CN111548966B - 一种促进马铃薯增产抗病的微生物菌剂及其制备方法 - Google Patents

一种促进马铃薯增产抗病的微生物菌剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种促进马铃薯增产抗病的微生物菌剂，所述微生物菌剂，包括枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、酵母菌、沙福芽孢杆菌、植物乳杆菌；本发明还提供上述菌剂的制备方法。本发明所述微生物菌剂，用于马铃薯种植，马铃薯根系发达，生长势强，叶片肥大而浓绿，马铃薯秧子较对照衰败晚7‑10天，果实表光度较好，没有发生青枯病，本发明所述微生物菌剂，较灭活的微生物菌剂或者不施用微生物菌剂相比，单果重平均增加0.8g，单株土豆平均增加0.7—1.2个。本发明所述微生物菌剂，用于马铃薯种植，平均亩产量达4800‑4850千克，增产24‑25%以上，青枯病发病率为0%。

Description

一种促进马铃薯增产抗病的微生物菌剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种促进马铃薯增产抗病的微生物菌剂及其制备方法，属于微生物菌剂技术领域。
背景技术
马铃薯是我国重要的粮食作物，我国马铃薯的种植面积和总产量均位居世界首位，但单产水平因病虫害等瓶颈因素的制约低于世界平均水平。近年来，由于马铃薯连作导致土传病害 有逐年加重的趋势，其直接影响马铃薯产量及品质，给马铃薯产业带来了较大的经济损失。
患有青枯病的马铃薯病株稍矮缩，叶片浅绿或苍绿，下部叶片先萎蔫后全株下垂，开始早晚恢复，持续4~5天后，全株茎叶全部萎蔫死亡，但仍保持青绿色，叶片不凋落，叶脉褐变，茎出现褐色条纹，横剖可见维管束变褐，湿度大时，切面有菌液溢出。块茎染病后，轻的不明显，重的脐部呈灰褐色水浸状，切开薯块，维管束圈变褐，挤压时溢出白色粘液，但皮肉不从维管束处分离，严重时外皮龟裂，髓部溃烂如泥，别于枯萎病。
马铃薯青枯病严重影响马铃薯的产量和品质。现有技术中常见利用化学杀菌剂防治土传病害的方法，长期使用导致病原菌抗性增强，同时还会造成环境污染。微生物菌剂以其环境友好性和适应性强受到越来越多的关注。但是现有的微生物菌剂的各菌种之间有的存在拮抗，有的存在协作，复配不合理会导致微生物菌剂的效果大打折扣，起不到防治病害的作用。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明提供一种促进马铃薯增产抗病的微生物菌剂及其制备方法，实现以下发明目的：
（1）防治马铃薯青枯病，提高防效；
（2）提高马铃薯产量。
为解决上述技术问题，本发明采取以下技术方案：
一种促进马铃薯增产抗病的微生物菌剂，所述微生物菌剂，包括枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、酵母菌、沙福芽孢杆菌、植物乳杆菌。
以下是对上述技术方案的进一步改进：
一种促进马铃薯增产抗病的微生物菌剂，所述微生物菌剂，以质量份计，包括以下组分：
Figure 16714DEST_PATH_IMAGE001
；
所述枯草芽孢杆菌，菌种保藏号为CICC21282；
所述巨大芽孢杆菌，菌种保藏号为 ACCC11099；
所述胶质芽孢杆菌，菌种保藏号为ACCC10168；
所述多粘类芽孢杆菌，菌种保藏号为ACCC10252；
所述酵母菌，菌种保藏号为ACCC20157；
所述沙福芽孢杆菌，菌种保藏号为ACCC19478；
所述植物乳杆菌，菌种保藏号为CICC24194。
所述枯草芽孢杆菌，为休眠体微生物干粉，干粉中枯草芽孢杆菌芽孢含量≥1011个/克；
所述巨大芽孢杆菌，为休眠体微生物干粉，干粉中巨大芽孢杆菌芽孢含量≥1011个/克；
所述胶质芽孢杆菌，为休眠体微生物干粉，干粉中胶质芽孢杆菌芽孢含量≥1010个/克；
所述多粘类芽孢杆菌，为休眠体微生物干粉，干粉中多粘类芽孢杆菌芽孢含量≥5×1010个/克；
所述酵母菌，为休眠体微生物干粉，干粉中酵母菌含量≥1010个/克；
所述沙福芽孢杆菌，为休眠体微生物干粉，干粉中沙福芽孢杆菌芽孢含量≥1011个/克；
所述植物乳杆菌，为休眠体微生物干粉，干粉中植物乳杆菌含量≥1010个/克。
上述菌种，都是通过市场购买得到。
所述枯草芽孢杆菌有效活菌数为2.0×1010CFU/克，巨大芽孢杆菌有效活菌数为1.0×1010CFU/克，胶质芽孢杆菌有效活菌数为5.0×109CFU/克，多粘类芽孢杆菌有效活菌数为1.0×1010CFU/克，酵母菌有效活菌数为6.0×109CFU/克，沙福芽孢杆菌有效活菌数为1.0×1010CFU/克，植物乳杆菌有效活菌数为3.0×109CFU/克。
一种促进马铃薯增产抗病的微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
枯草芽孢杆菌CICC21282休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的种子罐内，体积接种量为0.1～0.6%，培养温度为36～39℃，种子罐搅拌转速220～240rpm，培养8～10h，菌体达到对数生长期；将培养好的种子罐菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为5～10%，所述种子罐和发酵罐的配方相同，培养基的配方为玉米粉25～35g/L、豆粕粉30～40g/L、氯化钠2～10g/L、磷酸氢二钾1～8g/L、硫酸镁0.5～1g/L和硫酸锰0.2～0.6g/L，在培养温度为36～39℃,发酵罐搅拌转速200～220rpm培养30～38h，发酵罐中枯草芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上，含量≥1010个/ml，然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经喷雾干燥制备成休眠体微生物干粉，干粉中枯草芽孢杆菌芽孢含量≥1011个/克。
巨大芽孢杆菌ACCC11099的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将纯化培养的斜面培养基上的巨大芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为20～30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为牛肉膏蛋白胨培养基，在培养温度为36～40℃,摇瓶转速180～220rpm培养16～22h；
将活化培养好的巨大芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的种子罐内，体积接种量为0.1～0.5%，培养温度为36～40℃，种子罐搅拌转速200～220rpm培养12～14h，菌体达到对数生长期；将培养好的种子罐菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为5～10%，所述种子罐和发酵罐的配方相同，培养基的配方为豆饼粉25～35g/ L、玉米粉18～25g/ L、磷酸氢二钾0.5～1.5g/ L、玉米浆5～10g/ L、硫酸锰0.1～0.6g/ L和氯化钙1～5g/ L，在培养温度为36～40℃,发酵罐搅拌转速200～220rpm培养25～36h，发酵罐中巨大芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上，含量≥1010个/ml，然后将发酵得到的巨大芽孢杆菌单菌经喷雾干燥制备成休眠体微生物干粉，干粉中巨大芽孢杆菌芽孢含量≥1011个/克。
胶质芽孢杆菌ACCC10168休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将纯化培养的斜面培养基上的胶质芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蔗糖15～30g/ L、磷酸氢二钾0.1～2g/ L、硫酸镁0.1～1g/ L、碳酸钙0.5～5g/ L和酵母膏0.1～1g/ L，在培养温度为28～32℃，摇瓶转速140～160rpm培养20～30h；
将活化培养好的胶质芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的种子罐内，体积接种量为0.3～1%，培养温度为28～32℃,种子罐搅拌转速180～200rpm培养16～18h，菌体达到对数生长期；将培养好的种子罐菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为5～10%，所述种子罐和发酵罐的配方相同，培养基的配方为玉米粉10～30g/ L、磷酸二氢钾0.5～1.5g/ L、磷酸氢二钾0.5～2g/ L、玉米浆1～5g/ L、硫酸镁0.5～1.5g/ L、硫酸锰0.1～0.8g/ L、碳酸钙5～15g/ L和酵母粉0.1～0.8g/ L，在培养温度为28～32℃,发酵罐搅拌转速180～200rpm培养36～45h，发酵罐中胶质芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上，含量≥8×108个/ml，然后将发酵得到的胶质芽孢杆菌单菌经沸腾干燥制备成休眠体微生物干粉，干粉中胶质芽孢杆菌芽孢含量≥1010个/克。
多粘类芽孢杆菌ACCC10252休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将活化培养好的多粘类芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的种子罐内，体积接种量为0.5～1%，培养温度为28～32℃，种子罐搅拌转速200～220rpm培养16～20h，菌体达到对数生长期；将培养好的种子罐菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为5～10%，所述种子罐和发酵罐的配方相同，培养基的配方为玉米粉20～35g/L、豆粕粉30～40g/L、氯化钙1～8g/L、磷酸氢二钾1～5g/L、氯化铵0.5～2g/L、硫酸镁1～5g/L和硫酸锰0.5～1g/L，在培养温度为28～32℃,发酵罐搅拌转速200～220rpm培养28～35h，发酵罐中多粘类芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上，含量≥7×109个/ml，然后将发酵得到的解淀粉芽孢杆菌单菌经喷雾干燥制备成休眠体微生物干粉，干粉中多粘类芽孢杆菌芽孢含量≥5×1010个/克。
酵母菌ACCC20157休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将活化培养好的酵母菌菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的种子罐内，体积接种量为1～3%，培养温度为28～30℃，种子罐搅拌转速180～200rpm培养20～24h，菌体大量繁殖；将培养好的种子罐菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为5～10%，所述种子罐和发酵罐的配方相同，培养基的配方为蛋白胨15～25g/L、葡萄糖5～10g/L、牛肉粉10～20g/L、氯化铵3～15g/L、磷酸二氢钾5～12g/L、和尿素5～15g/L，在培养温度为28～30℃，发酵罐搅拌转速180～200rpm培养42～50h，发酵罐中酵母菌含量≥109个/ml，然后将发酵得到的酿酒酵母经流化床沸腾干燥制备成休眠体微生物干粉，干粉中酵母菌含量≥1010个/克。
沙福芽孢杆菌休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将活化培养好的沙福芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的种子罐内，体积接种量为0.1～1%，培养温度为36～39℃,种子罐搅拌转速200～220rpm培养12～14h，菌体达到对数生长期；将培养好的种子罐菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为5～10%，所述种子罐和发酵罐的配方相同，培养基的配方为玉米粉10～25g/L、豆粕粉20～35g/L、葡萄糖5～15 g/L、氯化钠1～10g/L、磷酸氢二钾3～10g/L、硫酸镁1～5g/L和硫酸锰0.1～1g/L，在培养温度为36～39℃,发酵罐搅拌转速200～220rpm培养28～35h，发酵罐中沙福芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上，含量≥1010个/ml，然后将发酵得到的沙福芽孢杆菌经喷雾干燥制备成休眠体微生物干粉，干粉中沙福芽孢杆菌芽孢含量≥1011个/克。
植物乳杆菌CICC24194休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
将纯化培养的斜面培养基上的植物乳杆菌菌种接种至装有体积比为50～70%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为MRS培养基，在培养温度为36～40℃,静置培养20～25h；
将活化培养好的植物乳杆菌菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的种子罐内，体积接种量为1～3%，培养温度为36～40℃，种子罐静置培养24～28h，菌体大量繁殖；将培养好的种子罐菌种接种到装有体积比为50～70%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为5～10%，所述种子罐和发酵罐的配方相同，培养基的配方为葡萄糖10～25g/L、胰蛋白胨10～20g/L、牛肉粉5～12g/L、酵母粉10～20g/L、乙酸钠5～12g/L、磷酸氢二钾1～6g/L和硫酸镁1～5g/L，在培养温度为36～40℃,发酵罐静置培养35～42h，发酵罐中植物乳杆菌含量≥109个/ml，然后将发酵得到的植物乳杆菌单菌添加保护剂经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，干粉中植物乳杆菌含量≥1010个/克。
本发明中的枯草芽孢杆菌通过成功定殖至植物根际、体表和体内，与病原菌竞争植物周围的营养，分泌抗菌物质以抑制病原菌生长，同时诱导植物防御系统抵御病原菌入侵。
本发明中的巨大芽孢杆菌在生命代谢活动中产生有机酸(乳酸、氨基酸、草酸、延胡索酸和柠檬酸等)，这些酸一方面直接溶解土壤中难溶性磷酸盐，另一方面则是通过螯合作用释放出土壤磷素，进而协助土壤中微生物的增长，预防土壤病害发生，减少连作障碍等问题，以达到土壤改良的功效。
本发明中的胶质芽孢杆菌能分泌生长素物质和赤霉素物质等促生长物质，增根壮苗，直接增强植株抗旱能力；能分解土壤里硅元素供植物利用，使得植物的蜡质层增厚，提高植物保水能力；能促进土壤团粒结构形成，防止土壤板结；破坏土壤毛细现象，防止土壤水分蒸发。
本发明中的多粘类芽孢杆菌可有效防治多种细菌性和真菌性土传病害，对马铃薯青枯病防治效果极佳，另外对马铃薯还有明显的促生长作用。
本发明中的沙福芽孢杆菌，能有效防治马铃薯青枯病。
本发明中的酵母菌和植物乳杆菌能有效提高土壤的通透性，分泌的产物还能防治多种土传病害。
采用上述技术方案，取得以下有益效果：
（1）本发明所述微生物菌剂，用于马铃薯种植，马铃薯根系发达，生长势强，叶片肥大而浓绿，马铃薯秧子较对照衰败晚7-10天，果实表光度较好，没有发生青枯病，本发明所述微生物菌剂，较灭活的微生物菌剂或者不施用微生物菌剂相比，单果重平均增加0.8g，单株土豆平均增加0.7—1.2个。
（2）本发明所述微生物菌剂，用于马铃薯种植，平均亩产量达4800-4850千克，增产24-25%以上，青枯病发病率为0%；防治马铃薯青枯病效果极佳。
具体实施方式
实施例1一种促进马铃薯增产抗病的微生物菌剂
以重量份计，所述微生物菌剂包括以下组分：
Figure 690272DEST_PATH_IMAGE002
所述的枯草芽孢杆菌CICC21282，为休眠体微生物干粉，干粉中枯草芽孢杆菌芽孢含量≥1011个/克；
所述的巨大芽孢杆菌 ACCC11099，为休眠体微生物干粉，干粉中巨大芽孢杆菌芽孢含量≥1011个/克；
所述的胶质芽孢杆菌ACCC10168，为休眠体微生物干粉，干粉中胶质芽孢杆菌芽孢含量≥1010个/克；
所述的多粘类芽孢杆菌ACCC10252，为休眠体微生物干粉，干粉中多粘类芽孢杆菌芽孢含量≥5×1010个/克；
所述的酵母菌 ACCC20157，为休眠体微生物干粉，干粉中酵母菌含量≥1010个/克；
所述的沙福芽孢杆菌 ACCC19478，为休眠体微生物干粉，干粉中沙福芽孢杆菌芽孢含量≥1011个/克；
所述的植物乳杆菌CICC24194，为休眠体微生物干粉，干粉中植物乳杆菌含量≥1010个/克。
实施例2 上述微生物菌剂的制备方法
包括以下步骤：
（1）枯草芽孢杆菌CICC21282休眠体微生物干粉的制备
将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为60%发酵培养基的种子罐内，体积接种量为0.3%，培养温度为37℃，种子罐搅拌转速230rpm，培养9h，菌体达到对数生长期；将培养好的种子罐菌种接种到装有体积比为60%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为8%，所述种子罐和发酵罐的配方相同，培养基的配方为玉米粉30g/L、豆粕粉35g/L、氯化钠6g/L、磷酸氢二钾5g/L、硫酸镁0.7g/L和硫酸锰0.4g/L，在培养温度为37℃,发酵罐搅拌转速210rpm培养35h，发酵罐中枯草芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上，含量≥1010个/ml，然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经喷雾干燥制备成休眠体微生物干粉，干粉中枯草芽孢杆菌芽孢含量≥1011个/克。
（2）巨大芽孢杆菌ACCC11099的休眠体微生物干粉的制备
将纯化培养的斜面培养基上的巨大芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为25%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为牛肉膏蛋白胨培养基，在培养温度为38℃,摇瓶转200rpm培养20h；
将活化培养好的巨大芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为60%发酵培养基的种子罐内，体积接种量为0.3%，培养温度为38℃，种子罐搅拌转速210rpm培养13h，菌体达到对数生长期；将培养好的种子罐菌种接种到装有体积比为60%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为8%，所述种子罐和发酵罐的配方相同，培养基的配方为豆饼粉31g/ L、玉米粉22g/ L、磷酸氢二钾1.0 g/ L、玉米浆7g/ L、硫酸锰0.3g/ L和氯化钙3g/ L，在培养温度为38℃,发酵罐搅拌转速210rpm培养30h，发酵罐中巨大芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上，含量≥1010个/ml，然后将发酵得到的巨大芽孢杆菌单菌经喷雾干燥制备成休眠体微生物干粉，干粉中巨大芽孢杆菌芽孢含量≥1011个/克。
（3）胶质芽孢杆菌ACCC10168休眠体微生物干粉的制备
将纯化培养的斜面培养基上的胶质芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15～30%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蔗糖22g/ L、磷酸氢二钾1g/ L、硫酸镁0.5g/ L、碳酸钙2g/ L和酵母膏0.5g/ L，在培养温度为30℃，摇瓶转速150rpm培养26h；
将活化培养好的胶质芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为65%发酵培养基的种子罐内，体积接种量为0.5%，培养温度为30℃,种子罐搅拌转速190rpm培养17h，菌体达到对数生长期；将培养好的种子罐菌种接种到装有体积比为60%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为8%，所述种子罐和发酵罐的配方相同，培养基的配方为玉米粉20g/ L、磷酸二氢钾1g/ L、磷酸氢二钾1g/ L、玉米浆3g/ L、硫酸镁1g/ L、硫酸锰0.5g/ L、碳酸钙10g/ L和酵母粉0.5g/ L，在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速190rpm培养40h，发酵罐中胶质芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上，含量≥8×108个/ml，然后将发酵得到的胶质芽孢杆菌单菌经沸腾干燥制备成休眠体微生物干粉，干粉中胶质芽孢杆菌芽孢含量≥1010个/克。
（4）多粘类芽孢杆菌ACCC10252休眠体微生物干粉的制备
将活化培养好的多粘类芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为60%发酵培养基的种子罐内，体积接种量为0.7%，培养温度为30℃，种子罐搅拌转速210rpm培养18h，菌体达到对数生长期；将培养好的种子罐菌种接种到装有体积比为60%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为7%，所述种子罐和发酵罐的配方相同，培养基的配方为玉米粉28g/L、豆粕粉35g/L、氯化钙5g/L、磷酸氢二钾3g/L、氯化铵1g/L、硫酸镁3g/L和硫酸锰0.7g/L，在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速210rpm培养31h，发酵罐中多粘类芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上，含量≥7×109个/ml，然后将发酵得到的解淀粉芽孢杆菌单菌经喷雾干燥制备成休眠体微生物干粉，干粉中多粘类芽孢杆菌芽孢含量≥5×1010个/克。
（5）酵母菌ACCC20157休眠体微生物干粉的制备
将活化培养好的酵母菌菌种接种到装有体积比为65%发酵培养基的种子罐内，体积接种量为2%，培养温度为29℃，种子罐搅拌转速190rpm培养22h，菌体大量繁殖；将培养好的种子罐菌种接种到装有体积比为65%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为8%，所述种子罐和发酵罐的配方相同，培养基的配方为蛋白胨20g/L、葡萄糖8g/L、牛肉粉15g/L、氯化铵10g/L、磷酸二氢钾8g/L、和尿素10g/L，在培养温度为29℃，发酵罐搅拌转速210rpm培养45h，发酵罐中酵母菌含量≥109个/ml，然后将发酵得到的酿酒酵母经流化床沸腾干燥制备成休眠体微生物干粉，干粉中酵母菌含量≥1010个/克。
（6）沙福芽孢杆菌ACCC19478休眠体微生物干粉的制备
将活化培养好的沙福芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为60%发酵培养基的种子罐内，体积接种量为0.3%，培养温度为37℃,种子罐搅拌转速210rpm培养13h，菌体达到对数生长期；将培养好的种子罐菌种接种到装有体积比为60%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为7%，所述种子罐和发酵罐的配方相同，培养基的配方为玉米粉18g/L、豆粕粉26g/L、葡萄糖10g/L、氯化钠5g/L、磷酸氢二钾8g/L、硫酸镁3g/L和硫酸锰0.5g/L，在培养温度为37℃,发酵罐搅拌转速210rpm培养31h，发酵罐中沙福芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上，含量≥1010个/ml，然后将发酵得到的沙福芽孢杆菌经喷雾干燥制备成休眠体微生物干粉，干粉中沙福芽孢杆菌芽孢含量≥1011个/克。
（7）植物乳杆菌CICC24194休眠体微生物干粉的制备
将纯化培养的斜面培养基上的植物乳杆菌菌种接种至装有体积比为65%的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为MRS培养基，在培养温度为37℃,静置培养23h；
将活化培养好的植物乳杆菌菌种接种到装有体积比为65%发酵培养基的种子罐内，体积接种量为2%，培养温度为37℃，种子罐静置培养26h，菌体大量繁殖；将培养好的种子罐菌种接种到装有体积比为65%发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为8%，所述种子罐和发酵罐的配方相同，培养基的配方为葡萄糖18g/L、胰蛋白胨16g/L、牛肉粉8g/L、酵母粉15g/L、乙酸钠8g/L、磷酸氢二钾4g/L和硫酸镁3g/L，在培养温度为37℃,发酵罐静置培养39h，发酵罐中植物乳杆菌含量≥109个/ml，然后将发酵得到的植物乳杆菌单菌添加保护剂经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉，干粉中植物乳杆菌含量≥1010个/克。
实验例3
对实施例1的微生物菌剂对马铃薯进行试验，试验时间为马铃薯的一个生长周期，实验地点为山东省滕州市大坞镇前峄庄村。
1、供试土壤：该地域土壤类型属于沙壤质潮褐土，地势平坦、整齐，排灌条件较好，肥力中等、均匀，前茬作物未做肥料试验。
2、供试品种及栽培方式：露地地膜马铃薯，超荷兰15号。试验采用直播法播种，2月23日播种，播种前将种子进行催芽，试验地在深翻后耙平，再按70—80cm的行距开沟后把已发芽的种子点播（亩成株数3900—4000株），播后起垄、打除草剂、覆膜。根据市场价格行情，6月7号开始采收，6月11日采收结束。
3、实验设计：试验设计3个处理，3次重复，共计9个试验小区，小区面积40平方米，各小区随机排列，设保护行。
4、试验处理
处理1，常规施肥+穴施实施例1微生物菌剂（3克/穴）；
处理2，常规施肥+穴施等量灭活实施例1微生物菌剂（3克/穴）；
处理3，常规施肥；
试验地田间浇水、施肥、病虫害防治等管理措施保持一致，试验地病害、虫害较轻，试验记录期间天气良好，无明显气候影响因素。
5、结果与分析
5.1不同处理对马铃薯生物学性状的影响
根据田间试验观察记录：穴施实施例1微生物菌剂的地块（处理1），马铃薯根系发达，生长势强，叶片肥大而浓绿，马铃薯秧子较对照衰败晚7—10天，果实表光度较好，没有发生青枯病。处理1、和处理2、处理3相比，单果重平均增加0.8g，单株土豆平均增加0.7—1.2个。
5.2不同处理对马铃薯产量及青枯病发病率的影响：
处理1、处理2比处理3分别亩增产960Kg、136Kg，各处理增产率分别为24.8%、3.4%；处理1没有发生青枯病，处理2和处理3青枯病发病率分别是30%和32%，处理1与处理2产量及青枯病发病率差异极显著，处理2与处理3产量及青枯病发病率差异不显著，说明穴施活性微生物菌剂比灭活微生物菌剂及空白对照组增产效果和抗青枯病的效果均显著，结果见表1。
表1 马铃薯产量统计表
Figure 685910DEST_PATH_IMAGE003
实验例4
实验地点同实验例3，为山东省滕州市大坞镇前峄庄村，实验共分九组，每组三个重复，各组随即排列，分别为实验组、对照组1-对照组7和空白对照组，实验组用实施例1的微生物菌剂，对照组1-7分别用对比例1-7的微生物菌剂，空白对照组不使用微生物菌剂。将实施例1的微生物菌剂以及对比例1-7的微生物菌剂对马铃薯做实验，结果如下表3。（对比例1-7的微生物菌剂配方见表2）。
通过对马铃薯一个周期的跟踪实验，分别对马铃薯根系、长势、单株马铃薯个数、产量、及青枯病发病率等方面进行了全面考察。通过观察穴施实验组微生物菌剂的马铃薯，其各项指标均优于对照组1-对照组7以及空白对照组，其增产比例分别为25.1%、16%、13.7%、14.2%、12.1%、16.2%、15.7%和13.9%。青枯病发病率分别是0、27%、22%、20%、28%、21%、29%、23%、35%，说明去除实验组组分中的任何一个菌种，都会影响该微生物菌剂的应用效果。
表2对比例1-7的微生物菌剂配方
Figure 276160DEST_PATH_IMAGE004
表2中的各微生物菌种保藏号同实施例1。
表3微生物菌剂实验组和对照组对马铃薯的影响
Figure DEST_PATH_IMAGE005
除非特殊说明，本发明采用的比例，均为质量比例，采用的百分比，均为质量百分比。

Claims (7)

1.一种促进马铃薯增产抗病的微生物菌剂，其特征在于：所述微生物菌剂，由枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、酵母菌、沙福芽孢杆菌、植物乳杆菌组成；
所述枯草芽孢杆菌，菌种保藏号为CICC21282；
所述巨大芽孢杆菌，菌种保藏号为 ACCC11099；
所述胶质芽孢杆菌，菌种保藏号为ACCC10168；
所述多粘类芽孢杆菌，菌种保藏号为ACCC10252；
所述酵母菌，菌种保藏号为ACCC20157；
所述沙福芽孢杆菌，菌种保藏号为ACCC19478；
所述植物乳杆菌，菌种保藏号为CICC24194；
所述枯草芽孢杆菌，为休眠体微生物干粉，干粉中枯草芽孢杆菌芽孢含量≥1011个/克；所述巨大芽孢杆菌，为休眠体微生物干粉，干粉中巨大芽孢杆菌芽孢含量≥1011个/克；所述胶质芽孢杆菌，为休眠体微生物干粉，干粉中胶质芽孢杆菌芽孢含量≥1010个/克；所述多粘类芽孢杆菌，为休眠体微生物干粉，干粉中多粘类芽孢杆菌芽孢含量≥5×1010个/克；所述酵母菌，为休眠体微生物干粉，干粉中酵母菌含量≥1010个/克；所述沙福芽孢杆菌，为休眠体微生物干粉，干粉中沙福芽孢杆菌芽孢含量≥1011个/克；所述植物乳杆菌，为休眠体微生物干粉，干粉中植物乳杆菌含量≥1010个/克。
2.根据权利要求1所述的一种促进马铃薯增产抗病的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述微生物菌剂的制备方法，包括枯草芽孢杆菌休眠体微生物干粉的制备；
所述枯草芽孢杆菌休眠体微生物干粉的制备，培养基的配方为玉米粉25～35g/L、豆粕粉30～40g/L、氯化钠2～10g/L、磷酸氢二钾1～8g/L、硫酸镁0.5～1g/L和硫酸锰0.2～0.6g/L，枯草芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上，含量≥1010个/ml时，干燥制备成休眠体微生物干粉。
3.根据权利要求1所述的一种促进马铃薯增产抗病的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述微生物菌剂的制备方法，包括巨大芽孢杆菌休眠体微生物干粉的制备；
所述巨大芽孢杆菌休眠体微生物干粉的制备，培养基的配方为豆饼粉25～35g/ L、玉米粉18～25g/ L、磷酸氢二钾0.5～1.5g/ L、玉米浆5～10g/ L、硫酸锰0.1～0.6g/ L和氯化钙1～5g/ L，发酵至巨大芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上，含量≥1010个/ml时，干燥制备成休眠体微生物干粉。
4.根据权利要求1所述的一种促进马铃薯增产抗病的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述微生物菌剂的制备方法，包括胶质芽孢杆菌休眠体微生物干粉的制备；
所述胶质芽孢杆菌休眠体微生物干粉的制备，培养基的配方为玉米粉10～30g/ L、磷酸二氢钾0.5～1.5g/ L、磷酸氢二钾0.5～2g/ L、玉米浆1～5g/ L、硫酸镁0.5～1.5g/ L、硫酸锰0.1～0.8g/ L、碳酸钙5～15g/ L和酵母粉0.1～0.8g/ L，当发酵至胶质芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上，含量≥8×108个/ml时，干燥制备成休眠体微生物干粉。
5.根据权利要求1所述的一种促进马铃薯增产抗病的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述微生物菌剂的制备方法，包括多粘类芽孢杆菌休眠体微生物干粉的制备；
所述多粘类芽孢杆菌休眠体微生物干粉的制备，培养基的配方为玉米粉20～35g/L、豆粕粉30～40g/L、氯化钙1～8g/L、磷酸氢二钾1～5g/L、氯化铵0.5～2g/L、硫酸镁1～5g/L和硫酸锰0.5～1g/L，当发酵至多粘类芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上，含量≥7×109个/ml时，干燥制备成休眠体微生物干粉。
6.根据权利要求1所述的一种促进马铃薯增产抗病的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述微生物菌剂的制备方法，包括酵母菌休眠体微生物干粉的制备；
所述酵母菌休眠体微生物干粉的制备，培养基的配方为蛋白胨15～25g/L、葡萄糖5～10g/L、牛肉粉10～20g/L、氯化铵3～15g/L、磷酸二氢钾5～12g/L、和尿素5～15g/L，当发酵至酵母菌含量≥109个/ml时，干燥制备成休眠体微生物干粉。
7.根据权利要求1所述的一种促进马铃薯增产抗病的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述微生物菌剂的制备方法，包括沙福芽孢杆菌休眠体微生物干粉的制备；
所述沙福芽孢杆菌休眠体微生物干粉的制备，培养基的配方为玉米粉10～25g/L、豆粕粉20～35g/L、葡萄糖5～15g/L、氯化钠1～10g/L、磷酸氢二钾3～10g/L、硫酸镁1～5g/L和硫酸锰0.1～1g/L，当发酵至沙福芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上，含量≥1010个/ml时，干燥制备成休眠体微生物干粉；
所述微生物菌剂的制备方法，还包括植物乳杆菌休眠体微生物干粉的制备；
所述植物乳杆菌休眠体微生物干粉的制备，培养基的配方为葡萄糖10～25g/L、胰蛋白胨10～20g/L、牛肉粉5～12g/L、酵母粉10～20g/L、乙酸钠5～12g/L、磷酸氢二钾1～6g/L和硫酸镁1～5g/L，当发酵至植物乳杆菌含量≥109个/ml，干燥制备成休眠体微生物干粉。
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