存在以下问题，农产品质量差，蔬菜产品中硝酸盐含量超标，农药残留高，严重危及人们的健康；由于不科学使用化肥、农药，不仅造成土壤环境恶化，地力下降，农作物产量高而不稳，高而不优，而且严重破坏生态环境。
发明内容：本发明的目的在于提供一种复合微生物菌剂，该菌剂在解磷、解钾、固氮的基础上，注重有机物质的发酵分解和微生物代谢产物的作用，由该菌剂制得的肥料有机物质发酵充分，肥效好，可生产无公害、绿色食品和有机食品，对环境也有保护的作用。
复合微生物菌剂，每克淀粉-红糖或麸皮-米糠或草炭-膨润土载体上吸附有酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiace)菌株A 2.8～5.2×108个数和酿酒酵母菌株B  1.7～3.1×108个数、粉状毕赤酵母〔Pichia farinose(Lindner)Hanxen〕菌株C1.12～2.08×108个数和粉状毕赤酵母菌株D 1.4～2.6×108个数、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)2.1～3.9×108个数、腊样芽孢杆菌(Bacillus cereus)1.4～2.6×108个数、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)1.4～2.6×108个数、植物乳杆菌(Lactobcillus plantarum)2.1～3.9×108个数的混合菌剂；
酿酒酵母菌株A和菌株B分别为酿酒酵母的一种亚菌株：
菌株A在PH6～6.5时生理活性较高；
菌株B在PH6.5～7.5时生理活性较高；
毕赤酵母菌株C和菌株D分别为粉状毕赤酵母的一种亚菌株：
菌株C在PH6.0～6.5时生理活性较高；
菌株D在PH7.0～7.5时生理活性较高；
复合微生物菌剂所述的载体有三种配方，其成分及按重量份配比分别为：
淀粉-红糖          99～96∶1～4；
或麸皮-米糠        60～40∶40～60；
或草炭-膨润土      30～70∶70～30；
复合微生物菌剂的制备方法，该方法包括菌种的培养和混合，其步骤如下：
1)酿酒酵母菌株A和菌株B的培养
斜面培养
培养基的配方：PGY蛋白胨0.5克，牛肉膏0.5克，酵母膏0.5克，吐温800.5滴，葡萄糖1克，琼脂2克，蒸馏水100毫升，PH6.8～7.0；PDA制法去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，蒸馏水1升，将马铃薯洗净，去皮，切块，放入水中，煮沸30分钟，经纱布过滤，滤液加水至1升，加糖和琼脂，溶解后分装三角瓶或试管，高温高压灭菌20分钟；
按微生物领域常规操作进行：
活化→一级放大→二级放大→摇床放大；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时进行载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
2)粉状毕赤酵母菌株C和菌株D的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
3)枯草芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
4)腊样芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
5)巨大芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
6)植物乳杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为1.5～3亿/ml个数时载体吸附；
当载体上有效活菌数超过2亿/克具备混合条件；
将具备条件的附有菌种的载体配料，按载体的重量份配比为：
酿酒酵母菌株A∶酿酒酵母菌株B∶粉状毕赤酵母菌株C∶粉状毕赤酵母菌株D∶枯草芽孢杆菌∶腊样芽孢杆菌∶巨大芽孢杆菌∶植物乳杆菌为19～21∶11～13∶7～9∶8～12∶13～17∶8～12∶8～12∶13～17；混合均匀；
在无菌条件下，进行自然固态堆积发酵，当温度保持35-38℃，持续24～36小时，进行低温干燥，干燥温度不高于55℃，当含水量≤20％，测定有效活菌总数和杂菌率；当有效活菌总数≥20亿/克，杂菌率≤10％，含水量≤20％时，常温常压真空包装。
(1)酿酒酵母、粉状毕赤酵母的繁殖与形态特征
表1  酿酒酵母、粉状毕赤酵母的繁殖与形态特征
  菌株   细胞形态   细胞大小(um)   繁殖方式         液体特征            菌落形态        假菌丝形成
  芽殖   裂殖   表面膜醭   质地   沉淀   质地   质地   颜色   表面   边缘   子囊   非结合子囊   结合子囊   子囊孢子形态
  酿酒酵母   椭圆棒状   1-4x1.5-15   -   +   +   松散   +   松散   松脆   乳白   粗糙皱折   波浪   +   -   椭圆
  粉状毕赤酵母   椭圆   2-4x3-7   +   -   -   +   致密   粘液   奶油   平滑无纹   平滑    -   -
(2)酿酒酵母、粉状毕赤酵母的生理生化特征
表2  酿酒酵母、粉状毕赤酵母的生理生化特征
  菌株              碳水化合物的发酵                碳源化合物的同化
  葡萄糖   半乳糖   蔗糖   麦芽糖   乳糖   棉子糖   半乳糖   L-山梨酸   蔗糖   麦芽糖   乳糖   棉子糖
  酿酒酵母   +   -   -   -   -   -   +   -   -   -   -   -
  粉状毕赤酵母   +   +   +   +   -   +   +   -   +   +   -   +
续表2  酿酒酵母、粉状毕赤酵母的生理生化特征
  菌株   可溶性淀粉   D-木糖   L-阿拉伯糖   D-核酸   D-甘露醇   肌醇   甘油   D-山梨糖
  酿酒酵母    -   +   -   +   +   -   +   +
  粉状毕赤酵母    -   -   -   -   -   -   -   -
续表2  酿酒酵母、粉状毕赤酵母的生理生化特征
  菌株   碳源化合物的同化   氮源化合物的同化   无维生素培养基生长
  琥珀酸   柠檬酸   杨梅苷   硫酸胺   硝酸盐   L-氨酸   肌酸
  酿酒酵母   +   +   +   +   -   +   +   +
  粉状毕赤酵母   -   -   -   +   -   -   +
续表2  酿酒酵母、粉状毕赤酵母的生理生化特征
  菌株   抗放线菌酮10×10-6   类淀粉化合物形成   50％葡萄糖生长   尿酶试验   重氮基兰B   吐温水解   10％NaCl生长
  酿酒酵母    -    -   +    -   +    -   +
  粉状毕赤酵母    -    -   +    -   -    -   -
(3)枯草芽孢杆菌、腊样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌的形态、生理、生化反应
表3  枯草芽孢杆菌、腊样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌的形态、生理、生化反应
  菌株   革兰氏染色   细胞大小(um)   芽孢位置   孢囊膨胀   触酶   厌氧生长   VP反应   VP培养基PH   产酸
  葡萄糖   L-阿拉伯糖   D-木糖
  枯草芽孢杆菌   G+   0.6-0.9X2.0-4.0   中生   不膨胀   +   -   +   5.5   +   +   +
  腊样芽孢杆菌   G+   1.0-1.2X   中生   不膨   +   +   +   5.7   +   -   -
  3.0-5.0   胀
  巨大芽孢杆菌   G+   1.2-2.5X3.5   中生   不膨胀   +  -  -   6.2   +   +   +
续表3  枯草芽孢杆菌、腊样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌的形态、生理、生化反应
  菌株            产        酸               利       用
  D-甘露醇   蔗糖   纤维二糖   麦芽糖   乳糖   乙酸盐   柠檬酸盐   丙酸盐   苹果酸盐   琥珀酸盐
  枯草芽孢杆菌   +   +   +   +   -   -   +   +   +   +
  腊样芽孢杆菌   -   +   +   +   +   +   +   +   +   -
  巨大芽孢杆菌   +   +   +   +   -   +   +   +   +   +
续表3  枯草芽孢杆菌、腊样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌的形态、生理、生化反应
Figure A20051004727700071
(注：+阳性，-阴性，(+)弱阳性，a50％-80％菌株呈阳性)
(4)植物乳杆菌的生理生化反应
表4  植物乳杆菌的生理生化反应结果
  草兰氏染色   细胞大小um   OF试验   葡萄糖产气   氧化酶   接触酶   生长因子   硝酸还原
  G+   0.7-0.8X2.8   F型    -   -   +   +    -
续表4  植物乳杆菌的生理生化反应结果
  产乳酸                          产         酸   生长温度℃
  阿拉伯糖   葡萄糖   纤维＝糖   乳糖   麦芽糖   核糖   木糖   甘油   15   45
  +   +   +   +   +   +   +   -   -   +   N
本发明的有益效果：本发明复合微生物菌剂，各菌株间无拮抗现象，在解磷、解钾、固氮的基础上，注重有机物质的发酵分解和微生物代谢产物的作用，由该菌剂制得的肥料有机物质发酵充分，可产生天然植物源杀虫剂，抗病效果好，肥效好，可生产无公害、绿色食品和有机食品，对环境也有保护的作用，其证明如下
1、复合微生物菌剂微生物及其生物有机肥安全性检验
复合微生物菌剂中所列微生物均取得了中国科学院微生物所的鉴定。其生物有机肥经北京市劳动卫生职业病防治研究所作毒理检测，LD506000mg/g证明为低毒物质，可判定为对人畜无害。山东省潍坊市卫生防疫站对其生物有机肥中铬、汞、镉、铅、砷的检测，符合无害化标准。
2、复合微生物菌剂中芽孢杆菌发酵液中植物激素产生情况
表5  复合微生物菌剂中植物激素的产生量              (单位：ug/ml)
  项目   次黄嘌呤(H)   腺嘌呤苷(Ade)   N6-异戊烯基腺苷   6-苄氨基嘌呤   吲哚乙酸(LAA)   总含量
  (PA)   (6-BA)
  复合微生物菌剂   43.4   2.8   15.3   ＜1.0   13.6   75.1
表5中所示复合微生物菌剂能产生多种植物激素。利用这些菌株制成的生物有机肥施用于作物后，将促进作物根系发达，植物细胞分裂和叶绿素形成，使叶片浓绿，光合作用增强，作物抗性增强，对作物生长有明显的促进作用。
1)提高农作物根系活力，增大吸收面积
农作物生长发育所必需的大量元素和微量元素，除C、H、O外，都是通过根系吸收后输送到地上部分的。因此根系活力状况和根系量直接影响农作物生长发育。对于盆栽试验作物，随机取5盆，每盆取3株，分别测量根长度和根系量。切取根尖，用∝-萘胺氧化法测定根系活力。
表6复合微生物菌剂肥对作物根系生长的影响
  项目   处理   黄瓜   小麦   玉米   大豆   芸豆
  次生根数量(条)   复合微生物菌剂肥   10.3   12.6   55.2   20.7   18.7
  复合微生物菌剂肥+化肥   11.2   11.7   50.8   18.4   18.6
  化肥   8.7   10.3   46.3   16.3   16.3
  对比例   7.4   9.8   32.8   10.5   11.6
次生根长度(cm) 复合微生物菌剂肥 12.7 10.8 26.5 18.7 24.1
  复合微生物菌剂肥+化肥   10.8   9.4   26.3   18.5   19.8
  化肥   9.7   9.3   24.2   16.8   18.7
  对比例   9.0   9.2   19.8   12.7   14.6
表7 复 合微生物菌剂肥对作物根系活力的影响        (单位：ug/g.FW.h)
 处理   黄瓜   小麦   玉米   大豆   芸豆
 复合微生物菌剂肥   1.57   1.78   2.13   1.66   1.74
 复合微生物菌剂肥+化肥   1.46   1.64   2.12   1.53   1.72
 化肥   1.37   1.47   1.84   1.42   1.63
 对比例   1.26   1.42   1.76   1.27   1.38
从表6、表7看出，所试作物施用复合微生物菌剂肥根系量和根系活力较之施用化肥和空白对比例都有不同程度的增加，黄瓜次生根数量增加1.6～2.9条，次生根长度增加3～3.7cm；根系活力提高14.60％～24.60％；小麦次生根数量增加2.3～2.8条，次生根长度增加1.5～1.6cm，根系活力提高21.09％～25.35％；玉米次生根数量增加8.9～22.4条，次生根长度增加2.3～6.7cm，根系活力提高15.76％～21.02％；大豆次生根数量增加4.4～10.2条，次生根长度增加1.9～6cm，根系活力提高16.9％～30.71％；芸豆次生根数量增加2.4～7.1条，次生根长度增加5.4～9.5cm，根系活力提高6.75％～26.09％。根系活力的增强和吸收面积的增大对改善农作物植株营养带来积极影响。
2)改善植株营养状况，保证植株健壮生长
植株营养状况是产量的物质基础，通过对植株叶片中氮、磷、钾含量进行分析来判定。对于盆栽试验作物，随机取5盆，每盆取3株，取功能叶，沿主叶脉两侧用打孔器打取相应部位的叶片，针形叶用剪刀剪取，消化定容后用722分光光度计测定。
表8  复合微生物菌剂肥对植株叶片营养的影响(单位.ug/cm2.叶片)
  作物   处理   氮(N)   磷(P2O5)  钾(K2O)  钙(CaO)  镁(MgO)
  黄瓜   复合微生物菌剂肥   184.3   56.5  36.7  136.4  102.3
  复合微生物菌剂肥+化肥   175   51.4  32.4  141.3  93.4
  化肥   143.7   47.3  28.7  124.7  87.3
  对比例   138.7   37.6  23.6  98.6  79.5
  小麦   复合微生物菌剂肥   774.3   152.4  47.4  30.5  10.4
  复合微生物菌剂肥+化肥   753.2   148.7  46.8  29.7  9.8
  化肥   697.4   134  45.3  28.4  9.4
  对比例   689.5   120  43.5  23.1  9.3
  小油菜   复合微生物菌剂肥   221.6   71.2  39.6  155.4  30.7
  复合微生物菌剂肥+化肥   201.4   70.5  38.4  156.8  29.4
  化肥   198.3   65.4  30.7  155.3  25.7
  对比例   176   55.4  26.3  154  20.1
  菠菜   复合微生物菌剂肥   210.4   66.7  38.7  148.5  30.8
  复合微生物菌剂肥+化肥   208.7   60.4  38.4  140.4  28.7
  化肥   187.6   58.6  32.7  132.5  28.3
  对比例   176.3   53.2  30.1  127.4  25.9
从表8中看出，施复合微生物菌剂肥的作物叶片中营养元素含量较之施用化肥和空白对照都有不同程度的增加，对于黄瓜，氮、磷、钾、钙、镁分别增加28.25％、32.88％、19.4％、50.27％、28.27％和55.51％、9.38％、38.34％、17.18％、28.68％；对于小麦，氮、磷、钾、钙、镁分别增加11.03％、12.30％、13.73％、27％、4.63％和8.97％、7.39％、32.03％、10.64％、11.83％；对于小油菜，氮、磷、钾、钙、镁分别增加11.75％、25.91％、8.87％、28.52％、28.99％和50.57％、0.06％、0.91％、19.46％、52.74％；对于菠菜，氮、磷、钾、钙、镁分别增加12.15％、19.34％、13.82％、25.38％、18.35％和28.57％、12.08％、16.56％、8.83％、18.92％。说明，施用复合微生物菌剂肥后，植株的营养状况得到良好改善，与土壤供肥能力的提高相吻合。钾和钙的增加有助于提高植株的抗逆性，镁的增加为叶绿素的合成创造了物质条件。
3)增加叶绿素含量，增大叶面积系数，光合作用提高
施用复合微生物菌剂制的生物有机肥后，叶色浓绿。为判定叶绿素含量，对于盆栽作物，随机取5盆，每盆取3株，取相应功能叶部位，用打孔器或用剪刀剪取相应部位叶片，捣碎，用乙醇提取定容后，用722分光光度计比色测定。
表9  复合微生物菌剂肥对叶绿素含量的影响    (单位：ug/cm2.叶片)
  作物  处理   叶绿素含量   增加(±％)
  黄瓜  复合微生物菌剂肥   29.46   +16.44
 复合微生物菌剂肥+化肥   28.74   +13.6
 对比例   25.30   -
  小麦  复合微生物菌剂肥   127.6   +37.1
 复合微生物菌剂肥+化肥   131.24   +41.01
 对比例   93.07   -
  小油菜  复合微生物菌剂肥   28.76   +56.56
 复合微生物菌剂肥+化肥   27.32   +48.72
 对比例   18.37   -
  菠菜  复合微生物菌剂肥   31.55   +28.99
 复合微生物菌剂肥+化肥   29.73   +21.55
 对比例   24.46   -
施用复合微生物菌剂肥后，植株生长健壮，为判定叶面积系数，对于盆栽作物，采用上述方法，测叶面积，折算成1m2作物叶面积。
表10  复合微生物菌剂肥对叶面积系数的影响
  项目   黄瓜   小麦   小油菜
  复合微生物菌剂肥   对比例  增加(±％)   复合微生物菌剂肥   对比例  增加(±％)   复合微生物菌剂肥   对比例  增加(±％)
  叶面积系数   0.94   0.65  +44.62   1.98   1.67  +18.56   5.87   4.65  +26.24
从表9、表10看出，供试作物叶绿素含量、叶面积系数均有不同程度的增加，叶绿素含量增加16.44％～56.56％，提高了光能利用率，叶面积系数增加了18.56％～44.62％，增大了光合面积，也就是增加了光合产物的合成。
4)降低呼吸强度，减少养分消耗，保证物质积累
为了判定施用复合微生物菌剂肥后作物呼吸强度，对于上述盆栽作物，随机取5盆，每盆取3株，剪取相应部位的功能叶称重，悬挂于盛有NaOH的三角瓶中密封，引出一支拉弯的移液管插入混有2、3滴蓝墨水的水中，记录1、2小时内水柱上升高度，以此测定呼吸强度。
表11  复合微生物菌剂肥对作物呼吸强度的影响    (单位：ml/h)
  项目                黄瓜              小麦               八油菜
  复合微生物菌剂肥   对比例   增加(±％)   复合微生物菌剂肥   对比例   增加(±％)   复合微生物菌剂肥   对比例   增加(±％)
  呼吸强度   0.35   0.42   -16.67   0.23   0.32   -28.13   0.32   0.40   -20
从表11看出，施用复合微生物菌剂肥后，供试作物的呼吸强度均有不同程度的降低，降低16.67％～28.13％。呼吸强度减弱，表明净光合速率增强，净光合产物积累增加，为产量提高提供了保障。
5)刺激作物生长
复合微生物菌剂发酵产物中含有多种植物激素。为了验证其作用，在实验室内，采用麦芽鞘伸长法测定复合微生物菌剂发酵液对麦芽鞘的刺激生长情况。将麦芽鞘切段浸泡于蒸馏水中，冲洗去内源激素，将10段串成一串，放入盛有复合微生物菌剂发酵液100倍数溶液的培养器中，重复3次。另做一组对照，在25℃黑暗条件下保持恒温25℃下24小时，取出测其长度。
表12  复合微生物菌剂发酵产物对麦芽鞘伸长的影响    (单位：mm)
  项目   复合微生物菌剂发酵产物   对比例   增加(±％)
  麦芽鞘长度   36.68   30.30   +21.06
从表12看出，复合微生物菌剂发酵产物对麦芽鞘伸长有促进作用，增加21.06％，说明复合微生物菌剂发酵液中植物激素含量足以刺激作物的生长。
6)抗病作用
农作物施用复合微生物菌剂肥具有明显防治病害作用。室内试验表明，复合微生物菌剂纯培养时对小麦全蚀病、黄瓜枯萎病、姜瘟病和棉花黄萎等都有明显抑制作用。
总之，施用复合微生物菌剂肥的作物，根系发达，营养充足，叶绿素含量、叶面积系数都有不同程度的增加，光合作用增强，呼吸消耗减少，生长发育加快，抗病性强，对提高作物的经济产量，特别是对产量的提高和抗逆性的增强都非常显著。
3、复合微生物菌剂生物有机肥的应用效果
1)在蔬菜上的应用效果
A对蔬菜产量的影响
试验于2003-2004年，在山东省寿光市农业高科技示范园、青州市东高镇、昌邑市都昌街办、南逄、安丘市贾戈街办、寿光孙集镇进行。大棚黄瓜品种津春3号，番茄品种为山春，韭菜品种为791号雪韭，圆葱品种为OP黄，芸豆品种为双冠王。韭菜、圆葱、生姜为露地栽培，其它为冬暖式大棚栽培。复合微生物菌剂类生物有机肥为N+P2O5+K2O≥4％，有机质≥30％，有效活菌总数≥1亿/克。亩用量240-600kg。
根据等养分施肥原则，配合有机肥(烘干鸡粪)或化肥(三元复合肥15-15-15)。小区面积20m2，随机区组排列，重复3次。对试验结果进行方差分析和LSR法检验。
表13复合微生物菌剂生物有机肥对蔬菜产量的影响
  作物   处理   小区产量(kg)   折亩产量(kg)   增产率(％)   差异显著性
  1   2   3   平均   0.05   0.01
  黄瓜   菌剂肥   189.2   186.5   189.8   188.5   6283.6   +8.90   a   A
  酵素菌肥   184.7   186.2   181.1   184.0   6133.6   +6.30   a   A
  菌剂肥+化肥   190.4   192.3   185.5   189.4   6313.6   +9.42   a   A
  有机肥+化肥(对比例)   176.4   163.3   179.6   173.1   5770.3   -   b   B
  番茄   菌剂肥   156.3   153.4   157.4   155.7   5190.3   +7.37   a   A
  酵素菌肥   152.7   149.7   150.6   151   5033.6   +4.14   a b   A B
  菌剂肥+化肥   158.4   157.3   155.6   157.1   5236.9   +8.34   a   A
  对比例   147.2   138.6   149.2   145   4833.6   -   b   B
  韭菜(每茬)   菌剂肥   69.3   71.2   70.7   70.4   2346.8   +34.35   a   A
  酵素菌肥   39.7   69.2   66.3   68.4   2280.1   +30.53   a   A
  菌剂肥+化肥   75.3   77.6   75.1   76   2533.5   +45.04   a   A
  对比例   52.7   60   44.5   52.4   1746.8   -   b   B
  生姜   菌剂肥   151   147   149   149   4966.9   +29.56   a   A
  酵素菌肥   134   139   141   138   4600.2   +20   a   A
  菌剂肥+化肥   147   134   128   136.3   4543.6   +18.52   a   A
  对比例   120   116   109   115   3833.5   -   b   B
  圆葱   菌剂肥   173   181   187   180   6010.3   +12.90   a   A
  菌剂肥+化肥   184   197   203   194.7   6490.3   +21.92   a   A
  对比例   153   162   164   159.7   5323.6   -   b   B
  芸豆   菌剂肥   104   112   102   106   3533.5   +29.74   a   A
  菌剂肥+化肥   97   98   101   98.7   3290.2   +20.81   a   A
  对比例   84   82   79   81.7   2723.5   -   b   B
注：制表原因，上表用菌剂肥代表复合微生物菌剂生物有机肥。
从表13看出，施用复合微生物菌剂类生物有机肥的蔬菜均有明显的增产效果，黄瓜增产6.30％～9.42％，番茄增产4.14％～8.34％，韭菜增产30.53％～45.04％，生姜增产18.52％～29.56％，增产效果优于日本酵素菌肥，圆葱增产12.90％～21.92％，芸豆增产20.81％～29.74％。复合微生物菌剂类生物有机肥即可以单独使用，也可以与其它肥料配合使用。
B对蔬菜植物学性状的影响
施肥20天后，对试验蔬菜每小区随机取5株，测定株高、自然开展度、叶片数、叶片大小、茎粗、功能叶、节间长度等。
从表14可以看出，施用复合微生物菌剂类生物有机肥后，所列各项均有改善，表明该肥对植株生长发育有良好的促进作用。
表14复合微生物菌剂生物有机肥对蔬菜植物学性状的影响
  作物   处理   株高(cm)   茎粗(mm)   开展度(cm)   叶片数   叶片长×宽(cm)   节间长度(cm)   分枝数
  黄瓜   菌剂肥   102.3   6.7   46.7   17.3   15.2×12.7   8.2   -
  酵素菌肥   98.7   6.8   43.2   15.2   14.3×11.6   7.3   -
  菌剂肥+化肥   104.6   6.5   50.3   16.8   15.3×13.2   8.8   -
  对比例   83.2   5.8   38.6   13.4   13.6×10.3   8.0   -
  番茄   菌剂肥   52.9   6.3   32.7   13.3   27.6×12.4   4.2   -
  酵素菌肥   50.4   6.4   30.4   12.5   25.2×12.5   3.8   -
  菌剂肥+化肥   53.4   6.0   35.2   13.0   30.1×12.7   4.7   -
  对比例   47.6   5.7   28.7   11.8   22.3×10.8   4.1   -
芸豆   菌剂肥   67.2   4.2   27.6   16.3   -   3.8   5.2
  菌剂肥+化肥   72.3   3.8   28.4   15.0   -   4.6   4.3
  对比例   60.4   3.5   25.3   14.3   -   4.2   3.7
注：制表原因，上表用菌剂肥代表复合微生物菌剂生物有机肥。
C对蔬菜品质的影响
施用复合微生物菌剂生物有机肥的蔬菜，由于光合作用强，促进了植物体内各种酶的合成，加速养分吸收，不仅产量增加，而且营养成分也有一定程度的增加。
表15  复合微生物菌剂生物有机肥对蔬菜产品器官营养成分的影响
  作物   处理   Vc(mg/100g.Fw)   糖含量(％)   叶绿素含量(mg/g)   可滴定酸度   胡萝卜素含量(mg/g)
  含量   增加(％)   蔗糖   葡萄糖   果糖
  黄瓜   菌剂肥   8.96   +2.28   -   1.12   1.03   0.043   -   -
  对比例   8.76   -   -   1.04   0.87   0.039   -   -
  番茄   菌剂肥   14.24   +22.97   0.42   1.38   1.38   -   0.38   -
  对比例   11.58   -   0.41   1.32   1.24   -   0.35   -
  韭菜   菌剂肥   58.42   +7.57   -   1.09   1.12   -   -   3.29
  对比例   54.31   -   -   0.84   0.89   -   -   3.18
注：制表原因，上表用菌剂肥代表复合微生物菌剂生物有机肥。
2)在果树上的应用
表16  复合微生物菌剂生物有机肥对苹果(红富士)产量的影响
  处理   单株产量(kg)   亩产量(kg)   增产率(％)   差异显著性
  2000年   2001年   2000年   2001年   累计   0.05   0.01
  菌剂肥   29.4   41.4   1940.4   2732.4   4672.8   +6.47   a   A
  酵素菌肥   28.2   40.3   1861.2   2659.8   4521   +3.01   a b   A B
  菌剂肥+化肥   29.5   42.4   1947   2798.4   4745.4   +8.12   a
  对比例   27   39.5   1782   2607   4389   -   b   B
注：制表原因，上表用菌剂肥代表复合微生物菌剂生物有机肥
从表16看出，通过对山东省栖霞市2003-2004年连续定点定株试验表明，在等养分含量施肥条件下，施用复合微生物菌剂生物有机肥的苹果增产6.47％，复合微生物菌剂生物有机肥与化肥配合效果最好，增产率8.12％，酵素菌肥增产率为3.01％。
3)对其它作物的增产效果
表17  复合微生物菌剂生物有机肥的肥效试验统计
  供试作物   试验点数   增产机率(％)   增产幅度(％)   增产幅度的95％可信区间(kg/亩)
  小麦   12   100   +6.84～+12.46   34.2～67.2
  玉米   16   100   +7.25～+15.27   35.2～53.8
  花生   6   100   +10.33～+47.45   21.2～50.8
  棉花   4   100   +6.03～+12.67   16.5～20.4
  黄烟   7   100   +8.42～+11.64   20.7～32.6
  甘薯   2   100   +12.74～+15.68   317.5～330.6
  大豆   3   100   +6.37～+8.64   29.6～40.3
  马铃薯   2   100   +23.95～+27.46   323.6～427.3
  谷子   3   100   +12.62～+16.47   30.6～42.7
  西瓜   6   100   +12.8+4～+20.8   547.9～724.6
从表17所示，复合微生物菌剂生物有机肥在10种作物61个试验点表明，所有使用复合微生物菌剂生物有机肥的作物较之等养分含量施肥全部增产，增产幅度6.03％～47.45％。
复合微生物菌剂生物有机肥内含作物生长发育所必需的大量元素、微量元素，还含有数量庞大的活性有益微生物、植物源杀虫剂等。
施用复合微生物菌剂生物有机肥。作物抗逆性增强，抗虫抗病，增加叶绿素含量，促进光合作用，降低呼吸消耗，促进生长发育。所试作物粮食增产6.84％～16.47％，蔬菜增产7.37％～45.04％，苹果增产6.47％～8.12％，经济作物增产6.03％～47.45％，可提高作物产品品质，增加蔬菜中维生素和其它养分含量，水分少，耐贮藏，腐烂少，口感好，风味佳。
推广复合微生物菌剂技术，进而生产生物有机肥，不仅具有显著的经济效益，还有良好的生态效益和可观的社会效益。对于推进农业标准化生产和农副产品的国际化具有深远的意义。
具体实施方式：复合微生物菌剂，其每克淀粉-红糖或麸皮-米糠或草炭-膨润土载体上吸附有酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiace)菌株A 2.8～5.2×108个数和酿酒酵母菌株B 1.7～3.1×108个数、粉状毕赤酵母(Pichiafarinose(Lindner)Hanxen〕菌株C 1.12～2.08×108个数和粉状毕赤酵母菌株D1.4～2.6×108个数、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)2.1～3.9×108个数、腊样芽孢杆菌(Bacillus cereus)1.4～2.6×108个数、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)1.4～2.6×108个数、植物乳杆菌(Lactobcillus plantarum)2.1～3.9×108个数的混合菌剂；
酿酒酵母菌株A和菌株B分别为酿酒酵母的一种亚菌株：
菌株A在PH6～6.5时生理活性较高；
菌株B在PH6.5～7.5时生理活性较高；
毕赤酵母菌株C和菌株D分别为粉状毕赤酵母的一种亚菌株：
菌株C在PH6.0～6.5时生理活性较高；
菌株D在PH7.0～7.5时生理活性较高；
复合微生物菌剂所述的载体有三种配方，其成分及按重量份配比分别为：
淀粉-红糖          99～96∶1～4；
或麸皮-米糠        60～40∶40～60；
或草炭-膨润土      30～70∶70～30；
复合微生物菌剂的制备方法，该方法包括菌种的培养和混合，其步骤如下：
实施例1用淀粉-红糖作载体吸附，淀粉红糖的配比96∶4，具体步骤：
1)酿酒酵母菌株A和菌株B的培养
斜面培养
培养基的配方：PGY蛋白胨0.5克，牛肉膏0.5克，酵母膏0.5克，吐温800.5滴，葡萄糖1克，琼脂2克，蒸馏水100毫升，PH6.8～7.0；PDA制法去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，蒸馏水1升，将马铃薯洗净，去皮，切块，放入水中，煮沸30分钟，经纱布过滤，滤液加水至1升，加糖和琼脂，溶解后分装三角瓶或试管，高温高压灭菌20分钟；
按微生物领域常规操作进行：
活化→一级放大→二级放大→摇床放大；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时进行载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
2)粉状毕赤酵母菌株C和菌株D的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
3)枯草芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
4)腊样芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
5)巨大芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
6)植物乳杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为1.5～3亿/ml个数时载体吸附；
当载体上有效活菌数超过2亿/克具备混合条件；
将具备条件的附有菌种的载体配料，按载体的重量份配比为：
酿酒酵母菌株A∶酿酒酵母菌株B∶粉状毕赤酵母菌株C∶粉状毕赤酵母菌株D∶枯草芽孢杆菌∶腊样芽孢杆菌∶巨大芽孢杆菌∶植物乳杆菌为19∶13∶7∶8∶17∶12∶8∶13；混合均匀；
在无菌条件下，进行自然固态堆积发酵，当温度保持35-38℃，持续24～36小时，进行低温干燥，干燥温度不高于55℃，当含水量≤20％，测定有效活菌总数和杂菌率；当有效活菌总数≥20亿/克，杂菌率≤10％，含水量≤20％时，常温常压真空包装。
实施例2用淀粉-红糖作载体吸附，淀粉红糖的配比99∶1，具体步骤
1)酿酒酵母菌株A和菌株B的培养
斜面培养
培养基的配方：PGY蛋白胨0.5克，牛肉膏0.5克，酵母膏0.5克，吐温800.5滴，葡萄糖1克，琼脂2克，蒸馏水100毫升，PH6.8～7.0；PDA制法去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，蒸馏水1升，将马铃薯洗净，去皮，切块，放入水中，煮沸30分钟，经纱布过滤，滤液加水至1升，加糖和琼脂，溶解后分装三角瓶或试管，高温高压灭菌20分钟；
如微生物领域常规操作进行：
活化→一级放大→二级放大→摇床放大；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时进行载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
2)粉状毕赤酵母菌株C和菌株D的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
3)枯草芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
4)腊样芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
5)巨大芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
6)植物乳杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为1.5～3亿/ml个数时载体吸附；
当载体上有效活菌数超过2亿/克具备混合条件；
将具备条件的附有菌种的载体配料，按载体的重量份配比为：
酿酒酵母菌株A∶酿酒酵母菌株B∶粉状毕赤酵母菌株C∶粉状毕赤酵母菌株D∶枯草芽孢杆菌∶腊样芽孢杆菌∶巨大芽孢杆菌∶植物乳杆菌为21∶13∶7∶8∶17∶12∶12∶17；混合均匀；
在无菌条件下，进行自然固态堆积发酵，当温度保持35-38℃，持续24～36小时，进行低温干燥，干燥温度不高于55℃，当含水量≤20％，测定有效活菌总数和杂菌率；当有效活菌总数≥20亿/克，杂菌率≤10％，含水量≤20％时，常温常压真空包装。
实施例3用淀粉-红糖作载体吸附，淀粉红糖的配比98∶2，具体步骤：
1)酿酒酵母菌株A和菌株B的培养
斜面培养
培养基的配方：PGY蛋白胨0.5克，牛肉膏0.5克，酵母膏0.5克，吐温800.5滴，葡萄糖1克，琼脂2克，蒸馏水100毫升，PH6.8～7.0；PDA制法去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，蒸馏水1升，将马铃薯洗净，去皮，切块，放入水中，煮沸30分钟，经纱布过滤，滤液加水至1升，加糖和琼脂，溶解后分装三角瓶或试管，高温高压灭菌20分钟；
按微生物领域常规操作进行：
活化→一级放大→二级放大→摇床放大；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时进行载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
2)粉状毕赤酵母菌株C和菌株D的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
3)枯草芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
7)腊样芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
8)巨大芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
9)植物乳杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为1.5～3亿/ml个数时载体吸附；
当载体上有效活菌数超过2亿/克具备混合条件；
将具备条件的附有菌种的载体配料，按载体的重量份配比为：
酿酒酵母菌株A∶酿酒酵母菌株B∶粉状毕赤酵母菌株C∶粉状毕赤酵母菌株D∶枯草芽孢杆菌∶腊样芽孢杆菌∶巨大芽孢杆菌∶植物乳杆菌为20∶12∶8∶10∶15∶10∶10∶15；
混合均匀；
在无菌条件下，进行自然固态堆积发酵，当温度保持35-38℃，持续24～36小时，进行低温干燥，干燥温度不高于55℃，当含水量≤20％，测定有效活菌总数和杂菌率；当有效活菌总数≥20亿/克，杂菌率≤10％，含水量≤20％时，常温常压真空包装。
实施例4用麸皮-米糠作载体吸附，麸皮米糠的配比60∶40具体步骤
1)酿酒酵母菌株A和菌株B的培养
斜面培养
培养基的配方：PGY蛋白胨0.5克，牛肉膏0.5克，酵母膏0.5克，吐温800.5滴，葡萄糖1克，琼脂2克，蒸馏水100毫升，PH6.8～7.0；PDA制法去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，蒸馏水1升，将马铃薯洗净，去皮，切块，放入水中，煮沸30分钟，经纱布过滤，滤液加水至1升，加糖和琼脂，溶解后分装三角瓶或试管，高温高压灭菌20分钟；
按微生物领域常规操作进行：
活化→一级放大→二级放大→摇床放大；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时进行载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
2)粉状毕赤酵母菌株C和菌株D的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
3)枯草芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
4)腊样芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
5)巨大芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
6)植物乳杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为1.5～3亿/ml个数时载体吸附；
当载体上有效活菌数超过2亿/克具备混合条件；
将具备条件的附有菌种的载体配料，按载体的重量份配比为：
酿酒酵母菌株A∶酿酒酵母菌株B∶粉状毕赤酵母菌株C∶粉状毕赤酵母菌株D∶枯草芽孢杆菌∶腊样芽孢杆菌∶巨大芽孢杆菌∶植物乳杆菌为21∶11∶9∶12∶13∶8∶8∶13；
混合均匀；
在无菌条件下，进行自然固态堆积发酵，当温度保持35-38℃，持续24～36小时，进行低温干燥，干燥温度不高于55℃，当含水量≤20％，测定有效活菌总数和杂菌率；当有效活菌总数≥20亿/克，杂菌率≤10％，含水量≤20％时，常温常压真空包装。
实施例5用麸皮-米糠作载体吸附，麸皮米糠的配比40∶60，具体步骤
1)酿酒酵母菌株A和菌株B的培养
斜面培养
培养基的配方：PGY蛋白胨0.5克，牛肉膏0.5克，酵母膏0.5克，吐温800.5滴，葡萄糖1克，琼脂2克，蒸馏水100毫升，PH6.8～7.0；PDA制法去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，蒸馏水1升，将马铃薯洗净，去皮，切块，放入水中，煮沸30分钟，经纱布过滤，滤液加水至1升，加糖和琼脂，溶解后分装三角瓶或试管，高温高压灭菌20分钟；
如微生物领域常规操作进行：
活化→一级放大→二级放大→摇床放大；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时进行载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
2)粉状毕赤酵母菌株C和菌株D的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
3)枯草芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
4)腊样芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
5)巨大芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
6)植物乳杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为1.5～3亿/ml个数时载体吸附；
当载体上有效活菌数超过2亿/克具备混合条件；
将具备条件的附有菌种的载体配料，按载体的重量份配比为：
酿酒酵母菌株A∶酿酒酵母菌株B∶粉状毕赤酵母菌株C∶粉状毕赤酵母菌株D∶枯草芽孢杆菌∶腊样芽孢杆菌∶巨大芽孢杆菌∶植物乳杆菌为21∶13∶7∶8∶13∶12∶8∶13；混合均匀；
在无菌条件下，进行自然固态堆积发酵，当温度保持35-38℃，持续24～36小时，进行低温干燥，干燥温度不高于55℃，当含水量≤20％，测定有效活菌总数和杂菌率；当有效活菌总数≥20亿/克，杂菌率≤10％，含水量≤20％时，常温常压真空包装。
实施例6用麸皮-米糠作载体吸附，麸皮-米糠的配比50∶50具体步骤
2)酿酒酵母菌株A和菌株B的培养
斜面培养
培养基的配方：PGY蛋白胨0.5克，牛肉膏0.5克，酵母膏0.5克，吐温800.5滴，葡萄糖1克，琼脂2克，蒸馏水100毫升，PH6.8～7.0；PDA制法去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，蒸馏水1升，将马铃薯洗净，去皮，切块，放入水中，煮沸30分钟，经纱布过滤，滤液加水至1升，加糖和琼脂，溶解后分装三角瓶或试管，高温高压灭菌20分钟；
按微生物领域常规操作进行：
活化→一级放大→二级放大→摇床放大；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时进行载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
2)粉状毕赤酵母菌株C和菌株D的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
3)枯草芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
4)腊样芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
5)巨大芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
6)植物乳杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为1.5～3亿/ml个数时载体吸附；
当载体上有效活菌数超过2亿/克具备混合条件；
将具备条件的附有菌种的载体配料，按载体的重量份配比为：
酿酒酵母菌株A∶酿酒酵母菌株B∶粉状毕赤酵母菌株C∶粉状毕赤酵母菌株D∶枯草芽孢杆菌∶腊样芽孢杆菌∶巨大芽孢杆菌∶植物乳杆菌为20∶12∶8∶10∶13∶12∶8∶17；混合均匀；
在无菌条件下，进行自然固态堆积发酵，当温度保持35-38℃，持续24～36小时，进行低温干燥，干燥温度不高于55℃，当含水量≤20％，测定有效活菌总数和杂菌率；当有效活菌总数≥20亿/克，杂菌率≤10％，含水量≤20％时，常温常压真空包装。
实施例7用草炭-膨润土作载体吸附，草炭膨润土的配比70∶30具体步骤
1)酿酒酵母菌株A和菌株B的培养
斜面培养
培养基的配方：PGY蛋白胨0.5克，牛肉膏0.5克，酵母膏0.5克，吐温800.5滴，葡萄糖1克，琼脂2克，蒸馏水100毫升，PH6.8～7.0；PDA制法去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，蒸馏水1升，将马铃薯洗净，去皮，切块，放入水中，煮沸30分钟，经纱布过滤，滤液加水至1升，加糖和琼脂，溶解后分装三角瓶或试管，高温高压灭菌20分钟；
如微生物领域常规操作进行：
活化→一级放大→二级放大→摇床放大；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时进行载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
2)粉状毕赤酵母菌株C和菌株D的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
3)枯草芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
4)腊样芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
5)巨大芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
6)植物乳杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为1.5～3亿/ml个数时载体吸附；
当载体上有效活菌数超过2亿/克具备混合条件；
将具备条件的附有菌种的载体配料，按载体的重量份配比为：
酿酒酵母菌株A∶酿酒酵母菌株B∶粉状毕赤酵母菌株C∶粉状毕赤酵母菌株D∶枯草芽孢杆菌∶腊样芽孢杆菌∶巨大芽孢杆菌∶植物乳杆菌为21∶12∶9∶8∶13∶10∶10∶13；混合均匀；
在无菌条件下，进行自然固态堆积发酵，当温度保持35-38℃，持续24～36小时，进行低温干燥，干燥温度不高于55℃，当含水量≤20％，测定有效活菌总数和杂菌率；当有效活菌总数≥20亿/克，杂菌率≤10％，含水量≤20％时，常温常压真空包装。
实施例7用草炭-膨润土作载体吸附，草炭膨润土的配比60∶40具体步骤
1)酿酒酵母菌株A和菌株B的培养
斜面培养
培养基的配方：PGY蛋白胨0.5克，牛肉膏0.5克，酵母膏0.5克，吐温800.5滴，葡萄糖1克，琼脂2克，蒸馏水100毫升，PH6.8～7.0；PDA制法去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，蒸馏水1升，将马铃薯洗净，去皮，切块，放入水中，煮沸30分钟，经纱布过滤，滤液加水至1升，加糖和琼脂，溶解后分装三角瓶或试管，高温高压灭菌20分钟；
如微生物领域常规操作进行：
活化→一级放大→二级放大→摇床放大；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时进行载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
2)粉状毕赤酵母菌株C和菌株D的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
3)枯草芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
4)腊样芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
5)巨大芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
6)植物乳杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为1.5～3亿/ml个数时载体吸附；
当载体上有效活菌数超过2亿/克具备混合条件；
将具备条件的附有菌种的载体配料，按载体的重量份配比为：
酿酒酵母菌株A∶酿酒酵母菌株B∶粉状毕赤酵母菌株C∶粉状毕赤酵母菌株D∶枯草芽孢杆菌∶腊样芽孢杆菌∶巨大芽孢杆菌∶植物乳杆菌为20∶12∶8∶12∶15∶12∶8∶15；混合均匀；
在无菌条件下，进行自然固态堆积发酵，当温度保持35-38℃，持续24～36小时，进行低温干燥，干燥温度不高于55℃，当含水量≤20％，测定有效活菌总数和杂菌率；当有效活菌总数≥20亿/克，杂菌率≤10％，含水量≤20％时，常温常压真空包装。
实施例8用草炭-膨润土作载体吸附，草炭膨润土的配比50∶50具体步骤
1)酿酒酵母菌株A和菌株B的培养
斜面培养
培养基的配方：PGY蛋白胨0.5克，牛肉膏0.5克，酵母膏0.5克，吐温800.5滴，葡萄糖1克，琼脂2克，蒸馏水100毫升，PH6.8～7.0；PDA制法去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，蒸馏水1升，将马铃薯洗净，去皮，切块，放入水中，煮沸30分钟，经纱布过滤，滤液加水至1升，加糖和琼脂，溶解后分装三角瓶或试管，高温高压灭菌20分钟；
如微生物领域常规操作进行：
活化→一级放大→二级放大→摇床放大；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时进行载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
2)粉状毕赤酵母菌株C和菌株D的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
3)枯草芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
4)腊样芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
5)巨大芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
6)植物乳杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为1.5～3亿/ml个数时载体吸附；
当载体上有效活菌数超过2亿/克具备混合条件；
将具备条件的附有菌种的载体配料，按载体的重量份配比为：
酿酒酵母菌株A∶酿酒酵母菌株B∶粉状毕赤酵母菌株C∶粉状毕赤酵母菌株D∶枯草芽孢杆菌∶腊样芽孢杆菌∶巨大芽孢杆菌∶植物乳杆菌为21∶13∶7∶8∶13∶12∶8∶13；混合均匀；
在无菌条件下，进行自然固态堆积发酵，当温度保持35-38℃，持续24～36小时，进行低温干燥，干燥温度不高于55℃，当含水量≤20％，测定有效活菌总数和杂菌率；当有效活菌总数≥20亿/克，杂菌率≤10％，含水量≤20％时，常温常压真空包装。
实验例：肥料的制备及施用方法及对比实验方法及数据
配方一：鸡粪45％、麸皮10％、鱼粉5％、骨粉5％、页岩30％、其它4％、
复合微生物菌剂0.1％，等基质发酵对比试验，配方同上，复合微生物菌剂菌种用等量麸皮替代，为对比例(下同)；
配方二：草炭45％、麸皮10％、鱼粉5％、骨粉5％、膨润土30％、其它4％、复合微生物菌剂菌种0.05％；
配方三：鸡粪22.5％、草炭22.5％、麸皮10％、鱼粉5％、骨粉5％、页岩15％、膨润土15％、其它4％、复合微生物菌剂菌种0.01％。发酵基数500kg。
整个发酵过程在室内进行。料堆呈山形，堆高60cm，上插温度计，用草苫覆盖。24小时后翻堆1次，之后每天翻1次，共四次。每天测定温度1次。发酵48小时后，于翻堆前测定肥料中标的微生物的有效活菌数。发酵5天后，将料堆摊开晾干，当水分降至13％时，测定有机质、全氮、全磷、全钾、PH值和蛔虫卵死亡率。
田间试验设在山东省潍坊市寒亭区固堤镇北张村和红旗村果园进行。统一施用2500kg土杂肥作基肥。设2个处理，处理一：每666.7m2施100kg复合微生物菌剂生物有机肥作基肥、100kg复合微生物菌剂生物有机肥作追肥(以下简称菌剂肥)；处理二：每666.7m2施100kg等基质发酵有机肥作基肥，100kg等基质发酵有机肥作追肥(对比例)。试验用肥采用配方一生产。随机区组排列，重复3次。基肥于11月20日施用，追肥均采用沟施，3月20日和7月5日各施50kg。花期测定成花数，第一次疏果时测定座果数。7、8月测定果园群体结构。收获后，随机取10个果实，测定产品品质。对试验结果进行方差分析和LSR法检验。
1)结果与分析
A发酵试验
温度变化
表18  等基质发酵有机肥料中温度比较
 配方   处理   天数(天)
  1 相差(±℃)   2 相差(±℃)   3 相差(±℃)   4 相差(±℃)   5 相差(±℃)
 一   菌剂肥对比例   35.527   +8.5-   5643   +13-   67.564   +13.5-   72.555   +17.5-   6556   +9-
 二   菌剂肥对比例   32.525.5   +7--   5543.5   +11.5-   6560   +15-   96.550   +19.5-   6362.5   +10.5-
 三   菌剂肥对比例   34.526   +8.5-   55.542.5   +1.3-   66.553   +13.5-   7053   +17-   64.554.5   +10-
从表18看出，对于三种配方，接种复合微生物菌剂的生物有机肥发酵快，温度高，堆积后1～4天，配方一比对比例温度提高8.5℃～17.5℃，配方二比对比例温度提高7℃～19.5℃，配方三比对比例温度提高8.5℃～17℃。堆积第5天，复合微生物菌剂组温度均有所下降，说明，有机物质发酵已基本结束，而对照组温度持续上升，说明自然发酵仍在进行中，温度较低，发酵较慢。
标的有效活菌数变化
表19  等基质发酵有机肥料中标的有效活菌数的比较(单位：×109个/g)
  项目   配方一   配方二   配方三
  菌剂肥   对比例   菌剂肥   对比例   菌剂肥   对比例
  有效活菌数   2.5   0.04   1.8   0.02   2.2   0.03
从表19看出，三种配方的有机肥处理中，接种复合微生物菌剂的生物有机肥，在发酵48小时后，有效活菌数达1.8亿～2.5亿个/g，而没接种的仅为0.02亿～0.04亿个/g。二者相差62.5～90倍。
B  田间试验结果与分析
等基质发酵有机肥对甜油桃早期产量的比较
表20  等基质发酵有机肥料对甜油桃早期产量的比较
  品种   处理   产量(kg/666.7m2)   比对照增产(％)   差异显著性
  0.05   0.01
  早红珠   菌剂肥对比例   597.4487.6   +22.52-   ab   AB
  019   菌剂肥对比例   728.9604.3   +19.38-   ab   AB
从表20看出，接种复合微生物菌剂菌种的生物有机肥较之对照能够显著提高甜油桃的产量。早红珠增产率22.2％，019增产率19.38％。
等基质发酵有机肥料对甜油桃成花数和座果数的影响
表21  等基质发酵有机肥料对甜油桃成花数和座果数的比较
  品种   处理   成花数(朵/株)   比对比例增加(朵/株)   座果数(果/株)   比对比例增加(果/株)
  早红珠   菌剂肥对比例   12876   +52-   39.725.6   +14.1-
  019   菌剂肥对比例   15897   +61-   40.328.4   +11.9-
从表21看出，甜油桃施用复合微生物菌剂生物有机肥，第二年形成较多花芽，早红珠经对比例单株成花数增加52朵，痤果数增加14.1个；019处理比对比例单株成花数增加61朵，座果数增加11.9个。
等基质发酵有机肥料对甜油桃营养生长及果园群体生长的影响
表22等基质发酵有机肥料对甜油桃营养生长及果园群体生长的比较
  品种   处理   干周(cm)   枝量(条/株)   冠径(m)   果园覆盖率(％)   叶面积系数   枝量(条/666.7m2)
  早红珠   菌剂肥对比例   22.716.4   427386   1.062.78   8970   1.860.97   4819736754
  019   菌剂肥对比例   23.517.4   458403   2.192.84   9274   1.881.02   5327642364
从表22看出，施用复合微生物菌剂生物有机肥的甜油桃，其营养生长加快，表现在干周、冠径增大、枝量增多；果园覆盖率、叶面积系数和单位面积枝量明显高于对比例。
等基质发酵有机肥料对甜油桃果实品质的影响
表23  等基质发酵有机肥料对甜油桃果实品质的比较
  处理   单果重(g)   着色面积(％)   可溶性固形物含量(％)
  菌剂肥   287.5   85   13.6
  对比例   268.5   80   12.7
注：品种为019；着色面积超过50％。
本试验结果表明，利用复合微生物菌剂接种有机肥发酵具有发酵温度高，时间短，养分转化充分等特点，明显优于不接种的有机肥。田间试验也充分验证了复合微生物菌剂的良好效果。复合微生物菌剂是优良的有机肥发酵剂，其内含8株微生物对有机物质发酵有一定作用，可以初步判定是优势菌株。

Claims (3)

1、复合微生物菌剂，其特征在于每克淀粉-红糖或麸皮-米糠或草炭-膨润土载体上吸附有酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiace)菌株A 2.8～5.2×108个数和酿酒酵母菌株B 1.7～3.1×108个数、粉状毕赤酵母〔Pichiafarinose(Lindner)Hanxen〕菌株C 1.12～2.08×108个数和粉状毕赤酵母菌株D1.4～2.6×108个数、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)2.1～3.9×108个数、腊样芽孢杆菌(Bacillus cereus)1.4～2.6×108个数、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)1.4～2.6×108个数、植物乳杆菌(Lactobcillus plantarum)2.1～3.9×108个数的混合菌剂；
酿酒酵母菌株A和菌株B分别为酿酒酵母的一种亚菌株：
菌株A在PH6～6.5时生理活性较高；
菌株B在PH6.5～7.5时生理活性较高；
毕赤酵母菌株C和菌株D分别为粉状毕赤酵母的一种亚菌株：
菌株C在PH6.0～6.5时生理活性较高；
菌株D在PH7.0～7.5时生理活性较高。
2、根据权利要求1所述的复合微生物菌剂，其特征在于其所述的载体有三种配方，其成分及按重量份配比为：
淀粉-红糖        99～96∶1～4；
或麸皮-米糠      60～40∶40～60；
或草炭-膨润土    30～70∶70～30。
3、根据权利要求1所述的复合微生物菌剂的制备方法，该方法包括菌种的培养和混合，其特征在于其步骤如下：
1)酿酒酵母菌株A和菌株B的培养
斜面培养
培养基的配方：PGY蛋白胨0.5克，牛肉膏0.5克，酵母膏0.5克，吐温80 0.5滴，葡萄糖1克，琼脂2克，蒸馏水100毫升，PH6.8～7.0；PDA制法去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，蒸馏水1升，将马铃薯洗净，去皮，切块，放入水中，煮沸30分钟，经纱布过滤，滤液加水至1升，加糖和琼脂，溶解后分装三角瓶或试管，高温高压灭菌20分钟；
按微生物领域常规操作进行：
活化→一级放大→二级放大→摇床放大；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时进行载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
2)粉状毕赤酵母菌株C和菌株D的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过2.5亿/克具备混合条件；
3)枯草芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附；
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
4)腊样芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
5)巨大芽孢杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为2.5～5亿/ml个数时载体吸附
载体上有效活菌数超过3亿/克具备混合条件；
6)植物乳杆菌的培养
斜面培养的培养基的配方及步骤同上；
当有效活菌数为1.5～3亿/ml个数时载体吸附；
当载体上有效活菌数超过2亿/克具备混合条件；
将具备条件的附有菌种的载体混合，按载体的重量份配比为：
酿酒酵母菌株A∶酿酒酵母菌株B∶粉状毕赤酵母菌株C∶粉状毕赤酵母菌株D∶枯草芽孢杆菌∶腊样芽孢杆菌∶巨大芽孢杆菌∶植物乳杆菌为19～21∶11～13∶7～9∶8～12∶13～17∶8～12∶8～12∶13～17；混合均匀；
在无菌条件下，进行自然固态堆积发酵，当温度保持35-38℃，持续24～36小时，进行低温干燥，干燥温度不高于55℃，当含水量≤20％，测定有效活菌总数和杂菌率；当有效活菌总数≥20亿/克，杂菌率≤10％，含水量≤20％时，常温常压真空包装。
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