CN1904035A - 一种联合固氮解磷解钾的微生物复合肥 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种复合微生物肥料。通过由胶冻样芽胞杆菌(Bacillus mucilaginosus)CGMCC.No1641、肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(klebsiella pneumoniae subsp pneumo naiae)CGMCC.No1642和巨大芽胞杆菌(Bacillus megaterium)CGMCC.No1640三种菌粉以重量比1∶1∶1混合，其混合物与增效剂组合物配伍。设管年产一种具有联合固氮解磷解钾微生物复合肥，对于应用促进农业增产具有重要意义。
Description
技术领域：
本发明涉及一种微生物肥料领域中的菌种及其组配物，具体是指在微生物肥料中三种分别具有固氮、解磷、解钾功能菌种复合与专用增效剂配伍而获得的混合物。
背景技术：
国际上微生物肥料使用的菌种范围很广，有各种根瘤菌、固氮菌、解磷菌、解钾菌、光合细菌等。近年来报道的具有PGPR作用的菌种也越来越多。日本发明的EM菌和酵素菌分别含有5科、10属、80种和3属24种细菌、放线菌、酵母菌等，可见国际上用于生产微生物肥料的菌种种类之多。
国际上最早的微生物肥料(接种剂)产品是1895年的Nitrogen。到目前，世界上至少有70多个国家在研究、生产和推广使用微生物肥料。除英国、美国、澳大利亚、日本等发达国家外，许多中等发达或发展中国家研究和生产微生物肥料的水平也在迅速提高。从国家外经贸部举办的第六届微生物肥料国际培训班反馈的信息证实，诸如印度、巴基斯坦、捷克、印度尼西亚、越南、立陶宛、朝鲜等国家在微生物肥料的研究、生产、推广方面也取得了很可观的成就，有些国家在生产工艺和增产机理研究方面已达到了较高水平。
联合国粮农组织(FAO)曾经向发展中国家推广根瘤菌肥的生产和施用技术，并且在二十多个国家取得了良好效果。
我国从上世纪50年代初开始发展微生物肥料事业，目前该项事业在我国正处于建国已来的第四个大发展期。到2002年底，全国已有微生物肥料企业400-500家，其中一半以上是未获生产许可的企业，年总产量约在200万吨以上。根据农业部2003年第238号公告公布的数字，获得国家质检中心登记的微生物肥料产品约150个，现在实际获得登记的产品数量应高于该数字。
目前我国现有的微生物肥料所涉及到的生产菌种统计有七十多个，包括多种细菌、放线菌和真菌等。由于我国微生物肥料的市场准入制度极为严格，对生产菌种的鉴定及使用也有明确规定。所以，这一数字比我国实际拥有的用于微生物肥料生产的菌种数量少得多。
微生物肥料能够促进农作物增产，其产品种类繁多，能促作物增产原因很多，如有的能直接为植物提供营养元素，有的能促进植物对营养元素的吸收，而有的能产生多种生理活性物质刺激调节植物生长，还有的能产生抑病作用间接促进作物生长有的能提高作物的抗逆性，而国际国内普遍接受PGPR理论，即，微生物肥料之所以有增产作用，不是靠单纯的固氮或解磷、解钾，而是靠包括上述作用在内的综合作用的一种结果。但是国内外对于微生物肥料能综合达到固氮、解磷和解钾功能产品还没有，在技术上也未有报道。农业中亟需建立起能促进农作物生长机能，并有明显田间增产效果的固氮或解磷、解钾技术产品。
发明内容：
针对目前微生物肥料功能单一，只能单一达到固氮、解磷、解钾部分效果的现状。本发明的目的在于提供一种微生物复合肥，通过高效选育到的胶冻样芽胞杆菌、肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种和巨大芽胞杆菌三株菌混合，与专用增效剂组成高活性微生物复合肥。本发明有效解决了微生物复合肥发酵中的技术难题，综合解决固氮、解磷、解钾效果，同时方便农民，简单实用。
本发明提供了一种具有联合固氮解磷解钾的微生物复合肥，具体涉及到三种菌混合，经过与增效剂组合物的配伍而获得。
同时，本发明还提供了这种具有联合固氮、解磷、解钾微生物复合肥的生产方法。该方法已具备规模工业化生产能力。
具体地，本发明提供了一种由胶冻样芽胞杆菌、肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种和巨大芽胞杆菌三种菌粉以重量比1∶1∶1混合，其混合物与增效剂组合物配伍而获得。
本发明提供了增效剂组合物组分如下：(以下％为重量百分比)
硫酸锌4.5％-8.2％、硫酸锰0.8％-1.9％、硫酸亚铁0.6％-1.4％、硫酸铜0.05％-1.0％、钼酸铵0.02％-1.9％、硼酸0.4％-1.9％、尿素0.5％-6％、磷酸氢二钾0.2％-1％、重过磷酸钙0.3％-5％、硫酸钙0.3％-2％、酵母汁0.2％-2％、蛋白冻0.2％-2％、CaCl 0.01％-0.3％。
本发明提供了一种菌株，编号为XHS0026N。该菌株已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位：中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址：北京市海淀区中关村北一条13号，中国科学院微生物研究所，邮编：100080。保藏日期是2005年3月7日，保藏号是CGMCC.No.1642。根据受体菌的来源，经过新疆特殊生态环境下筛选、选育和驯化而获得，依照伯杰氏系统细菌学手册第八版，经过微生物学鉴定，XHS0026N菌为肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(klebsiella pneumoniae subsppneumonaiae)，具有固氮属性，属于固氮菌类。该菌种的培养温度30℃，培养时间为2-3天，pH7.0，有夹膜、菌体呈短杆状、一般有夹膜包裹其菌落突起，呈透明状。可采用如下方法对其进行保存：采用常规的斜面传代保存法，此方法是将本发明菌种接种于适合于酵母菌生长的任何斜面培养基表面，常规培养和保存即可。或是利用真空冷冻干燥法将本发明菌种制成干粉菌种，低温或常温保藏即可。
另一方面，本发明提供了一种菌株，编号为XHS0012K。该菌株已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位：中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址：北京市海淀区中关村北一条13号，中国科学院微生物研究所，邮编：100080。保藏日期是2005年3月7日，保藏号是CGMCC.No.1641。根据受体菌的来源，经过新疆特殊生态环境下筛选、选育和驯化而获得，依照伯杰氏系统细菌学手册第八版，经过微生物学鉴定，XHS0012K菌为胶冻样芽胞杆菌(Bacillus mucilaginosus)，具有解钾属性，属于解钾细菌类。该菌种的培养温度30℃、培养时间3-4天、pH7.2，培养成熟后，培养基表面有薄薄的一层白色孢子，菌休呈杆状，两端钝圆，芽胞中生或端生，有时成链状排列、或单个排列，较有规则。可采用如下方法对其进行保存：采用常规的斜面传代保存法，此方法是将本发明菌种接种于适合于酵母菌生长的任何斜面培养基表面，常规培养和保存即可。或是利用真空冷冻干燥法将本发明菌种制成干粉菌种，低温或常温保藏即可。
再一方面，本发明提供了一种菌株，编号为XHS0019P。该菌株已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位：中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址：北京市海淀区中关村北一条13号，中国科学院微生物研究所，邮编：100080。保藏日期是2005年3月7日，保藏号是CGMCC.No.1640。根据受体菌的来源，经过新疆特殊生态环境下筛选、选育和驯化而获得，依照伯杰氏系统细菌学手册第八版，经过微生物学鉴定，XHS0019P菌为巨大芽胞杆菌(Bacillus megaterium)，具有解磷属性，属于解磷细菌类。该菌种的培养温度30℃，培养时间2-3天，PH7.0，其菌体形态、芽胞椭圆或柱状、中生，形态趋于扭曲状，菌落形态光泽，略微发黄。可采用如下方法对其进行保存：采用常规的斜面传代保存法，此方法是将本发明菌种接种于适合于酵母菌生长的任何斜面培养基表面，常规培养和保存即可。或是利用真空冷冻干燥法将本发明菌种制成干粉菌种，低温或常温保藏即可
本发明具体提供了上述菌株筛选、培养、驯化的方法：
1.将保存斜面中的芽孢用无菌水洗下，摇匀制成孢子悬液，用热冲击法处理，即用凉水冷却至30℃并制平板。
固氮菌XHS0026N采用摇瓶发酵液，用80℃热水浴处理瞬间即可。
钾细菌XHS0012K孢子液用100℃沸水浴处理30秒-15分钟。
磷细菌XHS0019P孢子液用100℃沸水浴处理，30秒-10分钟。
2.将平板在30℃条件下培养2-3天。
3.挑取个大、圆润、突起的单个菌落，转斜面。挑取单菌落前要进行外观检查和涂片镜检，对菌株进行辨别检查。
4.将斜面在30℃条件下培养2-3天。
5.镜检后保存。
6.取新筛选出的斜面上摇瓶，在30℃条件下培养一天以上，镜检，确定新筛菌株的性能。
本发明的实现通过以下技术方案：
本发明通过引进优良菌种，通过诱变、筛选出一种适合新疆干旱少雨昼夜温差大的特殊生态环境，并具有联合固氮菌特性的微生物XHS0026N菌株，经微生物学鉴定，确定为肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(klebsiellapneumoniae subsp pneumonaiae CGMCC.No.1642)。
该菌种的培养基采用常规普通适合固氮菌培养基配方，本发明优选采用培养基如下包括：
1.斜面固体培养基：白糖10克、K2HPO4 0.5克、CaCO3 1克、MgSO4 0.2克、NaCl 0.2克、水1000ml、琼脂18克；
2.摇瓶液体培养基：白糖5克-7克、KH2PO4 0.7克、K2HPO4 0.3克、MgSO4·7H20.5克、CaCO3 1克、NaCl 0.5克、FeCl3 0.01克、Na2MoO4·2H2O 0.01克、酵母汁0.9克、Na3C6H5O7·2H2O 0.01克、水1000ml。
工艺说明：
1.保存斜面、分离平板、生产斜面均采用无菌固体培养基。在pH值7.0，30℃条件下培养3-5天。
2.一级摇瓶、二级摇瓶、种子罐、发酵罐均采用相同的液体培养基。
3.一级、二级摇瓶培养条件：
装量：150ml/1000ml、温度：30-33℃、振幅：大于2cm、转速：200rpm，周期：18-24小时。
4.种子罐培养条件：装量0.7，消后体积100升。(种子罐公称容积150升)，接种量：1％以上，起始风量：3M3/hr，4小时调整到4M3/hr，不开搅拌，温度：30℃±1℃，罐压：0.05Mpa、周期18-24小时。
5.发酵罐培养条件：
装量：0.7，接种后体积：2吨(发酵罐公称容积3立方米)。接种量：5％、起始风量：60M3/hr、4小时调整到70M3/hr。温度：30℃±1℃、罐压0.05Mpa、周期18-24小时。
6.每一级种子都应镜检，严格挑选后方可进入下一级发酵。发酵罐运行到终点时，要严格镜检，计数后方可进行灌装。
7.无菌灌装时，要严格执行无菌操作规程。
本发明通过引进优良菌种，通过诱变、筛选出一种适合新疆干旱少雨昼夜温差大的特殊生态环境，并具有解钾特性的XHS0012K菌株，经微生物学鉴定，确定为胶冻样芽胞杆菌(Bacillus mucilaginosusCGMCC.No.1641)。
该菌种的培养基配方，包括
1.生产斜面制法：(用于生产斜面菌种的培养和保存)
1.1.配比：(克)蔗糖：2克-12克、K2HPO4 0.1克-0.8克、MgSO4 0.05克-0.4克、Nacl 0.03克-0.6克、CaCO3 0.4克-1.2克、CaSO4 0.03克-0.3克、KH2PO4 0.05克-0.3克，、酵母汁0.1克-0.7克、柠檬酸钠0.02克-0.2克、琼脂20克、蒸馏水1000ml。
1.2.培养条件：30℃，2-4天，pH 7.2。培养基表面孢外多糖丰富，镜检时菌体正常、并有少量芽孢，即可放入零上5℃的冰箱中保存，随用随取。保存期不超过一个月，如将斜面试管的棉塞换成胶塞，则保存期可延长到三个月。
2.种子罐培养：
2.1.原料配比：(以2M3罐为例)淀粉3-10(公斤)、豆饼粉2.8-5.2(公斤)、麸皮3.6-6.4(公斤)、玉米浆0.8-3.2(公斤)、CaCO3 0.9-2.4(公斤)、白糖0.8-2.2(公斤)、(NH4)2SO4 0.5-2.3(公斤)、豆油1-5(升)、聚醚60-200(毫升)。
2.2.发酵条件：温度：29℃-30℃，通风量：60M3/hr(通风比为1∶0.7vvm)，搅拌转速：240rpm。
所用固体原料，均应粉碎、过100目筛。PH值自然，投料体积：1.4吨，pH值为6.5。
2.3.培养周期：8-16(小时)，取样镜检可见正处在对数期的健壮菌体，血球计数含菌量在6-15亿/毫升，pH5.8-6.2，即可转入发酵罐。
3.发酵罐培养：
3.1.原料配比：(以15M3发酵罐为例)淀粉73.5公斤、蔗糖21公斤、硫铵5.78公斤、K2HPO4 21公斤、KH2PO4MgSO4、21公斤、FeCl3 2.1公斤、CaCO31 0.5公斤、酵母汁8.4公斤、豆饼粉7.35公斤、KOH 5.2公斤、豆油14.7公斤。
3.2.装料系数和中控条件：
所用固体原料，均应粉碎、过100目筛。70％投料。温度：在0-3小时内28℃-29℃；在3-6小时内30℃；在6小时后：控制在30℃-32℃；风温：无菌空气进罐前的温度控制在35℃-45℃；通风量：(M3/hr)0小时225；4小时308；8小时410；12小时520；20小时580；搅拌转速：160rpm；发酵周期：26-34小时。
3.3.成熟合格发酵液的质量标准：
外观：为黄白色浑浊液体，微带淡淡的香甜气味。
含菌量：芽孢含量占95％以上，总菌数在18-22亿/毫升。
发酵终点时pH5.8-6.2，镜检及平板检测不应有杂菌存在。
4.后处理：
检验合格后的发酵液即可通过无菌管路打入混合罐进行复配。
本发明通过引进国外优良菌种，通过诱变、筛选出一种适合新疆干旱少雨昼夜温差大的特殊生态环境，并具有解磷特性的微生物XHS0019P菌株，经微生物学鉴定，确定为巨大芽胞杆菌(Bacillus megateriumCGMCC.No.1640)。
该菌种的培养基适合普通的牛肉膏、蛋白胨、酵母膏培养基。
1.培养条件：调pH7.0，在30℃培养2-3天。
2.克氏瓶培养基同上，制法如上，加入2-10mg MnSo4·H2o有利于产生芽孢。250ml克氏瓶装70ml-80ml。制斜面应大小一致。
培养条件：调pH7.0，在30℃培养2-3天。
3.斜面菌种的质量标准
生产斜面和克氏瓶的菌种的质量标准一样。斜面上的菌苔连结成片，较浓厚，黄白色，无杂菌菌落。镜检可见大量芽孢形成，菌体健壮整齐。不能有任何杂菌。
4.该菌种的发酵条件
装量：70％，温度：30℃-31℃；全程搅拌；培养周期：8-16小时，取样镜检可见正处在对数期的健壮菌体，血球计数含菌量在14-22亿/毫升，pH5.8-6.6，既可转入发酵罐。
5.成熟合格发酵液的质量标准：
外观：为黄白色浑浊液体，有微带苦涩淡淡的臭味。
含菌量：芽孢含量占60-80％，总菌数在26-32亿/毫升。
发酵终点pH6.0-6.5。镜检及平板检测不应有杂菌存在。
6.发酵液的后处理：
检验合格后的发酵液即可通过无菌管路打入混合罐进行复配。
为了得到本发明高质量的产品，确保应用效果，本发明对三个菌种的发酵工艺进行了优化。优化的主要对象是发酵培养基，在此基础上又对发酵工艺进行优化，如：温度、通风比、pH值等进行了优化。
本发明主要优化了肺炎克氏菌、胶冻样芽孢杆菌及巨大芽孢杆菌的发酵培养基。并将优化后的培养基与优化前进行了多批对比试验及差异显著性测验。
本发明试验证实，优化后的培养基在发酵产率方面显著优于优化前，更适合发酵生产。
本发明试验证实，提高培养基浓度可以显著提高发酵水平，但前提是解决好培养基合理配比及发酵过程中的溶解氧的问题。图4显示了胶冻样芽孢杆菌发酵培养基浓度与生物量间的关系。
本发明试验证实，在培养基配比、浓度确定后，通风比和搅拌转速这两个决定溶氧速率的因素就成为影响发酵产率的关键。
本发明实现了工业化生产，本发明采用以全不锈钢通用式发酵为主要设备，包括公秤容积100升的通用式不锈钢种子罐，公秤容积3立方米的通用式不锈钢发酵罐。这两种发酵设备均采用了封闭效果较好的双端面机械密封，以及性能优良的机械搅拌系统。夹层的设置为有效控制发酵温度提供了保障。各台设备均装备有玻璃转子流量计、热电阻温度计等精密仪表。
本发明选用辅助设备有：
1.上海核八所生产的高流膜空气过滤系统。其关键部位是聚偏氟乙烯塑料薄膜。这一系统分初、中、高效三级过滤器，其中，中效过滤器的滤膜的孔径已经达到0.4μm，完全可以拦截各类细菌。而高效过滤器滤膜孔已经达到0.01μm可以拦截病毒。这就使得发酵用空气达到了完全洁净无菌的要求。
2.全无油空气压缩机，可以为发酵生产提供洁净、气压稳定的气源。
3.全不锈钢物料混合罐，用于成熟醪液与各种添加剂的混合。为后包装工序提供合格的液体肥料制成品。
以上设备，是生产本发明微生物复合生物肥的核心设备。这一工序的完善，为生产合格的产品提供了关键手段。
本发明将以上三株菌分别经过发酵获得发酵产物，用重量比1∶1∶1计混合。
本发明设计了添加增效剂的方案，确保本发明的使用效果。增效剂的主要成份是：硼、锰、锌、钼、氮、磷、钾等微量元素。
本发明涉及微生物复合生物肥，充分考虑到微生物菌种对于硼、锰、锌、钼、氮、磷、钾等微量元素的耐受性，本领域技术人员所熟知，对于设计合适的微量元素配比不仅对于保护本发明所涉及的菌种，而且对于实现本发明技术效果具有重要意义。本发明通过采用单因子试验及正交试验相配合的优化方法，利用不同作物的盆栽试验和国内各地试验，考察不同配比及各主要成份不同含量水平的施用效果，确定出其最佳配比，最终确定了可用于生产的增效剂配方。
本发明优先确定的增效剂配方：硫酸锌4.5％-8.2％、硫酸锰0.8％-1.9％、硫酸亚铁0.6％-1.4％、硫酸铜0.05％-1.0％、钼酸铵0.02％-1.9％、硼酸0.4％-1.9％、尿素0.5％-6％、磷酸氢二钾0.2％-1％、重过磷酸钙0.3％-5％、硫酸钙0.3％-2％、酵母汁0.2％-2％、蛋白冻0.2％-2％、CaCl 0.01％-0.3％。
本发明的微生物复合肥于2004年4月20日获得国家农业部肥料登记，登记证号：微生物肥(0253)号和微生物肥(0252)号。本发明技术产品已申请商标，其“坤奇尔”商标已经获得国家商标局授权保护，并根据本发明技术内容制定成企业标准(Q/XHS001-2004)，微生物复合肥的液体生物肥实现以下指标：外观：无异臭味液体，有效活菌总数≥5亿/ml，pH值5.5～7，杂菌数≤5％。
本发明产品经新疆维吾尔自治区产品质量监督检验所检测，各项指标完全合格。
本发明经国家农业部质检中心指定检测单位北京谱尼理化分析测试中心检测的成品无害化指标及检测结果：
| 编号 | 参数 | 单位 | 标准限值 | 检测结果 |
| 1 | 汞及化合物(以Hg计) | Mg/Kg | ≤5 | 1.05 |
| 2 | 镉及化合物(以Cd计) | Mg/Kg | ≤3 | 0.821 |
| 3 | 铬化合物(以Cr计) | Mg/Kg | ≤70 | 13.1 |
| 4 | 砷及化合物(以As计) | Mg/Kg | ≤30 | 5.62 |
| 5 | 铅及化合物(以Pb计) | Mg/Kg | ≤60 | 3.15 |
有益效果：
本发明微生物复合肥料中，XHS0026N吲哚乙酸含量可达到66ppm以上，赤霉素和细胞激动素含量有所提高；XHS0012K赤霉素含量可达72ppm，细胞分裂素有所增加；XHS0019P多种有机酸水平有所提高，发酵液总酸度可达16.6毫克当量/升。
使用本发明微生物复合肥料的处理冬瓜，对于冬瓜生长有明显的促进作用，改善了冬瓜的品质，提高了冬瓜对疫病、白粉病的抗性；对于辣椒生产上作为基肥和喷施都有十分显著的增产效果，并且施用本发明微生物复合肥料的辣椒，抗逆、抗病性强，发病率低；对于马铃薯生长中，本发
明微生物复合肥料不仅可以延长马铃薯的生育期，而且有明显增产效果；对于小麦生长中具有明显的增产效果；在棉花试验中，棉花苗期的抗病性增强明显，增产效果显著。
附图说明：
图1、菌种筛选、纯化工艺流程
图2、微生物复合肥料的生产工艺流程
具体实施方式：
实施例一：微生物肥料中XHS0026N菌株及其功能
微生物XHS0026N菌株，经微生物学鉴定，确定为肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(klebsiella pneumoniae subsp pneumonaiae CGMCC.No.1642)。
1.该菌种的培养基配方，包括：
1.1.斜面固体培养基：白糖10克、K2HPO4 0.5克、CaCO3 1克、MgSO40.2克、NaCl 0.2克、水1000ml、琼脂18克。
2.2.摇瓶液体培养基：白糖5克-7克、KH2PO4 0.7克、K2HPO4 0.3克、MgSO4·7H2O 0.5克、CaCO3 1克、NaCl 0.5克、FeCl3 0.01克、Na2MoO4·2H2O 0.01克、酵母汁0.9克、Na3C6H5O7·2H2O 0.01克、水1000ml。
2.种子罐配料：白糖700克、KH2PO4 50克、K2HPO4 30克、MgSO4·7H2O 50克、CaCO3 100克、NaCl 50克、FeCl3 1克、Na2MoO4·H2O 1克、酵母汁100克、Na3C6H5O7·H2O 1克。
3.发酵罐配料：
装料系数：0.7，接种后体积：2吨。
白糖14公斤、KH2PO4 1公斤、K2HPO4 0.6公斤、MgSO4·7H2O 1公斤、CaCO32公斤、NaCl 1公斤、FeCl3 0.02公斤、Na2MoO4·2H2O 0.02公斤、酵母汁1.6公斤、Na3C6H5O7·2H2O 0.02公斤
4.工艺说明：
4.1.保存斜面、分离平板、生产斜面均采用无菌固体培养基。30℃条件下培养3-5天。
4.2.一级摇瓶、二级摇瓶、种子罐、发酵罐均采用相同的液体培养基。
4.3.一级、二级摇瓶培养条件：
装量：150ml/1000ml、温度：30℃-33℃、振幅大于2cm、转速200rpm，发酵周期：18-24小时。
4.4.种子罐培养条件：装量0.7，消后体积100升。(种子罐公称容积150升)，接种量：1％以上，起始风量：3M3/hr，4小时调整到4M3/hr，不开搅拌，温度：30℃±1℃，罐压：0.05Mpa、周期18-24小时。
4.5.发酵罐培养条件：
装量：0.7，接种后体积：2吨(发酵罐公称容积3立方米)。接种量：5％、起始风量：60M3/hr、4小时调整到70M3/hr。温度：30℃±1℃、罐压0.05Mpa、周期18-24小时。
4.6.每一级种子都应镜检，严格挑选后方可进入下一级发酵。发酵罐运行到终点时，要严格镜检，计数后方可进行灌装。
4.7.无菌灌装时，要严格执行无菌操作规程。
5.菌种功能
XHS0026N培养液中主要植物生长素物质的含量水平比出发菌株显著提高，其中吲哚乙酸类物质提高最显著。在摇瓶检测中，不同重复中的含量水平由50-200ppm不等，平均含量达到66ppm以上，比出发菌株提高了约15％左右。另外，赤霉素及细胞激动素的含量也有不同程度的提高。该菌在发酵过程中还可产生大量胞外多糖，并且有显著的固氮属性。
实施例二：微生物肥料中XHS0012K菌株及其功能
微生物肥料中XHS0012K菌株，经微生物学鉴定，确定为胶冻样芽胞杆菌(Bacillus mucilaginosus CGMCC.No.1641)。
1.该菌种的培养基配方，包括
1.1.生产斜面制法：(用于生产斜面菌种的培养和保存)
配比：(克)蔗糖2-12、K2HPO4 0.1-0.8、MgSO4 0.05-0.4、Nacl 0.03-0.6、CaCO3 0.4-1.2、CaSO4 0.03-0.3、KH2PO4 0.05-0.3、酵母汁0.1-0.7、柠檬酸钠0.02-0.2、琼脂20、蒸馏水1000ml。
培养条件：30℃，2-4天。培养基表面孢外多糖丰富，镜检时菌体正常、并有少量芽孢，即可放入零上5℃的冰箱中保存，随用随取。保存期不超过一个月，如将斜面试管的棉塞换成胶塞，则保存期可延长到三个月。
1.2.克氏瓶菌种制作：
培养基：(克)葡萄糖0.2-1.2、蛋白胨0.3-1.0、磷酸氢二钾0.4-1.6、硫酸铵0.05-0.8、酵母汁0.04-0.9、硫酸镁0.3-0.7、磷酸二氢钾0.02-0.6、麸皮0.4-1.0、硫酸锌0.01-0.04、蒸馏水1000ml、琼脂20。
制法：
每支250ml克氏瓶，装培养基70ml，灭菌凉斜面。
培养条件：30℃，3-4天。待培养基表面的孢外多糖全部水化，只剩一层白色粉状物，镜检可见100％的芽孢，几乎没有营养体时，即可放入零上5℃冰箱中存放，保存期可长达4个月，随用随取。
2.种子罐培养：
2.1.原料配比：(以2M3罐为例)淀粉3-10(公斤)、豆饼粉2.8-5.2(公斤)、麸皮3.6-6.4(公斤)、玉米浆0.8-3.2(公斤)、CaCO3 0.9-2.4(公斤)、白糖0.8-2.2(公斤)、(NH4)2SO4 0.5-2.3(公斤)、豆油1-5(升)、聚醚60-200(毫升)。
2.2.发酵条件：温度：29℃-30℃，通风量：零小时：60M3/hr(通风比为1∶0.7vvm)，搅拌转速：240rpm左右。
所用固体原料，均应粉碎、过100目筛。投料体积：1.4T，零时pH值在pH6.5左右。
2.3.培养周期：8-16小时，取样镜检可见正处在对数期的健壮菌体，血球计数含菌量在6-15亿/毫升，pH5.8-6.2，既可转入发酵罐。
3.发酵罐培养：
3.1.原料配比：(以15M3发酵罐为例)淀粉73.5公斤、蔗糖21公斤、硫铵5.78公斤、K2HPO4 21公斤、KH2PO4MgSO4 21公斤、FeCl3 2.1公斤、CaCO3 10.5公斤、酵母汁8.4公斤、豆饼粉7.35公斤、KOH 5.2公斤、豆油14.7公斤。
3.2.装料系数和中控条件：
所用固体原料，均应粉碎、过100目筛。70％投料。温度：0-3小时28℃-29℃，3-6小时：30℃，6小时后：30℃-32℃；风温：无菌空气进罐前的温度控制在35℃-45℃；通风量：(M3/hr)0小时225；4小时308；8小时410；12小时520；20小时580；搅拌转速：160rpm；发酵周期：26-34小时。
3.3.成熟合格发酵液的质量标准：
外观：为黄白色浑浊液体，微带淡淡的香甜气味。
含菌量：芽孢含量占95％以上，总菌数在18-22亿/毫升。
发酵终点pH5.8-6.2，镜检及平板检测不应有杂菌存在。
4.后处理：
检验合格后的发酵液即可通过无菌管路打入混合罐进行复配。
5.菌种功能
XHS0012K发酵液中的赤霉素类的含量各重复平均可达72ppm，比出发菌株平均高出36％以上。细胞分裂素的含量有所增加，还可产生有机酸及大量胞外多糖，具有显著的解钾功能。
实施例三：微生物肥料中XHS0019P菌株及其功能
微生物XHS0019P菌株，经微生物学鉴定，确定为巨大芽胞杆菌(Bacillus megaterium CGMCC.No.1640)。
1.该菌种的培养基配方，包括
1.1.牛肉膏、蛋白胨、酵母膏培养基：蛋白胨2-7克、牛肉膏0.8-6克、酵母膏1-5克、NaCl 3-8克、葡萄糖琼脂15-20克、蒸馏水1000ml，调pH7.0，加入2-10mg MnSo4·H2o有利于产生芽孢。
1.2.马铃薯培养基：马铃薯浸提液500ml、蔗糖或葡萄糖15-20克、琼脂20克、蒸馏水500ml。
马铃薯去皮1600-2000克，用布包好，放入4500ml水中，煮沸10-30分钟。培养条件：30℃，培养2-3天。
2.克氏瓶制法
2.1.培养基：蛋白胨2-7克、牛肉膏0.8-6克、酵母膏1-5克、NaCl 3-8克、葡萄糖琼脂15-20克、蒸馏水1000ml，调pH7.0，加入2-10mg MnSo4·H2o有利于产生芽孢。
2.2.制斜面和培养条件：250ml克氏瓶装70-80ml。斜面应大小一致。培养条件：30℃，2-3天。
3.斜面菌种的质量标准
生产斜面和克氏瓶的标准基本一样。斜面上的菌苔连结成片，较浓厚，黄白色，无杂菌菌落。镜检可见大量芽孢形成，菌体健壮整齐。不能有任何杂菌。
4.种子罐的发酵条件(装量：70％)
4.1.配比：(以下为公斤)2M3罐(1.4T)、豆饼粉12-14、玉米粉21-26、酵母汁1.12-1.6、二钾0.28-0.5、Nacl 1.4-1.8、MnSo4 42-58克。
注：所有不溶性的固体原料，均须粉碎，过100目筛。
4.2.条件：温度：30℃-31℃、通风量：0-3hr M3/hr50、4-7hr M3/hr68、8hr M3/hr100，其通风比分别为0.59、0.8、1.2。
4.3.培养周期：8-16小时，取样镜检可见正处在对数期的健壮菌体，血球计数含菌量在14-22亿/毫升，pH5.8-6.6，即可转入发酵罐。
5.发酵罐的发酵条件(装量：70％)
5.1.配比： 6M3罐(公斤) 15M3罐(公斤)
豆饼粉： 28-40 105-122
玉米粉：(或淀粉) 45-60 158-179
酵母汁： 3.2-2.7 8.4-9.1
二钾： 0.8-1.6 2.1-3.7
Nacl： 4-6 10.5-12.6
MnSo4： 0.12-0.23 0.315-0.46
泡敌： 0.8-1.5 2.1-3.2
注：所有不溶性的固体原料，均须粉碎，过100目筛。
5.2.条件：温度：30℃-31℃：通风量：下表的括号内数字为通风比。搅拌：全程搅拌。
发酵罐的通风量及通风比
| 风量：M3/hr | 时序 | 0-3hr， | 4-7hr， | 8hr |
| 6M3罐 | 75(0.3) | 120(0.5) | 200(0.83) | |
| 15M3罐 | 180(0.3) | 300(0.48) | 500(0.8) |
3.成熟合格发酵液的质量标准：
外观：为黄白色浑浊液体，有微带苦涩淡淡的臭味。
含菌量：芽孢含量占60-80％，总菌数在26-32亿/毫升。
发酵终点pH6.0-6.5。镜检及平板检测不应有杂菌存在。
4.发酵液的后处理：
检验合格后的发酵液即可通过无菌管路打入混合罐进行复配。
5.菌种功能
XHS0019P pH值最低可达4.8，产酸量平均为16.6毫克当量/升，比出发菌株的pH5.5和11.2毫克当量/升有显著提高。检测证实，两者在产酸量上的差异显著。层析结果证实，有机酸的种类没有改变，仍以苹果酸、丙二酸、琥珀酸等为主，具有显著的解磷特性。
实施例四：联合固氮解磷解钾的微生物复合肥的生产
微生物复合肥中复合菌是由肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(klebsiellapneumoniae subsp pneumonaiae)、胶冻样芽胞杆菌(Bacillusmucilaginosus)和巨大芽胞杆菌(Bacillus megaterium)按照1∶1∶1混合组成。
用上述的微生物复合菌生产微生物肥料的方法如下：
1、原料准备：分别将上述三种菌种发酵获得发酵粉。
2、菌种配比：将三种菌种按照重量比1∶1∶1混合。
3、组配剂的组配，将上述混合后的三种菌的混合物与组配剂充分混合，获得联合固氮解磷解钾的微生物复合肥。
实施例五：发酵工艺的优化
为了得到高质量的产品，确保应用效果，本项研究对三个菌种的发酵工艺进行了优化。优化的主要对象是发酵培养基，在此基础上又对发酵工艺进行优化，如：温度、通风比、pH值等进行了优化。
主要优化了肺炎克氏菌，胶冻样芽孢杆菌及巨大芽孢杆菌的发酵培养基。并将优化后的培养基与优化前进行了多批对比试验及差异显著性测验。
优化前后的培养基
| 名称或编号 | 用途 | 成分(种) | 浓度(％) | 发酵水平(亿/ml) |
| DY | 巨大芽孢杆菌发酵 | 7 | 2.7 | 20 |
| YHP | 巨大芽孢杆菌发酵 | 8 | 2.9 | 26 |
| 99-原 | 胶冻样芽孢杆菌发酵 | 8 | 1.33 | 14-16 |
| YHK | 胶冻样芽孢杆菌发酵 | 9 | 1.63 | 20 |
| XMA | 肺炎克氏菌发酵 | 8 | 1.01 | 10 |
| YHN | 肺炎克氏菌发酵 | 8 | 1.22 | 18 |
试验证实，优化后的培养基在发酵产率方面显著优于优化前，更适合发酵生产。
实施例六：发酵条件：
对三个菌种的发酵条件，包括PH值、温度、培养基浓度，通风比、搅拌转速等均进行了优化。其中，后三个条件是与溶氧有关的主要因素，成为优化试验的重点。
提高培养基浓度可以显著提高发酵水平，但前提是解决好培养基合理配比及发酵过程中的溶解氧的问题。
在培养基配比、浓度确定后，通风比和搅拌转速这两个决定溶氧速率的因素就成为影响发酵产率的关键。
优化后各个菌种的主要发酵条件
| 菌种 | 培养基 | 10升罐 | 100升罐 | 3m33罐 |
| 巨大芽孢杆菌 | YHP | 消前PH值：7.2温度：30℃±1通风比：0小时1∶0.8-1.68小时后：1∶2.6-3.6搅拌：200-450rpm周期：35-40小时 | 消前PH值：7.2温度：30℃±1通风比：0小时1∶0.4-0.66小时后：1∶1.2-1.8搅拌：380rpm周期：33-40小时 | 消前PH值：7.2温度：30℃±1通风比：0小时1∶0.4-0.66小时后：1∶0.8-1.2搅拌：230rpm周期：28-35小时 |
| 胶冻 | YHK | 消前PH值：自然温度：30-31℃ | 消前PH值：自然温度：30℃±1 | 消前PH值：7.2-7.5温度：28-32℃ |
| 样芽孢杆菌 | 通风比：0小时1.1.2-2.28小时后：1∶4-5搅拌：300-450(650)rpm周期：41-48小时 | 通风比：0小时1∶0.8-1.24小时后：1∶1.8-2.6搅拌：380rpm周期：40-45小时 | 通风比：0.36-0.96搅拌：230rpm周期：30-40小时 | |
| 肺炎克氏菌 | YHN | 消前PH值：7.0温度：30℃±1通风比：1∶0.8-1.2搅拌：不开周期：32-36小时 | 消前PH值：7.0温度：30℃±1通风比：1∶0.6-0.7搅拌：不开周期：24-36小时 | 消前PH值：7.0温度：30℃±1通风比：1∶0.5-0.6搅拌：不开周期：24-32小时 |
实施例七：添加适量增效剂的方案
为了增加本项新产品的使用效果，本发明设计了添加增效剂的方案。增效剂的主要成份是：硼、锰、锌、钼等微量元素。
为了使营养元素的添加量合理，即显效，又不致过高，同时也为了达到各种成份配比合理，不发生任何物理、化学变化的目的，我们对增效剂的配方进行了优化。
本发明采用单因子试验及正交试验相配合的优化方法，通过三种作物的盆栽试验，考察不同配比及各主要成份不同含量水平的施用效果，选出了最佳配比，最终确定了可用于生产的增效剂配方：
名称 加量 分子式 常用量
硫酸锌 4.5-8.2 ZnSO4·7H2O 0.05-0.2
硫酸锰 0.8-1.9 MnSO4·7H2O 0.1
硫酸亚铁 0.6-1.4 FeSO4·7H2O 0.1-0.2
硫酸铜 0.05-1.0 CuSO4·5H2O 0.02-0.05
钼酸铵 0.02-1.9 (NH4)Mo7O24·4H2O 0.01-0.05
硼酸 0.4-1.9 H3BO3 0.05-0.15
实施例八：微生物复合肥料在冬瓜上的应用效果
试验作物为冬瓜，品种为广东青皮冬瓜，试验对象为“坤奇尔”微生物复合肥料在冬瓜上的增产性和抗逆性。天达2116植物生长营养液、黄金钾、绿源宝为瓜农常用叶面肥，本试验作为对照。
1、“坤奇尔”微生物复合肥料 新疆惠森生物技术有限公司
2、天达2116植物生长营养液 山东天达生物制药股份有限公司
3、黄金钾河 北省昌黎县好收成农化制品厂
4、绿源宝 山东寿光绿洲农化有限公司
试验设计
1、试验地点
试验地点设在苍山县兴明乡孙于沟村朱怀伦、马春学、孙加国三户的冬瓜种植田。
2、试验田要求
地势平整、有水浇条件、肥力中等，田间栽培管理、基肥的使用量、冬瓜品种及病害发生程度一致。
3、小区设计
每个小区面积30m2，重复三次，随机排列。
4、试验处理
①、“坤奇尔”微生物复合肥料 液体400ml/亩+固体1kg/亩
②、“坤奇尔”微生物复合肥料液体 400ml/亩
③、天达2116植物生长营养液 100g/亩
④、黄金钾 100g/亩
⑤、绿源宝 100g/亩
⑥、清水对照
5、施用时期及次数
处理①固体“坤奇尔”微生物复合肥料作基肥。液体“坤奇尔”微生物复合肥料及其他肥料于冬瓜生长期(4月20日)第一次喷施，以后每隔7天喷施一次，连喷3次。
6、施药方法
采用卫士牌背负式喷雾器对水常规喷雾，均匀喷洒叶面。
田间调查方法
1、长势调查
采取对角线5点取样法调查，每点取10株，末次施药后5天、7天、14天，调查标记的冬瓜植株长势。
长势分级方法：
1级：壮株，植株健壮，叶片浓绿，根系发达。
2级：旺株，叶色淡绿，茎秆细，有部分病叶。
3级：弱株，叶片小，叶色黄，有病。
2、抗逆性调查
采用对角线5点取样法调查，每点取10株，于施药前、第一次施药后7天及第三次施药后7天、14天、21天调查标记的冬瓜植株病情指数，计算防治效果。
白粉病分级方法：
0级：无病斑，
1级：病斑面积占整个叶片面积的5％以下；
3级：病斑面积占整个叶面积6％-10％；
5级：病斑面积占整个叶面积的11-20％；
7级：病斑面积占整个叶片面积的21-50％；
9级：病斑面积占整个叶面积的50％以上。
试验结果分析
表1： 冬瓜植株长势调查统计表
1、生长期调查：
由表1可以看出，使用“坤奇尔”微生物复合肥料的处理①一级壮株占88.5％，处理②一级壮株占84.3％，明显高于对照区的70.6％，处理①、处理②分别比对照高出17.9个、13.7个百分点，长势明显好于对照区。
抗逆性
由表3可以看出，第三次喷药后21天，处理①“坤奇尔”微生物复合肥料、处理②“坤奇尔”微生物复合肥料的病情指数分别为18.88、21.38，防治效果分别为34.54、33.51，对冬瓜的白粉病有明显的防治效果。
2、产量分析
由表2可以看出，处理①“坤奇尔”微生物复合肥料的冬瓜平均产量9463.3kg/亩，比对照增产20.25％。处理②“坤奇尔”微生物复合肥料的冬瓜平均产量9444.9kg/亩，比对照增产20.02％。
结论
“坤奇尔”微生物复合肥料对冬瓜的生长有明显的促进作用，改善了冬瓜的品质，提高了冬瓜对疫病、白粉病的抗性。经产量分析表明，处理①“坤奇尔”微生物复合肥料、处理②“坤奇尔”微生物复合肥料比对照处理⑥增产明显，增产冬瓜20.25％和20.02％。经方差分析，处理与对照间差异达到极显著水平。经多重比较可以看出处理①、处理②与对照间差异达到极显著水平。“坤奇尔”投入产出比为1∶5.2。
表2： 试验冬瓜产量统计表
注：小区产量为三个试验点的平均数。
表3：“坤奇尔”微生物复合肥料处理对冬瓜白粉病的防治效果
实施例九：微生物复合肥料在辣椒上的肥效试验效果
按照农业部《肥料登记管理办法》和农业行业标准《肥料效应鉴定田间试验技术规程》的要求，为验证“坤奇尔”微生物复合肥料在辣椒生产上的应用效果，进行本试验工作。
1.材料及实验方法
试验于2005年6月6日安排在山东省成武县汶上镇牛老家村内。由新疆惠森生物技术有限公司提供的“坤奇尔”微生物复合肥料，供试品种为：益度红。前茬作物为小麦，亩产430kg。该地块土壤为潮土，质地轻壤，中肥力水平，地力均匀。试验点土壤养分情况见下表：
试验点土壤养分基本情况
| 试验地点 | 有机质 | 碱解氮 | 速效磷 | 速效钾 |
| g/kg | Mg/kg | mg/kg | mg/kg | |
| 成武县汶上镇牛老家村 | 8.0 | 68.6 | 6.8 | 75.3 |
试验共设三个处理，三次重复，随机区组排列，小区面积333m2
处理一：ck当地习惯施肥。
处理二：ck+在辣椒移栽定植前亩用“坤奇尔”复合生物菌肥1000克均匀翻入土壤，不用进行叶面喷施。
处理三：ck+在辣椒移栽定植前亩用“坤奇尔”微生物复合肥料1000克均匀翻入土壤，于定植后20天进行叶面喷施，用“坤奇尔”微生物复合肥料稀释150倍每隔15天喷施一次，连喷三次。6月12日定植，7月1日进行第一次叶面喷施。
2.田间管理及记录
试验点田间管理如下表：
试验点田间管理情况表
| 试验地点 | 成武县汶上镇牛老家村 |
| 小区面积作物品种定植期 | 333平方米益度红6月12日(4月22日育苗) |
| 定植密度 | 4000株 |
| 收获期 | 8月25日至11月20日 |
| 基处理一肥情处理二况处理三 | 6月8日底施有机肥2000公斤/亩、复合肥50公斤/亩、硫酸钾20公斤/亩。同上同上 |
3.结果与分析
3.1试验结果与分析
试验结果如表1所示，自8月25日至9月30日实际采收的辣椒，处理一辣椒平均产量为718.4千克/亩，处理二辣椒的平均为835.5千克/亩，处理二与处理一相比增产16.3％；处理三辣椒的平均为903.4千克/亩，处理三与处理一相比增产25.8％。
表1 成武县汶上镇牛老家村试验结果统计
| 处理 | 亩产(千克) | |||
| I | II | III | 平均 | |
| 处理一 | 743.3 | 729.5 | 682.3 | 718.4 |
| 处理二 | 862.5 | 848.5 | 795.5 | 835.5 |
| 处理三 | 915.3 | 875.0 | 920.0 | 903.4 |
对辣椒试验各处理区辣椒的亩产量进行方差分析，各处理之间辣椒的亩产量差异显著，对各处理辣椒亩产量进行多重比较，结果如表2所示，可以看出，处理二与处理三之间辣椒亩产量差异显著，处理二、三辣椒的亩产量明显高于处理一的，差异达到极显著水平。
F＝32.22* F0.05＝6.94 F0.01＝18.00 LSD0.05＝56.06LSD0.01＝92.97
表2 成武县汶上镇牛老家村试验PLSD检测
| 处理 | 平均产量(千克/亩)Xi | 差异显著性 | |
| 0.05 | 0.01 | ||
| 处理三 | 903.4 | a | A |
| 处理二 | 835.5 | b | AB |
| 处理一 | 718.4 | c | C |
3.2辣椒长相观察
在辣椒生产上用“坤奇尔”微生物复合肥料作基肥的小区，辣椒定植后缓苗快，植株健壮，叶色深绿，抗逆、抗病性强，蕾铃脱落率低，座果率高。根据6月28日至9月7日调查，使用“坤奇尔”微生物复合肥料的小区，辣椒枯萎病、疫病、病毒病均比对照区轻，辣椒枯萎病、疫病、病毒病的病指分别在8.6％-13.6％、15.9％-23.6％、6.3％-10.2％，对照区辣椒枯萎病、疫病、病毒病的病指分别在19.2％-26.3％、25.1％-33.9％、11.3％-19.4％。
4.小结
4.1“坤奇尔”微生物复合肥料在辣椒生产上作基肥和喷施都有十分显著的增产效果，与不施用对照相比增产幅度在16.3％-25.8％。
4.2本试验未对产品品质进行分析，根据“坤奇尔”微生物复合肥料的作用机理，应对产品品质具有良好的作用。
4.3施用“坤奇尔”微生物复合肥料的辣椒，抗逆、抗病性强，发病率低。
4.4根据试验结果判断，可以大面积推广使用。
实施例十：微生物复合肥料在马铃薯上的肥效试验效果
一、试验目的：
为探讨“坤奇尔”微生物复合肥料在马铃薯上的应用效果，为大田推广提供科学依据，特设立此试验。
二、基本情况：
试验地点在武宁镇区电业局化肥厂门前，土质为壤土属于中高肥水地块，排灌条件良好，前茬作物为茄子、大白菜、辣椒等蔬菜，耕种前每亩施50％腐殖酸复合肥(N-P-K 13-7-10)50公斤底肥，同时亩施地虫克2公斤，以防治地下害虫。马铃薯品种为“中薯四号”，株距20cm，行距55cm，亩栽6000株，在生长过程中没防治病虫害，共浇水2次。2005年3月21日栽种，7月1日收获。
三、试验处理：
试验设二个处理，每小区0.4亩，不设重复。
1、“坤奇尔”微生物复合肥料拌种处理，
2、常规栽培(不拌种)。
在马铃薯生长期间(5月25日)，1处理喷洒150倍“坤奇尔”微生物复合肥料一次。对照不喷。
四、试验结果：
1、生长期观察。在马铃薯生长期间观测，进行处理的小区，马铃薯长势明显，叶片较对照浓绿，生长高度不明显；在6月15日起，对照小区开始有单株马铃薯叶片枯黄，渐至整株枯萎死亡，而处理区无此现象。至6月29日，对照区已经大片枯萎，但处理区长势依然良好，叶片浓绿，有个别株开始叶片变黄。
2、收获期测产。采取5点取样，每点采集1平方米进行测产，结果见表1。
表1“坤奇尔”微生物复合肥料测产结果表
从表1可以看出，经过拌种处理的马铃薯较对照增产明显，亩增580公斤，增产率达24.5％。由此试验我们认定，“坤奇尔”微生物复合肥料对不仅可以延长马铃薯的生育期，而且有明显增产效果，使农民达到增产增收之目的。
实施例十一：微生物复合肥料在小麦上的肥效试验效果
本次试验供试的小麦品种是淄麦17号，试验田是沙壤土质，地块方位是南北向长，面积是2亩，该地的小麦是2003年10月9日播种的基本苗是每亩25万株，冬前冬后长势均好。基本情况见表1。
表1 试验田基本情况
| 小麦品种 | 播种时间 | 试验面积 | 地块方位 | 播种量(亩) | 地块类型 | 基本苗密度(亩) | |
| 处理 | 对照 | ||||||
| 淄麦17号 | 2003.10.9 | 1亩 | 1亩 | 南北向长 | 22.5公斤 | 沙壤土 | 25万株 |
试验田处理时间是2004年4月1日雨后。“坤奇尔”微生物复合肥料一袋(500克)加20斤尿素，均匀撒施在试验田内，而对照麦田只均匀撒施尿素10公斤。
自4月1日处理后，处理田和对照田的管理相同。4月15日调查，处理田和对照田，无明显差异，都长势茂盛。5月1日调查差异较明显。处理田比对照田抗病，植株表现健壮。6月10日调查，处理田株高80厘米，对照田株高79厘米，处理田比对照田株高增加1厘米。处理田亩穗数是54.1万穗，对照田亩穗数是50.8万穗，处理比对照亩增加3.3万穗。单株小穗数，处理比对照增加一个，穗粒数，处理比对照增加4粒，单株叶片数，处理和对照相同。详见表2：
表2 “坤奇尔”微生物复合肥料小麦试验田调查结果
| 调查时间 | 试验小区 | 单株叶片数(片) | 株高(厘米) | 小穗数(万穗) | 亩穗数(万穗) | 实际产量(公斤) |
| 2004.6.10 | 处理 | 5 | 80 | 17 | 54.1 | 541.5 |
| 2004.6.10 | 对照 | 5 | 79 | 16 | 50.8 | 488 |
6月10日调查，6月11日收割，小麦单打单晒，晒干称重。处理区亩产541.5公斤，对照区亩产488公斤，处理比对照田每亩增加53.5公斤，增产10.9％。
试验证明，使用“坤奇尔”微生物复合肥料，经济实惠，增产效果显著。
实施例十二：微生物复合肥料在棉花上的肥效试验效果
“坤奇尔”微生物复合肥料在棉花上的试验供试棉花品种是鲁棉研22号，该品种生育期127天，出苗好，苗期长势强，株型较紧凑，群体整齐一致，遗传稳定性强。田间通透性好，铃壳薄，吐絮畅，铃重5.9克，衣分42.1％。具有抗棉铃虫、抗枯萎、抗黄萎、抗旱、抗(耐)盐碱、抗倒伏等多种抗性。该品种最突出的优点是综合性较好。增产潜力大，后期叶功能强，叶絮后叶脱落轻，仍为绿色不早衰。
本次试验设处理666.7m2，对照666.7m2，不设重复。处理用“坤奇尔”复合生物菌肥一袋(500克)拌种，对照不使用“坤奇尔”微生物复合肥料，其他方面与处理相同。同时与处理同日，即2004年4月18日播种，全部地膜覆盖播种，详见表1。
表1 坤奇尔棉花试验田基本情况调查
| 试验面积 | 播种时间 | 棉种品种 | 种子处理 | 播种量(斤) | 地块方位 | 放苗日期 |
| 处理667m2 | 2004.4.18 | 鲁棉研22号 | 用“坤奇尔”500克播种 | 8斤 | 南北向长 | 2004.4.28 |
| 对照667m2 | 2004.4.18 | 鲁棉研22号 | 不用“坤奇尔” | 8斤 | 南北向长 | 2004.4.28 |
试验田4月28日放苗，放完苗后，从苗情上看，处理区出苗整齐，叶片茂盛。对照区不如处理区整齐，叶片瘦弱。在棉花出苗、放苗后，整个苗期，处理区和对照区的棉苗生长差异较大，处理区的棉苗表现良好，耐病，抗病。对照区的棉苗则明显不如处理区的棉苗旺盛。具体情况见表2：
表2“坤奇尔”微生物复合肥料棉花试验田基本情况调查
| 调查日期 | 调查小区 | 调查株数 | 发病株数 | 发病率(％) | 死亡株数 | 死亡株率(％) | |
| 月 | 日 | ||||||
| 5 | 5 | 处理 | 100 | 5 | 5 | 1 | 1 |
| 5 | 5 | 处理 | 100 | 22 | 22 | 3 | 3 |
| 5 | 10 | 处理 | 100 | 16 | 16 | 3 | 3 |
| 5 | 10 | 对照 | 100 | 36 | 36 | 6 | 6 |
| 5 | 15 | 对照 | 100 | 14 | 14 | 2 | 2 |
| 5 | 15 | 对照 | 100 | 23 | 23 | 5 | 5 |
从上表可以看出，在“坤奇尔”微生物复合肥料棉花试验中，棉花苗期在使用“坤奇尔”微生物复合肥料拌种的棉苗中，抗病性大大增强，通过三次调查，使用坤奇尔处理的棉苗发病率为11.7％，死亡率为2.3％，而对照区的棉苗发病率为27％，死亡率为4.7％。对照区划棉花病害发病程度和死亡程度分别是处理区棉花的发病程度的2倍以上。
在定苗以后，处理区于6月5日和7月10日喷施了两遍100倍的“坤奇尔”液体菌肥稀释液，至此，处理区处理结束，从此处理区和对照区管理相同，而棉花长势则处理区越来越明显的好于对照区。
在10月15日，进行最后调查，调查结果见表3：
表3“坤奇尔”微生物复合肥料棉花试验田基本情况调查
| 调查日期 | 调查小区 | 小区面积(亩) | 小区密度(株) | 单株高(厘米) | 单株果枝(个) | 单株铃数(个) | |
| 月 | 日 | ||||||
| 10 | 15 | 处理 | 1 | 3220 | 113 | 14 | 21 |
| 10 | 15 | 对照 | 1 | 3220 | 108 | 13 | 18 |
从表3可以看出，在密度相同的条件下，处理区的棉花明显好于对照区，朱高，处理区比对照去平均株高增加5厘米，单株平均果枝数处理区比对照区，单株果枝增加1个。平均果枝铃数，处理区比对照区增加3个。
理论产量处理区亩产为398.95公斤，对照区亩产341.96公斤，处理区比对照区亩产增加56.99公斤，增产幅度为16.7％，经济效益十分客观。
通过试验证明，“坤奇尔”微生物复合肥料价格低廉，使用方便，增产效果明显，在棉花生产中，很有推广、使用的价值。
Claims (5)
1、一种复合微生物肥料，其特征在于，由胶冻样芽胞杆菌、肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种和巨大芽胞杆菌三种菌以重量比1∶1∶1混合，其混合物与增效剂组合物配伍而获得。
2、如权利要求1所述的肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种，其特征在于，具有固氮功能的肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(klebsiella pneumoniaesubsp pneumonaiae)CGMCC.No1642。
3、如权利要求1所述的胶冻样芽胞杆菌，其特征在于，具有解钾功能的胶冻样芽胞杆菌(Bacillus mucilaginosus)CGMCC.No1641。
4、如权利要求1所述的巨大芽胞杆菌，其特征在于，具有解磷功能的巨大芽胞杆菌(Bacillus megaterium)CGMCC.No1640。
5、如权利要求1所述的增效剂组合物，其组合物以重量计，具体组合物为，硫酸锌4.5％-8.2％、硫酸锰0.8％-1.9％、硫酸亚铁0.6％-1.4％、硫酸铜0.05％-1.0％、钼酸铵0.02％-1.9％、硼酸0.4％-1.9％、尿素0.5％-6％、磷酸氢二钾0.2％-1％、重过磷酸钙0.3％-5％、硫酸钙0.3％-2％、酵母汁0.2％-2％、蛋白冻、0.2％-2％、CaCl 0.01％-0.3％。
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